KR101473243B1

KR101473243B1 - 에이즈 감염여부 진단 방법

Info

Publication number: KR101473243B1
Application number: KR1020120122233A
Authority: KR
Inventors: 서윤희; 최진성
Original assignee: 주식회사 이비오
Priority date: 2012-10-31
Filing date: 2012-10-31
Publication date: 2014-12-16
Also published as: KR20140055409A

Abstract

본 발명은 혈액을 채취하는 대신 구강점액을 이용하여 에이즈의 감염여부를 신속하게 확인할 수 있는 에이즈 감염여부 진단방법에 관한 것으로서, 구강점액을 채취하는 샘플링패드, 금 결합체가 있는 결합패드, 감염여부를 진단하는 분석멤브레인패드 그리고 분석 후 잔여물질을 흡수하는 흡수패드로 구성되는 진단패드의 샘플링패드로 구강점액을 채취한 후, 샘플링패드 부위를 버퍼용액이 담긴 용기에 담가서 버퍼용액과 구강점액이 희석됨으로 인한 구강점액의 농도가 낮아지게 되어 모세관 현상으로 상부로 상승하고 결합패드를 거쳐 분석멤브레인패드에서 감염여부를 판단하고 분석 후 잔여물질은 흡수패드에서 흡수함을 특징으로 하는 에이즈 감염여부 진단방법을 개시한다.

Description

에이즈 감염여부 진단 방법{A method of diagnosis for HIV}

본 발명은 감염여부 진단방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 혈액을 채취하는 대신 구강점액을 이용하여 에이즈의 감염여부를 신속하게 확인할 수 있는 에이즈 감염여부 진단방법에 관한 것이다.

일반적으로 인간이 에이즈에 감염되었는지의 여부를 확인하기 위해서는 혈액을 채취한 다음, 채취한 샘플을 일정한 지점인 샘플패드에 접종하는 2단계 진단방법이 사용된다.

그러나 혈액을 이용한 감염여부를 확인하는 진단키트를 사용하는 경우 혈액의 채취단계에서의 통증 등으로 인한 불편함과 혈액채취상의 안정성 문제제기로 많은 거부감이 있어 왔다.

이러한 문제점 등으로 인해 2004. 미국의 오라슈어(Orasure)사에서 구강점액을 이용한 HIV 진단키트를 개발하여 세계 각지의 HIV 보균자를 대상으로 테스트를 거쳐 미국 FDA의 승인을 받았으며, 미국내에서는 2012년에 가정에서도 사용할 수 있도록 약국판매가 승인되었고, 대형할인매장에서도 판매가 예정되어 있다.

그러나 개당 가격이 60달러 수준으로 매우 비싸며, 국내에서도 수입 판매되고 있으나 개당 6만원을 넘는 등 고가로 판매되고 있는 실정이다.

한편 전세계 HIV 감염자는 2012년 현재 4,500만명이 넘는 것으로 추산되고 있느며, 미국내에서만 매년 약 5만여명이 HIV에 감염되고 있고 약 120만명의 감염자 중 20% 정도는 감염여부를 모르고 있는 것으로 알려져 있다.

상기와 같이 전세계적으로 해마다 증가하는 HIV감염자에 대하여 그 감염여부를 저가로 확인할 수 있는 자가진단방법의 개발 필요성이 대두되고 있다.

또한 구강을 이용해 추출이나 채취된 것에 대한 종래기술로는 등록특허 제 10-0168688호가 있으나 상기 특허는 면역학적 시험분야에 관한 것으로 면역학적 분석을 위한 경구적 수집을 위해, 시험을 위해 구강에서 물질을 수집하여 고농도로 회수하기 위해 패드에 유효농도로 존재하는 고장액의 염으로 함침시킨 흡수성 패드를 구강 내로 삽입한 다음, 구강에서 패드를 제거한 후, 분석시험을 위해 수집된 물질을 패드로부터 차후 제거하는 동안 패드를 보존하는 것으로 구성되는 것을 개시하고 있으나 에이즈 감염여부의 직접진단방법과는 다른 것으로 판단된다.

본 발명은 상기와 같은 필요성에 의해 혈액이 아닌 구강점액을 샘플패드로 채취한 다음 바로 시약에 넣어 모세관 현상을 이용해 에이즈 감염여부를 진단할 수 있어서 편리하고도 안전하며, 집에서 혼자 사용할 수 있어서 익명성이 보장되고 경제적인 에이즈 감염여부 진단방법을 제공함에 그 목적이 있다.

본 발명은 상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 구강점액을 채취하는 샘플링패드, 금 결합체가 있는 결합패드, 감염여부를 진단하는 분석멤브레인패드 그리고 분석 후 잔여물질을 흡수하는 흡수패드로 구성되는 진단패드의 샘플링패드로 구강점액을 채취한 후, 샘플링패드 부위를 버퍼용액이 담긴 용기에 담가서 버퍼용액과 구강점액이 희석됨으로 인한 구강점액의 농도가 낮아지게 되어 모세관 현상으로 상부로 상승하고 결합패드를 거쳐 분석멤브레인패드에서 감염여부를 판단하고 분석 후 잔여물질은 흡수패드에서 흡수하는 방법을 제공한다.

또한 상기에서 분석멤브레인패드에는 테스트라인과 컨트롤라인을 형성시켜 HIV의 감염여부를 판단하고 분석의 성ㅇ패 유무를 확인할 수 있게 함이 바람직하다.

본 발명의 방법은 동일자 출원하는 에이즈 감염여부 진단키트를 사용하면 보다 효과적으로 실행할 수가 있다.

본 발명에 의하면, 본 발명의 샘플링패드로 구강점액을 채취한 다음, 상기 샘플링패드쪽을 버퍼용액이 담긴 용기에 담가놓기만 하면 모세관 작용으로 버퍼용액과 구강점액이 분석멤브레인 패드를 거치게 되고 확인자는, 예를 들어 키트의 개방부를 통해 HIV 감염여부를 손쉽게 확인할 수 있으므로 안전하면서도 편리하고 익명성을 보장받을 수 있으면서도 용이하게 본 발명의 방법을 사용할 수가 있게 된다.

도 1은 본 발명의 방법을 수행하기에 적합한 진단패드 개략도.
도 2,3,4는 본 발명의 방법을 수행하는 개략도.

이하에서는 첨부도면을 참조하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

하기의 설명은 본 발명의 이해와 실시를 돕기 위한 것이지 본 발명을 이에 한정하는 것은 아니다. 당업자들은 이하의 특허청구의 범위에 기재된 본 발명의 사상내에서 다양한 변형 및 수정이 있을 수 있음을 이해할 것이다.

도 1은 본 발명의 방법을 사용하기에 적합한 진단패드(10)를 나타낸 것으로 샘플링패드(11), 결합패드(12), 테스트라인(14)과 컨트롤라인(15)이 형성된 분석멤브레인패드(13), 그리고 흡수패드(16)로 구성되어 있다.

상기에서 샘플링패드(11)부는 구강점액을 흡수 채취하는 곳으로 항체를 버퍼액에 의해 희석하여 결합패드(Conjugate pad; 12)쪽으로 운반하게 한다. 재질은 구강점액을 흡수채취할 수 있으면 모두 가능하나 유리섬유로 함이 바람직하다.

결합패드(12)부에는 금결합체(Gold conjugate)가 존재하여, HIV항원/금결합체의 복합체가 형성되는 부위이며, HIV항원/금결합체 복합체를 분석멤브레인(Analytical Membrane)패드(13)부로 운반하게 된다. 결합패드(12)는 폴리에스터 재질로 하여 약 200㎛ 두께로 함이 바람직하다.

상기 결합패드(12)는 HIV 항원단백질과 금의 결합체가 건조되어 들어 있어야 하는 패드로 항원단백질-금결합체와 시약 및 테스트 샘플이 잘 이동할 수 있는 성질을 지닌 폴리에스터 재질이 적합한 것으로 판단되었다. 시험결과 폴리에스터는 비특이적 결합이 적고 인장강도가 좋은데 비해 유리섬유는 비특이적 결합이 적으나 인장강도면에서 바람직하지 않고, 셀룰로오스 섬유는 비특이적 결합이 매우 적으나 홀드-업 볼륨(hold-up volume)이 커서 젖게 되면 약해지는 성질을 나타내었다.

또한, 분석멤브레인패드(13)부는 단백질 고정이 잘 되어야 하고 시약과 함께 이동해 온 단백질이 멤브레인에 고정된 단백질과 잘 결합된 후 떨어지지 않아야 한다. 따라서 재질은 니트로셀루롤오즈 멤브레인이 적합한 것으로 판단되었다. 여러물질을 비교해본바, 상기 니트로 셀룰로오즈는 결합력이 일렉트로스테틱(electrostatic)으로 나타난 반면, 폴리비닐리덴 플루오라이드는 하이드로포빅(hydrophobic)으로, 나일론계는(이오닉) 일렉트로스테틱((ionic)electrostatic)으로, 폴리에테르술폰(polyether sulfone)은 하이드로포빅으로 나타나, 니트로 셀루로오스로 하였다.

분석멤브레인패드(13)의 두께는 실험결과 약 200㎛ 두께에 기공크기는 약 10㎛가 바람직하였다.

상기 패드(13)부에는 테스트라인(14)과 컨트롤라인(15)이 형성되어 있어서 HIV 감염여부를 테스트라인(14)의 색깔로 양성, 음성을 판단하고, 컨트롤라인(15)을 확인해 항원, 항체반응인 실험결과의 성·패 여부를 판단하여 테스트의 신뢰성을 확보하여 준다. 여기서 컨트롤라인(15)이 실험 후 나타나지 않으면 실험의 실패로 판단한다.

그 다음 흡수패드(Absorbent Pad; 16)부는 흡수를 잘하는 능력을 가진 것으로 많은 시료가 키트안으로 빨려들어 올 수 있게 해주어야 하므로 셀룰로오즈 재질의 필터가 바람직하다. 분석 후 잔여물질을 흡수하는 역할을 한다.

또한 본 발명에서 사용하는 분석멤브레인(13) 패드부의 테스트라인(14)에서의 사용을 위해 구강점액내 HIV항체와 결합하고 항원인 재조합 HIV항원(HIV1, HIV2)을 금 입자와 결합시켜 결합패드에 배치한다.

또한 결합패드(12)에서의 금결합체 제조는 먼저 HAuCl₄ 용액을 끌인 후 환원제로 구연산나트륨(sodium cirtrato)를 첨가하여 40㎚ 콜로이달 골드(colloidal gold)를 제조한 후 여기에 항원 50㎍을 넣은 후 30분간 혼합하고 BSA를 첨가하여 항원이 붙지 않은 골드표면을 블로킹(blocking)하고, 원심분리하여 골드에 붙지 않는 여분의 항원이 들어 있는 상등액을 제거하고 펠릿(pellet) 부분만 버퍼(buffer)로 녹여 사용한다.

상기와 같은 진단패드(10)를 예를 들어 사용하여서 본 발명의 방법을 수행하는 경우를 설명한다.

먼저 진단패드(10)의 샘플링패드(11) 부위로 구강내의 점액을 채취한다. 그 다음 진단패드의 샘플링패드(11) 부위를 버퍼용액이 담긴 용기(도시되지않음)에 비스듬히 꽂아 둔다. 왜냐하면 점액은 점성이 강하므로 진단패드를 수직으로 세우더라도 모세관 현상을 나타낼 수 없기 때문에 점액을 버퍼와 희석시켜 패드(10)의 상부(도 2,3,4에서의 우측)로 이동시키기 위함이다.

상기와 같이 샘플링패드(11)에서의 구강점액이 이동함에 따라 그 다음의 골드결합체가 존재하는결합패드(12)에서 HIV항원/골드결합체의 복합체가 형성되고 이는 그 다음의 분석멤브레인패드(13)상의 HIV항원 및 2차항체와 결합하여 식별가능한 색을 나타내게 된다. 즉 패드(13)상에 형성된 테스트라인(14)에서 도 3에서와 같이 하나의 선이 나타나면 음성으로, 도 4에서와 같이 두 개의 선이 나타나면 양성으로 판단하여 HIV의 감염여부를 판단할 수 있게 된다.

또한 분석멤브레인패드(13)상의 컨트롤라인(15)이 나타나지 않으면 항원, 항체 반응이 제대로 된 것이 아닌 것으로 판단하여 실패로 판단한다. 그 다음의 잔여물질은 흡수패드(16)부에서 흡수하게 하면 된다.

10 : 진단패드
11 : 샘플링패드부 12 : 결합패드부
13 : 분석멤브레인패드부 14 : 테스트라인
15 : 컨트롤라인 16 : 흡수패드부

Claims

구강점액을 채취하는 유리섬유재질의 샘플링패드, 금 결합체가 있는 폴리에스터재질의 결합패드, 감염여부를 진단하며 니트로 셀룰로오즈재질이고, 테스트라인과 컨트롤라인이 형성된 분석멤브레인패드 그리고 분석 후 잔여물질을 흡수하는 셀룰로오즈재질의 흡수패드로 구성되는 진단패드의 상기 샘플링패드로 구강점액을 채취한 후, 항체를 버퍼액 희석하여 상기 결합 패드 쪽으로 운반하고, HIV항원/금 결합체의 복합체를 형성해 상기 분석 멤브레인패드로 운반하여 상기 테스트라인과 컨트롤라인을 통해 감염여부 및 실패여부를 판단하고 잔여물질은 흡수패드에서 흡수하도록하여 에이즈 감염여부에 필요한 정보를 제공하기위한, 진단패드의 이용방법.
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