KR101334264B1 - 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 염증 억제 및 아토피성 피부염 사이토카인 분비 조절 등에 작용하여 표피의 각질층 진정작용, 홍반 감소, 가려움증 소멸작용, 항균작용, 면역 억제 및 조절 작용, 염증 매개 물질 억제 등의 효과 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 거북 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical Composite Comprising Tortoise/Turtle For Improvement or Treatment of Skin Disease}

본 발명은 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 염증 억제 및 아토피성 피부염 사이토카인 분비 조절 등에 작용하여 표피의 각질층 진정작용, 홍반 감소, 가려움증 소멸작용, 항균작용, 면역 억제 및 조절 작용, 염증 매개 물질 억제 등의 효과가 있는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

염증은 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환장애와 삼출(渗出), 조직 증식의 세 가지를 병발하는 복잡한 병변을 일컫는다. 피부염 등과 같이 끝자가 염(炎)으로 되어 있는 것이 염증에 의한 질병이며 그 외에, 전염성 질환인 결핵, 매독, 이질 등 미생물의 감염으로 염증이 발생하기도 하지만 대부분 상처, 수술, 화상, 동상, 전기자극, 화학물질에 의하여 발생한다. 염증은 위 병변의 총칭으로, 대부분의 병이 이것에 속한다. 여러 가지 원인 중 세균에 의한 것이 가장 많다. 염증이 발생하면 조직이 빨갛게 되고, 부어 오르고, 열이 나며, 본래의 기능을 잃어 버리고 통증을 나타낸다. 아토피(atopy)는 1925년 코카(Coca)가 선천적으로 음식물과 흡입성 물질에 대한 알레르기 반응의 결과로 피부염이나 천식, 고초열이 나타나는 경향을 아토피라고 기술한 이후부터 쓰이게 된 피부질환으로서 아토피성 질환에는 아토피 피부염 이외에 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 등이 있다. 아토피는 알러지 반응을 수반하며 이 중 아토피 피부염은 만성 혹은 재발성 피부염으로, 피부 병변의 특징적인 모양 및 분포와 개인 혹은 가족의 아토피 병력을 가지는 즉, 아토피성 체질(유전적 소인)을 타고난 경우에 발생하는 매우 흔한 피부 질환이다. 대개 아토피 피부염은 영, 유아기 - 특히 생후 2개월 전후에 시작되는데 이 중 약 50%가 생후 2세 이전에 발생하고, 거의 5세 이전에 증상이 나타나는 반면 성인에서 처음 증상이 나타나는 예는 극히 드물다. 대부분 성장과 더불어 증상이 완화되거나 사라지며 유아기 발생 환자의 절반 이상이 2세 전에 호전된다.아토피 피부염은 심한 가려움을 동반한 홍반성 구진과 인설로 시작하여 심해지면 수포 및 장액성 삼출액과 가피를 보이는 급성 증상으로 진행한다. 가장 특징적인 증상인 소양증은 그 정도가 매우 심해서 피가 날 정도로 긁게 되며, 가려움-긁기-가려움의 악순환으로 계속 악화되며, 더 지속 되면 피부가 두꺼워지고 주름이 뚜렷해지는 태선화 현상이 나타난다. 대부분의 임상 양상은 긁거나 문지른 결과에 의해 발생하며, 밤에는 소양증이 더욱 심해져 수면장애를 일으킨다. 매년 아토피 환자들이 늘고 있으며, 최근에는 청소년과 성인에게도 발병이 증가하면서 아토피 피부염 관련 제품, 의약 및 용품의 시장규모가 매년 급팽창하고 있는 실정이다.

실제 장기적인 불황에 불구하고 아토피 피부염 관련 시장은 매년 30% 이상의 성장세를 보이고 있어 향후 아토피 피부염과 관련된 산업은 지속적으로 성장할 수 있다고 볼 수 있다. 상기의 아토피 피부질환은 정확한 병태생리는 아직까지 완전히 이해되고 있지 않으나 유전적 소인과 함께 면역학적, 비면역학적 기전이 관여하리라고 생각되고 있다. 아토피 피부염의 대부분을 차지하는 외인성 아토피 피부염은 면역 글로불린E(IgE)와 연관된 면역 기전에 의하여 발생되는데 특정 알레르겐에 대한 속발성 면역 반응보다는 T-세포 이상에 의한 원발성 면역반응이 관여한다는 보고들이 많다. 아토피 피부염 환자에서 세포 매개성 면역기능 장애가 면역 글로불린 E의 증가와 관련이 있음이 밝혀지면서 속발성 면역 반응 외에도 원발성 면역 반응이 아토피 피부염의 병인에 관여한다고 주장하는 보고들이 증가하고 있다(이기영, 최신알레르기 진료, 한국의학사, 서울, 2001, pp23~52).

아토피 피부염 환자에서 세포 매개성 면역 장애는 약 80%까지 발생하는 것으로 알려져 있으며, 바이러스 및 피부 사상균등에 의한 피부 감염증에 대하여 감수성이 증가 되고 접촉 알레르겐에 대한 감수성은 감소 되는 경향을 보인다. 과거에는 T-세포 성숙 결핍설, CD8+ 억제 T-세포의 수적 감소 등이 보고된 바 있으나 최근엔 CD4+ T-세포의 역할이 더욱 중요한 것으로 알려지고 있다. 즉, B 세포로부터 면역글로불린 E의 생성을 유도 또는 촉진하는 인터루킨(interleukin) 4, 5와 증폭시키는 인터루킨 6 등을 분비하는 T-세포는 CD4+ T-세포 중 Th2 세포인데 아토피 질환자들의 피부에서 Th1 세포에 비하여 Th2 세포가 높게 존재하는 것이 밝혀졌다.

이러한 사이토카인(cytokine)들은 비만세포, 대식세포, 호염구 등의 면역세포를 자극하여 히스타민(histamine), 루코트리엔(leukotrien), 프로스타글란딘(prostaglandin), 일산화질소(NO) 등의 분비를 촉진하게 되고 이들 염증 매개 물질이 피부의 염증반응을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 아토피 피부질환에서 나타나는 또 다른 특징은 피부 세포의 세포막을 형성하는 지질 중 감마 리놀렌산(γ-linolenic acid)의 결핍이 보고된 점이다. 감마 리놀렌산의 결핍은 필수 지방산의 생합성 경로에서 델타-6-디세추라아제(δ-6-desaturase)의 기능 결손에 의하여 리놀레산(linoleic acid)으로부터 감마 리놀렌산으로의 합성 장애로 인하여 일어나는 현상으로서, 이후 프로스타글란딘 등의 합성을 조절하지 못해 염증 매개 물질의 생성이 높아지게 된다. 또한, 감마 리놀렌산의 결핍으로 피부 지질막의 구조에 이상이 발생하여 과도한 수분 유출 등이 일어남으로써 피부 장벽이 허물어지는 결과를 초래하며 이때 세균 등의 2차 감염이 일어난다.

상기와 같이 현재까지 알려진 아토피 피부염의 병인, 기전, 증상 등을 감안하여 아토피 피부염에 대한 치료제가 개발되고 있으며, 그 결과 천연 또는 합성의 면역억제제, 항히스타민제제, 스테로이드 제제 등 다수가 개발되어 있다. 예를 들면, 면역 억제제로는 싸이클로스포린(Cyclosporin) A, FK506(타크로리무스, Tacrolimus; Wasik 등, Immunopharmacology 20:57-61, 1990)와 SDZ ASM981(피메크로리무스, Pimecrolimus; Grassberger 등, Br. J. Dermatology 141:264-273, 1999)이 각광받고 있다. 반면 기존의 아토피 피부염에 대한 치료제로 사용되는 스테로이드제제와 항히스타민제 등은 증상을 일시적으로 완화해주는 효과는 있으나 외용 또는 경구용 스테로이드 호르몬제의 장기 사용 환자들에 있어서 피부가 엷어지는 현상 및 골다공증의 유발, 어린이의 경우 성장 저해 등 그에 따른 국소 및 전신 부작용으로 인하여 임상적인 문제점이 있으며, 이러한 부작용이 없으며 효능이 우수한 치료제 개발이 절실히 요구되고 있다.

이에 본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 오랫동안 보익약으로 사용되고 있는 거북을 이용함으로써 신체에 대한 독성 우려가 없으며, 기존의 화학성분 치료제에서 발생하는 부작용을 최대한 줄일 수 있는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 장기간 치료를 해야 하는 아토피 피부염에 투여하더라도 병원균에 대한 내성, 면역력의 저하, 성장 저해의 우려가 없는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 각종 피부질환 중 특히 아토피 피부염의 원인균을 제거하는 데 우수한 효과를 가지는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 거북 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 거북 추출물은 거북을 95~100℃의 열수를 이용하여 추출되는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 거북 추출물은 알콜 또는 알콜 수용액을 이용하여 추출되는 것이되, 상기 알콜은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 중에서 어느 하나 이상이 선택되는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 거북 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 피부질환은 피부염, 아토피 피부염, 여드름, 무좀, 건선, 습진을 포함하는 것을 특징으로 한다.

이상과 같은 구성의 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 의하면 천연성분을 사용하여 피부에 대한 독성을 줄이고, 면역력을 향상시키는 효과가 있다.

또한, 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 의하면 염증 억제 및 아토피성 피부염 사이토카인 분비 조절 등에 작용하여 표피의 각질층 진정작용, 홍반 감소, 가려움증 소멸작용, 항균작용, 면역 억제 및 조절 작용, 염증 매개 물질 억제 등의 효과가 있다.

도 1은 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 Jurkat 세포에서 추출된 IL-4에 대한 억제능을 도시하는 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 Jurkat 세포에서 추출된 IL-5에 대한 억제능을 도시하는 그래프이다.
도 3는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 Jurkat 세포에서 추출된 TNF-a에 대한 억제능을 도시하는 그래프이다.
도 4은 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 염증이 유도된 실험생쥐의 염증 사이토카인인 IL-1b에 대한 억제능을 도시하는 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 염증이 유도된 실험생쥐의 염증 사이토카인인 IL-6에 대한 억제능을 도시하는 그래프이다.
도 6는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 염증이 유도된 실험생쥐의 염증 사이토카인인 TNF-a에 대한 억제능을 도시하는 그래프이다.

이하 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 거북 추출물을 유효성분으로 함유하는 것이다.

거북(민물서식거북:tortoise, 바다서식거북:turtle)은 거북목에 속하는 파충류 동물의 총칭으로서 거북이라고도 한다. 등딱지와 배딱지로 몸을 보호하고 있는데 이것들은 갈비뼈에서 분화된 연골로 이루어져 있다.

구판(귀판)은 거북이의 복갑(服甲) 또는 배갑으로서, 정기를 보충하고 허약한 체질을 개선하는 효능을 가진 보익약(補益藥)에 속한다. 한방에서는 허약한 정기를 보충하여 질병의 회복을 촉진하며, 허약으로 인하여 발생되는 질병의 예방효과가 있으며, 본경(本經)에서는 여성의 대하, 붕루, 징가를 치료하고, 사지가 무겁고 약해지는 증상을 치료하고, 오랫동안 복용하면 몸이 가벼워지고 배가 고프지 않게 된다. 별록(別錄)에서는 노기(怒氣)를 가라 앉히고 복통을 치료하며 오랫동안 서있지 못하는 증상을 치료하고, 뼛속이 시리거나 열이 나는 증상에 효능이 있는 약재이다.

또한, 거북은 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부터 추출된 본 발명의 추출물 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없으므로, 자라 추출물을 유효성분으로 하는 의약품 및 의약품의 첨가제는 물론 식품 첨가물로 이용할 수 있다.

본 발명의 거북 추출물에서 거북의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 거북의 몸통에서 내장과 피를 제거하고 이를 건조분말로 만들어 이용할 수 있다.

또한, 거북에서 내장, 피 및 구판을 제거하고 이를 이용할 수도 있다.

거북 추출물은 거북을 80~100℃의 열수를 이용하여 열수 추출하거나, 알콜 또는 알콜 수용액을 이용하여 추출하는 것이다. 알콜은 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소 프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 중에서 어느 하나 이상이 선택되는 것이며, 알콜 수용액은 50%이상인 것이 바람직하다.

거북 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20 중량%의 양으로 함유되는 것이다. 추출물의 농도가 0.1 중량% 미만인 경우에는 피부질환의 치료효과를 기대하기 어렵고, 20 중량%를 초과하는 경우에는 함유량의 증가에 따라 더 이상의 효과 증가를 나타내지 않는다.

거북 추출물은 통상의 추출 및 분리방법에 의하여 수득할 수 있는데, 먼저 건조시킨 거북을 분쇄하여 거북 분말 50g에 대하여 정제수(물) 300~1000ml를 넣고 80~100℃에서 1~10 시간 추출하는 것이며, 더욱 바람직하게는 물 400~600ml를 넣고 95~100℃에서 2~3 시간 동안 열수 추출하는 것이다.

한편 거북 분말 50g에 대하여 알콜 또는 50% 이상의 알콜 수용액 300~1000ml를 넣고 2~12 시간 동안 마그네틱바 등으로 교반하여 얻은 추출액을 여과지를 이용하여 찌꺼기를 제거하여 거북 추출물을 얻을 수 있다.

바람직하게는 용매로 사용되는 알콜은 에탄올 또는 메탄올을 사용하며, 거북 분말 50g에 대하여 알콜 용매 400~600ml를 첨가하여 6~9 시간 교반하여 얻은 추출액을 여과지를 이용하여 찌꺼기를 제거하여 거북 추출물을 얻는 것이다.

또한 거북을 분말화 한 후 상기 알콜 용매를 이용하여 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 냉침추출하여 진공여과에 의해 상층액을 회수하는 과정을 반복하여 상층액을 모으고 감압농축하여 추출할 수 있다.

찌꺼기를 제거한 거북 추출물 자체 또는 추가적으로 감압 농축한 다음 동결건조하거나 분무 건조하여 건조된 고체상으로 제조할 수도 있음은 물론이다.

상기 거북 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20 중량%로 함유되는 것이 바람직하다. 0.1 중량% 미만에서는 유효한 효능을 나타내지 못하며, 20 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 대비 효과의 차이가 크지 않다.

거북 추출물을 유효성분으로 경구투여 의약품에 적용하는 경우에는 정제, 환제, 과립제, 연질/경질 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제 등으로 제제할 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 전분류, 셀룰로즈류, 젤라틴 등을 포함할 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 또한, 담체, 계면활성제, 안정제, 완충제, 기타 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

한편 비경구 투여를 위한 제제로는 주사제, 짐적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등을 들 수 있으며, 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 피부질환의 치료 효과를 위해서 본 발명의 추출물은 1일 0.001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 50mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있으며, 수회 나누어 투여할 수도 있다.

한편 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공할 수도 있다. 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 피부 질환의 예방을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 별갑 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 5g의 비율로 가할 수 있다.

상기 피부질환은 일반 피부염, 아토피 피부염, 여드름, 무좀, 건선, 습진, 지루성 피부염을 포함하는 것이다.

거북 추출물을 함유하는 조성물은 세포의 염증 및 아토피 관련 사이토카인의 분비의 조율을 통해서 염증 및 아토피성 피부염 개선 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있다.

이하 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 보다 구체적으로 설명한다.

<실시예 1 내지 5>

시판되는 붉은귀거북을 구입하여 분쇄한 분말 50g을 80% 에탄올 500ml에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 환류 추출기에서 5시간 동안 추출한 다음, 100 메쉬 여과포로 여과하여 거북 추출물을 얻었다.

상기 거북 추출물은 상온에서 화트만(whatman) 여과지로 여과하여 불용성물질을 제거하였다.

실시예 1, 2, 3은 각각 0.1㎍/ml, 1㎍/ml, 10㎍/ml 농도의 거북 추출물을 집먼지진드기가 투입된 백혈병 세포에 투여한 것이다.

실시예 4, 5는 LPS(lipopolysaccharide)를 투여하여 염증을 유발시킨 생쥐에 거북 추출물을 각각 100mg/kg, 200mg/kg 씩 투여한 것이다.

<실험예 1> 거북 추출물의 세포에서의 사이토카인 조절능 측정

1. 실험 대상

거북 추출물의 유용성 확인을 위해 백혈병 세포인 Jurkat 세포에 아토피성 피부염을 일으키는 항원인 집먼지진드기의 미세분말액을 투여하여 48시간 동안 배양하고, IL-4 및 TNF-a의 양을 측정, 분석하여 염증에 대한 효능을 확인하였다.

2. 실험 방법

배양된 Jurkat 세포에 거북 추출물을 각각 0.1㎍/ml(실시예 1), 1㎍/ml(실시예 2), 10㎍/ml(실시예 3) 농도로 투입한 후 다시 배양기에서 48시간 동안 배양하였다.

한편, 정상군은 집먼지진드기를 투여하지 않은 Jurkat 세포(비교예 1)이며, 대조군은 집먼지진드기의 미세분말액만을 투여하고 거북 추출물을 투여하지 않은 Jurkat 세포(비교예 2)이고, 양성 대조군은 집먼지진드기의 미세분말액을 투여한 세포에 덱사메타손 1㎍/ml를 투여한 Jurkat 세포(비교예 3)이다.

아토피 관련 사이토카인 IL-4와 IL-5는 Th2 세포에서 발현하는 아토피 관련 사이토카인으로 생체에 항원이 침투되었을 때 항원제시세포에 의해 Th2 세포가 자극을 전달받고 IL-4, IL-5 등의 사이토카인을 분비하여 B세포를 자극하고 B세포는 IgE 등을 분비한다.

IgE는 비만세포(Mast cell)을 자극하여 히스타민 등 화학성 매개물질을 분비함으로써 가려움, 홍반 등을 유발한다.

또한 IL-4, IL-5등의 아토피성 사이토카인은 과립세포(호중구, 호산구, 호염기구)를 자극하여 화학성 매개물질을 분비하여 가려움, 홍반 등 염증을 유발한다.

따라서 실시예 1~3, 정상군, 대조군, 양성 대조군 각각에 대하여 백혈병 세포인 Jurkat세포에 집먼지진드기 미세분말액을 투여하여 배양된 염증성 사이토카인인 IL-4, IL-5 및 TNF-a의 분비량을 ELISA법을 이용하여 측정하였다.

3.실험 결과

상기 실험 1에 있어서, 실시예 1~3 및 비교예 1~3에서 측정된 값을 표 1에서 정리하였다.

	구분	IL-4검출량 (pg/ml)	IL-5검출량 (pg/ml)	TNF-a검출량 (pg/ml)
비교예 1	집먼지진드기를 투여하지 않은 Jurkat세포 (정상군)	100	12.8	5.2
비교예 2	거북 추출물을 투여하지 않은 Jurkat 세포 (대조군)	348	33.4	21.3
비교예 3	덱사메타손 1㎍/ml를 투여한 Jurkat 세포 (양성 대조군)	68	9.2	8.1
실시예 1	거북 추출물 0.1㎍/ml 투여	71	11.6	6.1
실시예 2	거북 추출물 1㎍/ml 투여	63	16.2	12.1
실시예 3	거북 추출물 10㎍/ml 투여	70	5.9	4.4

도 1 은 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 Jurkat 세포에서 추출된 IL-4에 대한 억제능을 나타내는 그래프이며, 도 2는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 Jurkat 세포에서 추출된 IL-5에 대한 억제능이고, 도 3은 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 Jurkat 세포에서 추출된 TNF-a에 대한 억제능을 도시하는 그래프이며, 표 1은 Jurkat 세포에서 추출된 IL-4, IL-5 및 TNF-a를 측정한 값을 나타낸 것으로서, IL-4, IL-5 및 TNF-a 모두 거북 추출물의 실시예 1~3에서 대조군에 비하여 현저하게 감소하였으며, 위의 결과로써 거북 추출물이 아토피 관련 사이토카인의 생성을 억제함으로써 거북 추출물의 아토피성 피부염 개선에 상당히 효과가 있음을 확인하였다.

<실험예 2> 거북 추출물의 염증 동물 모델에서의 염증성 사이토카인 억제능 측정

1. 실험 대상

거북 추출물의 염증 개선 유용성을 확인하기 위하여 Balb/c 생쥐를 이용하여 실험을 실시하였다.

본 발명에서 거북 추출물의 염증에 대한 유용성을 확인하기 위해 Balb/c 생쥐에 염증 유발 물질인 LPS(lipopolysaccharide)를 투여하여 염증을 유발시키고 거북 추출물을 투여한 후 염증 사이토카인인 IL-1b, IL-6, TNF-a를 ELISA법을 이용하여 측정하였다.

2. 실험 방법

상기 LPS를 투여하여 염증을 유발시킨 후 정상군은 마리당 식염수(saline) 200㎕를 경구 투여하고, 거북 투여군은 생쥐 마리당 100mg/kg(실시예 4), 200mg/kg(실시예 5)을 oral zonde를 이용하여 하루에 1회씩 7일간 경구 투여하였다. 그리고 난 후 지질 다당류인 lipopolysaccharide (LPS) 1 ㎎/㎏을 복강에 주사한 후 90분 후에 에틸 에테르(ethyl ether)로 마취하고 심장 천자법으로 채혈하였다. 채혈 후 혈청을 분리하여 IL-1b, IL-6, TNF-a 생성량을 ELISA법으로 측정하였다.

각 웰 플레이트(well plate)에 생쥐의 혈청 100㎕ (1/100 dilution)씩 분주한 후 antibody-biotine conjugated 100㎕를 처리하고 2시간 실온에서 방치한 후 2회 washing 완충 용액으로 세척한 다음 antibody avidin-HRP conjugated 100 ㎕를 처리하고 2시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다.

여기에 TMB(tetramethylbenzidine) 기질을 100㎕씩 분주하고 암소에서 30분간 방치한 후 100㎕의 stop 용액을 처리한 후 ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하여 이를 분석하였다.

3.실험 결과

(1) 도 4는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 염증이 유도된 실험생쥐의 염증 사이토카인인 IL-1b에 대한 억제능을 도시하는 그래프이며, 도시된 바와 같이 거북 추출물을 투여한 후 LPS로 유도된 급성 염증모델에서 혈청을 분리하여 IL-1b를 측정한 결과 정상군은 36.2±6.1(pg/ml), 대조군이 99.2±10.4(pg/ml), 거북100 투여군은 59.4±7.4(pg/ml), 거북200 투여군은 56.8±6.0(pg/ml)로 나타나 대조군은 정상군에 비해 유의성 있게 (p<0.001)증가하였고 거북 투여군에서는 대조군에 비하여 농도 의존적으로 유의성 있게 (p<0.001) 감소하였다.

(2) 도 5는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 염증이 유도된 실험생쥐의 염증 사이토카인인 IL-6에 대한 억제능을 도시하는 그래프이며, 도시된 바와 같이 거북 추출물을 투여한 후 LPS로 유도된 급성 염증모델에서 혈청을 분리하여 IL-6를 측정한 결과 정상군은 781.2±39.7(pg/ml), 대조군이 3624.8±165.4(pg/ml), 거북100 투여군은 3143.0±347.4(pg/ml), 거북200 투여군은 2487.8±147.6(pg/ml)로 나타나 대조군은 정상군에 비해 유의성 있게 (p<0.001)증가하였고 거북 투여군에서는 대조군에 비하여 농도 의존적으로 유의성 있게 각각 (p<0.05, p<0.001) 감소하였다.

(3) 도 6는 본 발명에 따른 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 투여한 염증이 유도된 실험생쥐의 염증 사이토카인인 TNF-a에 대한 억제능을 도시하는 그래프이며, 도시된 바와 같이 추출물을 투여한 후 LPS로 유도된 급성 염증모델에서 혈청을 분리하여 TNF-a를 측정한 결과 정상군은 603.2±11.5(pg/ml), 대조군이 1786.6±136.5(pg/ml), 거북100 투여군은 1271.2±52.7(pg/ml), 거북200 투여군은 859.8±65.7(pg/ml)로 나타나 대조군은 정상군에 비해 유의성 있게 (p<0.001) 증가하였고 거북 투여군에서는 대조군에 비하여 농도 의존적으로 유의성 있게 각각 (p<0.01, p<0.001) 감소하였다. 위의 결과로써 거북 추출물이 염증성 사이토카인의 생성을 억제함으로써 거북 추출물의 염증 개선에 상당히 효과가 있음을 확인하였다.

표 2에서 염증이 유도된 실험생쥐에서 측정된 염증 사이토카인인 IL-1b, IL-6, TNF-a 검출량을 정리한 것이다.

	구분	IL-1b (pg/ml)	IL-6 (pg/ml)	TNF-a (pg/ml)
비교예 4	정상군	36.2±6.1	781.2±39.7	603.2±11.5
비교예 5	대조군	99.2±10.4	3624.8±165.4	1786.6±136.5
실시예 4	거북 추출물 100mg/kg 투여	59.4±7.4	3143.0±347.7	1271.2±52.7
실시예 5	거북 추출물 200mg/kg 투여	56.8±6.0	2487.8±147.6	859.8±65.7

이상에서 설명된 본 발명은 예시적인 것에 불과하며, 본 발명이 속한 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 잘 알 수 있을 것이다. 그러므로 본 발명은 상기의 상세한 설명에서 언급되는 형태로만 한정되는 것은 아님을 잘 이해할 수 있을 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호 범위는 첨부된 특허청구범위의 기술적 사상에 의해 정해져야 할 것이다. 또한, 본 발명은 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 정신과 그 범위 내에 있는 모든 변형물과 균등물 및 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

Claims (5)

1. 거북 분말을 80~100℃의 열수를 이용하여 추출되는 거북 추출물을 유효성분으로 함유하며, 상기 거북 추출물은 전체 중량에 대하여 0.1~20중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 거북 추출물은 알콜 또는 알콜 수용액을 이용하여 추출되는 것이되,
   상기 알콜은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 중에서 어느 하나 이상이 선택되는 것을 특징으로 하는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
4. 삭제
5. 제1항 또는 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 피부질환은 피부염, 아토피 피부염, 여드름, 무좀, 건선, 습진을 포함하는 것을 특징으로 하는 거북 추출물을 함유하는 피부질환의 개선 또는 치료용 약학적 조성물.

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