KR101666968B1 - Beauveria bassiana having insect pathogenicityand agent for prevention of rice vermin using the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 곤충병원성 진균인 보베리아 바시아나 JEF007 균주 및 이를 이용한 농업해충, 특히 원예 또는 과수 해충 방제용 액상제제에 관한 것이다. 본 발명에 따른 농업해충 방제제는 곤충병원성 진균인 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주를 이용하여 제조됨으로써, 취급이 용이하고 인체에 무해하며 친환경적으로 농업해충을 방제할 수 있고, 또한 여과성 백을 이용함으로써 상기 균주의 액상제제를 간단하고 경제적으로 제조할 수 있는 효과가 있다.The present invention relates to an insect pathogenic fungus, bovaria barbiana JEF007 strain, and an agricultural pest using the same, particularly a liquid preparation for horticultural or fruit pest control. The agricultural pest control agent according to the present invention can be easily handled, harmless to the human body, and can be used in an environmentally friendly manner to control agricultural pests by producing the agricultural pest control agent using Beauveria bassiana JEF007 strain, which is an insect pathogenic fungus, It is possible to produce a liquid preparation of the strain simply and economically.
Description
본 발명은 곤충병원성 진균인 보베리아 바시아나 JEF007 균주 및 이를 이용한 농업해충, 특히 원예 또는 과수 해충 방제용 액상제제에 관한 것이다.The present invention relates to an insect pathogenic fungus, bovaria barbiana JEF007 strain, and an agricultural pest using the same, particularly a liquid preparation for horticultural or fruit pest control.
톱다리개미허리노린재, 꽃노랑총채벌레, 애멸구 및 벼물바구미 등은 우리나라를 비롯하여 일본, 타이완 등에 광범위하게 분포하면서 강남콩, 대두, 완두 등의 콩과 작물, 수박, 참외, 오이, 고추 등의 원예 작물, 및 벼, 피, 조 등의 벼과 작물를 흡즙하여 직접적으로 물리적인 피해를 주는, 농작물의 생산량에 막대한 손실을 초래하는 주요 농업해충이다. 이러한 농작물에 피해를 주는 병해충 방제를 위하여, 농업기술의 발달과 함께 재배작물 규모의 대형화에 따라 화학농약의 사용량이 더욱 증가하고 살포지역이 광범위하게 되었다. 2차 세계대전 이후 유기합성 살충제의 출현은 농업해충 방제에 의한 농작물의 증수와 위생해충 구제에 의한 인간의 보건향상이라는 두 가지 측면에 있어서 획기적인 전환점을 이룩하였다. 우리나라에서 해충방제를 위해 사용되고 있는 살충제들은 사용량이 매년 증가되고 있으며, 이 중 유기인계와 카바메이트계가 전체 사용량의 약 90％를 차지하고 있다.It is widely distributed in Korea, Japan, and Taiwan, and has been widely distributed in Korea, such as soybean, soybean, and pea, such as soybean crops, watermelon, melon, cucumber, Is a major agricultural pest causing great damage to the production of crops, which directly sucks rice and crops such as rice, blood, and marsh and suffers physical damage. In order to control pests harmful to these crops, the use of chemical pesticides has been increased and the spreading area has become wider as the size of cultivated crops has been increased with the development of agricultural technology. The emergence of organic synthetic insecticides after World War II marked a milestone turning point in two aspects: increasing agricultural crops by agricultural pest control and improving human health by sanitary pest control. Insecticides used for pest control in Korea are increasing in usage every year, of which organic phosphorus and carbamate accounts for about 90% of total usage.
그러나 이러한 기존 유기합성 농약들의 수십 년에 걸친 연용과 남용으로 인해 저항성 해충의 출현, 인축 독성, 천적에 의한 생물학적 방제 교란, 잔류독 및 환경오염 등과 같은 여러 가지 부작용이 유발되었고, 최근에는 이러한 합성 살충제의 부작용 및 환경에 미치는 영향에 대한 관심이 증대됨에 따라 합성 살충제의 사용이 점차 제한되고 있는 추세이다. 이에 합성 살충제를 대체할 수 있는, 차세대 농약의 개발 일환으로 생물학적 방제가 활발히 연구되고 있으나, 생물학적 방제는 미생물, 천적 또는 천연추출물을 이용하는데 취급하기가 용이하지 않아 상업화의 장애가 되고 있다. 또한, 곤충병원성 진균을 이용한 생물학적 방제에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나, 상업화에 있어서 중요한 부분인 대량생산 및 제제화에 대한 연구는 미흡한 실정이다. 현재 곤충병원성 진균을 이용한 제제는 고체배양을 통하여 생산된 포자를 배양체로부터 분리 한 후, 액상제제 및 수화제 형태로 제조되어 분무하는 방법으로 이용되고 있으나, 포자를 수확하는 과정에서 높은 인건비와 생산 공간이 필요한 문제점이 있어 상업화의 장애가 되고 있다.However, due to decades of continuous use and abuse of these organic synthetic pesticides, various adverse effects such as the appearance of resistant pests, lethal toxicity, biological control disturbance by natural enemies, residual poison and environmental pollution have been caused. Recently, The use of synthetic insecticides is becoming increasingly restricted as the interest in the adverse effects and environmental effects of the insecticides is increasing. Biological control has been actively studied as a next-generation pesticide that can replace synthetic pesticides, but biological control has become a hindrance to commercialization because it is difficult to handle using microorganisms, natural enemies or natural extracts. Studies on biological control using insect pathogenic fungi have been actively carried out, but research on mass production and formulation, which is an important part in commercialization, is insufficient. Currently, insect pathogenic fungi are produced by separating the spores produced from the solid culture from the cultures and then spraying them in the form of a liquid preparation and a wetting agent. However, in the process of harvesting spores, high labor costs and production space There is a problem that is becoming a hindrance to commercialization.
따라서, 인체에 무해하고, 친환경적이며, 취급이 용이하면서도 제조가 용이하여 상업적으로 활용이 가능한 새로운 농업해충 방제용 제제에 대한 개발의 필요성이 절실히 요구되고 있다.Accordingly, there is a desperate need to develop a new agricultural pest control agent that is harmless to the human body, eco-friendly, easy to handle, and easy to manufacture, and which can be used commercially.
본 발명자들은 농업해충 방제제에 대해 탐색하던 중, 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주를 새롭게 분리하였고, 상기 균주가 곤충병원성 및 우수한 포자 형성능을 갖는 것을 확인하고, 이를 농업해충 방제에 이용하는 경우 농업해충에 대해 우수한 방제 효과를 가지며, 또한, 여과성 백을 이용함으로써 상기 균주의 액상제제를 간단하고 경제적으로 제조할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.The present inventors newly discovered a strain of JEF007 of Beauveria bassiana while searching for an agricultural pest control agent and confirmed that the strain has an insect pathogenicity and excellent spore forming ability and is used for agricultural pest control The present invention has been accomplished by confirming that a liquid preparation of the above strain can be produced simply and economically by using a filtration bag having an excellent controlling effect against agricultural pests.
따라서, 본 발명은 농업해충 방제용 곤충병원성 진균인 보베리아 바시아나(B. bassiana) JEF007 균주, 이의 포자, 미생물 제제 및 액상제제를 제공하고자 한다.Accordingly, the present invention provides B. bassiana JEF007 strain, spore, microbial agent and liquid preparation thereof, which is an insect pathogenic fungus for agricultural pest control.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해서,In order to achieve the above object,
본 발명은 곤충병원성을 갖는 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주(KCCM11592P)를 제공한다.The present invention provides a strain of Beauveria bassiana JEF007 (KCCM 11592P) having insect pathogenicity.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주 또는 이의 포자를 포함하는, 농업해충 방제용 미생물 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a microorganism preparation for agricultural pest control, comprising a strain of Beauveria bassiana JEF007 or a spore thereof.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 고체배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 배양체을 수확하는 단계;를 포함하는 농업해충 방제용 미생물 제제의 제조방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a bacterium, which comprises culturing a bovaria bacillus JEF007 strain in a solid culture medium; And harvesting the culture. The present invention also provides a method for producing a microorganism preparation for agricultural pest control.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주를 고체배양 배지에서 배양하는 단계; 상기 배양체를 여과성 백(bag)에 봉입하는 단계; 및 상기 여과성 백을 물에 함침하여 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주 또는 이의 포자를 용출하는 단계를 포함하는, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a bacterium, which comprises culturing a strain of Beauveria bassiana JEF007 in a solid culture medium; Encapsulating the culture in a filter bag; And a step of immersing the filter bag in water to elute a strain of Beauveria bassiana JEF007 or spores thereof.
또한 본 발명은 상기 제조방법에 의해 제조된, 농업해충 방제용 액상제제를 제공한다.
The present invention also provides a liquid preparation for agricultural pest control, which is produced by the above production method.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 곤충병원성을 갖는 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주(KCCM11592P)를 제공한다.The present invention provides a strain of Beauveria bassiana JEF007 (KCCM 11592P) having insect pathogenicity.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주 또는 이의 포자를 포함하는, 농업해충 방제용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for controlling agricultural pests, comprising a strain of Beauveria bassiana JEF007 or a spore thereof.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주 또는 이의 포자를 포함하는, 농업해충 방제용 미생물 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a microorganism preparation for agricultural pest control, comprising a strain of Beauveria bassiana JEF007 or a spore thereof.
본 발명의 "보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주"는 본 발명자들이 자연 토양에서 분리한 진균들 중에서 농업해충 예를 들면, 톱다리개미허리노린재, 꽃노랑총채벌레 등에 대해 뛰어난 살충 효과를 나타내는 보베리아 바시아나 균주를 생물검정 실험을 통하여 분리한 후, 상기 분리된 균주를 형태학적으로 동정하고, 게놈 DNA 염기서열을 분석하여 기존에 알려진 보베리아 바시아나 균주와 약 98 %의 상동성을 보여 보베리아 바시아나 균주로 동정하고, JEF007로 명명하였으며, 2014년 10월 28일 한국종균협회 한국미생물보존센터에 기탁하였다(수탁번호 KCCM11592P).The " Beauveria bassiana JEF007 strain" of the present invention is one of the fungi isolated from natural soil by the present inventors and exhibits excellent insecticidal effect against agricultural insect pests, for example, The bacterium Bovia bacillus was isolated by a biochemical assay, and the isolated strain was morphologically identified and analyzed for its genomic DNA sequence to show about 98% homology with the known bobbia bacillus strains It was named as JEF007 and deposited on Oct. 28, 2014 with the Korean Society for Microbiological Protection (KCCM11592P).
상기 보베리아 바시아나 JEF007 균주는 백색 군집을 형성하고, 포자를 형성하는 형태학적 특성을 갖는다(도 1 참조). 상기 JEF007 균주는 특히 우수한 포자형성능을 가지며, 상기 JEF007 균주의 포자는 공지 균주인 보베리아 바시아나 GHA 보다 포자 보관 안정성이 우수하다.The bovaria bacillus JEF007 strain has a morphological characteristic of forming white clusters and spores (see Fig. 1). The JEF007 strain has particularly excellent spore forming ability, and the spore of the JEF007 strain is superior to the known bovaria bacillus or GHA strain for spore storage stability.
상기 곤충병원성(insect pathogenicity)은 대상이 되는 곤충(숙주곤충)에 병원체가 감염하여 병을 유발시키는 능력을 의미하고, 본 발명에 있어서는 상기 보베리아 바시아나 JEF007 균주가 농업해충에 감염되어 상기 해충에 병을 유발시키는 것을 의미한다.The insect pathogenicity refers to the ability of a pathogen to infect a subject insect (host insect) to cause disease. In the present invention, the boveriac basin or JEF007 strain is infected with agricultural pests, It means to cause illness.
상기 곤충병원성은 살충활성일 수 있다. 구체적으로, 보베리아 바시아나 JEF007 균주 또는 상기 균주의 포자는 숙주곤충의 외피에 부착하여 발아하면, 키티나제(chitinase), 프로테아제(protease), 리파제(lipase) 또는 에스테라제(esterase) 등을 생성하여 곤충의 큐티클층을 뚫어 침입하고, 곤충의 체내에서 증식하면서 작은 분자량이 독성물질 또는 당단백질과 같은 독성 단백질들을 생산하여 곤충의 면역작용을 차단하고, 숙주곤충을 사멸시키는 살충활성을 갖는다.The insect pathogenicity may be an insecticidal activity. Specifically, the bovaria bacillus or JEF007 strain or the spore of the strain attaches to the outer shell of the host insect and germinates to produce chitinase, protease, lipase, esterase, etc. And penetrates into the cuticle layer of the insect and propagates in the insect's body, so that a small molecular weight produces a toxic protein such as a toxic substance or a glycoprotein to block the immune function of the insect and kill the host insect.
상기 보베리아 바시아나 JEF007 균주는 우수한 포자 형성능과 함께, 농업해충에 대하여 현저히 우수한 살충 활성을 갖는 것을 분리하여 동정한 것으로, 농업해충의 방제에 유용하게 사용될 수 있다. The bovaria bacillus JEF007 isolate has excellent spore forming ability and has a remarkably excellent insecticidal activity against agricultural pests, and can be effectively used for controlling agricultural pests.
상기 곤충은 해충일 수 있고, 상기 해충은 위생해충, 산림해충 및 농업해충 등을 모두 포함한다. The insect can be a pest, and the pest includes all kinds of sanitary pests, forest pests and agricultural pests.
상기 곤충은 바람직하게는 농업해충일 수 있고, 상기 농업해충은 원예해충, 과수해충 및 벼해충 등을 모두 포함하는 의미이다. 상기 농업해충은 바람직하게는 톱다리개미허리노린재, 꽃노랑총채벌레, 배추벌레, 온실가루이, 담배가루이, 이화명나방, 복숭아순나방, 사과무늬잎말이나방, 사과애모무늬잎말이나방, 애멸구, 벼멸구, 흰등멸구, 벼물바구미, 벼줄기굴파리, 벼잎굴파리 등 일 수 있고, 더욱 바람직하게는 톱다리개미허리노린재 또는 꽃노랑총채벌레일 수 있다.The insect may preferably be an agricultural pest, and the agricultural pest includes both horticultural insect, fruit insect and rice insect. The agricultural insect pests are preferably selected from the group consisting of sawtooth antlers, flower yellow thrips, cabbage worms, greenhouse powder, cigarette louis, licorice moth, peach moth, apple leafy moth, apple moth leaf moth, White lantern worms, rice weevils, rice bran jellyfishes, rice bran jellyfish, and the like, and more preferably, they may be sawdust waist or flower yellow thrips.
상기 보베리아 바시아나 JEF007균주의 포자는 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 접종균을 고체배양 배지에서 배양함으로써 생산될 수 있다. 본 발명의 보베리아 바시아나 JEF007 균주는 기존의 보베리아 바시아나 GHA 균주에 비해 2 내지 3배 정도의 포자 생산성을 나타낼 수 있다.The spore of the bovaria bacillus JEF007 strain can be produced by culturing the inoculum of the bovaria bacillus or JEF007 strain in a solid culture medium. The bovaria bacillus JEF007 strain of the present invention can exhibit spore productivity of about 2 to 3 times as compared with the conventional bovaria bacillus or GHA strain.
상기 농업해충 방제용 미생물 제제는 입상제제, 액상제제 또는 퇴비로 제공될 수 있다. 상기 농업해충 방제용 미생물 제제는 농업해충에 살포 처리되었을 때 뛰어난 살충 효과를 나타내며, 특히, 공지 균주인 보베리아 바시아나 GHA 균주의 미생물 제제를 살포 처리한 경우와 비교하여 톱다리개미허리노린재에 대해 단 기간에 더 뛰어난 살충 효과를 나타내었다.The microorganism preparation for controlling agricultural pests may be provided as a granular preparation, a liquid preparation or a compost. The microorganism preparation for agricultural pest control has an excellent insecticidal effect when sprayed on agricultural pests. Especially, when compared to the case of spraying microbial agent of the known strain Bobelia basiana or GHA strain, And showed more excellent insecticidal effect in a short period of time.
상기 미생물 제제는 바람직하게는 입상제제 일 수 있고, 상기 제제가 입상제제일 경우 취급이 용이하고, 보베리아 바시아나 JEF007균주의 우수한 포자 형성능을 이용하여 입상제제를 용이하게 제조할 수 있어, 농업해충 방제용 제제의 제조 효율을 향상시킬 수 있다.The microorganism preparation can be preferably a granular preparation, and can be easily handled when the preparation is a granular preparation, and granular preparations can be easily produced using the spore-forming ability of bovia bacillus or JEF007 strain, The production efficiency of the control agent can be improved.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 고체배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 배양체을 수확하는 단계를 포함하는 농업해충 방제용 미생물 제제의 제조방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a bacterium, which comprises culturing a bovaria bacillus JEF007 strain in a solid culture medium; And harvesting the cultivated plant. The present invention also provides a method for producing a microorganism preparation for agricultural pest control.
상기 고체배양 배지는 조, 기장, 백미, 밀기울, 수수 및 이들의 조합으로부터 선택된 어느 하나를 포함하는 것이 바람직하고, 조를 포함하는 것이 더욱 바람직하다.Preferably, the solid culture medium comprises any one selected from the group consisting of crude, millet, white rice, wheat bran, millet, and combinations thereof, and more preferably includes a batch.
상기 농업해충 방제용 미생물 제제의 제조방법은 유기산과 조, 기장, 백미, 밀기울, 수수 및 이들의 조합으로부터 선택된 어느 하나를 혼합하여 고체배양 배지를 준비하는 단계를 더 포함할 수 있다.The method for preparing a microorganism preparation for agricultural pest control may further comprise preparing a solid culture medium by mixing any one selected from organic acids with crude, millet, white rice, wheat bran, sorghum and combinations thereof.
상기 유기산은 탄소원으로 사용될 수 있는 것이라면 특별히 제한 없이 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는 시트르산, 프로피온산, 부틸산, 젖산, 숙신산, 클루콘산, 발레르산, 카프로익산 및 이들의 조합으로부터 선택된 어느 하나인 것이 바람직하고, 시트르산인 것이 더욱 바람직하다.The organic acid is not particularly limited as long as it can be used as a carbon source. More specifically, it is preferably any one selected from citric acid, propionic acid, butyric acid, lactic acid, succinic acid, clonic acid, valeric acid, caproic acid and combinations thereof, more preferably citric acid.
상기 유기산과 고체배양 배지의 혼합은 고체배양 배지에 유기산을 가하고 혼합하는 방법으로 수행할 수 있다. The organic acid and the solid culture medium may be mixed by adding an organic acid to the solid culture medium and mixing the organic acid.
상기 균주의 배양 용기는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 배양 용기를 이용할 수 있으나, 그 종류에 한정되는 것은 아니다. 일 예로, 고체배양용 플라스틱 용기 또는 폴리비닐 주머니에 산소 공급용 필터를 부착하여 배양에 이용할 수 있다.The culturing vessel of the strain may be a culture vessel commonly used in the technical field of the present invention, but is not limited thereto. For example, a plastic container for solid culture or a polyvinyl bag can be used for culturing by attaching an oxygen supply filter.
상기 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 배양은 20 내지 30℃에서 4 내지 8일 동안 수행하는 것이 바람직하고, 25℃에서 6일 동안 수행하는 것이 더욱 바람직하다. 본 발명에서는 유기산과 혼합된 고체배양 배지를 멸균을 위하여 110~130℃에서 20~40분 동안 가열 및 냉각한 후, 상기 배지에 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 접종하여 배양을 수행하였다.Preferably, the culture of the bovaria bacillus JEF007 strain is carried out at 20 to 30 DEG C for 4 to 8 days, more preferably at 25 DEG C for 6 days. In the present invention, the solid culture medium mixed with the organic acid was heated and cooled at 110 to 130 ° C for 20 to 40 minutes for sterilization, and the culture was carried out by inoculating the bovaria barbiana strain JEF007 into the medium.
상기 고체배양 배지에 사용할 접종균은 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 계대배양 하여 얻을 수 있고, 상기 JEF007 균주의 배양은 통상적인 계대배양 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 계대배양에 필요한 배지는 그 종류에 한정되지 않는다.The inoculum to be used for the solid culture medium can be obtained by subculturing the bovaria barbiana strain JEF007, and the cultivation of the JEF007 strain can be carried out according to a conventional subculture method. The medium required for the subculture is not limited to that kind.
상기 계대배양 배지의 일 예로, PDB(Potato Dextrose Broth) 배지, 쌀겨 또는 밀기울을 포함하는 액체 배지를 이용할 수 있으나, 그 종류에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 계대배양 배지는 옥수수 가루, 미강 또는 콘 스티프 분말 등을 포함할 수 있다. As an example of the subculture medium, a liquid medium containing PDB (Potato Dextrose Broth) medium, rice bran or wheat bran can be used, but it is not limited thereto. The subculture medium may also include corn flour, rice bran or cornsteep powder, and the like.
또한, 본 발명은 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주를 고체배양 배지에서 배양하는 단계; 상기 배양체를 여과성 백(bag)에 봉입하는 단계; 및 상기 여과성 백을 물에 함침하여 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주 또는 이의 포자를 용출하는 단계를 포함하는, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a bacterium, which comprises culturing a strain of Beauveria bassiana JEF007 in a solid culture medium; Encapsulating the culture in a filter bag; And a step of immersing the filter bag in water to elute a strain of Beauveria bassiana JEF007 or spores thereof.
상기 고체배양 배지는 조, 기장, 백미, 밀기울, 수수 및 이들의 조합으로부터 선택된 어느 하나를 포함하는 것이 바람직하고, 조를 포함하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 배양체는 그대로 백에 봉입하여 사용할 수도 있으나, 분쇄하여 사용하는 것이 바람직하다. 분쇄과정을 통해 배양체의 표면적을 넓혀주는 것이 물과 접하는 면을 넓혀주는 것이므로, 여과성 백으로부터 균주 및 이의 포자의 용출이 쉽게 된다.Preferably, the solid culture medium comprises any one selected from the group consisting of crude, millet, white rice, wheat bran, millet, and combinations thereof, and more preferably includes a batch. The culture can be used as it is enclosed in a bag as it is, but it is preferably pulverized. The widening of the surface area of the culture through the pulverization process widens the surface in contact with water, so that the strain and spores thereof are easily eluted from the filterable bag.
상기 여과성 백은 통수성 여과성 재질로 이루어진 백이다. 상기 여과성 백은 폴리에스테르, 나일론, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 및 비닐론의 합성 섬유, 레이온 등의 반(半)합성 섬유, 닥나무 및 삼지닥나무의 천연 섬유의 단독 또는 복합 섬유로 이루어지는 직포 또는 부직포, 마닐라삼, 목재 펄프, 폴리프로필렌 섬유로 이루어지는 혼초지(混抄紙) 및 종이로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로 형성되는 것이 바람직하다.The filter bag is a bag made of a water-permeable filter material. The filter bag may be a synthetic fiber of polyester, nylon, polyethylene, polypropylene and vinylon, a semi-synthetic fiber such as rayon, a woven or nonwoven fabric consisting of natural fibers of mulberry or mulberry tree alone or a composite fiber, Wood pulp, mixed paper made of polypropylene fiber, and paper.
또한 본 발명은 상기 제조방법에 의해 제조된, 농업해충 방제용 액상제제를 제공한다.The present invention also provides a liquid preparation for agricultural pest control, which is produced by the above production method.
상기 보베리아 바시아나 JEF007 균주, 이의 포자, 미생물 제제 또는 액상제제를 농업해충에 살포 처리할 경우, 기존의 보베리아 바시아나 GHA 균주를 살포 처리한 경우보다 톱다리개미허리노린재에 대해 우수한 방제율을 나타내는 효과가 있다.When the bovaria bacillus JEF007 strain, its spore, microorganism preparation or liquid formulation is sprayed on agricultural pests, it is possible to obtain a superior control rate against the ants of the sawdust ants, compared to the case of spraying with the conventional bovaria bacillus or GHA strain There is an effect indicating.
본 발명에 따른 농업해충 방제제는 곤충병원성 진균인 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주를 이용하여 제조됨으로써, 취급이 용이하고 인체에 무해하며 친환경적으로 농업해충을 방제할 수 있고, 또한 여과성 백을 이용함으로써 상기 균주의 액상제제를 간단하고 경제적으로 제조할 수 있는 효과가 있다.The agricultural pest control agent according to the present invention can be easily handled, harmless to the human body, and can be used in an environmentally friendly manner to control agricultural pests by producing the agricultural pest control agent using Beauveria bassiana JEF007 strain, which is an insect pathogenic fungus, It is possible to produce a liquid preparation of the strain simply and economically.
도 1은 25℃의 암실에서 Sabraud 덱스트로스 아가 (SDA) 배지에서 7일 동안 배양한 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 광학현미경(400배)으로 관찰한 이미지를 나타내는 도이다.
도 2는 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 DNA 염기서열 분석(DNA sequencing) 결과를 나타내는 도이다.
도 3은 고체배양용 플라스틱 용기 및 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 미생물 제제를 각각 나타내는 도이다.
도 4는 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 이용한 희석살포형 액상제제의 제조방법을 나타내는 도이다.
도 5는 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 이용한 희석살포형 액상제제의 톱다리개미허리노린재에 대한 방제 효과를 나타내는 도이다.Brief Description of the Drawings Fig. 1 is a diagram showing an image obtained by observing a bovaria bacillus JEF007 strain cultured in Sabraud dextrose agar (SDA) medium in a dark room at 25 캜 for 7 days with an optical microscope (400 times).
Fig. 2 is a diagram showing the DNA sequencing results of the bovaria bacillus or JEF007 strain.
3 is a view showing a plastic container for solid culture and a microbial preparation of bovaria barbiana strain JEF007, respectively.
FIG. 4 is a diagram showing a method for producing a diluted spray liquid formulation using bovaria bacillus or JEF007 strain.
FIG. 5 is a view showing the effect of controlling the dilution-spray-type liquid preparation using the bovaria bacillus or JEF007 strain against the sawtooth antler.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the examples.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정Example 1 Isolation and Identification of Strain
1-1. 균주의 분리1-1. Isolation of strain
보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주는 자연 토양에서 분리한 진균들 중에서 원예 및 과수 해충 예를 들면, 톱다리개미허리노린재 등에 대해 뛰어난 살충 효과를 나타내는 보베리아 바시아나 균주를 생물검정 실험을 통하여 분리하였다.
Beauveria bassiana The JEF007 strain is a bacteriocin that exhibits excellent insecticidal effect against horticultural and fruit insects, for example, sawtooth ants, and fungi, among the fungi isolated from natural soil. Respectively.
1-2. 생육 및 형태학적 동정1-2. Growth and morphological identification
25℃의 암실에서 Sabraud Dextrose Agar(SDA)에서 7일 동안 배양한 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 광학현미경(400배) 이미지를 도 1에 나타내었다.An optical microscope (400X) image of the bovaria bacillus JEF007 strain cultured in Sabraud Dextrose Agar (SDA) for 7 days in a dark room at 25 ° C is shown in FIG.
도 1에 나타난 바와 같이, 보베리아 균주의 전형적인 특징인 백색 균자, 포자, 및 포자의 형성 방법이 잘 관찰되었다.
As shown in Fig. 1, the formation of white mycelia, spores, and spores, typical features of the bovaria strain, was well observed.
1-3. 염기서열 분석1-3. Sequencing
ITS1 정방향 프라이머(forward primer) 및 ITS4 역방향 프라이머(reverse primer)에 의한 PCR(polymerase chain reaction, 중합효소연쇄반응) 증폭 후, 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 DNA 염기서열 분석(DNA sequencing)한 결과를 도 2에 나타내었다.
After amplification of PCR (polymerase chain reaction, polymerase chain reaction) by ITS1 forward primer and ITS4 reverse primer, The results of DNA sequencing of the bovaria bacillus JEF007 strain are shown in Fig.
실시예 2. 농업 해충 방제용 미생물 제제의 제조Example 2: Preparation of a microorganism preparation for agricultural pest control
조(Italian millet) 200g을 고체배양용 플라스틱 용기(1L)에 놓은 후, 50% 시트르산(citric acid) 0.32 ml을 추가로 가하였다. 그 후, 멸균을 위하여 121℃에서 30분 동안 가열하였다. 멸균된 조를 상온으로 냉각하고, 상온에서 3일 동안 PDB배지에서 액체 배양된 보베리아 바시아나 JEF007 균주 1ml을 조에 접종한 후 흔들어 주며 25℃에서 6일 동안 배양함으로써 JEF007 균주의 미생물 제제를 제조하였다. 200 g of the Italian millet was placed in a plastic container (1 L) for solid culture, and then 0.32 ml of 50% citric acid was added. Thereafter, it was heated at 121 占 폚 for 30 minutes for sterilization. The sterilized bath was cooled to room temperature, and 1 ml of the boveriacacia JEF007 strain cultured in PDB medium for 3 days at room temperature was inoculated into the flask, followed by shaking for 6 days at 25 ° C. to prepare a microorganism preparation of strain JEF007 .
상기 고체배양용 플라스틱 용기 및 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 미생물 제제를 각각 도 3에 나타내었다.
The plastic container for the solid culture and the microorganism preparation of the bovaria barbiana strain JEF007 are shown in Fig. 3, respectively.
실시예 3. 포자 생성능 확인Example 3. Confirmation of spore production ability
JEF007 균주의 미생물 제제 1g을 0.3% silwet 10ml로 희석한 후, 혈구측정기(hamacytometer)를 이용하여 포자수를 계수하여 포자 생산성을 측정하였다. 보베리아 바시아나 JEF007 균주의 포자수 계수를 표 1에 나타내었다.1 g of the microorganism preparation of strain JEF007 was diluted with 10 ml of 0.3% silwet, and the number of spores was counted using a hamacytometer to measure the spore productivity. The porosity coefficients of the bovaria bacillus JEF007 strain are shown in Table 1.
표 1에 나타난 바와같이, 보베리아 바시아나 JEF007 균주는 기존의 상용화된 보베리아 바시아나 GHA 균주에 비해 2배 이상의 포자 생산성을 나타내었다.
As shown in Table 1, the bovaria bacillus JEF007 strain showed a spore productivity twice as much as that of the conventional commercialized bovaria bacillus or GHA strain.
실시예 4. 희석살포형 액상제제의 제조Example 4: Preparation of dilute spray liquid formulations
JEF007 균주의 미생물 제제 10g을 여과성 백(screen bag, 8×12 cm2)에 넣은 후 밀봉하였다. 그 후, 상기 밀봉된 여과성 백을 물 20L에 함침한 후, 수 초동안 흔들어줌으로써 여과성 백 내의 균주 또는 이의 포자를 물속으로 방출시켜 희석살포형 액상제제를 제조하였다.10 g of the microorganism preparation of strain JEF007 was placed in a screen bag (8 × 12 cm 2 ) and sealed. Thereafter, the sealed filtration bag was impregnated with 20 L of water and shaken for several seconds, thereby releasing the strain or spore thereof in the filter bag into water to prepare a diluted spray-type liquid preparation.
상기 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 이용한 희석살포형 액상제제의 제조방법을 도 4에 나타내었다.
The production method of the diluted spray liquid formulation using the bovaria bacillus JEF007 strain is shown in Fig.
실험예 1. 희석살포형 액상제제의 톱다리개미허리노린재에 대한 방제효과 확인EXPERIMENTAL EXAMPLE 1 Confirmation of the Effect of Diluent Spraying Liquid Formulation on the Back Leg Anchor
실시예 4에 따라 제조한 희석살포형 액상제제를 강남콩에서 발생한 30마리의 톱다리개미허리노린재 3령 약충에 분무기를 이용하여 살포하였다. 상기 살포 후 3, 7 및 10일이 경과한 후, 각각 생충수를 조사하였다. 상기 과정을 3번 반복실시하였고, 이에 따른 톱다리개미허리노린재의 방제효과를 도 5에 나타내었다. 또한 대조처리구로 B. bassiana GHA 균주를 JEF007 제형과 동일하게 제조 후, 포자 현탁액을 처리하였다.The diluted spray-type liquid formulation prepared according to Example 4 was sprayed on a third instar larvae of thirty legged ant thrice larvae of thrips grown in Kangnam-gun using an atomizer. After 3, 7 and 10 days after the spraying, the raw water was examined. The above procedure was repeated three times, and the effect of controlling the back leg antler was examined in FIG. In addition, B. bassiana GHA strain was prepared in the same manner as JEF007 formulation and then spore suspension was treated.
도 5에 나타난 바와 같이, 보베리아 바시아나 JEF007 균주를 이용한 희석살포형 제제는 기존 미생물제인 보베리아 바시아나 GHA 균주를 이용한 희석살포형 제제보다 톱다리개미허리노린재에 대해 우수한 방제효과를 나타내었다. 균주 현탁액 처리 7일 후 사충율을 조사한 결과, GHA 균주 처리구는 20%의 낮은 사충율은 보였으나, JEF007 처리구는 65% 이상의 높은 사충율을 나타내었다. 또한, 10일차 조사에도 유사한 경향을 보였다.
As shown in FIG. 5, the diluted spray formulations using the bovaria bacillus JEF007 strain showed a superior control effect against the antimicrobial agent of the saw blight than the diluted spray formulations using the conventional microorganism, bovaria bacillus or GHA strain. After 7 days of the suspension treatment, the germination rate of the GHA strain was 20% lower than that of the GSS strain, but the JEF007 treatment showed a high mortality rate of over 65%. Also, similar trend was observed in the 10th day survey.
Claims (9)
상기 배양체를 여과성 백(bag)에 봉입하는 단계; 및
상기 여과성 백을 물에 함침하여 보베리아 바시아나(Beauveria bassiana) JEF007 균주 또는 이의 포자를 용출하는 단계를 포함하는, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법.Culturing the strain of Beauveria bassiana JEF007 (KCCM11592P) having an insect pathogenicity in a solid culture medium to obtain a culture;
Encapsulating the culture in a filter bag; And
And the step of immersing the filter bag in water to elute the strain of Beauveria bassiana JEF007 or spores thereof.
상기 곤충은 톱다리개미허리노린재, 꽃노랑총채벌레, 배추벌레, 온실가루이, 담배가루이, 이화명나방, 복숭아순나방, 사과무늬잎말이나방, 사과애모무늬잎말이나방, 애멸구, 벼멸구, 흰등멸구, 벼물바구미, 벼줄기굴파리, 벼잎굴파리 및 이들의 조합으로부터 선택된 어느 하나의 해충인 것인, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법.The method according to claim 1,
The above insects include insect pests such as sawtooth ants backyard, flower yellow thrips, cabbage worms, greenhouse powdery mildew, tobacco roe, licorice moth, peach moth, apple leafy moth, apple moth leaf moth, Wherein the insect pest is any one of pests selected from the group consisting of weevils, rice paddies, rice paddies, and combinations thereof.
상기 고체배양 배지는 조, 기장, 백미, 밀기울, 수수 및 이들의 조합으로부터 선택된 어느 하나 및 유기산을 포함하는 것인, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the solid culture medium comprises any one selected from the group consisting of crude, millet, white rice, wheat bran, millet, and combinations thereof and an organic acid.
상기 배양은 20~30℃에서 4~8일 동안 수행되는 것인, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the cultivation is carried out at 20 to 30 DEG C for 4 to 8 days.
상기 여과성 백은 폴리에스테르, 나일론, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 및 비닐론의 합성 섬유, 레이온 등의 반(半)합성 섬유, 닥나무 및 삼지닥나무의 천연 섬유의 단독 또는 복합 섬유로 이루어지는 직포 또는 부직포, 마닐라삼, 목재 펄프, 폴리프로필렌 섬유로 이루어지는 혼초지(混抄紙), 및 종이로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나에 의해 형성된 것인, 농업해충 방제용 액상제제의 제조방법.The method according to claim 1,
The filter bag may be a synthetic fiber of polyester, nylon, polyethylene, polypropylene and vinylon, a semi-synthetic fiber such as rayon, a woven or nonwoven fabric consisting of natural fibers of mulberry or mulberry tree alone or a composite fiber, Wherein the paper is formed by any one selected from the group consisting of wood pulp, mixed paper made of polypropylene fiber, and paper.
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