KR101260871B1 - 장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물 - Google Patents

장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101260871B1
KR101260871B1 KR1020100101062A KR20100101062A KR101260871B1 KR 101260871 B1 KR101260871 B1 KR 101260871B1 KR 1020100101062 A KR1020100101062 A KR 1020100101062A KR 20100101062 A KR20100101062 A KR 20100101062A KR 101260871 B1 KR101260871 B1 KR 101260871B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
intestinal
lactic acid
acid bacteria
bowel disease
present
Prior art date
Application number
KR1020100101062A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20120039381A (ko
Inventor
김세헌
전태훈
이진
Original Assignee
고려대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 고려대학교 산학협력단 filed Critical 고려대학교 산학협력단
Priority to KR1020100101062A priority Critical patent/KR101260871B1/ko
Publication of KR20120039381A publication Critical patent/KR20120039381A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101260871B1 publication Critical patent/KR101260871B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 장내 항염증 효과를 갖는 새로운 유산균에 관한 것으로, 본 발명의 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421과 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191은 염증이 유발된 상피세포의 염증성 사이토카인을 효율적으로 억제시킬 수 있으며 다른 유산균 균주에 비해 장 부착능력이 탁월하다. 따라서 본 발명의 두 유산균 균주는 장내 항염증 소재로 가능성을 제시하고, 나아가 염증성 장질환의 치료 및 예방에 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물 {Probiotics having anti-inflammatory effects on intestinal epithelial cells, and compositions for treating and preventing inflammatory bowel disease comprising thereof}
본 발명은 장내 항염증 효과를 갖는 새로운 유산균에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 장 부착능력이 우수하고 장 상피세포의 염증성 사이토카인의 발현 및 분비를 억제하는 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421과 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191, 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.
염증성 장질환(inflammatory bowel disease)은 장에 만성적인 원인 불명의 염증을 일으키는 질환으로 궤양성 대장염과 크론병으로 나눌 수 있다. 염증성 장 질환의 발생 원인이나 병태생리에 대해서는 아직까지도 명확히 알려져 있지 않지만, 유전적 요인, 장내 세균이나 음식물 등의 환경적 요인, 면역학적 요인 등이 복합적으로 발생 기전에 관여하리라 추정되고 있다. 프로바이오틱스(probiotics)는 살아있는 유산균으로서 사람이 복용하였을 때 건강에 이로운 효과를 나타내는 것을 말하며, 최근 염증성 장질환의 치료에 있어서 프로바이오틱스의 효과에 대해 많은 연구가 이루어지고 있다. Matsumoto S. 등에 의하면 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)는 LPS(lipopolysaccharide)로 염증반응을 유도한 대장의 고유판(lamina propria) 단핵세포 모델에서 IL-6의 분비를 억제하고 SAMP1/Yit mice에서 NF-κB의 핵으로의 전이를 저하시킨다고 보고하였다 (Matsumoto, S., et al. 2005. Clin Exp Immunol. 140:417-426).
장 상피세포는 면역반응에서 많은 조절 물질을 분비하는데, 항균성 펩타이드로서 디페신(defensin), 뮤신(mucin) 등이 있으며 IL-8, IL-6, IL-1β 등과 같은 케모카인(chemokine)과 사이토카인(cytokine)이 분비됨으로써 염증반응이 일어난다.
이에, 본 발명자들은 염증성 장질환의 치료에 적용할 수 있는 유산균 균주들을 연구하던 중, 염증관련 사이토카인 억제를 통한 염증 완화 효과가 있는 유산균균주들을 발굴하였으며, 이들 균주가 다른 유산균주와 비교하여 우수한 장 부착능력 및 항염증 효과가 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 장 부착능력 및 장내 함염증 활성을 갖는 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 또는 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 유산균을 이용한 염증성 장질환 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 유산균을 이용한 염증성 장질환 개선 및 예방용 식품 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 장내 항염증 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 (KFCC11496P) 또는 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191 (KFCC11495P)을 제공한다.
본 발명자들은 장내 항염증 활성, 및 장질환 치료 효과를 갖는 유산균 균주를 분리하고자 유아의 분변으로부터 16종의 유산균을 분리하고 이들 유산균의 장 부착능력 및 항염증 활성을 시험하였다. 그 결과 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) 및 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) 균주를 우수한 장 부착능력 및 항염증 활성을 나타내는 균주로서 확인하였으며, 이들 균주를 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421과 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191로 명명하고, 2010년 10월 8일자로 국내기탁기관인 한국미생물보존센터에 기탁하여, 각각 기탁번호 KFCC11496P, 및 KFCC11495P를 부여받았다.
본 발명에 따른 유산균 균주, 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 및 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191은, 종래 장 부착능력이 우수한 균주로 잘 알려져 있는 락토바실러스 람노서스 GG(Lactobacillus rhamnosus GG)에 비해 장 부착능력이 현저히 우수하다 (도 2 참조). 또한 장 상피세포 내 mRNA 수준의 IL-8의 발현을 억제함과 동시에 배양액 내 IL-8의 분비를 억제하는 효능을 갖는다 (도 3a, 3b 및 4 참조).
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 또는 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 상기 유산균 균주는, 장 상피세포에 독성을 나타내지 않기 때문에 (도 1 참조) 장내에 정착 및 서식하여 그 기능을 할 수 있는 프로바이오틱스로 사용될 수 있다. 나아가 장 부착능력이 탁월하고 장내 염증성 사이토카인, 예컨대 염증 정도의 표시자(indicator)로서 IL-8의 분비를 억제시키는 효능을 가지므로 염증성 장질환의 치료 및 예방에 사용될 수 있다.
본 발명의 실시예에서는, 염증 유도제인 LPS(lipopolysaccharides)로 염증을 유도한 장 상피세포 HT-29 세포를 이용하여 본 발명의 유산균 균주들의 항염증 효과를 확인하였다. 그 결과 본 발명의 균주들이 세포 내 mRNA 수준의 IL-8의 발현을 억제함과 동시에 배양액 내 IL-8의 분비를 억제하는 효능을 가짐을 확인하였다 (도 3b, 4).
본 발명의 염증성 장질환 치료 및 예방용 약학적 조성물은, 임상 투여시 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며, 사람의 경우, 통상적인 1일 투여량은 1~30 ㎎/kg 체중의 범위일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 실제 투여량은 투여경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 건강상태 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 한다. 또한 주성분인 상기 균주 또는 이들의 배양상등액 또는 프로바이오틱스의 유효량에 1종 또는 2종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 통상적인 담체 또는 1종 또는 2종 이상의 첨가제를 선택하여 통상적인 약제학적 제형의 조성물로 제조할 수 있다.
상기 담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 방부제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 첨가제로는 향료, 비타민류, 항산화제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 담체 및 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 것은 모두 사용이 가능하며, 구체적으로는 희석제로는 유당(lactose monohydrate), 옥수수 전분(cornstarch), 콩기름(soybean oil), 미결정 셀룰로오스(microcrystalline cellulose) 또는 만니톨(D-mannitorl)이 좋고, 활택제로는 스테아린산 마그네슘(magnesium stearate) 또는 탈크(talc)가 바람직하며, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈(PVP: polyvinyipyrolidone) 또는 하이드록시프로필셀룰로오스(HPC: hydroxypropylcellulose) 중에서 선택함이 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메칠셀룰로오스칼슘(Ca-CMC: carboxymethylcellulose calcium), 전분글리콜산나트륨(sodium starch glycolate), 폴라크릴린칼륨(polacrylin potassium) 또는 크로스포비돈(cross-linked polyvinylpyrrolidone) 중에서 선택함이 바람직하고, 감미제로는 백당, 과당, 소르비톨(sorbitol) 또는 아스파탐(aspartame) 중에서 선택되고, 안정제로는 카르복시메칠셀룰로오스나트륨(Ma-CMC: carboxymethylcellulose sodium), 베타-싸이크로덱스트린(beta-cyclodextrin), 백납(white bee's wax) 또는 산탄검(xanthan gum) 중에서 선택되며, 방부제로는 파라옥시안식향산메칠(methyl p-hydroxy benzoate, methlparaben), 파라옥시안식향산프로필(propyl p-hydroxy benzoate, propylparaben), 또는 소르빈산칼륨(potassium sorbate) 중에서 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물은 염증성 장질환을 효율적으로 치료 또는 예방하는 목적으로 사용되는 것으로 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바 없으며, 음료, 파우더, 캅셀, 연질캅셀, 정제, 껌, 점착 타입 액제 조성물로 사용될 수 있으며, 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제와 같은 경피투여형 제형으로 사용할 수 있고, 탕제, 환제, 정제, 산제, 과립제 등의 제제로 사용할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에는 상기 주요성분 이외에도 보조성분으로 비타민 B, C, E나 베타카로틴, Ca, Mg, Zn 등의 미네랄 함유 화합물이나 레시틴 등의 인지질 또는 말톨, 올리고당, 아미노산 등의 화합물을 사용할 수 있다.
또한, 상기 성분 이외에도 공지의 첨가제로서 미각을 돋우기 위하여 매실, 레몬향, 파인애플향 또는 허브향과 같은 천연향료나 천연과즙, 클로르필린(Chlorophyllin), 플라보노이드(Flovonoid) 등의 천연색소 및 감미 성분인 과당, 벌꿀, 당알코올, 설탕 등과 구연산, 구연산나트륨 같은 산미제를 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 또는 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 개선 및 예방용 식품 조성물을 제공한다.
상기 유산균을 함유하는 식품 조성물은, 상기 유산균을 유효성분으로 하는 차, 젤리, 즙, 엑기스, 음료 등의 염증성 장질환 개선 및 예방을 목적으로 하는 식품들을 들 수 있다. 이와 같이 다양한 형태로 가공된 본 발명의 염증성 장질환 예방용 식품 조성물은 인체에 부작용이 없으면서 복용이 용이하고 장기간 보관이 가능하다.
본 발명의 상기 균주 또는 이들의 배양상등액을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 각각의 추출물을 그대로 참가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 상기 균주 또는 이들의 배양상등액을 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 무제가 없으므로 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 상기 균주 또는 이들의 배양상등액을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸컬릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 슈크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 또는 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191은 염증이 유발된 상피세포의 염증성 사이토카인을 효율적으로 억제시킬 수 있으며 다른 유산균 균주에 비해 장 부착능력이 탁월하다. 따라서 본 발명의 두 유산균 균주는 장내 항염증 소재로 가능성을 제시하고, 나아가 염증성 장질환의 치료 및 예방에 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 MTT assay를 이용하여 유산균 처리에 의한 장 상피세포의 세포 증식도를 확인한 결과이다.
도 2는 분리된 유산균의 장 점착능을 측정한 결과이다.
도 3a은 RT-PCR을 이용하여 유산균 처리에 의한 장 상피세포 내 mRNA 수준에서 IL-8 발현 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3b는 도 3a의 RT-PCR 결과를 상대적인 밴드 강도로서 나타낸 그래프이다.
도 4는 ELISA를 이용하여 유산균 처리에 의한 장 상피세포 배양액 내 IL-8의 분비 효과를 확인한 결과이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1. 유산균의 분리 및 동정
하기 표 1의 다양한 유산균주는 한국의 아기와 이집트 아기의 분변, 김치에서 분리한 균주이며, Man, Rogosa, and Saharpe (MRS) 선별배지를 이용하여 37℃에서 18시간 동안 배양하여 분리하였다. 분리 및 선택되어진 16개 균주로부터 16S rRNA를 분리하여 DNA sequencing에 의해 각 균주를 동정하였다.
Figure 112010066841932-pat00001
실시예 2. MTT를 이용한 세포 증식도 확인
세포의 증식도는 MTT assay를 통해 측정하였다. HT-29 세포를 1×104 씨딩(seeding)하여 96웰 플레이트에서 200 μl의 RPMI 배지에서 하루 동안 배양하였다. 실시예 1에서 분리된 유산균 1×106 cfu/ml을 처리한 후 24시간 배양하고, 100 μl의 배지를 제거하고 20 μl의 MTS solution을 첨가한 후, 다시 37℃에서 2시간 배양하였다. 배양 후, OD(optical density) 490 nm에서 ELISA reader를 이용하여 측정하였다. 세포의 생활성은 처리하지 않은 세포를 대조군(control) 100%로 하여 100×(sample 첨가 OD)/(contorol OD)로 나타내었다.
그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1은 MTT assay를 이용하여 유산균 처리에 의한 장 상피세포의 세포 증식도를 확인한 결과이다.
도 1에서, 시험된 16종의 유산균은 모두 장 상피세포인 HT-29 세포의 증식에 유의한 영향을 주지 않는 것으로 확인되었다.
실시예 3. 프로바이오틱스의 장 점착능 측정
장 상피세포는 HT-29 세포는 세포주은행 (ATCC HTB-38)에서 분양받아 사용되었다. HT-29 세포는 열 비활성화된 10% 우태아혈청(FBS), 1% L-glutamine, penicillin G(100 IU/ml)와 streptomycin(100 mg/ml)이 첨가된 RPMI 1640 (Thermo, USA) 배지를 이용하여 5% CO2 존재 하에 37℃에서 배양되었다. 장 부착능력 실험을 위해, HT-29 세포는 웰당 1.0×105 cells/ml의 수가 되도록 12웰 플레이트에 분주되었으며, 격일로 배지를 교환하며 단일층(monolayer)이 형성되었을 때 실험에 이용되었다. HT-29 세포는 실험 12시간 전 non-serum 및 항생제가 첨가되지 않은 배지로 갈아주고, 실험 시 25℃의 PBS 버퍼로 6회 세척 후 사용하였다. 세척 후 non-serum 및 항생제가 첨가되지 않은 RPMI 1640 배지 0.5 ml을 첨가하고, 16종의 유산균을 1×109 CFU/ml의 농도가 되도록 배지에 현탁한 다음 0.5 ml을 HT-29 세포 위에 다시 접종하고 5% CO2 존재 하에 37℃에서 2시간 배양하였다. 배양이 완료된 후, 부착되지 않은 유산균의 제거와 세척에 따른 부착능력을 확인하기 위해 PBS 버퍼를 사용하여 6회 세척을 실시하였다. 세척이 완료된 후 0.2% Trypsin-EDTA를 분주하여 부착되어 있는 세포를 떼어내고 peptone수를 이용하여 연속희석법으로 MRS-agar에 평판도말하고 37℃에서 48시간 배양하여 균수를 측정하였다. 양성대조군으로 락토바실러스 람노서스 GG(Lactobacillus rhamnosus GG)를 사용하여, 2시간 후의 장 부착능력을 비교하며 균수를 log 값으로 변환하여 GG strain 보다 같거나 높은 부착능을 가진 균은 우월한 부착능력을 가진 균으로 평가하였다.
그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2는 분리된 유산균의 장 점착능을 측정한 결과이다.
도 2에서, 평가된 16종의 유산균 중 양성대조군인 락토바실러스 람노서스 GG 균주보다 높은 장 부착능력을 보인 균주는 프로바이오틱스 421, E4191, 411, 및 414로 나타났으며, 이들을 장 부착능이 우수한 균주로 판단하였다.
실시예 4. RT-PCR을 이용한 프로바이오틱스의 IL-8 사이토카인 발현 억제 확인
HT-29 세포를 6웰 플레이트에 웰당 1×106 cells씩 씨딩하고 24시간 배양시켰다. 그 후, non-serum 및 항생제가 첨가되지 않은 배지에 16종의 프로바이오틱 균주를 2시간 처리한 후, 5% CO2 37℃에서 배양하였다. 대조군을 제외하고 1 μg/ml의 LPS (E. coli o111 :b4의 cell wall 분획물)를 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후 HT29 cell 내의 전체 cellular RNA의 분리는 TRIZOL과 phenolchloroform을 이용하여 이루어졌고, 1.5% 아가로즈 겔을 이용하여 확인되었다. 3 μg의 RNA를 역전사 시키기 위해 20 μl reaction mixture를 이용하여 SuperScript™ First-Strans Synthesis System에서 RT-PCR이 실행되었다. 그 후, Taq DNApolymerase를 이용하여 cDNA를 증폭시켰으며, IL-8의 정량을 위해서는 95℃에서 3분간 pre-denaturation, 30 cycle의 amplification cycle (95℃, 30sec → 65℃, 30sec → 72℃, 30sec), 72℃에서 10분간 extension의 조건으로 PCR을 실시하였다.
그 결과를 도 3a에 나타내었다. 도 3a는 RT-PCR을 이용하여 유산균 처리에 의한 장 상피세포 내 mRNA 수준에서 IL-8 발현 억제 효과를 확인한 결과이고, 도 3b는 상대적인 밴드 강도를 나타낸다.
도 3a와 3b에서, 세포내 염증성 사이토카인 IL-8의 발현 억제 효과가 우수한 균주는 프로바이오틱스 308, 421, E4191, 310, 410, 및 402로 확인되었다.
실시예 5. ELISA를 이용한 프로바이오틱스의 IL-8 사이토카인 분비 억제 확인
세포 배양액에 포함된 IL-8의 양을 정량하기 위해 IL-8/NAP-1 immunoassay kit를 이용하여 ELISA reader를 이용하여 측정하였다.
그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4는 ELISA를 이용하여 유산균 처리에 의한 장 상피세포 배양액 내 IL-8의 분비 효과를 확인한 결과이다.
도 4에서, 평가된 16종의 유산균 중 세포 배양액 내 IL-8의 분비 억제 효과가 현저히 우수한 균주는 프로바이오틱스 421, E4191, 411, 및 414 균주로 확인되었다.
이상의 결과를 종합하면, ① 장 부착능력이 우수하고, ② 장 상피세포 배양액 내 염증성 사이토카인인 IL-8의 분비 억제 효과가 우수할 뿐만 아니라, ③ 장 상피세포 내 mRNA 수준에서도 IL-8의 발현 억제 효과가 모두 현저히 우수한 균주는 프로바이오틱스 421과 E4191로 최종 판단하였다.
실시예 6. 선별된 균주의 균학적 특성 확인
실시예 3 내지 5에서 선별된 프로바이오틱스 421과 E4191 균주는 각각 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421과 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) E4191로 명명하였고, 2010년 10월 8일자로 국내기탁기관인 한국미생물보존센터에 기탁되었다. 본 발명에 따른 유산균의 특성은 다음과 같다.
- Leuconostoc paramesenteroides KJP421 (KFCC11496P)
1) 균의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균의 특성
① 세포의 형태: 간균
② 운동성: 없음
③ 포자형성능: 없음
④ 그람(Gram) 염색: 양성
2)생리적 성질
① 생육온도: 생장가능 생육온도: 25~40℃, 최적 생장온도: 36~38℃
② 생육 pH: 생장가능 생육 pH: 5.0~7.5, 최적 pH: 6.0~6.5
③ 산소에 대한 영향: 통성혐기성
4) 카탈라제: -
5) 가스형성여부: -
6) 당 발효 시험 (탄소원)
포도당 : +
- Lactobacillus salivarious E4191 (KFCC11495P)
1) 균의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균의 특성
① 세포의 형태: 간균
② 운동성: 없음
③ 포자형성능: 없음
④ 그람(Gram) 염색: 양성
2)생리적 성질
① 생육온도: 생장가능 생육온도: 25~40℃, 최적 생장온도: 36~38℃
② 생육 pH: 생장가능 생육 pH: 5.0~7.5, 최적 pH: 6.0~6.5
③ 산소에 대한 영향: 통성혐기성
4) 카탈라제: -
5) 가스형성여부: -
6) 당 발효 시험 (탄소원)
포도당: +
한국미생물보존센터(국내) KFCC11496 20101008 한국미생물보존센터(국내) KFCC11495 20101008

Claims (5)

  1. 장내 항염증 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 (KFCC11496P).
  2. 제 1항에 있어서, 락토바실러스 람노서스 GG(Lactobacillus rhamnosus GG)에 비해 장 부착능력이 우수하고, 장 상피세포의 IL-8 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 (KFCC11496P).
  3. 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 (KFCC11496P)을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 약학적 조성물.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 조성물은 장 상피세포의 IL-8 발현을 억제함으로써 장질환 치료 및 예방 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 류코노스톡 파라메센데로데스(Leuconostoc paramesenteroides) KJP421 (KFCC11496P)을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 개선 및 예방용 식품 조성물.
KR1020100101062A 2010-10-15 2010-10-15 장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물 KR101260871B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100101062A KR101260871B1 (ko) 2010-10-15 2010-10-15 장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100101062A KR101260871B1 (ko) 2010-10-15 2010-10-15 장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20120039381A KR20120039381A (ko) 2012-04-25
KR101260871B1 true KR101260871B1 (ko) 2013-05-07

Family

ID=46139776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020100101062A KR101260871B1 (ko) 2010-10-15 2010-10-15 장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101260871B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200099311A (ko) 2019-02-14 2020-08-24 주식회사 메디뉴트롤 글루텐 분해능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 glu70 균주를 유효성분으로 함유하는 글리아딘으로 야기된 염증성 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20200143944A (ko) 2019-06-17 2020-12-28 주식회사 메디뉴트롤 글루텐 분해능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 glu70 균주의 사균체를 유효성분으로 함유하는 글리아딘으로 야기된 염증성 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102041916B1 (ko) 2017-12-15 2019-11-08 (주)녹십자웰빙 신장질환 진행 억제 및 예방용 프로바이오틱스 및 이를 포함하는 신장질환 진행 억제 및 예방용 조성물
KR102118343B1 (ko) 2018-07-13 2020-06-03 롯데푸드 주식회사 장 도달력이 우수하고 장내 염증 예방 효과를 가지는 우유와 발효유
CN110638043A (zh) * 2019-11-04 2020-01-03 光明乳业股份有限公司 一种富含益生菌的全营养配方食品及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Appl. Microbiol. Biotechnol., Vol.74, pp.1103-1111 (Epub. 2006. 11. 29.)*
Immunology, Vol.118, pp.202-215 (2006.06.)*

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200099311A (ko) 2019-02-14 2020-08-24 주식회사 메디뉴트롤 글루텐 분해능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 glu70 균주를 유효성분으로 함유하는 글리아딘으로 야기된 염증성 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20200143944A (ko) 2019-06-17 2020-12-28 주식회사 메디뉴트롤 글루텐 분해능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 glu70 균주의 사균체를 유효성분으로 함유하는 글리아딘으로 야기된 염증성 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR20120039381A (ko) 2012-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101784847B1 (ko) 질염 예방 및 치료용 유산균 함유 조성물 및 이의 용도
CN107075455B (zh) 具有抗炎症及代谢疾病改善功效的植物乳杆菌hac01菌株及其用途
KR101452234B1 (ko) 장수마을 성인으로부터 분리한 배변활동에 도움을 주는 신규한 유산균 락토바실러스 퍼멘텀
KR101638984B1 (ko) 나노형 김치 유산균
KR101825836B1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 Lb41 균주 및 이를 포함하는 당뇨 또는 인슐린 저항성 증후군의 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101768678B1 (ko) 한국 장수마을에서 개발된 건강기능성이 우수한 비피도박테리움 롱검 아종 인판티스 bi9988
KR101680014B1 (ko) 김치로부터 분리한 염증성 장 질환 치료 효과를 갖는 유산균
KR102121826B1 (ko) 간 기능 개선용 유산균 및 이의 용도
KR20190111582A (ko) 염증성 장질환의 치료 또는 예방을 위한 락토바실러스 파라카제이 균주
KR101260871B1 (ko) 장내 항염증 효과를 갖는 유산균 및 이를 함유하는 염증성 장질환 치료 및 예방용 조성물
KR101860513B1 (ko) 질에서 분리한 락토바실러스 살리바리우스 mg242를 포함하는 칸디다성 질염의 예방 또는 치료용 조성물
KR102294445B1 (ko) 영유아 유래 유산균 락토바실러스 파라카제이 mg4592 및 이를 포함하는 장 건강 증진, 항산화 및 항비만용 조성물
KR20190050294A (ko) 신규 유산균 및 이의 용도
KR20160061611A (ko) 신규한 엔테로코커스 페시움 l11 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물
US10456430B1 (en) Lactobacillus composition for prevention and treatment of bacterial vaginosis
KR20190002036A (ko) 블루베리 추출물을 포함하는 장내 유익균의 증식을 위한 프리바이오틱스 및 이의 용도
KR102294437B1 (ko) 영유아 유래 유산균 락토바실러스 플란타럼 mg4553 및 이를 포함하는 장 건강 증진, 항산화 및 항비만용 조성물
KR102294442B1 (ko) 영유아 유래 유산균 락토바실러스 플란타럼 mg4555 및 이를 포함하는 장 건강 증진, 항산화 및 항비만용 조성물
KR20190111584A (ko) 염증성 장질환의 치료 또는 예방을 위한 락토바실러스 퍼멘툼 균주
KR102190239B1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 Lb41 균주 및 이를 포함하는 비만의 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR100865075B1 (ko) 장내 정착성이 우수한 신규 락토바실러스속 ｓｍ1 균주 및이들이 생산하는 생균제
KR102294456B1 (ko) 영유아 유래 유산균 락토바실러스 람노서스 mg4502 및 이를 포함하는 장 건강 증진, 항산화 및 항비만용 조성물
KR101234582B1 (ko) 알파 글루코시다제 활성 저해용 조성물
KR20180040906A (ko) 질염 예방 및 치료용 폴리감마글루탐산 함유 조성물 및 이의 용도
KR20180040894A (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 Lb41 균주 및 이를 포함하는 비만의 예방 및 치료용 약학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160225

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170328

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180406

Year of fee payment: 6