KR101494881B1 - 설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법 - Google Patents

설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR101494881B1
KR101494881B1 KR20130050848A KR20130050848A KR101494881B1 KR 101494881 B1 KR101494881 B1 KR 101494881B1 KR 20130050848 A KR20130050848 A KR 20130050848A KR 20130050848 A KR20130050848 A KR 20130050848A KR 101494881 B1 KR101494881 B1 KR 101494881B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
bacillus subtilis
gene
ywbo
enterococcus faecalis
sulfur
Prior art date
Application number
KR20130050848A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140131791A (ko
Inventor
윤창노
이준석
한원석
이진각
Original Assignee
한국과학기술연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국과학기술연구원 filed Critical 한국과학기술연구원
Priority to KR20130050848A priority Critical patent/KR101494881B1/ko
Publication of KR20140131791A publication Critical patent/KR20140131791A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101494881B1 publication Critical patent/KR101494881B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제와 특이적으로 결합하는 형광 화합물을 포함하는 바실러스 서브틸리스 검출 키트 및 이를 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법에 관한 것이다. 일 구체예에 따르면, 본 발명의 방법 및 키트는 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온에 특이적으로 결합하는 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제를 검출하여 바실러스 서브틸리스와 엔테로코쿠스 패칼리스를 구별하므로, 쉽고 빠르며 정확한 동정 결과를 제공할 수 있다.

Description

설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법{Method for detecting Bacillus subtilis using fluorescence probe binding to sulfur oxidoreductase}
본 발명은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제와 특이적으로 결합하는 형광 화합물을 포함하는 바실러스 서브틸리스 검출 키트 및 이를 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법에 관한 것이다.
세균 동정은 감염성 질병 진단의 가장 중요한 과정 중의 하나이다. 기존의 세균 동정 방법은 많은 검사 종목과 특수 배지나 시약을 필요로 하고, 상용화된 동정 키트는 간단하고 비교적 빠른 결과를 얻을 수 있으나, 키트의 가격이 비싸며 제품에 따라서는 정확한 동정이 이루어지지 않을 수도 있다.
여러 세균으로부터 바실러스 서브틸리스를 구별하는데 있어, 유전자 서열 분석기와 같은 거대 장비를 이용하지 않고, 균주 사이의 단백체 차이를 실험실 수준에서 확인하는 방법은 기존에 알려져 있지 않다.
5-클로로메틸플루오레세인 디아세테이트 (5-chloromethylfluorescein diacetate, CMFDA)는 세포막을 통과하는 형광 화합물로서, 표지된 세포의 이동 분석 등에 사용될 수 있는 세포 추적체 (cell tracker)이다.
본 발명에서는 ywbO 유전자 발현 산물을 형광 화합물로 검출하여 바실러스 서브틸리스와 엔테로코쿠스 패칼리스를 간단하고, 빠르며, 정확하게 구별하는 방법을 제공하고자 한다.
일 양상은 형광 화합물을 이용하여 세균으로부터 바실러스 서브틸리스를 구별하는 방법에 관한 것이다.
다른 양상은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제와 특이적으로 결합하는 형광 화합물을 포함하는 바실러스 서브틸리스 검출 키트를 제공하는 것이다.
일 양상은 2종 이상의 세균으로부터 세균 추출물을 수득하는 단계; 상기 세균 추출물과 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온을 접촉시키는 단계; 및 상기 세균 추출물로부터 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온이 표지된 단백질을 검출하는 단계를 포함하는, 바실러스 서브틸리스를 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명자들은 세균들 중에서 바실러스 서브틸리스를 쉽게 구별할 수 있는 방법을 연구한 결과, 특정 형광 화합물이 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제와 특이적으로 결합한다는 사실을 확인함으로서 본 발명을 완성하였다.
상기 방법은 먼저, 2종 이상의 세균으로부터 세균 추출물을 수득하는 단계를 포함할 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 2종 이상의 세균은 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스 (Enterococcus faecalis)를 포함할 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 2종 이상의 세균은 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "세균 추출물"은 구별하고자 하는 대상의 세균 내에 포함되어 있는 단백체 전체 집단을 의미하는 것으로 해석될 수 있다. 세균 추출물은 당업계에 널리 알려진 방법에 따라, 세균을 용해할 수 있는 키트를 이용하거나, 초음파를 이용하여 세균을 분쇄하고 원심분리를 통해 세균 내 단백체만 얻는 방법 등을 통해 수득할 수 있다.
본 발명은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제에 특이적으로 결합하는 형광 화합물인 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온을 이용하는 것으로, 여러 종류의 세균으로부터 바실러스 서브틸리스를 구별할 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 형광 화합물을 이용하여 엔테로코쿠스 패칼리스로부터 바실러스 서브틸리스를 구별할 수 있다.
다음으로, 상기 세균 추출물과 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온을 접촉시키는 단계를 거치게 된다.
본 발명에서 사용되는 형광 화합물인 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온은 Cell TrackerTM Green CMFDA (Invitrogen, inc. Cat# C2925)의 이름으로 판매되는 화합물로서, 하기 화학식 I의 화학식으로 나타낼 수 있다.
화학식 I
Figure 112013039915601-pat00001
일 구체예에 따르면, 상기 형광 화합물을 상기 수득한 세균 추출물에 직접 접촉시킨 이후, 상기 접촉된 결과물을 전기영동하여 상기 세균 추출물의 단백질 패턴을 확인하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 전기영동은 당업계에 잘 알려진 SDS-PAGE 방법을 통해 이루어질 수 있다.
마지막으로, 상기 방법은 상기 세균 추출물로부터 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온이 표지된 단백질을 검출하는 단계를 거치게 된다.
일 구체예에 따르면, 상기 단백질은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제일 수 있으며, 상기 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제는 서열번호 1에 나타내었다.
상기 형광 화합물은 상기 접촉된 결과물을 전기영동한 후, 상기 형광 화합물을 검출할 수 있는 스캐너를 이용하여 검출할 수 있으며, 상기 형광 화합물이 검출되는 경우 바실러스 서브틸리스가 존재하는 것으로 판단할 수 있다.
다른 양상은 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제를 포함하는 바실러스 서브틸리스 검출용 바이오 마커를 제공한다.
또 다른 양상은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제와 특이적으로 결합하는 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온을 포함하는 바실러스 서브틸리스 검출용 키트를 제공한다.
일 구체예에 따른 바실러스 서브틸리스 검출용 키트는 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온 및 이를 안정화시킬 수 있는 버퍼 등을 포함할 수 있으며, 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제를 검출하는 용도로서 사용될 수 있다.
한편, 상기 키트는 세균들로부터 바실러스 서브틸리스를 구별하는 데 사용될 수 있으나, 가장 바람직하게는, 상기 키트는 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스를 구별하기 위한 것일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 본 발명의 방법 및 키트는 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온에 특이적으로 결합하는 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제를 검출하여 바실러스 서브틸리스와 엔테로코쿠스 패칼리스를 구별하므로, 쉽고 빠르며 정확한 동정 결과를 제공할 수 있다.
도 1은 일 구체예에 따른 방법에 의해 바실러스 서브틸리스 ATCC 6633과 엔테로코쿠스 패칼리스 ATCC 29212의 단백질 패턴을 비교한 결과이다.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 세균의 배양 및 단백체의 준비
바실러스 서브틸리스 ATCC 6633과 엔테로코쿠스 패칼리스 ATCC 29212를 ATCC로부터 구입하여 단백체를 준비하였다. 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스를 각각 1 ml의 LB broth (DifcoTM LB Agar, Becton, Dickinson and Company, Lot#: 0049528)에 접종하여 37℃에서 2시간 동안 배양한 후, 20 ㎕를 LB Agar plate (DifcoTM LB Agar, Becton, Dickinson and Company, Lot#: 0137418)에서 배양하여, 단일 콜로니를 얻은 다음, 100 ml의 LB 배지에 배양하였다. 배양한 세균을 원심분리하여 상층액을 버리고, PBS 용액(pH 7.4)으로 2번 씻어 준 후, Genlantis 사의 SoluLyse kit(Cat #: L200125)를 이용하여 최종적으로 20 mM Tris-HCl, pH 7.5에 용해된 상기 세균들의 단백질 혼합물 용액을 얻었다.
실시예 2. 형광 화합물 처리 및 SDS - PAGE 이미지 분석
20 mM Tris-HCl, pH 7.5의 조건에서, 동일한 농도의 상기 세균 단백질 혼합물 용액에 DMSO 1%에 포함된 20 μM의 상기 형광 화합물을 처리하고, 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션 하였다. 반응을 마친 후, Laemmli 샘플 버퍼를 넣고, 95℃에서 2분 동안 가열한 다음, 15% SDS가 포함된 폴리아크릴아미드 겔에 로딩하여 전기영동(120V 20분, 이어서 180V 60분)한 후, 상기 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스의 단백질의 패턴을 형광 SDS-PAGE Scanner (TyphoonTM 9400, GE Health Science)로 확인하였다. 이때, Cell TrackerTM Green CMFDA의 표지 단백질 이미지는 TyphoonTM 9400 기기의 ex: 488 nm, em: 526-SP 조건에서 얻었다.
실시예 3. 형광 화합물과 결합하는 단백질 확인
도 1에서 나타낸 바와 같이, SDS-PAGE 결과로부터 엔테로코쿠스 패칼리스의 단백질 패턴에서는 나타나지 않지만, 바실러스 서브틸리스의 단백질 패턴에서 보이는 22 kDa 정도의 단백질이 Cell TrackerTM Green과 상호 작용함을 알 수 있었다. 이후, 상기 22 kDa의 단백질을 확인하기 위하여 다음과 같은 생물정보학적 방법을 사용하였다.
상기 형광 화합물과 22 kDa 단백질의 상호 작용을 예측하기 위해서는 각각의 3차원 구조가 필요하다. 이를 위해, 단백질 구조 모델링 프로그램을 사용하였으며, 본 실시예에서는 호몰로지 모델링(homology modeling) 프로그램인 'MODELLER' (University of California San Francisco)를 이용하여 상기 22 kDa 단백질 3차원 구조를 예측하였다. 또한, 상기 22 kDa 단백질과 Cell TrackerTM Green과의 상호작용을 예상하기 위하여 단백질과 화합물의 3차원 구조를 바탕으로 상호작용을 예측할 수 있는 도킹(docking) 프로그램을 사용하였다. 본 실시예에서는 'AutoDock' (The Scripps Research Institute) 프로그램을 이용하여 상기 22 kDa 단백질과 상기 형광 화합물의 결합을 예측하였다. 그 결과, 상기 22 kDa 단백질은 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제(Sulfur oxido-reductase)임을 확인할 수 있었다. 상기 결과로부터 Cell TrackerTM Green은 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제와 상호 작용함을 확인할 수 있었다. 따라서, Cell TrackerTM Green을 사용하여 ywbO 유전자로부터 발현되는 설퍼 옥시도리덕타아제의 존재 여부를 확인함으로써, 바실러스 서브틸리스와 엔테로코쿠스 패칼리스를 구별할 수 있음을 확인할 수 있었다.
<110> Korea Institute of Science and Technology <120> Method for detecting Bacillus subtilis using fluorescence probe binding to sulfur oxidoreductase <130> PN100795 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 200 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <400> 1 Met Thr Val His Ile Lys Val Tyr Ser Asp Tyr Val Cys Pro Phe Cys 1 5 10 15 Phe Val Gly Lys Ala Ala Phe Glu Glu Ala Ile Lys Gly Lys Asp Val 20 25 30 Glu Val Glu Trp Met Pro Phe Glu Leu Arg Pro Ser Pro Ser Pro Gln 35 40 45 Leu Asp Pro Val Asn Asp Pro Ser Lys Gln Tyr Met Trp Gln Thr Ser 50 55 60 Ile Gln Pro Met Ala Glu Lys Leu Gly Val Glu Ile Asn Phe Pro Asn 65 70 75 80 Val Ser Pro His Pro Tyr Thr Asp Leu Ala Phe Glu Gly Phe His Phe 85 90 95 Ala Lys Glu Tyr Asn Lys Gly His Glu Tyr Asn Thr Arg Val Phe Gln 100 105 110 Ala Phe Phe Gln Glu Asp Gln Asn Ile Gly Asp Ile Asp Ile Leu Thr 115 120 125 Lys Leu Ala Glu Glu Val Gly Leu Asp Gly Ala Ser Phe Lys Ser Ala 130 135 140 Leu Glu Thr Arg Thr Tyr Gln Asp Val Gln Arg Gln Ala Leu Lys His 145 150 155 160 Ala Tyr Glu Glu Ala Asp Ile Thr Ala Val Pro Thr Phe Ile Ile Gly 165 170 175 Asp Thr Val Ile Pro Gly Ala Ala Gly Lys Asp Val Phe Glu Lys Ala 180 185 190 Ile Ser Asp Glu Gln Lys Lys Lys 195 200

Claims (8)

  1. 2종 이상의 세균으로부터 세균 추출물을 수득하는 단계;
    상기 세균 추출물과 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온을 접촉시키는 단계; 및
    상기 세균 추출물로부터 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온이 표지된 단백질을 검출하는 단계를 포함하는, 바실러스 서브틸리스를 검출하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 2종 이상의 세균은 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스를 포함하는 것인 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 접촉시키는 단계 이후, 상기 접촉된 결과물을 전기영동하여 상기 세균 추출물의 단백질 패턴을 확인하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 단백질은 설퍼 옥시도리덕타아제인 것인 방법.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 설퍼 옥시도리덕타아제는 바실러스 서브틸리스의 ywbO 유전자로부터 발현되는 것인 방법.
  6. 삭제
  7. 3',6'-비스(아세틸옥시)-5-(클로로메틸)-스피로(이소벤조퓨란-1(3H),9'-(9H)잔텐)-3-온을 포함하는 바실러스 서브틸리스 검출용 키트.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 키트는 바실러스 서브틸리스 및 엔테로코쿠스 패칼리스를 구별하기 위한 것인 키트.
KR20130050848A 2013-05-06 2013-05-06 설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법 KR101494881B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130050848A KR101494881B1 (ko) 2013-05-06 2013-05-06 설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130050848A KR101494881B1 (ko) 2013-05-06 2013-05-06 설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140131791A KR20140131791A (ko) 2014-11-14
KR101494881B1 true KR101494881B1 (ko) 2015-02-24

Family

ID=52453047

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR20130050848A KR101494881B1 (ko) 2013-05-06 2013-05-06 설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101494881B1 (ko)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0077149A1 (en) 1981-10-01 1983-04-20 Robert Edward Silman Microorganism identification technique
WO1999045143A2 (en) 1998-03-06 1999-09-10 Novo Nordisk A/S A fluorescence polarization screening method
WO2010059051A2 (en) 2008-11-20 2010-05-27 Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno Rapid fret based pathogen diagnosis

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0077149A1 (en) 1981-10-01 1983-04-20 Robert Edward Silman Microorganism identification technique
WO1999045143A2 (en) 1998-03-06 1999-09-10 Novo Nordisk A/S A fluorescence polarization screening method
WO2010059051A2 (en) 2008-11-20 2010-05-27 Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno Rapid fret based pathogen diagnosis

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
서열번호 1 *
서열번호 1*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140131791A (ko) 2014-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Olaya-Abril et al. Another turn of the screw in shaving Gram-positive bacteria: Optimization of proteomics surface protein identification in Streptococcus pneumoniae
US20240141410A1 (en) Detection of a target polynucleotide
Culha et al. Leishmaniasis in Turkey: determination of Leishmania species by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS)
MX2019009045A (es) Nuevas luciferasas y metodos para su uso.
CN107033240A (zh) 一种新的棘球蚴病诊断抗原及其应用
CN107446034A (zh) 一组荧光蛋白探针及其制备方法和应用
KR101455176B1 (ko) ｙｑｊＬ유전자 발현 산물의 형광 영상화를 통한 바실러스 서브틸리스 검출 방법
KR101343352B1 (ko) ｔｈｉＤ 유전자 발현 산물의 형광 영상화를 통한 바실러스 서브틸리스 검출 방법
CN109868240B (zh) 一种梅毒螺旋体p15-17-47突变体、编码基因、重组载体、重组工程菌及其应用与制备方法
Gurung et al. In silico screened Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) recombinant proteins upregulated under stress conditions are immunogenic in sheep
KR101494881B1 (ko) 설퍼 옥시도리덕타아제 결합 형광 화합물을 이용한 바실러스 서브틸리스 검출 방법
CN108139401A (zh) 诊断莱姆病并用于预测治疗后莱姆病螺旋体消除的组合物和方法
CN111197098A (zh) 一种从痰液中检测结核分枝杆菌的方法
Kamusoko et al. Purification and amplification of DNA from cellulolytic bacteria: Application for biogas production from crop residues
KR101343353B1 (ko) 엔테로박터 및 에스케리키아의 구별 방법
KR101343357B1 (ko) ｙｏｇＡ 유전자로부터 발현되는 디히드로게나아제를 활용한 엔테로박터 클로아세 및 바실러스 서브틸리스의 구별 방법
KR101343356B1 (ko) ＭｅｔＮ 마커를 활용한 엔테로박터 및 에스케리키아의 구별 방법
KR101343355B1 (ko) ｙｂｉＹ 유전자 발현 산물을 활용한 에스케리키아 및 엔테로코쿠스의 구별 방법
KR101343354B1 (ko) 엔테로박터 및 엔테로코쿠스의 구별을 위한 ｐｆｋＢ 유전자 마커의 활용
KR101343351B1 (ko) 엔테로박터 클로아세 및 에스케리키아 콜라이의 구별 방법 및 키트
Mohammadian et al. Preparative SDS-PAGE electroelution for rapid purification of alkyl hydroperoxide reductase from Helicobacter pylori
Dey et al. Lip L protein antibodies: a new promising diagnostic marker for tuberculosis
Chen et al. Active site analysis of sortase A from Staphylococcus simulans indicates function in cleavage of putative cell wall proteins
KR101343350B1 (ko) 형광 화합물 패턴을 이용한 에스케리키아 콜라이 종 균주의 구별 방법 및 키트
Yi et al. Immunological Patterns from Four Melioidosis Cases: Constant and Variable Protein Antigens

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190201

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20200203

Year of fee payment: 6