KR101603109B1 - Ｉｌ-31에 특이적인 인간화된 항체 분자 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간화된 마우스 항-사람 IL-31 항체 및 IL-31에 결합할 수 있는 항체 단편을 제공하며, 이로써 IL-31의 전염증성 또는 전-소양증 효과의 중화, 억제, 제한, 또는 감소를 제공한다.

Description

ＩＬ-31에 특이적인 인간화된 항체 분자{HUMANIZED ANTIBODY MOLECULES SPECIFIC FOR IL-31}
본 발명은 IL-31에 특이적인 인간화된 항체 분자에 관한 것이다.
새롭게 확인된 사이토킨인 IL-31은 마우스에서 과잉 발현되었을 때 피부염-유사 증상을 유발하는 것으로 밝혀졌다 (Dillon et al., Nature Immunol. 5:752-760). 이들 증상은 IL-31의 활성을 차단, 억제, 감소, 길항 또는 중화하고, 항-IL-31 항체를 포함하는 길항체를 사용함으로써 상승될 수 있다. 2003년 1월 21일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 10/352,554호 (미국 특허 공보 제 2003-0224487호), 현재 미국 특허 일련 번호 7,064,186호, 7,425,325호, 및 7,459,293호 참조.
단클론성 항체 기술은 질병을 확인하고 치료하는데 사용하기 위한 광범위한 치료제뿐만 아니라 진단제를 제공하였다. 설치류의 항원-결합 부위를 포함하는 많은 재조합 또는 생합성 분자가 설명되었다. 특히 전체 가변성 도메인보다는 오직 설치류 결합 부위만을 사람 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 도메인에 이식함으로써 사람 항체에 직접 구성된 설치류 항원-결합 부위를 가지는 분자들은 문헌에 기술되었다 (Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327 및 Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534- 1536). 가변성 도메인의 상보성 결정 영역 (CDRS) 중 최소한 하나가 쥐과의 단클론성 항체로부터 유도되고, 분자의 나머지 면역글로불린-유도된 부분이 인간 면역글로불린으로부터 유도된 항원-결합 부위를 가지는 분자들은 1994년 9월 21일에 공개된 영국 특허 공보 GB 2,276,169에서 설명되었다. 많은 단일 사슬 항원-결합 부위 폴리펩티드 및 단일 사슬 Fv(sFv) 분자 또한 기술되어 있다 (Huston et al., 미국 특허 제 5,132,405호 및 5,091,513호; 및 Ladner et al., 미국 특허 제 4,946,778호).
마우스 항-사람 IL-31 단클론성 항체는 이미 전에 2006년 5월 8일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/430,066호 (미국 특허 공보 2006-02752960)에서 기술되었는데, 그 문헌에는 사람 IL-31을 인지하고 키메릭 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있는 마우스 단클론성 항체가 설명되어 있다. 그러나 키메릭 항체는 면역원성을 유발할 수 있고, 따라서 인간화된 마우스-항-사람 IL-31 항체가 바람직하다. 인간화된 항체는 일반적으로 마우스에 대해, 또는 어떤 경우에는 사람 치료법에 사용하기 위한 키메릭 항체에 대해 최소한 다음과 같은 세 가지의 가능한 장점을 갖는다: (1) 이펙터 부분이 사람으로부터 유래된 것이기 때문에 사람 면역시스템의 다른 부분과 더 잘 상호작용할 수 있다 (예컨대 보체-의존성 세포독성 (CDC) 또는 항체-의존성 세포의 세포독성 (ADCC)에 의해 보다 효과적으로 표적 세포를 파괴한다); (2) 사람 면역 시스템은 인간화된 항체의 프레임워크 또는 불변 영역을 외래의 것으로서 인지해서는 안되고, 그러므로 그런 주입된 항체에 대한 항체 반응은 전체가 외래의 것인 마우스 항체 또는 부분적으로 외래의 것인 키메릭 항체에 대한 것보다 적어야 한다; 그리고 (3) 주입된 마우스 항체는 정상적인 항체의 반감기보다 훨씬 더 짧은 사람 순환계 내에서의 반감기를 가지는 것으로 보고되었다 (D. Shaw et al., J. Immunol., 138, 4534-4538 (1987)). 주입된 인간화된 항체는 아마도 자연적으로 발생하는 인간 항체에 보다 유사한 반감기를 가질 것이며, 이것은 더 작은 용량과 더 적은 횟수로 제공되는 것을 가능하게 한다.
그러므로 IL-31 중재된 염증을 치료하기 위해 마우스 항-사람 IL-31 항체에 대해 인간화된 가변성 영역 아미노산 서열을 제공하는 분자에 대한 필요성이 있다.
발명의 개요
본 발명의 한 측면으로, 본 발명은 a) 아미노산 서열 SEQ ID NO:1, 2 및 3의 각각으로 이루어지거나 또는 아미노산 서열 SEQ ID NO:1, 4 및 3의 각각으로 이루어진 CDR을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인; b) SEQ ID NO:5, 6 및 7의 아미노산 서열로 이루어진 CDR을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 사람 IL-31에 결합하는 분리된 항체에 관한 것이다. 다른 측면으로, 본 발명은 본원에서 설명되는 항체에 관한 것으로, 이때 a) 상기 인간화된 중쇄 가변 도메인은 1) SEQ ID NO:8 (FRl), 9 (FR2), 10 (FR3) 및 11 (FR4)의 각각의 아미노산 서열; 2) SEQ ID NO:12 (FRl), 13 (FR2), 14 (FR3) 및 15 (FR4)의 각각의 아미노산 서열; 3) SEQ ID NO:12 (FRl), 13 (FR2), 16 (FR3) 및 15 (FR4)의 각각의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 최소한 90% 동일한 아미노산 서열을 가지는 프레임워크 영역 FRl, FR2, FR3 및 FR4를 포함하고, b) 상기 인간화된 경쇄 가변 도메인은 1) SEQ ID NO:17 (FR5), 18 (FR6), 19 (FR7) 및 20 (FR8)의 각각의 아미노산 서열; 및 2) SEQ ID NO:17 (FR5), 18 (FR6), 21 (FR7) 및 20 (FR8)의 각각의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택된 프레임워크 영역의 아미노산 서열에 최소한 90% 동일한 아미노산 서열을 가지는 프레임워크 영역 FR5, FR6, FR7 및 FR8을 포함한다. 한 구체예에서, 상기 동일성은 최소한 95%, 보다 바람직하게는 최소한 98%, 가장 바람직하게는 최소한 99%이다.
다른 측면으로 본 발명은 중쇄의 FR1의 위치 29에 있는 아미노산이 로이신이고, 중쇄의 FR3의 위치 32에 있는 아미노산이 페닐알라닌인, 본원에서 설명된 것과 같은 분리된 항체에 관련된다. 다른 측면으로, 본 발명은 중쇄의 FR3의 위치 8에 있는 아미노산이 리신이고, 경쇄의 FR7의 위치 15에 있는 아미노산이 티로신인, 본원에서 설명된 것과 같은 분리된 항체에 관련된다.
추가의 측면으로 본 발명은 사람 IL-31에 결합하는 분리된 항체에 관한 것으로, 상기 항체는 다음의 a)와 b)를 포함한다: a) SEQ ID NO:1과 3의 아미노산 서열을 각각 가지는 CDR1 및 CDR3와 AIYPGDGDTRYSXaa1Xaa2FXaa3G (SEQ ID NO:22)의 아미노산 서열을 가지는 CDR2를 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인, 이때 Xaa1은 글루타민 또는 프롤린이고, Xaa2는 세린 또는 리신이며, Xaa3은 글루타민 또는 리신이고, 상기 인간화된 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO:8, 9, 10 및 11의 각각의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO:12, 13, 14 및 15의 각각의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO:12, 13, 16 및 15의 각각의 아미노산 서열에 최소한 90% 동일한 아미노산 서열을 가지는 프레임워크 영역 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함하며, 단 FR1의 위치 29의 아미노산이 로이신이고 FR3의 위치 32에서의 아미노산이 페닐알라닌이어야 하고; b) SEQ ID NO:5, 6 및 7의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인, 이때 상기 인간화된 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO:17, 18, 19 및 20의 각각의 아미노산 서열에 최소한 90% 동일한, 또는 SEQ ID NO:17, 18, 21 및 20의 각각의 아미노산 서열에 최소한 90% 동일한 아미노산 서열을 가지는 프레임워크 영역 FR5, FR6, FR7 및 FR8을 포함한다. 본 발명의 한 측면으로, 상기 동일성은 최소한 95%이고, 바람직하게는 최소한 98%이며, 가장 바람직하게는 최소한 99%이다. 다른 측면으로 본 발명은 중쇄의 FR3의 위치 8의 아미노산이 리신이고, 경쇄의 FR7의 위치 15의 아미노산이 티로신인, 본원에서 설명된 것과 같은 분리된 항체에 관련된다. 또 다른 측면으로 본 발명은 아미노산 Xaa1이 글루타민이고, Xaa2가 리신이며, Xaa3이 리신인 본원에 기재된 분리된 항체; 아미노산 Xaa1이 프롤린이고, Xaa2가 세린이며, Xaa3이 글루타민인 본원에 기재된 분리된 항체; 또는 아미노산 Xaa1이 글루타민이고, Xaa2가 리신이며, Xaa3이 글루타민인 본원에 기재된 분리된 항체에 관련된다.
다른 측면으로 본 발명은, 중쇄 가변 도메인의 CDR은 SEQ ID NO:1, 4 및 3의 각각으로 구성되고, 경쇄 가변 도메인의 CDR은 SEQ ID NO:5, 6 및 7의 각각으로 구성되며, 중쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역은 SEQ ID NO:8, 9 및 10의 각각으로 구성되고, 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역은 SEQ ID NO:17, 18, 19 및 20의 각각으로 구성되는, 본원에서 설명되는 것과 같은 분리된 항체에 관련된다.
다른 측면으로 본 발명은, 중쇄 가변 도메인의 CDR은 SEQ ID NO:1, 2 및 3의 각각으로 구성되고, 경쇄 가변 도메인의 CDR은 SEQ ID NO:5, 6 및 7의 각각으로 구성되며, 중쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역은 SEQ ID NO:12, 13, 14 및 15의 각각으로 구성되고, 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역은 SEQ ID NO:17, 18, 19 및 20의 각각으로 구성되는, 본원에서 설명되는 것과 같은 분리된 항체에 관련된다.
또 다른 측면으로 본 발명은, 중쇄 가변 도메인의 CDR은 SEQ ID NO:1, 2 및 3의 각각으로 구성되고, 경쇄 가변 도메인의 CDR은 SEQ ID NO:5, 6 및 7의 각각으로 구성되며, 중쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역은 SEQ ID NO:12, 13, 16 및 15의 각각으로 구성되고, 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역은 SEQ ID NO:17, 18, 21 및 20의 각각으로 구성되는, 본원에서 설명되는 것과 같은 분리된 항체에 관련된다.
하기의 실시예 및 본원에서 교시되는 것으로부터 알 수 있는 것과 같이, 본원에서 설명되는 인간화된 항체의 FR1의 위치 29의 로이신과 FR3의 위치 32의 페닐알라닌의 존재는 상기 항체의 친화성 및 효능의 관점에서 긍정적인 영향을 나타낸다. 예를 들어 Biacore 분석에서 알 수 있는 바와 같이, FR1의 위치 29에서 로이신과 FR3의 위치 32에서 페닐알라닌을 둘 다 포함하는 인간화된 항체의 결합 친화성은 위의 위치에서 다른 아미노산을 포함하는 인간화된 항체와 비교할 때 더 좋다 (예를 들어 아래의 실시예 3의 표 2에서 클론 번호 7, 10, 13 및 14를 비교하라). 중쇄의 FR1의 위치 29와 FR3의 위치 94에 있는 아미노산의 긍정적인 영향은 친화성 및 효능의 관점에서 모두, 다른 두 개의 생물학적 시험에 의해 또한 확증되었다 (실시예 4 및 5 참조).
본 발명의 구체예에서, 본원에 기술되는 항체는 α, γ, μ, δ 또는 ε 인간 면역글로불린 중쇄의 불변 영역으로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다. 본 발명의 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 사람 IgG1 불변 도메인, 사람 IgG2 불변 도메인, 사람 IgG3 불변 도메인, 사람 IgG4 불변 도메인, 사람 IgM 불변 도메인, 사람 IgE 불변 도메인 및 사람 IgA 불변 도메인으로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다. 구체예에서, 사람 IgG4 불변 도메인은 용액 중에서 안정한 돌연변이 형태이고, 보체 활성화 활성을 거의 또는 전혀 갖고 있지 않다. 구체예에서, 중쇄 면역글로불린 불변 영역 도메인은 위치 241 (Kabat 번호매김)에서 Ser이 Pro로 돌연변이된 사람 IgG4 불변 도메인이다.
한 구체예에서, 면역글로불린 경쇄 불변 영역 도메인은 κ 또는 λ 사람 면역글로불린 경쇄의 불변 영역으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 면역글로불린 경쇄 불변 영역 도메인은 κ 사람 면역글로불린 경쇄의 불변 영역이다.
발명의 상세한 설명
본 발명을 상세하게 설명하기 전에, 다음 용어를 규정하는 것이 발명의 이해를 도울 것이다:
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 다클론성 항체, 친화성-정제된 다클론성 항체, 단클론성 항체, 및 항원-결합 단편, 예를 들면 F(ab')2, Fab 단백질 가수분해성 단편, 및 단일 사슬 가변 영역 단편 (scFvs)을 포함한다. 유전적으로 공학제조된 무상 항체 또는 단편들, 예를 들면 키메릭 항체, Fv 단편, 단일 사슬 항체 등과, 합성 항원-결합 펩티드 및 폴리펩티드도 또한 항체에 포함된다. 비-사람 항체는 비-사람 CDR을 사람 프레임워크 및 불변 영역 안에 이식함으로써, 또는 전체 비-사람 가변 도메인을 통합시킴으로써 (임의로 그것들을 노출된 잔기의 대체에 의해 사람-유사 표면으로 "은폐"하는 것, 그 결과는 "베니어(veneered)" 항체이다) 인간화될 수 있다. 어떤 경우에 인간화된 항체는 적절한 결합 특성을 증진시키기 위해 사람 가변 영역 프레임워크 도메인 내에 있는 비-사람 잔기를 보유할 수 있다. 항체의 인간화를 통해 생물학적 반감기가 증가될 수 있고, 사람에게 투여시에 해로운 면역 반응에 대한 가능성이 감소된다.
용어 "키메릭 항체" 또는 "키메릭 항체들"은 상이한 종에 속하는 면역글로불린 가변 및 불변 영역으로부터, 전형적으로는 유전자 공학제조에 의해 구성된 경쇄 및 중쇄 유전자들을 가지고 있는 항체들을 말한다. 예를 들어 마우스 단클론성 항체로부터의 유전자의 가변 절편은 사람 불변 절편, 예컨대 감마 1 및 감마 3에 결합될 수 있다. 그로써 전형적인 키메릭 항체는 마우스 항체로부터의 가변 또는 항원-결합 도메인과 사람 항체로부터의 불변 도메인으로 구성된 혼성 단백질이며, 이때 사람 대신 다른 포유류 종도 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "면역글로불린"은 실질적으로 면역글로불린 유전자에 의해 코드화되는 하나 또는 그 이상의 폴리펩티드로 구성되는 단백질을 말한다. 한 형태의 면역글로불린은 항체의 기본적인 구조적 단위를 구성한다. 이 형태는 사량체이며, 두 개의 동일한 쌍의 면역글로불린 사슬로 구성되고, 각각의 쌍은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄로 이루어진다. 각 쌍에서 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 함께 항원에 대한 결합에 기여하며, 불변 영역들은 항체 이펙터 기능에 기여한다.
전-길이 면역글로불린 "경쇄" (약 25Kd 또는 214 아미노산)는 NH2-말단에 있는 가변 영역 (약 110 아미노산)과 COOH-말단에 있는 카파 또는 람다 불변 영역에 의해 코드화된다. 전-길이 면역글로불린 "중쇄" (약 50Kd 또는 446 아미노산)는 가변 영역 유전자 (약 116 아미노산)에 의해 유사하게 코드화되며, 상기 언급된 다른 불변 영역 유전자들 중 하나이다 (약 330 아미노산). 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 그에 따른 항체의 이소타입은 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로 규정된다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12 또는 그 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 결합되며, 이때 중쇄는 또한 약 10 또는 그 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다 (일반적으로 Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989), Ch. 7 참조, 항체 제조 및 항체 단편에 대해서 내용 참조).
면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 세 개의 초가변 영역에 의해 차단되는 "프레임워크" 영역으로 이루어진다. 그러므로 용어 "초가변 영역"은 항원 결합에 기여하는 항체의 아미노산 잔기를 나타낸다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기들 (즉 경쇄 가변 도메인의 잔기 24 내지 34 (L1), 50 내지 56 (L2) 및 89 내지 97 (L3) 및 중쇄 가변 도메인의 31 내지 35 (H1), 50 내지 65 (H2) 및 95 내지 102 (H3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 아미노산 잔기들 (즉 경쇄 가변 도메인의 잔기 26 내지 32 (L1), 50 내지 52 (L2) 및 91 내지 96 (L3) 및 중쇄 가변 도메인의 26 내지 32 (H1), 53 내지 55 (H2) 및 96 내지 101 (H3); Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917)을 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 규정되는 것과 같이 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기들이다. 상이한 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역의 서열은 종 내에서 비교적 보존된다. 그러므로 "사람 프레임워크 영역"은 자연 발생 사람 면역글로불린의 프레임워크 영역에 대해 실질적으로 동일하다 (약 85% 또는 그 이상, 보통 90 내지 95% 또는 그 이상). 구성성 경쇄 및 중쇄의 조합된 프레임워크 영역인 항체의 프레임워크 영역은 CDR의 정위 및 배열에 기여한다. CDR은 기본적으로 항원의 에피토프에 대한 결합에 기여한다.
따라서 용어 "인간화된" 면역글로불린은 사람 프레임워크 영역과 비-사람 (보통 마우스 또는 쥐) 면역글로불린으로부터의 하나 또는 그 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린을 말한다. CDR을 제공하는 비-사람 면역글로불린은 "공여체"로 불리고, 프레임워크를 제공하는 사람 면역글로불린은 "수용체"로 불린다. 불변 영역은 굳이 존재할 필요가 없지만, 존재하는 경우, 그것들은 실질적으로 사람 면역글로불린 불변 영역과 동일해야 한다. 즉 최소한 약 85 내지 90%, 바람직하게는 약 95% 또는 그 이상 동일해야 한다. 그러므로 인간화된 면역글로불린은 아마도 CDR을 제외한 모든 부분이 실질적으로 자연적인 사람 면역글로불린 서열의 상응하는 부분에 동일하다. "인간화된 항체"는 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄 면역글로불린을 포함하는 항체이다. 예를 들어 인간화된 항체는 상기에서 규정된 것과 같은 전형적인 키메릭 항체를 포함하지 않는데, 왜냐하면 키메릭 항체는 전체 가변 영역이 비-사람의 것이기 때문이다.
용어 "재조합 항체"는 아미노산 서열이 본래 항체의 것과는 다른 항체를 의미한다. 항체 제조시 재조합 DNA 기술의 관련성 때문에 자연 항체에서 발견된 아미노산 서열에 대해 규정될 필요는 없으며, 항체는 원하는 특성을 얻기 위해 재디자인될 수 있다. 가능한 변화는 많으며 단지 하나 또는 소수의 아미노산이 바뀌는 것으로부터 전체 영역, 예컨대 가변 또는 불변 영역이 바뀌는 것에 이르기까지 다양하다. 불변 영역의 변화는 일반적으로 특성, 예컨대 보체 고정, 막과의 상호작용 및 다른 이펙터 기능을 개선 또는 변경시키기 위해 이루어질 것이다. 가변 영역의 변화는 항원 결합 특성을 개선하기 위해 이루어질 것이다.
항체 외에, 면역글로불린은 다양한 다른 형태, 이를테면 예를 들어 단일 사슬 또는 Fv, Fab, 및 (Fab')2 뿐만 아니라, 항체절편(diabody), 선형 항체, 다가 또는 다중특이적 혼성 항체 (Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987))의 형태로 및 단일 사슬로 (예컨대 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85, 5879-5883 (1988) 및 Bird et al., Science, 242, 423-426 (1988), 본원에 항체 단편에 대한 교시를 위해 참조로 삽입됨) 존재할 수 있다 (일반적으로 Hood et al., "Immunology", Benjamin, N.Y., 2nd ed. (1984), 및 Hunkapiller and Hood, Nature, 323, 15-16 (1986), 항체에 대해 참조로 삽입됨).
본원에서 사용되는 용어 "단일 사슬 Fv", "단일 사슬 항체", "Fv" 또는 "scFv"는 중쇄 및 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하지만 불변 영역은 없으며, 단일 폴리펩티드 사슬 내에 있는 항체 단편을 말한다. 일반적으로 단일 사슬 항체는 추가로 항원 결합을 허용하게 될 원하는 구조를 형성하는 것을 가능하게 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 포함한다. 단일 사슬 항체는 문헌에서 상세하게 논의된다: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); 국제 특허 출원 공보 WO 88/01649 및 미국 특허 제 4,946,778호 및 5,260,203호. 특정한 구체예에서, 단일 사슬 항체는 또한 이중특이항체이거나 및/또는 인간화된 항체일 수 있다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄와 CH1 및 하나의 중쇄의 가변 영역으로 구성된다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 이황화 결합을 형성할 수 없다.
"Fab' 단편"은 CH1과 CH2 도메인 사이에 많은 불변 영역을,사슬내 이황화 결합이 두 개의 중쇄 사이에 형성될 수 있도록 함유하여 F(ab')2 분자를 형성하는 하나의 중쇄와 하나의 경쇄를 함유한다.
"F(ab')2 단편"은 CH1과 CH2 도메인 사이에 불변 영역 일부를 함유하여서 사슬내 이황화 결합이 두 개의 중쇄 사이에 형성되는 두 개의 중쇄 및 두 개의 경쇄를 함유한다.
부정확한 분석 방법 (예컨대 겔 전기영동)에 의해 측정된 중합체의 분자량과 길이는 대략적인 값으로 인식될 것이다. 그런 값이 "약" X 또는 "대략적으로" X로 표시되는 경우, 진술된 X의 값은 ±10%로 정확한 것으로 인지될 수 있다.
본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전체 내용이 참조로 인용된다.
본 발명은 항체의 인간화된 마우스 항-사람 IL-31 가변 영역 서열의 발견을 토대로 한다. 이들 항체를 IL-31에 대한 길항체로서 사용함으로써 일반적으로 염증, 및 구체적으로 피부염 및 소양증의 증상들을 억제할 수 있다. 본 발명은 IL-31 폴리펩티드를 인식하고, 그것에 결합하며, 및/또는 중화하는 항체의 인간화된 경쇄 및 중쇄 영역을 사용하는 것을 제시한다. 그런 인간화된 경쇄 및 중쇄 영역은 면역글로불린 불변 영역, 에컨대 IgG4 또는 IgG1에 융합될 수 있고, 다양한 숙주 세포에서 발현된다. 본원에서 설명된 인간화된 항-IL-31 가변 영역 서열은 2006년 5월 8일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/430,066호 (미국 특허 출원 공보 2006-02752960호)에서 이미 설명된 바 있는 단클론성 항체의 마우스 항-사람 IL-31 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 사용하여 생성되었다.
항체는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함하는, 또는 그것으로 이루어지는 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있으며, IL-31이 그것의 수용체에 미치는 효과를 중화하거나, 억제하거나, 감소시키거나, 방지하거나 또는 최소화하는 키메릭, 인간화된, 또는 항체 단편일 수 있다. 항체 또는 항체 단편의 임상적인 결과는 본원에서 앞으로 설명되는 것처럼, 염증 및 자가면역 질병, 예컨대 피부염, 특히 아토피성 피부염, 및 소양증 및 크론씨병의 감소일 수 있다. 한 구체예에서 피부염은 아토피성 피부염이다. 다른 구체예에서 피부염은 결절성 양진이다. 다른 구체예에서 피부염은 습진이다. 감소는 또한 가려움, 긁기, 또는 탈모의 감소일 수 있다.
IL-31은 마우스에서 과잉발현될 때 피부염-유사 증상들을 유발하는 새롭게 발견된 T 세포 사이토킨이다 (Dillon, et al., Nature Immunol. 5:752-760, 2004). IL-31은 2003년 1월 21일에 출원되고 (미국 특허 공보 2003-0224487), 현재 미국 특허 일련 번호 7,064,186호 (Sprecher, Cindy et al., 2003)가 된 미국 특허 출원 일련 번호 10/352,554호에서 Zcyto17rlig로서 설명된 바 있는 사이토킨에 대한 HUGO 명칭이다 (Dillon, et al., Nature Immunol., 상기 동일). 사람 IL-31의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:24로 표시된다. 조직 분석 결과 마우스 IL-31의 발현은 고환, 뇌, CD90+ 세포, 전립선 세포, 침샘 및 피부에서 발견되는 것으로 나타났다.
IL-31에 대한 이종이량체 수용체는 미국 특허 공보 2003/0224487에서 zcytor17 (HUGO 명칭, IL-31RA)로서 설명되었는데, 그것은 온코스타틴M 수용체 베타 (OSMR베타)와 함께 이종이량체를 형성한다. IL-31은 활성화된 사람 말초혈세포 (hPBC)로부터 생성된 cDNA 라이브러리로부터 분리되었고, CD3에 대해 선택되었다. CD3은 림프종 기원 세포, 특히 T 세포에 독특한 세포 표면 마커이다.
인간화된 마우스 항-사람 경쇄 가변 도메인 및/또는 인간화된 마우스 항-사람 중쇄 가변 도메인을 포함하는 분자, 이를테면 본원의 "IL-31 항원 결합 분자" 또는 "IL-31 길항체"에 의해 신호 변환을 억제, 중화, 또는 차단하는 것은 당업자에게 공지되어 있는 많은 분석법에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어 증식의 감소를 측정하는 분석법은 AlamarBlueTM (AccuMed International, Inc. Westlake, Ohio), 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸륨 브로마이드 (Mosman, J. Immunol. Meth . 65: 55-63, 1983); 3,(4,5 디메틸 티아졸-2일)-5-3-카르복시메톡시페닐-2H-테트라졸륨; 2,3-비스(2-메톡시-4-니트로-5-술포페닐)-5-[(페닐아미노)카르보닐]-2H-테트라졸륨 히드록사이드; 및 시아노디톨릴-테트라졸륨 클로라이드 (Polysciences, Inc., Warrington, PA로부터 상업적으로 활용할 수 있다)와 같은 염료의 감소에 대한 분석; 유사분열 촉진 분석, 예컨대 3H-티미딘의 통합의 측정; 예를 들면 나프탈렌 블랙 또는 트립판 블루를 사용하는 염료 축출 분석법; 디아세틸 플루오레신을 사용하는 염료 흡수; 및 크로뮴 방출을 포함한다 (Freshney, Culture of Animal Cells : A Manual of Basic Technique, 3rd ed., Wiley-Liss, 1994). 상기 외에도, IL-31RA 및 전-길이 OSMR베타를 발현하는 BaF3 세포의 실례에 대해서는 미국 특허 공보 2003/0224487 (Sprecher, Cindy et al., 2003)을 참조하거나 또는 본원에서 설명되는 활성 실시예에서 알 수 있다.
본원에서 설명되는 항체를 코드화하는 폴리뉴클레오티드 (DNA 및 RNA 포함)를 제조하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 총 RNA는 구아니디늄 이소티오시아네이트 추출과, 이어서 CsCl 구배에서의 원심분리에 의한 분리를 사용하여 제조될 수 있다 (Chirgwin et al., Biochemistry 18:52-94, 1979). 폴리(A)+ RNA는 Aviv와 Leder 방법을 사용하여 총 RNA로부터 제조된다 (Proc . Natl . Acad . Sci . USA 69:1408-12, 1972). 상보성 DNA (cDNA)는 공지된 방법을 사용하여 폴리(A)+ RNA로부터 제조된다. 다르게는, 게놈 DNA가 분리될 수 있다. 그런 다음 IL-31 항체를 코드화하는 폴리뉴클레오티드가 확인되고 예를 들면 혼성화 또는 PCR에 의해 분리된다.
본 발명은 또한 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 폴리펩티드의 기능성 단편에 결합하는 IL-31 길항체 및 그런 기능성 단편을 코드화하는 핵산 분자를 포함한다. 본원에서 설명되는 "기능성" IL-31 또는 그것의 단편은 그것의 증식성 또는 분화 활성에 의해, 특수한 세포 기능을 유도 또는 억제하는 능력에 의해, 또는 항-IL-31 항체 또는 이들 수용체 (가용성 또는 고정화된)의 IL-31RA/OSMR베타 이종이량체에 특이적으로 결합하는 능력에 의해 특징지어진다. 그러므로 본 발명은 또한 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 하나 또는 그 이상의 IL-31 기능성 단편을 포함하는 폴리펩티드에 결합하는 IL-31 길항체를 제공한다.
본 발명은 또한 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 폴리펩티드의 에피토프-내포 부분 또는 면역원성 에피토프 또는 항원성 에피토프를 포함하는 폴리펩티드 단편 또는 펩티드에 결합하는 IL-31 길항체를 제공한다. 이들 에피토프에 대한 항체의 결합은 IL-31의 그것의 동족 수용체에 대한 신호 변환의 억제, 차단, 중화, 및/또는 감소를 초래한다.
마우스 항-사람 IL-31 단클론성 항체는 이미 공동 계류중인, 2006년 5월 8일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/430,066 (미국 특허 공보 2006-02752960)에서 설명된 바 있다. 마우스 항-사람 IL-31 항체의 가변 영역의 아미노산 서열은 공동 계류중인, 2007년 9월 4일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/850,006호 및 공동 소유의, 2007년 9월 4일에 출원된 PCT 출원 US07/77555에서 설명된다 (이것들은 둘 다 가변 영역 서열 및 항체 제조 방법에 대해 참조된다). 이들 아미노산 서열은 본원에서 설명된 인간화된 서열에 대한 출발 물질로서 사용되었다. 구체적으로, 마우스 항-사람 IL-31 항체 서열은 클론 번호가 292.12.3.1인 하이브리도마로부터 유래되었다.
본원에 설명된 것과 같은 항체의 활성은 IL-31 수용체를 발현하는 세포의 증식 및/또는 그 세포에 대한 결합을 측정하는 다양한 분석법을 사용하여, 증식을 억제, 또는 감소시키는 항체의 활성에 의해 측정될 수 있다. 특히 관심의 대상은 IL-31-의존성 세포의 변화이다. IL-31-의존성인 것으로 공학제조되기에 적당한 셀라인은 IL-3-의존성 BaF3 셀라인 (Palacios and Steinmetz, Cell 41:727-734, 1985; Mathey-Prevot et al., Mol . Cell . Biol . 6: 4133-4135, 1986), FDC-P1 (Hapel et al., Blood 64:786-790, 1984), 및 MO7e (Kiss et al., Leukemia 7:235-240, 1993)를 포함한다. 성장 인자-의존성 셀라인은 공개된 방법에 따라 수립될 수 있다 (Greenberger et al., Leukemia Res . 8:363-375, 1984; Dexter et al., in Baum et al. Eds., Experimental Hematology Today, 8th Ann. Mtg. Int. Soc. Exp. Hematol. 1979, 145-156, 1980). 인간화된 항-IL-31 항체 또는 길항체의 활성은 또한 본원에서 설명된 BaF3 증식 분석, Biacore 분석, 또는 NHK 분석으로 측정될 수 있다.
한 구체예에서, 면역글로불린 중쇄 불변 영역 도메인은 α, γ, μ, δ 또는 ε 사람 면역글로불린 중쇄의 불변 영역으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 상기 불변 영역은 γ1, γ2, γ3 또는 γ4 사람 면역글로불린 중쇄의 불변 영역일 수 있다.
다른 구체예에서, 면역글로불린 경쇄 불변 영역 도메인은 κ 또는 λ 사람 면역글로불린 경쇄의 불변 영역으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
다른 구체예에서, 중쇄 불변 영역은 사람 γ4이고, 그것은 용액 중에서 안정하며, 보체 활성화 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않는다. 다른 구체예에서, 중쇄 불변 영역은 사람 γ1이다.
면역글로불린은 면역글로불린의 주요 부류, 이를테면 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 및 어떠한 하위부류 또는 이소타입, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4; IgA-1 및 IgA-2 중 어느 것으로부터 선택될 수 있다.
IL-31의 활성을 억제하는 것은 많은 분석법에 의해 측정될 수 있다. 본원에 설명된 분석법들 외에, 샘플은 수용체 결합, IL-31-의존성 세포 반응의 자극/억제 또는 IL-31RA 수용체-발현 세포의 증식을 측정하기 위해 디자인된 다양한 분석법으로 IL-31 활성의 억제에 대해 시험될 수 있다.
IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 포함하여 IL-31-결합 폴리펩티드는 또한 리간드의 정제를 위해 사용될 수 있다. 폴리펩티드는 고체 지지체, 예컨대 아가로오스 비드, 교차결합된 아가로오스, 유리, 셀룰로오스성 수지, 실리카-기초 수지, 폴리스티렌, 교차결합된 폴리아크릴아미드, 또는 사용 조건하에서 안정한 유사 물질 상에 고정된다. 폴리펩티드를 고체 지지체에 결합시키는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 아민 화학, 시아노겐 브로마이드 활성화, N-히드록시숙신이미드 활성화, 에폭시드 활성화, 술프히드릴 활성화, 및 히드라지드 활성화를 포함한다. 그 결과의 배지는 일반적으로 칼럼의 형태로 설정되며, 리간드를 함유하는 유체는 칼럼을 1회 또는 여러 번 통과하여 리간드가 수용체 폴리펩티드에 결합되는 것을 허용한다. 그런 다음 리간드는 리간드-수용체 결합을 파괴하기 위하여 염 농도, 케이오트로픽(chaotropic) 제제 (구아니딘 HCl), 또는 pH의 변화들을 사용하여 용출된다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 만약 1) 그것들이 결합 활성의 역치 수준을 나타내거나; 2) 그것들이 관련된 폴리펩티드 분자와 유의미하게 교차반응하지 않는다면 특이적으로 결합하는 것으로 간주된다. 결합의 역치 수준은 본원의 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체가 IL-31 폴리펩티드, 펩티드 또는 에피토프에 대조 (비-IL-31) 폴리펩티드에 대한 결합 친화성보다 최소한 10배 더 큰 친화성으로 결합하는 경우 측정된다. 항체는 106 M-1 또는 그 이상, 바람직하게는 107 M-1 또는 그 이상, 보다 바람직하게는 108 M-1 또는 그 이상, 가장 바람직하게는 109 M-1 또는 그 이상의 결합 친화성 (Ka)을 나타낸다. 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 결합 친화성은 당업자에 의해, 예컨대 Scatchard 분석에 의해 쉽게 측정될 수 있다 (Scatchard, G., Ann . NY Acad . Sci. 51:660-672, 1949).
IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체가 관련된 폴리펩티드 분자와 유의미하게 교차반응하는가의 여부는 예를 들어 미지의 관련된 폴리펩티드가 아닌 IL-31 폴리펩티드를 표준 웨스턴 블롯 분석 (Ausubel et al., 상기 동일)을 사용하여 검출하는, IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의해 알 수 있다. 선별은 또한 비-사람 IL-31, 및 IL-31 돌연변이 폴리펩티드를 사용하여 수행될 수 있다. 더욱이 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 IL-31 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 집단을 분리하기 위해 공지된 관련 폴리펩티드에 "대해 선별"될 수 있다. 예를 들어 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 불용성 매트릭스에 고착된 관련 폴리펩티드에 대해 흡착되며; IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31에 특이적인 IL-31 길항체는 적절한 완충 조건 하에서 매트릭스를 통해 흐를 것이다 (Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; Current Protocols in Immunology, Cooligan, et al. (eds.), National Institutes of Health, John Wiley and Sons, Inc., 1995).
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 정제된 재조합 단백질 사람 IL-31의 존재하에 성장될 때 그것이 수용체 결합을 차단, 억제, 방지, 또는 감소시키는 능력에 대해 특성확인된다. 예를 들어 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 비닝(binning) (즉 항체가 어떠한 다른 결합의 결합을 억제할 수 있을지를 측정하는 것), 상대적 친화성, 및 중화를 포함한 많은 방법으로 특성확인될 수 있다.
본 발명의 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 아래의 표 1 및 도 1에 도시된다.
아래의 표 1에서 "12VH1" (즉 클론 7, 9, 10, 13 내지 18, 및 26 내지 36)의 표시를 가지는 클론에 대한 용어는 다음과 같다: 용어"fback"는 LC(back)+HC(fback)을 의미하고; 용어 "LC(back)"은 LC(G66R, G68E, D70Q, F71Y, T72S)를 의미하며; 용어 "HC(back)"은 HC(F29L, M69L, R71A, T73K, V78A, R94F)를 의미한다. 유사하게 표 1에서 "12VH5" (즉 클론 8, 11 및 21 내지 24)로 표시되는 클론들에 대해 용어는 다음과 같다: 용어 "fback"은 LC(back)+HC(fback)을 의미하고; 용어 "LC(back)"은 LC(G66R, G68E, D70Q, F71Y, T72S)를 의미하며; 용어 "HC(back)"은 HC(G24A, S28T, F29L, I69L, S70T, R94F)를 의미한다.
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본원에 개시되는 항체는 당해 기술분야에 공지되어 있는 어떠한 기법, 예컨대 재조합 기법, 화학적 합성, 클로닝, 결찰, 또는 그것들의 조합에 의해 제조될 수 있다. 구체예에서, 본 발명의 항체는 재조합 기법에 의해, 예컨대 적당한 숙주 세포에서 상응하는 핵산의 발현에 의해 제조된다. 제조된 폴리펩티드는 글리코실화되거나 그렇지 않을 수 있고, 또는 사용된 숙주 세포 유형에 따라 다른 후-번역 변형을 함유할 수 있다. 많은 책과 보고서에는 벡터 및 원핵 또는 진핵 숙주 세포를 사용하여 재조합 단백질을 클론하고 제조하는 방법에 대해 설명되어 있는데, 예를 들면 일련의 다음 제목과 같다: "A Practical Approach", Oxford University Press 출판 ("DNA Cloning 2: Expression Systems", 1995; "DNA Cloning 4: Mammalian Systems", 1996; "Protein Expression", 1999; "Protein Purification Techniques", 2001).
따라서 본 발명의 추가의 목적은 상기에서 혹은 아래에서 설명되는 항체의 어느 것이든지 코드화하는 분리된 핵산 분자, 또는 그것의 상보하는 가닥 또는 축퇴성 서열이다. 이런 관점에서 용어 "핵산 분자"는 모든 상이한 유형의 핵산, 이를테면 제한 없이, 데옥시리보핵산 (예컨대 DNA, cDNA, gDNA, 합성 DNA 등), 리보핵산 (예컨대 RNA, mRNA 등) 및 펩티드 핵산 (PNA)을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 핵산 분자는 DNA 분자, 예컨대 이중 가닥의 DNA 분자 또는 cDNA 분자이다. 용어 "분리된"은 보통은 자연적인 공급원에 관련된 최소한 하나의 오염 핵산 분자로부터 분리되고 확인된 핵산 분자를 의미한다. 분리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태나 설정과는 다르다. 분리된 핵산 분자는 따라서 그것이 자연 세포에 존재하는 한 특이한 핵산 분자와는 구별된다. 축퇴성 서열은 참조 뉴클레오티드 서열과 같은 아미노산 서열을 코드화하는 어떠한 뉴클레오티드 서열을 나타내지만, 유전자 코드 축퇴성의 결과로서 구별되는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기에서 또는 아래에서 설명되는 항체의 어느 것이든지 코드화하는 DNA를 포함하는 벡터이다. 벡터는 어떠한 원핵 또는 진핵 세포에서 기능할 수 있는, 통합적이거나 또는 자동 복제하는 어떠한 클로닝 또는 발현 벡터일 수 있다. 특히 벡터는 플라스미드, 코스미드, 바이러스, 파지, 에피솜, 인공 염색체 등일 수 있다. 벡터는 중쇄 및 경쇄 둘 다에 대한 코딩 서열, 또는 경쇄 및 중쇄 코딩 서열 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 벡터가 중쇄 및 경쇄 둘 다에 대한 코딩 서열을 포함해야 한다면 중쇄 및 경쇄는 각각 프로모터에 작동가능하게 연결될 수 있어야 한다. 프로모터는 중쇄 및 경쇄에 대해 동일하거나 상이할 수 있다. 중쇄 및 경쇄는 또한 하나의 단일 프로모터에 작동가능하게 연결될 수 있는데, 이 경우 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 바람직하게는 내부 리보솜 유입 부위 (IRES)에 의해 분리될 수 있다. 진핵 유전자 발현에 적당한 프로모터는 예를 들면 당업자에게 잘 알려져 있는 쥐과 또는 사람 사이토메갈로바이러스 (CMV) 또는 라우스 육종 바이러스 (RSV) 프로모터와 같은 바이러스 유전자로부터 유도된다. 벡터는 조절 요소, 예를 들면 프로모터, 터미네이터, 인핸서, 선택 마커, 복제 기원 등을 포함할 수 있다. 그러한 벡터의 구체적인 실례로는 아래에서 논의되는 바와 같이 원핵 플라스미드, 예컨대 pBR, pUC 또는 pcDNA 플라스미드; 바이러스 벡터, 이를테면 레트로바이러스, 아데노바이러스 또는 AAV 벡터; 박테리오파지; 배큘로바이러스; BAC 또는 YAC 등이 있다. 적절한 핵산 서열은 다양한 과정에 의해 벡터 안에 삽입될 수 있다. 일반적으로 DNA는 당해 기술분야에 공지되어 있는 기법들을 사용하여 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위(들)에 삽입된다. 하나 또는 그 이상의 이들 성분을 함유하는 적당한 벡터의 구성은 당업자에게 알려져 있는 표준 결찰 기법을 사용한다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 세포가 상기에서 규정된 것과 같은 핵산 분자 또는 벡터를 포함하고 있는 재조합 숙주 세포이다. 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 원핵 세포의 실례로는 박테리아, 예컨대 대장균이 있다. 진핵 세포의 실례는 효모 세포, 식물 세포, 포유류 세포 및 곤충 세포, 이를테면 어떠한 일차 세포 구조 또는 수립된 셀라인 (예컨대 3T3, Vero, HEK293, TN5 등)을 포함한다. 글리코실화된 단백질의 발현에 적당한 숙주 세포는 다중세포 유기체로부터 유도된다. 무척추동물 세포의 실례로는 곤충 세포, 예컨대 초파리 S2 및 Spodoptera Sf9, 및 식물 세포를 포함한다. 유용한 포유류 숙주 셀라인의 실례는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 및 COS 세포를 포함한다. 보다 구체적인 실례로는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1 라인 (COS-7, ATCC CRL 1651); 사람 배발생 신장 라인 (293 또는 현탁액 배양으로 성장시키기 위해 하위클론된 293 세포, Graham et al., J. Gen. Virol. 36:59 (1977)); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR (CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl, Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)); 마우스 세르톨리씨 세포 (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); 사람 폐 세포 (W138, ATCC CCL 75); 사람 간 세포 (Hep G2, HB 8065); 및 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51)이 있다. 본 발명에서 특히 바람직한 포유류 세포는 CHO 세포이다. 또한 본 발명의 항체 발현에 적당한 특별히 바람직한 포유류 세포는 마우스 골수종 (NS0) 세포와 같은 쥐과 세포이다.
상기에서 설명된 것과 같이, 본 발명의 항체는 당해 기술분야에 공지되어 있는 모든 기법에 의해, 예를 들면 재조합 기술에 의해, 화학적 합성, 클로닝, 결찰, 또는 그것들의 조합에 의해 제조될 수 있다. 특별한 구체예에서, 가용성 수용체는 재조합 기술에 의해, 예를 들면 적당한 숙주 세포에서 상응하는 핵산의 발현에 의해 제조된다. 그러므로 본 발명의 다른 목적은 본 발명의 항체를 제조하는 방법이고, 그 방법은 본 발명의 재조합 숙주 세포를 핵산 분자의 발현을 허용하는 조건하에서 배양하고, 생성된 폴리펩티드를 회수하는 것을 포함한다. 본 발명의 제조 방법은 또한 폴리펩티드를 약제학적 조성물로 제형하는 단계를 포함할 수 있다. 제조된 폴리펩티드는 글리코실화되거나 그렇지 않을 수 있고, 또는 사용된 숙주 세포 유형에 따라 다른 후-번역 변형을 함유할 수 있다. 많은 책과 보고서에는 벡터 및 원핵 또는 진핵 숙주 세포를 사용하여 재조합 단백질을 클론하고 제조하는 방법에 대해 설명되어 있는데, 예를 들면 일련의 다음 제목과 같다: "A Practical Approach", Oxford University Press 출판 ("DNA Cloning 2: Expression Systems", 1995; "DNA Cloning 4: Mammalian Systems", 1996; "Protein Expression", 1999; "Protein Purification Techniques", 2001).
본 발명에 따르는 항체의 제조 방법에 사용될 벡터는 에피솜성 또는 비-/동종 통합 벡터일 수 있으며, 그것은 어떠한 적당한 수단 (형질전환, 트랜스펙션, 포합, 원형질 융합, 일렉트로포레이션, 칼슘 포스페이트-침전, 직접 마이크로주입 등)에 의해 적절한 숙주 세포로 도입될 수 있다. 특정 플라스미드, 바이러스 또는 레트로바이러스 벡터를 선택하는 데 중요한 요인들로는 다음과 같은 것들이 있다: 벡터를 함유하는 수용체 세포가 쉽게 인식되고 벡터를 함유하지 않는 이들 수용체 세포로부터 쉽게 선택될 수 있는 용이성; 특정 숙주에서 바람직한 벡터의 복사물 수; 및 상이한 종의 숙주 사이에서 벡터를 "실어 나를"수 있기에 바람직한가의 여부. 벡터는 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서, 상기 세포에서 구성적으로 활성이거나 유도성이 되도록 선택된 적절한 전사 개시/종결 조절 서열의 제어하에 본 발명의 폴리펩티드 또는 융합 단백질의 발현을 허용해야 한다. 그러한 세포에서 실질적으로 풍부해진 셀라인이 그런 다음 분리되어 안정한 셀라인이 제공될 수 있다.
숙주 세포는 단백질 제조를 위해 본원에서 설명된 발현 또는 클로닝 벡터로 트랜스펙트되거나 형질전환되고, 그런 다음 프로모터를 유도하고, 형질전환체를 선택하고, 또는 원하는 서열을 코드화하는 유전자를 증폭시키기 위해서 필요에 따라 변형된 종래 영양 배지에서 배양될 수 있다. 배양 조건, 예컨대 배지, 온도, pH 등은 불필요한 실험 없이 당업자에 의해 선택될 수 있다. 일반적으로 세포 배양의 생산성을 최대화하기 위한 원리, 프로토콜, 및 실제적인 기법들은 문헌에서 찾아볼 수 있다 (Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) 및 Sambrook et al., 상기 참조).
진핵 숙주 세포 (예컨대 효모, 곤충 또는 포유류 세포)에 대해서는 상이한 전사 및 번역 조절 서열이 숙주의 성질에 따라 사용될 수 있다. 그것들은 바이러스 공급원, 예컨대 아데노바이러스, 유두종 바이러스, 시미안 바이러스 등으로부터 유도될 수 있는데, 그것에서 조절 신호는 높은 발현 수준을 가지는 특정 유전자와 결합된다. 실시예는 포진 바이러스, SV40 초기 프로모터, 효모 gal4 유전자 프로모터 등의 TK 프로모터이다. 발현 및 활성화를 허용하는 전사 개시 조절 신호가 선택될 수 있는데, 그로써 유전자 발현이 조절될 수 있다. 도입된 DNA에 의해 안정하게 형질전환된 세포들은 또한 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포의 선택을 허용하는 하나 또는 그 이상의 마커를 도입시킴으로써 선택될 수 있다. 마커는 또한 영양요구성 숙주에 대한 광요구성, 살생물제 내성, 예컨대 항생물질, 또는 구리와 같은 중금속 내성 등을 제공할 수 있다. 선택가능한 마커 유전자는 발현될 DNA 서열 (동일한 벡터 상에 있는)에 적접 연결되거나, 또는 공트랜스펙션에 의해 동일한 세포 안에 도입될 수 있다. 추가의 요소들이 또한 본 발명의 단백질의 최적 합성에 대해 요구될 수 있다.
적당한 원핵 세포는 재조합 박테리오파지, 플라스미드 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아 (예컨대 고초균 또는 대장균)를 포함할 수 있다. 그런 세포는 전형적으로 N-말단 메티오닌 잔기를 포함하는 단백질을 생성한다. 본 발명에 사용될 바람직한 세포는 진핵 숙주 세포, 예컨대 포유류 세포, 예를 들면 사람, 원숭이, 마우스, 및 차이니즈 햄스터 난소 (CHO), 세포인데, 왜냐하면 그것들이 정확한 접힘 또는 정확한 부위에서의 글리코실화를 포함하여, 단백질 분자에 대한 후-번역 변형을 제공하기 때문이다. 적당한 포유류 숙주 세포의 실례로는 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (Vero; ATCC CRL 1587), 사람 배발생 신장 세포 (293-HEK; ATCC CRL 1573), 어린 햄스터 신장 세포 (BHK-21, BHK-570; ATCC CRL 8544, ATCC CRL 10314), 개 신장 세포 (MDCK; ATCC CCL 34), 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO-K1; ATCC CCL61; CHO DG44 (Chasin et al., Som. Cell. Molec. Genet. 12:555, 1986)), 쥐 뇌하수체 세포 (GH1; ATCC CCL82), HeLa S3 세포 (ATCC CCL2.2), 쥐 간종양 세포 (H-4-II-E; ATCC CRL 1548), SV40-형질전환된 원숭이 신장 세포 (COS- 1; ATCC CRL 1650), 보우 흑색종 및 사람 간세포 암종 (예를 들면 Hep G2), 쥐 배발생 세포 (NIH-3T3; ATCC CRL 1658) 및 수많은 다른 셀라인이 있다. 또 다른 진핵세포는 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모 세포 (예컨대 사카로마이세스, 클루이베로마이세스, 등)이다. 또한 효모 세포는 글리코실화를 포함한 후-번역 펩티드 변형을 수행할 수 있다. 효모에서 원하는 단백질의 제조를 위해 활용될 수 있는 강력한 프로모터 서열 및 큰 복사수의 플라스미드를 활용하는 많은 재조합 DNA 스트래티지가 존재한다. 효모 세포는 클론된 포유류 유전자 산물에서 리더 서열을 인지하고, 리더 서열 (즉 프레-펩티드)을 내포하는 폴리펩티드를 분비한다.
장기적이고 고수율의 재조합 폴리펩티드를 제조하기 위해서는, 안정한 발현이 바람직하다. 예를 들어 관심의 폴리펩티드를 안정하게 발현하는 셀라인은 복제 기원 및/또는 내인성 발현 요소와 동일하거나 별도의 벡터 상에서 선택가능한 마커 유전자를 함유할 수 있는 발현 벡터를 사용하여 형질전환될 수 있다. 벡터의 도입 후에 세포는 풍부해진 배지에서 1 내지 2일 동안 성장하는 것이 허용된 후에 선택적 배지로 전환될 수 있다. 선택가능한 마커의 목적은 선택에 대한 내성을 부여하는 것이고, 그것의 존재는 도입된 서열을 성공적으로 발현하는 세포의 성장 및 회수를 가능하게 한다. 안정하게 형질전환된 세포의 내성 클론은 세포 유형에 적절한 조직 배양 기법을 사용하여 증식될 수 있다. 그런 세포에서 실질적으로 풍부해진 셀란인이 다음 단계에서 분리되어 안정한 셀라인이 제공된다.
본 발명의 재조합 폴리펩티드를 고수율로 제조하기에 특히 바람직한 방법은 DHFR-결핍 CHO 세포에서 디히드로폴레이트 환원효소 (DHFR) 증폭을 사용함으로써, US 4,889,803에서 설명된 것과 같이 연속적으로 증가하는 수준의 메토트렉세이트를 사용함으로써 이루어진다. 얻어진 폴리펩티드는 글리코실화된 형태일 수 있다.
본원에 개시된 항체는 또한 다른 진핵 세포, 예컨대 조류, 진균류, 곤충, 효모, 또는 식물 세포에서 발현될 수 있다. 배큘로바이러스 시스템은 클론된 유전자를 곤충 세포에 도입하기에 효과적인 수단을 제공한다. 배큘로바이러스/곤충 세포 발현 시스템에 대한 물질은 상업적으로, 그중에서도 특히 Invitrogen으로부터 키트 형태로 구매할 수 있다.
재조합 DNA 기술 외에, 본 발명의 항체는 화학적 합성 기술에 의해 제조될 수 있다. 화학적 합성 기술의 실례는 고상 합성 및 액상 합성이다. 고상 합성으로서는 예를 들면 합성하고자 하는 폴리펩티드의 카르복시-말단에 상응하는 아미노산이 유기 용매에서 불용성인 지지체에 결합되거나, 또는 대안적인 반응의 반복에 의해 (예컨대 그것들의 아미노 기와 적절한 보호기로 보호된 측쇄 기능 기로 아미노산을 순차적으로 축합함으로써), 폴리펩티드 사슬은 연장된다. 고상 합성 방법은 크게는 사용된 보호기의 유형에 따라 tBoc 방법 및 Fmoc 방법에 의해 분류된다. 전체적으로 합성 단백질은 문헌에 개시된다 (Brown A et al., 1996).
본 발명의 항체는 원하는 사용 및/또는 제조 방법에 따라 바람직할 수 있는 다른 대안적인 형태로 제조되거나 제형되거나 투여되거나, 또는 유전적으로 사용될 수 있다. 발명의 단백질은 예컨대 글리코실화에 의해 후-번역적으로 변형될 수 있다. 발명의 폴리펩티드 또는 단백질은 분리된 (또는 정제된) 생물학적으로 활성 형태로, 또는 그것의 전구체, 유도체 및/또는 염으로서 제공될 수 있다.
유용한 포합체 또는 복합체는 또한 약물 전달 효능의 관점에서 제제를 개선하기 위해 생성될 수 있다. 이 목적을 위해 본원에 기술되는 항체는 폴리에틸렌 글리콜 및 다른 천연 또는 합성 중합체와 같은 분자와의 활성 포합체 또는 복합체 형태로 존재할 수 있다 (Harris JM and Chess RB, 2003; Greenwald RB et al., 2003; Pillai O and Panchagnula R, 2001). 이런 관점에서 본 발명은 본원에 개시되는 것과 같은 화학적으로 변형된 항체를 포함하며, 이때 항체는 중합체에 결합된다. 전형적으로 중합체는 수용성이어서 포합체는 수성 환경, 예컨대 생리적 환경에서 침전되지 않는다. 적당한 중합체의 실례는 단일 반응성 기, 예컨대 아실화에 대해서는 활성 에스테르, 또는 알킬화에 대해서는 알데하이드를 가지기 위해 변형된 것이다. 이런 방식으로 중합도는 조절될 수 있다. 반응성 알데하이드의 실례는 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드, 오르모노-(C1-C10) 알콕시, 또는 그것의 아릴옥시 유도체이다 (예컨대 Harris, et al., 미국 특허 제 5,252,714호). 중합체는 분지되거나 분지되지 않을 수 있다. 더욱이 중합체의 혼합물은 포합체를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 치료를 위해 사용된 포합체는 약제학적으로 허용되는 수용성 중합체 부분을 포함할 수 있다. 적당한 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 모노메톡시-PEG, 모노-(C1-C10) 알콕시-PEG, 아릴옥시-PEG, 폴리-(N-비닐 피롤리돈) PEG, 트레실 모노메톡시 PEG, PEG 프로피온알데하이드, 비스-숙신이미딜 카보네이트 PEG, 프로필렌 글리콜 단일중합체, 폴리프로필렌옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (예컨대 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 덱스트란, 셀룰로오스, 또는 다른 탄수화물-기초 중합체를 포함한다. 적당한 PEG는 약 600 내지 약 60,000, 이를테면 예를 들어 5,000, 12,000, 20,000 및 25,000의 분자량을 가질 수 있다. 포합체는 또한 그런 수용성 중합체의 혼합물을 포함할 수 있다.
포합체의 실례는 상기에서 개시된 모든 항체 및 상기 가용성 수용체의 N-말단에 부착된 폴리알킬 옥사이드 부분을 포함한다. PEG는 하나의 적당한 폴리알킬 옥사이드이다. 예를 들면 본원에 개시된 어떠한 항체든지 PEG로 변형될 수 있는데, 그 과정은 "PEGylation(페길화)"로 알려져 있다. 페길화는 당해 기술분야에 공지된 페길화 반응 중 어느 것에 의해서든 수행될 수 있다 (EP 0 154 316, Delgado et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9:249 (1992), Duncan and Spreafico, Clin. Pharmacokinet. 27:290 (1994), and Francis et al., Int J Hematol 68:1 (1998)). 예를 들어 페길화는 아실화 반응에 의해, 또는 반응성 폴리에틸렌 글리콜 분자와의 알킬화 반응에 의해 수행될 수 있다. 대안적인 접근법에서, 포합체는 PEG의 말단 히드록시 또는 아미노기가 활성화된 링커에 의해 대체되어 있는 활성화된 PEG를 축합함으로써 형성된다 (예컨대 Karasiewicz et al., 미국 특허 5,382,657호). 바람직하게는 이들 모든 변형은 사람 IL-31에 결합하는 항체의 능력에 유의미하게 영향을 미치지 않는다.
본원에 기술된 항체는 추가의 N-말단 아미노산 잔기, 바람직하게는 메티오닌을 포함할 수 있다. 실제로 발현 시스템 및 조건에 따라 폴리펩티드는 출발 메티오닌을 포함하는 재조합 숙주 세포에서 발현될 수 있다. 이 추가의 아미노산은 그런 다음, 문헌에 개시된 방법에 따라 그 결과의 재조합 단백질에서 유지되거나, 또는 엑소펩티다제, 에컨대 메티오닌 아미노펩티다제에 의해 제거될 수 있다 (Van Valkenburgh HA and Kahn RA, Methods Enzymol. (2002) 344:186-93; Ben-Bassat A, Bioprocess Technol. (1991) 12:147-59).
본원의 실시예 부분에서 알 수 있는 것과 같이, 마우스 항-사람 항-IL-31 항체는 그것의 가변 도메인에 잠재적인 글리코실화 부위를 포함할 수 있다. 예를 들어 클론 292.12.3.1은 중쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역 FR1에 글리코실화 부위를 포함한다. 본 발명의 발명자들은 현재, 사람 IL-31에 대한 양호한 결합 친화성을 유지하기 위해 상기 글리코실화 부위가 더 이상 필요하지 않다는 것을 발견하였다. 더욱이 이 글리코실화 부위를 (예컨대 돌연변이에 의해) 없애는 것은 항체의 열안정성에 대해 포지티브 효과를 나타낸다. 그러므로 본 발명의 구체예에서, 본원에 개시된 항체는 그것들의 가변 도메인에 글리코실화 부위를 갖지 않는다.
본원에 개시된 방법에 의해 제조된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 다양한 방법에 의해 중화에 대해 시험될 수 있다. 예를 들어 공개된 미국 특허 출원 (공개 번호 2003/0224487, Sprecher, Cindy et al., 2003)에서 기술된 것과 같은 루시페라제 분석이 사용될 수 있다. 또한 중화는 리간드 및 단클론성 항체의 존재 하에 케라틴 생성세포 배양물로부터 TARC 및 MDC와 같은 전-염증성 케모카인의 생성의 감소를 측정함으로써 시험될 수 있다. 중화는 또한 본원에서 설명되는 생체 내 및 시험관 내 분석에 의해 측정될 수 있다.
본원에 기술된 인간화된 항-IL-31 항체 및 길항체에 대한 반응으로 TARC 및 MDC의 감소는 다음과 같이 AD 마우스 모델에서 측정될 수 있다:
방법 I) 생후 6주의 수컷 NC/Nga 마우스들 (CRL Japan)을 50㎍의 집먼지 진드기 추출물 (D. pteronyssinus, Indoor Biotechnologies)로 일주일에 3회 등에 피부내 민감화시키고, AD-유사 병변에 대해 기록한다. 민감화하고 5주 후에, 마우스들을 안락사시키고, 오른쪽 귀를 절단하여 RPMI+2% FBS (GIBCO Invitrogen)를 첨가한 48-웰 배양 접시 (Corning)의 단일 웰에 넣는다. 플레이트를 5% CO2 습도 조절된 인큐베이터에 넣는다. 상층액을 24시간 후에 수집하여 나중에 분석할 때까지 -20℃에서 냉동시킨다.
방법 II) 생후 12주의 암컷 NC/Nga 마우스들 (CRL Japan)을 10㎍의 SEB (Toxin Technology)로 귀와 등에, 일주일에 3회 피부내 민감화시킨다. 마우스들을 AD-유사 병변에 대해 기록한다. 민감화하고 5주 후에, 마우스들을 안락사시키고, 각 마우스의 주사된 귀로부터 6mm의 생검 펀치를 취하여 RPMI+2% FBS를 첨가한 48-웰 배양 접시의 단일 웰에 넣는다. 플레이트를 5% CO2 습도 조절된 인큐베이터에 넣는다. 상층액을 24시간 후에 수집하여 나중에 분석할 때까지 -20℃에서 냉동시킨다.
두 연구에서 마우스 그룹을 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 인간화된 IL-31 항체 또는 길항체로, 민감화하고 1 내지 2주 후부터 시작하여 일주일에 2회 복강내로 처리한다. 24-시간 상층액 중의 TARC 및 MDC 농도를 종래의 ELISA (R&D Systems)에 의해 측정한다.
한 구체예에서, 본 발명의 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 그것에 한정되지는 않지만, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, 단일 사슬 Fvs (scFv), 단일 사슬 항체, 이황화-연결 Fvs (sdFv) 및 VL이나 VH 도메인을 포함하는 단편들을 포함한다. 단일 사슬 항체를 포함하여, 항원-결합 항체 단편은 가변 영역(들)(즉 SEQ ID NO:25 내지 45)을 단독으로 또는 전체 또는 일부의 힌지 영역, CH1, CH2, 및 CH3 도메인과의 조합으로 포함할 수 있다. 또한 본 발명에는 가변 영역(들)과 힌지 영역, CH1, CH2 및 CH3 도메인과의 어떠한 조합을 포함하는 항원 결합 단편이 포함된다. 다른 구체예에서, SEQ ID NO:25, 27, 29, 30, 31, 35, 36, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 및 45 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:26, 28, 32, 33, 34 및 37 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역과 조합될 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명은 인간화된 중쇄 가변 도메인과 인간화된 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 사람 IL-31에 결합하는 분리된 항체 또는 항체 단편을 제공하며, 이때 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 인간화된 경쇄 가변 도메인은 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된다: a) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인; b) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인; c) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인; d) SEQ ID NO:29의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인; e) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 도메인; f) SEQ ID NO:30의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; g) SEQ ID NO:31의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; h) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:32의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; i) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; j) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; k) SEQ ID NO:35의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; l) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:32의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; m) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; n) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; o) SEQ ID NO:36의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; p) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; q) SEQ ID NO:38의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; r) SEQ ID NO:39의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; s) SEQ ID NO:40의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; t) SEQ ID NO:41의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; u) SEQ ID NO:42의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; v) SEQ ID NO:43의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; w) SEQ ID NO:44의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; x) SEQ ID NO:36의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; y) SEQ ID NO:36의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인; 및 z) SEQ ID NO:45의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 도메인.
다른 구체예에서, 본 발명은 인간화된 중쇄 가변 도메인과 인간화된 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 사람 IL-31에 결합하는 분리된 항체 또는 항체 단편을 제공하는데, 이때 인간화된 중쇄 가변 도메인과 인간화된 경쇄 가변 도메인은 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된다: a) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; b) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; c) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; d) SEQ ID NO:29의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; e) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; f) SEQ ID NO:30의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; g) SEQ ID NO:31의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; h) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:32의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; i) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; j) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; k) SEQ ID NO:35의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; l) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:32의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; m) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; n) SEQ ID NO:27의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; o) SEQ ID NO:36의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; p) SEQ ID NO:25의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; q) SEQ ID NO:38의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; r) SEQ ID NO:39의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; s) SEQ ID NO:40의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; t) SEQ ID NO:41의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; u) SEQ ID NO:42의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; v) SEQ ID NO:43의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; w) SEQ ID NO:44의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:26의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; x) SEQ ID NO:36의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; y) SEQ ID NO:36의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:28의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인; 및 z) SEQ ID NO:45의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:37의 아미노산 서열에 대해 최소한 90% 서열 동일성을 가지는 인간화된 경쇄 가변 도메인.
본 발명은 한 측면으로 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된 분리된 항체를 제공한다: a) 아미노산 서열 SEQ ID NO:46으로 이루어지는 경쇄 및 아미노산 서열 SEQ ID NO:47로 이루어지는 중쇄를 포함하는 항체; b) 아미노산 서열 SEQ ID NO:48로 이루어지는 경쇄 및 아미노산 서열 SEQ ID NO:49로 이루어지는 중쇄를 포함하는 항체; 및 c) 아미노산 서열 SEQ ID NO:50으로 이루어지는 경쇄 및 아미노산 서열 SEQ ID NO:51로 이루어지는 중쇄를 포함하는 항체.
본 발명은 또한 상기에서 설명된 것과 기능적으로 동등한 재조합 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 포함한다. 또한 개선된 안정성 및/또는 치료 효능을 제공하는 변형된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체가 포함된다. 변형된 항체의 실례는 아미노산 잔기의 보존성 치환, 및 하나 또는 그 이상의 결실 또는 항원 결합 유용성을 유의미하게 해롭게 변경하지 않을 아미노산의 첨가가 있는 항체를 포함한다. 치환은 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 변화시키거나 변형하는 것으로부터 치료 유용성이 유지되는 한 영역을 완전히 재디자인하기에 이르기까지 다양할 수 있다. 본 발명의 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 후-번역 변형될 수 있거나 (예컨대 아세틸화, 및 인산화) 합성적으로 변형될 수 있다 (예컨대 표지화 기의 부착). 본 발명의 방법에 의해 디자인된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 실질적으로 항원 결합 또는 다른 면역글로불린 기능에 영향을 미치지 않는 추가의 보존성 아미노산 치환을 가질 수 있다.
본 발명의 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 변형된 유도체, 예를 들면, 그것에 한정되는 것은 아니지만, 예컨대 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백질 가수분해성 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연쇄 등에 의해 변형된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 포함한다. 수많은 화학적 변형 중 어느 것이든지 공지된 기법, 이를테면 그것에 한정되는 것은 아니지만 특수한 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의 대사적 합성 등에 의해 수행될 수 있다. 또한 유도체는 하나 또는 그 이상의 비-고전적인 아미노산을 함유할 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 마우스 공여체 면역글로불린의 CDR과 사람 수용체 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄 프레임워크를 포함한다. 인간화된 항체의 제조 방법은 미국 특허 5,301,101호; 5,585,089호; 5,693,762호; 및 6,180,370호에 개시된다. 이들 항체의 CDR은 그런 다음에 당해 기술분야에 공지되어 있는 어떠한 선택된 사람 프레임워크에 이식되어 원하는 인간화된 항체가 생성될 수 있다.
본 발명은 또한 사람 IL-31에 대한, 본원에서 기술된 단클론성 항체의 결합을 경합적으로 억제하는 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 제공한다. 경합 억제는 당해 기술분야에 공지된 어떠한 방법에 의해, 예를 들면 본원에서 설명된 경합 결합 분석을 사용하여 측정될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 항체는 폴리펩티드에 대한 본 발명의 단클론성 항체의 결합을 최소한 90%, 최소한 80%, 최소한 70%, 최소한 60%, 또는 최소한 50% 경합적으로 억제한다.
본 발명은 또한 경합성 결합을 측정하기 위해 당해 기술분야에 공지된 어떠한 방법, 예를 들면 본원에 기술된 면역분석을 사용하여 측정되는 것과 같이, 본 발명의 에피토프에 대한 항체의 결합을 경합적으로 억제하는 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 제공한다. 바람직한 구체예에서, 항체는 에피토프에 대한 결합을 최소한 90%, 최소한 80%, 최소한 70%, 최소한 60%, 또는 최소한 50% 경합적으로 억제한다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 생체 내 반감기는 Fc 도메인과 FcRn 수용체 사이의 상호작용에 포함된 것으로 확인된 아미노산 잔기를 변형함으로써 (예컨대 치환, 결실 또는 첨가) (예컨대 국제 공보 WO 97/34631 및 WO 02/060919), 또는 고분자량 폴리에틸렌글리콜 (PEG)과 같은 중합체 분자를 부착함으로써 증가될 수 있다. PEG는 상기 항체들 또는 항체 단편의 N- 또는 C-말단에 대한 PEG의 부위-특이적 포합을 통하여 또는 리신 잔기상에 존재하는 엡실론-아미노기를 경유하여 다중기능성 링커가 부착되거나 부착되지 않을 수 있다. 생물학적 활성의 최소한의 손실을 초래하는 선형 또는 분지된 중합체 유도체화가 사용될 것이다. 포합도는 SDS-PAGE 및 질량 분광계에 의해 면밀하게 모니터되어 항체에 대한 PEG 분자의 적절한 포합이 보장될 것이다. 미반응 PEG는 예컨대 크기 축출이나 이온-교환 크로마토그래피에 의해 항체-PEG 포합체로부터 분리될 수 있다.
본 발명은 인간화된 면역글로불린 사슬을 포함하는 항체의 친화성을 증가시키기 위하여, 그것에 의해 인간화된 면역글로불린 사슬의 프레임워크의 제한된 수의 아미노산이 수용체보다는 오히려 공여체의 그런 위치에 있는 아미노산과 동일한 것으로 선택되는 기준을 포함한다.
본원에서 구체적으로 기술되는 인간화된 면역글로불린 외에, 본래 서열에 대해 "실질적으로 상동성으로" 변형된 다른 면역글로불린은 당업자들에게 잘 알려져 있는 다양한 재조합 DNA 기법을 활용하여 쉽게 디자인되고 제조될 수 있다. 다양한 상이한 사람 프레임워크 영역이 본 발명의 인간화된 면역글로불린에 대한 근거로서 단독으로 또는 조합되어 사용될 수 있다. 일반적으로 유전자 변형은 널리 알려져 있는 다양한 기법에 의해, 예컨대 부위-특정 돌연변이생성에 의해 쉽게 이루어질 수 있다 (Gillman and Smith, Gene, 8, 81-97 (1979) 및 S. Roberts et al., Nature, 328, 731-734 (1987)).
본 발명의 인간화된 항체는 무상 항체뿐 아니라 단편도 포함한다. 전형적으로 단편은 그것들이 항원 결합을 위해 유도되는 무상 항체와 경합한다. 단편은 전형적으로 최소한 107 M-1, 보다 전형적으로는 108 또는 109 M-1의 친화성으로 결합한다 (즉 무상 항체와 동일한 범위 내에서). 인간화된 항체 단편은 별도의 중쇄, 경쇄 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv를 포함한다. 단편은 재조합 DNA 기법에 의해, 또는 무상 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 분리에 의해 제조된다.
항체를 인간화하는 상세한 설명에 대해서는 다음의 문헌들을 참조한다: 유럽 특허 EP 239,400, EP 592,106, 및 EP 519,596; 국제 공보 WO 91/09967 및 WO 93/17105; 미국 특허 5,225,539호, 5,530,101호, 5,565,332호, 5,585,089호, 5,766,886호, 및 6,407,213호; 및 Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489 498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6): 805 814; Roguska et al., 1994, PNAS 91:969 973; Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119 25; Caldas et al., 2000, Protein Eng. 13: 353 60; Morea et al., 2000, Methods 20: 267 79; Baca et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:10678 84; Roguska et al., 1996, Protein Eng. 9:895 904; Couto et al., 1995, Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s 5977s; Couto et al., 1995, Cancer Res. 55:1717 22; Sandhu, 1994, Gene 150: 409 10; Pedersen et al., 1994, J. Mol. Biol. 235:959 73; Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Reichmann et al., 1988, Nature 332:323-329; 및 Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596.
항체 단편을 제조하기 위해 다양한 기법들이 개발되어 왔다. 이들 단편은 무상 항체의 단백질 가수분해성 소화에 의해 유도되거나 (Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)), 또는 재조합 숙주 세포에 의해 직접 제조된다. 예를 들어 항체 단편은 상기에서 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 분리될 수 있다. 또는 달리 Fab'-SH 단편은 직접 대장균으로부터 회수되고 화학적으로 결합되어 F(ab')2 단편이 형성될 수 있다 (Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 분리될 수 있다. 항체 단편을 제조하기 위한 다른 기법들은 숙련된 실시자들에게 명백할 것이다. 나아가 단일 사슬 Fv 및 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 기법의 실례는 미국 특허 4,946,778호 및 5,258,498호; Huston et al., Methods in Enzymology 203:46-88 (1991); Shu et al., PNAS 90:7995-7999 (1993); 및 Skerra et al., Science 240:1038-1040 (1988)에서 설명되는 것들을 포함한다.
본 발명은 융합 단백질을 생성하기 위해 본 발명의 폴리펩티드 (또는 그것의 부분, 바람직하게는 폴리펩티드의 최소한 10, 20 또는 50 아미노산)에 재조합적으로 융합된 또는 화학적으로 포합된 (공유 및 비-공유 포합을 둘 다 포함한다) 항체를 포함한다. 그러므로 본 발명은 또한 화학치료제, 독소 (예컨대 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 그것의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉 방사성 포합체)와 같은 세포독성제에 포합된, 본원에서 설명된 항체를 포함하는 면역포합체에 관련된다.
본 발명은 나아가 이종성 폴리펩티드 서열 (예컨대 가변 영역 이외의 항체 도메인)에 융합되거나 포합된 본 발명의 폴리펩티드 (예컨대 면역원성 또는 항원성 에피토프를 포함하는 것들)를 포함하는 조성물을 포함한다. 예를 들어 본 발명의 폴리펩티드는 항체 Fc 영역, 또는 그것의 일부에 융합되거나 포합될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 폴리펩티드 (그것의 단편 또는 변이체를 포함하는)는 면역글로불린의 불변 도메인 (IgA, IgE, IgG, IgM) 또는 그것의 일부분 (CH1, CH2, CH3 또는 그것들의 어떠한 조합 및 그것들의 일부분)으로 융합되어 그 결과 키메릭 폴리펩티드가 초래된다. 본 발명의 폴리펩티드에 융합된 항체 부분은 불변 영역, 힌지 영역, CH1 도메인, CH2 도메인, 및 CH3 도메인 또는 전체 도메인들의 어떠한 조합 또는 그것들의 일부를 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 또한 상기 항체 부분에 융합 또는 포합되어 다량체를 형성할 수 있다. 예를 들어 본 발명의 폴리펩티드에 융합된 Fc 부분은 Fc 부분들 사이의 이황화 결합을 통하여 이량체를 형성할 수 있다. 더 큰 다량체 형태는 폴리펩티드를 IgA 및 IgM의 부분에 융합시킴으로써 만들어질 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드를 항체 부분에 융합 또는 포합시키는 방법은 당해 기술분야에 알려져 있다 (예를 들면 미국 특허 5,336,603호; 5,622,929호; 5,359,046호; 5,349,053호; 5,447,851호; 5,112,946호; EP 307,434; EP 367,166; PCT 공보 WO 96/04388; WO 91/06570; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535-10539 (1991); Zheng et al., J. Immunol. 154:5590-5600 (1995); 및 Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-11341(1992)). 다른 비-제한적인 실례에 의해, 본 발명의 폴리펩티드 및/또는 항체 (그것의 단편 또는 변이체를 포함하여)는 알부민 (그것들에 한정되지 않지만 재조합 사람 혈청 알부민이나 그것의 단편 또는 변이체를 포함한다)과 융합될 수 있다 (1999년 3월 2일에 공개된 미국 특허 5,876,969호, 1998년 6월 16일에 공개된 EP 특허 0 413 622 및 미국 특허 5,766,883호 참조). 본 발명의 폴리펩티드 및/또는 항체는 (그것의 단편 또는 변이체를 포함하여) 이종성 단백질 (예컨대 면역글로불린 Fc 폴리펩티드 또는 사람 혈청 알부민 폴리펩티드)의 N- 또는 C-말단 단부 중 어느 것에 융합될 수 있다. 본 발명의 융합 단백질을 코드화하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명에 포함된다.
상기에서 논의된 것과 같이, 본 발명의 폴리펩티드는 상기 항체 부분에 융합되거나 포합되어 폴리펩티드의 생체 내 반감기가 증가되거나 당해 기술분야에 공지되어 있는 방법을 사용하는 면역분석에 사용될 수 있다. 나아가 본 발명의 폴리펩티드는 상기 항체 부분에 융합되거나 포합되어 정제를 용이하게 할 수 있다. 보고된 한 실례는 사람 CD4-폴리펩티드의 처음 두 개의 도메인과 포유류 면역글로불린의 중쇄 또는 경쇄의 불변 영역의 다양한 도메인으로 구성되는 키메릭 단백질을 설명한다 (예컨대 EP 394,827; Traunecker et al., Nature 331:84-86 (1988)). 면역 시스템에 대한 상피 장벽을 가로지르는 항원의 증진된 전달은 IgG 또는 Fc 단편과 같은 FcRn 결합 파트너에 포합된 항원 (예컨대 인슐린)에 대해 증명되었다 (예컨대 PCT 공보 WO 96/22024 및 WO 99/04813). 이황화-연결된 이량체 구조를 가지는 (IgG로 인해) 항체에 융합되거나 포합된 본 발명의 폴리펩티드는 또한 다른 분자와의 결합 및 중화에 있어서, 단량체 분비된 단백질이나 단독의 단백질 단편보다 더 효과적이다 (Fountoulakis et al., J. Biochem. 270:3958-3964 (1995)). 많은 경우 융합 단백질의 Fc 부분은 치료 및 진단에 유익하며, 그로써 예를 들면 개선된 약리학적 특성을 초래할 수 있다 (EP A 232,262). 또는 달리 융합 단백질이 발현되거나, 검출되거나, 정제된 후에 Fc 부분을 없애는 것이 바람직할 수도 있다. 예를 들어 Fc 부분은 융합 단백질이 예방접종을 위한 항원으로서 사용된다면 치료 및 진단을 방해할 수 있다. 약물 전달에서, 예를 들어 hIL-5와 같은 사람 단백질은 hIL-5의 길항체를 확인하기 위한 고-생산량 선별 분석의 목적을 위해 Fc 부분과 융합되었다 (D. Bennett et al., J. Molecular Recognition 8:52-58 (1995); K. Johanson et al., J. Biol. Chem. 270:9459-9471 (1995)). 그런 기법은 또한 그것에 한정하는 것은 아니지만, 이중기능성 포합제의 사용을 포함한다 (예컨대 미국 특허 5,756,065호; 5,714,631호; 5,696,239호; 5,652,361호; 5,505,931호; 5,489,425호; 5,435,990호; 5,428,139호; 5,342,604호; 5,274,119호; 4,994,560호; 및 5,808,003호).
더욱이 본 발명의 폴리펩티드 (예컨대 그것의 항체 또는 단편)는 마커 서열, 예를 들면 펩티드에 융합되어 폴리펩티드의 정제를 촉진할 수 있다. 추가의 구체예에서, 발명의 폴리펩티드 (그것에 한정되는 것은 아니지만 면역원성 및/또는 항원성 에피토프를 코드화하는 핵산을 포함하여)를 코드화하는 핵산은 또한 에피토프 태그 (예컨대 헤마글루티닌 태그 ("HA") 또는 플래그 태그)로서 관심의 유전자와 재조합되어 발현된 폴리펩티드의 발현 및 정제를 보조할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 마커 아미노산 서열은 상업적으로 활용활 수 있는 다른 많은 것들 중에서도, 헥사-히스티딘 펩티드, 예컨대 pQE 벡터 (QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, Calif., 91311)에 제공된 태그이다. Gentz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824 (1989)에서 설명되는 것과 같이, 예를 들어 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 편리한 정제를 위해 제공된다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그로는 그것에 한정되는 것은 아니지만, 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유도된 에피토프에 상응하는 "HA" 태그 (Wilson et al., Cell 37:767 (1984)) 및 "플래그" 태그가 있다.
본 발명은 또한 진단제 또는 치료제에 포합된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 포함한다. IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 예를 들면 주어진 치료, 진단, 검출, 및/또는 방지 처방의 효능을 측정하기 위하여, 임상적인 시도 과정의 일부분으로서 소양증의 발생 또는 진전을 모니터하기 위해 진단용으로 사용될 수 있다. 검출은 항체를 검출가능한 물질에 결합시킴으로써 촉진될 수 있다. 검출가능한 물질의 실례로는 다양한 효소, 보결 분자단, 형광 물질, 발광 물질, 생체발광 물질, 방사성 물질, 다양한 양전자 방출 단층촬영을 사용하는 양전자 방출 금속, 및 비방사성 상자성 금속 이온을 포함한다. 본 발명에 따르는 진단제로서 사용하기 위하여 항체에 포합될 수 있는 금속 이온에 대해서는 예를 들면 미국 특허 4,741,900호를 참조한다. 적당한 효소의 실례로는 양고추냉이 과산화효소, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제가 있고; 적당한 보결 분자단 복합체의 실례로는 스트렙트아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴이 있으며; 적당한 형광 물질의 실례로는 움벨리페론, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레신, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린이 있고; 발광 물질의 실례로는 루미놀이 있으며; 생체발광 물질의 실례로는 루시페라제, 루시페린, 및 에쿼린이 있고; 적당한 방사성 물질의 실례로는 125I, 131I, 111In 또는 99Tc가 있다.
또한 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 세포독소, 예컨대 세포분열 억제제 또는 살세포제, 치료제 또는 방사성 금속 이온과 같은 치료적 부분에 포합될 수 있다. 세포독소 또는 세포독성제는 세포에 해로운 모든 제제를 포함한다. 그것의 실례로는 팔시탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키친, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미토크산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 퓨로마이신 및 그것들의 유사체 또는 동족체가 있다. 치료제는 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 항대사물질 (예컨대 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제 (예컨대 메클로레타민, 티오에파 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴 (BSNU) 및 로무스틴 (CCNU), 시클로토스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 플라티늄 (II) (DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린 (예컨대 다우노루비신 (구, 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생물질 (예컨대 닥티노마이신 (구, 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신 (AMC)), 및 항-유사분열제 (예컨대 빈크리스틴 및 빈블라스틴)를 포함한다.
본 발명의 포합체는 주어진 생물학적 반응을 변형시키기 위해 사용될 수 있으며, 치료제 또는 약물 부분은 고전적인 화학적 치료제에 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어 약물 부분은 원하는 생물학적 활성을 가지는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 그런 단백질로는 예를 들면 독소, 예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소; 단백질, 예컨대 종양 괴사 인자, 알파-인터페론, 베타-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유도된 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화제, 혈전증 제제 또는 혈관신생 억제제, 예컨대 안지오스타틴 또는 엔도스타틴; 또는 생물학적 반응 변형제, 예컨대 림포카인, 인터류킨-1 ("IL-1"), 인터류킨-2 ("IL-2"), 인터류킨-6 ("IL-6"), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 ("GM-CSF"), 과립구 콜로니 자극 인자 ("G-CSF") 또는 다른 성장 인자일 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 또한 표적 항원의 면역분석 또는 정제에 특히 유용한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 그런 고체 지지체는 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 유리, 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌을 포함한다.
그런 치료적 부분을 항체에 포합시키기 위한 기법들은 잘 알려져 있다 (예컨대 Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), 및 Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev. 62:119-58 (1982)).
또는 달리 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 미국 특허 4,676,980호에서 Segal에 의해 설명된 것과 같이 두 번째 항체에 포합되어 항체 이종포합체를 형성할 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 그것에 포합된 치료 부분이 있든지 없든지, 단독으로 또는 세포독성 인자(들) 및/또는 사이토킨(들)과 조합되어 치료제로서 사용될 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 IL-31을 발현하는 세포를 태깅하기 위해; 친화성 정제에 의해 IL-31을 분리하기 위해; IL-31 폴리펩티드의 순환 수준을 측정하기 위한 진단 분석을 위해; 근원적인 병리학 또는 질병의 마커로서 가용성 IL-31을 검출하거나 정량하기 위해; FACS를 사용하는 분석적 방법에서; 발현 라이브러리를 선별하기 위해; 항-이디오타입 항체를 생성하기 위해; 그리고 시험관 내 및 생체 내 IL-31 활성을 차단하기 위한 길항체로서 또는 중화 항체로서 사용될 수 있다. 적당한 직접 태그 또는 표지로는 방사성 핵종, 효소, 기질, 보조인자, 억제제, 형광 마커, 화학발광 마커, 자기 입자 등이 있고; 간접 태그 또는 표지는 비오틴-아비딘 또는 다른 보체/항-보체 쌍을 중간체로서 사용하는 것이 특징일 수 있다. 본원의 항체는 또한 직접, 간접으로 약물, 독소, 방사성 핵종 등에 포합될 수 있고, 이들 포합체는 생체 내 진단용 또는 치료적 적용에 대해 사용된다. 더욱이 IL-31에 대한 항체 또는 그것의 단편은 시험관 내에서 변성된 IL-31 또는 그것의 단편을 분석, 예를 들어 웨스턴 블롯 또는 당해 기술분야에 공지되어 있는 다른 분석에서 검출하기 위해 사용될 수 있다.
적당한 검출가능한 분자는 폴리펩티드 또는 항체에 직접 또는 간접적으로 부착될 수 있고, 예를 들면 방사성 핵종, 효소, 기질, 보조인자, 억제제, 형광 마커, 화학발광 마커, 자기 입자 등을 포함한다. 적당한 세포독성 분자는 폴리펩티드 또는 항체에 직접 또는 간접적으로 부착될 수 있고, 예를 들면 박테리아 또는 식물 독소 (예컨대 디프테리아 독소, 사포린, 슈도모나스 외독소, 리신, 아브린 등) 뿐만 아니라 치료용 방사성 핵종, 예컨대 요오드-131, 레늄-188 또는 이트륨-90 (폴리펩티드 또는 항체에 직접 부착되거나, 또는 예를 들면 킬레이트화 부분을 통해 간접적으로 부착된)을 포함한다. 폴리펩티드 또는 항체는 또한 아드리아마이신과 같은 세포독성제에 포합될 수 있다. 검출가능한 또는 세포독성 분자의 직접 부착에 대해서는, 검출가능한 또는 세포독성 분자는 보체/항보체 쌍의 한 구성원과 포합될 수 있고, 이때 다른 구성원은 폴리펩티드 또는 항체 부분에 결합된다. 이들 목적에 대해 비오틴/스트렙트아비딘이 예시적인 보체/항보체 쌍이다.
본 발명의 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 당해 기술분야에 공지되어 있는 다양한 생체 내 모델, 예를 들어 그것들에 한정되는 것은 아니지만 NC/Nga 모델, Ova 피내 단자 모델, 만성 과민성 모델, 및 만성 합텐 모델에 의해 측정되고 본원에서 기술되는 바와 같이, IL-31 리간드를 억제하거나, 차단하거나 또는 중화하는 능력에 대해 측정될 수 있다.
피부-귀소성 T 세포 및 상피성 케라틴 생성 세포는 둘 다 사람의 피부 질환의 병리학에 포함되었다. IL-31 mRNA 및 단백질 발현은 사람에서 피부-귀소성 CLA+T 세포 집단에 제한된다. 예컨대 2006년 2월 14일에 출원된 미국 특허 출원 번호 11/353,427호 (미국 특허 공보 2006-0188499) 및 2006년 2월 14일에 출원된 미국 특허 출원 번호 11/353,454 (미국 특허 공보 2006-0188500) 참조. IL-31에 대한 길항체는 항체 또는 수용체 길항체를 포함하여 그 자체로서, CLA+T 세포의 발현을 나타내는 피부 및 상피성 질병을 치료하는 데 유용할 것이다. 그런 질병은 예를 들면 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 약물-유도된 알레르기 반응, 피부-향성 바이러스 및 바이러스 관련 소양증, 백반증, 피부의 T 세포 림프종, 원형 탈모증, 딸기코, 여드름, 결절성 양진, 및 수포성 유천포창을 포함한다. 케모카인 마커, 예컨대 TARC 및 MDC는 IL-31에 대한 단클론성 항체를 중화하는 효과를 측정하는 데 유용하다. 본원에서 설명되는 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 사용한 치료의 억제 효과는 TARC 및 MDC의 수준을 모니터함으로써 측정될 수 있다.
접촉성 피부염
알레르기성 접촉성 피부염은 피부와 접촉하게 되는 항원에 대한 T 세포 중재된 면역 반응으로 규정된다. CLA+T 세포 집단은 알레르기 유발 항원 의존성 T 세포 반응이 대부분 세포의 CLA+ 집단에 국한되기 때문에 피부염의 개시에 포함되는 것으로 간주된다 (Santamaria-Babi, L. F., et al., J Exp Med:181, 1935, (1995)). 최근의 데이터는 CD8+ T 세포가 아닌 오직 메모리 (CD45RO+)CD4+CLA+ 만이 공통적인 접촉 과민성 알레르기 유발 항원인 니켈에 대한 반응으로, 타입-1 (IFN-) 및 타입-2 (IL-5) 사이토킨 둘 다를 증식하고 생성하는 것을 나타냈다. 나아가 CD4, CD45RO (메모리) 또는 CD69와 조합하여 CLA를 발현하는 세포는 니켈-특이적 자극 후에 증가되고, 케모카인 수용체로 CCR6이 아닌 CXCR3, CCR4, CCR10을 발현한다 (Moed H., et al., Br J Dermatol:51, 32, (2004)).
동물 모델에서, 알레르기성 접촉성 피부염은 T-세포 의존성이고, 알레르기-반응성 T 세포는 알레르기 유발 항원 적용 부위로 이동하는 것으로 증명되었다. 일반적으로 Engeman T.M., et al., J Immunol: 164, 5207, (2000); Ferguson T.A. & Kupper T.S. J Immunol: 150, 1172, (1993); and Gorbachev A.V. & Fairchild R.L. Crit Rev Immunol: 21, 451(2001) 참조. CLA+T 세포가 IL-31을 생성하고, 피부 케라틴 생성세포의 IL-31 자극이 TARC 및 MDC와 같은 전-염증성 케모카인을 유도할 수 있기 때문에, IL-31은 접촉성 과민성의 마우스 모델에서 중화하는 IL-31 항체를 사용함으로써, 접촉성 피부염의 병리학에 포함될 것이다.
그러므로 본원에 설명된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기를 억제, 감소, 중화, 방지 또는 차단함으로써 접촉성 과민성의 임상적 결과를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
아토피성 피부염
아토피성 피부염 (AD)은 지난 수십 년에 걸쳐 발생률이 극적으로 증가하는 만성적으로 재발하는 염증성 피부 질병이다. 임상적으로 AD는 만성 재발 과정을 보이는 표피가 자주 벗겨지는 플라크나 뾰루지가 있고, 매우 가려운 것을 특징으로 한다. AD의 진단은 대부분 주요 및 소수의 임상적 발견을 토대로 한다. (Hanifin J.M., Arch Dermatol: 135, 1551 (1999)). 조직병리학은 해면화, 급성 병변에서 과도하고 중심적인 부전각화증을 나타내는 한편, 과도하고 현저한 상피 과형성 및 부전각화증, 가시세포층/과과립증 및 림프구 및 풍부한 비만 세포가 있는 피부의 혈관 주변 침윤은 크롬산 병변의 특징이다.
T 세포는 조직에서 국소적인 면역 반응을 개시하는 데 중심 역할을 하고, 증거는 피부-침윤성 T 세포가 특히 피부의 조절되지 않은 면역 반응의 개시 및 유지에 핵심 역할을 할 수 있다는 것을 시사한다. 피부의 염증 부위에서 침윤성 T 세포의 대략 90%가 내피 상의 유도성 점착 분자인 E-셀렉틴에 결합하는 피부 림프구-관련 Ag (CLA+)을 발현한다 (Santamaria-Babi L.F., et al., Eur J Dermatol: 14, 13, (2004)). 대조 개체와 비교하여 AD 환자 중에서 순환성 CLA+ T 세포의 상당한 증가는 보고된 바 있지만 (Teraki Y., et al., Br J Dermatol: 143, 373 (2000), 다른 것들은 AD 환자로부터의 메모리 CLA+ T 세포가 CLA- 집단에 비교하여 우선적으로 알레르기 유발 인자 추출물에 반응한다는 것을 증명하였다 (Santamaria-Babi, L. F., et al., J Exp Med: 181, 1935, (1995)). 사람에서는, 피부의 아토피성 장애의 발병은 IL-5 및 IL-13, 9, 10과 같이 증가된 수준의 Th-2-유형 사이토킨을 발현하는 CLA+ T 세포에서의 증가와 관련되었다 (Akdis M., et al., Eur J Immunol: 30, 3533 (2000); 및 Hamid Q., et al., J Allergy Clin Immunol: 98, 225 (1996)).
NC/Nga 마우스는 생후 6 내지 8주 쯤에 비-특이적인 병원균-유리 (비-SPF) 조건에서 수용되었을 때, 많은 측면에서 임상적 과정 및 신호를 포함하여 조직병리학 및 면역병리학과 사람 AD와 아주 유사한 AD-유사 병변을 자동적으로 전개한다. 대조적으로 NC/Nga마우스는 피부 병변을 전개하지 않는 SPF 조건하에서 유지되었다. 그러나 자발적인 피부 병변의 개시와 긁기 행동은 SPF 시설에서 미정제 집먼지 진드기 항원으로 주마다 피부내 주사에 의해 수용된 NC/Nga 마우스들에서 동시에 발생하였다 (Matsuoka H., et al., Allergy: 58, 139 (2003)). 그러므로 NC/Nga에서 AD의 발생은 AD의 신규한 치료법의 평가를 위한 유용한 모델이다.
자발적인 AD의 NC/Nga 모델 외에, OVA를 사용한 마우스의 피내 단자 감작은 또한 민감화된 마우스의 피부에서 단핵 침윤물을 사용한 항원-의존성 상피 및 피부의 비후 (thickening)를 유도하기 위한 모델로서 사용될 수 있다. 이것은 보통 총 및 특이적 IgE의 상승된 혈청 수준과 일치하지만, 이 모델에서는 피부 장벽 파괴나 소양증이 정상적으로 일어나지 않는다 (Spergel J. M., et al., J Clin Invest, 101:1614, (1998)). 이 프로토콜은 OVA로 DO11.10 OVA TCR 유전자도입 마우스를 감작시킴으로써 피부 장벽 조절이상 및 소양증을 유도하기 위해 변형될 수 있다. 항원을 감작하는 것을 인식할 수 있는 항원-특이적 T 세포의 수를 증가시키는 것은 가시적인 긁기 행동 및 피부의 태선화/스케일링을 유도하기 위한 피부의 염증 수준을 증가시킬 수 있다.
NC/Nga 자발적 AD 모델 및 OVA 피내 단자 DO11.10 모델은 둘 다 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 IL-31의 효과를 억제하거나 감소시키거나 또는 중화시키는 능력을 평가하기 위해 사용된다. 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 투여는 그것의 발생이 긁기에 좌우되는 소양성 질병, 예를 들면 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 아토피성 피부염, 결절성 양진, 및 습진을 치료하는 데 효과적일 수 있는 긁기의 감소를 유발할 수 있다.
본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 억제 효과를 측정하기 위한 추가의 모델은 문헌에 설명된다 (Umeuchi, H. et al., European Journal of Pharmacology, 518:133-139, 2005; and by Yoo, J. et al., J. Experimental Medicine, 202:541-549, 2005).
그러므로 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기를 억제, 감소, 방지 또는 차단함으로써 아토피성 피부염, 결절성 양진, 및 습진을 포함한 피부염 및 소양성 질병의 임상적 결과를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
인간화된 항-IL-31 항체 및 길항체의 가려움을 억제, 감소, 또는 중화하는 능력을 측정하는 방법은 다음의 분석 및 모델을 포함한다:
I) IL-31 처리된 마우스의 캡사이신 치료
생후 10주된 BALB/c 동물 (CRL)을 마취시키고 장기간 지속되는 진통제, 부프라노르핀 염산염을 0.1mg/kg으로 피하 주사한 후, 식염수 중의 10% 에탄올 + 10% 트윈-80중의 4mg/ml 캡사이신 용액 0.25ml을 목덜미에 피하 주사한다. 동물을 마취상태로 최소한 30분 동안 유지시킨 후 신경독소 처리를 한다. 48시간 후에 14일 삼투 펌프를 피하 이식하여 20㎍일의 IL-31을 14일 동안 연속적으로 전달한다. 마우스를 6일 동안 매일, 탈모증 및 소양증에 대해 다음의 기준을 사용하여 모니터하였다: 0 = 긁기 없음, 동물은 정상으로 나타난다, 1 = 작은 면적에 털이 성김, 긁기가 주지된다, 2 = 약간의 탈모 (작은 부분), 긁기, 3 = 중간 정도의 탈모, 긁기, 4 = 심각한 탈모, 과도한 긁기.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화, 억제 또는 감소는 가려움의 빈도와 세기를 감소시킬 수 있고, 따라서 가려움을 포함하는 피부 질환에 걸린 환자에게서 피부염을 감소시킬 수 있다.
II) Tac1 유전자 발현
Tac1 유전자가 동종접합적으로 결핍된 마우스는 검출가능한 물질 P 또는 뉴로키닌을 발현하지 않는다. 이들 마우스는 극심한 자극에 대하여 아픈 자극에 반응하는 통증 반응을 중간 정도로 상당히 감소시켰고, 따라서 통증/가려움 프로세싱 및 염증성 질병 상태에 대한 타키키닌 펩티드의 기여를 연구하기 위한 유용한 도구이다. 생후 12주 된 Tac1 녹아웃 마우스에 1㎍/일의 IL-31 단백질을 전달하는 14-일 삼투 펌프를 이식하고, 다음의 기준을 사용하여 탈모증 및 소양증에 대해 매일 관찰하였다: 0 = 긁기 없음, 동물은 정상으로 나타난다, 1 = 작은 면적에 털이 성김, 긁기가 주지된다, 2 = 약간의 탈모 (작은 부분), 긁기, 3 = 중간 정도의 탈모, 긁기, 4 = 심각한 탈모, 과도한 긁기.
이 연구의 결과, Tac1 결핍 마우스는 야생형 대조 마우스와 비교하여 IL-31 유도된 긁기/탈모에 덜 민감한 것으로 나타났다. 야생형 마우스가 100% (10/10) IL-31로 처리하고 6일째에 긁기와 탈모를 전개한 반면, Tac1 결핍 마우스는 단지 33.3% (2/6)만이 동일한 시점에 긁기와 탈모의 신호를 나타냈다. 그러므로 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화, 억제 또는 감소는 피부염의 맥락에서 긁기의 빈도와 세기를 감소시킬 수 있다.
III) IL-31 중화 항체의 투여
생후 대략 8주 내지 12주의 정상적인 암컷 BALB/c 마우스 (CRL)에 1㎍/일의 mIL-31을 전달하는 14-일 삼투 펌프 (Alzet, #2002)를 피하 이식하였다. 마우스 군에 IL-31을 전달하기 1주일 전부터 시작하여, 일주일에 2회 쥐 항-마우스 IL-31 단클론성 항체를 10mg/kg (200㎍/마우스)으로 복강내 (i.p.) 주사한다. 대조 마우스 군에는 동일한 투약 스케줄로 비히클 (PBS/0.1% BSA)을 복강내 주사한다. 마우스들을 다음의 기준을 사용하여 탈모증 및 소양증에 대해 매일 기록한다: 0 = 긁기 없음, 동물은 정상으로 나타난다, 1 = 작은 면적에 털이 성김, 긁기가 주지된다, 2 = 약간의 탈모 (작은 부분), 긁기, 3 = 중간 정도의 탈모, 긁기, 4 = 심각한 탈모, 과도한 긁기.
그러므로 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화, 감소 또는 억제는 IL-31에 의해 유도된 긁기/탈모 반응의 개시를 지연시킬 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 효과는 긁기, 가려움, 피부염의 억제, 케라틴 생성세포에서 IL-31RA 발현의 감소, 및/또는 탈모증 및 소양증에 대한 기록의 감소에 의해 측정된다.
약물-유도된 지연형 피부 알레르기 반응
약물-유도된 지연형 피부 알레르기 반응은 매우 이종성이고 구별되는 많은 병리생리학적 사건들을 반영할 수 있다 (Brockow K., et al., Allergy: 57, 45 (2002)). 이들 반응에 포함된 면역학적 메커니즘은 항체 또는 중재된 세포 중 하나로서 나타났다. 즉각적인 약물 알레르기에서 IgE-중재된 항체 반응은 20분 후에 포지티브 피부 단자 시험 및/또는 피내 시험에 의해 증명될 수 있는 반면, 약물에 대한 비-즉시 반응은 마지막 약물 섭취 후 1시간 이상 일어날 수 있고, 때로 T-세포 중재된다. 비-즉시 T-세포 중재된 지연형 반응은 예를 들어 페니실린에 대한 해로운 약물 반응을 보이는 환자에게서 일어날 수 있다. 페니실린에 대한 증식성 T 세포 반응은 페니실린 알레르기 환자로부터의 메모리 (CD45RO+) CLA+ 하위집단에 제한되는 것으로 나타난 반면, CD45RO+ CLA- 하위세트는 증식성 반응을 나타내지 않는다 (Blanca M., Leyva L., et al., Blood Cells Mol Dis:31, 75 (2003)). 지연형 과민증 (DTH) 반응은 마우스에서 인공적으로 재생될 수 있고, 그것은 DTH 반응의 개시 및 영구화에 포함될 수 있는 인자들의 평가를 가능하게 한다. 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 지연형 과민증 반응의 제한, 감소, 억제에 효과적일 수 있다.
독성 상피 괴사용해 (TEN)는 매우 드물지만 광범위한 수포를 수반하는 상피의 광범위한 아폽토시스를 특징으로 하는 매우 심각한 약물 반응이다. 연구 결과 수포를 침윤하는 림프구는 CLA+ T 세포이고, 상피의 케라틴 생성세포를 향해 세포독성을 나타낼 수 있다 (Leyva L., et al., J Allergy Clin Immunol: 105, 157 (2000); and Nassif A., Bensussan A., et al., J Allergy Clin Immunol: 114, 1209 2004). OVA가 마우스의 상피 및 머리(털) 여포성 케라틴 생성세포의 케라틴-5 (K5) 프로모터의 제어하에 발현되는 유전자도입 마우스 시스템은 TEN에 대한 동물 모델을 수립하기 위해 생성되었다. OVA 특이적 CD8+ T 세포는 K5-OVA 마우스에 입양 전이될 때 피부-배수 림프절에서 활성화 및 증식을 진행하고, K5-OVA 마우스의 피부를 표적으로 하여 TEN을 연상시키는 피부 병변의 발생을 초래한다 (Azukizawa H., et al., Eur J Immunol: 33, 1879 (2003)).
그러므로 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기의 억제, 감소, 방지 또는 차단에 의한 TEN의 임상 결과를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
수포성 유사 천포창
수포성 유사 천포창은 호중구 및 호산성 세포가 피부를 침윤하는 표피 아래의 수포로서 나타나는 표피 아래의 질환이다. 이것의 진단은 표피와 피부-표피 연결부의 특이적 점착 단백질에 대한 항원-특이적 항체의 존재를 특징으로 한다 ( Jordon R.E., et al., JAMA: 200, 751 (1967)). 수포성 유사 천포창의 발병에서 T 세포의 역할을 PBL및 피부 수포 T 세포의 분석에 의해 분석하는 연구는 IL-4 및 IL-13과 같은 Th2-사이토킨의 발현 수준이 증가된 CLA+ T 세포의 우위를 나타냈다 (Teraki Y., et al., J Invest Dermatol: 117, 1097 (2001)). 전신적으로 코르티코스테로이드를 사용한 치료를 따르는 수포성 유사 천포창 환자에서, CLA-가 아닌 CLA+, 인터류킨-13-생성 세포의 빈도는 상당히 감소된다. 코르티코스테로이드 치료후의 CLA+ 세포의 감소는 임상적인 개선과 관련된다 (Teraki, 상기 동일).
그러므로 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기의 억제, 감소, 방지 또는 차단에 의해 수포성 유사 천포창의 임상 결과를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
원형 탈모
원형 탈모 (AA)는 여포성 활성이 림프구 침윤물의 계속된 활성으로 인해 정지되는 모낭의 조직-제한성 자가면역 질병으로서 간주된다. AA는 신체의 어느 곳에서든지 털이 완전히 빠지는 부분을 유발하지만, 털이 없는 병변이라 할지라도 실제 모낭의 손실은 일어나지 않는다. 비록 염증의 임상적 신호는 없지만, 활동성 질병 부위로부터의 피부 생검은 CD8+ 모공내 침윤물과 함께 주로 CD4+ 세포의 모공주변 림프구 침윤을 나타낸다 (Kalish R.S. & Gilhar A. J Investig Dermatol Symp Proc: 8, 164 (2003)).
연구 결과 두피 침윤성 CD4+ 또는 CD8+ 림프구는 CLA를 발현하고, AA에 걸린 개체의 말초혈에서 CLA+ CD4+ 또는 CD8+ 림프구는 정상 대조표준의 그것보다 상당히 더 높다. 나아가 심각하거나 점진적인 AA에 걸린 환자는 질병으로부터 회복되는 환자에 비교하여 훨씬 더 높은 CLA-포지티비티를 나타내고, 퍼센트 CLA+ 세포의 감소는 양호한 임상적 과정과 아주 유사하다 (Yano S., et al., Acta Derm Venereol: 82, 82 (2002)). 그러므로 이들 연구는 CLA+ 림프구가 AA에서 중요한 역할을 할 수 있을 것을 시사한다. 이종이식 모델은 활성화된 T 세포가 AA의 발병에 역할을 담당하는 것 같다는 것을 증명하였다. 누드 마우스에 이식된 AA 환자로부터의 병변성 두피는 이식편으로부터의 침윤성 림프구의 손실과 일치하게 다시 털이 자라며, 활성화된 병변성 T 세포의 SCID 마우스로의 전달은 SCID 마우스에서 사람 두피 외식편에 털 손실을 전달할 수 있다 (Kalish R.S. & Gilhar A. J Investig Dermatol Symp Proc: 8, 164 (2003)).
다양한 면역조절 치료법은 이 장애에 대한 유용한 치료의 일부이지만, 이들 치료중 어느 것도 그것의 효능과 일치하는 것은 없었다 (Tang L., et al., J Invest Dermatol: 120, 400 (2003); Tang L., et al., (2004); and Tang L., et al., J Am Acad Dermatol: 49, 1013 (2003)). 그럼에도 불구하고, 그것들을 타당한 동물 모델에 사용하는 것은 치료 효과의 분자 메커니즘을 분석하는 도구를 제공한다 (Shapiro J., et al., J Investig Dermatol Symp Proc: 4, 239 (1999); Tang L., et al., Old wine in new bottles: reviving old therapies for alopecia areata using rodent models (2003); and Verma D. D., et al., Eur J Dermatol:14, 332 (2004)).
그러므로 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기의 억제, 감소, 방지 또는 차단에 의한 원형 탈모의 임상 결과를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
딸기코/보통 여드름
여드름 장치의 질환인 보통 여드름은 청소년기의 가장 흔한 피부 문제이다. 모낭 케라틴 생성의 비정상은 여드름 병변을 생성하는 것으로 여겨진다. 딸기코는 보통 여드름으로부터 검은색 피지의 부재 (white head)가 아니라 적색 구진, 농포, 낭종 및 광범위한 모세혈관 확장증의 존재에 의해 분화된다. 피지선으로부터의 증가된 피지 분비는 보통 여드름의 병리생리학의 주요 인자이다. 다른 피지선 기능은 또한 이를테면 지방 분비성 전염증성 지질; 국소적으로 생성된 상이한 사이토킨; 피지세포에 의해 생성되는 선주위 펩티드 및 뉴로펩티드, 예컨대 코르티코트로핀-방출 호르몬; 및 여드름 환자의 건강하게 보이는 선에 근접한 신경 말단부에서 발현되는 물질 P를 포함한 여드름의 발달과 관련된다 (Zouboulis C.C. Clin Dermatol: 22, 360 (2004)).
보통 여드름 및 딸기코의 병리생리학이 알려져 있지 않지만, 임상적 관찰과 조직병리학적 연구 결과 모피지낭의 염증은 딸기코와 보통 여드름의 발병에 중추적일 수 있는 것으로 시사된다. 딸기코 병변에 침윤하는 T 세포 하위 세트의 분석에 대한 초기 연구는 대부분의 T 세포가 CD4를 발현하였음을 나타냈다 (Rufli T. & Buchner S.A. Dermatologica: 169, 1 (1984)).
CD4+ T 세포는 IL-31을 생성하고, IL-31 발현에 대한 피부의 IHC 분석은 IL-31이 피지선 및 땀샘에서 발현되는 것을 시사한다. 상피의 케라틴 생성 세포의 IL-31 자극은 세포 침윤을 초래하는 것 같은 케모카인의 발현을 유도하고, 그것은 IL-31이 피부의 전염증성 반응에 기여할 수 있음을 시사한다 (Dillon S.R., et al, Nat Immunol: 5, 752 (2004)). IL-31은 그러므로 딸기코와 보통 여드름의 병리생리학에 기여한다.
따라서 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기의 억제, 감소, 방지 또는 차단에 의해 보통 여드름의 임상 결과를 개선하는 데 사용될 수 있다.
결절성 양진
결절성 양진은 치료하기 어려운 난치성 가려움증에 의해 유발된 태선화된 또는 벗겨진 소절(nodule)의 발진이다. 만성 문지름은 태선화, 및 선상 표피박탈을 초래하는 한편, 가렵고 염증이 생긴 피부를 쑤시고 후비는 개체는 결절성 양진으로 알려진 현저하게 두꺼워진 구진을 생성하는 경향이 있다. 비록 결절성 양진이 아토피성 피부염에 특이적이진 않지만, 이들 양진을 나타내는 많은 환자들은 또한 아토피성 반응을 보이고, 그것은 알레르기성 비염, 천식, 또는 식품 알레르기로 나타난다. T 세포는 양진 병변에 대부분의 침윤성 세포를 나타내고, 이들 병변은 때로 아토피 환자에서 대부분의 양진성 피부 병변을 나타낸다.
소감각 피부 신경에서 물질 P와 같은 신경펩티드의 고갈에 의한 양진 및 통증의 지각을 간섭하는 항-양진성 알카로이드인 캡사이신으로 결절성 양진을 국소적으로 치료하는 것은 피부 병변을 정화시키는 것을 초래하는 효과적이고 안전한 처방인 것으로 증명되었다 (Stander S., et al., J Am Acad Dermatol: 44, 471 (2001)). 캡사이신 치료를 사용하는 NC/Nga 마우스에서의 가려움 반응의 연구 결과는 피부염 병변의 자발적인 발생이 거의 완전하게 방지된 것으로 나타났다. 나아가 혈청 IgE 수준의 상승은 상당히 억제되었고, 캡사이신 처리된 마우스의 병변성 피부에서의 침윤성 호산성 세포 및 비만 세포 수는 감소되었다 (Mihara K., et al., Br J Dermatol: 151, 335 (2004)). 이 군으로부터의 관찰은 긁기 행동이 다양한 면역학적 반응을 증강시킴으로써 피부염의 발달에 기여할 수 있을 것임을 시사하는 것이고, 그로써 가려움 감각 및/또는 가려움-관련된 긁기 행동의 방지는 AD에 대한 효과적인 치료가 될 것이라는 것을 시사한다 (Mihara K., et al., Br J Dermatol: 151, 335 (2004)). 그러므로 본원에 기술된 인간화된 항-IL-31 항체는 그것들이 NC/Nga 마우스에서 긁기의 양을 감소시키는 것으로 본원에서 나타난 것과 같이, AD, 결절성 양진, 및 다른 소양성 질병의 효과를 최소화하는 데 유용할 것이다.
IL-31의 만성 전달은 마우스에서 소양증 및 탈모증과, 이어서 피부염과 아주 닮은 피부 병변의 발생을 유도하는 것은 IL-31이 가려움을 유도할 수 있다는 것을 시사한다 (Dillon S.R., et al., Nat Immunol: 5, 752 (2004)). 가려움 반응의 유도에서 IL-31의 포함 여부는 예를 들면 두 가지 방법, 즉 (i) IL-31-처리된 마우스의 캡사이신 반응; 및 (ii) Tac1 녹아웃 마우스의 IL-31 처리에 의해 측정될 수 있고, 그것은 신경펩티드의 발현의 결핍으로 인해 상당히 감소된 아픈 자극에 대한 통증 반응을 나타낸다. 또한 IL-31 처리된 마우스에서 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 사용한 IL-31의 중화가 소양증 및 탈모증을 방지할 수 있는 지의 여부가 이들 모델에서 시험되었다.
그러므로 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체에 의한 IL-31의 중화는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기의 억제, 감소, 방지 또는 차단에 의해 결절성 양진의 임상 결과를 개선하는 데 사용될 수 있다.
피부- 향성 바이러스 및 바이러스 관련된 소양증
말초혈의 단순 포진 바이러스 (HSV)-특이적 CD8+ T 세포 및 포진 병변으로부터 회수된 HSV-특이적 CD8+ T 세포는 고수준의 CLA를 발현하는데, 이때 비-피부-향성 포진 바이러스-특이적 CD8+ T 세포는 CLA 발현이 부족하다 (Koelle D.M., et al., J Clin Invest:110, 537 (2002)). HSV-2 반응성 CD4+ T 림프구는 또한 CLA를 발현하지만, CD8+ T 림프구에 대해 이전에 관찰된 것보다는 낮은 수준이다 (Gonzalez J. C, et al., J Infect Dis:191, 243 (2005)). 소양증은 또한 포진 바이러스 감염과 관련되지만 (Hung K.Y., et al., Blood Purif .:16, 147 (1998)), HIV와 같은 다른 바이러스 질병은 또한 소양성 피부 병변과 관련되었다. 심각하고 난치성인 소양증은 때로 홍반성 구진 피부 병변 및 과다 호산구증과 관련되며, 일부 비아토피성 HIV-감염 환자 36에게서 관찰되는 질환이다 (Singh F. & Rudikoff D, Am J Clin Dermatol;4, 177 (2003); and Milazzo F., Piconi S., et al., Allergy: 54, 266 (1999)).
피부-향성 바이러스와 소양증 및 CLA+ T 세포와의 관련은 IL-31 생성 T 세포가 바이러스 감염의 병리생리학에 포함될 수 있음을 시사한다.
그러므로 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 질병과 관련된 염증 및/또는 긁기의 억제, 감소, 방지 또는 차단에 의해 피부-향성 바이러스와 관련된 소양증의 임상 결과를 개선하는 데 사용될 수 있다.
더욱이 염증은 침윤성 병원균의 공격을 막기 위해 일어나는 유기체의 보호성 반응이다. 염증은 많은 세포성 및 체액성 매개 물질을 포함하는 증폭 사건이다. 한편으로 염증성 반응의 억제는 숙주 면역체계를 손상상태로 남기지만, 만약 손을 쓰지 않고 놓아둔다면, 염증은 만성 염증성 질병 (예컨대 류머티스성 관절염, 다발성 경색, 염증성 장 질병 등), 패혈성 쇼크 및 다발성 장기 부전을 포함한 심각한 합병증을 유발할 수 있다. 중요한 것은 이들 다양한 질병 상태가 공통적인 염증성 매개 물질을 공유한다는 것이다. 염증을 특징으로 하는 포괄적인 질병은 사람 유병률 및 사망률에 큰 영향을 나타낸다. 그러므로 항-염증성 항체 및 결합 폴리펩티드, 예컨대 본원에 기술된 항-IL-31 항체 및 결합 폴리펩티드가, 천식 및 자가면역에 대한 알레르기 및 패혈성 쇼크로부터 대다수의 사람 및 동물 질병에 대해 결정적인 치료 가능성을 가질 수 있다는 것이 명백하다. 본원에 기술된 항-염증성 항 IL-31 항체 및 결합 폴리펩티드의 사용은 그 자체로서, 특히 관절염, 내독소증, 염증성 장 질병, 건성, 관련 질병 등과 같은 질병에서 본원에 기술된 IL-31 길항체로서 치료적으로 사용될 수 있다.
1. 관절염
골관절염, 류머티스성 관절염, 손상 결과로서 관절 접합부, 등을 포함하여 관절염은 본 발명의 항-IL-31 항체 및 결합 폴리펩티드와 같은 항-염증성 항체 및 결합 폴리펩티드의 치료적 사용으로부터 유익할 수 있는 통상적인 염증성 질환이다. 예를 들어 류머티스성 관절염 (RA)은 전신에 영향을 미치는 전신성 질병이고, 가장 흔한 관절염 형태 중 하나이다. 그것은 통증, 뻣뻣함, 온기, 적열 상태 및 부기를 유발하는, 접합부분을 둘러싼 막의 염증을 특징으로 한다. 염증 세포는 뼈 및 연골을 소화할 수 있는 효소를 방출한다. 류머티스성 관절염의 결과로서, 염증이 생긴 관절 막, 활막은 뼈 및 연골을 침투하여 손상시킬 수 있어서 다른 생리적 효과 중에서도 관절 퇴화 및 심각한 통증을 유도할 수 있다. 포함된 관절은 그것의 모양과 정렬된 상태를 잃어버리게 되고, 결과적으로 통증과 운동력 상실을 초래한다.
류머티스성 관절염 (RA)은 특히 심각한 불안정성 및 증가된 사망률을 유발하는 염증 및 후속적인 조직 손상을 특징으로 하는 면역-중재된 질병이다. 다양한 사이토킨이 류머티스성 관절에서 국소적으로 생성된다. 많은 연구 결과 IL-1 및 TNF-알파, 이 두 가지의 원형적인 전염증성 사이토킨이 활막 염증 및 점진적인 관절 파괴에 포함된 메커니즘에서 중요한 역할을 한다는 것이 증명되었다. 실제로, RA 환자에서 TNF-알파 및 IL-1 억제제의 투여는 임상적이고 생물학적인 염증의 극적인 개선 및 뼈 침식과 연골 파괴의 방사선학적 신호의 감소를 유발하였다. 그러나 이런 고무적인 결과에도 불구하고, 상당한 백분율의 환자가 이들 제제에 반응하지 않았으며, 그것은 다른 매개 물질이 또한 관절염의 병리 생리학에 포함된다는 것을 시사한다 (Gabay, Expert . Opin . Biol . Ther . 2(2):135-149, 2002). 그런 매개 물질 중 하나는 IL-31일 수 있으며, IL-31에 결합하거나 억제하는 분자 자체, 예컨대 항 IL-31 항체 또는 결합 파트너는 류머티스성 관절염 및 다름 관절 질병에서 염증을 감소시키는 귀중한 치료제로서 작용할 수 있다.
당해 기술분야에 공지되어 있는 류머티스성 관절염에 대한 동물 모델은 여러 가지가 있다. 예를 들어 콜라겐-유도된 관절염 (CIA) 모델에서 마우스는 사람 류머티스성 관절염을 매우 닮은 만성 염증성 관절염을 발달시킨다. CIA는 RA와 유사한 면역학적 및 병리학적 특징을 공유하기 때문에, 이것은 잠재적인 사람 항-염증성 화합물을 선별하기 위한 이상적인 모델이 되게 한다. CIA 모델은 면역 반응과 염증성 반응이 일어나도록 하기 위해 그 두 가지에 의존하는 마우스에서 잘 알려진 모델이다. 면역 반응은 항원으로서 제공된 콜라겐에 반응하여 B-세포와 CD4+ T-세포의 상호작용을 포함하고, 항-콜라겐 항체의 생성을 유발한다. 염증 상태는 마우스의 본래의 콜라겐에 대해 교차 반응하고 보체 케스케이드를 활성화시키는 일부 이들 항체의 결과로서 염증의 매개물질로부터 조직 반응의 결과이다. CIA 모델을 사용하는 장점은 발병의 기본적인 메커니즘이 알려져 있다는 것이다. 타입 II 콜라겐상의 관련된 T-세포 및 B-세포 에피토프는 확인되었고, 면역-중재된 관절염에 관련된 다양한 면역학적 (예컨대 지연형 과민증 및 항-콜라겐 항체) 및 염증성 (예컨대 사이토킨, 케모카인, 및 매트릭스-분해 효소) 매개변수가 측정되었으며, 그로써 CIA 모델에서 시험 화합물 효능을 평가하기 위해 사용될 수 있다 (Wooley, Curr . Opin. Rheum . 3:407-20, 1999; Williams et al., Immunol . 89:9784-788, 1992; Myers et al., Life Sci . 61:1861-78, 1997; and Wang et al., Immunol . 92:8955-959, 1995).
면역 및 염증성 반응을 조절하는 분자로서 IL-31은 류머티스성 관절염의 발병에 관련된 것으로 보이는 SAA의 생성을 유도할 수 있다. 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 시험관 내 및 생체 내 SAA 활성을 감소시킬 수 있고, IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 전신성 또는 국소적 투여는 RA에서 염증성 반응을 잠재적으로 억제할 수 있다.
2. 내독소증
내독소증은 박테리아 및 다른 감염성 질병 병원체, 패혈증, 독성 쇼크 증후군과 같은 감염성 병원체로부터, 또는 기회적으로 감염된 면역손상된 환자 등에게서 통상적으로 유발되는 심각한 질환이다. 치료적으로 유용한 항-염증성 항체 및 결합 폴리펩티드, 예컨대 본 발명의 항-IL-31 항체 및 결합 폴리펩티드는 사람 및 동물에서 내독소증을 방지하고 치료하는 것을 도울 수 있다. 다른 잠재적인 치료제로는 IL-31RA 폴리펩티드, 가용성 이종이량체 및 다량체 수용체 폴리펩티드, 또는 본 발명의 항 IL-31 항체 또는 결합 파트너 등을 포함하며, 내독소증에서 염증 및 병리학적 효과를 감소시키기 위한 귀중한 치료제로서 작용할 수 있다.
리포다당 (LPS) 유도된 내독소증은 감염성 질병에서 병리학적 효과를 생성하는 많은 전염증성 매개물질과 관련이 있으며, 설치류에서 LPS 유도된 내독소증은 광범위하게 사용되고 잠재적인 전염증성 또는 면역조절제의 약리학적 효과를 연구하기 위한 허용되는 모델이다. 그람-네거티브 박테리아에서 생성된 LPS는 패혈성 쇼크의 발병에서 주요 원인 병원균이다 (Glausner et al., Lancet 338:732, 1991). 쇼크-유사 상태는 실제로 동물에 LPS를 단독 주사함으로써 실험적으로 유도될 수 있다. LPS에 반응하는 세포에 의해 생성된 분자는 병원체를 직접 또는 간접적으로 표적화할 수 있다. 비록 이들 생물학적 반응이 침투하는 병원체에 대해 숙주를 보호한다 할지라도, 그것들은 또한 해를 유발할 수 있다. 그러므로 심각한 그람-네거티브 박테리아 감염의 결과로서 발생하는 선천적인 면역성의 거대한 자극은 사이토킨과 다른 분자의 과잉 생성과, 열, 저혈압, 확산된 혈관내 응고, 및 다발성 장기 부전을 특징으로 하는 치명적인 증후군, 패혈성 쇼크 증후군의 발생을 유도한다 (Dumitru et al., Cell 103:1071-1083, 2000).
LPS의 이들 독성 효과는 대부분 다중 염증성 매개 물질의 방출을 유도하는 대식세포 활성화와 관련된다. 이들 매개 물질 중에서도 TNF는 중화하는 항-TNF 항체의 투여에 의한 LPS 독성의 방지에 의해 나타나는 바와 같이, 결정적인 역할을 하는 것으로 보인다 (Beutler et al., Science 229:869, 1985). 1㎍의 대장균 LPS를 C57Bl/6 마우스에 주사하는 것은 주사 후 대략 2시간 후에 순환하는 IL-6, TNF-알파, IL-1, 및 급성 상 단백질 (예를 들어 SAA)의 상당한 증가를 초래할 것이라는 것이 잘 수립되어 있다. LPS의 독성은 사망률의 감소를 유발할 수 있는 이들 매개 물질에 대한 수동 면역으로서 이들 사이토킨에 의해 중재되는 것으로 보인다 (Beutler et al., Science 229:869, 1985). 패혈성 쇼크를 방지 및/또는 치료하기 위한 잠재적인 면역 간섭 전략은 항-TNF mAb, IL-1 수용체 길항체, LIF, IL-10, 및 G-CSF를 포함한다. LPS가 아마도 내독소증의 병인에 기여하는 전-염증성 인자들의 생성을 유도하기 때문에, IL-31 폴리펩티드의 길항작용에 의한 IL-31 활성, SAA 또는 다른 전-염증성 인자들의 중화는 내독소성 쇼크에서 알 수 있는 것과 같이 내독소증의 증상들을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 다른 잠재적인 치료제는 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 포함한다.
3. 염증성 장 질병, IBD
염증성 장 질병 (IBD)은 결장과 직장 중 하나 (궤양성 대장염) 또는 둘 다, 소장 및 대장 (크론씨 병)에 영향을 미칠 수 있다. 이들 질병의 발병은 명확하지 않지만, 그것들은 영향을 받은 조직의 만성 염증을 포함한다. 잠재적인 치료제는 IL-31RA 폴리펩티드, 가용성 이종이량체 및 다량체 수용체 폴리펩티드, 또는 항-IL-31 항체 또는 본 발명의 결합 파트너 등을 포함하며, IBD 및 관련 질병에서 염증 및 병리학적 효과를 감소시키기 위한 귀중한 치료제로서 작용할 수 있다.
크론씨 병에서 만성 염증 및 궤양은 보통 급성 맹장염과 유사할 수 있는 소장 폐색 또는 복부 통증으로 시작되며, 다른 표시들은 그것의 합병증과 관련될 수 있다. 질병의 과정은 만성적이며, 치료에도 불구하고 악화 및 차도가 있을 수 있다. 개시는 보통 초기 성인기에 시작되며 모든 경우의 절반 가량은 20대와 30대 사이에 시작되고, 90%는 10대와 40대 사이에 시작된다. 여성보다는 남성이 약간 더 많이 영향을 받는다.
현미경 검사는 총(gross) 외관을 반영한다. 염증 포함은 불연속적이다: 그것은 중심적이거나 군데 군데 있다. 림프구 및 혈장 세포가 모여있는 것은 주로 점막과 점막하층에서 발견되지만, 보통 모든 층에 영향을 미친다 (경벽성 염증). 크론씨병의 고전적인 현미경 관찰에 의한 특징은 림프구 커프에 의해 둘러싸인 과립구의 존재이다. 특발성 염증성 장 질병의 발생은 상당한 지리적 변화를 나타낸다. 이들 질병은 도시화 및 번영의 증가로 인해 남유럽 및 일본의 일부 지역에서 더 높은 발생률이 유도되긴 하지만, 남유럽, 아프리카, 남아프리카 및 아시아의 여러 나라들보다 북유럽 및 미국에서 훨씬 더 많이 발생한다 (General and Systematic Pathology, Churchill Livingstone, 3rd edition 2000, JCE Underwood, Ed.).
크론씨병에서, 임상적으로 두 가지의 주요 그룹이 있는데, 하나는 질병이 발병 후 3년 이내에 지속적으로 차도를 보이는 환자를 포함하고, 두 번째 그룹은 질병이 3년 이상 지속되는 환자를 포함한다.
병인학이 무엇이든 간에, 전-염증성 사이토킨, 특히 인터류킨 (IL) 1, 2, 6 및 8, 인터페론 (IFN)- 및 종양 괴사 인자 (TNF)의 생성이 증가된 크론씨 병에서 지속성 및 부적절한 T-세포 및 대식세포 활성화의 증거가 있다. 크론씨 병은 섬유증이 수반되는 지속적인 (만성) 염증을 특징으로 한다. 섬유아세포성 증식 및 콜라겐 침착의 과정은 특정 항-염증 작용, 즉 섬유아세포 보충, 매트릭스 합성 및 염증 세포의 하향 조절을 나타내는 성장 인자에 의해 중재될 수 있지만, 많은 다른 매개 물질들이 연관되었을 것 같다.
궤양성 대장염 (UC)은 대장, 통상적으로는 결장의 염증성 질병이며, 결장의 점막 또는 가장 중심부의 내벽에 염증 및 궤양이 있는 것을 특징으로 한다. 이 염증은 결장이 자주 비는 것을 유발하여 설사를 초래한다. 증상들은 대변의 완화 및 관련된 복부의 경련, 열 및 체중 손실을 포함한다. 비록 UC의 정확한 원인은 알려져 있지 않지만, 최근의 연구는 신체의 자연스러운 방어가 그 신체가 이물질로 생각하는 ("자가면역 반응") 신체내 단백질에 대항하여 작동하는 것을 시사한다. 아마도 그것들이 소화관에서 박테리아 단백질을 닮아있기 때문에, 이들 단백질은 결장의 내벽을 파괴하기 시작하는 염증성 과정을 부추기거나 자극할 수 있다. 결장의 내벽이 파괴됨에 따라 궤양은 방출되는 점액, 고름 및 혈액을 형성한다. 질병은 통상 직장 영역에서 시작하여 결국에는 대장 전체를 통해 확장될 수 있다. 반복되는 염증의 에피소드는 반흔 조직을 가지는 장 및 직장의 벽이 두꺼워지는 것을 유발한다. 결장 조직의 죽음 또는 패혈증은 심각한 질병과 함께 일어날 수 있다. 궤양성 대장염의 증상들은 심각성이 달라지며, 그것의 개시는 점진적이거나 급성일 수 있다. 공격은 호흡기 감염 또는 스트레스를 포함하여 많은 인자들에 의해 유발될 수 있다.
비록 현재에는 UC에 대한 치료책이 유효하지 않지만, 치료는 결장 내벽의 비정상적인 염증성 과정을 억제하는 것에 집중된다. 코르티코스테로이드 면역억제제 (예컨대 아자티오프린, 메르캅토퓨린, 및 메토트렉세이트) 및 아미노살리실산염을 포함한 치료는 질병을 치료하기 위해 유효하다. 그러나 코르티코스테로이드 및 아자티오퓨린과 같은 면역억제제의 장기간 사용은 뼈의 얇아짐, 백내장, 감염 및 간 및 골수 효과를 포함한 심각한 부작용을 유발할 수 있다. 현재 치료법이 성공적이지 못한 환자들에서는 수술이 선택될 수 있다. 수술은 전체 결장 및 직장의 제거를 포함한다.
부분적으로 만성 궤양성 대장염을 모방할 수 있는 여러 동물 모델이 있다. 가장 널리 사용되는 모델은 2,4,6-트리니트로벤술폰산/에탄올 (TNBS) 유도된 대장염 모델이고, 그것은 결장의 만성 염증 및 궤양을 포함한다. TNBS가 민감한 마우스의 결장에 직장내 점적을 경유하여 도입될 때, 그것은 결장 점막에서 T-세포 중재된 면역 반응을 유도하며, 이 경우 대장의 전체 벽을 통해 T-세포 및 대식세포의 조밀하게 침윤하는 것을 특징으로 하는 광범위한 점막 염증을 유발한다. 더욱이 이 조직병리학적 상황에는 점진적인 체중 손실 (소모성), 출혈성 설사, 직장 탈출, 및 대장 벽 비후의 임상적인 특징들이 수반된다 (Neurath et al. Intern . Rev . Immunol. 19:51-62, 2000).
다른 대장염 모델은 덱사트란 술페이트 나트륨 (DSS)을 사용하는데, 그것은 출혈성 설사, 체중 손실, 결장의 단축 및 호중구 침윤이 있는 점막 궤양으로 나타나는 급성 대장염을 유도한다. DSS-유도된 대장염은 조직학적으로 염증성 세포의 점막 고유층 안으로의 침윤을 특징으로 하며, 림프구성 과형성, 중심적인 크립트 (crypt) 손상, 및 상피 궤양이 포함된다. 이들 변화는 상피에 미치는 DSS의 독성 효과로 인해, 그리고 상피 고유층 세포의 식균 작용 및 TNF-알파 및 IFN-감마의 생성에 의해 발생되는 것으로 여겨진다. 그것의 보편적인 사용에도 불구하고, 사람 질병과의 관련성에 대한 DSS의 메커니즘에 관련된 여러 문제들은 해결되지 않은 채로 남아있다. DSS는 그것이 SCID 마우스와 같은 T 세포-결핍 동물에서 관찰되기 때문에 T 세포-의존성 모델로서 간주된다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 이들 TNBS 또는 DSS 모델에 투여하는 것은 증상을 개선하고 위장 질병의 과정을 변경하기 위해 IL-31 길항체의 사용을 평가하기 위해 사용될 수 있다. IL-31은 대장염의 염증성 반응에서 역할을 할 수 있고, 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 투여함으로써 IL-31 활성을 중화하는 것은 IBD에 대한 잠재적인 치료적 접근법이다.
4. 건선
건선은 7백만 명 이상의 미국인에게 영향을 미치는 만성 피부 질환이다. 건선은 새로운 피부 세포가 비정상적으로 성장하여 염증이 생기고, 부기가 있으며, 피부의 작은 부분들이 비늘로 덮인 것과 같고 오래된 피부가 충분히 빠르게 없어지지 않게 될 때 발생한다. 가장 보편적인 형태인 플라크 건선은 피부에 염증이 생긴 작은 부분들이 있고, 그 맨 위에는 은백색의 비늘이 있는 것 ("병변")을 특징으로 한다. 건선은 소수의 플라크에 제한되거나 또는 광범위한 영역의 피부로 조정하는 것을 포함하며, 가장 흔하게는 두피, 무릎, 팔꿈치 및 몸통에 나타난다. 비록 매우 가시적이긴 하지만, 건선은 전염성 질병은 아니다. 이 질병의 발병은 영향을 받은 조직의 만성 염증을 포함한다. 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 건선, 다른 염증성 피부 질병, 피부 및 점막 알레르기, 및 관련 질병에서 염증 및 병리학적 효과를 감소시키기 위한 귀중한 치료제로서 작용할 수 있다.
건선은 상당한 불편을 유발할 수 있는 피부의 T-세포 중재된 염증성 질환이다. 그것은 치유되지 않고 모든 세대의 사람들에게 영향을 주는 질병이다. 건선은 대략 2%의 유럽 및 북아메리카 집단에게 영향을 미친다. 비록 약한 건선을 가지는 개체가 자주 국소 제제로 그들의 질병을 조절할 수 있긴 하지만, 전 세계적으로 1백만 이상의 환자가 자외선 또는 전신성 면역억제 치료를 필요로 한다. 불행하게도 자외선 조사의 불편함 및 위험과 많은 치료제의 독성은 그것들의 장기 사용을 제한시킨다. 더욱이 환자는 보통 건선이 재발된다.
IL-31은 면역 시스템에서 역할을 하는 세포를 함유하고 중요한 면역학적 기능을 가진 것으로 알려진 조직으로부터 분리되었다. IL-31은 CD3+ 선택된, 활성화된 말초혈 세포에서 발현되고, IL-31 발현은 T 세포 활성화 후에 증가하는 것으로 나타났다. 더욱이 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 단핵 세포/대식세포, T-세포, B-세포, NK 세포 및/또는 단핵 세포/대식세포, T-세포, B-세포, NK 세포 또는 이들 세포의 전구세포의 분화된 상태에 영향을 미친다. 조혈 전구세포의 증식을 자극하고 성숙한 세포를 활성화하는 인자들이 일반적으로 알려져 있지만, 증식과 활성화는 또한 추가의 성장 인자들을 필요로 할 수 있다. 예를 들어 IL-7과 Steel 인자 (c-키트 리간드)는 NK 전구세포의 콜로니 형성에 대해 요구되었음을 알 수 있다. IL-7 및 Steel 인자와 조합된 IL-15+IL-2가 더 효과적이다 (Mrozek et al., Blood 87:2632-2640, 1996). 그러나 미확인 사이토킨은 NK 세포 및/또는 NK 전구 세포의 특이적 하위세트의 증식에 필요할 수 있다 (Robertson et. al., Blood 76:2451-2438, 1990). 유사하게 IL-31은 단독으로 또는 단핵세포/대식세포, T-세포, B-세포 또는 NK 세포의 성장, 증식 확대 및 분화의 변형을 증진시키기 위하여 다른 사이토킨과 협력하여 또는 동반하여 작용할 수 있다.
본 발명은 아토피성 피부염, 소양증, 췌장염, 유형 I 당뇨병 (IDDM), 췌장암, 췌장염, 그레이브즈 병, 염증성 장 질병 (IBD), 크론씨병, 결장 및 장암, 게실증, 자가면역 질병, 패혈증, 기관 또는 골수 이식; 외상, 수술 또는 감염으로 인한 염증; 아밀로이드증; 비장 비대증; 이식 대 숙주 질병; 및 염증의 억제, 면역 억제, 조혈 세포, 면역, 염증성 또는 림프종 세포, 대식세포, T-세포 (Th1 및 Th2 세포, CD4+ 및 CD8+ 세포를 포함한다) 증식의 감소, 병원균 또는 항원에 대한 면역 반응의 억제와 같은 염증성 및 면역 질병 또는 질환의 길항체로서 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 사용에 직접적으로 관련된다. 더욱이 활성화된 CD4+ 및 CD19+ 세포와 같은 활성화된 면역 세포에서 IL-31RA 발현의 존재는, IL-31RA 수용체가 외래 침입자, 예컨대 미생물 및 세포 파편에 대한 신체의 면역 방어 반응에 포함될 수 있으며, 염증 및 암 형성 중에 면역 반응에서 역할을 할 수 있다는 것을 나타냈다. IL-31RA 수용체 기능에 대해 아고니스트 또는 길항체로서 작용하는 본 발명의 항체 및 결합 파트너, 예컨대 IL-31은 그 자체로서 면역 반응 및 염증을 변형하기 위해 사용될 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 또한 IL-31의 순환하는 수준의 검출을 위해 진단 시스템 내에서 사용될 수 있다. 관련된 구체예 내에서 IL-31 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다른 제제는 순환하는 IL-31 폴리펩티드를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 상승된 또는 감소된 수준의 리간드 폴리펩티드는 암을 포함하여 병리적 질환의 표식이 될 수 있다. IL-31 폴리펩티드는 병리적 과정에 기여할 수 있으며, 근원이 되는 질병의 직접적인 마커일 수 있다.
동맥경화증 병변에서 나타나는 첫 번째 비정상 중 하나는 단핵세포/대식세포의 내피세포에 대한 정위이다. 이들 병변은 IL-31에 대한 길항체의 사용에 의해 방지될 수 있다. 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 동맥경화증 병변에서 IL-31의 길항체로서 사용될 수 있다. 더욱이 단핵구성 백혈병은 대식세포의 생물학적 산물의 방출을 반영하는 다양한 임상적 비정상, 예를 들면 혈청과 뇨에서 고수준의 라이소자임 및 고열과 관련된다. 더욱, 그러한 백혈병은 단핵세포의 비정상적인 증가를 나타낸다. 이들 효과는 아마도 본원에 기술된 것과 같은 IL-31에 대한 길항체에 의해 방지될 수 있다. 더욱이, 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 본원에 기술된 것과 같이 백혈병 단핵세포의 죽음을 지시하기 위해 독성 부분 및 사이토킨과 같은 분자에 포합될 수 있다.
IL-31은 활성화된 단핵 세포에서 발현될 수 있고, 염증 조절에 포함되는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 폴리펩티드는 그 자체로서, 염증을 변형하는 그것의 능력에 대해 분석되고 사용될 수 있거나, 또는 염증에 대한 마커로서 사용될 수 있다. IL-31의 전염증성 및 항염증성 특질을 측정하기 위한 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있고 본원에서 논의된다. 더욱이 급성 상 반응물, 예를 들면 혈청 아밀로이드 A (SAA), α1-항키모트립신, 및 합토글로빈의 생성을 상향조절하는 데 포함될 수 있으며, IL-31RA 수용체 리간드의 발현은 염증성 반응에 포함된 생체 내 리포다당 (LPS)의 주사시에 증가될 수 있다 (Dumoutier, L. et al., Proc . Nat'l . Acad . Sci. 97:10144-10149, 2000). 급성 상 단백질, 예컨대 SAA의 생성은 염증이 유익한 단기간 생존 메커니즘으로 간주된다. 그러나 장기간 동안의 급성 상 단백질의 유지는 만성 염증의 원인이 되고, 인간 건강에 해가 될 수 있다 (Uhlar, CM and Whitehead, AS, Eur . J. Biochem . 265:501-523, 1999, and Baumann H. and Gauldie, J. Immunology Today 15:74-80, 1994). 더욱이 급성 상 단백질 SAA는 여러 만성 염증성 질병의 발병에 연루되며, 동맥경화증 및 류머티스성 관절염에 포함되고, 아밀로이드증에 침착된 아밀로이드 A 단백질에 대한 전구체이다 (Uhlar, CM and Whitehead, 상기 참조). 그러므로 전-염증성 분자로서 작용하고 SAA의 생성을 유도하는 IL-31과 같은 리간드가 있는 경우, 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 리간드에 의해 유도된 급성 상 반응 단백질과 관련된 염증성 질병 및 다른 질병을 치료하는 데 유용할 것이다. 예를 들어 염증을 감소시키는 방법은 염증 또는 가려움이 있는 포유류에게 염증 또는 가려움을 감소시키기에 충분한 양의 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 더욱이 염증이 있는 포유류에서 염증성 반응을 억제하는 방법은 다음의 단계를 포함할 수 있다: (1) 혈청 아밀로이드 A 단백질의 수준을 측정하는 단계; (2) 본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 허용되는 약제학적 담체 중에 포함하는 조성물을 투여하는 단계; (3) 혈청 아밀로이드 A 단백질의 투여 후 수준을 측정하는 단계; (4) 단계 (1)에서 얻어진 혈청 아밀로이드 A 단백질의 수준을 단계 (3)에서 얻어진 혈청 아밀로이드 A 단백질의 수준과 비교하는 단계, 이때 혈청 아밀로이드 A 단백질 수준의 증가 또는 감소의 결핍은 염증성 반응을 억제하는 표식이 된다.
IL-31RA 수용체 cDNA에 상응하는 mRNA의 조직 분포는 mRNA 수준이 단핵세포 및 전립선 세포에서 가장 높고, 활성화된 단핵세포, 및 활성화된 CD4+, 활성화된 CD8+, 및 활성화된 CD3+ 세포에서 상승되는 것을 나타냈다. 그러므로 IL-31RA 수용체는 또한 염증성 및 면역 반응을 유도하는 데 포함된다. 그로써 본 발명의 특정 구체예는 염증성 및 면역 질병 또는 질환, 예를 들면 췌장염, 유형 I 당뇨병 (IDDM), 췌장암, 췌장염, 그레이브즈 병, 염증성 장 질병 (IBD), 크론씨병, 결장 및 장암, 게실증, 자가면역 질병, 패혈증, 기관 또는 골수 이식; 외상, 수술 또는 감염으로 인한 염증; 아밀로이드증; 비장 비대증; 이식 대 숙주 질병; 및 염증의 억제, 면역 억제, 조혈 세포, 면역, 염증성 또는 림프종 세포, 대식세포, T-세포 (Th1 및 Th2 세포, CD4+ 및 CD8+ 세포를 포함한다) 증식의 감소, 병원균 또는 항원에 대한 면역 반응의 억제와 같은 염증성 및 면역 질병 또는 질환의 길항체로서 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 사용에 직접적으로 관련된다. 더욱이 활성화된 CD3+, 단핵세포, CD4+ 및 CD19+ 세포와 같은 활성화된 면역 세포에서 IL-31RA 수용체의 존재 및 IL-31 발현은, IL-31RA 수용체가 외래 침입자, 예컨대 미생물 및 세포 파편에 대한 신체의 면역 방어 반응에 포함될 수 있으며, 염증 및 암 형성 중에 면역 반응에서 역할을 할 수 있다는 것을 나타냈다. IL-31RA 수용체 기능에 대해 아고니스트 또는 길항체로서 작용하는 본 발명의 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 그 자체로서 면역 반응 및 염증을 변형하기 위해 사용될 수 있다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 다음의 목적에 유용하다:
1) 급성 염증, 외상의 결과로서의 염증, 조직 손상, 수술, 패혈증 또는 감염, 및 만성 염증성 질병, 예컨대 천식, 염증성 장 질병 (IBD), 만성 대장염, 비장 비대증, 류머티스성 관절염, 반복성 급성 염증성 에피소드 (예컨대 폐결핵), 및 아미로이드의 치료, 및 동맥경화증, 캐슬만씨 병, 천식, 및 급성-상 반응의 유도와 관련된 다른 질병의 치료에서 IL-31RA-포함 수용체를 통한 신호화를 길항하거나 차단하기 위해; 그리고
2) IL-31RA 수용체를 통한 면역 세포에서의 신호화를 방지하거나 억제하기 위해 IDDM, 다발성 경색 (MS), 전신성 홍반성 낭창 (SLE), 중증 근무력증, 류머티스성 관절염, 및 IBD와 같은 자가면역 질병의 치료에서 IL-31RA 수용체를 통한 신호화를 길항하거나 차단하기 위해 (Hughes C et al., J. Immunol 153:3319-3325, 1994). 또는 달리, 항체, 예컨대 IL-31에 대한 단클론성 항체 (MAb)는 또한 자가면역 질병을 치료하기 위하여 원하지 않는 면역 세포를 고갈시키기 위한 길항체로서 사용될 수 있다. 천식, 알레르기 및 다른 아토피성 질병은 면역반응을 억제하기 위하여 또는 해로운 세포를 고갈시키기 위하여 그것에 대항하는 MAb, 예를 들면 항-IL-31 항체, 가용성 IL-31RA 수용체 가용성 수용체 또는 IL-31RA/CRF-2 이종이량체로 치료될 수 있다. IL-31RA를 경유하여 본 발명의 폴리펩티드 및 항체를 사용하여 신호화를 차단하거나 억제하는 것은 또한 췌장, 신장, 뇌하수체 및 뉴론 세포의 질병을 유익하게 할 수 있다. IDDM, NIDDM, 췌장염, 및 췌장 암종도 유익할 수 있다. IL-31RA는 MAb를 길항하는 것이 암 성장을 억제하고 면역-중재된 죽음을 표적으로 하는 경우 암의 MAb 치료에 대한 표적으로서 작용할 수 있다 (Holliger P, and Hoogenboom, H: Nature Biotech . 16: 1015-1016, 1998). 가용성 IL-31RA 수용체 단량체, 단일이량체, 이종이량체 및 다량체에 대한 Mab는 또한 신증(nephropathy), 예컨대 사구체 경화증, 막성 사구체신염, 아밀로이드증 (또한 다른 조직 중에서도 신장에 영향을 준다), 신장 동맥경화증, 다양한 기원의 사구체신염, 신장의 섬유증식성 질병, 및 SLE, IDDM, 타입 II 당뇨병 (NIDDM), 신장 종양 및 다른 질병와 관련된 신장 기능부전을 치료하기 위해 유용할 수 있다.
일반적으로 투여된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 단위용량은 환자의 연령, 체중, 신장, 성별, 일반적인 의료 상태 및 이전의 의학적 이력에 매우 의존적일 것이다. 전형적으로 수용체에게 약 1pg/kg 내지 10mg/kg (제제의 양/환자의 체중)의 범위로 IL-31 폴리펩티드의 단위용량을 제공하는 것이 바람직하며, 필요에 따라 더 낮거나 더 높은 단위용량이 투여될 수 있다. 당업자는 그런 단위용량을 쉽게 결정할 수 있고, 당해 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 그것을 조정할 수 있다.
대상에게 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 투여하는 것은 국소, 흡입, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 근육 내, 피하, 흉막강 내, 척수 내, 국부 카테테르를 통한 주입에 의해, 또는 직접적인 병변 내 주사에 의해 이루어질 수 있다. 치료제 단백질을 주사에 의해 투여할 때 투여는 연속적인 주입에 의해 또는 단일 또는 다중 거환에 의해 이루어질 수 있다.
추가의 투여 경로는 경구, 점막, 폐, 및 피부를 통한 것을 포함한다. 경구 투여는 폴리에스테르 마이크로스피어, 제인 마이크로스피어, 유단백질 마이크로스피어, 폴리시아노아크릴레이트 마이크로스피어, 및 지질-기초 시스템에 적당하다 (DiBase and Morrel, "Oral Delivery of Microencapsulated Proteins," in Protein Delivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), pages 255-288 (Plenum Press 1997)). 비내 전달의 실행 가능성은 인슐린 투여와 같은 방식에 의해 예시화된다 (Hinchcliffe and Ilium, Adv . Drug Deliv . Rev . 35:199 (1999)). IL-31을 포함하는 건조 또는 액체 입자는 제조되고, 건조-분말 분산기, 액체 에어로졸 생성기, 또는 분무기를 이용하여 흡입될 수 있다 (Pettit and Gombotz, TIBTECH 16:343 (1998); Patton et al., Adv . Drug Deliv . Rev . 35:235 (1999)). 이 접근법은 AERX 당뇨 관리 시스템에 의해 설명되는데, 그것은 분무할 수 있는 인슐린을 폐에 전달하는 손에 쥐고 쓸 수 있는 전자 흡입기이다. 연구 결과 48,000 kDa 정도로 큰 단백질은 피부를 가로질러 치료 농도에서 저주파 초음파를 이용하여 전달된 것으로 나타났는데, 그것은 피부를 통한 투여의 가능성을 예시한다 (Mitragotri et al., Science 269:850 (1995)). 일렉트로포레이션을 사용한 경피 전달은 IL-31 결합 활성을 가지는 분자를 투여하기 위한 또 다른 수단이다 (Potts et al., Pharm . Biotechnol. 10:213 (1997)).
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 결합 활성을 가지는 IL-31 길항체를 포함하는 약제학적 조성물은 약제학적으로 유용한 조성물을 제조하기 위해 공지된 방법을 따라 제형될 수 있고, 그로써 치료 단백질은 약제학적으로 허용되는 담체와의 혼합물로 조합된다. 조성물은 그것의 투여가 수용체인 환자에게 허용될 수 있다면 "약제학적으로 허용되는 담체"라고 말할 수 있다. 멸균 포스페이트-완충된 식염수는 약제학적으로 허용되는 담체의 한 실례이다. 다른 적당한 담체는 당해 기술분야에 잘 알려져 있다 (Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company 1995).
치료를 목적으로 하는 경우, IL-31 결합 활성을 가지는 분자 및 약제학적으로 허용되는 담체는 치료적으로 효과적인 양으로 환자에게 투여된다. IL-31 결합 활성을 가지는 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드와 약제학적으로 허용되는 담체의 조합은 투여되는 양이 생리적으로 유의미하다면 "치료적으로 효과적인 양"으로 투여된다고 말할 수 있다. 제제는 그것의 존재가 수용체 환자의 생리에서 검출가능한 변화를 초래한다면 생리적으로 유의미하다. 예를 들어 염증을 치료하기 위해 사용된 제제는 그것의 존재가 최소한 일부의 염증성 반응을 완화시킨다면 생리적으로 유의미하다.
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체를 포함하는 약제학적 조성물은 액체 형태로, 에어로졸로, 또는 고체 형태로 제공될 수 있다. 액체 형태는 주사가능한 용액, 에어로졸, 점적액, 국소용 용액 및 경구용 현탁액으로 예시된다. 고체 형태의 예를 들면 캡슐, 정제, 및 방출 조절성 형태가 있다. 후자의 형태는 미니삼투 펌프 및 이식편으로 예시된다 (Bremer et al, Pharm . Biotechnol . 10:239 (1997); Ranade, "Implants in Drug Delivery," in Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), pages 95-123 (CRC Press 1995); Bremer et al., "Protein Delivery with Infusion Pumps," in Protein Delivery : Physical Systems , Sanders and Hendren (eds.), pages 239-254 (Plenum Press 1997); Yewey et al., "Delivery of Proteins from a Controlled Release Injectable Implant," in Protein Delivery : Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), pages 93-117 (Plenum Press 1997)). 다른 고체 형태로는 크림, 페이스트, 다른 국부 적용, 등이 있다.
본원에 기술된 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체는 면역리포솜으로서 제형될 수 있다. 항체를 함유하는 리포솜은 당해 기술분야에 공지되어 있는 방법들, 예를 들면 Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980); 및 미국 특허 4,485,045호 및 4,544,545호에 기술되어 있는 방법에 의해 제조된다. 증강된 순환 시간을 가지는 리포솜은 미국 특허 5,013,556호에 개시된다.
리포솜은 대상에게 정맥 내로, 복강 내로, 척수 내로, 근육 내로, 피하로, 또는 경구 투여, 흡입, 또는 비내 투여를 통해 치료 폴리펩티드를 전달하는 한 수단을 제공한다. 리포솜은 수성 구획을 둘러싸고 있는 하나 또는 그 이상의 지질 이중층으로 이루어지는 현미경적 소포이다 (Bakker-Woudenberg et al., Eur . J. Clin. Microbiol . Infect . Dis . 12 ( Suppl . l):S6l (1993), Kim, Drugs 46:618 (1993), and Ranade, "Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes as Carriers," in Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), pages 3-24 (CRC Press 1995)). 리포솜은 조성에 있어서 세포막과 유사하며, 그 결과로서 리포솜은 안전하게 투여되고 생체 내에서 분해될 수 있다. 제조 방법에 따라 리포솜은 단층이거나 다층일 수 있고, 리포솜은 0.02㎛ 내지 10㎛ 이상의 범위로 직경의 크기가 다양할 수 있다. 다양한 제제는 리포솜안에 캡슐화될 수 있다: 소수성 제제는 이중층 안에 구분되고, 친수성 제제는 내부 수성 공간 내에 구분된다 (Machy et al., Liposomes In Cell Biology And Pharmacology (John Libbey 1987), and Ostro et al., American J. Hosp . Pharm . 46:1576 (1989)). 더욱이, 캡슐화된 제제를 리포솜 크기, 이중층의 수, 지질 조성, 및 리포솜의 전하와 표면 특성을 다르게 함으로써 치료적 활용성을 조절하는 것이 가능하다.
특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)를 포함하는 지질 조성물을 사용하여 역상 증발법에 의해 제조될 수 있다. 리포솜은 규정된 기공의 필터를 통해 압출됨으로써 원하는 직경을 가지는 리포솜이 생성된다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 문헌에 설명된 것과 같이 (Martin et al. J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982)) 이황화 상호교환 반응을 통하여 리포솜에 포합될 수 있다. 화학요법제 (예컨대 독소루비신)는 임의로 리포솜과 조합될 수 있다 (Gabizon et al. J. National Cancer Inst. 81(19) 1484 (1989)).
인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체의 치료적 조성물은 임의의 생리적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 원하는 순도를 가지는 항체를 혼합함으로써 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태로 보관용으로 제조된다. 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용된 단위용량 및 농도에서 수용체에 무독성이며, 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 다른 탄수화물, 이를테면 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 슈크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 카운터 이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체 (예컨대 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈.TM., 플루로닉.TM. 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)를 포함한다.
본원의 제형은 또한 하나 이상의 활성 화합물을, 치료될 특별한 표식에 필요한 대로, 바람직하게는 상호간에 해로운 영향을 미치지 않는 상보하는 활성을 가지는 것들을 함유할 수 있다. 예를 들어 한 제형으로 IL-31에 결합하는 항체를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 또는 달리 또는 추가로, 조성물은 화학치료제 또는 사이토킨을 포함할 수 있다. 그런 분자는 의도된 목적에 대하여 효과적인 양으로 조합에 적당하게 존재한다.
IL-31 결합 활성을 가지는 폴리펩티드는 단백질 미소캡슐화의 표준 기법을 사용하여 리포솜 내에 캡슐화될 수 있다 (Anderson et al., Infect . Immun . 31:1099 (1981), Anderson et al., Cancer Res . 50:1853 (1990), and Cohen et al., Biochim . Biophys . Acta 1063:95 (1991), Alving et al., "Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies," in Liposome Technology, 2nd Edition, Vol.III, Gregoriadis (ed.), page 317 (CRC Press 1993), Wassef et al., Meth . Enzymol . 149:124 (1987)). 상기에서 주지된 바와 같이, 치료적으로 유용한 조성물은 다양한 성분을 함유할 수 있다. 예를 들어 리포솜은 폴리(에틸렌 글리콜)의 지질 유도체를 포함할 수 있다 (Allen et al., Biochim . Biophys . Acta 1150:9 (1993)).
생체 내 투여에 사용될 제형은 멸균되어야 한다. 이것은 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 이루어진다.
지속성-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속성-방출 제제의 적당한 실례는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스로, 그 매트릭스는 형상화된 인공물의 형태, 예를 들면 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속성-방출 매트릭스의 실례로는 폴리에스테르, 하이드로겔 (예컨대 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알코올), 폴리락타이드 (미국 특허 3,773,919호), L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 Luron Depot.TM. (락트산-글리콜산 공중합체와 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사가능한 마이크로스피어), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 있다. 에틸렌-비닐 아세테이트와 락트산-글리콜산과 같은 중합체가 100일 이상 분자의 방출을 가능하게 하는 한편, 특정 하이드로겔은 더 짧은 시간 동안 단백질을 방출한다. 캡슐화된 항체가 장시간 동안 신체에 남아있는 경우 그것은 37℃에서 습기에 노출된 결과 변성되거나 응집될 있고, 그 결과 생물학적 활성이 손실되며 면역원성에도 변화가 있을 수 있다. 따라서 포함된 메커니즘에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략이 고안될 수 있다. 예를 들어 만약 응집 메커니즘이 티오-이황화물 상호교환을 통하여 분자내 S--S 결합 형성을 이루는 것으로 발견된다면, 안정화는 술프히드릴 잔기를 변형하거나, 산성 용액으로부터 동결건조시키거나, 습기 함량을 조절하거나, 적절한 첨가제를 사용하거나, 특이한 중합체 매트릭스 조성을 개발함으로써 이루어질 수 있다.
다른 단위용량 형태들도 문헌에 나타난 바와 같이 당업자에 의해 고안될 수 있다 (Ansel and Popovich, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5th Edition (Lea & Febiger 1990), Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company 1995), and by Ranade and Hollinger, Drug Delivery Systems (CRC Press 1996).
예를 들어 약제학적 조성물은 인간화된 IL-31 항원 결합 분자 또는 IL-31 길항체 (예컨대 IL-31 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 항체 단편)를 포함하는 용기를 포함하는 키트로서 제공될 수 있다. 치료적 폴리펩티드는 단일 또는 다중 용량을 위한 주사가능한 용액의 형태로, 또는 주사 전에 재구성될 멸균 분말로서 제공될 수 있다. 또는 달리 그런 키트는 치료 폴리펩티드의 투여를 위해 건조-분말 분산기, 액체 에어로졸 생성기, 또는 분무기를 포함할 수 있다.
본 발명은 아래의 비-제한적인 실시예에 의해 한층 더 설명된다.
실시예
실시예 1: 인간화된 가변 영역 서열의 측정
마우스 항-사람 IL-31 단클론성 항체는 공동 계류중인, 2006년 5월 8일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/430,066호 (미국 특허 공보 2006-02752960호)에서 설명된다. 마우스 항-사람 IL-31 항체의 가변 영역의 아미노산 서열은 2007년 9월 4일에 출원된, 공동 계류중인 미국 특허 출원 일련 번호 11/850,006 및 2007년 9월 4일에 출원된 공동 소유의 PCT 출원 US07/77555에서 설명된다. 이들 아미노산 서열을 본원에서 기술되는 인간화된 서열에 대한 출발 물질로서 사용하였다. 구체적으로 마우스 항-사람 IL-31 항체 서열은 클론 번호 292.12.3.1과의 하이브리도마로부터 유래하였다.
클론 292.12.3.1의 CDR 영역을 코드화하는 뉴클레오티드를 사람 IgG를 코드화하는 cDNA 벡터에 클론하여, 쥐과의 CDR 영역을 은닉하는 사람 IgG 프레임워크로 구성되는 키메릭 항체를 제조하였다. 키메릭 항체 중의 개별적인 아미노산은 고품질의 단클론성 항체의 특성들 (결합 친화성, 안정성, 및 균질성)을 얻도록 최적화되었다. 각 항체의 3차원 모델을 제조하고, 인간화된 가변 영역과 CDR 영역을 측정하였다.
인간화된 마우스 항-사람 IL-31 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 함유하는 구성물을 위치 241에서 Ser이 Pro로 돌연변이되어 있는 사람 IgG4 불변 영역에 융합시켜 반(half) 항체의 형성을 억제하였다. 구성물을 HEK2923 세포로 표시하고 단백질 A 칼럼 상에서 정제한 후 PBS로 완충액을 교체하였다. 결합 친화성을 Biacore에 의해 측정하였다. 잠재력을 BAF 증식 분석법 및 NHK stat3 인산화 분석으로 측정하였다. 균질성, 응집, 및 접힘 안정성과 같은 생물물리학적 특성을 평가하였다.
실시예 2: HEK293 세포에서의 인간화된 IL -31 항원 결합 분자의 발현
모든 실험 과정은 제조업체 지시를 따라 수행하였다. 항 IL-31 항체 cDNA를 Geneart (http:://www.Geneart.com)에서 구입하고, 발현 플라스미드 pTT5에 하위클론하였다. 항체 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 독립적인 플라스미드에서 유지하였다. pTT5는 Yves Durocher (Biotechnology Research Institute, National Research Council Canada)로부터 인가받았다. pTT5 플라스미드를 다음의 공보에서 특성확인하였다: Durocher et al. NAR 2002; 및 Pham et al. Biotechn. Bioeng. 2003.
HEK293-6E 트랜스펙션에 대한 플라스미드를 얻기 위해, 항IL-31 항체 코딩 플라스미드를 화학적으로 TOP10 대장균 세포에 형질전환하였다 (cat no. C4040-06, Invitrogen, Taastrup, Denmark). 부위-특정 아미노산 교환은 PCR에 의해, DNA technology (http:://www.움-technology.dk)로부터의 프라이머와 Dpn1 소화물 (cat no. 200518, Clontech via Medinova Scientific A/S, Glostrup, Denmark)을 사용하여 수행하였다. 플라스미드를 MWG-biotech (http://www.mwg-biotech.com/html/all/index.ph)에서 서열화하였다.
HEK293-6E 세포를 293Fectin 프로토콜 (cat no. 12347019, Invitrogen, Taastrup, Denmark)에서 설명한 것과 같이 형질전환하였다. 간단히 설명하면, 15㎍의 LC와 15㎍의 HC 플라스미드를 1ml의 Opti-MEM (cat no. 31985-062, Gibco/Invitrogen, Taastrup, Denmark)으로 희석하고, 또한 1ml의 Opti-MEM에 희석된 40㎕의 293Fectin과 혼합하였다. 표준 형질전환을 위해 3천만 개의 HEK293-6E 세포를 펠릿화하고 28ml의 프리스타일 배지 (cat no. 12338, Gibco/Invitrogen, Taastrup, Denmark)에 재현탁한 다음 2ml의 플라스미드 혼합물을 첨가하였다. 그런 다음 세포를 37℃, 8% CO2에서 교반하면서 (125rpm) 6일 동안 인큐베이션한 후 펠릿화하고 상층액을 표본화하였다.
실시예 3: Biacore 에 의해 측정된 인간화된 IL -31 항원 결합 분자의 결합 친화성
도입
단백질 반응을 표면 플라스몬 반응 (SPR) 분석을 사용하여 실시간으로 모니터할 수 있다. 이 연구에서 본 발명자들은 Biacore 3000 및 Biacore T100 기기 상에서 SRP 분석을 수행하여, 재조합 사람 IL-31 (hIL-31)을 향한 친화성과 관련하여 항-IL-31 단클론성 항체를 특성확인하였다.
친화성 연구를 직접 결합 과정을 사용하여 수행하였는데, 단클론성 항체는 센서 칩 표면상에 있는 카르복시메틸화된 덱스트란 막 (CM5)에 유리 아민기를 통하여 공유 결합되었다. 재조합 hIL-31을 다양한 농도로 주입한 후, 센서 칩 표면위로 분리 기간동안 일정한 완충제가 흐르도록 하였다. 이 실험 디자인을 사용하여 고정된 단클론성 항체에 대한 hIL-31의 결합은 1:1 결합으로서 간주될 수 있고, 이때 하나의 hIL-31 분자는 하나의 항체 결합 분위에 결합한다. 상호작용에 대한 역학 매개변수들은 1:1 상호작용 랭뮤어 맞춤 모델을 사용하여 계산할 수 있다.
방법
정제된 단클론성 항체를 CM5형 센서 칩 상에서 개별적인 흐름 세포에 고정시켰다. 고정은 표준 아민 결합과정을 사용하여, 500 공명 단위 (RU)의 고정 수준을 목적으로 수행하였다. 항체를 1 내지 5㎍/ml로 10mM NaAc pH 4.5에 희석하였다.
HPS-EP pH 7.4 (1OmM HEPES, 15OmM NaCl, 3mM EDTA 및 0.005% 폴리소르베이트 P 20)를 작동 완충액으로 사용하여 재조합 hIL-31 (hIL-31, BHK 제품, A1277F, zcytorl71ig CEE)을 희석하였다. hIL-31을 333.3nM로부터 1.4nM로 3배 희석 시리즈로 시험하였다. 결합 (주사)은 4분이었고, 이어서 20분 동안 분리 (세척)하였다. 유속은 50㎕/분이었다. 실험을 25℃에서 수행하였다. 표면의 재생은 10mM의 글리신-HCl pH 1.8 또는 1M 포름산을 30㎕/분의 유속으로 30초 펄스 주사에 의해 이루었다. 모든 흐름 세포에서 동시에 검출을 하였다. 흐름 세포 #1은 고정된 항체를 전혀 함유하지 않았고, 그것을 바탕값 및 벌크의 공제에 사용하였다. 모든 실험을 3개 한 벌로 수행하였다.
"원래의" 쥐 단클론성 항체를 얻어진 역학 매개변수의 내부 참조를 위해 모든 실험에 포함시켰다.
역학 매개변수들은 1:1 랭뮤어 결합 모델을 사용하여 데이터의 포괄적인 적용에 의해 계산하였다. 데이터를 역학 매개변수의 계산 전에 대량 수송 한계에 대해 점검하였다. 일부 실험에서 Rmax는 국소적으로 맞추었는데, RI는 0에서 불변이었다.
실험을 Biacore 3000 및 T100 기기 상에서 수행하였다. 데이터를 Biaeval 4.1과 Biacore T100 평가 소프트웨어를 사용하여 평가하였다. 데이터를 아래의 표 2에 나타낸다. 이 분석에서는 여러 개의 클론이 원래의 스트레인과 유사한 친화성을 나타냈다.
Figure 112010036621520-pct00002
실시예 4: BAF 증식 분석에 의해 측정된 인간화된 IL -31 항원 결합 분자의 능력
A. 배지 및 완충제
배양 배지: 글루타맥스 (SKN, NN), 10%의 열-비활성화된 FBS, 1% P/S (BioWhitaker Cat.No. DE17-602E), 0.5 mg/ml의 제네티신 (GIBCO Cat.No. 10131-019), 100 μg/ml의 제오신 (Invitrogen 45-0430), 1 ng/ml의 마우스 IL3 (TriChem ApS Cat.No. 213-13), 2ug/ml의 피로마이신 (Sigma- Aldrich P7255)이 첨가된 RPMI.
분석 배지: 글루타맥스 (SKN, NN), 10%의 열-비활성화된 FBS, 1% P/S (BioWhitaker Cat.No. DE17-602E), 0.5 mg/ml의 제네티신 (GIBCO Cat.No. 10131-019), 100 μg/ml의 제오신 (Invitrogen 45-0430), 2ug/ml의 피로마이신 (Sigma- Aldrich P7255)이 첨가된 RPMI.
알마르블루 염료 (BioScourse, Dal1100)를 사용하여 증식을 평가한다.
B. 항체, 세포 및 사이토킨
사람 항-IL-31 단클론성 항체를 Novo Nordisk에서 제조하고 Novo NordisK (Copenhagen, Denmark)에서 정제하였다. BAF-3 (hIL-31R) 세포를 hIL-31Rα 및 hOSMRB에 대한 유전자로 형질전환된 KZS134-BAF3 셀라인으로서 ZymoGenetics, Inc. (Seattle, WA)로부터 받았다. 재조합 사람 IL-31 (C108S, 미국 특허 공보 2006-0228329호에서 설명됨)은 ZymoGenetics, Inc.에서 대장균에서 제조하였고, 분자량은 18 kDa이다.
C. 증식 분석
1. 자극 분석
BAF-3 (hIL-31R) 세포를 분석 배지에서 철저하게 세척하여 잔류하는 IL3을 제거하였다. 그런 다음 세포를 96-웰 미소적정 플레이트 (평평한 웰 뷰플레이트 Packard cat.S00190)에 웰당 104 세포로 뿌렸다. 웰에 연속적으로 희석시킨 hIL-31 (10-9M 내지 10-15M)을 첨가하고, 추가의 웰에 hIL-31이 들어있지 않은 세포를 넣어 네거티브 대조표준으로 사용하였다. 세포를 3일 동안 5% CO2와 37℃에서 배양하였다. 배양 기간의 마지막 6시간 동안에 10㎕의 알마르블루를 각 웰에 첨가하였다. 세포를 형광 세기에 대해 분광계 상에서 (bmg POLARstar+Galaxy) 555-12nm에서의 여기와 590nm에서의 방출을 사용하여 분석한다. 억제 분석을 위해 일정한 농도의 hIL-31을 사용하여 세포를 자극한다. 이 농도는 증식 분석에서 대략 90%의 최대 자극 (본 발명자들에게는 10-10M hIL20을 의미한다)을 토대로 선택하였다.
2. 억제 분석
세척된 BAF-3(hIL-31R)의 웰당 10×104 세포를 분석 배지가 들어있는 미소적정 웰에 뿌렸다. 10-10M (최종 농도)의 hIL-31을 각 웰에 첨가하는데, 몇 개의 웰을 세포만을 함유하는 네거티브 대조표준으로서 사용하였다. 연속적으로 희석한 항체 (즉 100㎍ 및 2배)를 이미 세포와 사이토킨을 함유하고 있는 웰에 첨가하였다 (단 세포+hIL-31만을 함유해야 하는 포지티브 대조표준에 대해 사용한 웰은 제외). 세포, 사이토킨 및 항체의 혼합물을 100㎕/w에서 72시간 동안 5% CO2와 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간의 마지막 6시간 동안에 10㎕/w의 알마르블루를 첨가하였다. 플레이트를 형광 세기에 대해 분광계 상에서 (bmg POLARstar+Galaxy) 555-12nm에서의 여기와 590nm에서의 방출을 사용하여 분석한다. 곡선을 그리고 능력 (IC50)을 프리즘 4 (GraphPad PRISM software Inc.)를 사용하여 계산한다. 데이터를 아래의 표 3에 나타낸다. 여러 개의 클론이 이 분석에서 원래의 것과 유사한 능력을 나타냈다.
Figure 112010036621520-pct00003
실시예 5: NHK stat3 인산화 분석에 의해 측정된 인간화된 IL -31 항원 결합 분자의 능력
정상인 케라틴 생성세포의 배양 및 STAT3 인산화 분석:
복부 피부로부터의 정상인 케라틴 생성세포 (NHK)를 Biopredic Int. (Rennes, France)로부터 얻어서 Cascade Biologies (Portland, OR)로부터의 HKGS 키트에 첨가된 Epilife 배지에서 성장시켰다. HBSS, 트립신-EDTA 및 트립신 중화제를 함유한 분리 키트를 사용하여 세포를 수확하고 Promocell (Heidelberg, Germany)로부터 얻었다. NHK를 15분 동안 재조합 사람 IL-31로 평평한 바닥의 96-웰 플레이트 (Nunc, Roskilde, Denmark)에서 자극하여 STAT3 인산화를 측정하고 사이토킨의 EC50을 측정하였다. NHK 용해물을 Cell Signaling Technology (Danvers, MA)로부터의 PathScan Phospho-STAT3 Sandwich ELISA 키트에서, 제조업체의 지시를 따라 시험하였다. 그런 다음 각각의 중화 항체의 IC50을 연속 희석의 항체를 NHK에 첨가한 후 15분 동안 EC80의 재조합 사람 IL-31로 자극함으로써 측정하였다. 마우스 IgG1 (R&D Systems, Minneapolis, MN) 및 사람 IgG4 (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO)를 이소타입 대조 항체로서 사용하였다.
항체의 능력은 사람 IL-31에 대해 지시되었다.
사람 IL-31에 대해 지시된 각 항체에 대하여 IC50 값 (nM)을 아래의 표 4에 나타낸다. 각 실험에 대해 XL Fit 소프트웨어로 측정한 Z' 인자가 표에 제시된다. 재조합 사람 IL-31의 EC80을 사용하여 얻어진 자극 지수를 제시한다. 여러 개의 클론이 이 분석에서 원래의 또는 허용되는 능력과 유사한 능력을 나타냈다.
Figure 112010036621520-pct00004
상술한 설명으로부터, 비록 본 발명의 특정 구체예가 본원에서는 예시를 위해 설명되었지만, 다양한 변형이 본 발명의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않고 이루어질 수 있다는 것이 명백할 것이다. 따라서 본 발명은 첨부되는 청구범위에 의해서 제한되는 것을 제외하고 한정되지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> ZymoGenetics, Inc. BONDENSGAARD, KENT BECKMANN, ROLAND <120> HUMANIZED ANTIBODY MOLECULES SPECIFIC FOR IL-31 <130> 07-13PC <150> 61/012,362 <151> 2007-12-07 <160> 51 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Arg Tyr Trp Met Gln 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala Pro Tyr Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 8 <211> 30 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (29)...(29) <223> Xaa is Leu or Phe <400> 8 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Xaa Thr 20 25 30 <210> 9 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 10 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Gln Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Phe 20 25 30 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 12 <211> 30 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (29)...(29) <223> Xaa is Leu or Phe <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Xaa Thr 20 25 30 <210> 13 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 14 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> Xaa is Lys or Thr <220> <221> VARIANT <222> (32)...(32) <223> Xaa is Phe or Arg <400> 14 Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Xaa Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Xaa 20 25 30 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 16 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> Xaa is Lys or Thr <220> <221> VARIANT <222> (32)...(32) <223> Xaa is Phe or Arg <400> 16 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Xaa Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Xaa 20 25 30 <210> 17 <211> 23 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 17 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 18 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 19 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (15)...(15) <223> Xaa is Phe or Tyr <400> 19 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Glu Thr Gln Xaa Ser 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 21 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (15)...(15) <223> Xaa is Tyr or Phe <400> 21 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANT <222> (13)...(13) <223> Xaa is Gln or Pro <220> <221> VARIANT <222> (14)...(14) <223> Xaa is Ser or Lys <220> <221> VARIANT <222> (16)...(16) <223> Xaa is Gln or Lys <400> 22 Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Xaa Xaa Phe Xaa 1 5 10 15 Gly <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 164 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Met Ala Ser His Ser Gly Pro Ser Thr Ser Val Leu Phe Leu Phe Cys 1 5 10 15 Cys Leu Gly Gly Trp Leu Ala Ser His Thr Leu Pro Val Arg Leu Leu 20 25 30 Arg Pro Ser Asp Asp Val Gln Lys Ile Val Glu Glu Leu Gln Ser Leu 35 40 45 Ser Lys Met Leu Leu Lys Asp Val Glu Glu Glu Lys Gly Val Leu Val 50 55 60 Ser Gln Asn Tyr Thr Leu Pro Cys Leu Ser Pro Asp Ala Gln Pro Pro 65 70 75 80 Asn Asn Ile His Ser Pro Ala Ile Arg Ala Tyr Leu Lys Thr Ile Arg 85 90 95 Gln Leu Asp Asn Lys Ser Val Ile Asp Glu Ile Ile Glu His Leu Asp 100 105 110 Lys Leu Ile Phe Gln Asp Ala Pro Glu Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr 115 120 125 Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe Ile Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe 130 135 140 Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln 145 150 155 160 Gln Ala Thr Thr <210> 25 <211> 122 <212> PRT <213> Mus musculus 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Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala Pro Tyr Gly Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 32 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Glu Thr Gln Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 33 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 33 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 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Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala Pro Tyr Gly Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 122 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala 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Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala Pro Tyr Gly Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr 210 215 220 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Lys <210> 48 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 49 <211> 449 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 49 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala Pro Tyr Gly Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn 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Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 51 <211> 449 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 51 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Pro Asp Gly Tyr Tyr Ala Ala Pro Tyr Gly Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 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365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Lys

Claims (29)

  1. SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 IL-31에 특이적으로 결합하는 분리된 모노클로날 항체.
  2. 제 1 항에 있어서, 모노클로날 항체는 인간 Fc 도메인을 갖는 것을 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  3. 제 2 항에 있어서, 인간 Fc 도메인의 이소타입은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4인 것을 특징으로 하는 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  4. 제 2 항에 있어서, 인간 Fc 도메인의 이소타입은 IgG4인 것을 특징으로 하는 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  5. 제 4 항에 있어서, 인간 Fc 도메인은 Kabat에 의해 결정된 것으로서 위치 241에서 세린에서 프롤린으로 돌연변이를 갖는 것을 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  6. 제 1 항에 있어서, 중쇄는 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  7. 제 6 항에 있어서, 경쇄는 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  8. 제 1 항에 따른 모노클로날 항체를 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오티드.
  9. 제 8 항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로서, 중쇄를 암호화하는 핵산 분자 및 경쇄를 암호화하는 핵산 분자는 전사 프로모터 및 전사 터미네이터에 작동가능하게 연결되는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  10. 제 9 항에 있어서, 중쇄를 암호화하는 핵산 분자 및 경쇄를 암호화하는 핵산 분자는 동일한 프로모터에 작동가능하게 연결되는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  11. 제 9 항에 있어서, 프로모터는 사이토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  12. 제 9 항에 따른 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포.
  13. 제 12 항에 있어서, 숙주 세포는 진핵 세포인 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  14. 제 13 항에 있어서, 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포인 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  15. 발현된 중쇄 및 경쇄가 모노클로날 항체를 형성하는 조건에서 제 9 항에 따른 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 모노클로날 항체를 회수하는 단계
    를 포함하는 모노클로날 항체를 제조하는 방법.
  16. 제 1 항의 모노클로날 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 소양증 또는 아토피성 피부염 치료용 약학적 조성물.
  17. 제 7 항의 모노클로날 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 소양증 또는 아토피성 피부염 치료용 약학적 조성물.
  18. 제 1 항에 따른 모노클로날 항체를 포함하는 소양증 치료용 약학적 조성물.
  19. 제 7 항에 따른 모노클로날 항체를 포함하는 소양증 치료용 약학적 조성물.
  20. 제 1 항에 따른 모노클로날 항체를 포함하는 아토피성 피부염 치료용 약학적 조성물.
  21. 제 7 항에 따른 모노클로날 항체를 포함하는 아토피성 피부염 치료용 약학적 조성물.
  22. 제 1 항에 따른 모노클로날 항체를 포함하는 피부염, 결절성 양진, 습진, 백반증, 원형탈모증, 딸기코, 여드름, 수포성 유천포창 또는 접촉성 피부염 치료용 약학적 조성물.
  23. 제 7 항에 따른 모노클로날 항체를 포함하는 피부염, 결절성 양진, 습진, 백반증, 원형탈모증, 딸기코, 여드름, 수포성 유천포창 또는 접촉성 피부염 치료용 약학적 조성물.
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Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2360923C2 (ru) 2002-01-18 2009-07-10 Займоджинетикс, Инк. Новый лиганд рецептора цитокина zcytor17
CA2595877A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Zymogenetics, Inc. Methods of treating diseases which are mediated by cutaneous lymphocyte antigen positive cells
AU2007254715B2 (en) 2005-05-06 2013-08-29 Zymogenetics, Inc. Methods of treating pain and inflammation in neuronal tissue using IL-31 antagonists
US20130216542A1 (en) 2005-05-06 2013-08-22 Zymogenetics, Inc. Variable region sequences of il-31 monoclonal antibodies and methods of use
US8101183B2 (en) 2005-05-06 2012-01-24 Zymogentics, Inc. Variable region sequences of IL-31 monoclonal antibodies
MX2007013609A (es) * 2005-05-06 2008-01-24 Zymogenetics Inc Anticuerpos monoclonales de il-31 y meodos de uso.
PT2594586E (pt) 2006-09-01 2014-11-26 Zymogenetics Inc Anticorpos monoclonais de il-31 e métodos de utilização
EP2796466B1 (en) 2007-12-07 2017-11-22 ZymoGenetics, Inc. Humanized antibody molecules specific for IL-31
US8790651B2 (en) 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
BR112015006051A2 (pt) * 2012-10-11 2017-07-04 Nerre Therapeutics Ltd usos inéditos
NZ713636A (en) 2013-05-30 2022-07-01 Kiniksa Pharmaceuticals Ltd Oncostatin m receptor antigen binding proteins
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
AR102333A1 (es) * 2014-08-19 2017-02-22 Regeneron Pharma Selectividad eficiente de proteínas recombinadas
KR102514173B1 (ko) 2015-04-14 2023-03-27 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-31 안타고니스트를 유효 성분으로서 함유하는 아토피성 피부염의 예방용 및/또는 치료용 의약 조성물
TWI738648B (zh) 2015-04-14 2021-09-11 日商中外製藥股份有限公司 含有ｉｌ－３１拮抗劑作為有效成分之異位性皮膚炎的預防用及／或治療用醫藥組合物
US9862760B2 (en) 2015-09-16 2018-01-09 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
ES2823173T3 (es) 2016-01-27 2021-05-06 Just Biotherapeutics Inc Promotor híbrido y usos del mismo
US11261462B2 (en) 2016-01-27 2022-03-01 Just-Evotec Biologics, Inc. Inducible expression from transposon-based vectors and uses
US11098310B2 (en) 2016-01-27 2021-08-24 Just-Evotec Biologics, Inc. Expression from transposon-based vectors and uses
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
US11433132B2 (en) 2017-12-01 2022-09-06 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
US11530262B2 (en) 2018-03-16 2022-12-20 Zoetis Services Llc Interleukin-31 monoclonal antibodies for veterinary use
EP3765069A1 (en) 2018-03-16 2021-01-20 Zoetis Services LLC Peptide vaccines against interleukin-31
FR3084365B1 (fr) * 2018-07-27 2020-10-23 Cisbio Bioassays Anticorps a domaine unique qui se lient a la proteine g alpha
BR112022006590A2 (pt) * 2019-11-20 2022-06-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Preparação contendo anticorpos
EP4209227A4 (en) 2020-09-01 2024-05-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE PREVENTION AND/OR TREATMENT OF PRURITUS IN DIALYSIS CONTAINING AN IL-31 ANTAGONIST AS ACTIVE INGREDIENT
EP4019546A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-29 Numab Therapeutics AG Antibody variable domains that bind il-31
CA3205037A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Numab Therapeutics AG Antibody variable domains that bind il-31

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006088956A2 (en) 2005-02-14 2006-08-24 Zymogenetics, Inc. Methods of predicting therpeutic response in atopic dermatitis to il-31 antagonists
WO2006122079A1 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Zymogenetics, Inc. Il-31 monoclonal antibodies and methods of use

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US459293A (en) 1891-09-08 Horse-checking device
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4054646A (en) 1973-07-30 1977-10-18 General Electric Method and apparatus for detection of antibodies and antigens
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
DE3572982D1 (en) 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
IL71691A (en) 1984-04-27 1991-04-15 Yeda Res & Dev Production of interferon-ypsilon
WO1987001130A1 (en) 1985-08-15 1987-02-26 Stauffer Chemical Company Tryptophan producing microorganism
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
ATE87659T1 (de) 1986-09-02 1993-04-15 Enzon Lab Inc Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette.
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5489425A (en) 1987-06-24 1996-02-06 The Dow Chemical Company Functionalized polyamine chelants
US4994560A (en) 1987-06-24 1991-02-19 The Dow Chemical Company Functionalized polyamine chelants and radioactive rhodium complexes thereof for conjugation to antibodies
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
NZ229700A (en) 1988-06-24 1993-01-27 Dow Chemical Co Tetraazacyclododecane derivatives containing a linker/spacer moiety capable of forming antibody conjugates; complexes with radionuclides and conjugates of such compounds and complexes with antibodies or antibody fragments
US5756065A (en) 1988-06-24 1998-05-26 The Dow Chemical Company Macrocyclic tetraazacyclododecane conjugates and their use as diagnostic and therapeutic agents
CN1033030C (zh) 1988-06-24 1996-10-16 唐化学原料公司 大环双官能螯合剂及其配合物和抗体共轭物的制备方法
US5274119A (en) 1988-07-01 1993-12-28 The Dow Chemical Company Vicinal diols
US5078997A (en) 1988-07-13 1992-01-07 Cetus Corporation Pharmaceutical composition for interleukin-2 containing physiologically compatible stabilizers
US5342604A (en) 1988-10-31 1994-08-30 The Dow Chemical Company Complexes possessing ortho ligating functionality
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US5696239A (en) 1988-10-31 1997-12-09 The Dow Chemical Company Conjugates possessing ortho ligating functionality and complexes thereof
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
US5808003A (en) 1989-05-26 1998-09-15 Perimmune Holdings, Inc. Polyaminocarboxylate chelators
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
EP0462815B1 (en) 1990-06-21 1996-09-25 Honeywell Inc. Receding horizon based adaptive control having means for minimizing operating costs
GB2276169A (en) 1990-07-05 1994-09-21 Celltech Ltd Antibodies specific for carcinoembryonic antigen
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
ES2096749T3 (es) 1990-12-14 1997-03-16 Cell Genesys Inc Cadenas quimericas para vias de transduccion de señal asociada a un receptor.
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5428139A (en) 1991-12-10 1995-06-27 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as radiopharmaceuticals
ES2202310T3 (es) 1991-12-13 2004-04-01 Xoma Corporation Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos.
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US5505931A (en) 1993-03-04 1996-04-09 The Dow Chemical Company Acid cleavable compounds, their preparation and use as bifunctional acid-labile crosslinking agents
US5382657A (en) 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5492841A (en) 1994-02-18 1996-02-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Quaternary ammonium immunogenic conjugates and immunoassay reagents
US5783672A (en) 1994-05-26 1998-07-21 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M
CN1117155C (zh) * 1994-07-29 2003-08-06 史密丝克莱恩比彻姆有限公司 新型化合物
JP4079461B2 (ja) 1994-12-29 2008-04-23 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを含んでなる抗腫瘍剤の作用増強剤
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
DK1323346T3 (da) 1995-01-17 2006-10-30 Brigham & Womens Hospital Receptorspecifik transport af immunogener gennem epitelet
US6074849A (en) 1995-07-19 2000-06-13 Genetics Institute, Inc. Polynucleotides encoding human CTLA-8 related proteins
AU728657B2 (en) 1996-03-18 2001-01-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US5792850A (en) 1996-05-23 1998-08-11 Zymogenetics, Inc. Hematopoietic cytokine receptor
DE19623207A1 (de) * 1996-06-11 1997-12-18 Bayer Ag Imidazolderivate
US20020034507A1 (en) 1997-02-28 2002-03-21 Yasuo Koishihara Inhibitor of lymphocyte activation
EP2135953B1 (en) 1999-06-02 2014-04-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Novel hemopoietin receptor protein, Nr. 10
AU6531101A (en) 2000-06-02 2001-12-17 Genentech Inc Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
CA2412211A1 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Genetech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis
US20030096339A1 (en) 2000-06-26 2003-05-22 Sprecher Cindy A. Cytokine receptor zcytor17
EP1325115B1 (en) 2000-06-26 2016-07-27 ZymoGenetics, Inc. Cytokine receptor zcytor17
EP1354040A2 (en) 2000-07-20 2003-10-22 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2318202A (en) 2000-10-06 2002-04-15 Immunex Corp Hematopoietin receptors hpr1 and hpr2
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
WO2002077230A1 (fr) 2001-03-26 2002-10-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Variants d'epissage nr10
EP2298817A1 (en) 2001-12-03 2011-03-23 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Hybrid antibodies
ES2546797T3 (es) 2002-01-18 2015-09-28 Zymogenetics, Inc. Multímeros Zcytor17 receptores de citocinas
RU2360923C2 (ru) 2002-01-18 2009-07-10 Займоджинетикс, Инк. Новый лиганд рецептора цитокина zcytor17
WO2003072740A2 (en) 2002-02-25 2003-09-04 Genentech, Inc. Novel type-1 cytokine receptor glm-r
AU2003265247A1 (en) * 2002-06-18 2003-12-31 The University Of Akron Fibrous protein-immobilization systems
GB0303337D0 (en) 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
DK1668031T3 (da) 2003-08-07 2008-06-30 Zymogenetics Inc Homogene præparater af IL-29
TW200616662A (en) 2004-09-10 2006-06-01 Wyeth Corp Humanized anti-5t4 antibodies and anti-5t4 antibody/calicheamicin conjugates
AR051836A1 (es) 2004-11-30 2007-02-14 Centocor Inc Antagonistas de receptor 3 simil toll metodos y usos
EP1848737B1 (en) 2005-01-28 2016-05-18 ZymoGenetics, Inc. Homogeneous preparations of il-31
JP2008530132A (ja) 2005-02-14 2008-08-07 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｉｌ−３１ｒａアンタゴニストを用いて皮膚障害を治療する方法
US8101183B2 (en) * 2005-05-06 2012-01-24 Zymogentics, Inc. Variable region sequences of IL-31 monoclonal antibodies
AU2007254715B2 (en) 2005-05-06 2013-08-29 Zymogenetics, Inc. Methods of treating pain and inflammation in neuronal tissue using IL-31 antagonists
US20130216542A1 (en) 2005-05-06 2013-08-22 Zymogenetics, Inc. Variable region sequences of il-31 monoclonal antibodies and methods of use
PT2594586E (pt) * 2006-09-01 2014-11-26 Zymogenetics Inc Anticorpos monoclonais de il-31 e métodos de utilização
AU2008204823A1 (en) 2007-01-10 2008-07-17 Zymogenetics, Inc Methods of using IL-31 to treat airway hyper-responsiveness and asthma
EP2796466B1 (en) 2007-12-07 2017-11-22 ZymoGenetics, Inc. Humanized antibody molecules specific for IL-31
US8790651B2 (en) * 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006088956A2 (en) 2005-02-14 2006-08-24 Zymogenetics, Inc. Methods of predicting therpeutic response in atopic dermatitis to il-31 antagonists
WO2006122079A1 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Zymogenetics, Inc. Il-31 monoclonal antibodies and methods of use

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Advanced Drug Delivery Reviews. Vol. 58, No. 5-6, pp. 640-656 (2006)

Also Published As

Publication number Publication date
US10640559B2 (en) 2020-05-05
TR201802202T4 (tr) 2018-03-21
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IL206147A0 (en) 2010-12-30
JP2011506302A (ja) 2011-03-03
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US11542327B2 (en) 2023-01-03
IL206147A (en) 2013-10-31
WO2009071696A3 (en) 2009-09-03
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