KR101256273B1

KR101256273B1 - 목단피 추출물을 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101256273B1
Application number: KR1020100066136A
Authority: KR
Inventors: 이선미; 김효연
Original assignee: 성균관대학교산학협력단
Priority date: 2010-07-09
Filing date: 2010-07-09
Publication date: 2013-04-18
Also published as: KR20120005617A

Abstract

본 발명은 목단피(Moutan Radicis Cortex) 추출물을 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 목단피 추출물을 유효성분으로 포함하는 간질환 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.

Description

목단피 추출물을 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 조성물{Composition comprising Moutan Radicis cortex extract for preventing or treating liver damage}

간의 주요 기능은 체외에서 유입되거나 체내에서 생성된 각종 물질들을 가공 처리하고 중요한 물질들을 합성 공급하는 것이다. 간질환의 원인은 다양한 것으로 알려져 있으며 병인학적으로 볼 때 바이러스에 기인된 간질환, 약물(독성물질)중독에 기인된 간질환 및 담도기능부전에 의한 간질환 등으로 분류할 수 있다. 이러한 간질환들은 간세포 파괴에 의한 해독능력저하와 담즙분비억제에 의한 독성물질 배설장애, 비타민 B₁,B₂및 C의 흡수억제 및 축적저하에 의한 전신 권태감, 소양감, 식욕부진 및 피로 등의 임상증상을 나타낸다.현재 국내외적으로 사용되고 있는 간질환 치료제로는 합성 약물인 인터페론과 말로틸레이트(malotilate)가 있으나 이들은 간독성 물질에 대한 보호 작용만으로 그의 유효성을 인정받고 있는 수준이며, 부작용 또한 빈번히 나타난다.

현재, 만성 B형 간염에 대한 치료제로서 합성물질인 인터페론-알파(Interferon-alpha)와 라미부딘(Lamivudine)이 사용되고 있지만, 아직 표준 치료법이 확립되어 있지 않다. 만성 C형 간염에 대한 치료제로서 인터페론-알파(Interferon-alpha)와 리바비린(Rivabirin)이 사용되고 있지만, 리바비린(Rivabirin)은 단독으로는 치료효과가 거의 없고, 인터페론-알파(Interferon-alpha)의 단독치료효과는 20~40% 정도로 낮다. 현재는 두 가지 약제를 병합치료하므로서 치료효과가 50% 이상으로 향상되고 있다. 만성 B형 간염과 만성 C형 간염에 대해서 치료효과가 보다 향상된 새로운 치료제가 개발되어야 한다.

또한 마리아 엉겅퀴의 활성성분인 실리마린(silymarin)과 천연물 유래 합성 간질환 치료제인 바이페닐 디메틸 다이카복실레이트(biphenyl dimethyl dicarboxylate)의 개발로 천연물에 대한 관심이 고조되고 있으나, 대다수의 천연물의 경우 유효 용량뿐 아니라 정확한 약리효과에 대한 기초연구 결과가 미약하다.

목단피는 작약과 (Paeoniaceae)에 속하는 목단 (Paeonia suffruticosa Andrews)의 뿌리 껍질로 한의학적으로 청열양혈, 활혈산어, 퇴허혈 작용을 가지고 있어 널리 이용되어 왔다. 목단피 추출물은 생체 외에서 케모카인(chemokine)의 일종인 IL-8 및 MCP-1의 유리를 억제하며, 또한 염증 매개인자인 iNOS 및 COX-2 발현은 억제하는 활성이 보고되어있다. 목단피의 추출물이 HIV 인테그레이즈(HIV integrase)에 대하여 억제활성이 매우 우수하다고 알려졌으며, 목단피의 주성분인 파에오놀(paeonol)은 잔틴 옥사이드(xanthine oxidase)을 억제하여 활성산소의 생성을 억제 시키며, 염증매개인자인 TNF-α의 유리를 억제한다고 알려져 있으나, 간질환과 관련된 치료효과는 보고된 바가 미미하다.

이와 같은 배경하에서 본 발명자들은 간질환의 예방 또는 치료제로서 천연물질을 찾기 위해 예의 노력한 결과, CCl₄, GalN에 의해 유도된 간독성에서 목단피 추출물의 억제 효과를 확인하였으며, 또한 상기 목단피 추출물이 ANIT(1-naphthylisocianate) 유도 담즙울체에 대한 개선 효과 및 에티오닌에 의해 유도되는 지방간을 억제하고 간혈류 개선에 긍정적인 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 목단피(Moutan Radicis Cortex) 추출물을 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 목단피 추출물을 유효성분으로 포함하는 간질환 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 목단피(Moutan Radicis Cortex) 추출물을 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 사용되는 용어, "목단피(Moutan Radics Cortex)"란 작약과의 목단(Paeonia suffruticosa Andrews)의 뿌리껍질로 만든 약재를 말하며, 혈열로 인한 생리불순, 생리통, 멍들었을 때, 토혈, 코피, 반점이 나타나는 증상, 허열로 인해 뼛골이 쑤시는 증상, 혈압상승, 어혈제거, 타박상, 소염 진통, 종기치료, 맹장염 초기 등에 사용되어 왔다. 목단피의 주요한 약리작용으로는 진통, 진정, 해열, 항경련, 항염증, 항혈전, 항알레르기, 위액분비억제, 자궁점막출혈, 항균작용 등이 보고되어 있다. 목단피는 단피, 고왕, 고상, 백양김, 목작약, 모란, 모란뿌리껍질 등으로 알려져 있다. 그러나, 목단피 추출물이 간질환 예방 또는 치료 효과가 있음에 대해서는 공개된 적이 없으며 본 발명자에 의해 최초로 규명되었다.

본 발명에서, 목단피 추출물은 목단피를 세척하고 건조시킨 후 분쇄하는 단계; 및 상기 분쇄된 목단피를 물, C1~C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로 추출하여 수득할 수 있다. 상기 목단피 추출물은 물, C1~C4의 저급 알콜 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매, 바람직하게는 메탄올, 에탄올 또는 부탄올로 추출한 것을 포함하며 에탄올로 추출한 것이 더욱 바람직하다. 또한, 본 발명에 있어서, 상기 추출물에는, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나도 포함하는 것으로 한다.

추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 보다 구체적으로 본 발명에서 목단피 추출물을 얻기 위한 방법은 다음과 같다. 건조 목단피를 건조 중량의 약 2 내지 20배, 바람직하게는 약 3 내지 5배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올 등과 같은 C1~C4의 저급 알콜의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매를 용출 용매로써 사용하고, 추출 온도는 20 내지 100℃, 바람직하게는 25℃에서, 추출 기간은 약 5시간 내지 10일, 바람직하게는 5-10 시간 동안 진탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용하여 추출한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 70% 에탄올로 24시간 냉침 후 남은 잔사를 70% 에탄올을 추출용매로 하여 온침하고, 추출액을 여과후 감압 농축하여 70% 에탄올을 추출 후 목단피 추출물을 확보하였다.

상기 목단피 추출물은 천연, 잡종, 변종 식물의 뿌리 껍질로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하다.

또한, 상기 알콜 농축액에 물을 넣어 현탁시키고, n-헥산, 클로로포름 또는 에틸아세테이트와 같은 비극성 용매를 사용하여 분획함으로써 얻은 용매 분획물을 사용할 수도 있다.

또한, 상기 용매 분획물을 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 이소프로판올 등의 극성 용매 및 에틸아세테이트, n-헥산, 디클로로메탄 또는 클로로포름 등의 비극성 용매 중에서 선택된 2종 이상으로 이루어진 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 분리하여, 간질환 예방 및 치료에 효능이 있는 활성성분을 분리하여 사용할 수도 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 목단피 추출물 또는 그 약제학적 염을 포함하는 조성물의 투여로 간질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 사용되는 용어, "치료"는 본 발명에 따른 추출물 또는 상기의 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "간질환"이란 간이 수행하는 여러 가지 기능 중 한 가지 이상의 기능에 문제가 생겨 정상적으로 대사를 수행할 수 없는 것을 말한다. 간질환에서 가장 많이 나타나는 것은 간염으로 급성 간염과 만성 간염으로 나뉘며, 일반적으로는 급성 간염이 치료하기 쉽고 양성에 속한다. 급성간염은 원인별로 바이러스성 간염, 알코올성 간염, 중독성 간염 등이 있으며, 간질환 중 현재 가장 많이 발견되는 것은 바이러스에 의한 간염이다. 상기 간질환은 본 발명의 목단피 추출물을 이용하여 치료될 수 있는 간질환은 제한없이 포함될 수 있으나, 그 예로 간염, 간독성, 담즙울체, 지방간, 간경변, 간허혈, 알코올성 간 질환, 간농양, 간성 혼수, 간위축증 및 간암일 수 있다. 본 발명에서는 목단피 추출물을 사용하여 간질환의 억제 및 치료효과를 확인하였다.

본 발명의 목단피 추출물은 간세포에서 AST(aspartate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase)의 혈중 농도 증가의 억제를 통해 간질환의 치료 또는 예방을 수행할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "AST(aspartate aminotransferase)"란 아스파테이트 아미노전이효소라고도 하며, 간손상을 알아내는 일차적인 효소로 정상 상태에서는 AST가 간세포내에 존재한다. 그러나 간이 손상을 받게 되면 상기 효소는 혈중으로 유입되어 혈액내 AST 수치가 높아진다. AST의 정상 범위는 혈청 1 리터당 5~40 단위이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "ALT(alanine aminotransferase)"란 알라닌 아미노전이효소라고도 하며, 간세포에 다량 존재하는 효소로 간질환에 특이적인 지표가 되는 효소이다. ALT의 정상범위는 혈청 1 리터당 7~56 단위이다. 상기 두 효소 모두 아미노 그룹을 공여 분자에서 수여분자로 전이시키는 세포내의 화학반응을 촉매하며, AST의 경우 정상적으로 간, 근육, 심장, 뇌를 포함한 다양한 조직에서 발견되나, ALT의 경우 간세포에 다량 존재하므로 간 상태를 나타내는 특이적인 지표가 된다.

본 발명의 목단피 추출물은 CCl₄에 의해 유도된 간독성을 억제 또는 완화하는데 효과가 있으며, GalN에 의해 유도된 급성간염에서 간손상을 억제하고, ANIT유도 담즙울체 증상을 억제하는데 효과가 있으며, 에티오닌에 의해 유도되는 지방간을 억제하는데 효과가 있음을 확인하였다. 본 발명의 구체적인 실시예에 따르면, 목단피 추출물을 CCl₄ 및 GalN으로 간독성을 유도한 세포군에 처리 후 간세포의 파괴와 관련하여 혈액 내 수치가 증가하는 ALT 및 AST의 농도를 확인한 결과, 목단피 추출물을 처리한 군에서 CCl₄ 및 GalN 유발 간독성에 의한 간손상을 억제하는 효과가 있음을 확인하였으며(도 1 내지 도 4), ANIT 유도 담즙울체 증상에 본 발명의 목단피 추출물을 투여하는 경우 상기 증상이 억제되는 효과가 있음을 확인하였다(도 5 및 도 6). 또한, 본 발명의 목단피 추출물을 에티오닌에 의해 지방간을 유도한 간세포에 처리하는 경우, 간세포 괴사 억제, 쿠퍼세포의 비대화 억제 및 지방세포의 과립화를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다(도 7).

본 발명에서 사용되는 용어 "담즙울체"란 간세포에서 만들어진 쓸개즙이 흘러가지 못하고 모세 혈관에 막혀 머물러 있는 간질환의 하나로, 신생아의 경우 담즙의 분비가 담즙의 생성보다 늦게 발달하기 때문에 자연스럽게 나타나기도 한다. 담즙울체가 발생하면 빌리루빈 수치가 상승하며, 담낭 종대현상이 나타나고, 황달증세가 동반되기도 한다.

본 발명의 간질환 예방 또는 치료용 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용되는 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 다른 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 간질환 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 허용 가능하는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 간질환 예방 또는 치료용 조성물은, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 약학적 제형으로 제조될 수 있다. 제형의 제조에 있어서, 활성 성분을 담체와 함께 혼합 또는 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시키는 것이 바람직하다.

따라서, 본 발명의 간질환 예방 또는 치료용 조성물은, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화 하여 사용될 수 있고, 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들어, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크같은 윤활제들도 사용된다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되고, 흔히 사용되는 단순희석제인 물,리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 목단피 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 간질환 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.

본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약제학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 바람직하게 복강 내 투여될 수 있다.

본 발명의 목단피 추출물을 이용한 간질환 치료 방법 및 적용 가능한 질환은 상기에서 설명하는 바와 동일하며, 본 발명의 치료방법은 목단피 추출물을 약학적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다. 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다. 또한, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 목단피 추출물을 유효성분으로 포함하는 간질환 개선용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 식품 조성물을 적용할 수 있는 간질환에는 간염, 간독성, 담즙울체, 지방간, 간경변, 간허혈, 알코올성 간 질환, 간농양, 간성 혼수, 간위축증 및 간암일 수 있다.

본 발명의 간질환 개선용 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

본 발명의 간질환 개선용 식품 조성물에서 포함할 수 있는 필수 성분으로 상기 목단피 추출물을 포함하는 간질환 예방 및 치료 활성을 갖는 조성물 또는 그의 유효 성분, 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별히 제한이 없으며 통상의 식품과 같이 여러가지 생약추출물, 식품 보조 첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

또한, 상기 언급한 바와 같이 식품보조첨가제를 추가로 첨가할 수도 있는바 식품보조첨가제는 당업계에 통상적인 식품보조첨가제, 예를 들어 향미제, 풍미제, 착색제, 충진제, 안정화제 등을 포함한다.

상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 간질환 개선용 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 목단피 추출물을 포함하는 조성물은 간질환의 예방 또는 치료 효과가 뛰어나고, 합성된 화합물이 아니라 천연물 유래의 추출물 또는 이의 활성성분을 사용하므로 안전하고 독성, 부작용이 거의 없어 장기간 체내에 사용할 수 있는 장점이 있으므로, 간질환의 예방 또는 치료용 조성물, 간질환 개선용 식품 조성물 등으로 사용할 수 있다.

도 1은 CCl₄-유도 간독성 모델에서 혈청 ALT 및 AST의 활성에 대한 목단피 추출물의 영향을 확인한 것이다. 수치는 실험 그룹당 마우스 9-11마리의 평균±SEM을 나타낸다. ^**는 대조군 그룹과 유의적인 차이(P<0.01)를 나타낸다; ^{+. ++}는 CCl₄ 그룹과 유의적인 차이(P<0.05, P<0.01)를 나타낸다. CCl₄는 사염화탄소를 나타낸다.
도 2는 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 간조직을 나타낸다. 마우스에 비히클 또는 목단피 추출물(300 ㎎/㎏)을 사염화탄소 투여 24시간, 2시간 전 및 투여 후 6시간 후에 경구 투여하였다. (A): 대조군 그룹은 정상 간 구조를 나타낸다. (B): CCl₄ 그룹은 간세포의 파괴 및 염증 침윤으로 인한 세포괴사를 나타낸다. (C): 목단피 추출물(300 ㎎/㎏)+CCl₄ 처리군은 경미한 간세포 괴사 및 염증 침윤을 나타낸다. 원래 배율X400.
도 3은 GalN 유도 간염에서 혈청 ALT 및 AST에 대한 목단피 추출물이 미치는 영향을 나타낸 것이다. 수치는 실험 그룹당 마우스 9-11마리의 평균±SEM을 나타낸다. ^**는 대조군 그룹과의 유의적(P<0.01)인 차이를 나타낸다; ^{+. ++}는 GalN 그룹과의 유의적인 차이(P<0.05, P<0.01)를 나타낸다. GalN은 D(+)-갈락토사민을 나타낸다.
도 4는 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 간조직을 나타낸다. 래트에 비히클 또는 목단피 추출물(300 ㎎/㎏)을 GalN 투여 24시간, 2시간 전 및 투여 후 6시간 후에 경구 투여하였다. (A): 대조군 그룹은 정상 간조직을 나타낸다; (B): GalN 그룹은 염증 침윤이 동반된 세포괴사를 나타낸다; (C): 목단피 추출물(300 ㎎/㎏)+GalN 처리그룹은 경미한 간세포 괴사 및 염증침윤을 나타낸다. 원래 배율X400.
도 5는 ANIT-유도 담즙울체에서 쓸개즙에 대한 목단피 추출물의 영향을 나타낸 것이다. 수치는 그룹당 7-8 마리의 평균 ±SEM을 나타낸다. ^**는 대조군 그룹과의 유의적인 차이(P<0.01)를 나타낸다; ⁺⁺는 ANIT 그룹과의 유의적인 차이(P<0.01)를 나타낸다. ANIT은 α-나프틸이소티오시아네이트를 나타낸다.
도 6은 ANIT-유도 담즙울체에서 전체 빌리루빈에 대한 목단피 추출물의 영향을 나타낸다. 수치는 그룹당 7-8 마리 래트의 평균±SEM을 나타낸다. ^**는 대조군 그룹과의 유의적인 차이(P<0.01)를 나타낸다; ⁺⁺는 ANIT 그룹과의 유의적인 차이(P<0.01)를 나타낸다. ANIT은 α-나프틸이소티오시아네이트를 나타낸다.
도 7은 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 간조직을 나타낸다. 래트에 비히클 또는 목단피 추출물(300 ㎎/㎏)을 에티오닌 투여 24시간, 2시간 전 및 투여 후 6시간 후에 경구 투여하였다. (a): 대조군은 정상 간조직을 나타낸다. (b): 에티오닌 그룹은 염증침윤이 일어난 지방세포 조각을 나타낸다; (c): 목단피 추출물(300 ㎎/㎏)+에티오닌 그룹은 지방세포 조각 및 염증 침윤의 경미한 변화를 나타낸다. 원래배율X400.
도 8은 허혈/재관류 과정 중 혈청 ALT에 미치는 목단피 추출물의 영향을 나타낸 것이다. 수치는 그룹당 7-8 마리 래트의 평균±SEM을 나타낸다. ^**는 대조군 그룹의 유의적인 차이(P<0.01)를 나타낸다; ⁺⁺는 비히클 처리된 I/R 그룹의 유의적인 차이(P<0.05)를 나타낸다. I/R은 허혈/재관류를 나타낸다.

이하, 하기 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 이들 실시예는 본 발명을 상세히 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한 되는 것은 아니다.

실시예 1: 목단피 추출물의 준비

표준품 규격의 목단피(약초약업사) 500g을 준비하였다. 상기 목단피를 70% 에탄올로 24시간 동안 냉침 후, 남은 잔사를 70% 에탄올을 추출용매로 이용하여 55~60℃에서 환류하여 온침을 3회 실시하였다. 추출액을 여과 후, 감압농축하여 70% 에탄올 추출하여 목단피 추출물을 수득하였다. 최종 목단피 추출물은 90.1g으로 수득율이 18.0%였다.

실시예 2: 약물 및 간손상 유발 물질 투여

2-1. 간손상 유발 물질 투여 및 약물 투여

약물투여는 목단피(30, 100 및 300 mg/kg)를 Tween 80-생리식염수에 용해시킨 후, CCl₄ (carbon tetrachloride), 갈락토사민 (galactosamine), ANIT (1-naphthylisocianate), 에티오닌 (ethionine) 투여 48시간, 24시간, 2시간 전 및 투여 후 6시간 후에 경구투여 하였다. 모든 실험동물은 간손상 유발 물질 투여 후 24시간에 채혈한 후 간을 적출하여 실험에 사용하였다.

2-2. CCl ₄ 유도 간독성

18 시간 절식시킨 생쥐에 CCl₄: olive oil혼합액(0.015 : 9.985, v/v)을 체중 10 g 당 0.1 ml씩 복강 내 투여하고 24시간 후 에테르로 마취한 뒤 복부 대정맥으로부터 혈액을 채취하였다. 혈액을 원심 분리하여 취한 혈청으로부터 ALT (alanine aminotransferase) 및 AST (aspartate aminotransferase) 활성을 측정하였다. 실험물질은 CCl₄투여 2일 전부터 1일 1회 동일한 시각에 경구 투여하였으며 CCl₄투여 당일에는 CCl₄투여 전 2시간 및 투여 후 6시간째에 경구 투여하였다.

2-3. GalN 유도 간염

18시간 절식시킨 흰쥐에 GalN (700 mg/kg, PBS)을 복강 내 투여하고 24시간 경과 후 혈액 및 간조직을 채취한 후 혈청 내 ALT, AST 활성, TG (triglyceride) 및 TC (총 cholesterol) 함량을 측정하였다. 실험물질은 GalN 투여 2일 전부터 1일 1회 동일한 시각에 경구 투여하였으며, GalN 투여 당일에는 GalN 투여 전 2시간 및 투여 후 6시간째에 경구 투여하였다.

2-4. ANIT 유도 담즙울체

18시간 절식시킨 흰쥐에 olive oil에 용해시킨 ANIT (40 mg/kg)를 복강 내로 투여하였음. ANIT 투여 48시간 후에 복부를 개복하여 담관에 카테터를 삽입시켜 1시간 동안 담즙을 채취하여 담즙 분비량을 측정한 후, 복부 대동맥으로부터 혈액을 취하여 혈청 내 ALT, AST 활성 및 총 빌리루빈치를 측정하였다. 실험물질은 ANIT 투여 2일 전부터 1일 1회 동일한 시각에 경구 투여하였으며, ANIT 투여 당일에는 ANIT 투여 전 2시간 및 투여 후 6시간째에 경구로 투여하였다.

2-5. 에티오닌 유도 지방간

18시간 절식시킨 흰쥐에 에티오닌 (500 mg/kg, PBS)을 복강 내 투여하고 24시간 경과 후 혈액 및 간조직을 채취한 후 간장내 TG 및 혈청 중 TC 함량을 측정하였다. 실험물질은 에티오닌 투여 2일 전부터 1일 1회 동일한 시각에 경구 투여하였으며, 에티오닌 투여 당일에는 에티오닌 투여 전 2시간 및 투여 후 6시간 째에 경구 투여하였다.

2-6. 간 허혈 수술( Hepatic ischemia procedure )

흰쥐를 18시간동안 절식시킨 후 케타민(ketamin, 60 mg/kg) 및 자일라린(xylazin, 8 mg/kg)으로 마취시켰으며, 복부 정중선을 따라 개복하여 문맥의 왼쪽분지와 간장 내 산소 공급에 주된 역할을 하는 간동맥 및 담관을 클램프하여 60분간 허혈을 유발시킨 후 클램프를 제거하여 재관류를 일으켰다. 재관류 5시간에 복부 대동맥으로부터 혈액을 채취하고 간의 좌엽 및 중앙엽을 적출하여 -80℃에 보관 후 분석에 사용하였다. 대조군은 문맥의 왼쪽분지, 간동맥 및 담관에 클램프만을 놓지 않고 모든 시험법을 위와 동일하게 시행하였다. 실험물질은 2일 전부터 1일 1회 동일한 시각에 경구 투여하였으며, 수술 당일에는 1시간에 경구 투여하였다.

실시예 3: 분석과정

3-1. 혈청 내 ALT 및 AST 활성

혈청 내 ALT 및 AST 활성은 IVD Lab kit (아이비디랩, 한국)를 사용하여 분광광도계(spectrophotometer, UV-1601, Simadzu, 일본)로 측정하였다.

3-2. 혈청 내 트리글리세리드 및 총 콜레스테롤 함량

혈청 내 트리글리세리드(triglyceride) 및 총 콜레스테롤 함량은 혈액을 원심 분리하여 얻은 혈청을 IVD Lab kit (아이비디랩, 한국)를 사용하여 분광광도계 (UV-1601, Simadzu, 일본)로 측정하였다.

3-3. 간 조직 내 트리글리세리드 및 총 콜레스테롤 함량

간조직 내 트리글리세리드 및 총 콜레스테롤 함량은 간조직 중 50mg을 적출하여 분쇄한 후, 클로로폼-메탄올 (2:1)용액을 첨가하고 원심분리 하여, 간조직 내 함유되어 있는 지질 성분을 추출 후, 추출액을 Chemilab TG kit(아이비디랩, 한국)를 사용하여 분광광도계 (UV-1601, Simadzu, 일본)로 측정하였다.

3-4. 담즙 분비량 측정

담즙 분비량의 측정은 복부 정중선을 따라 개복하여 담관에 카테터를 삽입시켜 미리 무게를 측정해 놓은 마이크로 튜브에 취하였으며, 이 차이를 담즙 분비량으로 환산하였다.

3-5. 혈청 내 총 빌리루빈 함량

혈청 내 총 빌리루빈 함량은 혈액을 원심 분리하여 얻은 혈청을 IVD Lab kit (아이비디랩, 한국)를 사용하여 분광광도계 (UV-1601, Simadzu, 일본)로 측정하였다.

3-6. 통계학적 분석

본 시험에서 얻어진 자료는 평균 ± 표준오차로 나타내며 이에 대한 통계학적인 분석은 one-way ANOVA를 시행하여 p < 0.05의 수준에서 유의성이 인정되는 경우 Dunnett’s test로 시험 군 간의 차이를 비교하였다.

실험예 1: CCl ₄ 유도 간독성에 대한 목단피의 보호 효과

1-1. 혈청 중 ALT 및 AST 활성에 미치는 영향

CCl₄ 유도 간독성 모델에서 목단피를 투여하여 간 보호 효과를 관찰한 결과 대조군의 혈액내 ALT 및 AST 활성은 각각 38.6 ± 3.4 U/L와 29.1 ± 4.6 U/L로 낮은 수치를 나타내었으나 CCl₄ 처치로 ALT 및 AST 활성이 각각 1983.0 ± 43.7 U/L와 1764.2 ± 237.1 U/L로 대조군에 비해 현저히 증가하였다. 목단피의 30, 100 및 300 mg/kg에서 각각 1315.6 ± 196.2 U/L, 1075.5 ± 120.1 U/L 및 739.4 ± 174.2 U/L의 ALT 활성을 나타내어 CCl₄에 의한 간손상을 현저히 억제하였다. CCl₄처치로 인한 AST 활성 증가 또한 ALT 활성과 유사하게 목단피의 300 mg/kg에서 960.3 ± 127.6 U/L로 현저히 억제되었다 (도 1).

1-2. 조직학적 분석

CCl₄ 유도 급성 간독성 모델에서 목단피가 간의 조직학적 변화에 미치는 영향은 도 2에서 보는 바와 같이 간조직의 염색 결과, CCl₄ 단독 투여군(도 2B)에서는 문맥 주위 염증, 간세포 괴사 및 쿠퍼 세포(Kupffer cell) 비대가 관찰되었으나 목단피 300 mg/kg 투여군 (도 2C)에서 이러한 변화가 현저히 완화되었다. 이는 목단피의 혈중 ALT 및 AST 결과를 일관성 있게 뒷받침하였으며, 이로서 목단피가 CCl₄로 유도된 급성 간독성에 있어 보호 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 2: GalN 유도 간독성에 대한 목단피의 보호 효과

2-1. 혈청 중 ALT 및 AST 활성에 미치는 영향

흰쥐의 GalN 유도 간염 모델에서 목단피를 투여하여 간 보호 효과를 관찰한 결과, 대조군의 혈액내 ALT 및 AST 활성은 각각 41.6 ± 3.4 U/L 및 54.6 ± 0.8 U/L로 낮은 수치를 나타내었으나 GalN 처치로 ALT 및 AST 활성이 각각 235.7 ± 28.6 U/L와 664.5 ± 41.7 U/L로 대조군에 비해 현저히 증가하였다. 목단피의 300 mg/kg에서 148.3 ± 19.2 U/L의 ALT 활성을 나타내어 GalN에 의한 간손상을 현저히 억제하였다. GalN 처치로 인한 AST 활성 증가는 목단피의 30, 100 및 300 mg/kg에서 각각 539.3 ± 27.5 U/L, 468.9 ± 18.8 U/L 및 530.1 ± 28.3 U/L로 현저히 억제되었다 (도 3).

2-2. 간 조직학적 손상에 미치는 영향

도 4에서 보는 바와 같이 간조직의 염색 결과, GalN 단독 투여군(도 4B)에서는 문맥 주위 염증이 관찰되었으나 목단피 300 mg/kg 투여군(도 4C)에서 이러한 변화가 현저히 완화되었다. 이는 목단피의 혈중 ALT 및 AST 결과를 일관성 있게 뒷받침하였으며, 이로서 목단피가 GalN로 유도된 급성 간염에 있어 보호효과가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 3: ANIT 유도 담즙울체에 대한 목단피의 보호 효과

3-1. 담즙 분비량에 미치는 영향

대조군의 담즙 분비량은 1.884 ± 0.461 ml/min/liver g b.wt 이었으나, ANIT 단독처치군의 담즙 분비량은 0.491 ± 0.062 ml/min/liver g b.wt 로 대조군에 비해 현저하게 감소하였다. 이러한 감소는 목단피 100 및 300 mg/kg 투여군에서 각각 0.579 ± 0.062 및 0.837 ± 0.035ml/min/liver g b.wt로 ANIT 단독처치군에 비해 현저히 억제되었다 (도 5).

3-2. 총 빌리루빈에 미치는 영향

총 빌리루빈 양은 대조군의 경우 0.301 ± 0.061 mg/dl이었으나, ANIT 단독처치군은 0.667 ± 0.068 mg/dl로 대조군에 비해 현저하게 증가하였다. 이러한 증가는 목단피 100 및 300 mg/kg 투여군에서 각각 0.418 ± 0.033 mg/dl 및 0.241 ± 0.065 mg/dl로 ANIT 단독처치군에 비해 현저히 억제되었다 (도 6).

실시예 4: 에티오닌 유도 지방간에 대한 목단피의 보호 효과

4-1. 간 조직학적 손상에 미치는 영향

도 7에서 보는 바와 같이 간조직의 염색 결과, 에티오닌 단독 투여군(도 7B)에서는 간세포 괴사, 쿠퍼 세포 비대와 지방 구(fatty droplet)의 생성이 관찰되었으나 목단피 300 mg/kg 투여군(도 7C)에서 이러한 변화가 현저히 완화되었다.

실시예 5: 간혈류 개선에 대한 목단피의 보호 효과

5-1. 혈청 중 ALT 함량에 미치는 영향

간 허혈 및 재관류 손상 시 목단피의 혈청 중 ALT 활성에 미치는 영향을 확인한 결과, 대조군의 경우 114.4 ± 60.2 U/L 이었으나 이는 허혈 및 재관류 손상 후 5810.8 ± 194.0 U/L 로 대조군에 비해 현저히 증가하였다. 이는 목단피 300 mg/kg 투여군에서 각각 1520.5 ± 134.2 U/L 로 현저히 억제되었다 (도 8).

상기와 같은 결과는, 본 발명의 목단피 추출물이 간질환의 여러 모델에서 보호 효과를 나타내는 것을 시사하는 결과이다.

Claims

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물, C1 ~ C4의 저급 알콜 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 목단피(Moutan Radicis Cortex) 추출물을 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 조성물.
제8항에 있어서, 상기 추출물은 물, 에탄올 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것인 조성물.
제8항에 있어서, 상기 저급 알콜 용매는 메탄올, 에탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 것인 조성물.
제8항에 있어서, 상기 용매는 70% 에탄올인 것인 조성물.
제8항에 있어서, 상기 간질환은 간염, 간독성, 담즙울체, 지방간, 간경변, 간허혈, 알코올성 간 질환, 간농양, 간성 혼수, 간위축증 및 간암으로 구성되는 군으로부터 선택된 간질환인 조성물.
제8항에 있어서, 상기 목단피 추출물은 간세포에서 AST(aspartate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase)의 혈중 농도 증가를 억제하는 것인 조성물.
제8항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것인 조성물.
제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 유효성분으로 포함하는 간질환 개선용 식품 조성물.