KR101588064B1

KR101588064B1 - 새로운 항균 화합물, 이들의 합성 및 포유류 감염 치료를 위한 이들의 용도

Info

Publication number: KR101588064B1
Application number: KR1020107003264A
Authority: KR
Inventors: 우테 묄만; 바딤 마카로프; 티. 콜레 스테바르트
Original assignee: 라이브니츠 인스티튜트 포 내추럴 프로덕트 리서치 앤드 인펙션 바이올로지 이.브이. 한스-크뇔-인스티튜트 (에이치케이아이)
Priority date: 2007-07-16
Filing date: 2008-06-25
Publication date: 2016-01-22
Also published as: CN101809009A; ZA201000491B; CN101809009B; ECSP109962A; EP2176248A1; WO2009010163A1; BRPI0813828A2; ATE482939T1; EA017806B1; EP2020406A1; KR20100043071A; NI201000012A; MX2010000672A; AU2008278056B2; UA99300C2; US8440842B2; TN2010000023A1; CA2693088A1; DE602008002843D1; NZ582620A

Abstract

본 발명은, 새로운 항균 화합물, 이들의 합성 및 포유류 감염 치료를 위한 이들의 용도에 관한 것이다. 본 발명은, 내성 및 약물 불내성에 관한 문제를 극복하기 위한 가능성 있는 새로운 결핵 약물로서 마이코박테리아에 대한 활성을 갖는 새로운 화합물의 생성을 목적으로 한다. 이러한 목적은 하기 화학식 I의 화합물을 제공함으로써 해결된다.
<화학식 I>

상기 식에서, R¹ 및 R²는, 서로 독립적으로, NO₂, NR⁷R⁸, NHOR⁹, COOR⁹, CN, CONR¹⁰R¹¹, CHO, F, Cl, Br, SO₂NR¹²R¹³, 저급 알콕시, OCF₃, 모노-, 디- 또는 트리플루오로메틸이고; R³ 및 R⁴는, 서로 독립적으로, H, 1개 내지 3개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, F, Cl, Br, 저급 알콕시이며; R⁵는 H, 1개 내지 7개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 할로겐화 또는 비-할로겐화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼이고; R⁶은 라디칼:

이며, 여기서, X는 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 할로겐화 또는 비-할로겐화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼이거나, 또는 R⁵ 및 R⁶은 함께 2가 라디칼:

을 나타내고, 여기서 n은 1 내지 4이고; R⁷ 내지 R¹³은, 서로 독립적으로, H, 또는 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 할로겐화 또는 비-할로겐화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, 페닐, 벤질이거나, 또는 R⁷ 및 R⁸은 함께, R¹⁰ 및 R¹¹은 함께, R¹² 및 R¹³은 함께 1개 내지 7개의 사슬 구성원을 갖는 선형 또는 분지형 지방족 2가 라디칼을 나타내며; R¹⁴ 및 R¹⁵는, 서로 독립적으로, H, 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, F, Cl, Br, NO₂, NH₂, CF₃이다.

Description

새로운 항균 화합물, 이들의 합성 및 포유류 감염 치료를 위한 이들의 용도 {NEW ANTIMICROBIAL COMPOUNDS, THEIR SYNTHESIS AND THEIR USE FOR TREATMENT OF MAMMALIAN INFECTIONS}

본 발명은, 신규한 벤조티아진 유도체, 및 박테리아에 의해 유발되는 포유류 (인간 및 동물)의 감염성 질병, 특히 마이코박테리아(mycobacteria)에 의해 유발되는 결핵 (TB) 및 나병 등의 질병에서의 항균제로서의 이들의 용도에 관한 것이다.

티아지논, 이들의 유도체 및 항균제, 특히 마이코박테리아 (TB)에 대한 항균제로서의 이들의 용도는, 예를 들어 AR 24 25 67 A1, AU 37 04 400 A1, CA 13 22 551 C1 또는 EP 0 245 901 B1에서 공개되었다.

공지된 바와 같이, 이용가능한 치료제에 대해 내성을 발현하는 마이코박테리아로의 결핵 감염이 전세계적으로 위협적으로 증가하고 있다 (문헌 [B.R.Bloom, J.L.Murray, Tuberculosis: commentary on a reemergent killer. Science 1992, 257, 1055-1064]). 다제 내성 (MDR) 마이코박테리아의 발현이 극히 위험하다. 이들은 적어도 가장 활성인 결핵 약물 중 2종, 이소니아지드 및 리팜피신 뿐만 아니라 스트렙토마이신, 피란지나미드 및 에탐부톨에 대해 내성인 마이코박테리아이다. 일부 국가에서 MDR-TB의 비율은 이미 20% 초과이다. XDR-TB (극도 내성 TB)의 첫번째 경우가 지난해 남아프리카공화국에서 진단됨에 따라 상황은 더욱 더 위협적이 되었다. 이제 XDR-TB는 이미 모든 국가에 걸쳐 전파되었다. XDR-TB를 일으키는 마이코박테리아는 제1 라인 TB 약물 리팜피신, 이소니아지드, 피라지나미드, 에탐부톨에 대해 내성을 갖고, 추가로 제2 라인 키놀론 및 아미노글리코시드에 대해 내성을 갖는다 (문헌 [Nature Med. 2007, 13, 295-298]). 일반적으로 전세계적으로 TB 질병의 수 증가와 함께, 이는 연간 약 2,000,000명의 사망자를 발생시키고 있다.

TB 또는 나병과 같은 이러한 질병의 치료를 위해, 특히 약물 내성을 극복하기 위해, 또한 이용가능한 약물의 공지된 극적인 부작용을 극복하기 위해, 새로운 작용 메카니즘을 갖는 새로운 약물이 긴급히 필요하다.

본 발명은 내성 및 약물 불내성에 관한 문제를 극복하기 위한 가능성 있는 새로운 결핵 약물로서 마이코박테리아에 대한 활성을 갖는 새로운 화합물의 생성을 목적으로 한다.

상기 목적은 하기 화학식 I의 화합물을 제공함으로써 해결된다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ 및 R²는, 서로 독립적으로, NO₂, NR⁷R⁸, NHOR⁹, COOR⁹, CN, CONR¹⁰R¹¹, CHO, F, Cl, Br, SO₂NR¹²R¹³, 저급 알콕시, OCF₃, 모노-, 디- 또는 트리플루오로메틸이고;

R³ 및 R⁴는, 서로 독립적으로, H, 1개 내지 3개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, F, Cl, Br, 저급 알콕시이며;

R⁵는 H, 1개 내지 7개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 할로겐화 또는 비-할로겐화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼이고;

R⁶은 라디칼:

이며,

여기서, X는 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 할로겐화 또는 비-할로겐화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼이거나, 또는

R⁵ 및 R⁶은 함께 2가 라디칼:

을 나타내고, 여기서 n은 1 내지 4이고;

R⁷ 내지 R¹³은, 서로 독립적으로, H, 또는 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 포화 또는 불포화, 할로겐화 또는 비-할로겐화, 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, 페닐, 벤질이거나, 또는 R⁷ 및 R⁸은 함께, R¹⁰ 및 R¹¹은 함께, R¹² 및 R¹³은 함께 1개 내지 7개의 사슬 구성원을 갖는 선형 또는 분지형 지방족 2가 라디칼을 나타내며;

R¹⁴ 및 R¹⁵는, 서로 독립적으로, H, 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, F, Cl, Br, NO₂, NH₂, CF₃이다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명은,

2-[4-(2-R¹⁴,5-R¹⁵-페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[4-(2-R¹⁴,6-R¹⁵-페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[4-(3-R¹⁴,5-R¹⁵-페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(메틸)아미노]-8-니트로-6-R²-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(R⁵)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(R⁵)아미노]-8-니트로-6-R²-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(R⁵)아미노]-8-니트로-6-클로로-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(R⁵)아미노]-8-니트로-6-플루오로-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(R⁵)아미노]-8-R¹-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온

(여기서, R¹, R⁵, R¹⁴ 및 R¹⁵는 상기 의미를 가짐)

으로 구성된 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

본 발명은 더욱 더 특별하게는,

2-[4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일]-6,8-디니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[4-(5-클로로-2-메틸페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-2-{4-[3-(트리플루오로메틸)페닐]피페라진-1 -일}-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(에틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(메틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[4-(2-플루오로페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-(4-벤질피페라진-1-일)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-(벤질아미노)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-{메틸[(1R)-1-페닐에틸]아미노}-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,

2-[벤질(메틸)아미노]-6-클로로-8-니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온

으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물에 관한 것이다.

본 발명자들은 새로운 또한 신규한 1,3-벤조티아진-4-온 유도체에 대한 4가지 상이한 합성 방법을 이용하였다. 방법 A, B 및 C는 출발 물질로서 공지된 다치환 2-클로로(브로모)-벤즈카르복스아미드를 사용하도록 제안하며, 이들 중 다수는 문헌에 기재되어 있거나, 또는 유사한 방법에 의해 용이하게 제조할 수 있다 (문헌 [Isaew S. G. Farm. Zh. (Kiev), 2000, 52]; [Makosza M., Nizamov S. Org. Prep, and Proced. Int., 1997, 29, 707]; [Nerin C, Tornes A. R., Domento C, Cacho J. J. Agr. and Food Chem., 1996, 44, 4009]; [Thiel W., Mayer R., Jauer E.-A., Modrow H., Dost H. J. Prakt. Chem., 1986, 328, 497]; [Yokoyama M., Yoshida S., Imamoto T. Synthesis, 1982, 591]; [Romanowski J., Eckstein Z. Pol. J. Chem., 1984, 58, 263]; [Nisato D., Sacilotto R., Frigerio M., Boveri S., Palmisano G., Lesma G. Org. Prep. Proced. Int., 1985, 17, 75]; [Oikawa N., Nakagawa Y., Nishimura K., Ueno T., Fujita T., Pestic. Sci., 1994, 41, 139]; [Welch D.E., Baron R.R., J. Med. Chem., 1969, 12, 299]; [Fuller R. W., Molloy B.B., Day W.A., Roush B.W., March M.M., J. Med. Chem., 1973, 16, 101] 및 기타 다수의 문헌).

방법 A

출발 물질 2-클로로벤즈카르복스아미드를 0 내지 50℃ 하에 약 1/4시간 내지 약 24시간 동안 알콜, 아세톤 또는 이들의 혼합물 중에서 1.0 내지 1.2 몰당량의 디티오카르바메이트의 금속 염으로 처리하였다. 바람직하게는, 이 반응을 실온에서 알콜 중에서 수행한다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 고체 2-디티오카르바모일벤즈카르복스아미드를 여과 제거하였다. 다음 단계에서, 조 생성물을 사용하거나, 이를 적합한 유기 용매로부터 재결정화시킬 수 있다. 2-디티오카르바모일벤즈카르복스아미드를 50 내지 100℃의 온도에서 2 내지 36시간 동안 물, 알콜 또는 물/알콜의 혼합물 중에서 약 알칼리 (예를 들어, Na₂HPO₄, NaHCO₃, Na₂CO₃ 등)로 처리하였다. 바람직하게는, 이 반응을 50 내지 75℃에서 약 24시간 동안 물/알콜의 혼합물 중에서 수행한다. 반응이 완료되면, 2-치환된-4H-1,3-벤조티아진-4-온이 통상의 회수 절차, 예를 들어 에틸아세테이트로의 연화처리(trituration) 또는 물로의 희석, 여과 및 적합한 유기 용매로부터의 재결정화에 의해 수득된다.

방법 B

이 방법은, 벤조티아지논 고리화에서 약 알칼리로서 과량의 금속 디티오카르바메이트를 사용하고, 2-디티오카르바모일벤즈카르복스아미드를 단리하지 않는 것을 제안한다. 따라서, 출발 물질 2-클로로벤즈카르복스아미드를 20 내지 80℃에서 약 3 내지 36시간 동안 알콜, 아세톤 또는 이들의 혼합물 중에서 1.2 내지 2.5 몰당량의 디티오카르바메이트의 금속 염으로 처리할 수 있다. 바람직하게는, 이 반응을 50 내지 75℃에서 약 24시간 동안 알콜 중에서 또는 물/알콜의 혼합물 중에서 수행한다. 목적한 2-치환된-4H-1,3-벤조티아진-4-온이 방법 A로부터의 회수 절차에 의해 수득된다.

방법 C

이 방법에서는, 출발 물질로서 2-클로로벤젠카르복스아미드를 사용한다. 이들 화합물을 약 0.5시간 내지 약 24시간 동안 20 내지 100℃의 온도에서 상이한 알콜, 아세톤, 아세토니트릴 또는 기타 적합한 유기 용매 중에서 1.1 내지 2.0배 과량의 알킬크산토게네이트의 금속 염, 예를 들어 상업적으로 입수가능한 칼륨 에틸크산토게네이트로 처리하였다. 바람직하게는, 이 반응을 실온에서 약 24시간 동안 알콜 중에서 수행한다. 단리된 2-알콕시-4H-1,3-벤조티아진-4-온을, 알콕시기의 상응하는 아민으로의 완전한 교환을 위해 48시간 이하 동안 아세트산, 알콜, 에틸아세테이트, DMF, 아세톤 또는 아세토니트릴 중에서 상응하는 아민 HNR⁵R⁶으로 처리하였다. 공정이 완료된 후, 반응 혼합물을 증발시키고, 물로 희석할 수 있거나, 또는 이를 직접 물로 희석할 수 있다. 목적한 2-NR⁵R⁶-4H-1,3-벤조티아진-4-온은, 통상의 단리 절차, 예를 들어 여과 및 적합한 유기 용매로부터의 재결정화에 의해 회수된다.

방법 D

2-클로로아릴클로로 무수물과 티오시아네이트 염의 반응 및 반응 물질의 상응하는 아민으로의 후속 처리를 이용하는 전형적인 1,3-벤조티아진-4-온 합성 방법을 이용할 수도 있다. 이 방법은 과학 문헌, 예를 들어 [J. Imrich, P. Kristian, Coll. Czech. Chem. Commun., 1982, 47, 3268-3282]; [D. Koscik, P. Kristian, J. Gonda, E. Dandarova, Coll. Czech. Chem. Commun., 1983, 48, 3315-3328]; [D. Koscik, P. Kristian, O. Forgac, Coll. Czech. Chem. Commun., 1983, 48, 3427- 3432]; US 특허 3522247 (T. H. Cronin, H.- J. E. Hess)에 잘 설명되어 있다.

놀랍게도, 본 발명의 화합물은, 특히 마이코박테리아에 대해, 최소 억제 농도 (MIC)가 급속 성장 마이코박테리아에 대해 <0.000012 내지 0.78 ㎍/ml, 엠. 투베르쿨로시스(M. tuberculosis) (다제 내성 균주 포함)에 대해 <0.39 내지 3.12 ㎍/ml (전형적인 방법으로 측정됨), 또한 M. 투베르쿨로시스 H37Rv에 대해 2.0 내지 50.0 ng/ml (알라마르 블루(Alamar Blue) 방법으로 측정됨)의 범위로, 강한 항균 활성을 나타낸다. 놀랍게도, 본 발명의 화합물은 단지 마이코박테리아에 대해 높은 수준의 선택도를 나타내어, 이는 불리한 부작용의 가능성을 크게 감소시킨다.

본 발명의 화합물은 SOS 크로모테스트(chromotest)에서 5 mg/ml에서 비-돌연변이유발성이다 (문헌 [M.Isidori, M. Lavorgna, A.Nardelli, L.Pascarella, A. Parella, Sci. Total Environ., 2005, 346, 87-98]; [M. Bombardier, N. Bermingham, R. Legault, A. Fouquet, Chemosphere, 2001, 42, 931-44]; [D.A. Widdick, D.I. Edwards, Mutat. Res., 1991, 259, 89-93]).

따라서, 본 발명의 화합물은 인간 및 동물에서 결핵 감염 및 기타 마이크로박테리아 감염 치료에 유용하다.

따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 포유류에서의 박테리아 감염의 치료 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

이러한 방법에 사용하기에 바람직한 화학식 I의 화합물은 상기에 구체적으로 열거된 것들이다.

본 발명의 화합물은, 정맥내, 피하 또는 근육내 주사에 의한 국소 또는 비경구 투여를 위한, 또는 비내 적용을 위한 제약상 허용가능한 수성, 유기 또는 수성-유기 매질 중의 희석액 또는 현탁액을 제조함으로써 사용을 위해 제제화되거나; 또는 경구 투여를 위한 통상의 부형제를 함유하는 정제, 캡슐 또는 수성 현탁액으로, 또는 좌약으로서 제조된다.

화합물은 체중 1 kg 당 0.001 내지 1000 mg의 투여량으로 사용될 수 있다.

하기 실험 부분에 기재된 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 제공된 것이나, 이는 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어선 안된다.

본 발명의 화합물의 구조는 합성 및 원소 분석 방식에 의해, 또한 핵 자기 공명 및 질량 스펙트럼에 의해 확립되었다.

<실시양태>

출발 물질

화학약품 및 용매는 알파-아에사르(Alfa-Aesar) (GB)로부터 또는 알드리치 컴파니(Aldrich Co.) (시그마-알드리치 컴파니(Sigma-Aldrich Company, 미국 세인트루이스 소재))로부터 구입하였고, 이들을 추가로 정제하지 않고 합성에 사용하였다. 융점은 BP 절차에 따라 측정하였고, 보정하지 않았다 (일렉트로써멀(Electrothermal) 9001 (GB)). 분석을 원소 기호로만 나타낸 경우, 분석 결과는 이론치의 ±0.3% 내에 있는 것이다 (카를로-에르바(Carlo-Erba) 5500, 이탈리아). NMR 스펙트럼은 배리언 유나이티 플러스(Varian Unity Plus) 400 (USA)으로 측정하였다. ¹H NMR의 변위는 TMS로부터 낮은장으로 ppm으로 기록하였다 (δ). 질량 스펙트럼은 핀니간(Finnigan) SSQ-700 (USA) 기기를 이용하여 직접 주입으로 얻었다. 화합물의 반응성 및 순도는 실리카겔(Silicagel) 60 F₂₅₄ 알루미늄 시트 (머크 컴파니(Merck Co) (독일))를 사용하여 TLC에 의해 조절하였다.

실시예 1

2-[4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일]-6,8-디니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 1)

2-클로로-3,5-디니트로벤즈카르복스아미드 0.5 g을 에탄올 25 ml 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 4-(4-클로로페닐)-피페라진 디티오카르바메이트 나트륨 염 이수화물 0.39 g으로 처리하고, 실온에서 6시간 동안 저장하였다. 반응 혼합물을 냉수 50 ml 내에 붓고, 생성된 황색 침전물을 여과 제거하였다. 에탄올로부터의 재결정화 후에 순수한 최종 생성물을 수득하였다. 2-아미노카르보닐-4,6-디니트로페닐-4-(4-클로로페닐)피페라진-1-카르보디티오에이트는 밝은 황색 결정성 고체였다. 수율 68%. mp 178-180℃. MS m/z 481 (M⁺).

2-아미노카르보닐-4,6-디니트로페닐-4-(4-클로로페닐)피페라진-1-카르보디티오에이트 0.5 g을 에탄올 25 ml 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 Na₂HPO₄ x 12H₂O 0.2 g으로 처리하고, 6시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 냉장기에서 냉각시키고, 밝은 황색 침전물을 여과 제거하고, 물 50 ml 및 메탄올 30 ml로 세척하였다. 에탄올로부터 2회 재결정화 후에 순수한 최종 생성물을 수득하였다. 2-(1,4-2-[4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일]-6,8-디니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온은 밝은 황색 결정성 고체였다. 수율 38%. mp 279-281℃ (EtOH).

실시예 2

2-[4-(5-클로로-2-메틸페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 2)

출발 물질로서 2-클로로-3-니트로-5-트리플루오로메틸벤즈카르복스아미드를 사용하여 실시예 1의 절차를 따름. 밝은 황색 결정성 고체. 수율 44%. mp 158-161℃ (DMF/물).

실시예 3

8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-2-{4-[3-(트리플루오로메틸)페닐]피페라진- 1-일}-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 3)

출발 물질로서 2-클로로-3-니트로-5-트리플루오로메틸벤즈카르복스아미드를 사용하여 실시예 1의 절차를 따름. 밝은 황색 결정성 고체. 수율 33%. mp 201-203℃ (EtOH).

실시예 4

2-[벤질(에틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 4)

에탄올 45 ml 중의 2-클로로-3-아미노-5-트리플루오로메틸벤즈카르복스아미드 1.2 g의 현탁액을 벤질(에틸)디티오카르바메이트 나트륨 염 이수화물 2.0 g으로 처리하고, 14시간 동안 환류시켰다. 암적색 반응 혼합물을 물 70 ml로 희석하고, 냉장기에서 6시간 동안 냉각하고, 밝은 황색 침전물을 여과 제거하고, 에스테르 50 ml로 세척하였다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산/아세톤 3:1) 후에 순수한 최종 생성물을 수득하였다. 2-[벤질(에틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온은 밝은 황색 결정성 고체였다. 수율 40%. mp 94-97℃.

실시예 5

2-[벤질(메틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 5)

실시예 4의 절차에 따름. 밝은 황색 결정성 고체. 수율 47%. mp 120-124℃ (EtOH/물).

실시예 6

2-[4-(2-플루오로페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 6)

실시예 1의 절차에 따름. 밝은 황색 결정성 고체. 수율 37%. mp 164-168℃ (i-PrOH).

실시예 7

2-(4-벤질피페라진-1-일)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 7)

실시예 4의 절차에 따름. 황색 결정성 고체. 수율 51%. mp 161-163℃ (EtOH/DMF).

실시예 8

2-(벤질아미노)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 8)

에탄올 25 ml 중의 2-클로로-3-니트로-5-트리플루오로메틸벤즈카르복스아미드 2.5 g의 현탁액을 나트륨 에틸크산토게네이트 1.75 g으로 처리하고, 실온에서 24시간 동안 저장하였다. 반응 혼합물을 냉수 50 ml에 붓고, 생성된 황색 침전물을 여과 제거하였다. 에탄올/물로부터의 재결정화 후에 순수한 2-에톡시-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온을 백색 결정성 고체로서 수득하였다. 수율 58%. mp 146-148℃.

아세톤 15 ml 중의 2-에톡시-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 0.7 g의 용액을 벤질아민 0.4 ml로 처리하고, 14시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 물 10 ml로 처리하고, 황색 침전물을 여과 제거하고, 물 50 ml로 세척하였다. 에탄올/DMF로부터 2회 재결정화 후에 순수한 최종 생성물을 수득하였다. 2-(벤질아미노)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온은 밝은 황색 결정성 고체였다. 수율 73%. mp 192-194℃.

실시예 9

2-{메틸[(1R)-1-페닐에틸]아미노}-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 9)

실시예 1의 절차에 따름. 밝은 황색 결정성 고체. 수율 54%. mp 110-113℃ (컬럼 크로마토그래피 (아세톤/헥산 5:1)로 정제).

실시예 10

2-[벤질(메틸)아미노]-6-클로로-8-니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온 (화합물 10)

실시예 8의 절차에 따름. 밝은 황색 결정성 고체. 수율 64%. mp 138-141℃ (컬럼 크로마토그래피 (아세톤/헥산 4:1)로 정제).

실시예 11

마이코박테리아에 대한 본 발명의 화합물의 시험관내 억제 활성 측정.

NCCLS 지침서 [National Committee for Clinical Laboratory Standards: Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; 5^th Ed.; Villanova, Ed.; Approved standard Document M7-A5. NCCLS (2000)]에 따른 뮐러-힌톤(Mueller-Hinton) 액체배지 (디프코(Difco))에서의 액체배지 마이크로 희석 방법에 의한 최소 억제 농도 (MIC) 측정에 의해 마이코박테륨 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis) SG 987, 엠. 아우룸(M. aurum) SB66, 엠. 바카에(M. vaccae) IMET 10670 및 엠. 포르투이툼(M. fortuitum) B에 대한 화합물의 항균 활성을 테스트하였다. 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

<표 1>

최소 억제 농도 MIC [㎍/ml]에 의해 측정된 화학식 I의 화합물의 항균 활성

실시예 12

하기 최소 억제 농도 (MIC) 및 최소 살균 농도 (MBC) 측정 방법에 의해 엠. 투베르쿨로시스 H37Rv에 대한 활성을 테스트하였다.

고체 로벤슈타인-옌센(Lowenstein-Jensen) 배지 상에 균주를 접종시켰다. 21일 후, 성장 배양물을 사용하여 5 x 10⁸개의 미생물 세포/ml에 상응하는 접종물 현탁액을 제조하였다. 상응하는 농도 (100.0 내지 0.195 ㎍/ml)의 연구 화합물을 함유하는 2 ml의 액체 슈콜니코바(Shkolnikova) 배지로 상기 현탁액 튜브 0.2 ml를 접종시켰다. 37℃에서 14일 동안 인큐베이션시킨 후, 액체 배지를 갖는 튜브를 3000 RPM으로 15분 동안 원심분리하였다. 상청액 배출 후, 침강물을 멸균 0.9% NaCl 0.8 ml 중에 재현탁시켰다. 현탁액 0.1 ml를 사용하여 도말표본을 제조하고, 이를 이어서 지엘-닐센(Ziehl-Neelsen) 방법에 의해 염색하였다. 잔류 침강물을 0.2 ml 부피로 고체 약물 비함유 로벤슈타인-옌센 배지를 갖는 3개 튜브로 접종시켜 최소 살균 농도 (MBC)를 측정하였다. 37℃에서 21 내지 28일 동안 배양 후, 결과를 기록하였다. 대조군은 연구 제제로 처리되지 않은 테스트-균주로 배양된 튜브였다.

약물의 최소 살균 농도 (MBC)는 고체 배지 상에서 마이코박테리아의 성장을 완전히 억제하는 약물 농도로서 간주하였다. 대조군과 비교하여 고체 배지 상의 성장 콜로니의 수에 있어서의 강한 감소 및 도말표본 내에서의 단지 개별 마이코박테리아의 존재에 의해 정균 효과 (MIC)를 특성화하였다. 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

<표 2>

최소 억제 농도 (MIC) 및 최소 살균 농도 (MBC)에 의해 측정된, 마이코박테륨 투베르쿨로시스 H37Rv 및 임상적 단리물 HSRE 내성 균주 및 XTB 균주에 대한 화학식 I의 화합물의 항균 활성

HSRE: 다제 내성 균주

XTB: 극도 내성 균주

실시예 13

또한, 레사주린 환원 분석 (MIC₉₆)에 의해 엠. 투베르쿨로시스 H37Rv에 대한 활성을 측정하였다. 방법은 문헌 [P. Quillardet, O. Huisman, R. D'Ari, M. Hofnung, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, 79, 5971-5]; [J.C. Palomino, A. Martin, M. Camacho, H. Guerra, J. Swings, F. Portaels, Antimicrob. Agents Chemother., 2002, 46, 2720-2]에 상세히 기재되어 있다. 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

<표 3>

최소 억제 농도 (MIC) [ng/ml]에 의해 측정된 화학식 I의 화합물의 항균 활성

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염.
<화학식 I>

상기 식에서,
R¹ 및 R²는, 서로 독립적으로, NO₂ 또는 트리플루오로메틸이고;
R³ 및 R⁴는 H이며;
R⁵는 H 또는 1개 내지 3개의 사슬 구성원을 갖는 포화 선형 알킬이고;
R⁶은 라디칼:

이며,
여기서, X는 1개 내지 2개의 사슬 구성원을 갖는 포화 선형 알킬이거나, 또는
R⁵ 및 R⁶은 함께 2가 라디칼:

을 나타내고, 여기서 n은 1 내지 4이고;
R¹⁴ 및 R¹⁵는, 서로 독립적으로, H, 1개 내지 5개의 사슬 구성원을 갖는 선형 또는 분지형 알킬, F, Cl, 또는 CF₃이다.
제1항에 있어서,
2-{메틸[(1R)-1-페닐에틸]아미노}-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-[4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일]-6,8-디니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-[4-(5-클로로-2-메틸페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-2-{4-[3-(트리플루오로메틸)페닐]피페라진-1 -일}-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-[벤질(에틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-[벤질(메틸)아미노]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-[4-(2-플루오로페닐)피페라진-1-일]-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-(4-벤질피페라진-1-일)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온,
2-(벤질아미노)-8-니트로-6-(트리플루오로메틸)-4H-1,3-벤조티아진-4-온, 및
2-[벤질(메틸)아미노]-6-클로로-8-니트로-4H-1,3-벤조티아진-4-온
으로 구성된 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염.
제1항 또는 제2항의 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 포함하고, 포유류에서의 미생물 감염의 치료적 또는 예방적 처치를 위한 것이며, 여기서 포유류에서의 미생물 감염은 결핵 또는 나병 감염인, 제약 조성물.
포유류에서의 결핵 또는 나병 감염의 치료적 또는 예방적 처치 방법에 사용하기 위한 제1항 또는 제2항의 화합물 또는 그의 염.
하기 화학식의 2-클로로벤즈카르복스아미드

를 20 내지 100℃의 온도에서 용매 중에서 1.1 내지 2.0배 몰 과량의 칼륨 에틸크산토게네이트와 반응시키는 단계, 및 이어서 생성된 하기 화학식의 2-에톡시-4H-1,3-벤조티아진-4-온

을 20 내지 100℃의 온도에서 용매 중에서 아민 HNR⁵R⁶으로 처리하는 단계를 포함하고, 여기서 R¹ 내지 R⁶은 제1항에 정의된 바와 같은, 제1항의 화학식 I의 2-NR⁵R⁶-4H-1,3-벤조티아진-4-온의 제조 방법.
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