KR101351121B1 - Ｉｌ－２７을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 IL-27을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 본 발명의 IL-27 단백질은 세포 또는 조직 이식 후 면역 거부 반응과 관련된 질환을 보이는 동물에게 투여하였을 때, 이식된 세포 또는 조직이 생착된 후 숙주에 대한 거부반응을 억제시킴으로써 면역거부질환을 완화시키는 효과를 갖는다. 따라서 상기와 같은 효과를 갖는 IL-27 단백질 및 IL-27 단백질을 암호화하는 핵산을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 면역 거부 반응 관련 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있는 특징이 있다.

Description

ＩＬ－２７을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating immunological rejection comprising IL-27 as an effective component}

본 발명은 면역거부반응으로 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 면역거부반응을 완화시키는 효과를 나타내는 IL-27 단백질 또는 IL-27 단백질을 암호화하는 핵산을 유효성분으로 함유하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

면역거부반응이란 이식된 조직을 숙주가 비자기(nonself)로 인식하고 이를 제거하고자 하는 반응으로 MHC(major histocompatibility complex) 혹은 minor histocompatibility complex가 관여하는 것으로 알려져 있다. 거부반응은 세포매개면역과 체액면역 모두가 관련하나 이들의 상대적인 기여도는 이식반응의 종류에 따라 다르다.

T세포매개 반응의 경우, 모든 세포에 광범위하게 표현되어 있는 MHC가 동종항원(alloantigen)으로서 역할을 하며, CD4 T세포(MHC typeⅡ인식)와 CD8 T세포(MHC typeⅠ인식)가 모두 관여한다. T세포매개반응은 수용자의 림프구가 공여자의 MHC를 만났을 때 개시되는데, 즉, 숙주 T세포가 이식장기내의 가지세포를 만나거나 공여자의 가지세포가 수용자의 림프절로 유입된 후 면역작용이 시작되며, 활성화된 CD4 T세포는 지연과민반응에서 나타나는 cytokine을 분비하여 혈관투과성을 증가시키고, 림프구, 대식구와 같은 단핵세포의 국소 침윤을 일으키며, 침윤된 대식구에 의해 미세혈관 손상, 조직허혈 및 이식조직 파괴가 일어나게 된다.

또한, 동종 항원에 대한 항체매개 반응으로도 면역 이식거부가 일어날 수 있는데, 초급성 거부는 이미 형성된 항공여자 항체가 존재하거나, 신장이식, 임신(태아에서 기원한 비자기 MHC), MHC가 일치되지 않은 사람에게서 수혈을 받은 경우(혈소판, 백혈구)에 일어나게 되고, 이식 항원에 노출된 적이 없으나 나중에 항체가 형성되어 거부반응이 나타나는 경우에는, B세포가 T세포의 도움을 받아 공여자의 항원에 대한 항체를 분비하고, 항체의 최초 표적은 이식 조직의 혈관이다.

일반적인 장기이식에서는 수혜자가 이식 장기를 거부하지만, 골수이식이나 면역세포를 이식할 경우는 이식해준 면역세포들이 수혜자의 면역계를 거부하는데, 이를 이식편 대 숙주 거부반응(graft-versus-host rejection)이라고 한다.

이식편대숙주질환(graft-versus-host disease, GvHD)은 동종이식 때 주입되는 공여자(供與者)의 말초 혈액이나 골수내의 T림프구를 환자의 몸에서 남의 것으로 인식하여 면역 반응이 일어나는 면역 거부 질환을 말한다. 즉, 수혈된 살아 있는 림프구에 의해 유발되며 면역 반응으로 인해 간 기능 이상, 피부 병변, 황달, 설사, 발열, 범혈구감소증 등의 증상이 나타나는 질환으로 심한 경우 환자가 사망할 수 있다.

이식편대숙주질환은 크게 급성 이식편대숙주질환(acute Graft-versus-Host Disease, aGvHD)과 만성 이식편대숙주질환(chronic Graft-versus-Host Disease, cGvHD)로 구분된다.

만성 이식편대숙주질환은 동종이식의 경우 이식 후 보통 4~6개월이 지나서 발생하며, 이식 80일 이전이나 1년 이후 발생하는 경우는 드물다. 따라서 동종반응이 만성 이식편대숙주질환을 일으키는 주요한 전제조건이며, 만성 이식편대숙주질환의 발명과정은 긴 잠복기를 거치거나, 표적 장기에 미치는 영향이 느리게 나타난다는 것을 알 수 있다.

또한 급성 이식편대숙주질환은 동종조혈세포이식의 중요한 합병증으로, 동종조혈모세포 이식 후 대게 30~40일 이내에 발생하게 되며, 피부, 간 그리고 위장관을 침범하게 된다. 이러한 급성 이식편대숙주질환은 3단계로 발생하게 되는데, 1단계에서는 골수를 이식하기 이전에 발생하는 것으로 환자의 조직이 손상되고 경우에 따라서는 박테리아 감염 등에 의해 항원제시세포(antigen presenting cell)가 활성화되는 단계이며, 2단계에서는 이식되는 골수세포 중의 T 세포가 활성화되는 단계이다. 이미 활성화된 환자의 항원제시세포가 T 세포를 Th1 세포로 분화시키며, 궁극적으로 IL-2, IFN-gamma 등의 사이토카인 분비를 증가시킨다. 3단계에서는 환자의 장기가 파괴된다. 활성화된 Th1 세포에서 분비되는 사이토카인에 의해 사이토톡식 T 세포 (cytotoxic T cell) 및 자연살해세포 (naturall killer cell)등이 활성화되면 이들 세포는 환자의 장기를 공격하게 되어 이식편대숙주질환이 발생하게 된다.

이러한 이식편대숙주질환을 치료하기 위해서 여러 가지 방법이 제안되고 있다. 이식되는 골수세포 중에서 T 세포를 제거하는 방법, T 세포와 항원제시세포의 반응을 억제하기 위해 CD80, CD86 등에 대한 항체를 투여하는 방법, IL-2, IFN-gamma 등의 사이토카인에 대한 항체를 투여하는 방법 등이 제시되고 있다. 이와 더불어 사이클로스포린 에이, 라파마이신, FK-506 스테로이드제제 등의 화합물 면역거부 억제제를 투여하는 방법도 사용되고 있다. 이들 방법 중에서 T 세포의 활성화를 억제하는 화합물 면역거부 억제제 투여법이 가장 널리 사용되고 있다.

현재까지 많은 화합물 면역억제제가 개발되어 있으나 사이클로스포린에이가 가장 우수한 임상효과를 나타내고 있으며 급성 이식편대숙주병을 포함하여 장기이식거부반응 등에 널리 쓰이고 있다. 그러나 사이클로스포린에이는 고용량으로 사용할 경우 T 세포의 활성화를 완벽하게 억제하여 질병을 치료할 수 있으나 신장독성을 포함하여 상당한 부작용을 나타내는 문제점이 있다.

따라서 부작용이 없고 치료 효과가 우수한 새로운 면역거부반응 치료제의 개발이 필요한 실정이다.

이에 본 발명자들은 IL-27(Interleukin-27)이 면역거부반응을 완화시킨다는 것을 규명함으로써 각종 면역 이식 거부 관련 질환에서 치료제로 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 IL-27(Interleukin-27)을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

나아가 본 발명의 다른 목적은 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 IL-27(Interleukin-27)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 IL-27(Interleukin-27)을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 IL-27은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 IL-27(Interleukin-27)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 IL-27은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2로 표시되는 염기서열을 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역거부질환은 이식편대숙주질환(graft-versus-host disease)일 수 있다.

본 발명의 IL-27 단백질은 세포 또는 조직 이식 후 면역 거부 반응과 관련된 질환을 보이는 동물에게 투여하였을 때, 이식된 세포 또는 조직이 생착된 후 숙주에 대한 거부반응을 억제시킴으로써 면역거부질환을 완화시키는 효과를 갖는다.

도 1은 이식편대숙주질환 동물모델에 IL-27을 처리하고 시간 경과에 따른 임상 점수를 평가하여 나타낸 그래프이다.

본 발명은 IL-27을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공함을 그 특징으로 한다.

IL-27(Interleukin-27)은 Interleukin-12계열의 이성이량체 사이토카인으로 EBI3와 p28의 두 서브유니트로 구성되어 있으며, Th1 개시의 초기 조절에 관여하는 사이토카인으로 Th2 인자인 GATA-3의 작용을 억제하는 역할을 한다. 이 사이토카인은 CD4+ T 림프구와 자연살해세포에서 아주 높게 발현하는 수용체(WSX-1)에 의하여 매개된다고 알려져 있다.

한편, 면역 거부 반응이란 공여체에서 수용체에 접종 또는 이식된 이질적인 세포 또는 조직의 특이적인 면역반응에 의한 붕괴현상으로써, 이식항원을 달리하는 공여자로부터 이식한 이식편은 수용자의 면역학적 기작으로는 생착(生着)할 수 없으며, 이러한 거부반응은 세포성 면역 및 체액성 면역에 의해 야기된다. 피부나 고형종양의 이식에서는 거부반응의 주체가 세포성 면역인데, 즉, 이식 피부 편을 거부한 동물의 혈청의 이입은 수용하는 동물과 같은 이식편의 거부는 촉진하지 않지만 림프계 세포의 이입은 이식편의 생착일수를 단축한다. 또한, 신생아기에 흉선을 절제한 동물은 피부거부반응을 나타내지 않는데, 반면, 신장거부반응에는 거부반응의 주체로 액성항체도 작용하며, 특히 수용자가 이미 공여자 림프구에 대한 항체를 갖고 있는 경우에는 사구체에 미소혈전을 만들어 초급성 거부반응을 일으키게 된다. 이식 후 7~21일 사이에는 급성거부반응이 일어나게 되며 이때는 세포성 면역과 체액성 항체의 양자가 모두 관여한다. 또한, 이식 후 수 개월에서 수 년 후에는 만성거부반응이 일어나는데 이는 사구체 기저막에서의 면역글로불린과 C3의 침착에 의해 일어나는 것으로 알려져 있다.

한편, 본 발명자들은 이러한 면역거부반응을 치료할 수 있는 새로운 치료제를 찾기 위해 IL-27이 면역거부반응에 의한 질환을 치료할 수 있는 효과가 있는지를 조사하였는데, 본 발명의 일실시예에 따르면, BALB/c (H-2k/d) 마우스를 수용자로 하고, C57BL/6(H-2kb) 마우스를 공여자로 하여 이식편대숙주질환(Graft-versus-Host Disease; GvHD) 동물모델을 제작하였으며, 골수이식 당일 날 수용자 마우스에 골수박멸형 전처치로 전신방사선(Total body irradiation; TBI)을 조사 한 다음, 공여자 마우스에서 분리 한 골수 세포와 비장세포를 꼬리 정맥에 주사하여 골수이식을 수행하였다. 이식 후 52일 째에 IL-27Fc DNA가 삽입된 재조합 벡터를 근육 내로 주입하고, 이식편대숙주질환의 진행 정도를 관찰하여 임상 평가를 실시한 결과, IL-27Fc DNA가 도입된 수용자 마우스는 대조군에 비해 임상평가 점수가 낮은 것으로 나타났다(도 1 참조).

따라서 본 발명의 IL-27을 골수 이식 동물에게 적용하는 경우, 이식된 골수가 생착된 후 숙주에 대한 면역 거부 반응이 억제됨으로써, 면역 거부 반응과 관련된 질환을 감소시킬 수 있으며, 상기와 같은 효과를 갖는 본 발명의 IL-27은 면역거부질환의 예방 또는 치료에서 유용하게 사용될 수 있다.

참고로 상기 “생착”이란 임플란트 되거나 이식된 세포 또는 조직이 일정 시간이 경과한 후에도 목표 장기(골수, 손상된 장기, 말초 림프절, 종양조직 등)에 머무르면서 치료용 세포 또는 조직의 수가 지속되거나 증식되는 현상을 의미한다.

상기와 같은 효과를 갖는 본 발명의 IL-27, 바람직하게는 IL-27 단백질 또는 상기 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 발현벡터를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 면역거부질환을 예방 또는 치료하는데 효과가 있다.

또한, 본 발명의 조성물로 치료할 수 있는 면역 거부 질환으로는 초급성 거부반응(hyperacute rejection), 급성 거부반응(acute rejection), 만성 거부반응(chronic rejection)을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 이식편대숙주질환일 수 있다.

본 발명에서 IL-27 단백질은 IL-27의 아미노산 서열을 갖는 단백질로서, 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하되, 이에 한정되지 않고 상기의 아미노산 서열과 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열로 표시되는 단백질을 포함할 수 있다.

본 발명의 IL-27 단백질은 포스포릴화, 글리코실화, 단백 분해 절단 등을 포함한 해독 후 변형을 포함하는 개념이다.

또한, 본 발명의 IL-27 단백질은 포유류의 조직으로부터 직접 분리하여 제조하거나, 화학적으로 합성하거나, 유전자 재조합 기술을 이용하여 얻을 수도 있다. 세포 또는 조직에 함유된 IL-27 단백질의 분리 및 정제는 많은 공지 방법에 의해 실시할 수 있다. 이들 방법의 예로는 염 침전 및 용매 침전과 같은 용해성을 이용한 방법, 투석, 한외여과, 겔여과 및 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동과 같은 분자량의 차이를 이용하는 방법, 이온 교환 컬럼 크로마토그래피와 같은 전하의 차이를 이용하는 방법, 역상 고성능 액체 크로마토그래피와 같은 친수성의 차이를 이용하는 방법, 등전점 포커싱 전기영동과 같은 등전점의 차이를 이용하는 방법 등을 예시할 수 있다.

또한 IL-27 단백질은 화학적으로 합성할 수 있으며, 화학적으로 합성하여 제조하는 경우, 당 분야에 널리 공지된 단백질 합성법, 즉, 폴리펩타이드 합성법을 이용하여 얻을 수 있다. 펩타이드(petide)는 통상의 단계적인 액체 또는 고체상 합성, 단편 응축, F-MOC 또는 T-BOC 화학법을 이용하여 제조할 수 있다. 특히, 바람직한 폴리펩타이드의 제조방법은 고체상 합성방법(solid phase syntheses)을 이용하는 것이다. IL-27은 보호된 아미노산간의 응축반응(condensation reaction)에 의하여 통상의 고체상 방법으로, C-말단으로부터 시작하여 그 서열에 따라 순차적으로 진행하면서 합성할 수 있다. 응축 반응 후 보호기 및 C-말단 아미노산이 연결된 담체를 산분해(acid decomposition) 또는 아미놀리시스(aminolysis)와 같은 공지의 방법에 의해 제거할 수 있다. 상기 언급된 펩타이드 합성법은 관련 서적에 상세히 기술되어 있다(Gross and Meienhofer's, The Peptides, vol 2., Academic Press (1980)).

또한 IL-27 단백질은 유전자 재조합 기술을 이용하여 얻을 수도 있다. 유전자 재조합 기술을 이용할 경우, IL-27 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 벡터를 숙주세포로 형질전환하여 IL-27 단백질이 발현되도록 숙주세포를 배양한 뒤, 숙주세포로부터 IL-27 단백질을 회수하는 과정으로 수득할 수 있다. 단백질은 선택된 숙주 세포에서 발현시킨 후, 분리 및 정제를 위해 통상적인 생화학 분리 기술, 예를 들어 단백질 침전제에 의한 처리(염석법), 원심분리, 초음파파쇄, 한외여과, 투석법, 분자체 크로마토그래피(겔여과), 흡착크로마토그래피, 이온교환 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피 등의 각종 크로마토그래피 등을 이용할 수 있으며, 통상적으로 순도가 높은 단백질을 분리하기 위하여 이들을 조합하여 이용한다.

따라서 본 발명은 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 IL-27 (Interleukin-27)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 상기 IL-27을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 자연에서 분리하거나 인위적으로 합성 변형한 것일 수 있는데, IL-27 단백질을 암호화하는 염기서열은 하나 이상의 핵산 염기가 치환, 결실 또는 삽입에 의해 변형될 수 있으며, 이러한 변형에 의해 발현된 단백질은 이의 생물학적 작용성에 유의한 변화를 포함하지 않아야 한다. 상기한 변형은 이종의 상동성 유전자로의 변형을 포함한다.

바람직하게 본 발명의 IL-27 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2의 염기서열을 갖는 것일 수 있다.

또한, IL-27 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현벡터로는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 당업계에 공지된 플라스미드, 파지, 코스미드, 바이러스벡터 또는 기타 매개체를 의미한다. 벡터는 자가 복제하거나 숙주 DNA에 통합될 수 있다.

IL-27 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 프로모터/인핸서 서열과 같은 발현 조절 서열 및 기타 전사, 해독 또는 프로세싱에 필요한 서열들과 함께 결합될 수 있다. 조절 서열은 뉴클레오타이드의 구성적 발현(constitutive expression)을 지시하는 것뿐만이 아니라 조직-특이적 조절 및/또는 유도성 서열을 포함한다. 발현 벡터의 설계는 트랜스펙션시킬 숙주 세포, 목적하는 발현 수준 등과 같은 요소에 의해 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 상기 발현벡터는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 세포에 도입할 수 있다. 예를 들어 이에 한정되지는 않으나, 일시적 형질감염(transient transfection), 미세주사, 형질도입(transduction), 세포융합, 칼슘 포스페이트 침전법, 리포좀 매개된 형질감염(liposome-mediated transfection), DEAE 덱스트란-매개된 형질감염(DEAE Dextran- mediated transfection), 폴리브렌-매개된 형질감염(polybrene-mediated transfection), 전기침공법(electropora tion), 유전자 총(gene gun) 및 세포 내로 핵산을 유입시키기 위한 다른 공지의 방법에 의해 세포 내로 도입할 수 있다(Wu et al., J. Bio. Chem., 267:963-967, 1992; Wu and Wu, J. Bio. Chem., 263:14621-14624, 1988).

또한, 본 발명에 있어서 IL-27 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 유효성분으로 포함한다는 의미는, IL-27 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 자체를 유효성분으로 포함하는 것과, IL-27 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터를 유효성분으로 포함한다는 것을 의미한다.

한편 본 발명에서 제공하는 IL-27을 유효성분으로 포함하는 면역거부질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 유효성분인 IL-27 단백질 또는 IL-27 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 이외에 당업계의 공지된 담체 및 희석제와 함께 적절한 제형으로 투여될 수 있으며, 목적하는 방법에 따라 비경구 투여, 예를 들면, 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 복강 내 주사, 피하주사, 좌제 등의 제형을 가질 수 있다. 본 발명의 치료제가 경구로 투여될 때, 치료제는 정제, 캡슐, 입자, 분말, 환제, 트로키, 내액제, 현탁제, 유화제, 또는 시럽 등의 제형으로 투여될 수 있다.

상기 제형들은 약학적 조성물에 통상적으로 사용되는 적당한 부형제, 충전물, 결합제, 습윤제, 분해제, 윤활제, 계면활성제, 분산제, 완충액, 방부제, 용해보조제, 소독제, 감미료, 향신료, 진통제, 안정화제, 등장액제 등을 이용한 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.

상기 기술된 각각의 제형은 약학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제를 포함할 수 있다. “약학적으로 허용되는”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체 또는 첨가제의 구체적인 예로는 물, 약학적으로 허용되는 유기용매, 콜라겐, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리딘, 카복시비닐 중합체, 알긴산 나트륨, 수용성 덱스트란, 카복시메틸 나트륨 녹말, 펙틴, 잔탄 고무, 아라비아 고무, 카제인, 겔라틴, 한천, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸글리콜, 바셀린, 파라핀, 스테아릴 알코올, 스테아린산, 인간 혈청 알부민, 만니톨, 소비톨 및 젖산 등이 있다. 한 개 또는 그 이상의 첨가제가 조제 형태에 따라 선택되거나 또는 적절히 조합될 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

더 나아가, 유전자요법 치료제 투여방법으로는, 정맥내, 동맥내 투여와 같은 통상적인 전신투여 이외에 표적세포로의 국소적 투여가 행해질 수 있으며, 카테터 기술 및 외과적 수술과 조합된 투여 방법이 사용될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 질환의 치료를 위하여 치료학적으로 유효한 양의 IL-27 단백질 또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

상기 “치료학적으로 유효한 양(therapeutically effective amount)”이란 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 따라서 최적의 함량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 포함하는 것이 중요하다.

본 발명은 또한 면역 거부 반응 관련 질환의 예방 또는 치료용 의약의 제조를 위한 상기 IL-27 단백질 또는 이를 암호화하는 핵산을 유효성분으로 포함하는 조성물의 용도를 제공한다. 상기한 IL-27 단백질 또는 이를 암호화하는 핵산을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 면역 거부 반응 관련 질환의 예방 또는 치료용 의약의 제조를 위한 용도로 이용될 수 있다.

또한 본 발명은 포유동물에게 치료상 유효량의 본 발명의 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 면역 거부 반응 관련 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

이때, 상기 “포유동물”은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.

또한, 상기 “치료상 유효량”은 상기 치료학적으로 유효한 양과 동일한 개념이다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

IL -27의 이식편대숙주질환 동물모델에 대한 효과 분석

본 발명자들은 이식편대숙주질환과 같이 면역거부반응에 의한 질환에 있어서 IL-27이 이러한 질환들을 치료할 수 있는 효과가 있는지를 확인하기 위해, 이식편대숙주질환 동물모델에서 IL-27에 의한 임상 점수를 측정하였다. 이를 위해 우선 이식편대숙주질환(Graft-versus-Host Disease; GvHD) 모델을 제작하였는데, 수용자(recipient)로써 BALB/c (H-2k/d) 마우스를 사용하고, 공여자로써 C57BL/6(H-2kb) 마우스를 사용하여, 골수이식 당일 날 수용체 마우스에 골수박멸형 전처치로 전신방사선조사(Total body irradiation; TBI)을 800cGy 조사 하고, 공여체 마우스 C57BL/6 (H-2k/b)에서 분리 한 골수 세포(5X10⁶)와 비장세포(5X10⁶)를 꼬리 정맥에 주사하여 골수이식을 수행하였다.

이식 후 52일 째에, 전기영동(Electrophoresis) 방법을 이용하여 IL-27Fc pcDNA3 벡터를 근육 내(intra-muscle; i.m)로 주입하였으며, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 임상 이식편대숙주질환 수치(clinical GVDH score)는 이식편대숙주질환의 진행 정도를 매일 마우스를 관찰하여 체중변화, 마우스의 자세, 털의 상태, 활동 정도, 발이나 꼬리 부위의 피부 상태와 같은 매개변수에 대한 각각의 점수를 매기는 임상점수체계를 사용하여 평가하였다.

Grade	Weight loss	Posture	Activity	Fur texture	Skin integrity
0	<10%	Normal	Normal	Normal	Normal
1	>10% to <25%	Mild hunching	Mildly decreased	Mild ruffling	Scaling of paw/tail
2	>25%	Severe hunching	Stationary unless stimulated	Severe ruffling	Obvious areas of denuded skin
Clinical GvHD was assessed once per week in the recipient mice treated with intra-bone marrow(IBM)-bone marrow transplantation(BMT) + IBM-donor lymphocyte infusion(DLI) or IBM-BMT + i.v.-DLI. Five clinical parameters were used to evaluate clinical GvHD: weight loss, posture, activity, fur texture, and skin integrity. Individual mouse received a score of 0-2 for each criterion listed in this table.

임상 평가 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 시간이 경과 할수록 IL-27Fc pcDNA3 벡터를 주입받은 마우스는 대조군인 이식편대숙주질환 모델에 비해 임상 평가 점수가 낮아지는 것을 관찰할 수 있었다.

따라서 상기 결과를 통해 본 발명자들은 IL-27이 이식편대숙주질환의 증상을 조절하는 효과가 있다는 것을 알 수 있었으며, 이러한 활성을 통해 면역거부 질환을 예방 또는 치료할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예를 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예는 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

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6. IL-27(Interleukin-27) P28 부위의 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드와 인간 항체의 FC에 대한 폴리뉴클레오티드가 연결된 융합폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 pcDNA3벡터를 유효성분으로 포함하는 이식편대숙주질환(graft-versus-host disease)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

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