KR101630789B1

KR101630789B1 - 등골나물속 추출물을 유효성분으로 하는 비만 및 골대사질환 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101630789B1
Application number: KR1020150058643A
Authority: KR
Inventors: 김민지; 정소라; 김현석; 김종근; 박기문; 박계원
Original assignee: 주식회사 성균바이오텍
Priority date: 2015-04-27
Filing date: 2015-04-27
Publication date: 2016-06-24
Also published as: KR20150056752A

Abstract

본 발명은 지방세포의 감소와 조골세포의 증가에 따른 지방세포 감소를 통한 항비만효과와 조골세포 증가를 통한 뼈 질환이나 골절의 효과, 그리고 간엽 줄기세포에서 상보적인 지방세포감소와 조골세포 증가에 따른 골다공증 예방효과를 가지는 등골나물속 추출물에 관한 것으로, 등골나물속 추출물은 다능성 줄기세포주인 C3H10T1/2 세포에서 지방세포 분화의 중요한 인자인 PPARγ, AP2, CD36, adiponectin C/EBPα, LPL 활성을 저해하고, 조골세포 분화의 중요한 인자인 ALP, osterix, COlⅠ의 활성을 증가시킴으로써 골다공증의 예방과 치료에 유용한 물질로 이용될 수 있다.

Description

등골나물속 추출물을 유효성분으로 하는 비만 및 골대사질환 예방 또는 치료용 조성물{Composition comprising extract of Eupatorium spp. as an effective component for prevention or treatment of obesity and metabolic bone disease}

본 발명은 등골나물속(Eupatorium spp .) 추출물을 유효성분으로 하는 골대사질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 골대사질환의 예방 또는 치료를 위한 건강기능식품 또는 의약품의 제조에 활용될 수 있다.

골다공증은 뼈의 양과 질의 감소에 따라 뼈가 약해져 골절이 일어나기 쉬운 상태를 말한다. 골다공증은 폐경기 이후 여성에서 특히 빈번하게 발생하며 이는 에스트로젠의 분비 감소에 의하여 뼈의 양이 현저하게 감소되는 질환이다. 뼈 양의 감소는 개인차, 또는 다른 여러가지 원인으로 인해 그 정도의 차이가 있지만, 병적으로 과다하게 뼈의 양이 감소하여 일정치 이하로 저하되면 작은 충격에도 쉽게 골절이 생기게 된다. 골다공증은 그 증세 자체보다는 뼈의 약화에 따라 초래되는 각종 골절, 특히 대퇴골 골절 또는 척추골절 등으로 장기간 활동을 제한하여 건강한 생활을 영위할 수 없고, 결과적으로 노인층 사망의 15%에 대한 원인이 되는 것으로 알려져 있다.

과도한 파골세포(osteoclast)의 활성에 의해 유발된 골질환의 치료나 예방의 목적으로 내인성 조절인자들 이외에도 여러 물질들이 연구되고 있다. 이러한 목적으로 현재 사용되고 있는 약물들은 일정한 약리작용을 나타내고 있으나, 여러 가지 부작용과 복용상의 어려움을 갖고 있음이 알려져 있어, 새로운 작용 및 약물구조를 가지면서 독성과 부작용이 적으며 골다공증의 예방 또는 치료에 효과적인 신물질의 개발이 요구되고 있다. 또한 이러한 신물질은 민간요법으로 예로부터 사용되어온 독성이 없는 천연물에서 발견될 가능성이 높기 때문에 천연물로부터 신약을 창출하려는 시도가 활발히 진행되고 있다.

지금까지 골다공증에 관한 연구는 골을 흡수하는 파골세포(osteoclast)와 골을 형성하는 조골세포(osteoblast) 사이의 불균형에 초점을 맞추어 진행되어 왔다. 하지만 골다공증은 골에 관여하는 세포 외에 골수(bone marrow) 유래 지방세포에도 큰 영향을 받는다는 것과 관련하여 계속적인 연구가 진행되고 있다.

뼈 양의 대부분은 12세~18세 사이에 생성되고 이때 뼈의 형성과 함께 호르몬, 환경적으로 영양을 받게 된다. 이 기간 동안 호르몬 서열의 변화나 뼈 흡수의 촉진은 뼈의 양을 감소시키게 되고 골절의 위험이 높아지게 된다. 중요한 점은 어린 시절의 골절은 골격의 불충분으로 인한 뼈 구조의 변화와 비만을 이끌 수 있는 몸의 구성 성분의 변화와 관련이 있다는 것이다. 노화에 따른 뼈 상실은 지방과 뼈의 관계에 중요한 영향력이 있다. 노화의 흔한 특징은 지방에 의한 골수의 유입이다. 조골세포(osteoblast)와 지방세포(adipocyte)는 동일한 전구체를 갖으며 간엽줄기세포(mesenchymal stem cells)로부터 유래한다. 골수(bone marrow)에서 지방세포의 숫자는 간엽 줄기세포로부터 조골세포(osteoblast)의 분화는 줄어들고 지방세포(adipocyte)로의 분화를 높이며 노화와 함께 증가하게 된다. 조골세포가 형성될 때 수반되는 지방세포의 저해는 지방세포 형성을 억제하거나 존재하는 지방세포를 조골세포로 전환함으로써 골다공증의 예방과 치료의 목표가 될 수 있다. 결론적으로 지방(fat)과 뼈(bone)의 관계는 노화와 관련된 뼈의 상실을 병리 생리학적으로 이해할 수 있게 해주고 골다공증 치료와 진단에 새로운 접근을 제공해 준다.

따라서, 조골세포와 지방세포의 관계는 노화와 관련된 골다공증을 치료하고 예방하기 위한 표적으로 이용될 수 있다고 인식되어 왔으며, 조골세포의 분화를 높이며, 지방세포의 분화는 낮추는 물질을 찾고, 이를 기능성 식품으로 개발하려는 노력이 많이 진행되고 있다. 특히 이러한 물질은 항비만 효과를 나타내며 골세포 분화 증가를 위한 골절 등의 뼈 질환에도 직접적으로 작용할 수 있기에 더욱 중요한 식/의약품 소재이다.

한편, 국내에 분포하는 등골나물속(Eupatorium spp.)은 등골나물(E. japonicum), 골등골나물(E. lindleyanum), 벌등골나물(E. makinoi var . oppisitifolium), 서양등골나물(E. rugosum)이 주로 알려져 있고, 물가의 습한 초진에서 잘 자라는 숙근성 다년초로서, 식용, 관상용 또는 약용으로 쓰이며, 발표(發表), 산한(散寒), 투진(透疹)의 효능이 있고 탈항, 발진하지 않는 홍역, 류머티성의 요통, 감기로 인한 해수를 치료하는데 사용되어 왔으나, 아직까지 비만 또는 골다공증을 포함하는 골대사질환에 대한 효과에 대하여는 알려진 바 없다.

본 발명의 목적은 독성이 없는 천연물에서 유래한 골대사질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공하고, 이로부터 건강기능식품 및 의약품을 제조하는 것이다.

본 발명의 골대사질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 등골나물속(Eupatorium spp .) 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 골대사질환 예방 또는 개선용 건강기능식품은 등골나물속(Eupatorium spp .) 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 등골나물속(Eupatorium spp.)은 등골나물(E. japonicum), 골등골나물(E. lindleyanum), 벌등골나물(E. makinoi var . oppisitifolium), 서양등골나물(E. rugosum) 및 이들의 동속 근연식물에서 선택된 어느 하나 이상의 식물이고, 바람직하게는 등골나물(E. japonicum)이다.

본원에서 정의되는 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 비극성용매 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올 수용액이나 메탄올 또는 에탄올에 가용한 등골나물속 추출물을 의미한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 등골나물속 추출물은 아래와 같이 제조될 수 있다.

본 발명의 등골나물속 추출물은 등골나물 속 식물의 전초, 줄기 또는 꽃을 음건하여 마쇄한 후, 건조된 시료의 중량의 약 1 내지 50배, 바람직하게는 약 10 내지 40배 분량의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 비극성 용매 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로, 20 ~ 110 ℃, 바람직하게는 80 ~ 100 ℃에서 약 1 내지 6시간, 바람직하게는 2 내지 4시간 동안 교반추출, 열탕 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 또는 초임계 추출 등의 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 열탕 추출한 후 수득한 추출액을 여과, 감압농축 또는 건조하여 본 발명의 생약 추출물을 얻을 수 있다.

상기 비극성 용매로는 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 헥산 또는 초임계 유체 중 어느 하나 이상이 사용될 수 있다.

또한 상기 혼합용매로 알코올 수용액이 사용될 경우 물과 상기 저급 알코올의 혼합비가 5(v/v)% 내지 100%(v/v)인 알코올 수용액 또는 알코올이 사용된다.

본 발명의 골다공증 예방 또는 치료용 조성물은 조골세포 분화 증대 활성 및 지방세포 분화 억제 활성을 나타내고, 조성물 총 중량에 대하여 상기 등골나물속 추출물을 0.1 내지 50% 중량으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 등골나물속 추출물을 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 조골세포 분화 증대 활성 및 지방세포 분화 억제 활성을 나타내는 등골나물속 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 건강기능식품은 각종 식품류, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 등골나물속 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 추출물이 골다공증 예방 또는 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강 식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 건강기능식품들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 등골나물속 추출물은 지방세포의 분화에 관련된 유전자인 PPARγ, AP2, CD36, adiponectin C/EBPα, LPL 활성을 저해하고 조골세포의 분화에 관련된 유전자인 ALP, osterix, COlⅠ활성을 높여 노화에 따른 뼈 상실로 인한 골다공증과 같은 골대사질환의 예방, 개선 또는 치료 효과를 갖는 건강기능식품 또는 의약품으로 사용될 수 있다.

도 1은 경기도 양주시 감악산에서 수확하기 전의 등골나물(eupatorim japonicnum)의 사진이다.
도 2는 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물 전초와 각 부위별 추출물을 골세포 분화 배지에서 9일간 처리한 후 ALP 활성에 미치는 영향을 나타낸 사진이다.
도 3은 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 전초를 골세포 분화 배지에서 10일간 처리한 후 조골세포(osteoblast)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 4는 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 잎 추출물을 골세포 분화 배지에서 9일간 처리한 후 조골세포(osteoblast)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 5는 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 줄기 추출물을 골세포 분화 배지에서 9일간 처리한 후 조골세포(osteoblast)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 6는 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 꽃 추출물을 골세포 분화 배지에서 9일간 처리한 후 조골세포(osteoblast)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 7은 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물 전초와 각 부위별 추출물을 지방세포 분화 배지에서 9일간 처리한 후 지방세포 분화 저해 효과를 나타낸 사진이다.
도 8은 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 전초를 지방세포 분화 배지에서 10일간 처리한 후 지방세포(adipocyte)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 9는 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 잎 추출물을 지방세포 분화 배지에서 10일간 처리한 후 지방세포(adipocyte)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 10은 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 줄기 추출물을 지방세포 분화 배지에서 10일간 처리한 후 지방세포(adipocyte)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 11은 C3H10T1/2 세포주에서 등골나물의 꽃 추출물을 지방세포 분화 배지에서 10일간 처리한 후 지방세포(adipocyte)의 분화에 관련된 유전자의 상대적인 mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 등골나물속 추출물 제조

본 발명에 사용된 등골나물속 식물은 경기도 양주시 감악산에서 직접 수확한 것으로, 등골나물(Eupatorium japonicum)이었다(도 1). 수확한 등골나물을 전초와 부위 별(꽃,잎,줄기)로 나누어 상온에서 2일간 완전히 건조시킨 다음, 곱게 분쇄하여 등골나물 분말 시료를 얻은 후, 각 부위별 분말 시료 10g 당 99.9 (v/v)% 메탄올 200ml을 넣은 후, 진탕배양기(shaking incubator)에서 120rpm, 40 ℃에서 24시간 추출하였으며, 상등액을 와트만(Whatman) No.1 필터 페이퍼(filter paper)로 여과하였으며, 남은 등골나물 시료에 다시 99.9% 메탄올을 시료 10g 당 200ml을 넣은 후 다시 24시간 추출하여 상기와 같은 방법으로 여과하였다. 여과액을 회전식 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 45℃에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 보낸 등골나무 전초 및 각 부위별 메탄올 추출물을 얻었다.

*실험예 1. C3H10T1 /2 세포에서 조골세포( osteoblast )분화 상승 효과 측정

(1) ALP ( alkaline phosphatase ) 염색

생쥐의 배아 섬유 모세포에서 기원한 C3H10T1/2 세포주는 일반적으로 골모세포와 지방세포를 포함한 다양한 세포혈통으로 분화할 수 있는 다능성 줄기세포주이다. C3H10T1/2 세포주는 10% FBS, 1% penicillin과 streptomycine이 첨가된 DMEM 배지로 37℃, 5% CO₂환경에서 배양되었다. Cell은 6 well plate에 2.5*10⁴/ml의 농도로 골세포 분화를 위한 10mM glycerophosphate와 50ug/ml ascorbic acid를 함유한 배지와 함께 배양하였고 3일 마다 배지를 교환하며 20ug/ml, 40ug/ml 등골나물 전초와 부위별 추출물과 함께 총 9일간 분화 시킨 뒤 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate/nitro blue tetrazolium(BCIO/NBT)를 이용하여 ALP staining을 하였다. ALP 염색결과를 도 2에 나타내었다. 그 결과, 전초, 잎, 줄기와 꽃 추출물에서 농도 의존적으로 ALP 활성이 높아지는 것을 알 수 있었고, 그 중 잎이 가장 높은 ALP활성을 보였다.

(2) realtime RT - PCR 을 통한 조골세포( osteoblast ) 분화 인자 발현량 분석

C3H10T1/2 세포를 3일마다 배지를 교환하며 등골나물 전초와 각 부위별 추출물 5ug/ml, 20ug/ml을 총 9일간 처리한 뒤 realtime RT-PCR을 통해 조골세포(osteoblast)형성의 중요한 요인인 ALP. osterix, COlⅠ의 mRNA 발현량을 확인하여 도 3 내지 6에 나타내었다.

그 결과, 전초의 경우 조골세포의 분화에 관련된 유전자중에서 5 ㎍/ml 농도에서 Osterix의 mRNA의 발현이 대조군(ctrl)에 비해 높았고, 20 ㎍/ml 농도에서는 ALP, COlⅠ에서 대조군(ctrl)에 비해 mRNA의 발현이 더 높았으며(도 3), 잎의 경우 5 ㎍/ml 농도에서는 대조군과 차이가 크지 않았으나, 20 ㎍/ml 농도에서는 ALP의 mRNA의 발현이 현저히 높았다(도 4).

줄기의 경우 5 ㎍/ml 농도에서 ALP mRNA의 발현이 더 높았고, 20 ㎍/ml 농도에서는 ALP, COlⅠ의 mRNA 발현량이 대조군에 비해 높았으며(도 5), 꽃의 경우에는 ALP의 mRNA 발현량이 대조군에 비해 높았다(도 6).

실험예 2. C3H10T1 /2 세포에서 지방세포( adipocyte )분화 억제 효과 측정

(1) 오일 레드 O 염색법( Oil red O staining )에 의한 지방세포 분화 저해 측정

C3H10T1/2 세포는 2.5*10⁴/ml의 농도로 지방세포 분화를 위한 1uM dexamethasone, 5ug/ml insulin 과 20nM PPARγ을 함유한 배지와 5ug/ml, 20ug/ml 등골나물 부위별 추출물을 넣어 9일간 배양하였다. 배지를 수거하고 4% formaldehyde로 세포를 고정시켜 0.5% Oil red O로 염색하여 그 결과를 도 7에 나타내었다.

도 7의 결과를 보면, 전초, 잎, 줄기와 꽃 모두 농도 의존적으로 지방세포의 분화를 억제 시킨 것을 알 수 있었다. 그 중 꽃의 지방세포 억제 효과가 가장 높았다.

(2) realtime RT - PCR 을 통한 지방세포( adipocyte )분화 인자 발현량 분석

C3H10T1/2 세포에 지방세포 분화 물질을 함유한 배지와 등골나물 전초, 부위별(잎, 줄기, 꽃)추출물을 총 10일간 처리한 뒤 realtime RT-PCR을 통해 지방세포(adipocyte) 형성의 중요한 요인으로 PPARγ, AP2, CD36, adiponectin C/EBPα, LPL의 상대적인 mRNA 발현량을 확인하여 도 8 내지 도 11에 나타내었다.

도 8 내지 11의 결과를 보면, 전초, 잎, 줄기와 꽃 추출물 모두 PPARγ, AP2, CD36, adiponectin C/EBPα, LPL 활성을 농도 의존적으로 저해한 것을 알 수 있었다.

하기에 본 발명의 추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 1의 전초 추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

*실시예 1의 전초 추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 1의 전초 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 1의 전초 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄ _,12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 1의 전초 추출물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

실시예 1의 전초 추출물 1,000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

실시예 1의 전초 추출물 1,000 ㎎

구연산 1,000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

등골나물(Eupatorium japonicum) 추출물을 유효성분으로 함유하고, 조골세포 분화 증대 활성 및 지방세포 분화 억제 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 비만 및 골다공증을 동시에 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매에 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 비만 및 골다공증을 동시에 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
제 2 항에 있어서, 상기 용매는 상기 저급 알코올의 혼합비가 5(v/v)% 내지 100%(v/v)인 알코올 수용액 또는 알코올인 것을 특징으로 하는 비만 및 골다공증을 동시에 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
삭제
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 추출물은 건조된 등골나물 중량의 1 내지 50 배 분량의 추출용매를 사용하여 교반추출, 열탕 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 또는 초임계 추출하여 얻어진 것임을 특징으로 하는 비만 및 골다공증을 동시에 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
등골나물(Eupatorium japonicum) 추출물을 유효성분으로 함유하고, 조골세포 분화 증대 활성 및 지방세포 분화 억제 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 비만 및 골다공증을 동시에 개선하기 위한 건강기능식품.
제 6 항에 있어서, 상기 건강기능식품의 형태는 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 것을 특징으로 하는 비만 및 골다공증을 동시에 개선하기 위한 건강기능식품.