KR101456040B1

KR101456040B1 - 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101456040B1
Application number: KR1020070038917A
Authority: KR
Inventors: 김호정; 김형만; 박선규; 김진준; 최재환
Original assignee: 주식회사 엘지생활건강
Priority date: 2007-04-20
Filing date: 2007-04-20
Publication date: 2014-11-03
Also published as: KR20080094455A

Abstract

본 발명은 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 특히 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 약재의 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 미백용 화장료 조성물은 피부에 안전하면서도 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 기미, 주근깨 개선 및 미백효과와 그 효과의 지속성이 우수하다.

화장료, 발효 추출물, 미백, 멜라닌, 기미, 주근깨

Description

미백용 화장료 조성물{Whitening cosmetic composition}

본 발명은 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 피부에 안전하면서도 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 기미, 주근깨 개선 및 미백효과와 그 효과의 지속성이 우수한 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

희고 고운 피부를 갖고자 하는 것은 모든 사람의 한결같은 소망이다. 사람의 피부색은 피부내 멜라닌(melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같이 멜라닌이 만들어지는 경로는 알려져 있으나, 티로시나제가 작용하는 이전 단계인 멜라닌 합성을 유도하는 메카니즘이 무엇인지에 대해서는 아직도 자세히 밝혀지지 않고 있다.

한편, 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로서 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증의 개선이 가능하다.

이에 종래에는 하이드로퀴논(hydroquinone), 아스콜빈산(ascorbic acid), 코지산(kojic acid), 글로타티온(glutathione) 등과 같은 티로시나제에 저해 활성을 갖는 물질을 연고나 화장료에 배합하여 피부 미백이나 기미, 주근깨 개선의 목적에 사용하여 왔다. 하이드로퀴논의 경우 미백효과는 인정되지만 피부자극성이 심하여 사용량이 극히 제한된다. 또한 아스콜빈산은 산화되기 쉬워 이를 배합한 화장료는 변색, 변취되는 등의 문제를 야기시키며, 글루타티온, 시스테인 등의 티올계 화합물은 특유의 불쾌한 냄새가 나고 경피흡수에 문제가 있다. 또한 이들의 배당체 및 유도체들은 극성이 높아 화장료의 배합성분으로 사용하는데 문제가 있다. 또한 태반 추출물 등은 미백 효과가 불충분하다는 문제가 있다.

한편, 미생물이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시키는 과정을 발효라고 한다. 발효와 부패는 비슷한 과정에 의해 진행되지만 분해 결과 우리의 생활에 유용하게 사용되는 물질이 만들어지면 발효라 하고, 악취가 나거나 유해한 물질이 만들어지면 부패라고 한다. 따라서, 한약재를 미생물을 이용하여 발효시키면 한약재의 독성이 감소되거나, 저분자화되어 소화가 용이하거나, 피부에 도포시 경피흡수 등이 용이하게 되어 생체 이용률이 향상된다.

또한 한약재들은 그 자체로도 약리 작용을 나타낼 수 있지만 발효를 통해 약리효과가 더욱 강화되거나 미생물의 대사에 의해 해로운 성분들이 만들어져 발효전의 한약재에 없던 새로운 약리작용을 발휘할 수 있다.

상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자, 본 발명은 피부에 안전하면서 도 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 기미, 주근깨 개선 및 미백효과와 그 효과의 지속성이 우수한 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 다른 목적은 발효를 통해 각 약재의 약리효과를 더욱 강화시켜 미백효과가 더욱 향상된 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 약재의 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 발효 추출물은 효모, 유산균 또는 비피더스균에 약재를 첨가, 배양하여 수득할 수 있다.

상기 발효 추출물은 약재에 곰팡이(fungi)를 접종하고 고체발효하여 수득할 수 있다.

상기 약재 발효 추출물은 화장료 조성물에 0.0001 내지 10 중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

상기 화장료 조성물은 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼, 오일젤 등의 제형으로 제조될 수 있다.

이하 본 발명의 미백용 화장료 조성물에 대하여 상세히 설명한다.

이하 본 발명에서 설명하는 약재 추출물은 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이로부터 1 종 이상 선택되는 약재를 통상의 방법에 따라 추출하여 수득한 추출물을 의미하는 것이다. 또한, 약재 발효 추출물은 상기 약재 추출물을 효모, 유산균 또는 비피더스균에 접종 및 배양하여 수득되거나, 시판되는 약재 자체나 분쇄물에 곰팡이를 첨가하여 고체발효시켜 수득되는 2차 추출물을 의미하는 것이다.

본 발명자들은 멜라닌 합성 유도 자체를 억제하는 물질까지 스크리닝(screening)할 수 있는 쥐의 멜라노마 세포(B16 mouse melanoma cell)를 이용하여 연구를 거듭한 결과, 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향, 송이 등의 발효액이 각각의 추출물에 비해 월등히 우수한 멜라닌 생성 억제 효과와 미백 효과가 있음을 밝혀내고, 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물은 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 약재의 발효 추출물을 유효성분으로 포함한다.

상기 국화(Chrysanthemum morifolium)는 국화과(Compositae)에 속하는 다년생 초본으로 그늘에 말려 약용 또는 차로서 이용하며, 신경통, 기침, 동맥경화, 배뇨곤란 등에 쓰인다. 상기 두충(Eucommia ulmoides)은 두충나무과(Eucommiaceae)에 속하는 낙엽교목으로 껍질을 건조시켜 약재로 사용하며, 주 약리작용은 혈압강하작용이다. 상기 반하(Pinellia ternate)는 천남성과(Araceae)에 속하는 다년생 초본식물로 진해, 거담, 구토, 위장염의 약리작용을 갖는다. 상기 백급(Bletilla striata)은 난초과(Orchidaceae)에 속하는 다년생 초본으로 수렴제, 지혈제, 배농 제로 사용한다. 상기 백렴(Ampelopsis japonica)은 포도과 (Vitaceae)에 속하는 낙엽만경으로 진통, 해열, 산결, 소종의 효능을 갖는다. 상기 백작약(Paeonia japonica)은 미나리아재비과(Ranunculaceae)에 속하는 단년생초본으로 뿌리를 진통, 진경, 부인병 등에 사용한다. 상기 백출(Atractylodes macrocephala)은 국화과(Compositae)에 속하는 다년생 초본으로, 주로 건위약으로 쓰이며 발한, 해열, 구풍 등에 쓰인다. 상기 산수유(Cornus officinalis)는 층층나무과(Cornaceae)에 속하는 낙엽활엽 소교목으로 지혈, 해열, 빈뇨, 야뇨증의 치료에 쓰인다. 상기 상백피(Morus alba)는 뽕나무과(Moraceae)에 속하는 낙엽관목인 뽕나무의 뿌리 껍질로 기침, 천식, 유행성 감염치료 등에 사용된다. 상기 소회향(Foeniculum vulgare)은 미나리과(Umbelliferae)에 속하는 다년생 초본인 회향의 성숙과실로 냉복통, 요통, 하지통, 신허 요통 등에 쓰인다. 상기 송이(Tricholoma matsutake)는 담자균류 송이과의 버섯으로 혈중 콜레스테롤 억제효과, 혈액순환증진(손, 발 저림, 허리와 무릎 시림), 동맥경화, 심장병, 당뇨병, 고지혈증 등에 사용된다.

상기 약재들은 통상의 방법에 따라 약재 추출물로 제조할 수 있으며, 예를 들어 증류수, 탄소수 1∼4 개의 무수 또는 함수 저급알코올과 같은 유기용매로 추출한 후 감압 농축한 다음 건조하여 1차 추출물을 수득할 수 있다. 구체적으로, 생약재로 시판되는 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 또는 송이를 구입하여 잘게 분쇄하고, 분쇄물 건조 중량에 대하여 5 내지 20 부피의 물이나, 탄소수 1∼4 개의 무수 또는 함수 저급알코올과 같은 유기용매로 환류냉각기가 달린 추출기에서 50∼100 ℃로 1∼5 시간 동안 가열하여 약재들의 추출물을 추출한다. 그 다음 여과포로 여과한 후, 잔사를 같은 방법으로 1 회 이상씩 더 추출한 후, 추출액들을 합하여 감압농축하고, 동결건조나 분무건조하여 건조추출물을 얻는다.

상기와 같이 수득한 약재 추출물들은 효모, 유산균 또는 비피더스균에 첨가, 배양하여 최종 약재 발효 추출물을 얻을 수 있다. 이때, 상기 약재 추출물은 효모, 유산균 또는 비피더스균의 기본 배지에 1 내지 20 중량%로 첨가되는 것이 바람직하다.

상기 효모는 Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces ellipsoids, Saccharomyces boulardii 등을 사용할 수 있다.

상기 유산균은 Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus confusus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus brevis 등을 사용할 수 있다.

상기 비피더스균은 Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis 등을 사용할 수 있다.

또한 상기 약재 발효 추출물은 시판되는 약재 자체 또는 절편, 분말화하여 곰팡이(fungi)를 접종하고 고체발효하여 얻을 수도 있다.

상기 곰팡이는 차가버섯(Inonnotus-obliquus), 동충하초균류(Cordyceps sinensis, Paecilomyces japonica), 상황버섯(phellinus linteus), 영지버섯(Ganoderma lucidum) 등의 약용 버섯류의 곰팡이를 사용할 수 있다.

보다 구체적으로 설명하면, 미생물로 효모를 사용할 경우에는 일정한 농도(약 10⁵∼10⁷ cells/mL)로 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이의 1차 추출물이 각각 함유된 기본 배지(YM 배지)에 효모를 접종한 후, pH 5.5∼6.5, 온도 25∼35 ℃, 통기량 0.05∼0.5 VVM의 조건을 유지하면서 30∼120 시간 동안 배양한다. 그 뒤, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 효모균체를 제거하고, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 각각의 약재 발효 추출물을 수득할 수 있다.

미생물로 유산균을 사용할 경우에는 일정한 농도(약 10⁵∼10⁷ cells/mL)로 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이의 1차 추출물이 각각 함유된 기본 배지(MRS 배지)에 유산균을 접종한 후, pH 6.5∼7.5, 온도 35∼38 ℃, 통기량 1 VVM의 조건을 유지하면서 24∼120 시간 동안 배양한다. 그 뒤, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균체를 제거하고, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 각각의 약재 발효 추출물을 수득할 수 있다.

미생물로 비피더스균을 사용할 경우에는 일정한 농도(약 10⁵∼10⁷ cells/mL)로 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이의 1차 추출물이 각각 함유된 기본 배지(BL 배지)에 비피더스균을 접종한 후, pH 6.5∼7.5, 온도 35∼38 ℃, 혐기배양 조건을 유지하면서 24∼120 시간 동안 배양한다. 그 뒤, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 비피더스균체를 제거하고, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 각각의 약재 발효 추출물을 수득할 수 있다.

또한, 미생물로 곰팡이(fungi)를 사용할 경우에는 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이 자체 또는 절편, 분말화한 분쇄물 각각에 곰팡이를 1∼10 중량%로 접종하고, 18∼25 ℃, 습도 60∼70 %에서 60 일간 고체발효시켜 각각의 약재 발효 추출물을 수득할 수 있다.

상기와 같은 약재 발효 추출액들은 쥐의 멜라노마 세포(B-16 melanoma cell)에 처리하였을 때 일반적인 약재 추출물들과 비교하여 월등히 우수한 멜라닌 합성 저해효과를 나타낸다. 또한, 상기 약재 발효 추출액들을 이용하여 화장료를 제조한 후 사람의 피부에 도포하였을 때 어떤 부작용의 발생 없이 피부에 안전하며, 매우 우수한 기미, 주근깨 개선 및 피부 미백효과를 나타낸다.

상기와 같이 수득한 약재 발효 추출물은 본 발명의 미백용 화장료 조성물에 0.0001 내지 10 중량%로 포함되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 0.0005 내지 10 중량%로 포함되는 것이다. 그 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 뚜렷한 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과할 경우에는 함유량의 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증거가 나타나지 않는다.

상기와 같은 본 발명의 약재 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화장료 조성물은 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼, 오일젤 등의 제형으로 제 조될 수 있다. 이때, 상기 피부외용연고는 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 바셀린 50∼97 중량% 및 폴리옥시에틸렌올레일-에테르 포스페이트 0.1∼5 중량%를 함유하도록 제조할 수 있으며, 유연화장수는 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 다가알콜류(프로필렌글리콜, 글리세린 등) 1∼10 중량% 및 계면활성제(폴리에틸렌올레일에테르, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 등) 0.05∼2 중량%를 함유하도록 제조할 수 있다. 또한, 영양화장수 및 영양크림은 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 오일류(스쿠알란, 바셀린, 옥틸도데칸올 등) 5∼20 중량% 및 왁스성분(세탄올, 스테아릴알콜, 밀납 등) 3∼15 중량%를 함유하도록 제조할 수 있으며, 에센스는 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 글리세린, 프로필렌글리콜 등의 다가알콜류 5∼30 중량%를 함유하여 제조할 수 있다. 마사지 크림은 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 유동파라핀, 바셀린, 이소노닐이소노나노에이트 등의 오일 30∼70 중량%를 함유하여 제조되며, 팩은 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 폴리비닐알콜 5∼20 중량%를 함유하는 필 오프(peel off) 팩 또는 일반유화형 화장료에 본 발명의 약재 발효 추출물 이외에 카올린, 탈크, 산화아연, 이산화티탄 등의 안료가 5∼30 중량% 함유된 워시오프(wash off) 팩으로 제조할 수 있다.

또한 본 발명의 미백용 화장료 조성물은 각각의 제형에 상기 기재한 성분들 이외에 일반 피부화장료에 배합되는 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 또는 향료 등을 필요에 따라 적절히 배합하여 사용할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실 시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1

시판되는 국화, 두충, 반하, 백급, 백렴, 백작약, 백출, 산수유, 상백피, 소회향 및 송이를 구입하여 분쇄한 각각의 분쇄물 200 g을 정제수나 80 % 메탄올 3 L에 각각 넣고, 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 3 시간 동안 끓여 추출하였다. 그 다음, 100 메쉬(mesh) 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1 회 더 추출하였다. 각각의 추출물을 합하여 상온에서 와트만(Whatman) 2 번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 하기 표 1과 같은 각각의 건조 중량을 얻었다. 하기 표 1은 추출용매에 따른 약재 100 g 당 추출물의 건조중량을 나타낸 것이다.

약재	80% 메탄올	정제수
국화	7.2 g	6.9 g
두충	8.3 g	8.0 g
반하	11.2 g	9.8 g
백급	8.3 g	8.1 g
백렴	7.6 g	7.1 g
백작약	12.2 g	10.5 g
백출	9.5 g	8.3 g
산수유	6.3 g	6.0 g
상백피	6.2 g	5.1 g
소회향	7.4 g	6.8 g
송이	5.3 g	5.0 g

실시예 2∼12

80 % 메탄올을 이용하여 얻어진 각각의 약재 추출물을 효모인 Saccharomyces cerevisiae에 대한 기본배지인 YM 배지에 5 중량%로 첨가하여 발효시켰다.

구체적으로, Saccharomyces cerevisiae를 약 10⁵∼10⁷ cells/mL의 농도로 5 중량%의 각각의 약재 추출물이 함유된 효모 기본 배지(YM 배지)에 접종한 후, pH 5.5∼6.5, 온도 25∼35 ℃, 통기량 0.05∼0.5 VVM의 조건을 유지하면서 48 시간 배양하였다. 그 뒤, 각각의 발효액 100 g을 원심분리하여 고분자 침전물과 효모균체를 제거한 후, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 약재 효모 발효 건조물을 수득하였다. 약재 효모 발효 건조물의 건조중량은 하기 표 2에 나타내었다.

약재	발효액의 건조중량 (g)
실시예 2 (국화)	6.02
실시예 3 (두충)	6.00
실시예 4 (반하)	6.12
실시예 5 (백급)	6.06
실시예 6 (백렴)	6.09
실시예 7 (백작약)	5.89
실시예 8 (백출)	5.82
실시예 9 (산수유)	6.16
실시예 10 (상백피)	6.09
실시예 11 (소회향)	5.98
실시예 12 (송이)	6.22

실시예 13∼23

80 % 메탄올을 이용하여 얻어진 각각의 약재 추출물을 유산균인 Lactobacillus acidophilus에 대한 기본배지인 MRS 배지에 5 중량%로 첨가하여 발효시켰다.

구체적으로, Lactobacillus acidophilus를 약 10⁵∼10⁷ cells/mL의 농도로 5 중량%의 각각의 약재 추출물이 함유된 유산균 기본 배지(MRS 배지)에 접종한 후, pH 6.5∼7.5, 온도 35∼38 ℃, 통기량 1 VVM의 조건을 유지하면서 48 시간 배양하였다. 그 뒤, 각각의 발효액 100 g을 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균체를 제거한 후, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 약재 유산균 발효 건조물을 수득하였다. 약재 유산균 발효 건조물의 건조중량은 하기 표 3에 나타내었다.

약재	발효액의 건조중량 (g)
실시예 13 (국화)	5.91
실시예 14 (두충)	5.93
실시예 15 (반하)	5.96
실시예 16 (백급)	5.89
실시예 17 (백렴)	5.94
실시예 18 (백작약)	6.01
실시예 19 (백출)	6.11
실시예 20 (산수유)	5.98
실시예 21 (상백피)	6.02
실시예 22 (소회향)	5.94
실시예 23 (송이)	5.89

실시예 24∼34

80 % 메탄올을 이용하여 얻어진 각각의 약재 추출물을 비피더스균인 Bifidobacterium longum에 대한 기본배지인 BL 배지에 5 중량%로 첨가하여 발효시켰다.

구체적으로, Bifidobacterium longum를 약 10⁵∼10⁷ cells/mL의 농도로 5 중량%의 각각의 약재 추출물이 함유된 유산균 기본 배지(BL 배지)에 접종한 후, pH 6.5∼7.5, 온도 35∼38 ℃, 혐기배양 조건을 유지하면서 48 시간 배양하였다. 그 뒤, 각각의 발효액 100 g을 원심분리하여 고분자 침전물과 비피더스균체를 제거한 후, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 약재 비피더스균 발효 건조물을 수득하였다. 약재 비피더스균 발효 건조물의 건조중량은 하기 표 4에 나타내었다.

약재	발효액의 건조중량 (g)
실시예 24 (국화)	6.23
실시예 25 (두충)	6.20
실시예 26 (반하)	6.21
실시예 27 (백급)	6.21
실시예 28 (백렴)	6.11
실시예 29 (백작약)	6.13
실시예 30 (백출)	6.13
실시예 31 (산수유)	6.33
실시예 32 (상백피)	6.18
실시예 33 (소회향)	6.09
실시예 34 (송이)	6.26

실시예 35∼45

상기 표 1에서 사용된 약재를 절편하여 곰팡이(fungi)를 5 중량%로 첨가하여 고체발효시켰다.

구체적으로, 각각이 약재 200 g을 절편으로 하여 일정한 습도하에서 Paecilomyces japonica를 5 중량%로 각각 접종하고 18∼25 ℃, 습도 60∼70 %에서 60 일간 발효시키고 건조시킨 후, 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩을 80% 메탄올 3L에 각각 넣고, 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 3 시간 끓여 추출하였다. 그 다음, 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 60 ℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 약재 곰팡이 발효 건조물을 수득하였다. 약재 곰팡이 발효 건조물의 건조중량은 하기 표 5에 나타내었다.

약재	발효액의 건조중량 (g)
실시예 35 (국화)	6.73
실시예 36 (두충)	7.55
실시예 37 (반하)	9.91
실시예 38 (백급)	7.87
실시예 39 (백렴)	6.53
실시예 40 (백작약)	10.93
실시예 41 (백출)	8.53
실시예 42 (산수유)	5.77
실시예 43 (상백피)	5.47
실시예 44 (소회향)	6.39
실시예 45 (송이)	4.80

실험예 1. 멜라닌 생성 저해효과

상기 실시예 1에서 80% 메탄올을 이용하여 수득한 각각의 약재 추출물과 상기 실시예 2 내지 45의 약재 발효 추출물을 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에 첨가하여 세포수준에서의 미백효과를 실험하였다(Lotan R., Lotan D. Cancer Res. 40:3345-3350, 1980).

먼저, 상기 실시예 1에서 80% 메탄올을 이용하여 수득한 각각의 약재 추출물과 상기 실시예 2 내지 45의 약재 발효 추출물들은 최종농도가 0.005 %가 되도록 하여 하이드로퀴논 수용액과 함께 각각 B-16 멜라노마 세포의 배양배지에 첨가하여 3 일간 배양한 후, 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양 용기로부터 떼어내 원심분리한 후 멜라닌을 추출하였다. 여기에 수산화나트륨 용액(1N 농도) 1 mL를 가하여 10 분간 끓여 멜라닌을 녹이고 분광광도계를 이용하여 400 나노미터(㎚)에서 흡광도를 측정하여 생성된 멜라닌의 양을 단위 세포수당(10⁶ cells) 흡광도로 나타내는 방법으로 수행하였다. 위 실험을 3 회 이상 반복하여 측정하였으며, 대조군에 대한 상대적인 멜라닌 생성량을 저해율(%)로 계산하고 결과를 하기 표 6 및 표 7에 정리하였다.

시료		멜라닌 생성량	저해율 (%)
대조군 (무첨가)		0.045±0.004	-
YM 배지 (최종농도 0.005 %)		0.044±0.002	2
MRS 배지 (최종농도 0.005 %)		0.046±0.002	-2
BL 배지 (최종농도 0.005 %)		0.044±0.003	2
국화 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.034±0.003	24
	실시예 2의 효모 발효 추출물	0.027±0.003	40
	실시예 13의 유산균 발효 추출물	0.026±0.003	42
	실시예 24의 비피더스균 발효 추출물	0.024±0.002	47
	실시예 35의 곰팡이 발효 추출물	0.019±0.003	58
두충 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.030±0.002	33
	실시예 3의 효모 발효 추출물	0.020±0.003	56
	실시예 14의 유산균 발효 추출물	0.023±0.002	49
	실시예 25의 비피더스균 발효 추출물	0.027±0.003	40
	실시예 36의 곰팡이 발효 추출물	0.024±0.003	47
반하 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.032±0.003	29
	실시예 4의 효모 발효 추출물	0.020±0.003	56
	실시예 15의 유산균 발효 추출물	0.023±0.002	51
	실시예 26의 비피더스균 발효 추출물	0.027±0.003	47
	실시예 37의 곰팡이 발효 추출물	0.024±0.003	56

시료		멜라닌 생성량	저해율 (%)
백급 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.039±0.003	13
	실시예 5의 효모 발효 추출물	0.030±0.003	33
	실시예 16의 유산균 발효 추출물	0.024±0.003	47
	실시예 27의 비피더스균 발효 추출물	0.027±0.003	40
	실시예 38의 곰팡이 발효 추출물	0.024±0.003	47
백렴 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.033±0.003	27
	실시예 6의 효모 발효 추출물	0.023±0.002	48
	실시예 17의 유산균 발효 추출물	0.022±0.002	51
	실시예 28의 비피더스균 발효 추출물	0.025±0.002	47
	실시예 39의 곰팡이 발효 추출물	0.022±0.002	51
백작약 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.037±0.003	18
	실시예 7의 효모 발효 추출물	0.031±0.003	31
	실시예 18의 유산균 발효 추출물	0.026±0.003	42
	실시예 29의 비피더스균 발효 추출물	0.026±0.003	42
	실시예 40의 곰팡이 발효 추출물	0.025±0.003	45
백출 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.028±0.002	38
	실시예 8의 효모 발효 추출물	0.020±0.003	56
	실시예 19의 유산균 발효 추출물	0.022±0.003	51
	실시예 30의 비피더스균 발효 추출물	0.020±0.003	56
	실시예 41의 곰팡이 발효 추출물	0.018±0.003	60
산수유 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.041±0.003	9
	실시예 9의 효모 발효 추출물	0.033±0.003	27
	실시예 20의 유산균 발효 추출물	0.029±0.002	36
	실시예 31의 비피더스균 발효 추출물	0.031±0.003	31
	실시예 42의 곰팡이 발효 추출물	0.022±0.002	51
상백피 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.030±0.003	33
	실시예 10의 효모 발효 추출물	0.022±0.002	51
	실시예 21의 유산균 발효 추출물	0.024±0.002	47
	실시예 32의 비피더스균 발효 추출물	0.021±0.002	47
	실시예 43의 곰팡이 발효 추출물	0.022±0.003	53
소회향 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.037±0.003	18
	실시예 11의 효모 발효 추출물	0.029±0.003	36
	실시예 22의 유산균 발효 추출물	0.025±0.003	44
	실시예 33의 비피더스균 발효 추출물	0.027±0.003	40
	실시예 44의 곰팡이 발효 추출물	0.026±0.002	42
송이 (최종농도 0.005 %)	실시예 1의 추출물	0.038±0.003	16
	실시예 12의 효모 발효 추출물	0.029±0.002	36
	실시예 23의 유산균 발효 추출물	0.027±0.002	40
	실시예 34의 비피더스균 발효 추출물	0.025±0.003	44
	실시예 45의 곰팡이 발효 추출물	0.027±0.003	40
하이드로퀴논 (최종농도 0.0001 %)		0.025±0.002	44

상기 표 6 및 7에 나타낸 바와 같이, 실시예 2 내지 45에 따라 수득한 약재 발효 추출물은 실시예 1에서 80% 메탄올을 이용한 추출물과 비교하여 배양된 쥐의 멜라노마 세포에서 멜라닌 생성 저해가 현저히 증가되었으며, 전혀 정제되지 않은 상태임을 감안하면 기존에 알려진 미백물질인 하이드로퀴논과 비교할 때 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 매우 강한 멜라닌 생성 억제능이 있음을 알 수 있었다.

실험예 2. 농도에 따른 멜라닌 생성 저해효과

상기 실험예 1과 같은 방법으로 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물의 농도를 각각 0.5 %, 0.05 %, 0.005 %, 0.0005 %로 조절하여 각각의 농도에 따른 멜라닌 생성 억제능을 조사하고, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.

시료	적용농도 (%)	멜라닌 생성량	저해율 (%)
대조군 (무첨가)	-	0.045±0.00	-
실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물	최종농도 (0.0005%)	0.028±0.00	38
	최종농도 (0.005%)	0.019±0.00	58
	최종농도 (0.05%)	0.016±0.00	64
	최종농도 (0.5%)	0.015±0.00	67
하이드로퀴논	최종농도 (0.0001%)	0.025±0.00	44

상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 국화 곰팡이 발효 추출물은 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 매우 강력한 멜라닌 생성 억제능을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 기존에 알려진 미백물질인 하이드로퀴논은 저농도에서 강력한 멜라닌 생성 억제능을 가지지만 세포독성이 심해 0.0001% 이상의 농도로는 실험할 수 없었으나, 본 발명에 따른 실시예 35의 발효 추출물은 0.05 % 농도 이상에서도 세포독성을 나타내지 않으면서 사용가능한 최대량의 하이드로퀴논보다 높은 멜라닌 생성 억제 효과를 갖음을 알 수 있었다.

실시예 46 및 비교예 1

상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물을 이용하여 하기 표 9의 처방으로 피부 외용연고를 제조하였다.

구분	실시예 46	비교예 1
국화 곰팡이 발효 추출물	10	-
디에틸 세바케이트	8	8
경납	5	5
폴리옥시에틸렌올레일에테르 포스페이트	6	6
벤조산 나트륨	적량	적량
바셀린	To 100	To 100

실시예 47 및 비교예 2

상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물을 이용하여 하기 표 10의 처방으로 크림을 제조하였다.

구분	실시예 47	비교예 2
국화 곰팡이 발효 추출물	1.0	-
스테아린산	15.0	15.0
세탄올	1.0	1.0
수산화칼륨	0.7	0.7
글리세린	5.0	5.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0
방부제	적량	적량
향	적량	적량
정제수	To 100	To 100

실시예 48 및 비교예 3

상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물을 이용하여 하기 표 11의 처방으로 유연화장수를 제조하였다.

구분	실시예 48	비교예 3
국화 곰팡이 발효 추출물	0.2	-
에탄올	10.0	10.0
폴리라우린산폴리옥시에틸렌소르비탄	1.0	1.0
파라옥시안식향산메틸	0.2	0.2
글리세린	5.0	5.0
1,3-부틸렌글리콜	6.0	6.0
향	적량	적량
색소	적량	적량
정제수	To 100	To 100

실시예 49 및 비교예 4

상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물을 이용하여 하기 표 12의 처방으로 영양화장수를 제조하였다.

구분	실시예 49	비교예 4
국화 곰팡이 발효 추출물	0.1	-
와셀린	2.0	2.0
세스퀴올레인산소르비탄	0.8	0.8
폴리옥시에틸렌올레일에틸	1.2	1.2
파라옥시안식향산메틸	적량	적량
프로필렌글리콜	5.0	5.0
에탄올	3.2	3.2
카르복시비닐폴리머	18.0	18.0
수산화칼륨	0.1	0.1
색소	적량	적량
향	적량	적량
정제수	To 100	To 100

실시예 50 및 비교예 5

상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물을 이용하여 하기 표 13의 처방으로 팩을 제조하였다.

구분	실시예 50	비교예 5
국화 곰팡이 발효 추출물	0.5	-
글리세린	5.0	5.0
프로필렌글리콜	4.0	4.0
폴리비닐알코올	15.0	15.0
에탄올	8.0	8.0
폴리옥시에틸렌올레일에틸	1.0	1.0
파라옥시안식향산메틸	0.2	0.2
향	적량	적량
색소	적량	적량
정제수	To 100	To 100

실시예 51 및 비교예 6

상기 실시예 35의 국화 곰팡이 발효 추출물을 이용하여 하기 표 14의 처방으로 에센스를 제조하였다.

구분	실시예 51	비교예 6
국화 곰팡이 발효 추출물	5.0	-
프로필렌글리콜	10.0	10.0
글리세린	10.0	10.0
하이루론산나트륨수용액 (1%)	5.0	5.0
에탄올	5.0	5.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유	1.0	1.0
파라옥시안식향산메틸	0.1	0.1
향	적량	적량
정제수	To 100	To 100

실험예 3. 약재 발효 추출물 함유 화장료의 색소 침착 저해 효과

건강한 성인 남녀 20 명씩을 선정하여 양팔의 하박부에 직경 7 ㎜ 크기의 구멍이 6 개씩 2 줄로 파인 알루미늄 호일을 붙이고, 팔에서 10 ㎝ 떨어진 거리에서 ORIEL solar simulator 1000W를 사용하여 60 mJ/㎠의 광량을 조사하였다. 조사 전, 70% 에탄올 수용액으로 조사부위를 잘 세척하였다. 조사하기 3 일전부터 조사 후 3 주째까지 1일 2회씩 국화 곰팡이 발효 추출물을 함유한 실시예 46 내지 51의 화장료와 국화 곰팡이 발효 추출물을 함유하지 않은 비교예 1 내지 6의 화장료를 한 쌍으로 같은 줄에 도포하였다. 이때, 실시예 50 및 비교예 5의 팩의 경우 도포한 다음 15 분 후에 떼어내었다. 각각에 대하여 실시예와 비교예의 색소침착도를 육안으로 판정하고, 실시예가 비교예에 비해 색소침착을 억제한 정도를 뚜렷한 효과, 효과있음, 차이없음의 3 단계로 평가하고, 그 결과를 하기 표 15에 나타내었다.

구분	뚜렷한 효과 (명)	효과있음 (명)	차이없음 (명)
실시예 46	5	8	7
실시예 47	3	8	9
실시예 48	2	10	8
실시예 49	4	8	8
실시예 50	3	8	9
실시예 51	1	11	8

상기 표 15에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따라 국화 곰팡이 발효 추출물을 함유한 실시예 46 내지 51의 화장료의 경우 피시험자 20 명 중 최소 10 명 이상에 대하여 미백효과를 나타내었으며, 특히 많은 양의 국화 곰팡이 발효 추출물이 적용된 실시예 46과 비교예 1의 비교 실험에서는 65 %가 색소 침착 저해 효과를 보이고, 피부내에서 어떤 부작용도 나타내지 않아, 국화 곰팡이 발효 추출물이 안전하고 효과가 뛰어난 기미, 주근깨 개선 및 미백용 화장료임을 알 수 있었다.

이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형, 및 변경이 가능함은 본 발명의 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백한 것이다.

본 발명에 따른 미백용 화장료 조성물은 피부에 안전하면서도, 발효를 통해 각 약재의 약리효과를 더욱 강화시켜 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 기미, 주 근깨 개선 및 미백효과와 그 효과의 지속성이 우수하다.

Claims

백출의 발효추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,

상기 백출의 발효추출물은 Saccharomyces cerevisiae(사카로마이세스 세레비제), Schizosaccharomyces ellipsoids(스키조사카로마이세스 일립소이드), Saccharomyces boulardii(사카로마이세스 보울라디), Lactobacillus acidophilus(락토바실러스 아시도필루스), Lactobacillus casei(락토바실러스 카제이), Lactobacillus bulgaricus(락토바실러스 불가리쿠스), Lactobacillus rhamnosus(락토바실러스 람노서스), Lactobacillus plantarum(락토바실러스 플란타룸), Lactobacillus reuteri(락토바실러스 루테리), Lactobacillus confusus(락토바실러스 컨퓨서스), Lactobacillus fermentum(락토바실러스 퍼멘툼), Lactobacillus brevis(락토바실러스 브레비스), Bifidobacterium breve(비피도박테리움 브레베), Bifidobacterium bifidum(비피도박테리움 비피덤), Bifidobacterium longum(비피도박테리움 롱검) 및 Bifidobacterium infantis(비피도박테리움 인판티스)로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 균의 배양시 백출을 첨가, 배양하여 수득한 발효 추출물인 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
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제1항에 있어서,

상기 발효추출물은 백출에 차가버섯(Inonnotus-obliquus), 동충하초균류(Cordyceps sinensis, Paecilomyces japonica), 상황버섯(phellinus linteus) 및 영지버섯(Ganoderma lucidum)로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 곰팡이(fungi)를 접종하고 고체발효하여 수득되는 발효추출물인 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서,

상기 발효추출물은 화장료 조성물에 0.0001 내지 10 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
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