KR101620950B1 - 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물에 관한 것으로, 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 혼합하여 혼합물을 만드는 단계(단계 1); 상기 혼합물에 물을 가한 후 열수추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 2); 및 상기 추출물을 여과하는 단계(단계 3); 를 포함하여 제조하는 것을 기술적 특징으로 하며, 피부 세포 재생, 항산화, 항균 효과가 우수할 뿐만 아니라, 최적의 배합비로 혼합함으로써 항염증 효과를 향상시킨 장점이 있다.

Description

피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물{Manufacturing method of the Cosmetic Composition for Regenerating Skin Cell, Anti-oxidant, Anti-bacterial effect and Anti-inflammatory of the skin and the Cosmetic Composition manufactured by the same}

본 발명은 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 최적의 배합비로 혼합하여 항염증 효과를 향상시킬 수 있는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부로부터 신체를 보호하는 방어막으로서 역할을 한다. 피부에 상처가 생기면 생체의 자연 치유 작용에 의해 상처자리를 혈액이 채우게 되고 혈소판의 과립감소와 하게만 인자(hageman factor)의 활성화가 시작되어 상처 치유 과정이 진행된다. 혈액의 응고는 임시 방어 작용으로서, 노출된 상처 조직들을 보호하고 치유 과정 동안 세포들이 이동할 수 있는 기반을 제공한다. 상처치유 과정은 크게 염증기, 재상피화기, 증식기 및 성숙기의 4단계로 구분된다. 염증기 동안에는 상처 자리에 면역 세포들이 출현하는데, 이 세포들은 혈관으로부터 상처 부위로 이동한 것이다. 이어 과립조직 형성을 유도하는 성장인자와 신호전달 물질들이 분비된다. 중대한 감염이 없는 상태에서는 염증기가 일반적으로 짧게 진행된다. 염증기는 상처치료 과정에 꼭 필요한 단계이다. 증식기는 재상피화기와 비슷하게 일어나게 되는데 상처 부위에서 과립 조직들이 형성되는 특성을 나타낸다. 과립조직들은 섬유아세포(fibroblasts) 및 염증성 세포(inflammatory cells)와 함께 미성숙 콜라겐(immaturity collagen), 피브로넥틴(fibronectin) 및 히알루론산(hyaluronic acid) 등의 세포외기질 구성요소들의 조합으로 이루어져 있고 이 과립조직들이 상처부분을 빠르게 채우고 조직적인 구조를 갖추는 것이 상처치료에 중요하다. 벗겨진 상처 표면이 각질형성세포(keratinocytes)층에 의해 덮이면서 새로운 표피가 생성되고 상피층이 재건되게 된다. 세포들은 상처 가장자리 또는 남겨진 피부의 진피 잔여물에서 상처를 통하여 떠올라 딱지 아래와 살아있는 결합 조직 위를 통하여 이주를 시작한다. 상처의 재상피화가 완료되면 결합조직의 증가와 재편성을 통해 상처 면적이 감소되는 일련의 과정들이 진행되게 된다. 그 후, 성숙기 동안에는 회복기 조직의 엉긴 세포들과 모세혈관들이 조금씩 사라지게 되는데 이런 조직들이 과형성되거나 정상적으로 분해되지 않을 경우 흉터가 생기게 된다. 이것이 빌반적인 상처치료 과정이다. 상처 치유과정에서는 상처를 빠르게 치료하는 것뿐만 아니라 부작용이나 흉터 없이 치료하는 것이 중요하기 때문에 염증의 억제와 성장 인자들의 발현 조절을 통해 조직세포들이 균형 있게 채워져 나가는 것이 더욱 중요하며, 이러한 효능을 가지는 물질을 찾고자 하는 노력이 계속 진행되고 있다.

인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하게 되고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가되고, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙하게 안 좋아지게 되고, 피부트러불이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 도한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 알라스틴, 히알루론산 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게된다. 또한 피부 노화가 진행되거나 피부가 자외선에 노출되면, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질 물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 기질물질의 분해 및 변성이 가속화되어 피부 기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 이러한 피부에는 아토피의 중요한 원인균인 말라세지아(Malassezia) 곰팡이와 황색포도알균(Staphylococcus aureus), 표피포도알균(Staphylococcus epidermidis) 및 여드름균(Propionibacterium acne) 등의 세균이 함께 공존하고 있어, 곰팡이가 아토피를 유발하면 세균들이 아토피로 인한 피부 증상을 더 악화시킨다. 따라서, 세균을 정균 혹은 살균하는 항균 효능과 말라세지아와 같은 곰팡이를 정균하는 항진균 효과를 동시에 갖는 피부 외용제 조성물의 필요성이 대두되고 있다.

화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 제품이지만 화장품 조성물에는 본래의 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품제조에 필수불가결한 존재이기 때문에 사용된다. 예를 들면 가용화제 및 유화제, 방부제, 향료, 자외선차단제 및 기타 부가물을 들 수 있다. 이러한 성분들은 일반적으로 피부에 염증이나, 뾰루지, 부종 등을 유발하는 주원인으로 알려져 있다.

염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어목적으로 나타나는 것이며 염증을 유발하는 원인으로 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인, 항체반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 일어난다. 염증을 소실시키기 위해 염증원의 제거, 생체반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 것을 항염제라고 한다.

화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있고 이를 해결하고자 여러 가지 연구가 진행되어 왔으며 현재까지 항염의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 프루폐나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 인도메타신(indometacine) 등이 있고, 스테로이드계통으로 프레드리솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexametahsone) 등이 있으며, 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존, 감초산 및 그 유도체 등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 인도메타신(indometacine)은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고, 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있으며, 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 적용시 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있다. 따라서, 지금까지 알려진 항염제는 피부안전성 면이나 화장료 배합시의 안정성 면에서 대부분 문제점이 있어 그 사용이 제한되고 있다.

대한민국등록특허공보 제10-0417791호(2004.02.11.)에는 항균 및 미용기능을 갖는 생약추출물을 포함하는 항균제 조성물이 개시되어 있다.

상기 특허에서는 항균 및 미용기능이 우수한 다양한 생약추출물을 제시하고 있지만, 항염증 효과를 향상시킬 수 있는 최적의 배합비에 대해서는 연구되지 않았다.

KR 10-0417791호 B1 2004.02.11.

본 발명의 목적은 최적의 배합비로 혼합하여 항염증 효과를 향상시킬 수 있는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 다음과 같은 수단을 제공한다.

본 발명은 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 혼합하여 혼합물을 만드는 단계(단계 1); 상기 혼합물에 물을 가한 후 열수추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 2); 및 상기 추출물을 여과하는 단계(단계 3); 를 포함하는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법을 제공한다.

상기 단계 1에서, 상기 혼합물은 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1~2 : 1 : 1~2 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합한다.

상기 단계 2는, 상기 혼합물을 부직포 마대에 넣은 후, 열수 추출탱크에 투입하고, 상기 혼합물 100중량부에 대하여 물 800~1,000중량부를 가한 후 85~100℃의 온도조건에서 8~10시간 동안 열수추출한다.

상기 단계 3은, 상기 추출물을 활성탄소 필터를 통과시킴으로써 중금속 및 잔류 농약성분을 흡착 및 제거한 후에, 상기 활성탄소 필터를 통과한 추출물의 온도를 10~15℃로 유지하면서 10,000-15,000rpm의 고속 원심분리장치를 통과시킨다.

또한, 본 발명은, 상기 제조방법으로 제조되는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화장용 조성물을 함유하는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장품을 제공한다.

본 발명에 따른 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피의 혼합 추출물을 함유하는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물은 피부 세포 재생, 항산화, 항균 효과가 우수할 뿐만 아니라, 최적의 배합비로 혼합함으로써 항염증 효과를 향상시킨 장점이 있다.

도 1은 실험용 쥐의 상처난 사진이다.
(도 1의 a 의 상처에는 시료 1을 살균처리된 거즈에 묻혀 부착, 도 1의 b 의 상처에는 시료 2를 살균처리된 거즈에 묻혀 부착, 도 1의 c 의 상처에는 시료 3을 살균처리된 거즈에 묻혀 부착, 도 1의 d 의 상처에는 시료 4를 살균처리된 거즈에 묻혀 부착)
도 2는 상처유도 후 3주 후의 사진이다.
도 3은 상처유도 후 7주 후의 사진이다.
도 4는 시료 1을 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프이다.
도 5는 시료 2를 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프이다.
도 6은 시료 3을 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프이다.
도 7은 시료 4를 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프이다.
도 8은 그람 음성균인 대장균(E. coli)에 대한 살균시험 초기 사진이다.
도 9는 그람 음성균인 대장균(E. coli)에 대한 살균시험 1시간 후 사진이다.
도 10은 그람 양성균인 황색포도상구균(S. aureus)에 대한 살균시험 초기 사진이다.
도 11은 그람 양성균인 황색포도상구균(S. aureus)에 대한 살균시험 1시간 후의 사진이다.
도 12는 실시예 1 내지 실시예 3 및 비교예 3 내지 비교예 5의 조성물에 대해 Cell viability를 MTS assay를 이용하여 측정한 그래프이다.
도 13은 Nitrite 억제 효과를 조사하기 위하여 LPS로 염증을 유도한 후 Griess reagent를 사용하여 Nitric oxide의 생성량을 나타내는 그래프이다.
도 14는 LPS에 의해 생성되는 PGE2의 생성량을 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

먼저, 본 발명에 따른 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법에 대해 설명한다.

본 발명에 따른 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법은,

인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 혼합하여 혼합물을 만드는 단계(단계 1);

상기 혼합물에 물을 가한 후 열수추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 2); 및

상기 추출물을 여과하는 단계(단계 3);

를 포함한다.

본 발명에서 사용되는 인삼(Panax ginseng C.A Meyer : Ginseng radix)은 쌍떡잎식물 산형화목 두릅나무과의 여러해살이풀의 뿌리로, 진세노사이드(ginsenoside)라고 명명되는 총 30여 종의 사포닌 성분을 함유하고 있으며, 피부 재생력을 키워주며 피부트러블을 억제하고 피부 세포를 빠르게 재생시키는 효과가 있다. 20세기 후반부터 사포닌 이외 인삼 다당체, 단백질 그리고 펙틴과 같은 다양한 성분에 대해서도 연구가 활발하게 진행되면서 인삼의 다양한 생리활성 성분이 피부세포의 생장에 관여하는 성장호르몬의 분비를 촉진시키며 혈관확장과 혈관 내 노폐물을 제거하고 혈류를 원활하게 하여 조직과 세포에 영양공급을 왕성하게 해주며 항산화작용으로 피부노화 방지효과와 항염증, 항균작용과 지방질 제거효과 등이 있는 것으로 속속 밝혀지고 있어 식품이 아닌 화장품과 의약품 분야에서도 약리 효능 측면에서 가치가 매우 높다.

본 발명에서 사용되는 원지(Polygalae Radix)는 원지과 식물인 세엽원지(Polygala tenuifolia Willd.)의 뿌리로서 신경쇠약, 심계, 건망, 해수, 불면 등의 치료에 응용되며 약리작용으로는 항균, 자궁수축력 및 긴장도 등의 증가, 항염작용 등이 알려져 있다. 원지는 독성이 약하고 점막분비선의 분비기능을 높이며 조직 상피구조의 투과성을 높인다. 곪은 상처, 뽀두라지, 고름집 등의 피부질환에 효과가 있으며 피부 내 약용성분의 침투를 용이하게 하고 세포조직 내 노폐물이나 지방질, 화농 등의 배출을 용이하게 해준다. 진정, 항균, 거담, 강압작용, 용혈작용, 자궁흥분작용, 항암작용, 심기안정, 건망증, 잘 놀라면서 가슴이 뛸 때, 가래기침, 최면작용, 강심작용, 가래 삭힘 작용, 급만성기관지염, 폐렴, 후두염 등에 효능이 있다.

본 발명에서 사용되는 고삼(Sophora flavescens)은 맛이 쓰다는 의미의 고라는 글자와 효능이 삼과 유사하다는 의미의 삼이라는 글자를 합성한 것으로, 뿌리의 생김새 때문에 도둑놈의 지팡이라는 식물명을 가지고 있다. 고삼은 마트린(matrin), 옥시마트린, 소프라놀, 아나기린, 소포카르핀, 메틸시티신, 아로마트린, 플라보노이드, 이소안하이드, 로이카린 등을 함유하고 있어 살균, 항균, 항진균 작용이 탁월한 것으로 알려져 있으며, 피부염, 아토피, 여드름에 효과적이다. 고삼은 항균작용이 우수하여 염증을 예방하고 아토피로 인한 가려움 증상을 완화시키며 알칼로이드와 플라보나이드가 함유되어 있어 피부상제균에 대한 항균, 항진균 작용이 강하여 피지제거 해독작용, 여드름균 억제 및 살균작용과 부패 분비제거, 트리코모나스질염, 습진, 신경성 피부염, 자궁 내막염, 피부병, 나병, 피부미백효과, 황달, 옴, 마름버짐, 치질, 대하 등에 효과가 탁월하다.

본 발명에서 사용되는 감초는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이풀로, 트리테르페노사이드사포닌의 하나인 글리치리진과, 플라보노이드에 해당하는 리쿠이리틴, 리쿠이리티게닌, 이소리쿠이리틴과, 쿠마린화합물인 헤르니아린, 움벨리페론, 유기산, 아스파라긴을 비롯한 여러 가지 아미노산 등을 함유하며, 항염, 항산화효과가 탁월하다. 감초는 약물의 중독을 풀어주며 항염증 작용이 강한 것으로 알려져 있다. 글리브리딘이란 성분은 태양 자외선에 의해 유도되는 색소 침착증, 홍반 현상을 억제하는 효과와 소염작용이 있고 과산화물의 생성과 산화효소의 활성을 억제함으로써 피부 노화방지 효과와 피부 멜라민의 생성과 염증 발생을 억제하는 효능이 있다. 또한, 글리시리진을 위시한 트리테르페노이드와 폴리페놀과 다당류 성분 등은 강력한 소염작용, 항바이러스 효과, 항궤양효과, 항암 효과 등의 다양한 약리작용이 있다.

본 발명에서 사용되는 황련(Coptidis rhizoma)은 한방에서 사용되는 생약으로, 세균성 감염에 효과가 있다고 알려져 있고, 그 주요물질로 알칼로이드(alkaloid) 성분인 프로토버버린(protoberberine)을 함유하고 있다. 이러한 프로토버버린(protoberberine)은 알카로이드 혼합물 총칭으로서, 버버린(berberine), 콥티신(coptisine), 자트로리진(jatrorhizne), 팔미틴(palmitine) 등이 함유되어 있으며, 이 중에서 버버린(berberine)이 항칸디다 활성을 가지는 것으로 알려져 있다. 황련의 버버린(berberine)이란 주성분은 세균감염에 의해 발생하는 질환을 치료하는데 사용되는 약물로 알칼로이드 물질에 속한다. 또한 항생작용이 있어 포도상구균에 대해 직접 제균 작용을 하며 소염, 해열약으로 유효하며 폐렴, 황달, 자궁염, 요도염에도 응용하고 외용으로는 급성화농성 피부질환, 구강염, 결막염 등에 효능이 있으며 강한 항염증, 항균작용이 있어 이질균, 결핵균, 대장균, 녹농균, 뇌막염 쌍구균 등에 억제효과가 크고 호흡, 흥분작용과 진정, 근육이완 작용이 있으며 혈관확장작용과 국부 마취작용이 있다.

본 발명에서 사용되는 유근피(Ulmus macrocarpa)는 느릅나무 뿌리의 껍질로 그 성분으로 플라보노이드, 사포닌, 점액질, β-시토스테롤(sitosterol), 파이토스테롤(phytosterol), 시티그마스테롤(stigmasterol), 레진(resin), 지방산(fattyoil) 등이 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 끈적끈적한 진액을 피부에 바르면 각종 피부질환을 치료하고 피부를 아름답고 매끄럽게 하는데 신기한 효과가 있다. 항염증 작용, 항균작용이 뛰어나 곪은 상처와 같은 화농성 피부염, 종기, 종창 등에 바르면 고름을 빨아내고 새살을 돋게 하며 아토피성 피부염이나 세균성 피부질환에 탁월한 치유효과를 보인다.

상기 단계 1에서 상기 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피는 추출효율을 높이기 위해 파쇄한 후에 혼합하는 것이 바람직하다.

상기 단계 1에서 상기 혼합물은 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1~2 : 1 : 1~2 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하는 것이 바람직하다.

본 발명은 상기 비율로 혼합하는 경우에 항염증 효과를 향상시킬 수 있는 것을 실험을 통하여 확인하였다.

상기 단계 2는 상기 혼합물을 부직포 마대에 넣은 후, 열수 추출탱크에 투입하고, 상기 혼합물 100중량부에 대하여 물 800~1,000중량부를 가한 후 85~100℃의 온도조건에서 8~10시간 동안 열수추출하고, 상기 부직포 마대를 제거하여 추출물을 얻는 것이 바람직하다.

상기 단계 3은 상기 추출물을 활성탄소 필터를 통과시킴으로써 중금속 및 잔류 농약성분을 흡착 및 제거한 후에, 상기 활성탄소 필터를 통과한 추출물의 온도를 10~15℃로 유지하면서 10,000-15,000rpm의 고속 원심분리장치를 통과시킴으로써 단백질, 탄수화물, 섬유질을 제거하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조되는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물은 피부 세포 재생, 항산화, 항균 효과가 우수할 뿐만 아니라, 최적의 배합비로 혼합함으로써 항염증 효과를 향상시킨 장점이 있다.

또한, 본 발명은 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 혼합 추출물을 포함하는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장품을 제공한다. 상기 혼합 추출물은 전체 중량비에서 1 내지 30 중량%로 함유될 수 있으며, 5 내지 20 중량%로 함유될 수 있다.

또한, 본 발명의 추출물을 포함하는 화장용 조성물은 상기 추출물 이외에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제형화할 수 있다. 본 발명의 화장용 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 클렌징 크림, 클렌징포옴, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로 플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이스프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁화제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 실시 예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의해 제한되는 것은 아니다.

인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 파쇄한 후에 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1 : 1 : 1 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만들었다. 상기 혼합물을 부직포 마대에 넣은 후, 열수 추출탱크에 투입하고, 상기 혼합물 100중량부에 대하여 물 900중량부를 가한 후 90~95℃의 온도조건에서 9시간 동안 열수추출하고, 상기 부직포 마대를 제거하여 추출물을 얻었다. 상기 추출물을 활성탄소 필터를 통과시킴으로써 중금속 및 잔류 농약성분을 흡착 및 제거한 후에, 상기 활성탄소 필터를 통과한 추출물의 온도를 10~15℃로 유지하면서 10,000-15,000rpm의 고속 원심분리장치를 통과시킴으로써 단백질, 탄수화물, 섬유질을 제거하여 조성물을 제조하였다. (BG)

[비교예 1]

실시예 1에서, 인삼, 원지 및 고삼을 중량비로 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다.

[비교예 2]

실시예 1에서, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다.

[실험예 1]

실시예 1에서 제조한 조성물이 피부 세포 재생 효과가 있는지 확인하기 위하여 실험을 실시하였다. 먼저, 살균처리된 증류수 100㎖를 준비(시료 1)하였다. 그리고 살균처리된 증류수 90㎖에 비교예 1에서 제조한 조성물을 감압농축하여 얻은 고형분 20% 농도의 조성물 10㎖를 혼합하여 시료 2를 만들었고, 살균처리된 증류수 90㎖에 비교예 2에서 제조한 조성물을 감압농축하여 얻은 고형분 20% 농도의 조성물 10㎖를 혼합하여 시료 3을 만들었으며, 살균처리된 증류수 90㎖에 실시예 1에서 제조한 조성물을 감압농축하여 얻은 고형분 20% 농도의 조성물 10㎖를 혼합하여 시료 4를 만들었다. 실험용 쥐의 복부부분을 제모한 다음 상기 시료 1 내지 시료 4의 세포 재생능을 비교하기 위하여 메스를 이용하여 동일한 크기의 상처를 4군데 만들어 소독용 거즈로 출혈을 멈추게 하였다. 실험용 쥐의 상처난 사진을 도 1에 나타내었다. 도 1의 a 의 상처에는 시료 1을 살균처리된 거즈에 묻혀 부착하였고, 도 1의 b 의 상처에는 시료 2를 살균처리된 거즈에 묻혀 부착하였고, 도 1의 c 의 상처에는 시료 3을 살균처리된 거즈에 묻혀 부착하였고, 도 1의 d 의 상처에는 시료 4를 살균처리된 거즈에 묻혀 부착하였다. 도 1의 a, b, c, d 의 상처에 매일 1회씩 동일한 시료를 묻힌 거즈를 새롭게 교체하였다. 상처유도 후 3주 후의 사진을 도 2에 나타내었고, 상처유도 후 7주 후의 사진을 도 3에 나타내었다. 상처가 치유되는 모습을 육안으로 확인한 결과는 도 2 및 도 3과 같으며, 증류수를 이용한 시료 1을 처리한 상처 a 의 회복상태는 매우 더디게 나타나고 있는 반면에, 실시예 1의 조성물을 이용한 시료 4를 처리한 상처 d 는 상처의 흔적이 매우 미미할 정도로 회복속도가 빠름을 알 수 있다. 또한, 비교예 1의 조성물을 이용한 시료 2를 처리한 상처 b 와 비교예 2의 조성물을 이용한 시료 3을 처리한 상처 c 는 상처 a 에 비해서는 회복속도가 빠르지만, 상처 d 에 비해서는 회복속도가 다소 느림을 알 수 있다.

[실험예 2]

실시예 1에서 제조한 조성물이 항산화 효과가 있는지 확인하기 위하여 실험을 실시하였다. 시료 1 내지 시료 4는 실험예 1과 동일하게 만들었다. 상기 시료 1 내지 시료 4의 항산화 효과를 알아보기 위하여 정상적인 신진대사에서 세포 내 호흡을 수행하면서 에너지를 발생시키는 미토콘드리아에서 발생하는 산화 물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량을 전기영동장치를 이용하여 측정하였다. 시료 1을 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프를 도 4에 나타내었고, 시료 2를 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프를 도 5에 나타내었고, 시료 3을 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프를 도 6에 나타내었고, 시료 4를 담은 미토콘드리아 세포에서 발생하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 발생량 그래프를 도 7에 나타내었다. 도 4 내지 도 7을 보면 알 수 있듯이, 도 4의 시료 1을 담은 미토콘드리아 세포에서 가장 많은 과산화수소(H₂O₂)가 발생하였고, 도 7의 시료 4를 담은 미토콘드리아 세포에서 가장 적은 양의 과산화산소(H₂O₂)가 발생하였다. 이러한 결과는 피부노화를 유발하는 산화물질인 과산화수소(H₂O₂)의 생성을 실시예 1의 조성물이 세포 신진대사과정에서 활성산소의 발생을 현저하게 억제시키고 산소와 물로 전환시킴을 알 수 있다.

[실험예 3]

실시예 1에서 제조한 조성물이 항균 효과가 있는지 확인하기 위하여 실험을 실시하였다. 대장균 및 황색포도상구균을 Brain Heart Broth (DIFCO)에 배양시킨 후 배양된 세균을 희석하여 초기 세균수가 10⁵ ~10⁶ CFU/㎖ 이 되도록 조정하여 시험에 사용하였다. 시험용액(원액) 20㎖에 시험균액을 첨가하고 혼합한 후 상온에서 1시간 동안 방치하였을 때 세균수를 측정하여 초기 세균수에 대한 살균감소율을 알아보았다. 생리식염수를 대조로 하여 세균 수를 측정한 것을 초기 세균수로 표시하였다. 단, 이때 모든 실험의 최초 희석 단계에서는 D/E Neutralizing Broth (DIFCO)를 이용하여 중화시키는 과정을 거쳐 시험을 실시하였으며 배지에서 세균이 증식한 경우, 배지상의 균수에 희석 배수를 곱하여 산출하였으며, 배지에서 세균이 증식하지 않는 경우는 중화단계에서 이루어진 희석배수를 곱하여 『10 미만 (<10)』 으로 표시하였다. 생균수 계산은 [식1]에 따라 측정하였고 살균감소율은 [식2]에 따라 결정하였다.

생균수 계산 [식1] N = C × D

N : 생균수

C : 집락수 (2매의 집락 수 평균치)

D : 희석배수 (희석액의 희석배수)

살균감소율(%) 계산 [식2] R(%) = [(A-B)/A] × 100

R : 살균감소율

A : 초기 세균수

B : 일정시간 후 세균 수

실시예 1에서 제조한 조성물에 대한 항균 효력을 알아보기 위하여 그람 음성균인 대장균(E. coli)과 그람 양성균인 황색포도상구균(S. aureus)에 대하여 살균시험을 실시하였다. 그 결과는 하기 표 1과 같으며, 그람 음성균인 대장균(E. coli)에 대한 살균시험 초기 사진을 도 8에, 살균시험 1시간 후의 사진을 도 9에 나타내었고, 그람 양성균인 황색포도상구균(S. aureus)에 대한 살균시험 초기 사진을 도 10에 나타내었고, 살균시험 1시간 후의 사진을 도 11에 나타내었다.

시험균주	초기	1시간 후
E. coli	4.3 × 105	<10 (99.9% 이상)
S. aureus	3.1 × 105	<10 (99.9% 이상)

표 1 및 도 8, 도 9를 보면, E. coli 에 대한 살균시험 결과, 초기 접종균수 [4.3×10⁵ CFU/㎖] 에서 1시간 처리 후 [<10(10미만) CFU/㎖] 로 감소하였다.

표 1 및 도 10, 도 11을 보면, S. aureus 에 대한 살균시험 결과, 초기 접종균수 [3.1×10⁵ CFU/㎖] 에서 1시간 처리 후 [<10(10미만) CFU/㎖] 로 감소하였다.

위의 결과에서 보듯이, 실시예 1에서 제조한 조성물이 나타내는 세균성 미생물에 대한 살균효과는 매우 우수한 것으로 나타났다.

실시예 1에서, 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 2 : 1 : 1 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다. (Mat)

실시예 1에서, 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1 : 1 : 2 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다. (Via)

[비교예 3]

실시예 1에서, 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1 : 2 : 1 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다. (HP)

[비교예 4]

실시예 1에서, 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1 : 1 : 1 : 1 : 1 : 2 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다. (LS)

[비교예 5]

실시예 1에서, 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 1 : 1 : 1 : 2 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만든 것을 제외하고 나머지는 동일하게 하여 조성물을 제조하였다. (CY)

[실험예 4]

실시예 1 내지 실시예 3에서 제조한 조성물이 항염증 효과가 있는지 확인하기 위하여 Nitric Oxide와 PGE2의 생성 억제 효과를 측정하는 실험을 실시하였다.

1) 세포배양

마우스의 대식세포주인 RAW 264.7 cell은 한국세포주은행(KCLB)에서 분양받았으며, 세포배양을 위해 1% penicillin-streptomycin과 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지를 사용하였다. 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

2) Cell viability 측정

세포생존율 측정은 5-(3-carboxymeth-oxyphenyl)-2H-tetra-zolium inner salt (MTS) assay를 사용하여 측정하였다. 상기 배양된 RAW 264.7 세포를 96 well plate에 1×10⁴ cells/well 분주하고, 상기 실시예 1 내지 실시예 3, 비교예 3 내지 비교예 5에서 수득한 조성물을 각각 농도별 (0, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 750, 1000 ㎍/㎖)로 18시간 동안 처리하였다. 이후 well 당 20㎕ MTS 용액을 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 4시간 동안 반응시킨 후, 마이크로 플레이트 리더(microplate reader, DYNEX, Opsys MR, USA)를 이용하여 450㎚에서 흡광도의 변화를 측정하여 조성물을 처리하지 않은 대조군에 대한 세포생존율을 백분율로 표시하였다.

3) NO(Nitric Oxide) 억제효과 측정

LPS로 염증을 유도한 RAW 264.7 세포의 세포 배양액 내 nitrite 농도를 Griess Reagent 를 이용하여 측정하여, 상기 실시예 1 내지 실시예 3, 비교예 3 내지 비교예 5에서 수득한 조성물이 NO를 얼마나 억제하는지 정량하였다. RAW 264.7 세포에 시료를 Cell viability 를 손상시키지 않는 농도 이내에서 농도별로 전 처리하고, 1시간 후 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 18시간 동안 배양하였다. 세포 배양액 50 ㎕ 와 동량의 Griess Reagent를 혼합하여 상온에서 10분간 반응시킨 다음 microplate reader(VersaMax, Molecular Devices, USA)를 사용하여 540 ㎚ 파장에서의 흡광도를 측정하였다. Sodium nitrite를 농도별로 분주하여 표준곡선을 얻고 조성물의 흡과도와 대비하여 배양액 내의 NO 농도를 계산하였다.

4) PGE2 생성량 측정

세포 배양액 내의 PEG2 를 측정하여 조성물이 어느 정도의 cytokine 억제 효과를 보이는지 확인하였다. commercial competitive enzyme immunoassay kit를 R&D systems (Minneapolis, USA)에서 구입하여 실험하였다. RAW 264.7 세포에 시료를 Cell viability를 손상시키지 않는 농도 이내에서 농도별로 전처리하고, 1시간 후 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 18시간 동안 배양하였다. 여기서 얻은 세포 배양액을 goat anti-mousse 로 coating된 96 well plate에 100㎕ loading 한 다음, primary antibody solution과 PGE2 conjugate 를 각각 50㎕ 씩 첨가하여 4℃에서 overnight 시켰다. Washing buffer를 사용하여 4회 세척하고 substrate solution을 200㎕ 씩 처리하여 5분간 반응시킨 후, 50㎕의 stop solution을 처리한 다음, 450㎚ 파장에서의 흡광도를 측정하였다. 생성된 PGE2의 양은 조성물을 처리하지 않은 well 에 대하여 fold 값으로 나타내었다.

RAW 264.7 세포에 대한 각 조성물의 Nitric Oxide와 PGE2 억제 효과를 측정하기 위하여 먼저 Cell viability를 MTS assay를 이용하여 측정하였고, 그 결과는 도 12와 같다. 비교예 5(CY)의 경우에는 500 ㎍/㎖, 나머지 다른 조성물인 실시예 1(BG), 실시예 2(Mat), 실시예 3(Via), 비교예 3(HP), 비교예 4(LS)는 모두 750 ㎍/㎖ 농도에서 세포 생존율이 80% 이하로 내려갔다. 따라서 비교예 5(CY)는 250 ㎍/㎖, 나머지 조성물은 500 ㎍/㎖ 농도를 최고 농도로 하여 이후 실험을 진행하였다.

먼저 Nitrite 억제 효과를 조사하기 위하여 LPS로 염증을 유도한 후 Griess reagent를 사용하여 Nitric oxide의 생성량을 측정하여 도 13에 나타내었다. 도 13을 보면, 실시예 2(Mat), 실시예 1(BG), 실시예 3(Via)의 조성물이 비교예 4(LS), 비교예 3(HP), 비교예 5(CY)의 조성물에 비해 Nitric oxide 억제 효과가 우수한 것을 확인할 수 있다.

또한, LPS에 의해 생성되는 PGE2의 생성량을 측정하여 도 14에 나타내었다. 도 14를 보면, 실시예 1(BG), 실시예 2(Mat), 실시예 3(Via)의 조성물이 비교예 4(LS), 비교예 3(HP), 비교예 5(CY)의 조성물에 비해 PGE2 생성량을 감소시키는 효과가 우수한 것을 확인할 수 있다.

본 발명은 상기와 같이 조성물의 함량비를 다르게 함에 따라 항염증 효과가 달라지는 것을 확인하였으며, 최적의 배합비로 혼합하여 항염증 효과를 향상시킬 수 있는 피부 세포 재생 효과, 항산화 효과, 항균 효과 및 항염증 효과를 갖는 화장용 조성물을 제공하는 장점이 있다.

Claims (6)

1. 삭제
2. 인삼, 원지, 고삼, 감초, 황련 및 유근피를 중량비로 2 : 1 : 1 : 1 : 1 : 1 의 비율로 혼합하여 혼합물을 만드는 단계(단계 1);
   상기 혼합물을 부직포 마대에 넣은 후, 열수 추출탱크에 투입하고, 상기 혼합물 100중량부에 대하여 물 800~1,000중량부를 가한 후 85~100℃의 온도조건에서 8~10시간 동안 열수추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 2); 및
   상기 추출물을 활성탄소 필터를 통과시킴으로써 중금속 및 잔류 농약성분을 흡착 및 제거한 후에, 상기 활성탄소 필터를 통과한 추출물의 온도를 10~15℃로 유지하면서 10,000-15,000rpm의 고속 원심분리장치를 통과시켜 여과하는 단계(단계 3);
   를 포함하는,
   항염증 효과를 갖는 화장용 조성물의 제조방법.
   
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제

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