KR101248617B1

KR101248617B1 - 초음파에 의한 콜라겐을 추출하는 방법

Info

Publication number: KR101248617B1
Application number: KR1020100139655A
Authority: KR
Inventors: 이남혁; 김영호; 김현경; 우제환
Original assignee: 한국식품연구원
Priority date: 2010-12-30
Filing date: 2010-12-30
Publication date: 2013-03-28
Also published as: KR20120077625A

Abstract

본 발명은 초음파기에 의한 콜라겐을 추출하는 방법에 관한 것으로 좀더 자세하게는, 어피를 산성용액하에서 초음파 처리하여 콜라겐 추출물을 수득하는 제 1단계; 상기 콜라겐 추출물에서 콜라겐과 초음파 처리된 어피를 분리하는 제 2단계; 및 상기 초음파 처리된 어피를 제 1단계 및 제 2단계를 반복하여 수행하여 콜라겐을 추출하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 의한 콜라겐 추출 방법은 어피에 0.01M의 아세트산을 사용하여 초음파 처리하므로써, 기존의 콜라겐 추출 방법보다 산성 용액의 농도를 줄이고 높은 수율로 콜라겐을 추출할 수 있다. 또한 본 발명의 콜라겐 추출방법에 의하면 콜라겐의 가수분해물 형태가 아닌 고분자량의 콜라겐을 기본 구조 그대로 유지하면서 추출 할 수 있다.

Description

초음파에 의한 콜라겐을 추출하는 방법{A METHOD OF EXTRACTING COLLAGEN BY ULTRASONICATION}

본 발명은 초음파에 의한 콜라겐을 추출하는 방법에 관한 것이다.

콜라겐은　피부, 혈관, 뼈, 내장 등 거의 모든 조직에 포함되어 있으며, 신체를 구성하는 단백질의 약 30%를 점유하고 있는 주요 단백질이다. 인체를 구성하고 있는 콜라겐 중 약 40%는 피부에 존재하며, 20%는 뼈 및 연골에 포함되어 있고, 그 외 혈관, 내장 등 광범위하게 분포되어 있다. 이러한 콜라겐은 예부터 젤라틴 등의 형태로 식용되어 왔으며, 이러한 것들은 최근에는 소화관내 효소에 의해 분해되어 펩타이드나, 아미노산의 형태로 흡수되는데 이들은 면역기능을 향상시키고, 세포의 재생작용을 촉진시켜 관절을 튼튼하게 해주며, 피부의 신진대사 활성화 및 보습력 유지를 통하여 피부미용에 탁월한 효과를 나타내는 것으로 알려지고 있다. 콜라겐은 주로 가축의 가죽, 뼈, 관절 등에서 추출하는데 최근 BSE, 구제역 등의 발생으로 동물성 콜라겐에 대한 인식이 나빠지고 있으며, 어류의 피부, 비늘 등에서 추출한 마린콜라겐의 가치가 증대되고 있다.

한편, 이들의 콜라겐은 산, 알칼리, 염 등과 같은 화학물질을 사용하여 추출하는데, 이에 따른 환경오염 및 폐수처리 비용 등의 문제점이 뒤따르고 있으며, 따라서 최근에는 가능한 화학물질을 사용하지 않고 친환경적으로 추출할 수 있는 방법에 대한 연구가 중요시 되고 있다.

본 발명은 초음파 처리를 통한 콜라겐의 추출 방법으로 화학물질의 사용을 최소화하여 어피로부터 콜라겐의 수율을 최대로 추출하는데 목적이 있다.

본 발명의 “어피”란 가용성인 해양 생물로부터 유래되는 마린 콜라겐을 포함하는 것으로 어류의 비늘이 제거된 것을 말한다. 이는 특성상 산성 용매를 가하지 않고 초음파 처리만 하는 경우 콜라겐 섬유의 구조적 변화를 일으키기 어려워 콜라겐의 분리를 위해서는 산성 용매가 반드시 필요하다. 본 발명에서는 산성 용매의 존재하에 초음파 처리를 병행하므로 최소 농도의 산성 용매하에서도 높은 수율로 콜라겐을 용출시킬 수 있다. 따라서, 콜라겐의 분리에 사용되는 산의 양을 현저히 감소시킬 수 있다.

본 발명의 “콜라겐”은 동물의 결합조직, 뼈, 힘줄, 피부, 연골, 혈관 등을 구성하는 섬유상 구조단백질로 기본적 구조단위는 트로포콜라겐 (tropocollagen)으로 분자량 약 10만의 3개의 폴리펩타이드로 이루어지는 3중 나선구조를 갖고 있는 것을 말하며, 폴리펩티드 사슬 3 개가 서로 수소결합으로 안정화되어 있으나, 가열하면 이들 소수 결합이 절단되어 무작위 코일 상의 젤라틴으로 되어 물성이 변화할 수 있다.

본 발명의 “초음파 처리”는 초음파 에너지가 목적대상의 입자를 진동시켜서 대상을 파괴하거나 비활성화 시키는 것으로, 생화학에서는 세포막을 파괴하여 세포 내용물이 배출되도록 하는 목적으로 주로 사용되며, 이에 한정하지는 않지만, 가청주파영역(약 20kHz 이하)보다 높은 진동수의 음파를 사용한다.

일 구체예에서, 본 발명은 어피를 산성용액하에서 초음파 처리하여 콜라겐 추출물을 수득하는 제 1단계; 상기 콜라겐 추출물에서 콜라겐과 초음파 처리된 어피를 분리하는 제 2단계; 및 상기 초음파 처리된 어피를 제 1단계 및 제 2단계를 반복하여 수행하여 콜라겐을 추출하는 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 산성용액이 0.01~0.5M의 아세트산이거나, 초음파 처리는 20kHz 주파수에서 이루어지거나, 초음파의 진폭이 20~80%이거나, 초음파 처리가 0.1 내지 24 시간 동안 수행되거나, 초음파 처리가 0 내지 10 ℃에서 수행되거나, 콜라겐 추출물을 원심분리하여 상등액을 수득하고, 이 상등액에 염화나트륨(NaCl)을 가하여 침전시켜서 콜라겐을 추출 또는 분리할 수 있다.

일 구체예에서, 본 발명의 방법은 8회 추출하는 경우에 초음파의 진폭이 20~40%으로 수행하는 방법과 초음파 처리가 24 시간 동안 수행하는 방법을 제공한다.

일 구체예에서, 본 발명의 방법에 의하여 추출된 콜라겐을 제공한다.

본 발명에 의한 콜라겐 추출 방법은 초음파 처리 반복하여 실행하므로써, 기존의 콜라겐 추출 방법보다 산성 용액의 농도를 줄이고 높은 수율로 콜라겐을 추출할 수 있다. 또한 본 발명의 콜라겐 추출방법에 의하면 콜라겐의 가수분해물 형태가 아닌 고분자량의 콜라겐을 기본 구조 그대로 유지하면서 추출 할 수 있다.

도 1 내지 도 4 는 실시예 1 내지 4의 방법으로 콜라겐을 분리하는 경우 콜라겐의 분리 수율을 나타낸 것이다.
도 5 는 비교예 1 내지 4의 방법으로 분리하는 경우 콜라겐의 분리 수율을 나타낸 것이다.
도 6 은 실시예 1 내지 4의 방법으로 분리하는 경우 콜라겐의 최대 수율을 나타낸 것이다.
도 7 은 비교예 1 내지 4의 방법으로 분리하는 경우 콜라겐의 최대 수율을 나타낸 것이다.
도 8 은 실시예 1 및 3의 방법으로 콜라겐을 분리하는 경우 분리된 콜라겐의 SDS-PAGE 패턴을 나타낸 것이다.
도 9 는 비교예 2 내지 4의 방법으로 콜라겐을 분리하는 경우 분리된 콜라겐의 SDS-PAGE 패턴을 나타낸 것이다.
도 10 은 0.5M 아세트산으로 24 시간 처리하는 것과 동일한 수율을 나타낼 때까지 산성 용매의 존재하에서 초음파 처리를 한 경우 걸리는 시간을 나타낸 것이다.
도 11 은 분리된 콜라겐과 콜라겐을 젤라틴화 시킨 경우 소화력을 평가하여 나타낸 것이다.
도 12는 초음파처리를 반복 횟수에 따른 콜라겐의 추출 수율을 나타낸 그래프이다.
도 13은 초음파 처리 반복 횟수에 따라 분리된 콜라겐의 SDS-PAGE 패턴을 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1. 시료의 전처리

시료는 (주)오성양어장으로부터 농어의 냉동어피를 제공받아 사용하였다. 어피는 일부 안쪽에 잔존하는 농어근육과 비늘을 제거한 후 얼음물에 세척하여 불순물을 제거하였으며, 1.0 cm×1.0 cm의 크기로 세절하였다. 어피에 붙어있는 염용성 단백질을 완전히 제거하기 위하여 어피 중량에 대하여 20배의 0.5 M NaCl 용액을 가한 후 잘 교반하여, 6,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 이와 같은 조작을 3회 반복하였으며, 모든 조작은 4 ℃이하에서 행하였다. 원심분리로 얻어진 침전물을 다시 4 ℃이하에서 보관한 정제수로 세척한 후, 침전물에 대하여 약 20 배 중량의 냉 에탄올을 첨가하여 4 ℃에서 24시간 동안 교반하면서 탈지하여 이를 정제시료로 하였다. 정제시료는 -20 ℃이하에서 보관하면서 필요 시 꺼내어 사용하였다.

실시예 2. 콜라겐의 추출

2-1. 초음파 처리에 의한 콜라겐의 추출

상기 실시예 1에서 준비된 어피에 약200배 중량의 0.01 내지 0.5M의 아세트산을 가한 후, 4 ℃에서 하기 표 1의 조건으로 초음파 처리를 하였다. 펄스 on/off 는 20 sec/20 sec 로 하였다. 초음파 처리 후 얻어진 점성의 용액을 6,000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상등액을 분리하고 상등액에 NaCl을 5 wt%가 되도록 첨가하여 백색침전을 얻었다. 상기 백색침전을 원심분리하고 정제수로 투석 후, 동결건조하여 콜라겐을 추출하였다.

구분		진폭(Amplitude)	아세트산 농도(M)
제조예1	제조예 1-1	20	0.01
	제조예 1-2		0.1
	제조예1-3		0.5
제조예2	제조예2-1	40	0.01
	제조예2-2		0.1
	제조예2-3		0.5
제조예3	제조예3-1	60	0.01
	제조예3-2		0.1
	제조예3-3		0.5
제조예4	제조예4-1	80	0.01
	제조예4-2		0.1
	제조예4-3		0.5

2-2. 산 가용성 콜라겐의 추출

시료 중량에 대하여 하기 표 2의 조건으로 200 배량의 0~0.5 M 아세트산을 첨가하여 4℃에서 24시간 동안 교반하면서 추출하였다. 얻어진 점성의 용액을 6,000rpm에서 10 분간 원심분리한 후 상등액을 분리하고 상등액에 NaCl을 5wt%가 되도록 첨가하여 백색침전을 얻었다. 상기 백색침전을 원심분리하고 정제수로 투석 후, 동결건조를 하여 콜라겐을 추출하였다.

구분	아세트산 농도(M)
비교예 1	0
비교예 2	0.01
비교예 3	0.1
비교예 4	0.5

2-3. 초음파 처리 반복에 의한 콜라겐의 추출

상기 실시예 1에서 준비된 어피에 약200배 중량의 0.01M의 아세트산을 가한 후, 4 ℃에서 3시간 동안 40% 내지 80%의 진폭으로 초음파 처리를 하였다. 펄스 on/off 는 20sec/20sec로 하였다. 초음파 처리 후 얻어진 점성의 용액을 6,000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상등액(콜라겐)을 분리하고, 침전(잔사)에 다시 200배 중량의 0.01M의 아세트산을 가한 후 4 ℃에서 3시간 동안 40% 내지 80%의 진폭으로 초음파 처리를 하였다. 원심 분리로 콜라겐을 분리하고 나머지 잔사에 다시 0.01M 아세트산을 가하여 반복하는 작업을 총 4회 내지 8회를 하여 콜라겐을 분리하였다. 상기와 같이 총 4 내지 8회의 작업에 걸쳐 모아진 상등액을 동결건조하여 콜라겐을 추출하였다(도 12 참조).

실험예 3. 콜라겐 수율의 측정

상기 제조예 및 비교예에서 얻어진 시료를 15,000×g에서 20분간 원심분리하여 얻은 상등액을 Biuret법(Gornall, A, G.등, 1949)을 이용하여 단백질 함량을 측정하였다. 콜라겐 수율은 총 단백질 함량에 대한 초음파 처리 후 단백질 함량의 비로 다음과 같은 식에 의해서 산출하였다.

콜라겐 수율(%) = (상등액 중의 단백질 농도/총 단백질 농도)×100

처리시간에 따른 콜라겐 수율을 도 1 내지 도 5에 나타내었다. 도 1 내지 4 는 제조예 1 내지 4의 아세트산 농도에 따른 콜라겐의 수율을 나타내며, 도 5는 비교예 1 내지 5의 산 농도에 따른 콜라겐의 수율을 나타낸 것이다. 도 1 내지 4에 의하면 초음파 처리를 함으로서 초음파 처리를 하지 않은 도 5와 비교하여 콜라겐의 수율이 빠르게 증가하는 것으로 나타났다. 더욱이 진폭이 커짐에 따라서 증가하는 속도가 빠르게 나타났다. 도 5에 의하면, 초음파 처리를 하지 않고 0.01M의 낮은 농도의 아세트산으로만 처리하는 경우에는 거의 콜라겐이 분리되지 않았으나, 도 1 에 의하면, 20 kHz에서 진폭 20 %의 초음파로 처리하였을 경우 0.01M 의 저농도 아세트산 하에서도 콜라겐의 분리 양이 증가하기 시작하였다. 또한, 도 2 내지 4 에 의하면 농도가 높아질수록 콜라겐의 증가 폭도 더욱 크게 나타났으며, 같은 조건하에서 진폭이 높을수록 그 증가속도는 더욱 빠르게 나타났다. 따라서, 콜라겐의 분리능은 아세트산의 농도 및 초음파 진폭에 의존하여 증가하는 것으로 보인다.

또한, 초음파 반복 추출에 따라 얻어진 콜라겐의 수율을 도 12에 나타내었다. 3시간 동안 40% 진폭의 초음파 처리를 8회 추출한 콜라겐의 수율은 종래의 방법인 0.01M의 아세트산 하에서 24시간 추출된 콜라겐의 수율보다 3배 이상 증가되었다. 그리고 3시간 동안 80% 진폭의 초음파 처리를 4회 추출한 콜라겐의 수율은 종래의 방법인 0.01M의 아세트산 하에서 12시간 추출된 콜라겐의 수율보다 약 2배가량 증가되었다. 따라서, 초음파 반복 추출했을 때에 콜라겐의 수율은 초음파의 진폭에 반비례하면서 추출 횟수에 비례하는 것을 알 수 있었다.

<콜라겐의 최대 수율 측정>

상기 제조예 1 과 같은 방법으로 콜라겐의 수율을 측정하고, 수율이 증가할 때 그 속도(k i )를 다음의 식으로 산출하였다.

K i = (n t -n o )

여기서, n t : 초음파 처리 t 시간 후의 용해도

n o :초음파 처리 전의 용해도

t:초음파 처리 시간

그 결과는 도 6 및 7에 나타내었다. 도 6 은 제조예 1 내지 4의 산성 용매 하에서 초음파로 처리한 경우 및 비교예 1 내지 4의 산성 용매로만 처리한 경우의 콜라겐 최대 수율을 나타낸 것이다. 도 6에서 각각의 기호는 0%(●), 20%(○), 40%(▼), 60%(▽) 및 80%(■) 진폭을 나타낸다. 도 7은 콜라겐 수율의 증가속도를 나타낸 것이다.

도 6에 의하면, 아세트산의 농도가 증가할수록, 초음파의 진폭이 증가할수록 콜라겐의 최대 수율도 높게 나타났으며, 아세트산의 농도가 0.1 M 일 때 최대 수율과 0.5 M 일 때 최대 수율은 유사하여 아세트산의 농도가 0.5 M 이상으로 증가하여도 최대 수율의 증가는 미미할 것이라는 것을 짐작할 수 있다. 또한, 아세트산을 첨가하지 않고 초음파 처리를 하는 경우에도 콜라겐의 분리는 거의 일어나지 않았다. 산성 용매로만 처리하는 비교예의 경우에도 아세트산의 농도가 증가함에 따라 최대 수율도 증가하였으나, 초음파 처리를 병행하는 경우보다 증가속도가 느렸다. 또한, 아세트산의 농도가 0 M 인 경우 콜라겐의 분리가 일어나지 않아 콜라겐의 분리에는 산이 필요함을 알 수 있었다

도 7 에 의하면, 콜라겐 수율의 증가 속도에 미치는 초음파의 진폭과 아세트산 농도와의 관계를 상세히 살펴본 결과 어떠한 조건하에 있어서도 직선관계를 나타내었으며 이들의 각각의 관계식은 다음과 같았다. 즉, 0.01 M에서의 아세트산과 진폭과의 관계식은 y = 0.0198x + 0.2296, 0.1 M에서는 y = 0.0418x +0.6832, 0.5 M에서는 y = 0.044x + 1.2633을 나타내었다. 이 식에 의하면, 아세트산의 농도에 따라서 기울기가 다르게 나타났으며, 0.01 M 아세트산보다 0.1 M 이상에서 기울기가 증가하여, 0.1 M 이상의 아세트산 존재하에서 콜라겐의 분리가 빠르게 일어나는 것으로 나타났다. 또한, 0.1 M과 0.5 M 아세트산을 비교하면 기울기가 거의 유사하여 0.5 M 이상의 아세트산 농도에서는 아세트산의 농도가 콜라겐의 수율 증가 속도에 큰 영향을 미치지 못하는 것으로 나타났다.

실시예 4. 분리된 콜라겐의 SDS - PAGE pattern

상기 제조예 및 비교예에 의해 얻어진 콜라겐의 서브유닛(subunit) 조성을 SDS 전기영동(SDS-PAGE)으로 검토하였다. SDS-PAGE는 Lammli법(Lammli, V.K. 등,1970)에 의하여 7.5% slab gel을 이용하여 수행하였다. 상기 제조예 및 비교예에서 분리된 콜라겐 시료에 8M 요소(urea), 2% 머캅토에탄올(mercaptoethanol), 2% SDS와 20 mM Tris-HCl(pH 8.0)을 첨가하여 용해하고, 100 ℃에서 2분간 가열하였다. Fixing과 staining은 Neuhoff(Neuhoff V. 등 1988)의 방법에 의해 쿠마시브릴리언트블루(Coomassie brillant blue)를 이용하여 실시하였다. 진폭 40%의 초음파로 처리한 제조예의 결과는 도 8에 나타내었으며, 아세트산의 농도를 달리하여 처리한 비교예 2 내지 4의 결과는 도 9 에 나타내었다.

도 8에 의하면, 0.01 M 아세트산의 존재하에서 40% 진폭의 초음파로 처리한 경우 4시간 후에 콜라겐에 상당하는 성분이 관찰되기 시작하였으며, 초음파 처리 시간이 길어질수록 α1, α2, β 및 체인(chain)이 확실히 관찰되었다. 이와 같은 경향은 콜라겐의 다량체로 추측되는 성분도 겔의 최상단에서 관찰되었다. 진폭 60 %로 처리하는 경우 전체적인 경향은 진폭 20%로 처리하는 경우와 같았다. 그러나, 초음파 처리 시간이 길어질수록 콜라겐의 분해산물로 추정되는 성분이 관찰되기 시작하였다. 특히 0.5 M 아세트산 하에서 초음파 처리를 24시간 동안 한 경우 콜라겐의 주요 서브유닛인 α1 및 β 체인의 감소가 일어났으며, 이와 함께 겔의 background가 염색되는 불특정의 펩타이드가 생성되는 것으로 관찰되었다.

도 9에 의하면, 산성 용매만으로 처리하여 분리한 콜라겐의 서브유닛 조성을 검토한 결과 0.01 M 아세트산 하에서는 반응 6시간 후에 콜라겐에 상당하는 α1 및 β 체인이 관찰되기 시작하였으며, 24시간 후에는 이들과 함께 α2 및 체인이 관찰되었다. 이와 같은 현상은 아세트산 농도가 높아지면서 더욱 현저히 관찰되기 시작하였으며 반응시간이 지남에 따라 양적으로도 α1, α2, β 및 체인이 증가하는 것으로 관찰되었다.

결과적으로, 산성 용매하에서 초음파 처리를 하는 경우 콜라겐에 상당하는 α1, α2 ,β 및 체인이 더 빠르게 증가하여 산성 용매하에서 초음파 처리를 하는 경우 단시간내에 콜라겐의 분리가 일어나는 것으로 나타났다.

또한 도 13에 의하여 초음파 처리를 반복하여 수행하여 추출된 콜라겐도 전형적인 콜라겐 구조를 지니고 있음을 확인할 수 있었다.

실시예 6. 콜라겐의 확인

제조예에서 산성 용매하에서 초음파 처리를 병행하여 분리한 콜라겐이 콜라겐의 형태로 분리되었는지 또는 젤라틴의 형태로 분리된 것인지를 확인하기 위하여 펩신(1:10,000. Yakuri pure chem., co.. ltd., Japan)에 의한 콜라겐의 소화력을 검토하였다. 콜라겐의 특성은 그 구조가 매우 견고하여 일반적인 소화효소로는 분해가 일어나지 않으며 콜라게나제(Collagenase)로 분해가 일어나는 것으로 알려져 있다. 그러나 콜라겐이 열에 의해서 젤라틴화가 되면 소화효소로 분해가 일어난다. 따라서, 이와 같은 특성을 이용하여 초음파에 의해서 분리된 콜라겐을 펩신 처리하여 소화가 일어나면 젤라틴의 형태로 분리된 것이며, 소화가 일어나지 않으면 콜라겐의 형태로 분리되었다고 판단할 수 있다.

콜라겐 농도를 1 mg/ml로 조절한 후 100 ℃에서 5분간 가열하여 젤라틴화하였다. 콜라겐 및 젤라틴의 농도에 대하여 0.5 % 펩신을 첨가하여 10 ℃에서 0~30분간 처리한 후 각각의 시료에 8 M SDS, 2 % 머캅토에탄올(mercaptoethanol), 20 mM Tris-HCl(pH 8.0)을 첨가하여 100 ℃에서 2분간 가열하여 효소활성을 정지시켰다. 그런 다음 SDS-PAGE(Lammli법)에 의해서 소화 패턴을 분석하였다. 이때, 콜라겐 표준물질은 Acid soluble Collagen(TypeⅠ, from white rabbit skin., Sigma, USA.)을 사용하였다. 그 결과는 도 11과 같다. 도 11 에서, No 1 은 기준이 되는 TYPE I 의 콜라겐이며, No 2 는 0.01 M 의 아세트산에서 80% amplitude로 12 시간 초음파 처리하여 분리한 콜라겐이며, No 3, 4, 5 는 이를 펩신으로 처리한 결과이다. No 6 은 No 2 의 콜라겐을 100 ℃로 열처리하여 젤라틴화한 것이며, No 7, 8, 9 는 상기 젤라틴을 펩신으로 처리한 것을 분석한 결과이다.

도 11 에서 각 No. 가 의미하는 바는 다음과 같다:

S: molecular weight marker

No. 1: I type collagen(acid soluble)

No. 2: Collagen of fish skin Isolated by sonication with acetic acid.

No. 3,4,5: Collagen treated with pepsin for 10, 20 and 30 mim.

No. 6: Gelatin obtained from collagen(No. 2) by heating at 100℃.

No. 7,8,9: Gelatin(No.6) treated with pepsin for 10, 20 and 30 mim.

도 11에 의하면, 산성 용매 하에서 초음파에 의해서 분리된 콜라겐(No. 2)은 펩신 처리를 하여도 콜라겐의 주요 성분인 α 및 β chain의 변화가 일어나지 않았다(No. 3, 4 및 5). 그러나 콜라겐을 열처리하여 젤라틴화(No. 6) 시킨 후 펩신 처리를 하면 콜라겐의 주요 성분인 α 및 β chain이 완전히 소실, 저분자 성분이 증가하는 것으로 관찰되었다(No. 7, 8 및 9). 따라서, 이상의 결과로부터 초음파에 의해서 분리된 성분은 젤라틴 또는 콜라겐의 가수분해물이 아닌 콜라겐인 것으로 확인되었다.

지금까지 예시적인 실시 태양을 참조하여 본 발명을 기술하여 왔지만, 본 발명의 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명의 범주를 벗어나지 않고서도 다양한 변화를 실시할 수 있으며 그의 요소들을 등가물로 대체할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 또한, 본 발명의 본질적인 범주를 벗어나지 않고서도 많은 변형을 실시하여 특정 상황 및 재료를 본 발명의 교시내용에 채용할 수 있다. 따라서, 본 발명이 본 발명을 실시하는데 계획된 최상의 양식으로서 개시된 특정 실시 태양으로 국한되는 것이 아니며, 본 발명이 첨부된 특허청구의 범위에 속하는 모든 실시 태양을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

어피를 산성용액하에서 초음파 처리하여 콜라겐 추출물을 수득하는 제 1단계;
상기 콜라겐 추출물에서 콜라겐과 초음파 처리된 어피를 분리하는 제 2단계; 및
상기 초음파 처리된 어피를 제 1단계 및 제 2단계를 반복하여 수행하여 콜라겐을 추출하는 방법.
제 1항에 있어서,
상기 산성용액은 0.01~0.5M의 아세트산인 것을 특징으로 하는 콜라겐을 추출하는 방법.
제 1항에 있어서,
상기 초음파 처리는 20kHz 주파수에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 콜라겐을 추출하는 방법.
제 1항에 있어서,
상기 초음파 처리시 초음파의 진폭이 20~80%인 것을 특징으로 하는 콜라겐을 추출하는 방법.
제 1항에 있어서,
상기 초음파 처리가 0.1 내지 24 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 콜
라겐을 추출하는 방법.
제 1항에 있어서,
상기 초음파 처리가 0 내지 10 ℃에서 수행되는 것을 특징으로 하는 콜라겐을 추출하는 방법.
제 1항에 있어서,
제 1 단계 및 제 2단계를 8회 수행한 경우에 초음파의 진폭이 20~40%인 것을 특징으로 하는 콜라겐을 추출하는 방법.
제 7항에 있어서,
초음파 처리가 24 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 콜라겐을 추출하는 방법.
삭제