KR101620275B1 - 갈조류 유래 혼합 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항산화, 면역 증강 및 항염 효과가 모두 우수한 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 단일 추출공정으로 제조하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로, 분말화된 감태를 열수 추출 후 별도의 여과 단계 없이 가수분해효소를 투여하고 생성된 효소 가수분해물을 여과 및 농축하는 단계를 포함한다.
Description
본 발명은 갈조류 유래 혼합 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
대형 갈조류(brown algae)의 한 종류인 감태(Ecklonia cava)는 한반도의 온화한 해안 구역에 분포하고 있으며, 일반적으로 맑은 물에서 높은 밀도로 서식한다(비특허문헌 1).
감태는 항암, 조혈 촉진 효과, 면역조절 효과, B 림프구와 대식세포 등 주요 면역세포에 대한 면역자극 효과가 있는 황화다당체로 잘 알려진 후코이단을 포함하고 있다. 후코이단은 식용이 가능한 물질로 의약 및 건강기능식품 관련 산업 분야에서 폭넓게 사용된다(비특허문헌 2).
이에, 본 발명자들은 감태로부터 후코이단 및 기능성 성분을 포함하는 혼합 조성물을 제조하는 방법을 개발하였으며 이의 조성 비율에 의해 최적의 생리활성이 나타나는 것을 밝혀 본 발명을 완성하였다.
Kang R.S., Won K.S., Hong K.P. and Kim J.M. 2001. Population studies on the Kelp Ecklonia cava and Eisenia bicyclis in Dokdo, Korea. Algae 16: 209-215.
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본 발명은 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
또한, 본 발명은 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 제공하기 위한 것이다.
또한, 본 발명은 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 면역 증강 및 항염용 약학적 조성물을 제공하기 위한 것이다.
또한, 본 발명은 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 면역 증강 및 항염용 건강기능식품을 제공하기 위한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물의 제조방법을 제공하며, 상기 제조방법은 ⅰ) 동결건조한 감태(Ecklonia cava)를 1 내지 40 메쉬(mesh)의 크기로 분말화하는 단계; ⅱ) 상기 분말화된 감태를 담수 100 중량부 기준으로 5 내지 10 중량부 첨가하고 95 내지 100℃의 열수로 4 내지 8시간 동안 열수 추출하는 단계; ⅲ) 상기 열수 추출한 후 60 내지 65℃로 추출물을 냉각하는 단계; ⅳ) 상기 냉각된 추출물의 pH를 6.5 내지 7.0으로 조정한 후 당분해효소를 첨가하고 2 내지 8시간 동안 효소반응시켜 감태 가수분해물을 생성하는 단계; ⅴ) 상기 감태 가수분해물을 여과하고 농축하는 단계;를 포함하는 것일 수 있다.
상기 단계 ⅴ)에서 여과하고 농축된 감태 효소 가수분해물 내의 폴리페놀은 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 11 내지 20 중량%로 포함되고 후코이단은 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 51 내지 60 중량%로 포함되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 폴리페놀 12 내지 13 중량% 및 후코이단 55 내지 56중량%로 포함되는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
감태(Ecklonia cava)란, 주로 제주도 일대 및 일부 남해안에 분포하는 갈조류로 평소에는 갈색이나 건조하면 흑색이 된다. 점심대의 수심 10m 내외의 깊은 곳에서 서식하고 2-3년간 생장하는 다년생 식물이다. 전복의 주 먹이이기도 한 감태는 알긴산, 요오드 및 칼륨 등의 영양소가 많이 함유되어 있는 건강식품 자원으로 활용되고 있다.
상기 당분해효소는 셀루클라스트(celluclast), 글루코아밀레이스(amyloglucosidase, AMG), 울트라플로(Ultraflo) 및 터마밀(Termamyl)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것일 수 있으나, 바람직하게는 셀루클라스트(Celluclast)일 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 제공한다.
본 발명은 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 면역 증강 및 항염용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다. 구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정제, 트로치제(troches), 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀롤로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐 제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 혼합 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의단위 투여형으로 제제한다.
본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 추출물을 0.0001 ~ 500 ㎎의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 0.001 ~ 100 ㎎의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명은 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 면역 증강 및 항염용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품은 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
상기 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 등은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
그 밖에 본 발명의 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물은 천연 과일주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 크게 중요하지는 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 일실시예에서, 본 발명자들은 감태 유래 폴리페놀 및 혼합 조성물을 단일 추출공정으로 제조하는 방법을 개발하였다. 구체적으로, 분말화된 감태를 열수 추출 후 온도가 65℃ 이하로 낮아지면 pH를 6.5로 조정하고 별도의 여과 단계 없이 가수분해효소 투여 후 생성된 효소 가수분해물을 여과 및 농축하였다. 그 결과, 열수 추출 후의 셀루클라스트 가수분해물은 다른 효소 가수분해물, 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물과 달리 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 폴리페놀이 12 내지 13 중량% 및 후코이단이 55 내지 56중량%로 포함되었다. 그리고, 이와 같은 조성에 의해 다른 효소 가수분해물, 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물보다 항산화, 면역 증강, 항염 효과가 동시에 모두 우수하여(표 5), 본 발명의 제조방법에 따른 감태 유래 가수분해물이 최적의 생리활성을 나타내는 것을 확인하였다.
본 발명은 분말화된 감태를 열수 추출 후 별도의 여과 단계 없이 가수분해효소를 투여하고 생성된 효소 가수분해물을 여과 및 농축하는 단계를 포함하는, 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 단일 추출공정으로 제조하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물은 항산화, 면역 증강 및 항염 효과가 동시에 모두 우수하므로 항산화, 면역 증강 및 항염용 약학적 조성물 또는 건강기능식품에 적용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 갈조류(brown algae)의 한 종류인 감태(Ecklonia cava)의 사진이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
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실시예
1> 감태 유래
가수분해물
제조
감태 유래 폴리페놀 및 후코이단의 혼합 조성물을 단일 추출공정으로 제조하기 위해, 동결건조된 감태 20 g을 40 메쉬(mesh) 이하의 크기로 분말화하였다. 분말화된 감태는 담수 100 중량부 기준으로 10 중량부를 첨가하고 95℃ 초과의 열수로 4시간 동안 열수 추출 후 온도가 65℃ 이하로 낮아지면 pH를 가수분해효소(당분해효소)의 최적 조건에 부합하는 pH 6.5로 조정하였다.
이후, 별도의 여과 단계 없이 가수분해효소를 기질에 대하여 각각 10:1 및 100:1 비율로 투여하고 6시간 동안 가수분해하여 감태 가수분해물을 제조하였다. 가수분해효소로는 당분해효소인 셀루클라스트(celluclast)(Novozyme, Denmark), 글루코아밀레이스(Novozyme, Denmark), 울트라플로(Ultraflo)(Novozyme, Denmark) 및 터마밀(Termamyl)(Novozyme, Denmark)을 사용하였다.
제조한 감태 가수분해물은 1.2mm 폴리피렌(polypilene) 고밀도 여과포를 충전재로 사용한 필터프레스(한국필터주식회사)를 사용하여 1차 여과를 수행하고 농축과정을 진행 후 동결건조하였다. 이후 생리활성 실험 시에는 동결건조된 샘플을 증류수에 녹인 후 포어사이즈 0.45 ㎛인 여과막으로 2차 여과 후 사용하였다.
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실시예
2> 가수분해효소에 따른 감태 유래
가수분해물
성분 분석
실시예 1에 따라 수득한 감태 셀루클라스트 가수분해물, 감태 글루코아밀레이스 가수분해물, 감태 울트라플로 가수분해물 및 감태 터마밀 가수분해물에 대한 수율과 폴리페놀 및 후코이단 함량을 측정하였다.
그 결과, 표 1과 같이 감태 셀루클라스트 가수분해물의 수율(Yield)은 50.5±1.6 %로 다른 효소 가수분해물보다 높았으며, 감태 셀루클라스트 가수분해물의 폴리페놀 함량은 12.8±1.1 %, 후코이단 함량은 55.4±1.1 %로 다른 효소 가수분해물보다 높은 것을 확인하였다. 또한, 감태 셀루클라스트 가수분해물의 후코이단 내 황산기 함량은 14.7±0.6 %, 후쿠오스 함량은 66.2±2.7 %으로 다른 효소 가수분해물보다 황산기 및 푸코오스 함량이 크게 증가되었다(표 2). 이에 따라, 이후 실험은 가수분해효소로 셀루클라스트를 이용한 가수분해물로 수행하였다.
| 열수 추출 + 효소 처리 | ||||
| AMG | Celluclast | Termamyl | Ultraflo | |
| 수율(Yield)/% | 46.7 | 50.5 | 46.3 | 45.6 |
| 폴리페놀(Polyphenol)/중량% | 10.7 | 12.8 | 8.9 | 9.1 |
| 후코이단(Fucoidan)/중량% | 50.6 | 55.4 | 48.9 | 46.3 |
| 조단백질(Crude Protein)/중량% | 31.1 | 26.0 | 36.1 | 36.3 |
| 조지방 및 조회분/중량% | 7.6 | 5.8 | 6.1 | 8.3 |
| 열수 추출 + 효소 처리 | ||||
| AMG | Celluclast | Termamyl | Ultraflo | |
| 후코이단(Fucoidan)/중량% | 50.6 | 55.4 | 48.9 | 46.3 |
| 후코이단 내 황산기 (Sulfate)/중량% | 11.69 | 14.7 | 12.3 | 10.9 |
| 후코이단 내 푸코오스 (Fucose)/중량% | 49.6 | 66.2 | 50.3 | 50.6 |
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실시예
3> 추출 공정에 따른 감태 유래
가수분해물
성분 분석
실시예 1에 따라 수득한 감태 셀루클라스트 가수분해물, 열수 추출물 및 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물에 대한 수율과 폴리페놀 및 후코이단 함량을 측정하였다.
그 결과, 표 3과 같이 열수 추출 후 감태 셀루클라스트 가수분해물의 수율(Yield), 폴리페놀 및 후코이단 함량은 열수 추출물 및 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물보다 높은 것을 확인하였다. 또한, 감태 셀루클라스트 가수분해물의 후코이단 내 황산기 및 후쿠오스 함량이 열수 추출물 및 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물보다 크게 증가되었다(표 4).
| 열수 추출 | Celluclast 처리 | 열수 추출+ Celluclast 처리 | |
| 수율(Yield)/% | 30.3 | 40.6 | 50.5 |
| 폴리페놀(Polyphenol)/중량% | 5.9 | 8.7 | 12.8 |
| 후코이단(Fucoidan)/중량% | 32.4 | 45.5 | 55.4 |
| 조단백질(Crude Protein)/중량% | 48.1 | 36.7 | 26.9 |
| 조지방 및 조회분/중량% | 13.6 | 9.1 | 4.9 |
| 열수 추출 |
Celluclast 처리 | 열수 추출+ Celluclast 처리 | |
| 후코이단(Fucoidan)/중량% | 32.4 | 45.5 | 55.4 |
| 후코이단 내 황산기(Sulfate)/중량% | 7.5 | 12.5 | 14.7 |
| 후코이단 내 푸코오스(Fucose)/중량% | 45.2 | 55.8 | 66.2 |
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실시예
4> 감태 유래
가수분해물의
생리활성 효과 검정
<4-1> 감태 유래
가수분해물의
자유기 산소
라디칼
소거 효과 검정
감태 유래 가수분해물의 항산화 효과를 확인하기 위하여, 자유기 산소 라디칼 소거 실험을 수행하였다. 구체적으로, Lee 등의 방법(Lee SK, et al., Evaluation of the antioxidant potential of natural products. Comb Chem High Throughput Screen 1: 35-46(1998))을 변형하여 대조군인 열수 추출물, 효소 가수분해물 및 실험군인 열수 추출 후 효소 가수분해물에 의해 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 라디칼이 소거되는 정도를 측정하였다. 96웰 플레이트에 대조군 10㎕ 및 실험군 10㎕과 99% 에탄올에 혼합한 1.5×10-4M의 DPPH 용액 190㎕를 상온에서 각각 약 30분간 반응시킨 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였고, 가수분해물 대신 메탄올을 넣은 것을 대조군으로 하여 자유기 산소 라디칼이 소거된 정도를 확인하였다
그 결과, 표 5와 같이 열수 추출 후의 셀루클라스트 가수분해물은 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물에 비해 자유기 산소 라디칼 소거능에 있어 우수한 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
<4-2> 감태 유래
가수분해물의
마우스
비장세포
증식 효과 검정
감태 유래 가수분해물의 면역 증강 효과를 확인하기 위하여, 마우스 비장세포 증식 실험을 3H-티미딘 결합(3H-thymidine incorporation) 방법을 이용하여 수행하였다. 구체적으로, 생후 8~9주의 ICR 마우스 비장조직으로부터 수득한 비장세포를 10% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)와 1% 항생제(페니실린(penicillin)(100 U/ml) 및 스트렙토마이신(streptomycin) 100 ㎍/㎖)를 포함하는 RPMI 1640 배지를 사용하여 4×105cells/㎖의 농도로 희석하였다. 세포액 200 ㎕를 96웰 플레이트에 분주하고, 대조군인 열수 추출물, 효소 가수분해물 및 실험군인 열수 추출 후 효소 가수분해물을 각각 150 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 72시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양한 후, 각 웰에서 100 ㎕의 상층액을 제거하고, 각 웰에 3H-티미딘 1 uCi를 처리하였다. 이후 18시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하고, 자동셀수확기(automatic cell harvester)를 이용하여 96웰 플레이트로부터 필터맵(Filter map)에 세포를 모으고, 세포의 DNA와 결합한 방사능(radioactivity)을 액체 섬광 분광계(liquid scintillation spectrometer)를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 표 5와 같이 열수 추출 후의 셀루클라스트 가수분해물은 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물에 비해 마우스 비장세포 증식능에 있어 우수한 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
<4-3> 감태 유래
가수분해물의
마우스
비장세포
생존 효과 검정
감태 유래 가수분해물의 면역 증강 효과를 확인하기 위하여, 마우스 비장세포 생존 실험을 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 방법을 이용하여 수행하였다. 실시예 2-2와 동일한 마우스 비장세포에 ACK (Ammonium-Chloride-Potassium) 용해 버퍼를 처리하여 적혈구를 용해시켰다. 1% FBS를 함유한 DPBS(Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline)로 세포를 씻어준 후, 10% FBS와 1% 항생제(페니실린(penicillin)(100 U/ml) 및 스트렙토마이신(streptomycin) 100 ㎍/㎖)를 함유한 RPMI 1640 배지를 사용하여 2×104cells/㎖의 농도로 희석하였다. 세포액 200 ㎕를 96웰 플레이트에 분주하고, 대조군인 열수 추출물, 효소 가수분해물 및 실험군인 열수 추출 후 효소 가수분해물을 각각 150 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 24시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양한 후, 50 ㎕의 MTT(5 ㎎/㎖)를 각 웰에 첨가하였다. 4시간 배양 후, 2000 rpm에서 10분간 원심분리하였다. 그 후, 각 웰의 용액을 제거하고 150 ㎕의 다이메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)를 처리하여 형성된 포르마잔(formazan) 침전물을 용해시켜 효소결합면역침강분석기(ELISA reader)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 측정값을 하기 수학식 1을 통해 세포 생존능(%)으로 환산하였다.
수학식 1
세포 생존능(Cell viability)(%) = (샘플을 처리한 세포의 흡광도 / 샘플을 처리하지 않은 세포의 흡광도)× 100
그 결과, 표 5와 같이 열수 추출 후의 셀루클라스트 가수분해물은 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물에 비해 마우스 비장세포 생존능에 있어 우수한 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
<4-4>
감태
유래
가수분해물의
리포폴리사카라이드(
lipopolysaccharide
, LPS)로 유도된 일산화질소(
ntric
oxide, NO)의 소거 효과 검정
감태 유래 가수분해물의 항염 효과를 확인하기 위하여, 세포 배양액에 존재하는 일산화질소에 대한 소거 실험을 수행하였다. 구체적으로, RAW 264.7 세포를 DMEM 배지를 이용하여 1.5×105cells/㎖ 로 조절한 후 24웰 플레이트에 접종하였고 대조군인 열수 추출물, 효소 가수분해물 및 실험군인 열수 추출 후 효소 가수분해물을 2시간 동안 전처리 후 LPS 1 ㎍/㎖를 처리하여 24시간을 배양하였다. 이후 대조군 및 실험군의 세포배양 상등액 100 ㎕와 그리스(Griess) 시약(1% (w/v) 술파닐아미드(sulfanilamide), 0.1% (w/v) naphthylethlenediamine dihydrochloride in 2.5% (v/v) phosphoric acid) 100 ㎕를 혼합하여 96웰 플레이트에서 10분 동안 반응시킨 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)(Bio-TEK instruments, Winooski, VT, USA)를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 표 5와 같이 열수 추출 후의 셀루클라스트 가수분해물은 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물에 비해 일산화질소 소거능에 있어 우수한 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
실시예 3의 실험 결과(표 5)에서, 열수 추출 후의 셀루클라스트 가수분해물은 다른 효소 가수분해물, 열수 추출물 또는 열수 추출 단계 없는 셀루클라스트 가수분해물보다 항산화, 면역 증강, 항염 효과가 모두 우수하여, 본 발명의 제조방법에 따른 감태 유래 가수분해물이 최적의 생리활성을 나타내는 것을 확인하였다.
|
|
열수 추출 | Celluclast 처리 | 열수 추출+ Celluclast 처리 | |||
| 항산화 효과(IC50) | 2.28±0.33 mg/ml |
0.82±0.07 mg/ml |
0.40±0.02 mg/ml |
|||
| 세포독성 평가 (150 ug/ml) | 없음 | 없음 |
없음 |
|||
| 면역 증강 효과 (150 ug/ml) | 173±9% |
191±5% |
235±6% |
|||
| 항염증 효과(IC50) | 576.4±4.6 ug/ml | 177.5±2.4 ug/ml | 75.0±3.0 ug/ml | |||
<
실시예
6> 감태 유래
가수분해물이
함유된 약제 제조
실시예 1에서 제조된 감태 유래 셀루클라스트 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 시럽제의 제조예는 하기 표 6과 같다.
| 구성 성분 | 중량% |
| 감태 유래 셀루클라스트 가수분해물 | 2 |
| 사카린 | 0.8 |
| 당 | 25.4 |
| 글리세린 | 8 |
| 향미료 | 0.04 |
| 에탄올 | 4 |
| 소르브산 | 0.4 |
| 증류수 | 59.36 |
<
실시예
7> 감태 유래
가수분해물이
함유된 건강기능식품 제조
실시예 1에서 제조된 감태 유래 셀루클라스트 가수분해물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
Claims (7)
- ⅰ) 동결건조한 감태(Ecklonia cava)를 1 내지 40 메쉬(mesh)의 크기로 분말화하는 단계;
ⅱ) 상기 분말화된 감태를 담수 100 중량부 기준으로 5 내지 10 중량부 첨가하고 95 내지 100℃의 열수로 4 내지 8시간 동안 열수 추출하는 단계;
ⅲ) 상기 열수 추출한 후 60 내지 65℃로 추출물을 냉각하는 단계;
ⅳ) 상기 냉각된 추출물의 pH를 6.5 내지 7.0으로 조정한 후 셀루클라스트(celluclast)를 첨가하고 2 내지 8시간 동안 효소반응시켜 감태 효소 가수분해물을 생성하는 단계;
ⅴ) 상기 감태 효소 가수분해물을 여과하고 농축하는 단계;
를 포함하는 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물의 제조방법으로,
상기 단계 ⅴ)에서 여과하고 농축된 감태 효소 가수분해물 내의 폴리페놀은 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 11 내지 20 중량%로 포함되고 후코이단은 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 51 내지 60 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물의 제조방법으로,
상기 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물은 항산화, 면역 증강 및 항염 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물의 제조방법. - 삭제
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- 제 1항에 있어서, 감태 효소 가수분해물 내의 폴리페놀은 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 12 내지 13 중량%로 포함되고 후코이단은 전체 가수분해물의 전체 중량에 대하여 55 내지 56 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물의 제조방법.
- 제 1항에 따른 제조방법으로 제조된 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물.
- 제 5항의 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강 및 항염용 약학적 조성물.
- 제 5항의 감태 유래 폴리페놀 및 후코이단 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 면역 증강 및 항염용 건강기능식품.
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| KR101692292B1 (ko) * | 2016-06-20 | 2017-01-04 | 한남대학교 산학협력단 | 해조류 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
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2015
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