KR101431088B1

KR101431088B1 - 항―노화 활성 성분의 선별을 목적으로 하는 데스모글레인 ⅰ 단백질의 수용성 형태의 용도

Info

Publication number: KR101431088B1
Application number: KR1020100003222A
Authority: KR
Inventors: 마르크 도노반; 루시에 시모네티; 도미니크 베르나르드
Original assignee: 로레알
Priority date: 2009-01-13
Filing date: 2010-01-13
Publication date: 2014-10-07
Also published as: JP2010175538A; JP6284897B2; US20100216165A1; KR20100083741A; EP2209006B1; US9316653B2; JP2015158500A; FR2940976B1; JP5820565B2; FR2940976A1; BRPI1002094A2; ES2564186T3; CN101980022A; EP2209006A1

Abstract

본 발명은 활성 성분 또는 처치(treatment), 특히 표피에 관련된 항-노화(anti-ageing) 활성 성분 또는 처치(treatment)의 유효성을 평가하기 위한 마커로서의, 착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 하나 이상의 데스모글레인 I의 수용성 펩타이드 형태(들)의 용도에 관한 것이다.

Description

항―노화 활성 성분의 선별을 목적으로 하는 데스모글레인 Ⅰ 단백질의 수용성 형태의 용도{Use of soluble forms of the Desmoglein I protein for the purposes of screening for anti-ageing active agents}

본 발명은 하나 이상의 피부 노화의 징후(sign)를 보여주는 표피에 대한 잠재적 활성 성분의 유효성을 식별(characterization)하기 위한, 적어도 부분적으로 데스모글레인 I로부터 유래된 착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 수용성 펩타이드 형태의 용도에 관한 것이다.

상피는 세포들이 다른 세포들과 결합하여 서로 연결되어 있는 조직이며 기저막 위에 존재한다. 상피는 외부 표면, 예를 들면 피부의 표면, 즉 표피를 형성하거나, 점막의 표면에 있는 내부 표면을 형성한다. 상피는 또한 샘(gland)을 형성할 수 있다.

상세하게, 이러한 상피는 세포 증식, 이동 및 분화의 모든 단계에서 활동하는 미세하게 조절된 세포 내부의 징후(sign) 및 세포 외부의 징후(sign)의 한 세트의 실행 및 다양한 세포 외부 기질 성분의 합성으로부터 유래된 항상성의 구조이다. 이러한 징후(sign)는 특히 각질형성세포(keratinocyte)에 의해 생성된 팩터(factor)의 활동으로부터 유발될 수 있다.

상피의 정확한 생리적 기능의 유지는, 특히 상피의 최종 분화 또는 프로테오글라이칸 합성을 포함한다.

더욱 상세하게 표피에 관하여 말하자면, 표피는 전통적으로 특히, 피부 줄기 세포를 포함하며, 표피의 종자층(germinative layer), 기저층 위에 있는 다면체 세포(polyhedral cell)의 여러 층으로 구성된 유극층(spiny layer), 개별적인 세포질을 함유하는 케라토히알린 과립(keratohyalin granule)을 포함하는 평편 세포(flattened cell)로 일컬어지는 1 개 내지 3 개 층을 포함하는 과립층(granular layer), 그리고 사세포(corneocyte)로 일컬어지는, 분화의 마지막 단계의 각질형성세포(keratinocyte)로 구성된 각질층(horny layer 또는 stratum corneum)으로 일컬어지는 한 세트의 상위 세포(upper cell)를 구성하는, 각질형성세포(keratinocyte)의 기저층으로 나뉜다.

생물과 환경 사이의 장벽의 기능을 하는 피부의 가장 바깥 부분인, 각질층 및 머리를 구성하는 모낭(hair follicle) 부분을 나타내는, 모간(hair shaft)은 모두, 각질형성세포(keratinocyte) 분화 과정의 결과이다. 표피 분화는 기저층으로부터의 각질형성세포(keratinocyte)가 분화되고 이동하는 성숙 과정 이후에 완전히 각질화된 죽은 세포인, 사세포(corneocyte)의 형성을 유발한다. 분화는 일정하게 유지되는 표피의 두께를 유발하여 표피의 항상성을 보장하는 완벽하게 잘 조화된 현상의 결과이다.

많은 피부 장애 또는 병리학상의 상태는 표피의 항상성의 기능장애로부터 유발될 수 있다.

노화된 피부의 경우에 있어서, 이러한 기능 장애는 일반적으로 겉보기의 주름살(미세 주름살 및 깊은 주름살), 탄력성의 상실, 까칠한 감촉 및 건조함을 통하여 나타난다. 조직학적 관점으로부터, 진피와 표피의 접선(dermo-epidermal junction)의 평평화(flattening) 및 진피 및 표피의 두께의 감소가 관찰된다. 콜라겐 및 글리코사미노글라이칸의 함량이 감소하고, 피부의 장벽 기능이 손상된다. 모든 이러한 현상은 태양에 대한 만성적인 노출에 의해 상승된다.

유사하게, 이러한 기능 장애는 폐경기의 여성에서 더욱 악화될 수 있다.

이러한 기능 장애는 각질층에서 발현되는 일정한 단백질의 발현 또는 생물학적 활성의 서로 다른 조절과 특히 관련될 수 있는 것으로 오늘날 알려져 있다.

데스모글레인 I(또한 DGI로 알려짐)은 프레프로단백질(preproprotein) 형태로, 1049 개의 아미노산을 포함하며 대략 114　kDa 내지 150　kDa의 분자량을 가지며, 당화(glycosylated) 되느냐 또는 당화되지 않느냐에 의존하는, 막통과 당단백질(transmembrane glycoprotein)이다. 상기 단백질의 서열은 36, 110 및 180의 위치에서 아스파라긴 잔기 상에서 당화되는 부위(glycosylation site) 뿐만 아니라, 또한 칼슘-결합 부위를 포함한다.

상기 단백질은 카드헤린(cadherin)에 관련되어 있고 데스모글레인 II 및 III을 또한 포함하는 단백질 계통에 속한다. DGI는, DGI가 주요한 구조적 성분의 하나인, 데스모좀(desmosome)에만 존재한다.

미국특허 제2004/0142335호는, 전사체(transcriptome) 분석에 의하여 젊은 개체의 피부와 비교되는 나이든 개체의 피부에서 데스모글레인 I 단백질을 코딩하는 mRNA의 발현의 상승에 관하여 개시한다. 그러나, 상기 문헌에는 데스모글레인 I의 수용성 펩타이드 형태에 대해서 전혀 제시하지 않는다.

최근에, 본 발명자들은 그러한 측면에서, 표피의 자연 노화(chronological)가 일어나는 동안에, 각질층에서 데스모글레인 I의 발현이 상당히 증가되고, 그 결과 각질층에서 축적된다는 것을 알아냈다. 즉, 본 발명자들은 각질층에서의 데스모글레인 I의 발현의 정도는 피부의 생리학적 상태, 특히 노화를 식별(characterization)하기 위한 유용한 표시를 구성한다는 것을 알아냈다.

그러한 측면에서, 본 발명은, 상피벗김형 처치(treatment)(desquamation-type treatment)를 한 인간 각질층에서, 데스모글레인 I과 구별되지만 그로부터 분명히 유래된 수용성 펩타이드 형태의 식별(characterization)에 관하여 제시하고자 한다. 본 발명자에 의하여 식별(characterization)된 펩타이드 형태는 데스모글레인 I의 단백질 분해로부터 적어도 부분적으로 유래된 것으로 여겨질 수 있다.

본 발명의 수용성 펩타이드 형태는 데스모글레인 I, 즉 서열번호 2의 전체 서열과 구별된다.

이하에서 나타나는 것과 같이, 이러한 착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 상기 단백질의 수용성 펩타이드 형태는, 특히 이하의 실시예 1에서 설명되는, 특정한 ELISA 분석 기법의 개발에 의하여 본 발명자에 의하여 식별(characterization)되었다.

따라서, 이러한 수용성 형태는 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 편리한 도구, 또는 특히 작용, 즉 아마도 피부 노화가 일어나는 동안에 관찰되는 각질층에서의 데스모글레인 I의 축적에 대한, 아마도 퇴화형(degradation type) 작용을 통한 피부 노화를 예방 또는 치료하기 위한 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하기 위한 편리한 도구인 것으로 밝혀졌다.

두 가지 경우에서, 활성 성분 또는 처치(treatment)의 유효성은 본 발명에 따라서 적어도 하나의, 또는 심지어 여러 개의, 수용성 형태의 방출의 증가를 통하여 나타난다.

따라서, 본 발명의 관점에 따르면, 본 발명은 피부 노화를 예방 또는 치료하는데 유용한 활성 성분을 선별하기 위한 도구로서, 서열번호 1 또는 그의 유사체의 전부 또는 일부에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래된, 착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태의 용도에 관한 것이다.

바람직한 실시예에 따라서, 본 발명에 적합한 수용성 펩타이드 형태는 서열번호 2에 의해 대표되지 않는다.

이러한 수용성 펩타이드 형태의 함량의 증가는 항-노화(anti-ageing) 처치(treatment)의 유효성을 나타낸다.

상세하게, 상기 펩타이드 형태(들)의 함량의 존재 또는 증가의 감지는 피부 노화를 예방 또는 치료하는데 유용한 물성을 갖는 활성 성분의 지표이다.

본 발명은 a) 수용성 펩타이드 형태의 방출에 적합한 상태에서, 적어도 하나의 테스트 항-노화(anti-ageing) 활성 성분과 접촉하는, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 형태를 방출할 수 있는 적어도 하나의 세포 타입을 가져오는 단계, b) 상기 수용성 펩타이드 형태의 함량을 측정하는 단계, 및 c) 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물의 부존재하에서 측정된 상기 수용성 형태의 함량과 상기 b) 단계에서 측정된 함량을 비교하는 단계를 포함하는 활성 성분, 특히 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 방법에 관한 것이다.

편리하게, 수용성 형태(들)의 함량의 증가가 관찰되는 활성 성분(들)을 선택하는 단계는 c)의 단계 말(end)에, 또한 실행될 수 있다.

본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 또한, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 데스모글레인 I의 수용성 펩타이드 형태를 질적 또는 양적으로 식별(characterization)하는 단계를 포함하는, 주름살 또는 미세한 주름과 같은 개체의 자연 노화(chronological)와 관련된 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료하기 위한 미용적 또는 치료적 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하기 위한, 비침습적, 특히 미용적 방법에 관한 것이다.

특히, 본 발명에 따라서 상기 펩타이드 형태의 함량의 존재 또는 증가를 감지하거나 식별(characterization)하는 것은, 상기 활성 성분 또는 상기 처치(treatment)의 유효성을 반영한다.

본 발명의 일실시예에 따라서, 상기에서 설명한 방법 중 하나는, 데스모글레인 I의 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태를 식별(characterization)하는 단계의 말(end)에, 개체에게, 상기 수용성 형태에서 얻은 정보에 관련되어 수립되거나 선택되어 평가된, 케어, 특히 미용 조성물을 투여하는 적어도 하나의 추가적 단계를 포함한다. 특히, 상기 추가적 단계는 식별(characterization)하는 단계에 연속적일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 그러한 조성물은 식별(characterization)하는 단계의 말(end)에 얻을 수 있는 타입의 정보에 적합한, 각각의 조성물로부터 선택될 수 있다.

따라서, 본 발명의 장점은, 첫째, 상피, 특히 피부의 표피의 생리학적 상태를 식별(characterization)하고, 둘째, 그에 따라서 상기 상피 또는 표피에 적합한 처치(treatment)를 조절하는, 간단하고 빠른 방법을 제공할 수 있는 것이다.

본 발명에서 사용하는 용어 "피부 노화의 징후(sign)"는 자연 노화(chronological), 예를 들면 주름살 및 미세한 주름, 쭈글쭈글한 피부, 피부의 탄력성 또는 긴장성의 부족, 진피의 약화(thinning) 또는 콜라겐 섬유의 분해(degradation)에 기인한 겉보기의 피부의 모든 변형을 의미하며, 이것은 늘어지고 주름진 피부를 초래한다.

더욱 상세하게, 상기에서 설명한 비치료적 방법은 i) 개체를 대표하는 적어도 하나의 제 1 피부 표면 샘플을 제공하는 단계, ii) 상기 샘플에서, 특히 이하의 실시예 1에서 설명한, 특히 ELISA 분석 기법을 통하여, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태를 수량화하는 단계, iii) 상기 개체의 대표적 제 2 피부 표면 샘플에 대해, 상기 i) 단계 및 ii) 단계를 반복하는 단계, 및 iv) 처치(treatment)의 적어도 하나의 효과와 관련된 정보로부터 추론하기 위하여, 상기 ii) 단계와 iii) 단계의 말(end)에 얻은, 제 1 및 제 2 피부 표면 샘플들의 결과를 비교하는 단계를 포함하는, 개체의 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료할 수 있는 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하기 위한 것이다.

ii) 단계의 참조값(reference value) 또는 데이터는, 상기 처치(treatment)를 하기 전에, 처치(treatment)의 대상인 대표적 개체의 상피, 특히 표피로부터 얻은 데이터일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 제 1 샘플은 처치전(pretreatment) 상태를 대표하며, 상기 제 2 샘플은 처치(treatment)의 과정 동안의 상태 또는 처치후(post-treatment) 상태를 대표한다.

iv) 단계에, 상기 수용성 펩타이드 형태의 함량의 증가의 감지는 상기 처치(treatment)의 유효성을 반영한다.

본 발명의 또다른 실시예에 따라서, 본 발명의 방법은 상기 개체에, iv) 단계의 말(end)에 얻은 정보와 관련되어 수립되거나 선택된 미용 케어 조성물을 투여함으로써, 상기 처치(treatment)를 조절하는 단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 또다른 관점에 따라서, 본 발명은 또한, 데스모글레인 I에 대하여 작용할 수 있는 생물학적 또는 화학적 화합물을 선별하고, 특히 그것을 퇴화시켜서, 결과적으로 데스모글레인 I의 수용성 형태의 방출을 유도하고 증진할 수 있는 도구로서의, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태의 용도에 관한 것이다.

수용성 형태의 식별(characterization)은 또한, 표피 상태의 진단을 수립하는데 유용하다는 것을 증명할 수 있다.

따라서, 본 발명은 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo )에서 상피 상태, 특히 상피의 자연 노화(chronological) 상태를 식별(characterization)하고, 상피의 자연 노화(chronological) 상태를 나타내는 상기 펩타이드 형태(들)의 함량의 존재 또는 감소를 감지하는 도구로서의, 본 발명에 따르는 수용성 펩타이드 형태의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따르는 데스모글레인 I의 수용성 펩타이드 형태의 질적 또는 양적 식별(charaterization)을 포함하는, 특히 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서, 표피의 자연 노화(chronological) 상태를 식별(characterization)하는, 비침습적, 특히 미용적 방법에 관한 것이다.

상피 상태를 식별(characterization)하는 방법은, a) 상기 상피의 표면 샘플에서, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태의 함량을, 특히 ELISA 분석 기법을 통하여 측정하는 단계, b) 참조값(reference value)과 상기 a) 단계에서 측정된 상기 함량을 비교하는 단계를 포함한다.

본 발명의 일 변형예에 따르면, 예를 들어, 식별(characterization)의 대상이 되는 것, 그리고 알려진 상태와 구별되는, 적어도 하나의 상피, 특히 표피로부터 얻은 데이터 또는 수치는 얻은 참조값(reference value) 또는 수치와 비교하여 평가될 수 있다.

본 발명의 방법은 시험관 내(in vitro), 생체 밖(ex vivo) 또는 생체 내(in vivo)에서 실행될 수 있다.

이하의 설명에서 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따르는 방법은 그 방법의 실행이 침습적 과정을 요구하지 않는 한 특히 편리하다.

왜냐하면, 각질층에서의 노화에 대한 이러한 새로운 바이오마커(biomarker)의, 본 발명자들에 의한, 국소화(localization)는 간단한 국소 견본추출(sampling)에 의해 상기 마커의 발현을 양적 또는 질적으로 식별(charaterization)하는 것을 가능하게 만들기 때문이다.

편리하게, 상기 방법은 박피(stripping)에 의해 간단하게 채취되는 조건에서 개체의 각질층의 샘플에 대해 실행될 수 있다. 견본추출(sampling) 방법은, 예를 들어, 상피, 특히 표피에 접착 테이프를 적용하는 박피 기법(stripping technique)이 될 수 있다. 상기 접착 테이프를 떼어내면서, 상피 부분, 예를 들면 표피 부분이 견본추출된다. 단백질 추출(extraction) 후에, 상기 상피 부분은 그 후 본 발명에서 사용되는 ELISA 분석에 의해 분석된다.

본 발명의 또다른 관점에 따라서, 본 발명은 다층화된 세포 모델, 특히 재구성된 피부의 모델을 준비 또는 개선하는, 본 발명에 따르는 수용성 펩타이드 형태(들)의 유효한 함량의 용도에 관한 것이다.

본 발명에서 사용하는 "유효한 양"은 기대되는 효과를 얻는데 필요한 최소한의 함량을 의미한다.

본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은, 분리되어 재구성된 피부, 특히 각질형성세포를 생성할 수 있는 세포와 접촉하는, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태를 가져오는 단계를 포함하는, 분리되어 재구성된 피부를 준비하는 방법에 관한 것이다.

데스모글레인 I의 "수용성 형태"의 정의

본 발명에서 사용하는 용어 "수용성"은 예를 들어, 그러한 성분의 존재하에서만 추출될 수 있는, 본래의 데스모글레인 I에 반대로, 카오트로픽제(chaotropic agent) 또는 이온 세척제(ionic detergent)와 같은, 단백질-변성 물질 없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는, 본 발명에 따르는 착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 펩타이드 형태의 능력을 설명하기 위한 것이다.

본 발명에서 사용하는 용어 "착화된(complexed)"은 데스모글레인 I 또는 상기 단백질의 절편 또는 데스모글레인 I 단백질 또는 그의 유도체의 또다른 수용성 형태와 구별되는 단백질 중 어느 하나를 갖는, 본 발명에 따르는 펩타이드 형태들 중 어느 하나의 수용성 컨쥬게이트(conjugate)에 관한 것이다.

본 발명에서 사용하는 용어 "데스모글레인 I 단백질의 유도체"는, 이하에서 설명한 바와 같이, 데스모글레인 I 단백질의 절편 또는 유사체를 나타낸다.

이러한 착화된(complexed) 수용성 형태는, 데스모글레인 I 또는 그의 절편과 타겟 단백질이라고도 불리는 제 2의 단백질(secondary protein)의 회합(association)으로부터 유래된 생성물일 수 있다.

데스모글레인 I 또는 그의 절편과 상호작용할 수 있는 이러한 단백질의 예로서, 데스모콜린 2a(Dsc2, Desmocollin 2a), 플라코필린스 1(Plakophilins 1), 플라코필린스 2(Plakophilins 2), 플라코필린스 3(Plakophilins 3), 플라코글로빈(Plakoglobin), 칼리크레인 5(Kallikrein 5), 성장 호르몬 1(GH1, growth hormone 1), 27　kD 동원체 자가항원(SSSCA1, 27　kD centromeric autoantigen), RuvB-유사 1(RuvB-like 1), C3orf10 단백질 및 백시니아 관련 키나아제 3(VRK3, vaccinia related kinase 3)을 들 수 있다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르는 수용성 형태는 서열번호 1 또는 그의 유사체의 전부 또는 일부에 의해 대표되는 핵산에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드의 단백질 분해(proteolysis)로부터, 적어도 부분적으로 유래된다.

본 발명에서 사용하는 용어 "핵산 서열의 절편"은 본 발명에 따르는 수용성 형태 또는 그의 유사체를 부분적으로 코딩하는 핵산 서열, 상세하게 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 대표되는 핵산 서열을 의미한다.

본 발명에서 사용하는 용어 "핵산 서열의 유사체"는 핵산 코드의 퇴화로부터 선택적으로 유발되고, 상기 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩타이드의 서열과 동일하거나 유사한 서열을 갖는 수용성 형태의 일부를 코딩하는, 핵산 서열을 의미한다.

기원의 생물체(organism of origin)에서 천연적으로 나타날 수 있거나 나타날 수 없는 사실을 미리 판단함이 없이, 핵산 서열은 가능한 상기의 어느 기원들(origins), 예를 들면, 동물, 특히 포유동물, 더더욱 특히 인간 또는 식물로부터, 또는 미생물(바이러스, 파즈(phage), 그중에서도 특히 박테리아)로부터, 또는 균류로부터 유래할 수 있다.

본 발명의 또다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 수용성 형태는 서열번호 2 또는 그의 유사체로 대표되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드의 단백질 분해(proteolysis)로부터 적어도 부분적으로 유래된다.

본 발명에서 사용되는 용어 "데스모글레인 I"은 일반적으로, 달리 표현되지 않는다면, 그것의 명백한 분자량 또는 등전점(isoelectric point)을 변형할 수 있는, 포지션 36, 110 또는 180에서 아스파라긴 잔기에 대한 N-아세틸글리코실레이션(N-acetylglycosylation)의, 번역후 변형(post-translational modification)을 하거나 하지 않을 수 있는 단백질의 서열(서열번호 2)을 의미한다.

더욱이, 폴리펩타이드의 주요 서열, 예를 들면, 트립신과 같은 프로테아제 효소에 의해 특별히 인식되는 위치를 결정하는, 일련의 아미노산은, 일단 이러한 위치의 인식이 유효하게 되면, 단백질 분해(proteolysis)에 의한 폴리펩타이드의 절단을 유래하는 것으로 잘 알려져 있다. 본 발명에 따르는 데스모글레인 I의 수용성 형태를 대표하는 것으로서 다양한 펩타이드 또는 단백질 분해(proteolysis) 절편이 수용성 형태로 존재하는 경우, 상기 단백질 분해(proteolysis)는 다양한 펩타이드 또는 단백질 분해 절편의 생성을 유발한다.

따라서, 본 발명의 일 실시예에 따라서, 본 발명에 따르는 수용성 형태를 유래하는 폴리펩타이드는 서열번호　3, 서열번호　4, 서열번호　5, 서열번호　6, 서열번호 No.　7, 서열번호　8, 서열번호　9, 서열번호　10, 서열번호　11, 서열번호　12, 서열번호　13, 서열번호　14, 서열번호　15, 서열번호　16, 서열번호　17, 서열번호 18, 서열번호　19, 서열번호　20, 서열번호　21, 서열번호　22, 서열번호　23, 서열번호　24, 서열번호　25, 서열번호　26, 서열번호　27, 서열번호　28, 서열번호　29, 서열번호　30, 서열번호　31, 서열번호　32, 서열번호　33, 서열번호　34, 서열번호　35, 서열번호　36, 서열번호　37, 서열번호　38, 서열번호　39, 서열번호　40, 서열번호　41, 서열번호　42, 서열번호　43, 서열번호　44, 서열번호　45, 서열번호　46, 서열번호　47, 서열번호　48, 서열번호　49, 서열번호　50, 서열번호　51, 서열번호　52, 서열번호　53, 서열번호　54, 서열번호　55, 서열번호　56, 서열번호　57, 서열번호　58, 서열번호　59, 서열번호　60, 서열번호　61, 서열번호　62, 서열번호　63, 서열번호　64, 서열번호　65, 서열번호　66, 서열번호　67, 서열번호　68, 서열번호　69, 서열번호　70, 서열번호　71, 서열번호　72, 서열번호　73, 서열번호　74, 서열번호　75, 서열번호　76, 서열번호　77, 서열번호　78, 서열번호　79, 서열번호　80, 서열번호　81, 서열번호　82, 서열번호　83, 서열번호　84, 서열번호　85 및 이들의 혼합물로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.

본 발명에서 사용하는 용어 "폴리펩타이드의 유사체"는 특히 상기 폴리펩타이드의 특징적 서열의 하나에 따르며, 상기 폴리펩타이드와 동일한 성질의 생물학적 활성을 갖는, 서열 상동성을 보여주는 폴리펩타이드를 의미한다.

상동성은 적어도 85%, 예를 들어 적어도 90%, 적어도 95%일 수 있다. 상동성은 시각적 대조 또는 www.ncbi.nlm.nih.gov 에서 이용가능한 BLAST 프로그램과 같은, 업계에서 일반적으로 사용되는 어떠한 컴퓨터 도구에 의해 측정될 수 있고, 디폴트 함수(default parameter)를 가지고 사용될 수 있다.

서열 상동성은, 본 발명에 따르는 폴리펩타이드의 특징적 서열에서 하나 이상의 아미노산의 삭제, 또는 하나 이상의 아미노산의 삽입, 또는 하나 이상의 아미노산의 치환으로부터 발생하는, 본 발명에 따르는 펩타이드의 서열에서 일어난 돌연변이 또는 다양성으로부터 유래한 변형으로부터 유발될 수 있다.

본 발명에서 사용하는 용어 "절편"은 적어도 4 개, 적어도 6 개, 바람직하게 적어도 8 개, 그리고 더욱 바람직하게 12 개의 데스모글레인 I의 연속적 아미노산을 포함하며, 실질적으로 유사한 생물학적 활성을 나타내는 펩타이드 부분을 의미한다. 일반적으로, 폴리펩타이드 유사체는 천연 아미노산 서열에 따르는 보수적 치환을 포함할 수 있다.

이러한 다양한 변형이 결합될 수 있다.

본 발명에서 고려될 수 있는 돌연변이의 실시예의 한 예로서, 유사한 수치료법의 지수(hydropathic index)를 갖는, 그러나 본 발명에 따르는 데스모글레인 I의 원래의 생물학적 성질에 실질적으로 영향을 미치지 않는, 아미노산 잔기를 가진 하나 이상의 아미노산 잔기의 대체에 관한 언급이 비소모적으로 이루어질 수 있다.

수치료법의 지수는 아미노산의 소수성(hydrophobicity) 및 전하(charge)에 따라서 아미노산에 할당된 지수이다(Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157: 105).

본 발명에 의하여 또한 밝혀진 수용성 형태는 하나 이상의 번역후 변형(들)(post-translational modification(s))이 일어난 폴리펩타이드로부터 유래될 수 있다.

본 발명에서 사용하는 용어 "번역후 변형(들)"은 펩타이드 또는 단백질이 세포에서 세포 합성의 말기에 겪을 수 있는 모든 변형들, 예를 들어, 하나 이상의 인산화 반응(들), 하나 이상의 티올화 반응(들), 하나 이상의 아세틸레이션 반응(들), 하나 이상의 당화 반응(들), 파네실화 반응(farnesylation) 또는 팔미토일레이션 반응(palmitoylation)과 같은, 하나 이상의 리피데이션 반응(들)(lipidation(s)), 펩타이드 서열 내에서 이황화 결합 또는 절단의 형성과 같은 구조적 재배열 같은 것을 의미한다.

더욱이, 유사체는 천연 폴리펩타이드와 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 실행에 적합한 수용성 형태는, 데스모글레인 I의 원래 형태의 효소적 또는 화학적 세포 용해(lysis) 후에 적당히 얻을 수 있거나, 또는 화학적 또는 생물학적 합성에 의해 적당히 얻을 수 있거나, 또는 생물학적 조직, 예를 들면 원래 이러한 수용성 형태를 천연적으로 발현하는 피부로부터의 추출에 의하여 적당히 얻을 수 있는, 천연 또는 합성 폴리펩타이드, 또한 이들의 다양한 번역후 변형으로부터 유래할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 착화된(complexed) 수용성 형태는 데스모글레인 I 또는 그의 절편과 또다른 데스모글레인 I 단백질 또는 그의 절편 또는, 타겟 단백질의 회합(association)으로부터 유래될 수 있다.

상기 타겟 단백질은 데스모콜린 2a(Dsc2, Desmocollin 2a), 플라코필린스 1(Plakophilins 1), 플라코필린스 2(Plakophilins 2), 플라코필린스 3(Plakophilins 3), 플라코글로빈(Plakoglobin), 칼리크레인 5(Kallikrein 5), 성장 호르몬 1(GH1, growth hormone 1), 27　kD 동원체 자가항원(SSSCA1, 27　kD centromeric autoantigen), RuvB-유사 1(RuvB-like 1), C3orf10 단백질 및 백시니아 관련 키나아제 3(VRK3, vaccinia related kinase 3)으로부터 선택될 수 있다.

당업자는 재조합 DNA에 기초한 방법들, 예를 들어 매뉴얼 "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" (2차 발행), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook)에 의하여 본 발명에 따르는 수용성 형태를 얻을 수 있다.

본 발명의 또다른 실시예에 따라서, 본 발명의 실행에 적합한 수용체 형태들은 상기에서 언급한 것들, 친수성 또는 소수성 표적제(targeting agent), 생물전환 전구체(bioconversion precursor), 또는 형광의, 방사성의, 측색의(colorimetric)의 표지제와 구별되는 다른 폴리펩타이드와 또한 융합될 수 있다.

비제한 방법에서, 본 발명에 따르는 수용성 형태와 결합될 수 있는 화합물의 예로서, Green Fluorescent Protein와 같은 형광 단백질, 로다민(rhodamine), 플루오레세인(fluorescein), 또는 Texas Red^®과 같은 형광의 화학적 화합물, 인광(phosphorescent) 화합물, ³H, ¹⁴C, ³⁵S, ¹²¹I 또는 ¹²⁵I와 같은 방사성 원소, 또는 갈락토시다아제(galactosidase), 펄옥시다아제(peroxidase), 클로람페니콜 아세틸전이효소(chloramphenicol acetyltransferase), 루시퍼라아제(luciferase) 또는 알칼리성 포스파타아제(alkaline phosphatase)의 반응에 민감한 크로모제닉(chromogenic) 기질과 같은 측색의 표지제를 들 수 있다.

본 발명에 따르는 수용성 형태와 결합될 수 있는 화합물의 성질에 따라서, 커플링(coupling)은 화학적 방법에 의해 실행될 수 있으며, 특히 민감한 화학적 작용에 의해서, 또는 당업자에게 알려진 분자 생물학적 방법에 의하여 실행될 수 있다.

폴리펩타이드를 감지하는 방법으로서, 웨스톤 블로팅(Western blotting), 슬롯 블로팅(slot blotting), 도트 블로팅(dot blotting), 싱글플렉스 또는 멀티플렉스 타입의 ELISA(효소결합면역흡착검사법), 프로테오믹스(proteomics) 또는 글리코믹스(glycomics) 방법, 은계 염색약(silver-based stain), 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는 SYPRO를 사용하여 폴리아크릴아미드 겔에서 폴리펩타이드를 염색하는 방법, 면역형광법(immunofluorescence), 자외선 흡수법(UV absorption), 전통적인 면역조직화학(immunohistochemical) 방법, 전자 또는 공초점 주사현미경(confocal microscopy), FRET(형광공명에너지전이), TR-FRET(시분할 FRET)방법, FLIM(형광 수명 이미징 현미경술) 방법, FSPIM(형광 스펙트럼 이미징 현미경술) 방법, FRAP(광표백 이후의 형광 회복) 방법, 리포터-유전자(reporter-gene) 방법, AFM(원자력 현미경법), 표면 플라즈몬 공명법(surface plasmon resonance method), 미세열량계법(microcalorimetry method), 유세포분석법(flow cytometry method), 바이오센서법(biosensor method), 방사면역측정법 (RIA), 등전집중방법(isoelectric focusing method), 및 효소 분석법(enzymatic assay), 펩타이드 칩, 당(sugar) 칩, 항체 칩을 이용한 방법, 질량분석법(mass spectrometry method), 및 SELDI-TOF 분광법 (Ciphergen)을 들 수 있다.

상기에서 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따르는 수용성 형태는 ELISA 방법, 특히 이하의 실시예 1에서 설명한 ELISA 방법에 의하여 편리하게 식별(characterization)된다.

항-노화( anti - ageing ) 활성 성분의 선별하거나 피부 노화의 징후( sign )에 대한 처치( treatment )의 유효성을 식별( characterization )하는 본 발명에 따르는 수용성 형태의 용도

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 관점에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따르는 수용성 형태를, 질적 또는 양적으로 분석하여 얻은, 항-노화(anti-ageing) 활성 성분 또는 미용적 또는 치료적 처치(treatment)의 유효성을, 특히 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서, 식별(characterization)하는 비침습적 방법에 관한 것이다.

본 발명의 식별(charaterization)을 실행하기 위한 외과적 기법이 요구되지 않는 한, 이러한 본 발명은 특히 편리하다.

이하에서 설명하는, 본 발명에 따르는 방법은, 샘플, 예를 들어, 상피, 특히 개체로부터 얻은, 표피의 분리된 샘플에 대해 실행될 수 있다.

본 발명에 따르는 방법은 상피, 및 특히 상피 세포 모델로부터 채취한 표피, 특히 표피 세포 모델, 또는 그러한 세포 모델의 상태를 제한하기 위하여 분리된 재구성된 피부로부터 얻은 샘플에 대하여 또한 실행될 수 있다.

따라서, 표피의 추출물은 간단한 박피에 의하여 얻어질 수 있고, 하기의 실시예 1에서 설명한 대로 ELISA에 의해 직접적으로 분석될 수 있다.

박피 기법은 표피 표면에 끈적한 표면을 적용하는 것, 즉 3M의 Blenderm^®, D'squam(CuDERM의 상업적 접착제), 또는 시아노아크릴레이트 접착제 같은 것을 적용하는 것이다. 이러한 박리에 의하여, 점착성 각질세포(corneocyte) 및 그의 세포내 공간의 함량이 견본추출될 수 있고 결과적으로 단백질 함량에 접근할 수 있는 추출물이 될 수 있다.

본 발명의 방법에 적합한 샘플을 채취하는 것은 피부 표면을 "수세((washing)"한 것에 의해 더욱 직접적으로 실행될 수 있다. 예를 들어, 유체 순환(fluid circuit)과 결합된 프랑스 특허 제2　667　778 호에 설명된 바와 같은, 베인 터빈(vane turbine) 타입 또는 와선형(spiral) 세포 타입의 부속물에 의하거나, 간단히 피부의 표면에 완충액 액적을 추가/제거하는 것에 의할 수 있다.

본 발명을 실행하는데 적합한 또다른 견본추출 방법의 수단으로서, 트윈 블레이드 시스템(twin blade system) 또는 면도 생검(shave biopsy)에 의하여 각질층의 상단 부분을 벗겨내는 것에 기초하는 방법을 들 수 있다. 이러한 기법은 스꽈메(squamae)를 수집하는 것을 가능하게 하며, 상기 수집된 스꽈메는 미네랄, 아미노산 또는 지질 함량을 측정하기 위하여 다양한 기법에 의해 직접적으로 분석될 수 있다.

견본 추출의 말(end)에, 샘플은 ELISA방법에 의하여 식별(characterization)된다.

이러한 방법은 본 발명에 따르는 수용성 형태의 감지에 적합한 항체의 용도에 특히 기초한 것이다. 표피 상태를 평가하기 위한 도구로서 사용될 수 있는 항체는 "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)에서 설명된 바와 같이, 당업자에게 알려진 방법에 의해서도 얻어질 수 있다. 편리하게, 사용되는 항체는 Antibodies-by-design (AbD) 회사에 의해 개발된 것과 같은 재조합 항체가 될 수 있다.

이하의 실시예 1에서 설명된 바와 같이, 데스모글레인 I의 수용성 형태를 감지하는 방법은 특히 2개 타입의 항체, 예를 들면 HuCAL 기술(AbD 클론 AbyD03984)을 사용하여 개발된 캡쳐 항체(capture antibody) 및 MSD 표지(단일클론 항체, 클론 129204, R&D 시스템)에 따르는 "술포-태그(sulpho-tag)" 로 표지된 디텍션 항체(detection antibody)의 사용을 요구한다.

생물학적 또는 화학적 화합물의 선별

본 발명은, 데스코글레인 I에 대해 작용하여, 결과적으로 본 발명에 따르는 수용성 형태의 방출에 영향을 미치는, 생물학적 또는 화학적 화합물, 또는 심지어 항-노화(anti-ageing) 활성 성분, 또는 물리화학적 팩터(factor)를 선별하는 방법에 관한 것으로서, a) 수용성 펩타이드 형태의 방출에 적합한 상태에서, 적어도 하나의 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물과 접촉하는 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 펩타이드 형태를 방출할 수 있는 적어도 하나의 세포 타입을 가져오는 단계, b) 상기 수용성 펩타이드 형태의 함량을 측정하는 단계, 및 c) 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물의 부존재 하에서 측정된 상기 수용성 형태의 함량과 상기 b) 단계에서 측정된 함량을 비교하는 단계를 포함한다.

편리하게, 수용성 형태(들)의 함량의 증가가 관찰되는 활성 성분(들)을 선택하는 단계는 c) 단계의 말(end)에, 또한 실행될 수 있다. 상기 c) 단계에서 실행된 비교를 통하여, 데스모글레인 I를 변형하여, 따라서 본 발명에 따르는 수용성 형태의 방출에 영향을 미치는 상기 테스트된 화합물의 성질에 관한 정보를 추론할 수 있다.

이러한 관점에서, 나이와 함께 각질층에 축적되는, 데스모글레인 I에 대한 유효성을 나타내기 위한 화합물은 본 발명에 따르는 데스모글레인 I의 수용성 형태의 방출을 유도한다.

상기 수용성 펩타이드 형태의 함량의 존재 또는 증가의 감지는 데스모글레인 I 상에서 작용할 수 있는 화학적 또는 물리학적 화합물의 표지이다.

더욱 상세하게, 개체에서 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료할 수 있는 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하는데 유용한 방법은 i) 개체를 대표하는 적어도 한의 제 1 피부 표면 샘플을 제공하는 단계, ii) 상기 샘플에서, 특히 ELISA 분석 기법을 통하여, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 수용성 형태를 수량화하는 단계, iii) 상기 개체의 대표적인 제 2 피부 표면 샘플에 대해, 상기 i) 단계 및 ii) 단계를 반복하는 단계, 및 iv) 처치(treatment)의 적어도 하나의 효과와 관련된 정보로부터 추론하기 위하여, 상기 ii) 단계와 iii) 단계의 말(end)에 얻은, 제 1 및 제 2 피부 표면 샘플들의 결과를 비교하는 단계를 포함한다.

테스트 되어야 하는 생물학적 또는 화학적 화합물, 또는 심지어 항-노화(anti-ageing) 활성 성분, 또는 물리화학적 팩터의 사용에 앞서 참조값(reference value)의 측정이 실행되는 경우, 본 발명에 따르는 방법은 또한, 적절하게, 상기 화합물의 잠재적 유효성을 평가할 수 있다.

본 발명에 따르는 수용성 형태(들)의 방출은 상기 화합물의 존재에 의하여 영향받지 않을 수 있으나, 한편으로는 자극될 수 있다.

순기능(stimulatory effect)이 관찰되는 경우, 테스트된 화합물은, 예를 들어 항-노화(anti-ageing) 활성 성분으로서 사용될 수 있다.

본 발명에 따르는 방법은 분리된 세포 샘플에 대하여 실행될 수 있다.

본 발명에 따르는 수용성 형태의 함량의 측정은 이하의 실시예 1에서 설명한 일정한 ELISA 방법에 의하여 실행된다.

본 발명은 또한, 다층화된 세포 모델, 특히 표피 타입 또는 점막 타입의 세포 모델, 특히 재구성된 피부 모델을 준비 또는 개선하기 위한, 본 발명에 따르는 수용성 형태의 유효한 함량의 용도에 관한 것이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "재구성된 피부 모델"은 다양한 특히 피부의 천연 구성성분과 같은, 세포 타입, 예를 들면, 각질형성세포, 섬유모세포(fibroblast), 랑게르한 세포 및 멜라닌세포와 같은 것이 결합된 모델을 나타낸다.

섬유모세포는 방사선 조사되거나, 그렇지 않을 수도 있다.

그러한 모델 및 그의 제조는 당업자에게 알려져 있다.

따라서, 본 발명은 분리되고 재구성된 피부, 특히 각질형성세포를 생성할 수 있는 세포와 접촉하는 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체 형태를 가져오는 최소한의 단계를 포함하는, 분리되고 재구성된 피부를 준비하는 방법에 또한 주의를 기울인다.

본 발명의 목적을 위하여, 본 발명의 또다른 관점에 따르면, 상기에서 설명한 데스모글레인 I의 수용성 형태는 미용적 또는 치료적 조성물에 사용될 수 있다.

본 발명에 따르는 모든 미용적 또는 치료적 조성물이 생리학적으로 허용가능한 매체를 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용하는 용어 "생리학적으로 허용가능한 매체"는 상피 또는, 피부, 두피, 입술, 점막과 같은 케라틴 물질, 머리카락, 손톱 및 체모와 같은 케라틴 섬유, 또는 구강 또는 장관 외(parenterally) 적합한 곳에 본 발명의 조성물을 적용하는데 적합한 매체를 의미한다.

본 발명의 일 실시예에 따라서, 본 발명은 미용적 또는 치료적 조성물의 형태로 될 수 있다.

본 발명에 따르는 조성물은 수용성 형태(들)에 추가하여, 적어도 하나의 미용적 또는 치료적 활성 성분을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 문맥에서 사용될 수 있는 활성 성분의 예로서, 실리콘 오일, 트리글리세라이드 타입의 식물 오일, 팔렘 오일(parleam oil)과 같은 탄화수소계 오일, 지방산과 지방산 알코올의 에스테르와 같은, 미용 오일을 들 수 있다.

또한 본 발명에서는, 보습 활성성분, 또는 세라마이드, 콜레스테롤 설페이트 또는 지방산 및 이들의 혼합물과 같은, 천연 지질막(natural lipid barrier)을 개선시키는 활성 성분과 같은, 피부 상태를 개선시킬 수 있는 다른 활성 성분이 또한 사용될 수 있다.

또한 본 발명에서는, 프로테아제, 리파아제, 글루코시다아제, 아미다아제, 세레브로시다아제(cerebrosidase) 또는 멜라나아제, 및 이들의 혼합물과 같은, 피부에서 활성을 갖는 효소가 또한 사용될 수 있다.

일반적으로 본 발명의 조성물은 피부(몸의 피부 부위) 또는 점막(볼, 협골점(jugal), 잇몸, 생식기관, 결막, 등)에 적용될 수 있다.

공지된 방법에 의해, 본 발명의 미용적 조성물은 친수성 또는 소수성 겔화제, 친수성 또는 소수성 부가제(additive), 보존제, 항산화제, 용매, 향기, 부형제(filler), 차단제(screening agent), 냄새 흡수제 및 염료와 같은, 미용 업계에서 통상적인 보조제(adjuvant)를 또한 포함할 수 있다.

본 발명에 따르는 조성물의 다양한 구성성분의 함량은 업계에서 전통적으로 사용되는 함량이다.

본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은, 피부, 점막 또는 케라틴 섬유의 적어도 일부에 본 발명에 따르는 적어도 하나의 미용적 조성물을 적용하는 적어도 하나의 단계를 포함하는, 피부 노화의 징후(sign)의 미용적 처치(treatment)를 위한 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 또한 용도에 관한 것이며, 상세하게 피부 노화의 징후(sign)를 예방하기 위한, 더욱 상세하게 노화된 피부의 예방 또는 치료를 위한, 데스모글레인 I의 수용성 펩타이드 형태, 또는 그의 유사체, 또는 그러한 폴리펩타이드의 활성, 발현 또는 안정성을 조절하는 성분의, 미용적 또는 치료적 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 실시예에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따르는 수용성 형태를 조절하는 성분의 용도에 관한 것이다.

본 발명에서 사용하는 용어 "조절하다"는 주어진 효과의 관점으로부터, 그러한 효과를 자극하거나 억제하는 작용을 의미한다.

본 발명에서 사용하는 용어 "생물학적 활성 또는 발현을 조절하는 성분 또는 조절할 수 있는 화학적 또는 물리학적 화합물"은 본 발명에 따르는 수용성 형태, 또는 상기 수용성 형태를 부분적으로 코딩하는 핵산 서열에 대하여, 또는 상기 수용성 형태를 포함하는, 세포 내의 또는 세포 외의 징후(sign) 경로의 성분에 대하여, 또는 상기 수용성 형태를 코딩하는 핵산 서열의 전사 또는 번역을 조절하고, 또한 상기 수용성 형태의 안정성을 조절하는데 관여하는 성분에 대하여, 직접적 또는 간접적으로, 작용할 수 있는 어떠한 화합물을 의미한다.

이러한 조절제(modulating agent)는 본 발명의 수용성 형태의 발현을 억제하거나 활성화하는 성분, 그밖에 상기 수용성 형태의 안정성을 조절하는 성분이 될 수 있다.

더욱 상세하게, 조절제는 본 발명에 따르는 수용성 형태의 발현의 활성제(activator)가 될 수 있다.

본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 조절제는, 그의 단백질 분해를 억제함으로써, 본 발명에 따르는 수용성 형태의 안정성을 증진시키는 성분이다.

이하의 실시예는, 본 발명의 비제한 예시에 의하여 나타난다.

본 발명의 장점은, 첫째, 상피, 특히 피부의 표피의 생리학적 상태를 식별(characterization)하고, 둘째, 그에 따라서 상기 상피 또는 표피에 적합한 처치(treatment)를 조절하는 간단하고 빠른 방법을 제공할 수 있는 것이다.

도 1은 데스모글레인 I의 분해에 따라 작용하는 활성 성분을 모니터하는데 있어서, 본 발명에 따르는 고감도 ELISA 분석의 유효성을 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따르는 수용성 펩타이드 형태의 함량에 있어서, 10%의 비피도바이오틱(bifidiobiotic)(CLR 복합체) 및 0.002%의 파이토스핑고신-SLC (처치 "G")로 구성된 혈청의 효과를 나타낸다.

본 출원은 2009년 1월 13일에 출원된 프랑스 가출원 제09 50159호와 2009년 1월 27일에 출원된 미국 가출원 제61/202,078호의 우선권 이익을 주장하며, 상기 출원의 내용들은 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.

실시예 1 :

본 발명에 따르는 데스모글레인 I의 수용성 형태를 분석하기 위한 고감도 ELISA 분석법의 개발

"데스모글레인"-특이 96-웰 플레이트는 MesoScale Discovery (MSD) 회사의 기술을 사용하여 맞춤형으로 개발되었다.

데스모글레인의 세포외 부위에 대한, 재조합 캡처 항체(클론 AbyD03984)는 재조합 데스모글레인 (R&D 시스텝)을 사용하여 실행되는 선별에 의하여 HuCAL(회사: Antibodies by Design) 기술로 개발되었다. 캡쳐 항체(클론 DB15C9)는 작은 반점 타입(MesoScale)의 표준 96-웰 플레이트 위에 200 마이크로그램/ml의 농도로 떨어뜨렸다.

참조 곡선(400 내지 6 ng/ml)은 재조합 데스모글레인 단백질을 사용하여 수립되었다. 각각의 플레이트는 주위 온도에서 1시간 동안 블로킹 완충액(MesoScale)로 블로킹되었다. 각각 25 마이크로리터의 샘플과 표준물질은 3개씩 준비하고 주위 온도에서 1 시간 동안 교반하여 배양하였다. 그 후 플레이트는 트리스 완충액(MesoScale)으로 4번 수세되었다. 그 후 플레이트는 1　마이크로그램/ml 의 농도에서 MSD 지시에 따르는 "술포-태그(sulpho-tag)" 로 표지된 25　마이크로리터의 검출 항체(단일클론 항체, 클론 129204, R&D Systems)로 주위 온도에서 1 시간동안 교반하여 배양하였다. 플레이트는 150 마이크로리터의 1　X read buffer T (MesoScale)를 첨가하기 전에 트리스 완충액(MesoScale)으로 4 번 수세되었다.플레이트는 "Sector Imager 6000" 기구를 통하여 읽혔다. Bradford 키트(Bio-Rad)를 사용하여 측정된, 데이터는 총 단백질 마이크로그램 당 데스모글레인 ng 단위로 표준화되었다.

실시예 2 :

데스모글레인 I의 분해에 따라 작용하는 활성 성분을 선별하기 위한 고감도 ELISA 분석법의 사용

프로토콜 :

6 mg의 미세하게 둥근 plantaire Stratum Corneum (PSC)는 96-웰 Multiscreen 0.22　마이크로미터 여과 시스템 플레이트(Millipore)의 각각의 웰에 분배된다. 각각의 분석은 3개씩 실행되었다.

0.1M 트리스 완충액에서 0.2% 및 2%로 존재하는 100 마이크로리터의 pH 8의 EDTA는 PSC. 0.1M에 첨가된다. 플레이트는 주위 온도에서 10분 동안 배양된다. 그 후 플레이트는 여과되고, 웰은 200 마이크로리터의 PBS 완충액으로 5번 수세된다. 200 마이크로리터의 pH 8의 0.1M 트리스 완충액은 각각의 웰에 첨가된다. 플레이트는 30 ℃에서 교반하여 2시간 동안 배양된 후 리셉션 플레이트(reception plate)로 여과된다. 따라서, 각각의 반응 매개물(reaction medium)이 수집된다.

데스모글레인 I 폴리펩티드는 앞서 설명된 Mesoscale MA6000 DB016 플레이트를 통하여 분석된다.

각각의 분석은 25 마이크로리터의 반응 매개물을 사용하여 직접적으로 실행된다. 표준 범위는 재조합 데스모글레인(R&D 시스템)을 사용하여 같은 조건에서 준비된다. 결과는 AU(arbitrary units = "Sector Imager 6000" 상에서 얻은 신호) 또는 총 단백질 1 마이크로그램 당 ng의 데스모글레인 I으로 표현될 수 있다.

도 1은, EDTA 계열의 킬레이트제(chelator)를 이용한 처치(treatment)와 같은, 각질교소체(corneodesmosome)의 분해를 촉진하는 처치(treatment)에 의해 유래된, 데스모글레인 I의 수용성 형태의 방출을 실제로 모니터하는 것을 가능하게 한다.

따라서 분석은 시험관 내(in vitro)에서 방출된 수용성 형태를 측정함으로써 데스모글레인 I 분해-자극 효과를 평가하는데 적합하다.

따라서 이러한 분석은 분자 또는 미용 제형(cosmetic formulation), 특히 노화된 각질층에서 관찰되는 데스모글레인 I의 정상적 축적을 보상할 수 있게 만드는, 항-노화(anti-ageing) 활성 성분의 효과를 모니터하기 위한 것이다.

실시예 3 :

박피에 의해 채취한 다양한 샘플에서 데스모글레인 I의 수용성 형태의 함량의 식별( characterization )

이러한 식별(characterization)은 실시예 1에서 설명한 ELISA 분석법을 사용하여 실행된다.

생성물 연구(product study)는 팔뚝으로부터 채취한 샘플을 사용하여, 56일을 초과한, 예를 들면 2개월 동안(40 내지 45세의 카프카스 사람의 피부의, 24명의 여성 개체로 구성된 1개의 그룹)실행되었다.

생성물은 10%의 비피도바이오틱(CLR 복합체) 및 0.002%의 파이토스핑고신-SLC (처치 "G")로 구성된 혈청이다.

CLR 복합체는 INCI 이름 CLSP: Bifidat ferment Lysate, EINECS 이름: Bifidobacterium longum, EINECS 번호: 306-168-4 및 CAS 번호: 96507-89-0로 등록된 용해질에 관한 것이다.

그러한 용해질은 특히 K.　Richter GmbH 회사의 상품명 Repair Complex CLR^®으로 판매된다. 파이토스핑고신-살리실레이트 유도체에 대응되는 상품명 Phytosphingosine-SLC은 Evonik Goldschmidt 회사에 의해 판매된다.

상기 연구에 있어서, D-스콰메(D-squame) 샘플은 팔뚝(얼굴 뒷부분)으로부터 채취되었다.

a) D- 스꽈메 코르네오디스크(D- squame corneodisc )로부터 단백질의 추출

코르네오디스크는 끈적한 표면이 안쪽을 향하는, 2 ml 에펜도르프(Eppendorf) 튜브 속에 놓고, 상기 튜브당 550 마이크로리터의 "Native+"추출 완충액 (TBS, 1%Triton X-100, 1M　NaCl) 및 하나의 스테인레스 스틸브레드(stainless steel bread)를 첨가하였다. 그 후 튜브는 MM400 진동 밀(mill)(Retsch)의 선반에 두었다. 추출은 30 Hz에서 2분당 1 싸이클의 진동 밀에 의해 실행되었다. 매체는 회수되어 0.45　마이크로미터 Millipore Ultrafree 컬럼을 통하여 여과된 후, 4℃ 에서 5000 g으로 5분 동안 원심분리되었다. 상층액은 분석되기 전까지 20℃에서 저장되었다.

b) 통계적 분석

처치 효과(treatment effect )에 대한 분석은 고정 효과로서 시간 요인과 랜덤 효과로서 주관적 요인을 갖는 짝지은 활성 성분-플라시보 차이(paired active agent-placebo differences)에 기초하여, 변수의 혼합 모델의 분석에 의해 실행된다.

D0 및 D56에서의 처치 효과는 비교에 의하여 테스트된다.

변수들은, 필요하면, 가우스(Gaussian) 분포를 만들기 위하여 미리 로그-전환된다.

SPSS 소프트웨어, 버전 14는 기술적 분석(평균 및 박스플롯의 그래프)을 위하여 사용되며, SAS Enterprise Guide 소프트웨어, 버전 3은 간섭(interference) 부분을 위하여 사용된다.

첫번째-종(first-species) 알파-위험은 양면 접근(two-sided approach)에서 5%로 고정되었다.

상기 연구의 결과는 도 2에 나타냈다.

도 2는 수용성 형태의 함량에 대한 테스트된 생성물의 효과를 나타낸다. 따라서 데스모글레인 I의 방출에 대한 상기 생성물의 자극 효과를 증명하는, 생성물의 데스모글레인 I의 수용성 형태의 방출의 상당한 증가가 관찰된다.

따라서, 테스트된 생성물은 나이에 따른 데스모글레인 I의 축적을 방지할 수 있게 하므로, 진정한 항-노화(anti-ageing) 효과를 갖는다고 할 수 있다.

<110> L'OREAL <120> Use of soluble forms of the Desmoglein I protein for the purposes of screening for anti-ageing active agents <130> IMP091432 <150> FR 09 50159 <151> 2009-01-13 <150> US 61/202,078 <151> 2009-01-27 <160> 85 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 4512 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 1 cccagcccaa gtttttaggg tggggatcca gactggttat acgtaccttc agtccttctc 60 ccagaggaag gcagaaacac ctcaaagcct gcatgtaaga acatctactg agaaattatt 120 ttaatcagac accagctgag tgggagaaag gaaaagaaca gagaagaaca aacaaaactc 180 ccttggtctt ggatgtaaga gaatccagca gagatggact ggagtttctt cagagtagtt 240 gcagtgctgt tcatttttct ggtggtggta gaagttaaca gtgaattccg aatccaggta 300 agagattata acactaaaaa tggcaccatc aaatggcatt caatccgaag gcagaaacgt 360 gaatggatca agttcgcagc agcctgtcgt gaaggtgaag acaactcaaa gaggaaccca 420 atcgccaaaa ttcactcaga ttgtgctgca aaccagcaag ttacataccg catctctgga 480 gtaggaattg atcagccacc atatgggatc tttgtcatta atcagaaaac tggtgaaatt 540 aatataacat ccatagttga tcgagaggtc actcctttct tcattatcta ctgccgagct 600 ctgaactcaa tgggccaaga tttagagagg cctctagagc tcagagtcag ggttttggat 660 ataaatgaca accctccagt gttttcaatg gctacatttg caggacaaat agaagaaaat 720 tctaatgcaa atacactggt gatgatactc aatgctactg acgcagatga accgaacaat 780 ttgaactcaa aaatagcctt caagattata agacaagaac cttcagattc accaatgttt 840 attatcaaca gaaatactgg agaaattcga acgatgaata attttctaga cagagagcaa 900 tacggccagt atgctcttgc tgtaagaggc tctgaccgag atggtggggc agatggcatg 960 tcagcggaat gtgagtgcaa cattaaaatc ctcgatgtca atgataatat cccttacatg 1020 gaacagtctt catataccat agaaattcaa gaaaatactc taaattcaaa tttgctcgag 1080 attagagtaa ttgatttgga tgaagagttc tcagctaact ggatggcagt aattttcttt 1140 atctctggaa atgaaggaaa ttggtttgag atagaaatga atgaaagaac aaatgtggga 1200 attttaaagg ttgttaagcc cttagattat gaagctatgc agagtctgca actcagtatt 1260 ggtgtcagaa ataaagctga atttcatcat tcaattatgt ctcaatataa actgaaagca 1320 tctgcaattt ctgtgactgt gttaaatgta attgaaggcc cagtgtttcg tccaggttca 1380 aagacatatg ttgtaactgg taatatggga tcaaatgata aagtgggaga ctttgtagct 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tccattagag agtggcaata ggatgaggtt tcttcagggt aaactagcaa tgcctgagcc 4020 tgaaccttaa tgtggggcct cagttaatat ccctgtggag tcaaggattc ttctgattct 4080 agtgtgtgtt tagtgataga tgtagtcttg acgaatattg cttactggtg aggttgagga 4140 atatcacact cgtctttccc tttaccactg tggttttgac ttaagaaagc aaaactcact 4200 aagtttactt ctcgaattga agcaagtgag gcctgacatg gttgtcatca ctagtggcaa 4260 atgaccttcc aagtaagcag atgggaactg aattgtgttt tcaggttttg tttttagtag 4320 gtgatattca ttcgtatcca gctctttatt acatagctct gaagttaaaa tgatttacat 4380 aggccgagct gtggacaaaa aaaaagaagc agcagcttgt agtatgctta agctttgggg 4440 aatttttttt taaggggatc taaaaaaatg tttttagaac atgtaaaatg tttaatggtg 4500 aaagttggaa aa 4512 <210> 2 <211> 1049 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Met Asp Trp Ser Phe Phe Arg Val Val Ala Val Leu Phe Ile Phe Leu 1 5 10 15 Val Val Val Glu Val Asn Ser Glu Phe Arg Ile Gln Val Arg Asp Tyr 20 25 30 Asn Thr Lys Asn Gly Thr Ile Lys Trp His Ser Ile Arg Arg Gln Lys 35 40 45 Arg Glu Trp Ile Lys Phe Ala Ala Ala Cys Arg Glu Gly Glu Asp Asn 50 55 60 Ser Lys Arg Asn Pro Ile Ala Lys Ile His Ser Asp Cys Ala Ala Asn 65 70 75 80 Gln Gln Val Thr Tyr Arg Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro 85 90 95 Tyr Gly Ile Phe Val Ile Asn Gln Lys Thr Gly Glu Ile Asn Ile Thr 100 105 110 Ser Ile Val Asp Arg Glu Val Thr Pro Phe Phe Ile Ile Tyr Cys Arg 115 120 125 Ala Leu Asn Ser Met Gly Gln Asp Leu Glu Arg Pro Leu Glu Leu Arg 130 135 140 Val Arg Val Leu Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Val Phe Ser Met Ala 145 150 155 160 Thr Phe Ala Gly Gln Ile Glu Glu Asn Ser Asn Ala Asn Thr Leu Val 165 170 175 Met Ile Leu Asn Ala Thr Asp Ala Asp Glu Pro Asn Asn Leu Asn Ser 180 185 190 Lys Ile Ala Phe Lys Ile Ile Arg Gln Glu Pro Ser Asp Ser Pro Met 195 200 205 Phe Ile Ile Asn Arg Asn Thr Gly Glu Ile Arg Thr Met Asn Asn Phe 210 215 220 Leu Asp Arg Glu Gln Tyr Gly Gln Tyr Ala Leu Ala Val Arg Gly Ser 225 230 235 240 Asp Arg Asp Gly Gly Ala Asp Gly Met Ser Ala Glu Cys Glu Cys Asn 245 250 255 Ile Lys Ile Leu Asp Val Asn Asp Asn Ile Pro Tyr Met Glu Gln Ser 260 265 270 Ser Tyr Thr Ile Glu Ile Gln Glu Asn Thr Leu Asn Ser Asn Leu Leu 275 280 285 Glu Ile Arg Val Ile Asp Leu Asp Glu Glu Phe Ser Ala Asn Trp Met 290 295 300 Ala Val Ile Phe Phe Ile Ser Gly Asn Glu Gly Asn Trp Phe Glu Ile 305 310 315 320 Glu Met Asn Glu Arg Thr Asn Val Gly Ile Leu Lys Val Val Lys Pro 325 330 335 Leu Asp Tyr Glu Ala Met Gln Ser Leu Gln Leu Ser Ile Gly Val Arg 340 345 350 Asn Lys Ala Glu Phe His His Ser Ile Met Ser Gln Tyr Lys Leu Lys 355 360 365 Ala Ser Ala Ile Ser Val Thr Val Leu Asn Val Ile Glu Gly Pro Val 370 375 380 Phe Arg Pro Gly Ser Lys Thr Tyr Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser 385 390 395 400 Asn Asp Lys Val Gly Asp Phe Val Ala Thr Asp Leu Asp Thr Gly Arg 405 410 415 Pro Ser Thr Thr Val Arg Tyr Val Met Gly Asn Asn Pro Ala Asp Leu 420 425 430 Leu Ala Val Asp Ser Arg Thr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Asn Lys Val 435 440 445 Thr Lys Glu Gln Tyr Asn Met Leu Gly Gly Lys Tyr Gln Gly Thr Ile 450 455 460 Leu Ser Ile Asp Asp Asn Leu Gln Arg Thr Cys Thr Gly Thr Ile Asn 465 470 475 480 Ile Asn Ile Gln Ser Phe Gly Asn Asp Asp Arg Thr Asn Thr Glu Pro 485 490 495 Asn Thr Lys Ile Thr Thr Asn Thr Gly Arg Gln Glu Ser Thr Ser Ser 500 505 510 Thr Asn Tyr Asp Thr Ser Thr Thr Ser Thr Asp Ser Ser Gln Val Tyr 515 520 525 Ser Ser Glu Pro Gly Asn Gly Ala Lys Asp Leu Leu Ser Asp Asn Val 530 535 540 His Phe Gly Pro Ala Gly Ile Gly Leu Leu Ile Met Gly Phe Leu Val 545 550 555 560 Leu Gly Leu Val Pro Phe Leu Met Ile Cys Cys Asp Cys Gly Gly Ala 565 570 575 Pro Arg Ser Ala Ala Gly Phe Glu Pro Val Pro Glu Cys Ser Asp Gly 580 585 590 Ala Ile His Ser Trp Ala Val Glu Gly Pro Gln Pro Glu Pro Arg Asp 595 600 605 Ile Thr Thr Val Ile Pro Gln Ile Pro Pro Asp Asn Ala Asn Ile Ile 610 615 620 Glu Cys Ile Asp Asn Ser Gly Val Tyr Thr Asn Glu Tyr Gly Gly Arg 625 630 635 640 Glu Met Gln Asp Leu Gly Gly Gly Glu Arg Met Thr Gly Phe Glu Leu 645 650 655 Thr Glu Gly Val Lys Thr Ser Gly Met Pro Glu Ile Cys Gln Glu Tyr 660 665 670 Ser Gly Thr Leu Arg Arg Asn Ser Met Arg Glu Cys Arg Glu Gly Gly 675 680 685 Leu Asn Met Asn Phe Met Glu Ser Tyr Phe Cys Gln Lys Ala Tyr Ala 690 695 700 Tyr Ala Asp Glu Asp Glu Gly Arg Pro Ser Asn Asp Cys Leu Leu Ile 705 710 715 720 Tyr Asp Ile Glu Gly Val Gly Ser Pro Ala Gly Ser Val Gly Cys Cys 725 730 735 Ser Phe Ile Gly Glu Asp Leu Asp Asp Ser Phe Leu Asp Thr Leu Gly 740 745 750 Pro Lys Phe Lys Lys Leu Ala Asp Ile Ser Leu Gly Lys Glu Ser Tyr 755 760 765 Pro Asp Leu Asp Pro Ser Trp Pro Pro Gln Ser Thr Glu Pro Val Cys 770 775 780 Leu Pro Gln Glu Thr Glu Pro Val Val Ser Gly His Pro Pro Ile Ser 785 790 795 800 Pro His Phe Gly Thr Thr Thr Val Ile Ser Glu Ser Thr Tyr Pro Ser 805 810 815 Gly Pro Gly Val Leu His Pro Lys Pro Ile Leu Asp Pro Leu Gly Tyr 820 825 830 Gly Asn Val Thr Val Thr Glu Ser Tyr Thr Thr Ser Asp Thr Leu Lys 835 840 845 Pro Ser Val His Val His Asp Asn Arg Pro Ala Ser Asn Val Val Val 850 855 860 Thr Glu Arg Val Val Gly Pro Ile Ser Gly Ala Asp Leu His Gly Met 865 870 875 880 Leu Glu Met Pro Asp Leu Arg Asp Gly Ser Asn Val Ile Val Thr Glu 885 890 895 Arg Val Ile Ala Pro Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ser Leu Thr Ile His 900 905 910 His Pro Arg Glu Ser Ser Asn Val Val Val Thr Glu Arg Val Ile Gln 915 920 925 Pro Thr Ser Gly Met Ile Gly Ser Leu Ser Met His Pro Glu Leu Ala 930 935 940 Asn Ala His Asn Val Ile Val Thr Glu Arg Val Val Ser Gly Ala Gly 945 950 955 960 Val Thr Gly Ile Ser Gly Thr Thr Gly Ile Ser Gly Gly Ile Gly Ser 965 970 975 Ser Gly Leu Val Gly Thr Ser Met Gly Ala Gly Ser Gly Ala Leu Ser 980 985 990 Gly Ala Gly Ile Ser Gly Gly Gly Ile Gly Leu Ser Ser Leu Gly Gly 995 1000 1005 Thr Ala Ser Ile Gly His Met Arg Ser Ser Ser Asp His His Phe Asn 1010 1015 1020 Gln Thr Ile Gly Ser Ala Ser Pro Ser Thr Ala Arg Ser Arg Ile Thr 1025 1030 1035 1040 Lys Tyr Ser Thr Val Gln Tyr Ser Lys 1045 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Ala Glu Phe His His Ser Ile Met 1 5 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 4 Ala Glu Phe His His Ser Ile Met Ser Gln Tyr Lys 1 5 10 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 5 Ala Gly Gln Ile Glu Glu Asn Ser Asn Ala Asn Thr Leu 1 5 10 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 6 Ala Gly Gln Ile Glu Glu Asn Ser Asn Ala Asn Thr Leu Val 1 5 10 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 7 Ala Leu Asn Ser Met Gly Gln Asp Leu Glu Arg Pro Leu Glu Leu Arg 1 5 10 15 <210> 8 <211> 18 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 8 Ala Ser Ala Ile Ser Val Thr Val Leu Asn Val Ile Glu Gly Pro Val 1 5 10 15 Phe Arg <210> 9 <211> 22 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 9 Ala Ser Ala Ile Ser Val Thr Val Leu Asn Val Ile Glu Gly Pro Val 1 5 10 15 Phe Arg Pro Gly Ser Lys 20 <210> 10 <211> 16 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 10 Asp Gly Gly Ala Asp Gly Met Ser Ala Glu Cys Glu Cys Asn Ile Lys 1 5 10 15 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 11 Asp Gly Gly Ala Asp Gly Met Ser Ala Glu Cys Glu Cys Asn Ile Lys 1 5 10 15 Ile <210> 12 <211> 18 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 12 Asp Gly Gly Ala Asp Gly Met Ser Ala Glu Cys Glu Cys Asn Ile Lys 1 5 10 15 Ile Leu <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 13 Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Val Phe Ser Met Ala Thr 1 5 10 <210> 14 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 14 Asp Leu Asp Thr Gly Arg Pro Ser Thr Thr Val Arg 1 5 10 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 15 Asp Ser Pro Met Phe Ile Ile Asn Arg 1 5 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 16 Glu Ile Arg Val Ile Asp Leu Asp Glu Glu Phe 1 5 10 <210> 17 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 17 Glu Ile Arg Val Ile Asp Leu Asp Glu Glu Phe Ser Ala Asn 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 18 Glu Gln Tyr Gly Gln Tyr Ala Leu Ala Val Arg 1 5 10 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 19 Glu Gln Tyr Asn Met Leu Gly Gly Lys 1 5 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 20 Glu Ser Ser Asn Val Val Val Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 21 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 21 Glu Val Thr Pro Phe Phe Ile Ile Tyr Cys Arg 1 5 10 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 22 Phe Ile Ser Gly Asn Glu Gly Asn Trp Phe Glu Ile Glu 1 5 10 <210> 23 <211> 16 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 23 Phe Leu Val Leu Gly Leu Val Pro Phe Leu Met Ile Cys Cys Asp Cys 1 5 10 15 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 24 Phe Leu Val Leu Gly Leu Val Pro Phe Leu Met Ile Cys Cys Asp Cys 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 18 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 25 Phe Leu Val Leu Gly Leu Val Pro Phe Leu Met Ile Cys Cys Asp Cys 1 5 10 15 Gly Gly <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 26 Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro Tyr Gly Ile Phe Val Ile Asn Gln 1 5 10 15 Lys <210> 27 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 27 Ile His Ser Asp Cys Ala Ala Asn Gln Gln Val Thr Tyr Arg 1 5 10 <210> 28 <211> 16 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 28 Ile Ile Arg Gln Glu Pro Ser Asp Ser Pro Met Phe Ile Ile Asn Arg 1 5 10 15 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 29 Ile Leu Asp Val Asn Asp Asn Ile Pro Tyr 1 5 10 <210> 30 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 30 Ile Leu Ser Ile Asp Asp Asn Leu Gln Arg 1 5 10 <210> 31 <211> 19 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 31 Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro Tyr Gly Ile Phe Val Ile 1 5 10 15 Asn Gln Lys <210> 32 <211> 16 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 32 Lys Ile Ile Arg Gln Glu Pro Ser Asp Ser Pro Met Phe Ile Ile Asn 1 5 10 15 <210> 33 <211> 17 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 33 Lys Ile Ile Arg Gln Glu Pro Ser Asp Ser Pro Met Phe Ile Ile Asn 1 5 10 15 Arg <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 34 Lys Leu Lys Ala Ser Ala Ile Ser Val Thr Val 1 5 10 <210> 35 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 35 Lys Leu Lys Ala Ser Ala Ile Ser Val Thr Val Leu 1 5 10 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 36 Leu Ala Asp Ile Ser Leu Gly Lys 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 37 Leu Asp Arg Glu Gln Tyr Gly Gln Tyr 1 5 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 38 Asn Met Leu Gly Gly Lys Tyr Gln Gly Thr Ile 1 5 10 <210> 39 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 39 Asn Met Leu Gly Gly Lys Tyr Gln Gly Thr Ile Leu 1 5 10 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 40 Asn Asn Phe Leu Asp Arg Glu Gln Tyr 1 5 <210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 41 Asn Asn Phe Leu Asp Arg Glu Gln Tyr Gly 1 5 10 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 42 Asn Asn Phe Leu Asp Arg Glu Gln Tyr Gly Gln 1 5 10 <210> 43 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 43 Asn Asn Phe Leu Asp Arg Glu Gln Tyr Gly Gln Tyr 1 5 10 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 44 Asn Ser Asn Leu Leu Glu Ile Arg 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 45 Asn Val Ile Glu Gly Pro Val Phe Arg 1 5 <210> 46 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 46 Asn Val Ile Glu Gly Pro Val Phe Arg Pro Gly Ser 1 5 10 <210> 47 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 47 Asn Val Ile Glu Gly Pro Val Phe Arg Pro Gly Ser Lys 1 5 10 <210> 48 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 48 Asn Val Ile Glu Gly Pro Val Phe Arg Pro Gly Ser Lys Thr 1 5 10 <210> 49 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 49 Asn Val Ile Glu Gly Pro Val Phe Arg Pro Gly Ser Lys Thr Tyr 1 5 10 15 <210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 50 Pro Pro Tyr Gly Ile Phe Val Ile Asn Gln Lys 1 5 10 <210> 51 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 51 Gln Glu Pro Ser Asp Ser Pro Met Phe Ile Ile Asn Arg 1 5 10 <210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 52 Arg Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro 1 5 10 <210> 53 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 53 Arg Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro Tyr 1 5 10 <210> 54 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 54 Arg Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro Tyr Gly 1 5 10 <210> 55 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 55 Arg Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro Tyr Gly Ile 1 5 10 <210> 56 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 56 Arg Ile Ser Gly Val Gly Ile Asp Gln Pro Pro Tyr Gly Ile Phe 1 5 10 15 <210> 57 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 57 Ser Ile Asp Asp Asn Leu Gln Arg 1 5 <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 58 Ser Ile Val Asp Arg Glu Val Thr Pro Phe 1 5 10 <210> 59 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 59 Thr Ser Ile Val Asp Arg Glu Val Thr Pro Phe Phe 1 5 10 <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 60 Thr Ile Glu Ile Gln Glu Asn Thr Leu Asn Ser Asn Leu Leu Glu Ile 1 5 10 15 Arg <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 61 Thr Leu Asn Ser Asn Leu Leu Glu Ile Arg 1 5 10 <210> 62 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 62 Thr Met Asn Asn Phe Leu Asp Arg 1 5 <210> 63 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 63 Thr Tyr Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser Asn Asp Lys 1 5 10 <210> 64 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 64 Val Ala Thr Asp Leu Asp Thr Gly Arg Pro Ser Thr 1 5 10 <210> 65 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 65 Val Ala Thr Asp Leu Asp Thr Gly Arg Pro Ser Thr Thr Val 1 5 10 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 66 Val Ala Thr Asp Leu Asp Thr Gly Arg Pro Ser Thr Thr Val Arg 1 5 10 15 <210> 67 <211> 19 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 67 Val Gly Asp Phe Val Ala Thr Asp Leu Asp Thr Gly Arg Pro Ser Thr 1 5 10 15 Thr Val Arg <210> 68 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 68 Val Ile Asp Leu Asp Glu Glu Phe Ser Ala Asn 1 5 10 <210> 69 <211> 29 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 69 Val Ile Gln Pro Thr Ser Gly Met Ile Gly Ser Leu Ser Met His Pro 1 5 10 15 Glu Leu Ala Asn Ala His Asn Val Ile Val Thr Glu Arg 20 25 <210> 70 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 70 Val Leu Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Val 1 5 10 <210> 71 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 71 Val Leu Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Val Phe Ser Met 1 5 10 <210> 72 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 72 Val Leu Asp Ile Asn Asp Asn Pro Pro Val Phe Ser Met Ala 1 5 10 <210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 73 Val Leu Asn Val Ile Glu Gly Pro Val Phe Arg 1 5 10 <210> 74 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 74 Val Met Gly Asn Asn Pro Ala Asp Leu Leu 1 5 10 <210> 75 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 75 Val Met Gly Asn Asn Pro Ala Asp Leu Leu Ala Val Asp Ser Arg 1 5 10 15 <210> 76 <211> 18 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 76 Val Met Gly Asn Asn Pro Ala Asp Leu Leu Ala Val Asp Ser Arg Thr 1 5 10 15 Gly Lys <210> 77 <211> 20 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 77 Val Met Gly Asn Asn Pro Ala Asp Leu Leu Ala Val Asp Ser Arg Thr 1 5 10 15 Gly Lys Leu Thr 20 <210> 78 <211> 20 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 78 Val Val Lys Pro Leu Asp Tyr Glu Ala Met Gln Ser Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Ile Gly Val Arg 20 <210> 79 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 79 Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser Asn Asp Lys 1 5 10 <210> 80 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 80 Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser Asn Asp Lys Val Gly Asp Phe 1 5 10 15 <210> 81 <211> 18 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 81 Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser Asn Asp Lys Val Gly Asp Phe Val 1 5 10 15 Ala Thr <210> 82 <211> 20 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 82 Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser Asn Asp Lys Val Gly Asp Phe Val 1 5 10 15 Ala Thr Asp Leu 20 <210> 83 <211> 30 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 83 Val Val Thr Gly Asn Met Gly Ser Asn Asp Lys Val Gly Asp Phe Val 1 5 10 15 Ala Thr Asp Leu Asp Thr Gly Arg Pro Ser Thr Thr Val Arg 20 25 30 <210> 84 <211> 14 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 84 Tyr Gln Gly Thr Ile Leu Ser Ile Asp Asp Asn Leu Gln Arg 1 5 10 <210> 85 <211> 16 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 85 Tyr Val Met Gly Asn Asn Pro Ala Asp Leu Leu Ala Val Asp Ser Arg 1 5 10 15

Claims

서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드, 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된 착화되거나 착화되지 않은 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들을 포함하는 피부 노화를 예방 및/또는 치료하는데 유용한 활성 성분의 선별용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 펩타이드 형태 또는 형태들의 함량의 존재 또는 증가의 감지는 피부 노화를 예방 또는 치료하는 활성 성분을 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.
삭제
삭제
제 1항에 있어서, 상기 수용성 펩타이드 형태는 착화되지 않은(noncomplexed) 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 착화된(complexed) 수용성 펩타이드 형태는 데스모글레인 I과ⅰ) 다른 데스모글레인 I 단백질의 수용성 형태 또는 이의 절편 또는 ⅱ) 데스모글레인 I 단백질 및/또는 이의 절편과 상호작용할 수 있는 타겟 단백질의 회합(association)으로부터 유래한 것을 특징으로 하는 조성물.
제 6항에 있어서, 상기 타겟 단백질은 데스모콜린 2a(Dsc2, Desmocollin 2a), 플라코필린스 1(Plakophilins 1), 플라코필린스 2(Plakophilins 2), 플라코필린스 3(Plakophilins 3), 플라코글로빈(Plakoglobin), 칼리크레인 5(Kallikrein 5), 성장 호르몬 1(GH1, growth hormone 1), 27　kD 동원체 자가항원(SSSCA1, 27　kD centromeric autoantigen), RuvB-유사 1(RuvB-like 1), C3orf10 단백질 및 백시니아 관련 키나아제 3(VRK3, vaccinia related kinase 3)으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
a)EDTA계열의 킬레이트제(chelator)의 존재하에서, 테스트 항-노화(anti-ageing) 활성 성분과 접촉하는, 서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된
착화되거나 착화되지 않은 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들을 방출할 수 있도록 세포타입을 가져오는 단계,
b) 상기 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들의 함량을 측정하는 단계, 및
c) 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물의 부존재하에서 측정된 상기 수용성 형태 또는 형태들의 함량과 상기 b) 단계에서 측정된 함량을 비교하는 단계를 포함하는 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 방법.
서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된,
착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들을 질적 또는 양적으로 식별(characterization)하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체의 자연 노화(chronological ageing)에 관련된 피부 노화의 징후(sign)를 예방 및/또는 치료하기 위한 미용적 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하는 방법.
제 8항 또는 제 9항에 있어서, 상기 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들의 함량의 존재 또는 증가의 감지 또는 식별(characterization)은 상기 활성 성분 또는 상기 처치(treatment)의 유효성을 반영하는 것을 특징으로 하는 방법.
i) 개체를 대표하는 제 1 피부 표면 샘플을 제공하는 단계,
ii) 상기 샘플에서,
서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된,
착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들을 수량화하는 단계,
iii) 상기 개체의 대표적인 제 2 피부 표면 샘플에 대해, 상기 i) 단계 및 ii) 단계를 반복하는 단계, 및
iv) 처치(treatment)의 적어도 하나의 효과와 관련된 정보로부터 추론하기 위하여, 상기 ii) 단계와 iii) 단계의 말(end)에 얻은, 제 1 및 제 2 피부 표면 샘플들의 결과를 비교하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 개체의 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료하기 위한 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하는 비치료적 방법.
제 11항에 있어서, 상기 제 1 샘플은 처치전(pretreatment) 상태를 대표하며, 상기 제 2 샘플은 처치(treatment)의 과정 동안의 상태 또는 처치후(post-treatment) 상태를 대표하는 것을 특징으로 하는 비치료적 방법.
제 11항에 있어서, 상기 iv) 단계에서의 상기 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들의 함량의 존재 또는 증가의 감지는 상기 처치(treatment)의 유효성을 나타내는 것을 특징으로 하는 비치료적 방법.
제 11항에 있어서, 상기 iv) 단계의 말(end)에 얻어진 정보와 관련되어 수립되거나 선택된 미용 케어 조성물을 상기 개체에 적용하는 것에 의하여 상기 처치(treatment)를 조절하는 단계로 구성된 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 비치료적 방법.
서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된,
착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들의 방출을 촉진할 수 있는 생물학적 또는 화학적 활성 화합물의 선별용 조성물.
서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된
착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들의 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서 상피의 자연 노화(chronological ageing) 상태의 식별(characterization)용 조성물.
제 16항에 있어서, 상기 펩타이드 형태 또는 형태들의 함량의 존재 또는 감소의 감지는 상피의 자연 노화(chronological ageing) 상태를 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.
서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는
서열번호 3 내지 서열번호 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택된,
착화되거나(complexed) 착화되지 않은(noncomplexed) 단백질-변성 물질없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 능력을 갖는 수용성 펩타이드 형태 또는 형태들을 질적 또는 양적으로 식별(characterization)하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체의 자연 노화(chronological ageing)에 관련된 피부 노화의 징후(sign)를 예방 및/또는 치료하기 위한 치료적 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하는 방법.