KR101346247B1

KR101346247B1 - 톨라신 분해능을 가지는 슈도모나스 속 미생물 ｈｃ１

Info

Publication number: KR101346247B1
Application number: KR1020110146388A
Authority: KR
Inventors: 이찬중; 전창성; 정종천; 오진아
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2011-12-29
Filing date: 2011-12-29
Publication date: 2014-02-06
Also published as: KR20130077591A

Abstract

본 발명은 버섯 세균성 갈반병을 일으키는 슈도모나스 톨라시 균이 분비하는 독소인 톨라신을 분해하는 효과가 있는 미생물에 관한 발명으로서 서열번호 1의 염기서열을 포함하며, KACC91693P인 미생물에 관한 발명이다. 본 발명에 따른 미생물은 톨라신을 분해하는 효과가 우수하므로, 본 발명에 따른 미생물을 처리하여 버섯 세균성 갈반병을 방제할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 미생물을 사용하여 버섯 세균성 갈반병을 방제하게 되면 화학 농약을 사용하여 버섯 세균성 갈반병을 치료하는 경우에 비해 보다 친환경적이며, 인체에 무해한 버섯을 생산하게 된다.

Description

톨라신 분해능을 가지는 슈도모나스 속 미생물 ＨＣ１{Pseudomonas genus Microorganism HC1 detoxyfing tolaasin}

본 발명은 버섯 세균성 갈반병을 일으키는 원인균으로서 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)가 분비하는 독소인 톨라신(tolaasin)을 분해하는 미생물에 관한 것이다.

버섯 세균성 갈반병은 버섯의 갓이 우선적으로 갈색으로 변하기 시작하여 버섯의 생장이 멈추거나, 갓을 시작으로 갈색으로 변한 버섯이 전체적으로 갈색으로 변하면서 부패하여 심한 비린내를 내면서 폐기되는 병을 말한다.

이러한 버섯 세균성 갈반병은 과습 상태가 오래 유지되거나, 재배 환경 내의 공기 순환이 원활하게 진행되지 않는 경우이거나, 저기압 상태에서 가습을 하는 경우이거나, 건조와 가습이 반복되는 경우 등 재배 환경에 의해 발생되기도 한다. 하지만 이러한 버섯 세균성 갈반병은 주로 이러한 환경 아래에서 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)라는 병원균의 감염에 의해 유발되는 것이 일반적이다. 특히 슈도모나스 톨라시는 톨라신이라는 독소를 분비하여 버섯 세균성 갈반병을 일으키게 된다.

그리하여 버섯 세균성 갈반병을 막기 위해서는 화학 농약을 사용하여 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii) 균의 활성을 억제하거나, 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)를 사멸하거나, 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)가 톨라신(tolaasin)을 분비하지 못하도록 처리하는 것이 일반적이었다. 하지만 이렇게 화학 농약을 사용할 경우 인체에 유해한 농약 잔유물이 버섯에 남게 되어 인체에 치명적이며, 친환경적이지 못하다는 문제가 있었다. 그리하여 이러한 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)에 대한 항균 활성이 존재하는 미생물을 발견하여 버섯 세균성 갈반병의 치료에 사용한다면 상기 화학 농약으로 발생하는 문제들을 막을 수 있을 것으로 예상된다. 하지만 버섯 세균성 갈반병을 막기 위해 이러한 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)에 대한 항균 활성이 있는 미생물을 발견하기 위한 노력이 미흡한 것이 현실이다. 특히 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii)가 분비하는 톨라신(tolaasin)을 분해하는 미생물에 대한 연구는 전무한 실정이다.

상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 본 발명의 목적은 버섯 세균성 갈반병을 일으키는 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii) 균이 분비하는 톨라신이라는 독소를 분해하는 미생물을 발견하고, 이러한 미생물을 통해 버섯 세균성 갈반병을 치료하는 기술을 제공하고자 한다. 그리하여 본 발명에 따른 미생물을 통한 버섯 세균성 갈반병의 치료를 통해 화학 농약을 사용한 경우에 비해 보다 친환경적이며 인체에 무해한 버섯을 생산하는 기술을 제공하고자 한다.

위와 같은 과제를 해결하기 위한 본 발명의 한 특징에 따른 톨라신을 분해하는 미생물은 서열번호 1의 염기서열을 포함하며, 그 기탁번호가 KACC91693P이다. 또한 상기 미생물은 그 배양 온도가 15℃~40℃에서 배양되어 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 그 pH가 4.0 내지 11.0에서 배양되어 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 이노시톨, 글리세롤, 덱스트로스, 덱스트린, Na-CMC, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올 및 솔리신으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 탄소원으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 펩톤, 소이톤, 카사미노 산, 트립톤, 효모 추출물 및 맥아 추출물로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 유기 질소원으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 NH₄Cl, (COONH₄)₂, NH₄H₂PO₄, (NH₄)₂HPO₄, NH₄NO₃, 및 (NH₄)₂SO₄ 로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 무기 질소원으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 히스티딘 및 시스테인으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 아미노산으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO₄, FeSO₄, AgNO₃, Na₂MoO₄, KH₂PO₄, FeCl₃, CoCl₂, Li₂SO₄ 및 MnSO₄로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 물질을 배양하여 수득되는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물은 그 배양 온도를 15℃~40℃에서 배양하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물의 배양방법은 그 배양시 펩톤, 소이톤, 카사미노 산, 트립톤, 효모 추출물 및 맥아 추출물로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 유기 질소원으로 배양하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 특징에 따른 상기 미생물의 배양방법은 서열번호 1의 염기서열을 포함하며, 그 기탁번호가 KACC91693P인 미생물의 배양방법으로서 그 배양 온도를 15℃~40℃에서 배양하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물의 배양방법은 그 배양 pH를 4 내지 11에서 배양하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물의 배양방법은 그 배양시 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 이노시톨, 글리세롤, 덱스트로스, 덱스트린, Na-CMC, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올 및 솔리신으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 탄소원으로 배양하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물의 배양방법은 NH₄Cl, (COONH₄)₂, NH₄H₂PO₄, (NH₄)₂HPO₄, NH₄NO₃, 및 (NH₄)₂SO₄ 로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 무기 질소원으로 배양하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물의 배양방법은 그 배양시 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 히스티딘 및 시스테인으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 아미노산으로 배양하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 미생물의 배양방법은 그 배양시 그 배양시 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO₄, FeSO₄, AgNO₃, Na₂MoO₄, KH₂PO₄, FeCl₃, CoCl₂, Li₂SO₄ 및 MnSO₄로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 물질을 배양하는 것을 특징으로 한다.

또한 본 발명의 또 다른 특징에 따른 약품은 상기 서열번호 1의 염기서열을 포함하며, 그 기탁번호가 KACC91693P인 미생물을 포함하는 약품이다.

또한 본 발명의 또 다른 특징에 따른 세균성 갈반병을 치료하는 방법은 상기 서열번호 1의 염기서열을 포함하며, 그 기탁번호가 KACC91693P인 미생물을 사용하여 이루어진다.

본 발명에 따른 미생물을 사용하여 버섯 세균성 갈반병을 치유하게 되면 화학 농약을 사용하는 경우에 비해 친환경적이며, 인체에 무해한 버섯을 생산할 수 있게 된다. 그리하여 소비자들의 버섯 소비 증가에 기여하게 되며, 버섯 농가의 소득을 향상 시킬 수 있게 된다.

도 1은 본 발명에 따른 미생물에 의해 톨라신이 분해되어 나타나는 결과를 보여주는 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 미생물의 배양시 최적 온도 및 최적 pH의 조건을 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 미생물의 배양시 최적 탄소원의 조건을 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 미생물의 배양시 최적 유기 질소원의 조건을 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 미생물의 배양시 최적 무기 질소원의 조건을 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명에 따른 미생물의 배양시 최적 아미노산의 조건을 나타내는 그래프이다.
도 7은 본 발명에 따른 미생물의 배양시 최적 무기물의 조건을 나타내는 그래프이다.
도 8은 본 발명에 따른 미생물이 느타리버섯에서의 톨라신 분해 활성이 있음을 나타내는 사진이다.
도 9는 본 발명에 따른 미생물이 양송이버섯에서의 톨라신 분해 활성이 있음을 나타내는 사진이다.
도 10은 본 발명에 따른 미생물이 팽이버섯에서의 톨라신 분해 활성이 있음을 나타내는 사진이다.
도 11은 본 발명에 따른 미생물의 유전적 계통을 분석한 것이다.

이에 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점으로 지적된 버섯 세균성 갈반병을 극복하기 위한 미생물의 분리 동정 및 개발을 위해 예의 연구 노력한 결과, 상기 버섯 세균성 갈반병을 일으키는 슈도모나스 톨라시가 분비하는 독소인 톨라신을 분해하는 미생물을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

구체적으로는 본 발명에 따른 버섯 세균성 갈반병을 일으키는 슈도모나스 톨라시 균이 분비하는 독소인 톨라신을 분해하는 미생물은 기탁번호가 KACC91693P인 미생물로서, 서열번호 1의 염기서열을 포함한다. 그리하여 본 발명에 따른 KACC91693P의 미생물은 버섯 세균성 갈반병을 치유하는 효과가 탁월하다.

또한 본 발명의 또 다른 특징에 따른 상기 미생물의 배양 방법으로서 배양 온도는 15℃ 내지 40℃로 배양하는 것이 바람직하다. 또한 배양시 pH 는 4 내지 11의 범위에서 배양하는 것이 바람직하다. 또한 탄소원은 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 이노시톨, 글리세롤, 덱스트로스, 덱스트린, Na-CMC, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올 및 솔리신으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상을 사용하여 배양하는 것이 바람직하며, 이중 덱스트린을 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한 유기 질소원으로는 펩톤, 소이톤, 카사미노 산, 트립톤, 효모 추출물 및 맥아 추출물로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상을 사용하여 배양하는 것이 바람직하며, 이중 효모 추출물을 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한 무기 질소원으로는 NH4Cl, (COONH4)2, NH4H2PO4, (NH4)2HPO4, NH4NO3, 및 (NH4)2SO4 로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상을 사용하여 배양하는 것이 바람직하며, 이중 (NH4)2HPO4을 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한 아미노산은 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 히스티딘 및 시스테인으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상을 사용하여 배양하는 것이 바람직하며, 이중 아르기닌을 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한 무기물은 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO4, FeSO₄, AgNO3, Na2MoO₄, KH2PO4, FeCl₃, CoCl2, Li2SO4 및 MnSO4으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상을 사용하여 배양하는 것이 바람직하며, 이중 FeCl3을 사용하는 것이 가장 바람직하다.

이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예

< 실시예 1: 슈도모나스 톨라시 ( Pseudomonas tolaasii ) 균의 분리 동정>

전국의 버섯재배 농가에서 버섯 세균성 갈반병의 증상을 보이는 자실체를 수득하였으며, 이러한 자실체의 이병부위를 1cm 크기로 절단하여 멸균수 1ml의 EP 튜브에 넣어 마쇄하였다. 그 후 단계적 희석을 통하여 상등액 100㎕를 한천배지(nutrient agar)에 도말하였으며, 25℃의 배양기에서 배양하였고, 이렇게 배양 후 단일 콜로니를 순수분리 하였다. 그리고 순수 분리한 균주를 슈도모나스 한천 F(Pseudomonas agar F)배지에서 슈도모나스 리액턴스(Pseudomonas reactanse)와 대치 배양하였다. 그리하여 백색침강선 형성유무를 확인하였고, 유전자분석, 생리?생화학적인 실험을 통하여 17 균주의 슈도모나스 톨라시(Pseudomonas tolaasii) 균주를 동정하였다. 버섯에서 분리된 P. tolaasii 균의 병원성 유무를 조사하기 위하여 멸균수에 병원균을 1.5 ×108cfu/ml이 되도록 희석하여 접종원으로 사용하였다. 느타리버섯과 양송이버섯의 갓 표면에 병원균 50㎕를 접종하여 25℃, 95%의 항온기에 넣어 2일 후 병원성 유무를 확인하였다. 병원성은 균주에 따라 약간의 차이는 있었지만 버섯 균주와 자실체에 전형적인 갈반과 무름 증상의 강한 병원성을 보였다.

< 실시예 2: 톨라신 분해 균주의 선발 및 톨라신 분해 활성 측정을 통한 HC1 선발>

재배중인 느타리버섯의 폐면배지와 양송이버섯 퇴비를 농가별 3점씩 채취하였다. 채취된 느타리버섯의 폐면배지와 양송이버섯 퇴비를 R2A배지에 단계별로 희석하여 미생물을 분리 배양하였다. 그리고, 50~60개의 콜로니(colony)를 형성한 플레이트(plate)로부터 독립적으로 분리하였다. 순수 분리한 미생물은 R2A배지에서 2일 동안 배양한 후 균체를 모아서 20%(v/v) 글리세롤 용액에 넣어 ?70℃에 보존하면서 검정용 시료로 사용하였다.

슈도모나스 톨라시가 분비하는 독소인 톨라신에 대한 분해활성은 톨라신과 상기 순수 분리한 미생물을 일정한 비율로 혼합한 액을 감자 조각에 처리하여 갈변 정도에 따라 분해 활성을 평가하였다. 그리하여 분해 활성이 강한 HC1, HC2, HC4 총 3종의 미생물을 분리해 냈다. 도 1은 이러한 갈변 정도를 나타낸 사진이다. 이러한 도 1에 따르면 HC1을 처리한 경우 갈변 정도가 가장 약하게 나타나며, 이에 HC1이 나머지 균주보다 톨라신을 분해하는 효과가 가장 우수함을 확인할 수 있었다.

이와 같이 본 발명에 따른 미생물인 HC1는 버섯 세균성 갈반병에서 분비하는 독소인 톨라신을 분해하는 효과가 있음을 확인 하였다. 그리하여 본 발명에 따른 미생물인 HC1는 국립농업유전자원센터에 기탁하였으며, 그 기탁번호는 KACC91693P인 미생물로서 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 미생물이다.

< 실시예 3: HC1 의 최적 배양 조건>

선발미생물 HC1의 온도, pH, 탄소원, 유기 질소원, 무기 질소원, 아미노산, 무기물을 통해 배양하는 생육최적조건을 조사한 결과 온도는 15℃에서부터 급격히 활성이 증가하기 시작하여 40℃까지 활성이 유지되었으며 그 이상에서는 다시 급격히 활성이 낮아졌다. 또한 이러한 온도 범위 안에서도 20℃에서 최적의 활성을 보이는 것으로 확인되었다. 그리고 pH는 4에서부터 급격히 활성이 증가하기 시작하여 11까지 그 활성이 유지되었으며, 5에서 가장 생육이 좋았다. 그리하여 상기 온도와 pH 범위에서 병원균인 슈도모나스 톨라시에 대해 강한 억제력을 나타내었다. 탄소원의 종류는 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 솔루블 스타크, 이노시톨, 글리세롤, 자일로스, 덱스트로스, 락토오스, 덱스트린, Na-CMC, 아도니톨, 만니톨, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올, 솔리신을 대상으로 하였으며, 이중 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 이노시톨, 글리세롤, 덱스트로스, 덱스트린, Na-CMC, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올 및 솔리신에서 활성이 있는 것으로 확인 되었고, 이중 최적의 탄소원은 덱스트린(Dextrine)으로서 0.9%의 농도에서 HC1의 배양시 활성이 가장 우수하였다. 또한 유기질소원의 종류는 펩톤, 소이톤, 우레아, 카사미노 산, 트립톤, 효모추출물, 맥아 추출물을 그 대상으로 하였으며, 이중 펩톤, 소이톤, 카사미노 산, 트립톤, 효모 추출물 및 맥아 추출물에서 활성이 확인되었고, 이중 최적의 유기 질소원은 효모 추출물(Yeast extract)로서1.5%의 농도에서 HC1의 배양시 활성이 가장 우수하였다. 또한 무기질소원의 종류는 NH₄Cl, (COONH₄)₂, NH₄H₂PO₄, (NH4)₂HPO₄, NH₄NO₃, NaNO₃, (NH₄)₂SO₄를 그 대상으로 하였으며, 이중 NH₄Cl, (COONH₄)₂, NH4H2PO4, (NH₄)₂HPO₄, NH₄NO₃, 및 (NH₄)₂SO₄ 에서 활성이 확인되었고, 이중 최적의 무기 질소원은 (NH₄)₂HPO₄로서 0.5%의 농도에서 HC1의 배양시 활성이 가장 우수하였다. 또한 아미노산의 종류는 아스파라긴, 메사이오닌, 프롤린, 류신, 글루타민, 발린, 아스팔틱 산, 글루타믹 산, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 트레오닌을 그 대상으로 하였으며, 이중 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 히스티딘 및 시스테인에서 활성이 확인되었고, 이중 최적의 아미노산은 아르기닌(arginine)으로서 0.5%의 농도에서 HC1의 배양시 활성이 가장 우수하였다. 또한 무기물의 종류는 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO₄, FeSO₄, AgNO₃, Na₂MoO₄, KH₂PO₄, FeCl₃, CoCl₂, Li₂SO₄, MnSO₄를 그 대상으로 하였으며, 이중 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO₄, FeSO₄, AgNO₃, Na2MoO₄, KH₂PO₄, FeCl₃, CoCl₂, Li₂SO₄ 및 MnSO₄에서 활성이 확인되었고, 이중 최적의 무기물은 FeCl₃로서, 4mM에서 HC1의 배양시 활성이 가장 우수하였다. 아래 표 1는 상기 최적 배양 결과를 나타내는 것이다.

또한 도 2는 HC1의 최적 배양을 위한 온도와 pH에 관한 실험 결과를 나타낸 그래프이다. 또한 도 3은 탄소원의 최적 배양 조건을 나타낸 그래프이며, 또한 도 4은 유기 질소원의 최적 배양 조건을 나타낸 그래프이며, 도 5은 무기 질소원의 최적 배양 조건을 나타낸 그래프이며, 도 6는 아미노산의 최적 배양 조건을 나타낸 그래프이며, 도 7은 무기물의 최적 배양 조건을 나타낸 그래프이다.

실험예

< 실험예 1: HC1 분리 균주의 버섯 세균성 갈반병 방제 활성 측정>

상기 실시예에 따른 미생물 HC1이 톨라신을 분해하여 버섯 세균성 갈반병을 방제하는 효과가 존재하는가에 대해 측정하는 실험을 진행하였다. 느타리버섯에 상기 실시예 1에 의해 수득된 슈도모나스 톨라시 균을 접종한 후에 HC1를 처리한 결과 무처리구에서는 93.8%의 이병율을 보였지만 HC1처리에서는 42.3%의 이병율을 보였고, 그 방제 효과는 55%로 나타났다. 양송이버섯에서는 무처리구에서 56.3%의 이병율을 보였지만HC1처리에서는 16.8%의 이병율을 보였고, 그 방제 효과는 70%로 나타났다. 그리고 팽이버섯에서는 무처리구에서 89.8%의 이병율을 보였지만 HC1처리에서는 29.3%의 이병율을 보였고, 그 방제 효과는 68%로 나타났다. 이상의 결과로 보아 HC1균주는 세균성 갈반병을 일으키는 거의 모든 버섯에 높은 방제 효과가 있는 것으로 판단된다. 그리하여 HC1은 톨라신을 분해함으로써 버섯 세균성 갈반병에 대한 방제 효과가 있는 것을 확인하였다. 이의 결과는 아래의 표 2에 나타냈다. 또한 도 8는 느타리버섯에서의 상기 분해 활성에 대한 실험 결과를 나타낸 사진이며, 도 9은 양송이버섯에서의 상기 분해 활성에 대한 실험 결과를 나타낸 사진이며, 도 10는 팽이버섯에서의 상기 분해 활성에 대한 실험 결과를 나타낸 사진이다.

< 실험예 2: HC1 의 생리적 특성을 파악하기 위한 실험>

HC1의 생리적 특성을 파악하기 위한 실험을 진행하였으며, 아래 표 3과 같은 결과를 얻었다.

< 실험예 3: HC1 의 유전관계를 파악하기 위한 실험>

HC1이 어떤 속, 어떤 종에 속하는 미생물인지에 대한 실험을 진행하였다. 그리하여 도 11과 같은 결과를 얻었다. 즉, 본 발명에 따른 HC1은 슈도모나스 속에 속하는 미생물이기는 하나, 슈도모나스 속에 속하는 미생물 중 기존에 존재하는 미생물과는 다른 새로운 종에 속하는 미생물임이 확인되었다.

상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고, 이 또한 첨부된 특허 청구 범위에 속하는 것은 당연하다.

농업생명공학연구원

KACC91693P

20111219

서열목록 전자파일 첨부

Claims

서열번호 1의 염기서열을 포함하며 기탁번호 KACC91693P인 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1(Pseudomonas sp. HC1).
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 그 배양 온도가 15℃~40℃에서 배양되어 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 pH가 4.0 내지 11.0에서 배양되어 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 이노시톨, 글리세롤, 덱스트로스, 덱스트린, Na-CMC, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올 및 솔리신으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 탄소원으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 펩톤, 소이톤, 카사미노 산, 트립톤, 효모 추출물 및 맥아 추출물로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 유기 질소원으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 NH₄Cl, (COONH₄)₂, NH₄H₂PO₄, (NH₄)₂HPO₄, NH₄NO₃, 및 (NH₄)₂SO₄ 로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 무기 질소원으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 히스티딘 및 시스테인으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 아미노산으로 배양하여 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 있어서, 상기 슈도모나스 HC1은 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO₄, FeSO₄, AgNO₃, Na₂MoO₄, KH₂PO₄, FeCl₃, CoCl₂, Li₂SO₄ 및 MnSO₄로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 물질을 배양하여 수득되는 것을 특징으로 하는 톨라신을 분해하는 슈도모나스 HC1.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양 온도를 15℃~40℃에서 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양 pH를 4 내지 11에서 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양시 프록토스, 갈락토오스, 사카로스, 이노시톨, 글리세롤, 덱스트로스, 덱스트린, Na-CMC, 만노스, 말토오스, 라피노스, 셀로비스, 에탄올 및 솔리신으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 탄소원으로 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양시 펩톤, 소이톤, 카사미노 산, 트립톤, 효모 추출물 및 맥아 추출물로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 유기 질소원으로 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양시 NH₄Cl, (COONH4)₂, NH₄H₂PO₄, (NH₄)₂HPO₄, NH₄NO₃, 및 (NH4)₂SO₄로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 무기 질소원으로 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양시 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 히스티딘 및 시스테인으로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 아미노산으로 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항에 따른 슈도모나스 HC1은 그 배양시 KCl, BaCl₂, CaCl₂, MgSO₄, ZnSO₄, FeSO₄, AgNO₃, Na₂MoO₄, KH₂PO₄, FeCl₃, CoCl2, Li2SO₄ 및 MnSO₄로 이루어지는 군 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 물질을 배양하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 슈도모나스 HC1을 포함하는 버섯 세균성 갈반병을 방제 또는 치료하는 약품.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 슈도모나스 HC1을 사용하여 버섯 세균성 갈반병을 치료하는 방법.