KR101413086B1 - 젤라틴의 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 젤라틴의 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물 및 그 제조방법을 제공한다. 이상의 도면 및 표를 통해 살펴본 바와 같이 본 발명에 따른 젤라틴 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물은 뼈의 건강, 특히 조골세포의 증식효과, 대퇴골의 중량 증가 및 미네랄 함량 증가의 측면에서 현저하게 증가된 효과를 나타낸다. 이러한 효과를 통해 성장기 어린이의 발육을 촉진하고 노년기 및 여성의 골다공증을 예방할 수 있다.

Description

젤라틴의 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물{Fermented milk composition containing enzymatic hydrolysates of gelatin }
본 발명은 젤라틴의 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물에 관한 것이다.
영양은 외부의 물리적인 부하에 대하여 뼈의 구조적 저항력의 유지에 매우 중요한 역할을 한다(Bonjour JP,J. Am Coll Nutr. 2005, 24(6), 526S-536S). 적당한 비타민 D의 섭취와 함께 칼슘의 섭취와 더불어 단백질은 뼈의 건강에 있어 매우 중요한 영양소이며 골다공증의 예방에 역할을 하게 된다. 특히 동물성 단백질은 만성적 대사산증, 즉 요에 칼슘이 빠져나오는 증상(calciuric)에 의한 뼈건강의 악화와 광물질 파괴를 촉진한다는 연구보고도 있지만 단백질의 섭취가 감소하면 뼈건강에 부정적인 역할을 하는 것도 밝혀졌다. 따라서, 단백질의 선택적인 결핍은 뼈의 무게, 미세구조와 뼈강도의 급격한 감소 및 골다공증의 특징을 일으키게 된다고 볼 수 있다.
노인의 경우 단백질 섭취감소 시 흔히 엉덩이뼈골절이 나타나는 것이 관찰되었으며, 이러한 환자에게 케이신 단백질을 급여한 결과 골절 후 뼈손실을 감소 및 근육강도의 증가가 유도되었다. 결과적으로, 동물성 단백질 및 식물성 단백질을 포함하는 높은 단백질 섭취는 뼈무기질 량을 증가시키고 골다공증유발의 골절율을 감소시킨다. 또한 단백질의 섭취는 IGF-1을 증진시키는데 이는 골격발달과 뼈의 형성에 영향하는 긍정적인 역할을 하는 요소로서 작용한다. 결론적으로 단백질의 섭취는 칼슘과 비타민 D와 함께 골다공증의 예방에 필수적이다.
뼈 강도를 증진시키고 성장을 촉진시키고 골다공증의 예방을 위해 여러 가지 칼슘 보강용 단백질 또는 펩타이드 소재가 개발되었다. 현재까지는 우유에서 유래된 카세인 포스포펩타이드(casein phosphopeptide (CPP))가 대표적이며 섭취시 칼슘의 용해성을 증진시켜 칼슘흡수를 돕는 것으로 알려져 있다.
카세인 포스포펩타이드는 소화관내에서 카세인의 분해에 의해 얻어지며 래트에서 뼈의 칼슘화(calcification)를 돕는 것으로 알려지고 있다. 이러한 카세인 포스포펩타이드는 칼슘을 킬레이팅하고 칼슘인산염의 침강을 막아주어 용해 칼슘이용성을 증가시킨다.
케이신을 풍부하게 함유하고 있는 우유는 뼈 건강에 좋은 식품으로 인식되어 학교급식에 활용되고 있으나, 우유 소화장애가 있는 성인에게는 애용되지 못하고 있다. 발효유는 남녀노소 모두에게 장수식품으로 애용되고 있으나 포장 용량이 소형화되어 뼈 건강 증진 인자의 강화가 필요하다.
한편, 우리나라 발효유 시장규모는 연간 1조2천8백억원에 달하고 있으며, 소비량은 1997년에 65만 톤을 정점으로 감소되었으나 최근 증가세를 나타내고 있다. 또한, 발효유의 소비량은 '09년 44만6천톤, '10년 50만2천톤 및 '11년 52만 2천톤에 달하고 있다.
최근 고령화 사회로 진입함에 있어 노인들의 골절과 바쁜 현대생활로 인해 청소년들의 식품섭취의 불균형이 증가하면서 골다공증의 증가 등 각종 뼈 질환이 사회문제가 되고 있다. 우리나라의 골다공증 환자는 약 1,000만명 정도로 추정되고 있으며 2010년에는 1,600만명 정도로 예상되고 있다.
우리나라 여성의 42.6%가 골다공증 또는 골감소증을 보이고 50, 60, 70대로 진행될수록 골다공증 비율이 2배 이상 증가하고 있다.
한국여의사회와 여성부공동으로 30-70대 여성 660명의 골다공증 진단결과 골감소증은(골밀도-1.0~-2.5%) 233명으로 35.3% 이었고 골다공증(골밀도 -2.5이상)은 48명으로 7.3%를 나타내었고 또한 50대의 5.1%가 골다공증이었고 60대는 12.4%, 70대는 26%가 골다공증이었다.
노화로 인한 65세 이상의 노인성골다공증과 여성호르몬 부족으로 오는 폐경 후 골다공증뿐만 아니라 칼슘의 섭취 부족과 같은 잘못된 식사 습관에서 골다공증이 젊은 사람들에게서 발생하고 있다. 또한 최근 20여 년간 초중고생의 골절율은 2배 이상 증가하였고 골다공증을 예방하기 위해서라도 성장기에 식품을 통해 최대 골량을 높이고 관리하는 것이 중요하다.
이와 같은 골다공증의 예방하기 위해 한국공개특허 2001-0072587에는 발효유로부터 유래된 골다공증 예방용의 식이성 보충식이 기재되어 있다.
이와 같은 기술적 배경하에서 본 발명자들은 예의 노력한 결과, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
결국, 본 발명의 목표는 젤라틴의 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목표는 젤라틴 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 원유, 젤라틴의 가수분해물 및 미생물을 포함하는 발효유 조성물이 제공될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 젤라틴의 가수분해물은 젤라틴을 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavorzyme)으로 처리한 것일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 미생물은 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacilus acidophilus) LA-5, 비피도박테리움(Bifidobacterium) BB-12, 및 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus) 일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 젤라틴을 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavorzyme)으로 가수분해하고 동결건조하는 단계; 상기 동결건조된 젤라틴 가수분해물을 원유에 첨가하고 살균하는 단계; 상기 젤라틴 가수분해물이 첨가된 원유에 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacilus acidophilus) LA-5, 비피도박테리움(Bifidobacterium) BB-12, 및 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus)를 첨가하는 단계; 및 상기 혼합물을 배양하여 발효시키는 단계를 포함하는 발효유 조성물의 제조방법이 제공될 수 있다.
본 발명에 따른 젤라틴 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물은 조골세포의 증식효과가 뛰어나 성장기 어린이의 발육을 촉진하고 노년기 및 여성의 골다공증을 예방할 수 있다.
도 1은 젤라틴 가수분해물의 조골세포증식 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 젤라틴 가수분해물(#26, 3kDa이하, 4시간분해, protamex+flavorzyme처리)의 농도별 처리가 동물의 경골성장에 미치는 효과에 대한 그래프이다.
(대조구: 증류수 처리, A-고: 0.5ml of #26/체중 100g, A-저: 0.1ml of #26/체중 100g, B-고: 0.5ml of #37/체중 100g, B-저:0.1ml of #37/체중 100g)
도 3은 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 일반성분을 나타내는 그래프이다.
시험구 1, 2 및 3은 젤라틴 가수분해물을 각각 0.5%, 1% 및 2% 첨가하여 제조한 발효유 조성물이다.
도 4는 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 저장중 유산균수를 나타내는 그래프이다.
도 5는 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유 급여에 의한 대퇴골 중량 증가양상을 나타내는 그래프이다.
처리구 1, 2, 및 3은 젤라틴 가수분해물을 각각 0.5%, 1% 및 2% 첨가하여 제조한 발효유 조성물을 개체당 매일 0.5 mL씩 7주간 급여한 것이다.
도 6은 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유 급여에 의한 대퇴골 미네랄 함량증가를 나타내는 그래프이다.
처리구 1, 2, 및 3은 젤라틴 가수분해물을 각각 0.5%, 1%, 2% 첨가하여 제조한 발효유 조성물을 개체당 매일 0.5 mL씩 7주간 급여한 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 원유, 젤라틴의 가수분해물 및 미생물을 포함하는 발효유 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명의 가수분해물의 원료로 사용되는 젤라틴은 동물의 표피, 뼈, 내장 등에서 사용될 수 있으며, 특히 우피, 돈피, 닭껍질, 닭날개, 닭발 등의 다양한 가축의 껍질에서 얻어질 수 있다. 돈피는 고대부터 이용되어온 식품으로서 주요 구성성분은 수분 61.48%, 조단백질 34.44%, 조지방 2.71%, 조회분이 1.42%를 보이며 조단백질 중 70% 이상이 콜라겐(Type I)으로 이루어져 있다.
콜라겐은 결합조직의 주된 단백질로서 인간 체내의 단백질의 30%를 차지한다. 피부와 뼈에 많이 분포하며 피부 단백질의 70%, 연골의 50%를 차지한다. 이는 인간 체내의 뼈와 피부, 내장기를 둘러싸는 막, 관절연골, 눈의 각막에 존재하고 특히 뼈를 구성하는 칼슘의 접착제로서 기능을 하고 있다.
뼈는 복잡한 조직으로서 주요기능은 물리적인 힘과 파손에 대해 저항의 목적이 있다. 뼈의 강도는 뼈 조직의 양뿐만 아니라 품질에 따라 달라지는데 뼈의 기하학적인 모양과 형태, 해면골의 미세구조, 미네랄, 콜라겐에 의해 특징 지워진다. 뼈 품질의 다른 결정인자들은 서로 밀접하게 연결되어 있는데, 특히 미네랄과 콜라겐이 주 역할을 담당한다. 따라서, 물리적인 힘 앞에서 뼈의 강도는 Type I 콜라겐과 미네랄의 상관관계에 의해 달라진다.
인간의 몸에는 뼈를 형성하는 골아세포와 뼈를 파괴하는 파골세포가 있는데 뼈의 재흡수(파골세포) 과정인 오래된 뼈나 불필요한 뼈를 파괴하는 속도가 새로운 뼈를 형성(골아세포, 뼈의 외부 세포 매트릭스를 구성하고 연결하고 있으며, 지속적인 미네랄화도 조정하는 역할을 함)하는 속도보다 더 빠를 경우 골다공증이 발생할 수 있다. 또한, 성장기 어린이와 청소년의 뼈의 양 끝단에는 연골세포의 집합체인 성장 연골층이 있는데, 이것이 골단이 되면 골아세포가 형성되어 뼈로 변하기 때문에 세로방향을 성장하여 키가 커지게 된다.
상기 젤라틴의 가수분해를 위해 화합물의 처리 등을 통한 화학적 방법, 효소의 처리를 통한 생물학적 방법을 포함하는 다양한 방법이 사용될 수 있다.
상기 생물학적 방법으로는 콜라게나제(collagenase), 젤라티나제(gelatinase), 알카라제(alcalase), 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavorzyme) 중에서 선택된 1종 이상의 단백질 가수분해 효소를 사용할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 젤라틴의 가수분해물은 젤라틴을 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavorzyme)으로 처리한 것일 수 있다.
상기 단백질 가수분해효소와 젤라틴은 1: 50 ~ 500의 중량비, 보다 바람직하게는 1:100의 중량비로 사용되는 것이 바람직하다. 효소의 반응시간, 온도, pH는 각 이용하는 효소에 따라 다를 수 있지만 각각 2 ~ 24시간, 30 ~ 60 , 6.0 ~ 9.0의 조건에서 수행하는 것이 바람직하다. 얻어진 가수분해물을 적절히 탈염한 후 한외여과, 겔 여과 및 각종 크로마토그래피, 멤브레인 필터, 등전점을 이용한 방법 등으로 분리 및 정제하여 사용하는 것이 바람직하다.
일 실시예에 따르면, 상기 가수분해물은 젤라틴을 가수분해 효소로 40~60, 보다 바람직하게는 50에서 각각 4, 12, 24시간 동안 분해한 후 염을 제거하고 멤브레인 필터를 이용하여 50kDa이하, 50kDa~3kDa 사이, 3kDa이하 크기의 분해물로 분리한 것일 수 있다. 상기와 같이 가수분해물을 분해시간, 처리효소, 분자량 크기로 나눌 경우, 각 분획의 활성은 해당 분획 내에 포함된 단백질의 종류 및 상태에 따라 다양한 양상을 나타낼 수 있다.
이렇게 하여 얻어진 젤라틴 가수분해물의 일부 분획을 유효성분으로 함유하는 조성물은 성장기 어린이 성장 촉진제뿐만 아니라 골 질환 예방 및 치료용 물질에 효과를 나타낼 수 있다. 상기 골 질환으로는 골다공증, 골절, 골밀도 감소증 등을 예로 들 수 있다.
본 발명에 따른 발효유 조성물은 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 발효유 조성물은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.01 ~ 0.04 중량부, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 중량부 범위에서 선택하는 것이 바람직하다.
상기 외에 본 발명의 기능성 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명에 따른 발효유 조성물은 천연 과일주스, 과일주스음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 중요하진 않지만 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 발효유 조성물은 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테킨(catechin), 알파-토코페롤, 로즈메리 추출물(rosemary extract), 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 발효유 조성물은 미생물을 이용하여 발효된 것일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 미생물은 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacilus acidophilus) LA-5, 비피도박테리움(Bifidobacterium) BB-12, 및 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus) 일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 젤라틴을 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavorzyme)으로 가수분해하고 동결건조하는 단계; 상기 동결건조된 젤라틴 가수분해물을 원유에 첨가하고 살균하는 단계; 상기 젤라틴 가수분해물이 첨가된 원유에 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacilus acidophilus) LA-5, 비피도박테리움(Bifidobacterium) BB-12, 및 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus)를 첨가하는 단계; 및 상기 혼합물을 배양하여 발효시키는 단계를 포함하는 발효유 조성물의 제조방법이 제공될 수 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.
1. 젤라틴 가수분해물의 선발
젤라틴용액의 pH를 7.0으로 조절하고 젤라틴 용액 100g에 1g의 알카라제(Alcalase)프로타멕스(Protamex)(AP), 프로타멕스(Protamex)플라보자임(Flavorzyme)(PF), 플라보자임(Flavorzyme)알카라제(Alcalase)(FA), 알카라제(Alcalase)프로타멕스(Protamex)플라보자임(Flavorzyme)(APF)을 첨가한 후 50에서 각각 4, 12, 24시간 동안 분해한 후 염을 제거하고 멤브레인 필터를 이용하여 젤라틴 가수분해물을 50kDa이하, 50kDa~3kDa 사이, 3kDa이하 크기의 분해물로 분리하였다. 가수분해물을 분해시간, 처리효소, 분자량 크기로 나누어 36개의 분해물을 준비하고 양성대조군으로서 효소분해 전 젤라틴을 준비하였다.
표 1은 처리된 효소, 분해시간을 달리하여 처리함으로써 분자크기에 따라 구분된 젤라틴 효소 분해물을 나타낸다.
샘플번호(실시예) 분자크기(Da) 분해시간 분해효소
1 <50,000 4 1
2 2
3 3
4 4
5 12 1
6 2
7 3
8 4
9 24 1
10 2
11 3
12 4
13 50,000~3,000 4 1
14 2
15 3
16 4
17 12 1
18 2
19 3
20 4
21 24 1
22 2
23 3
24 4
25 <3,000 4 1
26 2
27 3
28 4
29 12 1
30 2
31 3
32 4
33 24 1
34 2
35 3
36 4
37(비교예) 젤라틴 - -
상기 표 1에서, 1은 알카라제+프로타멕스, 2는 프로타멕스+플라보자임, 3은 플라보자임+알카라제, 4는 알카라제+프로타멕스+플라보자임을 나타낸다.
젤라틴 가수분해물의 마우스 골아세포인 MG-63 조골세포주 증식 활성은 BrdU를 이용하여 측정하였다. 즉, 로쉐(Roche(독일))사의 Cell Proliferation ELISA, BrdU (colorimetric) Kit를 이용하여 측정하였다. 계대 배양한 MG-63 조골세포주를 110개 전후로 96웰 플레이트에 분주하여 안정화시켰다. 이후 각 37개의 시료를 적량 처치하고 BrdU를 각 웰에 처리하여 12-16시간 동안 배양하였다. 이후 각 세포를 고정액을 사용하여 고정한 다음, anti BrdU 용액을 이용하여 BrdU를 찾고, 기질액과 반응시켜 발색시켰다. 충분히 발색되면 25ul의 1M H2SO4 용액을 처치하여 발색을 정지시키고 450 nm의 흡광도에서 측정하였다. 다양한 효소와 분해온도, 분해시간에 따라 분리한 젤라틴 가수 분해물을 10배로 희석하여 측정한 결과 #2, #6, #10, #22, #25, #26, #27, #28, #29, #30에서 유의적으로 높은 조골세포 증식능이 관찰되었고, 조골세포 증식효과는 2번 효소 (ProtamexFlavorzyme)를 처리하여 분해한 샘플이 다른 효소를 처리하여 분해한 샘플에 비해 상대적으로 높은 효과를 나타냈다.
분자크기별로 보면, <3kDa 처리군에서 비교적 높은 조골세포 증식능을 보였는데 분해시간은 4시간 또는 12시간 동안 효소를 처리한 군에서 높은 증식능을 보였으며, 24시간 동안 효소를 처리한 군의 경우에는 증식이 관찰되지 않았다.
도 1은 젤라틴 가수분해물의 조골세포 증식 효과를 나타내는 그래프이다. 이를 참조하면, #30번이 가장 높은 조골세포 증식능을 나타냄을 알 수 있으며, 3kDa 미만 구간의 샘플들이 상대적으로 가장 높은 조골세포 증식능을 나타냄을 알 수 있다.
결국, 가장 경제적이고 높은 조골세포증식효과를 갖는 분해물의 특성을 종합해 보면, 분자크기는 3kDa보다 작으면서 프로타멕스플라보자임(PF) 효소를 처리한 샘플이 가장 안정적이고 우수한데, 4시간 또는 12시간 처리한 경우에만 효과가 있었으나, 이 두 가지 시간대 처리구의 실험결과에 유의적 차이가 없으므로 보다 처리시간이 짧아 경제적인 4시간 처리 샘플을 조골세포 증식능이 가장 높은 분획으로 선정하였다.
2. 젤라틴 가수분해물의 뼈 성장 촉진 효과
뼈 성장 촉진 활성은, Sprague-Dawley계 래트를 이용하여 평가하였다. 상기에서 가장 높은 조골세포증식효과를 보였던 젤라틴 가수분해물(#26)을 대조군에 대해서 증류수를 경구 투여하였고, 샘플 A 투여군은 각각 2개 농도 (5 및 1 ml/kg, B.W.), 샘플 B 투여군은 각각 2개 농도 (200 및 40 mg/kg, B.W.)로 실험개시일부터 5일간 매일 1회 투여하였다. 그 후 기본시료(대조군)를 투여한 경우의 뼈의 신장과 비교하여 촉진효과를 평가하였다.
시험기간 중, 래트가 음료수와 사료를 자유로이 섭취하도록 하고, 기본사료로서 MF(상품명, 오리엔탈 효모제)를 사용하였다. 흰쥐의 골성장에 대한 샘플 A, B의 효능을 관찰하기 위하여 뼈 성장 측정을 위해 Hansson이 처음 시도한 방법을 사용하였다. 이는 정상적인 골대사를 관찰하기 위한 방법으로 형광인자가 칼슘과 킬레이트 결합을 통해 골에 침착되는 현상을 이용한 것이다. 골생성이 가장 활발한 성장기에 골성장판 하부의 골신생부에 가장 많이 침착하여 선을 형성하는데 이를 이용하여 1회 투여한 후 일정기간 후에 형광선과 성장판 사이의 길이를 형광현미경으로 관찰하여 성장한 길이를 측정하였다. 모든 실험군에 똑같이 실험개시 후 4일째에 칼세인(calcein: 10 mg/kg, i.p.: Sigma, U.S.A.)을 투여하였다.
형광인자 투여 1일 후에 흰쥐를 해부하였다. 흰쥐의 좌우 족경골 (tibia)을 떼어내어 2시간 동안 0.1 M 포스페이트 완충 포르말린(phosphate buffered formalin) 고정액에 고정시킨 다음, 탈회시켜 2-3일 동안 방치한 후, 동결에 대한 보호를 위해 30% 슈크로스에 담가 4에서 하룻밤 동안 유지하였다. 고정된 골조직을 동결한 후 슬라이딩 마이크로톰(sliding microtome (HM440E, Zeiss, Germany))을 사용하여 족경골 (tibia) 근위 (proximal part)부의 시상절편 (sagital section)을 매 60m씩 수집하였다. 수집한 절편을 슬라이드 글라스 위에 올리고 건조한 후 형광현미경을 이용하여 골 조직 내 형광인자의 침착으로 형성된 선과 성장판 사이의 길이를 측정하여 골 성장 지표로 사용하였다.
성장판 연골세포 대사 증진 효과를 구명하기 위해 상기와 같이 매 60m씩 수집한 절편을 슬라이드 글라스 위에 올리고 건조한 후 크레실 바이올렛(cresyl violet)으로 염색한 다음 성장판의 높이를 측정하였다.
도 2는 젤라틴 가수분해물(#26, 3kDa이하, 4시간분해, protamex+flavorzyme처리)의 농도별 처리가 동물의 경골성장에 미치는 효과에 대한 그래프이다.
이 때, 대조구는 증류수 처리, A-고는 0.5ml of #26/체중 100g, A-저는 0.1ml of #26/체중 100g, B-고는 0.5ml of #37/체중 100g, B-저는 0.1ml of #37/체중 100g이 되도록 젤라틴 가수분해물을 처리한 것이다.
도 2를 참조하면, A-고 및 A-저 시험구의 결과가 대조구에 비해 확연히 높음을 알 수 있다.
3. 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 제조 및 특성
발효유 제조를 위해 동결건조한 젤라틴 가수분해물(#26)을 원유 중량의 0, 0.5, 1.0, 2.0%로 첨가하여 95에서 10분간 가열하여 살균하였다. 이후 38로 냉각시킨 후, 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacilus acidophilus) LA-5, 비피도박테리움(Bifidobacterium) BB-12, 및 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus)가 혼합된 스타터 ABT-5 (Chr Hansen A/S,Hor)을 0.004% 첨가하였다. 배양기에 넣고 38.5에서 8시간 동안 배양한 후 4에서 12시간 정치하였다. 설탕을 4% 첨가한 후 개별 포장하여 냉장저장 10일간 각 0, 5, 10일에 꺼내어 품질의 변화를 측정하였다.
본 발명에 따른 발효유의 단백질, 지방, 유당, 총고형분 함량은 MilkoScan FT120(Foss, Denmark)으로 측정하였으며, 그 결과는 도 3에 그래프로 나타나 있다. 상기 성분들은 본 발명에 따른 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 일반성분을 나타내는 것이며, 단백질, 총고형분(TS), 및 무지고형분(SNF)의 함량이 대조구에 비해 시험구에서 유의적으로 높음을 알 수 있다.
유산균 수는 평판배양법으로 BCP 한천배지(Difco, USA)에 1 mL씩 분주하고 37에서 48시간 배양하여 콜로니를 계수하여 유산균 수를 측정하였다.
도 4는 본 발명에 따른 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 저장중 유산균수를 나타내고 있으며, 대조군에 비해 실험군이 유의적으로 높은 유산균수를 나타냄을 알 수 있다.
발효유의 pH의 측정은 pH 미터(Thermo-Scientific Orion 3star, USA)를 이용하였다.
표 2는 본 발명의 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 저장중 pH를 나타낸다.
저장일
0 5 10
대조구 4.41 ± 0.004d 4.36 ±0.005d 4.26 ±0.004d
GH 0.5 4.50 ±0.003c 4.44 ±0.003c 4.36 ±0.002c
GH 1.0 4.60 ±0.002b 4.56 ±0.003b 4.49 ±0.002b
GH 2.0 4.71 ±0.003a 4.65 ±0.003a 4.58 ±0.003a
표 2를 참조하면, 본 발명에 따른 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 저장중 pH가 대조구에 비해 유의적으로 높음을 알 수 있다.
점도는 점도계의(Fungilab Visco basic+, Spain) L4 스핀들(spindle)을 이용하여 60 rpm에서 4분에서 8분까지 1분까지 측정한 후 평균값을 이용하였다.
표 3은 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 저장중 점도를 나타낸다.
저장일
0 5 10
대조군 533.95 ±17.638b 573.35 ±11.119b 501.540 ±0.232c
GH 0.5 591.10 ±6.404a 608.34 ±8.493ab 553.107 ±2.070a
GH 1.0 493.41 ±12.814b 524.99 ±11.620c 465.307 ±2.017d
GH 2.0 617.39 ±18.528a 628.26 ±14.407a 534.220 ±1.080b
표 3을 참조하면, 본 발명의 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 저장중 점도가 대조구에 비해 유의적으로 높음을 알 수 있다.
본 발명에 따른 발효유에 대한 관능적 특성은 훈련된 관능검사 요원 12명을 대상으로 9점 척도법을 이용하여 측정하였다.
표 4는 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 기호성을 나타낸다.
저장일
0 5 10
대조군 6.67 ±0.376 6.33 ±0.256 6.42 ±0.193
GH0.5 6.67 ±0.355 6.17 ±0.297 6.42 ±0.260
GH1.0 6.50 ±0.314 6.42 ±0.313 6.50 ±0.261
GH2.0 6.17 ±0.297 6.00 ±0.461 6.42 ±0.288
표 4를 참조하면, 본 발명의 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유의 기호성을 대조구와 비교해본 결과, 유의적인 차이가 나지 않는 것으로 나타났다.
4. 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유 급여에 의한 뼈 건강 증진 효과
발효유 급여 효과는 Sprague-Dawley계 래트를 이용하여 평가하였다. 상기에서 제조한 요구르트 4종(대조구, 0.5, 1.0, 2.0%로 첨가)을 매일 0.5 mL씩 7주간 급여하고 체중, 사료섭취량, 장기 무게와 장골의 무게 및 강도를 측정하였다.
도 5는 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유 급여에 의한 대퇴골 중량 증가양상을 나타내는 그래프이다.
처리구 1, 2, 및 3은 젤라틴 가수분해물을 각각 0.5%, 1%, 2% 첨가하여 제조한 발효유 조성물을 개체당 매일 0.5 mL씩 7주간 급여한 것이다. 도 5를 참조하면, 대조구의 건조 대퇴골 중량이 0.35g인데 반해, 처리구의 건조 대퇴골 중량은 평균 0.39g으로, 본 발명에 따른 발효유 조성물을 급여한 처리구의 건조 대퇴골 중량이 대조구에 대비하여 11.4%나 높은 것을 알 수 있다.
도 6은 젤라틴 가수분해물 첨가 발효유 급여에 의한 대퇴골 미네랄 함량증가를 나타내는 그래프이다. 도 6을 참조하면, 대조구의 대퇴골 미네랄 함량이 398.49mg인데 반해, 처리구의 대퇴골 미네랄 함량은 평균 416.83mg으로, 본 발명에 따른 발효유 조성물을 급여한 처리구의 대퇴골 미네랄 함량이 대조구에 대비하여 4.6%나 높은 수치이다. 대퇴골의 미네랄 함량의 증가는 골강도의 증가를 반영한다.
본 발명은 젤라틴의 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물 및 그 제조방법을 제공한다. 이상의 도면 및 표를 통해 살펴본 바와 같이 본 발명에 따른 젤라틴 가수분해물을 포함하는 발효유 조성물은 뼈의 건강, 특히 조골세포의 증식효과, 대퇴골의 중량 증가 및 미네랄 함량 증가의 측면에서 현저하게 증가된 효과를 확인할 수 있다. 이러한 효과를 통해 성장기 어린이의 발육을 촉진하고 노년기 및 여성의 골다공증을 예방할 수 있다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항 들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (4)

  1. 원유, 상기 원유의 0.5~2.0중량%의, 젤라틴의 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavorzyme) 가수분해물; 및
    락토바실러스 아시도필러스(Lactobacilus acidophilus) LA-5, 비피도박테리움(Bifidobacterium) BB-12, 및 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus)를 포함하는, 골성장 및 골강도의 증가를 위한 발효유 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
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