KR101469352B1 - 무청 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 건강 기능 식품 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 무청(무우의 지상부: Raphanus sativus L. leaves) 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성(anti-bacterial) 약학 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 무청의 에탄올 추출물로부터 분획 조제된 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 상기 부탄올 분획물을 포함하는 건강 기능 식품에 관한 것이다. 본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 건강 기능 식품은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 그람음성세균 및 그람양성세균 모두에서 강력한 항균효과를 나타내며, 특히, 본 발명의 약학 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분인 무청 추출물의 부탄올 분획물은 급성경구독성이 나타나지 않으며, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 항세균 활성의 감소가 나타나지 않아, 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Description

무청 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 건강 기능 식품{AN ANTI-BACTERIAL PHARMACEUTICALS COMPRISING THE BUTANOL FRACTION OF RAPHANUS SATIVUS L. LEAVES EXTRACT AS AN EFFECTIVE COMPONENT AND A HEALTH FUNCTIONAL FOOD COMPRISING THE SAME}
본 발명은 무청(무우의 지상부: Raphanus sativus L. leaves) 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성(anti-bacterial) 약학 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 무청의 에탄올 추출물로부터 분획 조제된 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 상기 부탄올 분획물을 포함하는 건강 기능 식품에 관한 것이다.
미국 질병관리예방센터(U.S. Center for Disease Control and Prevention)에 따르면, 병원 내 혈류 감염이 미국에서 주된 사망 원인 중 하나이다. 또한, 피부 및 연조직을 통한 병원성 세균의 감염은 보편적인 의학적 질병으로 인식되어 있으며, 주로 외상 또는 수술에 의하여 유발되는 것으로 이해되고 있다. 스태필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus) 및 스트렙토코커스 피오제네스(Streptococcus pyogenes)가 심부 조직 감염 환자로부터 가장 흔히 분리되는 병원균이지만, 건강한 피부에서 발견되는 것들을 포함하여 임의의 병원성 유기체도 다양한 세균성 감염을 유발할 수 있다.
많은 병원성 세균의 감염은 감염의 중증도에 따라 그 처치 방법이 다르지만, 경구용 항미생물제 및 국소 청결로 성공적인 치료가 가능하다. 그러나, 근원적인 위험 인자(예를 들면, 혈관 혈류이상, 당뇨) 및/또는 치료하기 어렵거나 다중-내성인 세균에 의해 유발된 감염을 갖는 환자에서 흔히 발생하는 보다 심하거나 복잡한 감염은 정맥 내 항미생물제 치료 및 침입성 외과적 조직제거 등의 조치가 필요할 수도 있다.
스태필로코커스는 임상적 및 치료적 측면에서 중요시되며, 1960년대 초 이래로 병원 내 감염과 점점 더 관련되어 왔다. 응고효소-양성종인 메티실린-내성 스태필로코커스 오레우스(MRSA)는 지역사회 감염 및 병원 내 감염 모두에서 오랫동안 문제가 되었으며, 여러 응고효소-음성 스태필로코커스는 특히 중환자실과 같은 집중적인 관리 시설 내의 환자의 치료에서 인간 기회 감염균으로 인식되어 왔다. 임상적 관심에 대한 또 다른 주 원인은 세계의 많은 지역에서 페니실린-내성 스트렙토코커스 뉴모니에(Streptococcus pneumoniae) 균주의 분리가 증가하고 있는 것이다.
글라이코펩타이드계 항생물질인 반코마이신이 다중-약물-내성 그램-양성균, 특히 MRSA, 응고효소-음성 스태필로코커스(CoNS) 및 엔테로코커스에 의해 야기된 심한 병원 내 감염에 대해 사용되었다. 반코마이신은 MRSA에 의해 야기된 감염에 사용되며, 최근까지 모든 분리균은 한결같이 민감성을 나타내었다. 그러나, 반코마이신에 대해 중간의 민감성 또는 내성을 갖는 스태필로코커스 오레우스의 균주의 분리가 현재 증가하는 빈도로 보고 되고 있다.
이와 같이, 상기 병원균 중 일부균에 의해 유발된 심한 감염에 대한 치료 옵션은 매우 제한되어 있으며, 특히 반코마이신에 대한 그램-양성 병원균의 최근 생긴 내성은 보다 효과적인 새로운 항생물질 개발의 필요성을 증가시키고 있다.
한편, 무(Raphanus sativus L.)는 쌍떡잎 식물, 양귀비목, 겨자과에 속하는 한해살이 또는 두해살이 초본으로, 품종에 따라 비대한 지하부 뿌리(무)와 지상부 엽채(무청)를 함께 식용으로 사용하기도 하고, 뿌리만 또는 무청만 식용하기도 한다. 한국에서는 지역에 따라 무우, 무수, 무시 등으로 불리기도 하며, 주로 3종류가 재배되고 있다. 중국을 통해 들어온 재래종(조선무)은 김치, 깍두기, 무말랭이 등으로 주로 생산 소비되며, 중국에서 일본을 거쳐 들어온 일본무 계통은 주로 단무지로, 유럽을 통해 들어온 샐러드용 무는 주로 샐러드로 이용된다. 우리나라 대표 채소중의 하나인 무는 수분함량이 93%, 조단백 1%, 당질 3%를 함유하며, 다량의 비타민C와 미네랄을 포함하는 것으로 알려져 있어 겨울철 비타민 공급원으로 주요한 역할을 해왔다(Ku 등, 2008. J. Korean Soc. Food Sci . Nutr. 37: 390-395). 또한, 무씨는 내복자, 나복자 등으로 불리며, 한방에서는 약용으로 사용하기도 한다. 한편, 무청은 건조하여 국이나 나물로 조리하여 이용하였으며, 실제 과거 채소가 귀했던 겨울철에 단백질, 비타민, 미네랄, 식이섬유 등을 공급해온 주요 식품이었다. 그러나, 최근 도시와 농촌의 격리, 산업화의 정착, 식생활 습관의 변화 등으로 인해 무가 대량생산되는 시기에 무청은 제대로 이용되지 못하고 폐기되고 있는 실정이다. 그러나 무청을 말린 우거지의 경우 35% 이상이 식이섬유이고 20%의 높은 단백질 함량과 미네랄을 가지고 있음(Ku 등, 2006. J. Korean Soc . Food Sci . Nutr. 34: 780-785)이 알려지면서 점차 무청의 효율적인 이용에 관심이 증가되고 있다.
무에 대한 연구로는, 무 재배, 저장, 가공 등에 대한 연구가 주로 이루어져 왔으며, 생리활성으로는 무 추출물의 항산화 활성(Beevi, S. S 등, 2012. Nat . Prod . Res. 26: 557-563), 인간 암세포에 대한 성장억제 활성(Beevi, S. S. 등, 2010. Plant Food Hum. Nutr. 65: 200-209), 무 식이섬유에 의한 배변 촉진 활성(Shimotoyodome, A., S. 2001, Digest . Dis . Sci . 46: 1482-1489] 및 항염증 활성(Sim 등, 2010, J. Korean Soc. Food Sci . Nutr. 39: 1097-1101) 등이 알려져 있다. 한편, 무청에 대한 연구로는 조리방법에 따른 미네랄 함량 변화, 열풍건조에 따른 품질 특성변화, 무청의 건조방법에 따른 미생물 변화(Ku 등, 2006. Korean Soc . Food Sci . Nutr . 35: 649-654) 등이 알려져 있으며, 생리활성에 대한 보고로는 무청의 항고혈압 활성(Chung 등, 2012. Nutr . Res. Pract . 6: 308-314), 유방암 및 폐암세포 성장억제활성(Yim 등, 2004. J. Korean Soc. Food Sci . Nutr . 33: 287-290), 항산화 활성 및 콜레스테롤 축적 억제효과 (Rhee 등, 2005. J. Korean Soc . Food Sci . Nutr. 34: 1157-1163), 장기능 개선 및 혈중 지질 개선 효과(Jang 등, 2008. J. Korean Soc . Food Sci . Nutr. 37: 1258-1263) 등이 있다. 그러나, 재래종 조선무의 무청에 대한 항균 활성에 대한 보고는 없으며 활성분획물 및 활성물질에 대한 연구는 아직 미미한 상태이다.
한편, 무와 관련된 특허로는, 대한민국 등록특허 제10-1152905호(등록일자: 2012.5.29) "쌈무의 제조방법", 대한민국 특허 제10-0881635호(등록일자: 2009.02.03) "무 및 무잎을 이용한 음료 및 의 제조방법", 대한민국 특허 제10-1028865호(등록일자: 2011.04.12) "무로부터 설포라펜을 분리하는 방법 및 이의 용도" 등이 알려져 있으며, 무청과 관련된 특허로는 대한민국 등록특허 제10-0636366호(등록일자: 2006.10.12) "철의 흡수능이 개선되고 식이섬유가 풍부하며, 간암억제효능을 갖는 무청농축물의 제조방법", 대한민국 등록특허 제10-0738680호(등록일자: 2007.07.05) "식이섬유가 강화된 무청의 제조방법 및 이를 이용한 식품", 대한민국 등록특허 제 10-1027128호(등록일자: 2011.03.29) "시래기 제조방법 및 그 제조장치", 대한민국 등록특허 제 10-0901254호(등록일자: 2009.05.29) "즉석식 시래기 제조방법" 등이 알려져 있다. 그러나, 현재까지 무청 추출물의 유기용매 분획물의 항세균성 제제 관련 특허는 보고된 바 없다.
KR 10-0881635 B
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 대량으로 재배되면서도 대부분 폐기되고 있는 식용 무청으로부터 부탄올에 추출되는 유효성분을 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 상기 부탄올 분획물을 포함하는 건강 기능 식품을 제공하고자 하는 것이다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 무청(Raphanus sativus L. leaves) 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물을 제공한다.
상기 무청 추출물은 물, 주정, 및 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택된 용매로 추출되는 것이 바람직하다.
상기 무청 추출물은 알코올로 추출되는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 본 발명의 상기 무청 추출물의 부탄올 분획물을 포함하는 건강 기능 식품을 제공한다.
본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 건강 기능 식품은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 그람음성세균 및 그람양성세균 모두에서 강력한 항균효과를 나타내며, 특히, 본 발명의 약학 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분인 무청 추출물의 부탄올 분획물은 급성경구독성이 나타나지 않으며, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 항세균 활성의 감소가 나타나지 않아, 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 무청 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하며, 그람음성세균 및 그람양성세균 모두의 생육을 저해하는 효과에 의한 항세균성 약학 조성물과 건강 기능 식품에 관한 것이다.
본 발명의 발명자들은 일정 방법으로 수득한 무청 추출물로부터 우수한 항세균 작용을 가진 부탄올 분획을 회수하였고, 이러한 성분은 경구급성독성이 나타나지 않으면서, 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로써 상기 성분을 그람음성세균 및 그람양성세균을 억제할 수 있는 항세균성 약학 조성물 및 건강 기능 식품으로 활용하고자 하였다.
구체적으로, 본 발명자들은 무청을 이용하여 항균물질 및 건강 기능 식품을 개발하기 위하여 무청의 에탄올 추출물을 조제하고, 이를 헥센, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차 분획하여 각 분획물들을 수득하고, 이를 각각의 그람음성세균, 그람양성세균 및 진균에 대한 항균 효과를 평가하였다. 그 결과, 무청 에탄올 추출물의 부탄올 분획에서 그람음성세균 및 그람양성세균에 대한 강한 항균 활성을 확인하였다. 또한, 무청 추출물의 부탄올 분획물은 열 및 산 안정성이 우수하였을 뿐만 아니라, 흰쥐에 경구투여시 급성독성이 나타나지 않아, 상기 분획물이 독성이 없음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 무청 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 약학 조성물 및 건강 기능 식품을 제공한다.
이하에서는, 본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물을 제조하는 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명은 무청으로부터 추출물을 조제하는 단계; 상기 무청 추출물로부터 부탄올 분획물을 조정제하는 단계; 상기 부탄올 분획물의 효능 및 안정성 조사단계; 및 상기 부탄올 분획물의 급성 독성을 검사하는 단계를 포함한다.
본 발명의 조성물에 포함되는 "무청 추출물"은 조선무의 지상부를 열풍건조하여 추출에 적합하도록 분쇄한 후 물, 유기용매 또는 물과 유기용매의 혼합용매로 추출하는 단계, 상기 추출액을 0.06mm 이하의 여과망을 사용하여 여과하고, 이를 감압 농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용매는 물(냉수 또는 열수); 주정, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올)과 같은 유기용매; 또는 상기 물과 유기용매의 혼합용매 등을 이용할 수 있으며, 식품원료 제조에 사용 가능한 에탄올이 가장 바람직하다.
본 발명에서는, 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 무청의 에탄올 추출물과 이로부터 순차 분획된 헥센 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물에 대한 그람음성세균, 그람양성세균 및 진균 억제 활성을 생육 억제환 실험을 통하여 평가하였다. 그 결과, 상기 추출물 및 분획물들은 그람음성세균 및 그람양성세균의 증식을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물은 감압증류 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 이들은 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 활성을 유지한다.
본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물은 그람음성세균과 그람양성세균을 모두 포함하는 항세균성 약학 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물을 포함하는 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.
이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 물, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.
바람직한 구체예로서, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제가 사용될 수도 있다.
바람직한 구체예로서, 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
바람직한 구체예로서, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다. 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 약학적 조성물에서 무청 추출물의 부탄올 분획물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다.
본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.
또한, 본 발명의 건강 기능 식품은 그람음성세균 및 그람양성세균을 모두 포함하는 병원성 세균의 감염을 예방 또는 개선시키기 위한 목적으로 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
본 발명의 무청 추출물의 부탄올 분획물은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다.
상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A, 글리시르히진, 사카린, 아스파르탐 등을 사용할 수 있다.
상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 무청 추출물 100중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 하나의 구체예일뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.
[ 실시예 ]
실시예 1: 무청 추출물 및 유기용매 분획물의 조제
2011년 경북 안동에서 생산된 조선무의 무청을 구입하여 이를 50℃ 건조기에서 2일간 건조한 후, 추출에 적합하도록 분말화한 후, 무청 분말에 대해 10배 부피의 에탄올(95%, 대정화학, 한국)을 가하고, 상온에서 2일간 3회 추출하였다. 추출물은 감압 농축하여 분말로 제조하고 사용 전까지 저온 밀봉 보관하였다. 분획물 조제를 위해서는, 추출물을 증류수에 현탁한 후, 헥센, 에틸아세테이트, 부탄올로 순차적 분획하였으며, 최종적으로 물 잔류물을 얻었다. 이때 에탄올 추출물의 수득율은 5.6%였으며, 무청 추출물의 에틸아세테이트 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물의 수득율은 각각 25.3%, 3.6%, 19.4% 및 51.7%였다. 추출물의 50% 이상이 물 잔류물로 이행되었다. 또한 조선무 지하부가 수분함량 94.3%, 조단백질, 조지방, 탄수화물 및 회분 함량이 각각 0.8±0.2%, 0.1±0.01%, 4.4±0.1%, 및 0.4±0.03%로 나타난 것에 비해, 조선무 무청의 경우 수분함량은 90.5±1.3%이었으며, 조단백질, 조지질, 탄수화물 및 회분 함량은 각각2.3±0.3%, 0.2±0.05%, 4.5±0.2% 및 1.5±0.1%로 나타나, 무의 지하부에 비해 무청이 영양적으로도 우수함을 확인하였다.
조제된 무청 추출물 및 분획물들의 총 플라보노이드(total flavonoid), 총 폴리페놀(total polyphenol), 총 당 및 환원당 함량을 측정하였다. 총 플라보노이드 함량 측정은 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na2CO3 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 환원당은 DNS법으로, 총당은 phenol-sulfuric acid법을 이용하여 정량하였다. 그 결과는 다음 [표 1]에 나타내었다.
무청의 에탄올 추출물 및 분획물의 수율 및 이들의 성분 분석
추출물/분획물 추출 및
분획효율(%)		 함량 (mg/g)
총 폴리페놀 총 플라보노이드 총 당 환원당
에탄올 추출물 5.6 25.00±0.05 29.53±3.01 114.77±3.14 60.72±12.91
헥센 분획 25.3 20.04±0.72 71.29±2.84 53.85±1.72 37.89±0.62
에틸아세테이트 분획 3.6 97.57±0.86 152.91±12.21 96.98±4.29 37.64±2.39
부탄올 분획 19.4 45.32±0.72 49.64±0.33 118.21±2.29 74.59±0.88
물 잔류물 51.7 12.12±0.19 7.99±0.00 155.32±0.00 82.28±3.27
상기 [표 1]에 나타난 바와 같이, 무청 에탄올 추출물 및 유기용매 분획물들의 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량 측정결과, 에틸아세테이트 분획물에서 각각 97.5mg/g및 152.9mg/g으로 매우 높음을 확인하였으며, 부탄올 및 헥센 분획물에서도 각각 20~45mg/g 및 49~71mg/g의 비교적 높은 함량을 나타내었다. 한편 총당의 경우 물 잔류물 > 부탄올 분획 > 에틸아세테이트 분획 > 헥센 분획 순으로 나타냈으며, 환원당의 경우도 유사한 패턴으로 나타났다. 항산화 활성 평가결과 역시 에틸아세테이트 분획물에서 매우 강력한 항산화능을 확인하였으며, 이는 폴리페놀의 높은 함량때문으로 판단되었다(결과 미제시). 상기 결과는 무청이 영양적으로 또한 생리활성적으로 매우 우수한 식품소재임을 제시하고 있다.
실시예 2: 무청 추출물 및 분획물의 항세균 활성 평가
무청의 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 항균 활성을 평가하기 위해 그람 음성균으로 Escherichia coli KCTC 1682, Proteus vulgaris KCTC 2433, Salmonella typhimurium KCTC 1926, Pseudomonas aeruginosa KACC 10186를 사용하였고, 그람 양성균으로는 Staphylococcus aureus KCTC 1916, Listeria monocytogenes KACC 10550, Bacillus subtilis KCTC 1924를 사용하였다. 한편, 항진균 활성 평가를 위해서는 Saccharomyces cerevisiae IF0 0233 및 캔디다증 진균감염증 원인균 Candida albicans KCTC 1940를 사용하였다.
먼저, 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth(Difco Co., USA)에 각각의 세균을 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양한 후, 각 균주를 O.D.600 0.1로 조정하여 Nutrient agar(Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish(90×15mm, 녹십자, 한국)에 100㎕ 도말하고, 각각의 시료 5㎕를 멸균 disc-paper(지름 6.5mm, Whatsman No. 2)에 가하여, 37℃에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균의 경우에는 Sabouraud dextrose(Difco Co. USA)를 이용하여 동일한 방법으로 30℃에서 24시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 엠피실린(ampicillin)과 항진균제인 마이코나졸 (miconazole)(Sigma Co., USA)을 각각 1μg/disc 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 mm 단위로 측정하였고, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 다음 [표 2]에 나타내었다.
무청 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 항세균 및 항진균 활성평가
미생물 생육억제환(mm)
항생제
(1 μg/disc) 		무청
(500 μg/disc)
엠피실린 마이코나졸 에탄올
추출물		 헥센
분획물		 에틸아세테이트 분획물 부탄올
분획물		 물
잔류물
그람
음성
세균		 EC 8.0 - - - - - -
PV 34.5 - 10.0 10.0 8.5 12.0 -
ST 16.0 - 7.5 7.5 16.0 8.5 -
PA 11.0 - - - - -
그람
양성
세균		 SA 25.0 - 9.5 7.5 - - -
LM 28.0 - - 15.5 14.0 9.0 -
BS 25.5 - 8.5 7.5 7.5 7.5 -
진균 SC - 20.0 - - - - -
CA - 20.5 - - - - -
EC : Escherichia coli , PV : Proteus vulgaris , ST : Salmonella typhimurium , PA : Pseudomonas aeruginosa , SA : Staphylococcus aureus , LM : Listeria monocytogenes, BS : Bacillus subtilis , SC : Saccharomyces cerevisiae , CA : Candida albicans .
- : 생육저해 없음.
[표 2]에 나타낸 바와 같이, 항세균 활성대조구로 사용된 엠피실린(1μg/disc)의 경우 8.0~34.5mm의 생육억제환을 나타내어 강력한 항세균 활성을 확인하였으며, 항진균제인 마이코나졸(1μg/disc)의 경우 C. albicans에 대해 20mm의 생육억제환을 나타내었다.
무청 에탄올 추출물(500μg/disc) 및 이의 분획물들인 헥센 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물에서는 항균활성이 모두 확인되어 무청 추출물이 다양한 항세균 활성물질을 포함하고 있음을 알 수 있었으며, 특히 S. typhimurium 및 L. monocytogenes의 식중독 유발균에 대해 8.5~9.0mm의 강력한 생육억제환을 나타내어, 식중독 예방 및 세균성 독소에 의한 혈관 손상 및 혈전 생성을 억제하여 건강증진 효과가 나타날 것으로 기대된다.
실시예 3: 무청 추출물의 부탄올 분획물의 안정성
상기 실시예 1에서 얻은 무청 추출물의 부탄올 분획물을 대상으로 열 안정성, 산 안정성 및 혈장 안정성을 확인하였다. 각각의 시료들은 100℃에서 2시간 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 2시간 처리, 혈장에서 2시간 처리시에도 상기 표 2의 결과와 유사한 그람음성세균 및 그람양성세균에 대한 항균활성을 유지하여 높은 안정성을 나타내었다.
실시예 4: 무청 추출물의 부탄올 분획물의 마우스 단회 경구독성 시험
상기 실시예 1에서 얻은 무청 추출물의 부탄올 분획물을 대상으로 마우스 단회 경구독성을 평가하였다. 먼저 4주령의 흰쥐(Slc, ICR Mouse)를 (주)중앙실험동물로부터 공급받아 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 150~300Lux의 조도로 12시간 간격(오전 8시~오후 8시)으로 조절되는 동물실험실에서 14일간 순화시켰다. 이후 실시예 1로부터 얻은 부탄올 분획물을 옥수수유에 녹인 후, 400, 800, 1500, 2000mg/kg 농도로 각각 3마리씩 경구투여 후, 일주일 간 생존 여부와 병적 이상 증후를 관찰하였다. 대조구로는 옥수수유만을 경구투여하였다. 그 결과 생존율은 100%였으며, 병적 이상 징후는 나타나지 않았다. 따라서, 약용으로 사용되어 온 무청으로부터 분리한 부탄올 분획물은 저독성 또는 무독성으로 구분되며, 이의 낮은 농도의 사용은 부가적인 문제점을 야기하지 않으리라 판단되었다.

Claims (4)

  1. 무청(Raphanus sativus L. leaves) 에탄올 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) 및 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택된 세균성 감염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 무청(Raphanus sativus L. leaves) 에탄올 추출물의 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) 및 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택된 세균성 감염증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품.
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