KR101301253B1 - 방사선을 이용한 크로메논 유도체의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 방사선을 이용한 크로메논 유도체의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 의한 제조방법은 시판되는 실리빈으로부터 반응 용매하에 방사선을 조사함으로써, 크로메논 화합물인 디하이드로실리빈과 아피제닌 화합물을 동시에 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 반응 단계가 간단하고, 높은 수율로 화합물을 얻을 수 있고, 상기 화합물의 제조 비용이 저렴하여 대량 생산 시, 매우 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 디하이드로실리빈 및 아피제닌은 암세포 생존률을 억제하는 효과가 우수하므로 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

방사선을 이용한 크로메논 유도체의 제조방법{Preparation method of chromenone derivatives using the radiation}
본 발명은 방사선을 이용한 크로메논 유도체의 제조방법에 관한 것이다.
실리빈(silybin)은 밀크씨슬(milk thistle, Silybum marianum (L.) Gaertn) 또는 엉겅퀴라고도 불리는 국화과 식물의 주요 활성성분으로서 밀크씨슬은 약 2000년 전부터 유럽 등에서 간질환에 사용되어 온 식물이다.
보고에 의하면 실리빈은 항산화 및 항암 효능을 나타내고 있다. In vitro 또는 동물모델을 이용한 연구에서 실리빈은 간독성에 대하여 보호능을 나타내고 있으며 전립선암 세포, 에스트로젠 의존성 또는 비의존성 유방암 세포주, 자궁경부암 세포, 대장암 세포, 폐암 세포 등에서 항암 효능을 나타내는 것으로 보고되었다.
또한, 디하이드로실리빈은 실리빈의 유도체로서, 항산화 활성이 있으며, UV-보호하는 효과가 있고, 뿐만 아니라, 인간 케라틴세포(HaCaT) 및 인간 간암세포주(HepG2)의 시토크롬 P450의 이성구조(isoform)의 CYP1A1에 대한 저해활성이 있는 것으로 알려져 있다.
또한, 최근 디하이드로실리빈(DHS)는 실리빈보다 과립소체 지질 과산화를 저해하는 효과가 우수하며, 세포 사멸 효과, P-당단백질을 저해효과, 항암효과가 있는 것으로 보고된바 있다(Axel Huber, et. al., Biochimica et Biophysica Acta 1780 (2008) 837-847).
나아가, 아피제닌은 iNOS, COX-2, NFκB 활성화 기전 등을 조절하는 역할(Lo, A.H. et al., Carcinogenesis 23(6): 983-991 (2002))을 하는 반면, 아피제닌은 COX-1을 억제하지 않아 관절염치료제로 이용하고, 또한, 항염증 작용, 혈관이완 작용, 항산화 작용, 항바이러스 작용, 및 항암 작용 같은 다양한 생물학적 활성을 갖는 물질로 알려져 있다. 이중, 항암 작용과 관련하여, 아피제닌은 예를 들면, 약 50μM 이하 정도의 매우 낮은 농도에서도 효과적으로 작용할 수 있으며, 전립선암, 유방암, 폐암, 직장암, 혈액암(백혈병), 피부암, 갑상선암, 간암 등 다양한 암세포들의 주요 특징인 세포증식(proliferation)과 신생혈관형성(angiogenesis) 과정에 대해서 세포사멸(apoptosis) 및 괴사(necrosis) 기전에 작용하여 항증식 및 세포독성(cytotoxicity) 효과를 유발하고 결과적으로 암세포 증식을 억제하는 것으로 알려져 있다.
또한, 아피제닌은 암 세포에서 뿐만 아니라, 쥐의 배 섬유아세포(murine embryo fibroblast) 같은 비종양 세포(nontumor cell)에서도 종양 억제 단백질 p53의 축적, 세포사멸 유도 같은 세포독성 효과 및 세포증식억제 활성을 갖는 것으로 알려져 있으며, 사람의 정상 전립선 상피세포에서도 약간의 세포증식억제 효과가 있는 것으로 알려져 있다(Plaumann B. et al., Oncogene 13(8), 1605-14 (1996) and Gupta, S. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 287(4): 914-920).
그러나, 최근에는 폐암 및 직장암 세포주에 대한 아피제닌 적용 농도에 따라, 세포주를 포함하는 in vitro 시험에서는 탁월한 효과를 발휘하지만 in vivo에서는 거의 효과가 없는 경우도 또한 보고되고 있다(Engelmann, C. et al., Phyto medicine 9(6): 489-495 (2002)).
특히, 세포증식억제 기전을 기초로 하는 아피제닌의 효과는 세포증식억제와 세포독성이 함께 나타날 뿐만 아니라 적용되는 낮은 농도에서 효과에 대한 매우 민감한 반응을 보이는 것으로 확인되고 있으며, 아피제닌은 관절 연골재생제로 사용될 수 있음이 보고된바 있다(대한민국 등록특허 제10-0437274호).
한편, 상기 디하이드로실리빈과 아피젠은 천연물에서 유래한 화합물로써, 대부분 천연물에서 분리하여 생리활성을 측정하는데 이용하였고, 이중, 실리빈으로부터 디하이드로실리빈을 얻는 방법으로는 시판되는 실리빈을 요오드(iodine)와 아세트산에 녹인 포타슘아세테이트(KOAc)하에 산화반응을 수행하여 제조하는 방법이 개시되어 있고(Barron, D., et. al., Bioorg Med Chem Lett. 2000, 10(2), 157), 아피젠은 나리제닌으로부터 제조되는 방법이 개시되어 있다(Jianli Chen, et. al., Carbohydrate Research 344 (2009) 2245-2249).
그러나, 종래 합성 화합물의 경우, 디하이드로실리빈과 아피제닌의 화합물을 동시에 얻을 수 없을 뿐만 아니라, 상기 화합물의 제조시, 다양한 시약을 사용해야하고, 이러한 시약들의 사용시 환경오염 문제가 있을 뿐 아니라, 비용이 많이 드는 문제점이 있다.
이에, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 시약을 사용하지 않으면서, 화합물의 제조방법을 연구하던 중, 시판되는 실리빈을 반응용매하에 방사선을 조사함으로써, 디하이드로실리빈과 아피제닌 화합물을 동시에 얻을 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 제10-0437274호
Axel Huber, et. al., Biochimica et Biophysica Acta 1780, 837-847 (2008) Plaumann B. et al., Oncogene 13(8), 1605-14 (1996) Gupta, S. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 287(4): 914-920 Engelmann, C. et al., Phyto medicine 9(6): 489-495 (2002) Barron, D., et. al., Bioorg Med Chem Lett. 10(2), 157 (2000) Jianli Chen, et. al., Carbohydrate Research 344, 2245-2249 (2009)
본 발명의 목적은 크로메논 유도체의 제조방법을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 화학식 3의 크로만 화합물을 반응용매에 용해한 후, 상기 반응혼합물에 방사선을 조사하여 최종 화합물을 얻는 단계를 포함하는 하기 화학식 1 또는 2의 크로메논 유도체의 제조방법을 제공한다:
[반응식 1]
Figure 112011097939384-pat00001
.
본 발명에 의한 제조방법은 시판되는 실리빈으로부터 반응 용매하에 방사선을 조사함으로써, 크로메논 화합물인 디하이드로실리빈과 아피제닌 화합물을 동시에 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 반응 단계가 간단하고, 높은 수율로 화합물을 얻을 수 있고, 상기 화합물의 제조 비용이 저렴하여 대량 생산 시, 매우 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 디하이드로실리빈 및 아피제닌은 암세포 생존률을 억제하는 효과가 우수하므로 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예의 방사선 조사선량에 따른 화합물의 전환률을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 화합물에 대한 DU145 세포(전립선암 세포주)의 세포 생존률을 나타내는 도면이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 화합물에 대한 Hela 세포(자궁암 세포주)의 세포 생존률을 나타내는 도면이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 화합물에 대한 SW480 세포(대장암 세포주)의 세포 생존률을 나타내는 도면이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 화합물에 대한 H460 세포(폐암 세포주)의 세포 생존률을 나타내는 도면이다.
도 6은 본 발명에 따른 실시예 화합물에 대한 SW620 세포(대장암 세포주)의 세포 생존률을 나타내는 도면이다.
도 7은 본 발명에 따른 실시예 화합물에 대한 A549 세포(폐암 세포주)의 세포 생존률을 나타내는 도면이다.
본 발명은 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
화학식 3의 크로만 화합물을 반응용매에 용해한 후, 상기 반응혼합물에 방사선을 조사하여 최종 화합물을 얻는 단계를 포함하는 하기 화학식 1 또는 2의 크로메논 유도체의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure 112011097939384-pat00002

본 발명에 따른 크로메논 유도체의 제조방법에 있어서, 상기 단계는 크로만 화합물인 실리빈 화합물을 반응용매 하에 방사선을 조사하여 크로메논 화합물 즉, 디하이드록시실리빈 및 아피제닌을 얻는 단계이다.
이때, 사용가능한 반응용매는 디메틸설폭사이드를 함유하는 C1-C4 저급알코올이고, 바람직하게는 디메틸설폭사이드를 함유하는 메탄올 또는 에탄올을 사용할 수 있다.
구체적으로, 10% 디메틸설폭사이드를 함유하는 메탄올 또는 에탄올을 사용할 수 있다.
또한, 상기 방사선은 감마선, 전자선 UV 및 X선으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나이고, 바람직하게는 감마선을 사용할 수 있다.
나아가, 상기 방사선은 100-500 kGy의 선량으로 조사될 수 있고, 바람직하게는 150-350 kGy의 선량으로 조사될 수 있다.
상기 범위를 벗어나는 경우, 방사선 조사선량이 100 kGy 이하인 경우, 화합물의 생성이 잘 되지 않는 문제점이 있고, 500 kGy 이상인 경우, 화합물 생성 수율이 감소하는 문제점이 있다.
또한, 상기 단계를 수행하는 반응온도는 0 ℃ 내지 상온이고, 바람직하게는 상온에서 수행될 수 있다.
구체적으로, 실리빈 화합물을 10% 디메틸설폭사이드를 함유하는 메탄올에 녹인 후, 상온에서 150-350 kGy의 감마선을 조사하여 반응을 수행하고, 반응 종결 후, 컬럼 크로마토그래피 또는 감압 여과하여 화학식 1 및 2로 표시되는 화합물을 얻을 수 있다.
상기 제조방법으로 제조된 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 상기 화학식 1 또는 2의 화합물을 유기용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조하여 제조되거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 2 및 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물 등을 모두 포함한다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
화학식 1 또는 2의 화합물의 암 세포에 대한 생존률을 측정실험을 수행한 결과, 암 세포의 생존률을 억제하는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(실험예 1 및 표 3 내지 8, 및 도 2 내지 7 참조).
본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 화학식 1 또는 2의 화합물을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
상기 화학식 1 또는 2의 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 200 ㎎/㎏/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격을 1일 수회, 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 설명한다.
하기 실시예는 본 발명을 설명하는 것일 뿐, 이에 한정하지 않는다.
< 실시예 1> (3,5,7- 트리하이드록시 -2-(3-(4- 하이드록시 -3- 메톡시페닐 )-2-( 하이드록시메틸 )-2,3- 다이하이드록벤조[b][1,4]다이옥신 -6-닐)-4H- 크로멘 -4-온(이하, 2,3-디 하이드로실 리빈) 및 5,7- 다이하이드록시 -2-(4- 하이드록시페닐 )-4H- 크로멘 -4-온의 제조(이하, 아피제닌( apigenin ))의 제조
실리빈으로 알려진 화합물 3,5,7-트리하이드록시-2-(3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-2-(하이드록시메틸)-2,3-다이하이드록벤조[b][1,4]다이오신-6-닐)크로만-4-원(1.0 g)을 10 mL 다이메틸설폭사이드에 용해하고, 90 mL 메탄올을 적가 한 후 천천히 교반시켜 녹인 후, 실온에서 상기 반응 용액을 감마라디에이션을 이용해 흡수선량이 300 kGy가 되도록 조사하였다. 반응 종결 후 유기층을 모두 수거하여 소듐 설페이트로 건조시킨 후, 감압 농축하였다. 상기 반응 혼합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하고, 화학식 1로 표시되는 목적화합물(노란색 분말, 0.497 g, 49.7 %) 및 화학식 2로 표시되는 목적화합물(노란색 분말, 0.426 g, 42.6 %)을 각각 얻었다.
그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
구분 구조 데이터



목적 화합물 1:
(3,5,7-트리하이드록시-2-(3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-2-(하이드록시메틸)-2,3-다이하이드록벤조[b][1,4]다이옥신-6-닐)-4H-크로멘-4-온


Figure 112011097939384-pat00003
1H-NMR(500 MHz, Acetone-d6) d 3.38(1H, m, H-11b), 3.58(1H, m, H-11a), 3.80(3H, s, 18-OCH3), 4.28(1H, m, H-12), 4.89(1H, d, J = 7.5 Hz, H-13), 6.20(1H, s, H-6), 6.46(1H, s, H-8), 6.83(1H, d, J = 8.0 Hz, H-19), 6.89(1H, d, J = 7.5 Hz, H-16), 7.05(1H, s, H-15), 7.12(1H, d, J = 8.5 Hz, H-5'), 7.77(2H, s, H-2', H-6'), 12.4(s, 5-OH);

HREIMS calcd for C25H20O10(M+) 480.1056; found,480.1057.



목적화합물 2:
5,7-다이하이드록시-2-(4-하이드록시페닐)-4H-크로멘-4-온
Figure 112011097939384-pat00004
1H-NMR(500 MHz, Acetone-d6) d 6.19(1H, s, H-8), 6.48(1H, s, H-6), 6.76(1H, s, H-3), 6.93(2H, d, J = 8.0 Hz, H-3', H-5'), 7.91(2H, d, J = 8.0 Hz, H-2', H-6'), 12.9(s, 5-OH);

HREIMS calcd for C15H10O5(M+) 270.0528; found,270.0529.
< 실시예 2 내지 6> 감마선 조사선량에 따른 시료의 함량 변화 측정
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 출발물질인 실리빈에 방사선 조사선량에 따른 디하이드로실리빈 및 아피제닌 화합물의 전환률을 측정하기 위해 상기 실시예 1에서 방사선 조사량이 300 kGy인 것을 제외하고는 동일한 방법으로 전환률 측정 실험을 수행하였다.
그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

구분		 tR (min) 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5 실시예 6 실시예 1
50 kGy 70 kGy 100 kGy 150 kGy 200 kGy 300 kGy
Area (%) Area (%) Area (%) Area (%) Area (%) Area (%)


출발물질
(Silybin)
28.55
31.58
28.79
25.13
19.45
15.913
7.562

28.73
37.31
35.99
31.04
21.70
19.357
9.130


생성물질 1
(Dehydrosilybin)
31.80
3.15
4.74
6.69
10.01
17.554
23.114

32.00
5.53
6.68
8.79
14.13
17.040
26.652

생성물질 2
(Apigenin)
30.49
22.49
23.79
28.36
34.70
30.135
33.541
표 2에 나타낸 바와 같이, 실리빈은 방사선의 조사선량이 증가함에 따라 감소하는 것으로 나타났고, 방사선 조사선량이 증가함에 따라 화학식 1 및 2의 화합물이 생성률이 증가하는 것으로 나타났다.
따라서, 본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 방사선의 조사선량이 증가할 수 록 목적 화합물의 양이 증가하므로, 디하이드로실리빈 및 아피제닌의 화합물의 제조시 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 1> 항암효과 측정
본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1 및 2의 화합물의 암세포 저해 활성 효과를 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.
암세포 성장 저해 활성을 측정하기 위해 EZ-Cytox 세포 생존 활성 키트(EZ-Cytox cell viability assay kit)(대일랩, 한국)를 사용하였고, 암세포는 DU145(전립선암 세포주), Hela(자궁암 세포주), SW480(대장암 세포주) 및 H460(폐암 세포주)를 사용하였다.
모든 암세포는 96-웰 플레이트에 5×104 cells/mL의 농도로 24시간 배양한 후, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 디하이드로실리빈 및 화학식 2의 화합물 아피제닌과 대조군으로 출발물질로 사용된 실리나빈을 50 μg/mL 농도로 처리한 뒤 37 ℃, 5% 이산화탄소 환경에서 24시간 동안 배양한 후, 각각의 웰(well)에 키트 솔루션 10 μL를 처리한 후, 3시간 동안 추가 배양한 후, 480 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 3 내지 6 및 도 2 내지 7에 나타내었다.
전립선암 세포주( DU145 )에 대한 항암효과
구분 세포생존력(%)

화학식 1의 화합물
40.4

화학식 2의 화합물
51.6
대조군
(실리빈)
87.9

무처리군
100
표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 전립선암 세포 생존력이 40.4%이고, 화학식 2의 화합물은 전립선암 세포 생존력이 51.6%로서 대조군으로 사용된 출발물질인 실리빈(87.9%)보다 4 내지 5배 우수하므로 전립선암 세포를 사멸시키는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(도 2 참조).
자궁암 세포주( Hela )에 대한 항암효과
구분 세포생존력(%)

화학식 1의 화합물
21.1%

화학식 2의 화합물
38.7%
대조군
(실리빈)
83.2%

무처리군
100
표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 자궁암 세포 생존력이 21.1%이고, 화학식 2의 화합물은 자궁암 세포 생존력이 38.7%로서 대조군으로 사용된 출발물질인 실리빈(83.2%)보다 3.6 내지 4.7배 우수하므로 자궁암 세포를 사멸시키는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(도 3 참조).
대장암 세포주( SW480 )에 대한 항암효과
구분 세포생존력(%)

화학식 1의 화합물
41.7%

화학식 2의 화합물
49.2%
대조군
(실리빈)
79.8 %

무처리군
100
표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 대장암 세포 생존력이 41.7%이고, 화학식 2의 화합물은 대장암 세포 생존력이 49.2%로서 대조군으로 사용된 출발물질인 실리빈(79.8 %)보다 2.5 내지 2.9배 우수하므로 대장암 세포를 사멸시키는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(도 4 참조).
폐암 세포주( H460 )에 대한 항암효과
구분 세포생존력(%)

화학식 1의 화합물
66.3%

화학식 2의 화합물
97.4%
대조군
(실리빈)
101%

무처리군
100
표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 폐암 세포 생존력이 66.3%이고, 화학식 2의 화합물은 폐암 세포 생존력이 97.4%로서 대조군으로 사용된 출발물질인 실리빈(101%)보다 2.6 내지 3.3배 우수하므로 폐암 세포를 사멸시키는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(도 5 참조).
대장암 세포주( SW620 )에 대한 항암효과
구분 세포생존력(%)

화학식 1의 화합물
27.8%

화학식 2의 화합물
39.4%
대조군
(실리빈)
75.5%

무처리군
100
표 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 폐암 세포 생존력이 27.8%이고, 화학식 2의 화합물은 폐암 세포 생존력이 39.4%로서 대조군으로 사용된 출발물질인 실리빈(75.5%)보다 2.5 내지 2.9배 우수하므로 대장암 세포를 사멸시키는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(도 6 참조).
폐암 세포주(A549)에 대한 항암효과
구분 세포생존력(%)

화학식 1의 화합물
58.9%

화학식 2의 화합물
72.1%
대조군
(실리빈)
97.5%

무처리군
100
표 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 폐암 세포 생존력이 58.9%이고, 화학식 2의 화합물은 폐암 세포 생존력이 72.1%로서 대조군으로 사용된 출발물질인 실리빈(97.5%)보다 11.2 내지 16.4배 우수하므로 폐암 세포를 사멸시키는 효과가 우수한 것으로 확인되었다(도 7 참조).
따라서, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 디하이드로실리빈과 아피제닌은 종래 합성방법으로 제조하는 것보다 간단하고, 우수한 수율로 제조할 수 있을 뿐만 아니라, 암세포의 사멸 효과가 우수하므로 항암용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
< 제제예 1> 산제의 제조
화학식 1 또는 2의 화합물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
< 제제예 2> 정제의 제조
화학식 1 또는 2의 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
< 제제예 3> 캡슐제의 제조
화학식 1 또는 2의 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
< 제제예 4> 주사제의 제조
화학식 1 또는 2의 화합물 100 ㎎
만니톨 180 ㎎
Na2HPO4ㆍ2H2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.

Claims (6)

  1. 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
    화학식 3으로 표시되는 살리빈을 반응용매에 용해시켜 반응혼합물을 준비하는 단계(단계 1); 및
    상기 단계 1에서 얻은 반응혼합물에 감마선을 조사하는 단계(단계 2);를 포함하는 화학식 1로 표시되는 디하이드로실리빈 및 화학식 2로 표시되는 아피제닌을 동시에 제조하는 방법:
    [반응식 1]
    Figure 112013027088867-pat00005
    .
  2. 제1항에 있어서, 상기 반응용매는 디메틸설폭사이드를 함유하는 C1-C4 저급알코올인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 반응용매는 디메틸설폭사이드를 함유하는 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 상기 감마선은 100-500 kGy의 선량으로 조사되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 방법은 0 ℃ 내지 상온에서 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
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