KR101376015B1 - 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀. - Google Patents

Abstract

본 발명은 개똥쑥을 함유한 사료의 제조방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 항암작용이 우수한 개똥쑥을 재료로 사료를 제조하고 이를 산란계에 공급하므로써 항암 기능을 가지는 달걀을 얻을 수 있도록 하기 위한 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀에 관한 것이다.
본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절 후 파쇄하여 개똥쑥 분말을 제조하는 제 4단계; 상기 개똥쑥 분말을 일반사료와 혼합하는 제 5단계; 를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계; 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계; 상기 분쇄한 개똥쑥에 탄소원으로 sucrose를 첨가하는 제 6단계; 상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계; 상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계; 상기 식힌 개똥쑥에 Bacillus subtilis BL-2균주를 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계; 상기 1차 발효된 개똥쑥에 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계; 상기 2차 발효된 개똥쑥에 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계; 상기 3차 발효된 개똥쑥을 일반사료와 혼합하는 제 12단계; 를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절 후 파쇄하여 개똥쑥 분말을 제조하는 제 4단계; 상기 개똥쑥 분말을 일반사료와 혼합하는 제 5단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법; 으로 제조된, 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계; 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계; 상기 분쇄한 개똥쑥에 탄소원으로 sucrose를 첨가하는 제 6단계; 상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계; 상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계; 상기 식힌 개똥쑥에 Bacillus subtilis BL-2균주를 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계; 상기 1차 발효된 개똥쑥에 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계; 상기 2차 발효된 개똥쑥에 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계; 상기 3차 발효된 개똥쑥을 일반사료와 혼합하는 제 12단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법; 으로 제조된, 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀인 것을 특징으로 한다.
상기 과제의 해결 수단에 의해, 본 발명의 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀은 주변에서 쉽게 구할수 있으며 저렴한 개똥쑥을 이용하여 항암 기능성 달걀을 얻을 수 있는 효과가 있다.
또한, 천연재료인 개똥쑥을 이용해 사료에 향균, 항암, 항산화 기능을 부여하여 가축의 질병 발생을 감소하고 가축의 생산성을 높이며, 산란계에게 섭취하도록 하였을 경우 항생제가 잔류되지 않는 안전한 달걀을 얻을 수 있는 효과가 있다.

Description

개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀.{Feed manufacturing method using artemisia annua and Anti-cancerous chicken eggs in taking it.}

본 발명은 개똥쑥을 함유한 사료의 제조방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 항암작용이 우수한 개똥쑥을 재료로 사료를 제조하고 이를 산란계에 공급하므로써 항암 기능을 가지는 달걀을 얻을 수 있도록 하기 위한 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀에 관한 것이다.

요즘 양계 농장에서는 달걀을 생산하는 과정에서 닭의 음용수 또는 사료에 한방재료 및 여러 자연건강식품을 혼합함으로써 기능성 달걀을 제조하고자 하는 기술이 지속적으로 개발되고 있다.

종래의 기술들은 한방재료 및 여러 자연건강식품을 사료에 혼합하여 우수한 기능을 갖는 달걀을 얻고자 노력하고 있지만, 첨가되는 재료가 비교적 고가이며 구하기 어려워 양계 농장에 쉽게 적용되지 못하는 단점이 있다.

또한, 종래의 기술들의 첨가물은 향균효과가 낮아 산란계의 질병 예방 및 치료 목적으로 항생제를 별도로 첨가하여야 하나, 최근 식품의 안정성 문제가 대두되어 항생제의 사용을 엄격하게 규제하거나, 사용하더라도 계란에 잔류가 되지 않도록 각별히 주의를 기울여야 하는 실정이다.

한국공개특허 제 10-2004-0087509 호.

본 발명은 상기의 문제점을 해결하기 위해서 안출된 것으로서 항암 및 항산화 효과가 있는 천연재료인 개똥쑥을 재료로 사료를 제조하여 닭에게 제공함으로써 항암 기능성을 가지는 달걀을 얻는 데 그 목적이 있다.

또한, 항균효과를 가지고 있는 개똥쑥을 사료에 첨가하여 닭에게 제공함으로써 별도의 항생제 첨가없이 소비자에게 안전하고 건강한 달걀을 제공하는 데 그 목적이 있다.

발명이 해결하고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절 후 파쇄하여 개똥쑥 분말을 제조하는 제 4단계; 상기 개똥쑥 분말을 일반사료와 혼합하는 제 5단계; 를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계; 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계; 상기 분쇄한 개똥쑥에 탄소원으로 sucrose를 첨가하는 제 6단계; 상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계; 상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계; 상기 식힌 개똥쑥에 Bacillus subtilis BL-2균주를 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계; 상기 1차 발효된 개똥쑥에 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계; 상기 2차 발효된 개똥쑥에 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계; 상기 3차 발효된 개똥쑥을 일반사료와 혼합하는 제 12단계; 를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절 후 파쇄하여 개똥쑥 분말을 제조하는 제 4단계; 상기 개똥쑥 분말을 일반사료와 혼합하는 제 5단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법; 으로 제조된, 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀은 개똥쑥을 채취하는 제 1단계; 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계; 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계; 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계; 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계; 상기 분쇄한 개똥쑥에 탄소원으로 sucrose를 첨가하는 제 6단계; 상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계; 상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계; 상기 식힌 개똥쑥에 Bacillus subtilis BL-2균주를 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계; 상기 1차 발효된 개똥쑥에 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계; 상기 2차 발효된 개똥쑥에 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계; 상기 3차 발효된 개똥쑥을 일반사료와 혼합하는 제 12단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법; 으로 제조된, 개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀인 것을 특징으로 한다.

상기 과제의 해결 수단에 의해, 본 발명의 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법 및 이를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀은 주변에서 쉽게 구할수 있으며 저렴한 개똥쑥을 이용하여 항암 기능성 달걀을 얻을 수 있는 효과가 있다.

또한, 천연재료인 개똥쑥을 이용해 사료에 향균, 항암, 항산화 기능을 부여하여 가축의 질병 발생을 감소하고 가축의 생산성을 높이며, 산란계에게 섭취하도록 하였을 경우 항생제가 잔류되지 않는 안전한 달걀을 얻을 수 있는 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 제 1 제조방법에 따른 개똥쑥을 이용한 분말사료의 제조방법을 보여주는 순서도.
도 2는 본 발명의 제 2 제조방법에 따른 개똥쑥을 이용한 발효사료의 제조방법을 보여주는 순서도.

이상과 같은 본 발명에 대한 해결하고자 하는 과제, 과제의 해결 수단, 발명의 효과를 포함한 구체적인 사항들은 다음에 기재할 제조방법 및 도면들에 포함되어 있다. 본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 제조방법들을 참조하면 명확해질 것이다.

개똥쑥은 국화과에 속하는 일년생 초본으로 잔잎쑥, 개땅쑥, 계피쑥으로도 불리며, 길가나 빈터, 강가 또는 산비탈에서 군락을 이루며 자란다. 높이가 약 1m정도에 이르고 6 ~ 8월에 녹황색의 꽃이 피며 우리나라의 경기, 제주, 평북, 함남지방이나 아시아 및 유럽 등지에 널리 분포되어 있다. 한방에서는 개똥쑥의 지방부를 청호라는 이름으로 해열제, 지혈제, 피부병 치료제 및 살충제 등으로 이용되고 있으며, 중국에서는 예로부터 말라리아 치료를 위한 약초로 사용되어 왔는데, sesquiterpene lactone의 일종인 artemisinin은 강력한 항말라리아 효능을 지니므로 현재 의약품으로도 이용되고 있다. 또한 최근에는 암세포를 선택적으로 괴사시키는 항암효능이 입증되면서 세계적으로 주목받는 생약재로 평가받고 있다.

일반적으로 항생제 대체제로서 활용되는 성분은 향균성과 항산화성분이 많이 이용되는데 향균성은 장내 유해미생물을 억제하는 목적으로 사용되고 있으며, 항산화성분은 면역성 강화 목적으로 이용되고 있다.

개똥쑥은 arteannuin, arteanuin B, scopoletin, coumarin, eupatin등을 주요성분으로 함유하고 있는데 이러한 성분들은 항암 및 향균작용과 관계가 깊다. 또한, 개똥쑥은 항산화력이 높은 약용식물 중의 하나로써 개똥쑥에 함유된 페놀 혼합물등에 의해 높은 항산화 활성을 갖게한다.

본 발명의 제조방법에 따르면 개똥쑥을 함유한 사료를 제조할 수 있으며, 이를 이용하여 항암기능성이 있는 달걀을 얻을 수 있다.

하기에서는 상기 제시된 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법을 도면을 이용하여 설명한다.

<제 1 제조방법>

도 1은 본 발명의 제 1 제조방법에 따른 개똥쑥을 함유한 분말사료의 제조 방법을 보여주는 순서도이다.

먼저, 제 1단계(S110)에서는 개똥쑥을 채취한다. 구체적으로, 개똥쑥은 가을에 파종하여 겨울을 나게 한 뒤, 다음해 6 ~ 7월경에 잘라서 사용하거나, 자른 부분에서 새롭게 자라는 것을 초가을 경에 수확하여 사료의 원료로 사용한다.

다음으로, 제 2단계(S120)에서는 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거한다. 구체적으로, 농약을 사용하지 않은 개똥쑥일수록 벌레 등의 불순물이 있을 수 있으므로 수확 후 꼼꼼히 확인하여 제거한다.

다음으로, 제 3단계(S130)에서는 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조시킨다. 구체적으로, 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 그늘에서 15 내지 20일간 건조하여 수분함량이 15 내지 20%가 되도록 한다. 구체적으로, 개똥쑥을 그늘에서 건조하거나 건조기를 이용하여 건조한다. 상기 개똥쑥은 그늘에서 자연 건조하는 것이 바람직하나, 습도가 높은 여름철의 경우에는 건조기를 통해서 건조하여 개똥쑥이 썩지 않도록 하는 것이 바람직하다. 이때 상기 개똥쑥의 수분함량이 15% 미만 일 경우에는 분쇄과정에서 비산되는 것이 많고, 수분함량이 20%를 초과할 경우에는 분쇄과정이 원활하게 이루어지지 못하게 됨으로 상기의 수분함량 범위 내에서 건조하는 것이 바람직하다. 개똥쑥을 15일 미만으로 건조할 경우 충분한 건조가 이루어지지 않으며 20일을 초과하여 건조할 경우 수분함량이 15%미만이 되어 바람직하지 못하다.

다음으로, 제 4단계(S140)에서는 상기 건조된 개똥쑥을 뿌리, 줄기, 잎을 고르게 섞어 파쇄하여 분말형태로 제조한다. 구체적으로, 상기 건조된 개똥쑥을 뿌리, 줄기, 잎을 고르게 섞는다. 개똥쑥의 부위별 총 페놀 함량은 잎에 가장 많이 함유되어 있으며 그다음 줄기, 뿌리 순이고, 줄기 및 뿌리에는 잎과 꽃보다 섬유소의 함량이 높다. 상기 고르게 섞은 개똥쑥을 일정한 크기로 세절한 후 80 내지 120mesh 입자 크기로 파쇄하여 개똥쑥 분말을 얻는다.

다음으로, 제 5단계(S150)에서는 상기 개똥쑥 분말을 일반사료와 혼합한다. 구체적으로, 상기 개똥쑥 분말 1 중량부에 대하여 일반사료 15 내지 20중량부를 혼합하여 분말형태의 개똥쑥을 함유한 분말사료를 제조한다. 상기 개똥쑥 분말이 15 중량부 미만으로 배합될 경우 사료에 충분한 항암효능과 항생제 효과를 전달할 수 없으며, 20 중량부를 초과하여 배합될 경우 이취로 인해 사료섭식율이 감소하는 측면에 있어서 바람직하지 않으므로 상기의 범위로 배합하는 것이 좋다.

<제 2 제조방법>

도 2은 본 발명의 제 2 제조방법에 따른 개똥쑥을 함유한 발효사료의 제조 방법을 보여주는 순서도이다.

먼저, 제 1단계(S210)에서는 개똥쑥을 채취한다. 구체적으로, 개똥쑥은 가을에 파종하여 겨울을 나게 한 뒤, 다음해 6 ~ 7월경에 잘라서 사용하거나, 자른 부분에서 새롭게 자라는 것을 초가을 경에 수확하여 사료의 원료로 사용한다.

다음으로, 제 2단계(S220)에서는 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거한다. 구체적으로, 농약을 사용하지 않은 개똥쑥일수록 벌레 등의 불순물이 있을 수 있으므로 수확 후 꼼꼼히 확인하여 제거한다.

다음으로, 제 3단계(S230)에서는 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조시킨다. 구체적으로, 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 그늘에서 15 내지 20일간 건조하여 수분함량이 15 내지 20%가 되도록 한다. 구체적으로, 개똥쑥을 그늘에서 건조하거나 건조기를 이용하여 건조한다. 상기 개똥쑥은 그늘에서 자연 건조하는 것이 바람직하나, 습도가 높은 여름철의 경우에는 건조기를 통해서 건조하여 개똥쑥이 썩지 않도록 하는 것이 바람직하다. 이때 상기 개똥쑥의 수분함량이 15% 미만 일 경우에는 세절하는 과정에서 비산되는 것이 많고, 수분함량이 20%를 초과할 경우에는 세절과정이 원활하게 이루어지지 못하게 됨으로 상기의 수분함량 범위 내에서 건조하는 것이 바람직하다. 개똥쑥을 15일 미만으로 건조할 경우 충분한 건조가 이루어지지 않으며 20일을 초과하여 건조할 경우 수분함량이 15%미만이 되어 바람직하지 못하다.

다음으로, 제 4단계(S240)에서는 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절한다. 구체적으로, 상기 건조된 개똥쑥의 잎, 줄기, 뿌리를 골고루 섞어 2 내지 3cm가 되도록 세절한다. 개똥쑥의 부위별 총 페놀 함량은 잎에 가장 많이 함유되어 있으며 그다음 줄기, 뿌리 순이고, 줄기 및 뿌리에는 잎과 꽃보다 섬유소의 함량이 높다.

다음으로, 제 5단계(S250)에서는 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄한다. 구체적으로, 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하여 효모의 증식이 원활하게 이루어져 발효가 잘 일어날 수 있도록 수분함량을 조절한다. 상기 가해지는 물의 양은 상기 세절한 개똥쑥 1 중량부에 대하여 물 0.5 중량부를 혼합하여 분쇄한다. 물이 0.5 중량부 미만일 경우 효모의 증식이 원활하게 일어나는 환경을 조성하기 어려우며, 물이 0.5 중량부를 초과할 경우 수분함량이 높아 분쇄과정에 어려움이 생기므로 유의한다.

다음으로, 제 6단계(S260)에서는 상기 분쇄한 개똥쑥에 탄소원으로 sucrose를 첨가한다. 구체적으로, 상기 분쇄한 개똥쑥에 발효작업시 쓰이는 탄소 및 에너지원인 탄소원으로 sucrose을 첨가하여 균의 증식속도를 증가시킨다. 상기 sucrose의 함량은 상기 분쇄한 개똥쑥 1 중량부에 대하여 0.10 내지 0.12 중량부를 혼합한다.

다음으로, 제 7단계(S270)에서는 상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균한다. 상기 개똥쑥을 무균상태로 살균하여 해균으로부터 오염을 예방하며, 고압살균은 통상적으로 고압살균시 사용되는 조건인 120 내지 125도, 1.0 내지 1.3kg/cm²에서 10 내지 15분간 실시한다.

다음으로, 제8단계(S280)에서는 상기 고압살균한 개똥쑥을 식힌다. 구체적으로, 상기 고압살균한 개똥쑥을 상온에서 37도 전후가 되도록 식힌다.

다음으로, 제 9단계(S290)에서는 상기 식힌 개똥쑥에 Bacillus subtilis BL-2균주를 접종하여 1차 발효를 실시한다. 구체적으로, 상기 식힌 개똥쑥 1중량부에 대하여 호기성 균의 일종인 Bacillus subtilis BL-2균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하고, 35 내지 38도에서 250rpm으로 24시간 진탕배양하여 1차 발효를 진행한다. 진탕배양은 미생물이나 동식물의 배양세포를 액체배지에 접종하여 진탕기 위에서 계속 흔들면서 배양하는 방법으로서, 일반적으로 진탕에 의하여 배지성분과의 접촉 및 산소의 공급이 잘되어 증식이 균일하고, 그 능률이 좋아진다. Bacillus subtilis BL-2균주를 접종함으로써 상기 첨가한 sucrose를 fruto-oligosaccharide 와 leaven(효모)로 형성되도록 한다.

다음으로, 제 10단계(S300)에서는 상기 1차 발효된 개똥쑥에 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종하여 2차 발효를 실시한다. 구체적으로, 상기 1차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 0.0005 내지 0.0010 중량부 접종하고, 20 내지 23도에서 48시간 알코올 발효 방법으로 2차 발효를 진행한다. 알코올 발효 방법은 산소가 없는 상태에서 미생물에 의하여 당류가 알코올과 이산화탄소로 분해되어 알코올을 생성하는 발효이다. 이러한 작용을 하는 미생물로 가장 잘 알려진 것이 효모이며, sucrose를 발효시킬 수 있다. 상기 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종함으로써, 2차 발효시 Bacillus subtilis BL-2균주에 의해 sucrose로 부터 leaven을 생성할 때 부생되는 glucose를 소모한다.

다음으로, 제 11단계(S310)에서는 상기 2차 발효된 개똥쑥에 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 접종하여 3차 발효를 실시한다. 구체적으로, 상기 2차 발효된 개똥쑥에 우수한 향균 활성 및 스트레스에 내성을 갖는 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하고, 35 내지 38도에서 48시간 3차 발효하여 발효 개똥쑥 첨가물을 제조한다.

다음으로, 제 12단계(S320)에서는 상기 발효 개똥쑥 첨가물을 일반사료와 혼합한다. 구체적으로, 상기 발효 개똥쑥 첨가물 1 중량부에 대하여 일반사료를 15 내지 20중량부 혼합하여 개똥쑥을 함유한 발효 사료를 제조한다. 상기 발효 개똥쑥 첨가물이 15 중량부 미만으로 배합될 경우 사료에 충분한 항암효능과 항생제 효과를 전달할 수 없으며, 20 중량부를 초과하여 배합될 경우 이취로 인해 사료섭식율이 감소하는 측면에 있어서 바람직하지 않으므로 상기의 범위로 배합하는 것이 좋다.

본 발명의 제조방법을 참고하여 제조된 개똥쑥을 함유한 사료를 이용하여 닭에게 사양실험을 실시한 후 생산된 달걀을 이용하여, 암세포 증식억제에 대한 활성 측정 과정 및 결과를 하기와 같이 나타내었다.

[실시예 1]

상기 제 1 제조방법을 바탕으로 상기 개똥쑥 분말 1중량부에 대하여 일반사료 24 중량부를 혼합하여 제조된 개똥쑥을 함유한 분말사료로 사양실험을 진행한 닭의 달걀.

[실시예 2]

상기 제 1 제조방법을 바탕으로 상기 개똥쑥 분말 1중량부에 대하여 일반사료 16 중량부를 혼합하여 제조된 개똥쑥을 함유한 분말사료로 사양실험을 진행한 닭의 달걀.

[실시예 3]

상기 제 2 제조방법을 바탕으로 상기 발효 개똥쑥 첨가제 1중량부에 대하여 일반사료 24 중량부를 혼합하여 제조된 개똥쑥을 함유한 발효사료로 사양실험을 진행한 닭의 달걀.

[실시예 4]

상기 제 2 제조방법을 바탕으로 상기 발효 개똥쑥 첨가제 1중량부에 대하여 일반사료 16 중량부를 혼합하여 제조된 개똥쑥을 함유한 발효사료로 사양실험을 진행한 닭의 달걀.

[비교예 1]

시중에서 판매되고 있는 일반사료로 사양실험을 진행한 닭의 달걀.

1)시료용액 조제

상기 사양실험에서 생산된 달걀 500g에 80% 에탄올 10L를 가하여 60℃의 수욕상에서 6시간씩 2회 추출하여 여과 후, 회전진공증발농축기에서 완전 건고시킨 다음, 80% 에탄올 30mL를 가해 원심분리하여 상층액을 암세포 증식 억제에 대한 시료용액으로 사용하였다.

2)암세포 배양

실험에 사용된 암세포주는 인체 자궁경부 상피암 세포인 Hera(cervix epitheloid carcinoma, Human)와 간암세포인 HepG2(liver carcinoma, Human)를 한국세포주은행에서 분양받아 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco, Rockville, MD, USA), Penicillin(100units/mL) 및 streptomycin(50㎍/mL)를 첨가한 minimum essential medium eagle(MEM; sigma chemical Co.,St.Louis, MO, USA)배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였다. 암세포는 일주일에 2~3회 새로운 배지로 교환하고 phosphated buffered saline(PBS, pH7.0, Gibco)으로 세척한 후, 0.25% trypsin을 사용하여 부착된 세포를 분리하여 원심분리한 다음 집접된 암세포에 배지를 첨가하여 암세포가 골고루 분산되도록 피펫으로 잘 혼합한 후 cell culture flask에 일정량 분할하여 주입하고, 3~4일마다 계대하면서 실험에 사용하였다.

3)암세포 증식 억제에 대한 활성 측정

인체 암세포에 대한 시료 추출물의 증식 억제 활성을 알아보기 위하여 MTT colorimetric assay를 이용하였다. MTT assay는 생존 암세포의 미토콘드리아 내의 dehydrogenase의 효소 작용에 의해 노란색의 수용성물질인 MTT[3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]가 환원되어 dark blue formazan crystal이 생성되는 원리를 이용한 것으로 formazan crystal이 침전되는 정도를 측정함으로써 항암제에 의해 암세포가 사멸 또는 증식억제 되는 정도를 결정할 수 있다. 배양된 암세포는 well당 HeLa는 3x10³ cells/mL가 되도록 96 well plate에 100㎕씩 분주하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 24시간 동안 배양한 후, 100, 200, 500, 1000, 2000 및 5000㎍/mL 농도로 조절한 시료용액을 10㎕씩 접종하였다. 이를 다시 24시간 배양한 다음 PBS에 용해한 5mg/mL의 MTT용액을 10㎕씩 첨가하여 2시간 동안 37℃에서 배양하였으며, 이 때 생존하는 세포와 MTT와의 반응으로 생성된 formazan 결정을 dimethyl sulfoxide (DMSO) 100㎕에 녹여 plate shake (MX2, FINEPCR, Seoul, Korea)에서 5분간 반응시킨 후, ELISA reader를 이용해 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도 측정 시 사용되는 blank는 세포 부유액 대신 MEM배지 110㎕를 첨가하였으며, 대조군의 활성을 100%로 하여 상대적인 세포 증식억제율을 산출하였다.

1. 자궁 경부암 세포(HeLa)에 대한 증식 억제 활성.

상기 실시예 1, 실시예 2, 실시예 3, 실시예 4 및 비교예 1의 사료를 닭에게 60일간 급이하여 생산된 계란을 시료로 하여 인체 유래 자궁경부 상피암 HeLa 세포에 대한 증식억제 활성을 실험하여 산출한 세포 증식 억제율을 하기 표 1에 나타내었다.

구분	시료용액의 농도(㎍/mL)
	100	200	500	1000	2000	5000
비교예1	2.85±0.09	2.97±0.11	2.26±0.53	2.30±0.15	3.00±0.08	4.50±0.11
실시예1	9.78±0.26	13.65±0.46	16.46±0.37	21.49±0.15	23.65±0.76	39.09±0.63
실시예2	10.21±0.85	32.61±0.55	50.32±0.57	66.39±0.33	70.26±0.84	70.48±0.59
실시예3	25.08±0.68	22.14±0.35	38.05±0.68	42.25±0.29	50.84±0.39	70.21±0.49
실시예4	47.09±0.16	62.70±0.36	86.73±0.38	87.41±0.68	82.60±0.33	81.94±0.45

표 1에서 나타낸 바와 같이 일반사료로 제조한 비교예 1의 달걀에서는 거의 활성이 없었고, 실시예 1의 사료에서도 시료용액의 농도가 500㎍/mL까지는 큰 활성을 보이지 못하였다.

하지만, 실시예 1의 사료에서 시료용액의 농도가 1000㎍/mL이상일 경우 활성이 다소 인정되었고, 나머지 실시예에서 모두 첨가되는 시료용액의 농도가 증가함에 따라 활성이 증가하였다.

실시예 2의 경우 시료용액의 농도가 500㎍/mL이상에서는 최저 50% 근방에서 최고 70.5가 넘는 억제율을 보였다.

발효사료인 실시예 3과 실시예 4의 경우, 상기 제시된 분말사료인 실시예 1과 실시예 2에 비해 낮은 농도의 시료용액에서도 암세포에 대한 억제율이 높다는 것을 알 수 있었다. 특히 실시예 4의 경우 시료용액 농도가 500 내지 1000㎍/mL에서 암세포의 저지율이 86%에 가까운 놀라운 효과를 보였다.

2. 간암 세포(HepG2)에 대한 증식 억제 활성.

상기 자궁 경부암 세포에 대한 증식 억제 활성 실험과 동일한 조건으로 간암 세포에 대한 증식 억제 활성 실험을 진행하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.

구분	시료용액의 농도(㎍/mL)
	100	200	500	1000	2000	5000
비교예1	2.85±0.13	1.31±0.06	2.73±0.33	2.38±0.15	3.75±0.21	3.41±0.16
실시예1	32.26±0.36	27.57±0.15	35.65±0.23	38.26±0.43	42.10±0.22	47.11±0.35
실시예2	30.25±0.18	32.98±0.43	34.16±0.36	50.62±0.49	55.70±0.56	60.29±0.37
실시예3	47.61±0.59	57.48±0.68	63.25±0.49	67.66±0.49	70.48±0.38	71.69±0.49
실시예4	50.01±0.38	61.56±0.59	71.71±0.73	76.99±0.19	76.38±0.42	78.24±0.17

표 2에 나타낸 바와 같이, 간암 세포 실험에서도 비교예 1은 항암효과가 미미하게 나타났다.

한편, 실시예 2, 실시예 3 및 실시예 4의 경우에는 시료용액의 농도가 100㎍/mL일 때부터 활성이 감지되었으며, 농도가 증가함에 따라 활성이 크게 증가되었다.

상기 자궁 경부암 세포 및 간암 세포 증식 억제 활성 실험에서 나타난 바와 같이 실시예 1과 실시예 3, 실시예 2와 실시예 4를 비교할 경우 사료에 첨가되는 개똥쑥의 비율 및 시료용액의 농도가 동일할 경우 발효사료가 분말사료에 비해 높은 활성을 보인다는 것을 알 수 있다. 이는 사료를 발효시키는 과정에서 첨가된 미생물에 의해 기능성 물질의 흡수가 용이하게 되어 나타난 현상으로, 첨가된 미생물이 생산한 효소에 의해 개똥쑥 조직 속에 결합되어 있던 phenolic acid, flavonol 및 catechin 등의 항암 물질들이 조직 외로 나와 닭의 사료 섭취시 보다 용이하게 흡수되어 계란으로 이행되었음을 알 수 있다.

상기 실시예의 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법은 제조공정이 간단한 분말사료와 항암효능이 뛰어난 발효사료를 성장 상태 및 성장 환경에 따라 선택적으로 산란계에게 공급함으로써 비용절감은 물론이고 소비자에게 안전하고 건강한 달걀을 제공할 수 있다.

이와 같이, 상술한 본 발명의 기술적 구성은 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자가 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다.

그러므로 이상에서 기술한 제조방법은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해되어야 하고, 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타나며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

S110. 개똥쑥을 채취하는 제 1단계.
S120. 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계.
S130. 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계.
S140. 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절 후 파쇄하여 개똥쑥 분말을 제조하는 제 4단계.
S150. 상기 개똥쑥 분말을 일반사료와 혼합하는 제 5단계.
S210. 개똥쑥을 채취하는 제 1단계.
S220. 상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계.
S230. 상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계.
S240. 상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계.
S250. 상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계.
S260. 상기 분쇄한 개똥쑥에 탄소원으로 sucrose를 첨가하는 제 6단계.
S270. 상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계.
S280. 상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계.
S290. 상기 식힌 개똥쑥에 Bacillus subtilis BL-2균주를 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계.
S300. 상기 1차 발효된 개똥쑥에 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계.
S310. 상기 2차 발효된 개똥쑥에 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계.
S320. 상기 3차 발효된 개똥쑥을 일반사료와 혼합하는 제 12단계.

Claims (9)

1. 삭제
2. 개똥쑥을 채취하는 제 1단계;
   상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계;
   상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계;
   상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계;
   상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계;
   상기 분쇄한 개똥쑥 1중량부에 대하여 탄소원으로 sucrose를 0.10 내지 0.12 중량부 첨가하는 제 6단계;
   상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계;
   상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계;
   상기 식힌 개똥쑥 1중량부에 대하여 Bacillus subtilis BL-2균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계;
   상기 1차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 0.0005 내지 0.0010 중량부 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계;
   상기 2차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계;
   상기 3차 발효된 개똥쑥 1 중량부에 대하여 일반사료를 15 내지 20중량부 혼합하여 개똥쑥을 함유한 발효 사료를 제조하는 제 12단계;
   를 포함하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법.
3. 삭제
4. 제 2항에 있어서,
   상기 제 7단계에서 고압살균 공정은 120 내지 125℃, 1.0 내지 1.3kg/cm²의 조건에서 10 내지 15분간 실시하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법.
5. 제 2항에 있어서,
   상기 제 8단계에서 상기 식힌 개똥쑥 1중량부에 대하여 Bacillus subtilis BL-2균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하며, 35 내지 38℃에서 250rpm으로 24시간 진탕배양하여 1차 발효하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법.
6. 제 2항에 있어서,
   상기 제 10단계에서 상기 1차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 0.0005 내지 0.0010 중량부 접종하며, 20 내지 23℃에서 48시간 알코올 발효 방법으로 2차 발효하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법.
7. 제 2항에 있어서,
   상기 제 11단계에서 상기 2차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하며, 35 내지 38℃에서 48시간 3차 발효하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법.
8. 삭제
9. 개똥쑥을 채취하는 제 1단계;
   상기 채취한 개똥쑥의 이물질을 제거하는 제 2단계;
   상기 이물질을 제거한 개똥쑥을 건조하는 제 3단계;
   상기 건조된 개똥쑥의 잎,줄기,뿌리를 섞어 세절하는 제 4단계;
   상기 세절한 개똥쑥에 물을 가하고 분쇄하는 제 5단계;
   상기 분쇄한 개똥쑥 1중량부에 대하여 탄소원으로 sucrose를 0.10 내지 0.12 중량부 첨가하는 제 6단계;
   상기 sucrose를 첨가한 개똥쑥을 고압살균하는 제 7단계;
   상기 고압살균한 개똥쑥을 식히는 제 8단계;
   상기 식힌 개똥쑥 1중량부에 대하여 Bacillus subtilis BL-2균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하여 1차 발효를 실시하는 제 9단계;
   상기 1차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Saccharomyces carlsbergensis Saflager S-23균주를 0.0005 내지 0.0010 중량부 접종하여 2차 발효를 실시하는 제 10단계;
   상기 2차 발효된 개똥숙 1중량부에 대하여 Lactobacillus plantrum KCTC3108균주를 0.10 내지 0.12 중량부 접종하여 3차 발효를 실시하는 제 11단계;
   상기 3차 발효된 개똥쑥 1 중량부에 대하여 일반사료를 15 내지 20중량부 혼합하여 개똥쑥을 함유한 발효 사료를 제조하는 제 12단계;
   를 포함하는 것을 특징으로 하는 개똥쑥을 함유한 사료의 제조 방법; 으로 제조된,
   개똥쑥을 함유한 사료를 섭취한 닭의 항암기능성 달걀.

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