KR101167285B1 - 피부 미백 활성을 갖는 나이아신-펩타이드 및 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 미백 활성을 나타내는 나이아신-펩타이드를 제공한다. 본 발명의 펩타이드는 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백 활성을 나타내는데 이는 멜라닌 생성에 관여하는 유전자(예를 들면, TRP-1, TRP-2, MIFT)의 발현 억제에 의한 것이다. 또한 본 발명의 펩타이드는 안정성 및 피부 투과도가 우수하다. 본 발명은 나이아신-펩타이드를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

Description

피부 미백 활성을 갖는 나이아신-펩타이드 및 그의 용도{Niacin-Peptides Having Skin Whitening Effect and Uses Thereof}

본 발명은 피부 미백 활성을 갖는 나이아신-펩타이드 및 그의 용도에 관한 것이다.

사람의 피부색은 여러 가지 요인들 특히, 계절, 인종, 및 성별에 따라 다르며, 주로 멜라닌, 카로틴, 및 헤모글로빈의 양에 의해서 결정되는데, 이중 멜라닌이 가장 결정적인 요소로 작용한다. 멜라닌(melanin)은 피부 기저층에 존재하는 멜라닌 세포(melanocyte)에서 합성되며 주변 각질 세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다. 멜라닌이 비정상적으로 적게 되면 백반증과 같은 피부 병변이 유발되며, 반대로 과잉으로 생산될 경우에는 기미, 잡티를 형성하는 것으로 알려져 있다. 멜라닌은 아미노산 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나아제(tyrosinase)가 작용함으로써 생성되는데 티로시나아제는 자외선에 의해 더욱 활성화되기 때문에 햇빛을 많이 받게 되면 피부가 검게 변하게 된다. 국내 및 일본 등지에서 피부 미백효과 개념의 화장품들이 큰 시장을 형성하고 있는데, 이들은 대개 티로시나아제의 활성 억제 효과가 있는 물질들을 배합한 제품들이다.

최근 멜라닌 합성과 피부 명암에 관련된 많은 효소들의 활성이 명백해졌지만 아시안 피부색이 특히 더 과색소가 침착되고 노화되기 쉬운 이유에 대해선 아직 완전히 밝혀지지 않았다. 피부 명암을 밝힌다고 여겨지는 물질들은 전형적으로 멜라닌 합성과 그에 관여된 효소들 각각을 저해하는 것으로 알려져 있다.

종래에 티로시나아제의 활성억제제로서 미백화장품에 배합되는 원료들에는 아스코르빈산(비타민 C) 및 그 유도체, 상백피추출물, 녹차추출물, 알로에추출물, 황금추출물 등 식물추출물 뿐만 아니라, 코직산, 알부틴, 유용성 감초추출물 및 나이아신아마이드 등이 있다. 그러나 각종 식물추출물들은 불안정하고 제품에 배합할 경우 효과가 지속적이지 못하며, 티로시나아제 활성억제력도 미미하다는 문제점이 있다. 또한 코직산(kojic acid)은 티로시나아제 억제제로서 통상적으로 사용되고 있으나, 알레르기 반응을 일으킬 수 있으며(Nakagawa M. et.al., Contact Dermatitis, 43:PP9-3(1995)) 제품 내에서 불안정하여 2%에 가까운 과량을 사용해야 하는 등 조성물로서 제조하는데 어렵다는 문제점이 있다.

나이아신아마이드는 최근 식품의약품안전청으로부터 승인된 미백 기능성 효능물질로서 니코틴아마이드라고도 알려진 수용성 비타민 B3이며, 이것은 우리 몸에 필수적으로 필요하며 녹색 채소나 씨리얼과 같은 식품에도 포함되어 있다. 건강한 피부를 위한 나이아신아마이드의 필요성은 20세기 초부터 인지되어 왔다. 식이에서 비타민 B3가 부족할 경우, 심각한 피부 병변을 일으키는 전염병인 펠라그라(pellagra)가 나타나는데 나이아신아마이드는 이를 예방하는 비타민(Vitamin PP)으로 알려져 왔다.

나이아신아마이드는 종래의 멜라닌 합성 억제제들의 직접적인 멜라닌 합성 억제 기능과는 달리 티로시나아제, 오파옥시데이즈의 저해가 나타나지 않았으며 멜라닌 세포(melanocyte) 배양으로 실험한 결과 멜라닌 합성 저해도 보이지 않고, 단지 기저막에 위치한 멜라닌 세포에서 합성된 멜라닌을 적재한 멜라노좀(melanosomes)이 멜라닌 세포로부터 수상돌기를 통해서 케라티노사이트(keratinocyte)로 전이되며 결국은 피부표면으로 이동되는 경로를 차단하는 기능을 가지고 있다고 알려져 있다. 나이아신아마이드는 이 멜라닌 세포에서 케라티노사이트로 멜라닌의 이동을 68%까지 감소시켜 깨끗한 피부 유지에 도움을 주는 것으로 알려져 있다. 하지만, 나이아신아마이드 제조에서 중간체로 사용하는 나이아신아세트산은 공정 시 나이아신아마이드를 고순도로 정제해도 어느 수준으로 잔존되어 있다고 알려져 있는데(20-100 PPM 내외), 잔존할 경우 세포 독성이 큰 것으로 알려져 있다.

한편, 펩타이드를 이용한 다양한 미백제를 개발하기 위한 다양한 시도가 있었지만, 그 효과는 그리 크지 않았으며, 효과를 보다 극대화 하기위한 비타민 C-펩타이드 복합체, 하이드로 퀴논펩타이드 복합체 등도 제조에 있어 어려움이 있으며, 고가이기 때문에 이용이 제한적이어서 시장에서의 적용은 그리 많지 않았다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 나이아신이 결합된 펩타이드 라이브러리에서 미백효과를 나타내는 펩타이드를 찾기 위하여 노력한 결과, 나이아신이 결합된 일부 펩타이드가 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백에 효과를 나타낸다는 사실을 발견하였고, 그로부터 안정성 및 피부 투과율이 우수한 펩타이드를 선별함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명의 목적은 피부 미백용 펩타이드를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 니코티노일-EQ, 니코티노일-ET, 니코티노일-FP, 니코티노일-NI, 니코티노일-NL, 니코티노일-NP, 니코티노일-NY, 니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-QI, 니코티노일-VA, 니코티노일-VF, 니코티노일-VS, 니코티노일-VT, 니코티노일-WM, 니코티노일-YR, 니코티노일-YT, 니코티노일-AHK, 니코티노일-FWY, 니코티노일-GHR, 니코티노일-GPHyp, 니코티노일-TYR, 니코티노일-YGY, 니코티노일-PLG, 니코티노일-PLG-NH₂, 니코티노일-beta-AHSH, 니코티노일-DKYV, 니코티노일-GEPG, 니코티노일-GQPR, 니코티노일-GRKG, 니코티노일-KAKA, 니코티노일-SSNA, 니코티노일-VPAA, 니코티노일-YPFF, 니코티노일-YPFF-NH₂, 니코티노일-GPRPA, 니코티노일-GPRPA-NH₂, 니코티노일-ISELGW, 니코티노일-KLAKK, 니코티노일-KRGDR, 니코티노일-KRGKP, 니코티노일-KTTKS, 니코티노일-KVARP, 니코티노일-RKDVY, 니코티노일-YGGFL, 니코티노일-YGGFM, 니코티노일-SIKVAV, 니코티노일-VEPIPY, 니코티노일-VGVAPG, 니코티노일-EEMQRR, 니코티노일-EEMQRR-NH₂, 니코티노일-GPQGPQ 및 니코티노일-YGYTGA로 구성된 군으로부터 선택되는 피부 미백 활성을 나타내는 펩타이드를 제공한다.

본 발명자들은 나이아신이 결합된 펩타이드 라이브러리에서 미백효과를 나타내는 펩타이드를 찾기 위하여 노력한 결과, 나이아신이 결합된 일부 펩타이드가 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백에 효과를 나타낸다는 사실을 발견하였다.

본 발명자들은 N-말단에 나이아신을 포함하는 다양한 펩타이드 라이브러리를 제조하고 후보 펩타이드들을 준비한 후, 후보 펩타이드들 중에서 멜라닌 생성 억제 활성이 우수한 펩타이드를 스크리닝 함으로써, 본 발명의 펩타이드가 제공된다.

본 명세서에서 용어 “펩타이드”는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미하며, 나이아신-펩타이드는 펩타이드의 N-말단에 나이아신을 결합시킨 형태를 말한다.

본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)에 따라 제조될 수 있다(Merrifield, J. Amer . Chem . Soc . 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)).

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 N-말단에 나이아신(니코티노일)을 결합하여 변형을 유도할 수 있다. 이러한 변형을 통해 본 발명의 펩타이드는 생체 내 투여시 안정성이 증가되어 높은 반감기를 가질 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 펩타이드의 C-말단에 아미노기(-NH₂)결합하여 변형을 유도할 수 있다.

상술한 아미노산의 변형은 본 발명의 펩타이드의 안정성을 크게 개선하는 작용을 한다. 본 명세서에서 용어 "안정성"은 인 비보 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 의미한다. 상술한 보호기는 생체 내의 단백질 절단효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 작용을 한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 사람 유래의 세포에 독성을 나타내지 않아 피부 미백용 펩타이드로서 활용도가 매우 높다. 본 발명에 따르면, 10 ng/ml-100 μg/ml의 농도로 HaCat 세포 및 NIH3T3 세포에 나이아신-펩타이드를 처리한 결과, 현저한 세포 독성은 측정되지 않았으며 육안으로 세포의 형태를 확인하였을 때도 큰 변화는 관찰되지 않았다(도 9).

본 발명에 따르면, 나이아신-펩타이드는 40℃ 온도에서도 우수한 열안정성을 나타내며(도 3), 나이아신이 부착되지 않은 펩타이드에 비해 혈청 내에서 안정성이 높아(도 4) 작용기간이 길고 보다 우수하다. 따라서 본 발명의 펩타이드는 의약품, 의약외품 및 화장품과 같은 장기간 저장이 요구되는 제품에 유리하게 적용될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 멜라닌 생성 억제능을 갖는다. 본 발명에 따르면, 멜라닌 세포에 α-MSH를 처리하여 멜라닌 생성을 유발시킨 후 본 발명의 펩타이드류를 처리하고 배양시킨 후 멜라닌 생성량을 비교한 결과, 나이아신-펩타이드를 처리한 경우 대조군에 비해 멜라닌 생성이 약 4-44% 억제되었다(표 1). 보다 상세하게는 멜라닌 생성 억제율이 니코티노일-ET를 처리하였을 때 40%, 니코티노일-PG을 처리하였을 때 30%, 니코티노일-PS를 처리하였을 때 44% 및 니코티노일-VS를 처리하였을 때 35%로 나타났다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 멜라닌의 생성억제율을 농도-의존적으로 증가시킨다. 본 발명에 따르면, 나이아신-펩타이드(NA-PS) 및 나이아신이 결합되어 있지 않은 펩타이드를 농도별(1 μg/ml, 10 μg/ml, 100 μg/ml, 250 μg/ml)로 세포에 처리하고 3일 동안 배양한 후 멜라닌 생성량을 육안으로 확인한 결과, 나이아신-펩타이드를 처리한 경우 농도-의존적으로 배지의 색이 투명해지는 것을 확인하였다(도 5). 또한, 나이아신-펩타이드(니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-ET, 니코티노일-VS), 나이아신이 결합되어 있지 않은 펩타이드(PG, PS, ET, VS), 알부틴 및 AA2G를 농도별(1 μg/ml, 10 μg/ml, 100 μg/ml, 250 μg/ml)로 처리하고 3일 동안 배양한 후 배양액의 흡광도를 490 nm에서 측정하여 분석한 결과, 나이아신이 결합되어 있지 않은 펩타이드에 비해 나이아신-펩타이드에서 멜라닌 생성량이 현저히 감소되었음을 확인하였다(도 6).

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 티로시나아제의 활성을 억제시킨다. 본 발명에 따르면, L-티로신, 펩타이드(니코티노일-PS 또는 PS) 및 티로시나아제를 반응시킨 후 475 nm에서 흡광도를 측정하여 티로시나아제에 대한 저해율을 확인한 결과, 나이아신-펩타이드(니코티노일-PS)를 처리하였을 경우 나이아신이 결합되어 있지 않은 펩타이드 및 알부틴과 비교하여 티로시나아제 활성에 있어 현저한 억제효과를 나타내었다(도 7).

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 TRP-1(tyrosinase-related protein-1), TRP-2(tyrosinase-related protein-2) 및 MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제시킨다.

멜라닌은 티로시나아제, TRP-1, TRP-2 등의 일련의 효소반응에 의하여 생성되며(Olivares et al., Pigment Cell Melanoma Res 22(6): 750-760(2009)), 멜라닌 생성의 주요 기전은 멜라닌 세포의 증식과 티로시나아제 효소 활성도의 증가이다. 멜라닌 생성에 있어 가장 중요한 역할을 하는 효소는 티로시나아제이며, 멜라닌 생합성에서 초기단계를 촉매하는 속도조절 인자로서, 이 효소에 의해 티로신이 3,4-dihydroxy-phenylalanine(DOPA), DOPA 퀴논으로 변환되어 붉은 계열의 유멜라닌(eumelanin)과 갈색 계열의 페오멜라닌(pheomelanin)이 합성된다(Lopezet et al., J Biol Chem 267: 381-390(1992)). 유멜라닌 형성의 중요한 다른 두 가지 효소는 TRP-1과 TRP-2이다. 또한, MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)는 티로시나아제 및 관련 효소(TRPs)의 전사를 담당하는 주요한 요소이다. 따라서, MITF, TRP-1 및 TRP-2의 발현이 억제되면 멜라닌 생성이 억제된다고 할 수 있다.

본 발명에 따르면, 멜라닌 세포에 α-MSH 및 펩타이드(PG, PS, ET, VS) 또는 α-MSH 및 나이아신-펩타이드(니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-ET, 니코티노일-VS)를 농도별(1 μg/ml, 10 μg/ml, 50 μg/ml)로 처리하고 4일간 배양한 후 세포로부터 mRNA를 수득하여 역전사 중합효소 연쇄반응을 수행한 결과, 나이아신-펩타이드를 처리한 경우 멜라닌 생성과 관련이 있는 유전자(TRP-1, TRP-2, MITF)의 발현이 억제되는 것을 확인하였다(도 8). 이러한 결과는 본 발명의 펩타이드가 멜라닌 생성과 관련된 유전자의 발현을 억제하여 피부 미백에 매우 우수한 효능을 가진다는 것을 의미한다. 또한, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물의 경우, 다양한 제형을 이용하여 피부 미백에 매우 효과적으로 이용될 수 있다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 니코티노일-EQ, 니코티노일-ET, 니코티노일-FP, 니코티노일-NI, 니코티노일-NL, 니코티노일-NP, 니코티노일-NY, 니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-QI, 니코티노일-VA, 니코티노일-VF, 니코티노일-VS, 니코티노일-VT, 니코티노일-WM, 니코티노일-YR, 니코티노일-YT, 니코티노일-AHK, 니코티노일-FWY, 니코티노일-GHR, 니코티노일-GPHyp, 니코티노일-TYR, 니코티노일-YGY, 니코티노일-PLG, 니코티노일-PLG-NH₂, 니코티노일-beta-AHSH, 니코티노일-DKYV, 니코티노일-GEPG, 니코티노일-GQPR, 니코티노일-GRKG, 니코티노일-KAKA, 니코티노일-SSNA, 니코티노일-VPAA, 니코티노일-YPFF, 니코티노일-YPFF-NH₂, 니코티노일-GPRPA, 니코티노일-GPRPA-NH₂, 니코티노일-ISELGW, 니코티노일-KLAKK, 니코티노일-KRGDR, 니코티노일-KRGKP, 니코티노일-KTTKS, 니코티노일-KVARP, 니코티노일-RKDVY, 니코티노일-YGGFL, 니코티노일-YGGFM, 니코티노일-SIKVAV, 니코티노일-VEPIPY, 니코티노일-VGVAPG, 니코티노일-EEMQRR, 니코티노일-EEMQRR-NH₂, 니코티노일-GPQGPQ 및 니코티노일-YGYTGA로 구성된 군으로부터 선택되는 펩타이드를 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 화장료 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 나이아신-펩타이드는 2 내지 6개의 아미노산 잔기로 구성되어 매우 분자량이 작아 피부 침투율이 매우 우수하다. 따라서 본 발명의 조성물을 국소적으로 피부에 도포하는 경우 높은 피부 침투율로 인해 피부 미백 효과를 달성할 수 있다. 본 발명의 조성물은 멜라닌 생성을 억제하므로 피부 색상을 밝게 하고 피부 톤을 일정하게 하며, 피부색소의 제거 및 검버섯 제거 등에 효과적이다. 본 발명의 나이아신-펩타이드는 각질세포에서 멜라닌 색소의 생성을 여러 과정으로 억제하고 각질세포에서 기 생성된 멜라닌의 배출을 방지 또는 약화시켜 피부 각질세포층의 색상을 밝게 하는 효능을 발휘한다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 니코티노일-펩타이드 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점(advantages)을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명의 나이아신-펩타이드는 멜라닌 생성을 억제시켜 피부 미백에 우수한 효과를 나타낸다.

(b) 본 발명의 펩타이드는 안정성 및 피부 투과도가 매우 우수하다.

(c) 본 발명의 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물은 피부 미백에 매우 우수한 효능을 발휘한다.

(d) 상술한 본 발명의 펩타이드의 우수한 활성 및 안정성은 피부 미백용 화장품에 매우 유리하게 적용될 수 있도록 한다.

도 1은 나이아신-펩타이드 라이브러리에 대한 미백 스크리닝 그림이다
도 2는 나이아신-펩타이드에 대한 고성능 액상 크로마토그래피 분석 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 나이아신-펩타이드의 열 안정성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 나이아신-펩타이드의 인간 혈청 내 안정성을 비교 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 나이아신-펩타이드를 처리한 후, 멜라닌 세포의 멜라닌 생성 감소효과를 촬영하여 비교한 그림이다.
도 6은 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 나이아신-펩타이드를 처리한 후, 멜라닌 생성 감소를 UV로 측정하여 확인한 그래프이다.
도 7은 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 나이아신-펩타이드를 처리한 후, 티로시나아제의 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 나이아신-펩타이드를 처리한 후, mRNA를 추출하고 멜라닌 생성 표지인자 프라이머를 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응을 수행한 결과를 나타낸 그림이다.
도 9는 나이아신-펩타이드를 NIH3T3, HaCat 및 B16F10 세포에 처리하여 세포독성을 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: 펩타이드 라이브러리의 합성

본 발명자들은 펩타이드의 라이브러리를 합성하기 위해 19개의 Fmoc-아미노산(Fmoc-Ala, Fmoc-Arg(pbf), Fmoc-Asp(OtBu), Fmoc-Asn(trt), Fmoc-Gly, Fmoc-Glu(OtBu), Fmoc-Gln(trt), Fmoc-His(trt), Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Trp(Boc), Fmoc-Leu, Fmoc-Ile, Fmoc-Val, Fmoc-Phe, Fmoc-Met, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Pro)이 부착된 클로로 트리틸 클로라이드 레진(Chloro trityl chloride resin: CTL resin, Novabiochem Cat No. 01-64-0021)을 96웰 테프론 반응기에 시리즈 별로 각 19 라인에 50 mg을 넣고 메틸렌 클로라이드(MC) 1 ml를 가하여 3분간 교반하였다. 용액을 제거하고 디메틸포름아마이드(DMF) 1 ml를 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 20%의 피페리딘/DMF 1 ml를 반응용기에 넣고 10분간 상온에서 교반한 후 용액을 제거한뒤, 동량의 탈보호 용액을 넣고 다시 10분간 반응을 유지한 후 용액을 제거하고 DMF로 2회, MC로 1회, 다시 DMF로 3분씩 1회 세척하여 Fmoc-보호기를 제거하였다. 각 96웰 반응기에 1 ml의 메틸렌 클로라이드용액을 넣고, 이어 각 시리즈 별로 20 μmole의 19개 N-α-나이아신-아미노산(또는 서열에 부합되는 Fmoc-아미노산) 및 DIPEA(diisopropyl ethylamine) 40 μmole, HOBt(N-Hydroxybenzotriazole) 20 μmole 및 BOP(Benzotriazole-1-yloxy-tris(dimethyl amino)-phosphonium hexafluorophosphate) 20 μmole을 넣은 후 교반하여 잘 용해하고, 1시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응액을 제거하고 DMF 용액으로 3회 5분씩 교반한 후 미반응 용매를 제거하였다. 반응 레진을 소량 취하여 카이저 테스트(Ninhydrine test)를 이용하여 반응 정도를 점검하였다. 경우에 따라 3-6 mer의 기획된 펩타이드의 서열에 따라 탈보호와 펩타이드 합성을 반복하였다. 제조된 나이아신-펩티딜 레진은 DMF, MC 및 메탄올로 각각 3번을 세척하고, 질소 공기를 천천히 흘려 건조한 후, P₂O₅하에서 진공으로 감압하여 완전히 건조하였다. 제조된 레진에 탈루용액[트리플로로화 초산(Trifluroacetic acid: TFA) 81.5%, 증류수 5%, 티오아니졸(Thioanisole) 5%, 페놀 5%, EDT(1,2-Ethanedithiol) 2.5% 및 TIS(Triisopropylsilane) 1% 포함] 30 ml을 넣은 후 상온에서 가끔 흔들어주며 얼음 수조 안에서 1 시간 반응을 유지하였다. 레진을 여과하고, 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 5 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심 분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제 전 나이아신-펩타이드 서열 펩티드들을 수득하였다.

실시예 2 : 나이아신-펩타이드의 스크리닝

실시예 1에서 합성한 나이아신-펩타이드(NA-Peptide) 라이브러리를 활용해 멜라닌색소의 생성 감소실험을 이용해 미백 펩타이드를 탐색하였다. 미백의 활성탐색은 B16F10(한국 세포주 은행) 멜라닌 세포를 배양한 뒤 α-MSH(α-melanocyte stimulating hormone, Sigma)로 멜라닌 생성을 유발시킨 뒤 라이브러리 펩타이드에 대한 멜라닌 생성억제를 확인하였다. 마우스의 멜라닌 세포는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media, Sigma)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, Sigma)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 96-웰 플레이트에 5 X 10⁴ 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤, 대조군에는 아무것도 처리 하지 않고 용매만 넣었으며, 양성대조군은 α-MSH을 20 μg/ml, 그리고 나머지 디쉬에는 α-MSH 20 μg/ml과 펩타이드를 10 ng/ml을 처리하였다. 3일 동안 배양하였다. 원심분리를 통해 배양액을 제거한 뒤 세포의 멜라닌 생성량을 육안으로 확인하였다.

실시예 1에서 합성한 각 펩타이드에 대한 멜라닌 생성 억제율을 UV490에서 측정하였다. 억제율의 계산은 α-MSH만을 처리한 양성 대조군의 멜라닌의 흡광도를 기준으로 하여 측정된 해당 펩타이드들의 멜라닌 흡광도의 차이를 표 1에 표시 하였다. 스크리닝에 의해 좋은 역가를 보인 후보 펩타이드는 별도 그룹으로 구분하여 100 μmole 단위로 대량 합성하여 이후 실험을 수행 하였다. 도 1은 나이아신-펩타이드의 스크리닝 결과를 나타내었다.

각 합성 펩타이드별 스크리닝 수치: α-MSH 대비 멜라닌 생성 억제

번호	품 명	스크리닝 수치	번호	품 명	스크리닝 수치
1	Nicotinoyl-IF	1	27	Nicotinoyl-beta-AHSH	0.82
2	Nicotinoyl-EQ	0.9	28	Nicotinoyl-DKYV	0.87
3	Nicotinoyl-ET	0.60	29	Nicotinoyl-GEPG	0.96
4	Nicotinoyl-FP	0.8	30	Nicotinoyl-GQPR	0.83
5	Nicotinoyl-NI	0.8	31	Nicotinoyl-GRKG	0.93
6	Nicotinoyl-NL	0.8	32	Nicotinoyl-KAKA	0.87
7	Nicotinoyl-NP	0.8	33	Nicotinoyl-SSNA	0.71
8	Nicotinoyl-NY	0.8	34	Nicotinoyl-VPAA	0.85
9	Nicotinoyl-PG	0.70	35	Nicotinoyl-YPFF-NH2	0.85
10	Nicotinoyl-PS	0.56	36	Nicotinoyl-GPRPA-NH2	0.7
11	Nicotinoyl-QI	0.82	37	Nicotinoyl-ISELGW	0.64
12	Nicotinoyl-VA	0.83	38	Nicotinoyl-KLAKK	0.96
13	Nicotinoyl-VF	0.81	39	Nicotinoyl-KRGDR	0.92
14	Nicotinoyl-VS	0.65	40	Nicotinoyl-KRGKP	0.84
15	Nicotinoyl-VT	0.78	41	Nicotinoyl-KTTKS	0.92
16	Nicotinoyl-WM	0.81	42	Nicotinoyl-KVARP	0.96
17	Nicotinoyl-YR	0.79	43	Nicotinoyl-RKDVY	0.87
18	Nicotinoyl-YT	0.75	44	Nicotinoyl-YGGFL	0.78
19	Nicotinoyl-AHK	0.8	45	Nicotinoyl-YGGFM	0.81
20	Nicotinoyl-FWY	0.61	46	Nicotinoyl-SIKVAV	0.72
21	Nicotinoyl-GHR	0.75	47	Nicotinoyl-VEPIPY	0.81
22	Nicotinoyl-GPHyp	0.89	48	Nicotinoyl-VGVAPG	0.95
23	Nicotinoyl-KVK	1.01	49	Nicotinoyl-EEMQRR-NH2	0.86
24	Nicotinoyl-TYR	0.72	50	Nicotinoyl-GPQGPQ	0.88
25	Nicotinoyl-YGY	0.69	51	Nicotinoyl-YGYTGA	0.95
26	Nicotinoyl-PLG-NH2	0.92	-	-	-

실시예 3 : 나이아신 - 펩타이드의 안정성 확인 실험

선정된 라이브러리-펩타이드를 대량으로 추가 합성한 뒤 HPLC와 MALDI-TOF로 추가 분석하였다. 도 2는 미백효과를 나타내는 라이브러리 펩타이드 중 NA-VS, NA-PS 및 NA-ET에 대한 고성능 액상 크로마토그래피와 MALDI-Tof 질량분석기 결과이다. 한편 제조된 펩타이드의 안정성을 확인하기 위하여, HPLC를 이용하여 순수하게 정제한 98% 이상의 고순도 니코티노일-VS, 니코티노일-PS 및 니코티노일-ET 펩타이드를 100 μg/ml이 되도록 펩타이드를 50 mM Tris-HCl(pH 8.0) 완충용액에 용해하여 유리 바이알에 분주하여 넣은 후 40℃ 에서 7, 14, 21, 28, 35, 42 및 60일 보관하며 열에 의한 펩타이드 손실을 측정한 결과, 60일까지 단지 10% 미만의 펩타이드 손실을 나타내어 열 및 보관기간에 있어 높은 안정성을 갖는다는 것을 확인하였다(도 3). 아울러 인간 혈청에서 나이아신-펩타이드가 얼마나 안정한가를 검사하였다. 인간 혈청에 나이아신-펩타이드(니코티노일-PS, 100 μg/ml) 또는 나이아신이 결합되어 있지 않는 펩타이드(PS, 100 μg/ml)를 처리하고 10시간 동안 배양하면서, 혈청에 남아있는 펩타이드의 양을 시간별로 측정하였다. 비교 안정성 실험 결과 니코티노일로 N-말단을 막은 니코티노일-PS은 혈청에서 10시간 배양시 나이아신이 결합되어 있지 않은 펩타이드에 비해 약 20% 잔존량이 많았다. 이로써, 나이아신-펩타이드가 나이아신이 결합되어 있지 않은 펩타이드 보다 혈청내에서 안정한 것을 확인하였다(도 4).

실시예 4: 나이아신 - 펩타이드의 미백효능 확인

나이아신-펩타이드를 농도별로 처리한 뒤 멜라닌 생성 억제효과를 측정하였다. 마우스의 멜라닌 세포는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media, Sigma)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, Sigma)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 24-웰 플레이트에 1 X 10⁵ 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤, 대조군에는 아무것도 처리하지 않고 용매만 넣었으며, 양성대조군은 α-MSH을 20 μg/ml, 그리고 나머지 디쉬에는 α-MSH 20 μg/ml과 나이아신-펩타이드(NA-PG, NA-PS, NA-ET, NA-VS)와 대조군으로 Arbutin과 AA2G를 1 μg/ml, 10 μg/ml, 100 μg/ml, 250 μg/ml의 농도가 되도록 처리를 하였다. 각각의 디쉬에 시험물질을 가한 뒤 3일 동안 배양하였다. 3일 뒤, 원심분리를 통해 배양액을 제거한 뒤 세포의 멜라닌 생성량을 육안으로 확인하였다.

도 5는 생성된 멜라닌 세포를 관찰한 사진으로 니코티노일-PS와 PS의 펩타이드에 대한 각 처리 농도에 따른 멜라닌의 생성 감소 비율을 확인한 것으로 세포수는 α-MSH를 처리한 것에 비해 비교적 줄어들지 않으나, 알부틴 등으로 유사한 농도로 처리한 곳에서는 세포수가 급격히 줄어드는 것을 관찰 할 수 있었다. 세포수에 비해 배지의 색이 투명해지는 것으로 보아 멜라닌 생성 저해 효과가 있음을 알 수 있었다.

각 펩타이드의 멜라닌 배출량을 측정하기 위하여 배양액을 튜브에 넣고 490 nm에서 관찰 한 결과 도 6과 같이 배지 속으로 유출된 멜라닌의 양이 나이아신을 결합시킨 펩타이드를 처리한 군에서 비교군인 펩타이드에 비해 급격히 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 이로써, 피부에 멜라닌의 생성을 유발시키는 요인이 적용되었을 때 펩타이드가 그 활성을 억제해 피부의 톤을 밝게 할 수 있다는 것을 예측할 수 있다.

실시예 5 : 나이아신 - 펩타이드류의 타이로시나아제의 활성감소

티로시나아제 효소로는 버섯류로부터 추출한 것으로, 시그마(sigma)사의 것을 사용하였다. 먼저 기질인 L-티로신을 1.5 mM의 농도가 되도록 인산완충액(0.05 M, pH 6.8)에 용해시킨 다음, 이 용액 0.01 ml를 0.3 ml 용량의 분광광도계 큐벳(cuvette)에 가하고 보조인자(cofactor)인 도파를 0.06 mM 농도로 만들어 0.01 ml 첨가하였다. 여기에 본 발명의 펩타이드를 첨가하고 0.1 ml가 되도록 상기 인산완충액을 첨가하였다. 여기에 티로시나아제를 인산완충액에 60 U/mL로 용해시킨 효소 용액을 0.1 ml 첨가함으로써 반응을 진행시켰다. 그리고 알부틴과 니코티노일-PS와 PS 펩타이드를 100 ppm 씩 사용하여 비교실험을 하였다. 이때 대조군(blank)으로는 티로시나아제 대신 완충액만을 0.1 ml 첨가한 것으로 하였다.

반응은 37℃에서 10분간 진행시켰으며, 분광광도계(spectrophotometer, Beckman DU-7500)를 이용하여 475 nm에서의 흡광도를 측정하여 티로시나아제에 대한 저해율을 구하였다. 니코티노일-PS는 PS나 알부틴에 비해 상대적으로 양호한 티로시나아제 억제효과를 나타내었다(도 7).

실시예 6: 멜라닌 생성 표지인자들의 억제

α-MSH를 처리하여 멜라닌 생성이 유발된 마우스 흑색종 세포에서 나이아신 -펩타이드의 미백 활성을 보다 확실하게 검증하기 위하여, TRP-1(tyrosinase-related protein-1), TRP-2(tyrosinase-related protein-2) 및 MITF(microphthalmia-associated transcription factor)의 RNA 생성을 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(qRT-PCR)으로 확인하였다.

우선, 6 웰의 세포배양접시에 B16F10 세포를 1x10⁵개 정도 접종하여 3일을 배양하였다. 세포가 정착된 뒤에 2% 혈청으로 배지를 교환하면서, 대조군에는 용매만을, 양성대조군은 α-MSH를 20 μg/ml로 넣어 주었으며, 나머지 디쉬들에는 α-MSH 20 μg과 펩타이드(PG, PS, ET, VS) 및 나이아신-펩타이드(니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-ET, 니코티노일-VS)를 1, 10, 50 μg/ml 농도로 처리하였다. 4일 배양하고 배양세포를 원심분리로 모아 배양세포로부터 mRNA를 추출하여 TRP-1, TRP-2 및 MITF의 프라이머를 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 프라이머 정보는 TRP-1은 F(TGG CCC AGG ATC AGT AGG T)/R (CAT CAA CAC TTC CAG CA), TRP-2는 F(GGC TAC AAT TAC GCC GTT G)/R (CAC TGA GAG AGT TGT GGA CCA A), MITF의 경우에는 F(CTT AAC TCC AAC TGT GAA AAA GAG G)/R(CAT ACC TGG GAC TCA CTC TC), 그리고 표준 유전자는 GAPDH로 F(GAG CCA AAC GGG TCA TCA)/R(CAT ATT CG TGG TTC ACA CC)를 사용하였다. 실험 결과, 본 발명의 나이아신-펩타이드가 멜라닌 생성과 관계가 있는 유전자인 TRP-1, TRP-2 및 MITF의 발현을 농도 의존적으로 억제한다는 것을 확인하였다(도 8).

실시예 7 : 세포독성실험

본 발명의 펩타이드에 대한 각질세포내독성이 있는지의 여부를 확인하기 위하여, 리지노 등의 방법(Rizzino, et al. Cancer Res., 48:4266(1988))을 참조하여, HaCat 세포(한국세포주은행), NIH3T3 세포(한국세포주은행)를 이용한 MTT 시험법을 수행하였다. 각각의 세포주를 10% FBS(fetal bovine serum)가 함유된 EMEM(Eagle's minimal essential media, Gibco)를 이용하여 배양하였다. 배양된 세포주를 0.25% 트립신 용액으로 배양용기 바닥에서 떼어낸 후 원심 분리하여 세포 침전물만을 모았다. 이를 FBS가 함유되지 않은 EMEM 배양액에 다시 현탁한 후, 96-웰 조직 배양용 평판에 각 웰 당 1x10⁵세포가 되도록 넣고, 24시간 동안 37℃, 7% CO₂ 조건 하에서 배양하였다. 24시간 뒤 무혈청 배양액으로 배지를 교환한 뒤 표준을 잡기위한 공 시료와 니코티노일-VS, 니코티노일-PS, 니코티노일-ET 및 니코티노일-PG 펩타이드를 물과 10% DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 멸균상태로 용해한 다음, 10 ng/ml, 100 ng/ml, 1 μg/ml, 10 μg/ml 및 100 μg/ml의 농도로 72시간을 위와 동일 조건으로 배양하였다. 배양이 완료된 후 배양 상층액을 제거하고 PBS로 1회 세척하였다. 세척용액을 제거한 뒤 비색 SRB 용액으로 처리하고 PBS로 충분히 세척을 한 뒤 현미경으로 각 세포를 관찰하여 생존 세포의 상태를 관찰하였으며, SRB를 추출한 후 자외선 590 nm에서 흡광도를 측정하여 각 세포의 생존상태를 확인하여 대조군과 비교하였다(도 9).

도 9에서 보는 바와 같이, 각질세포주의 일종인 HaCat 세포, 섬유아세포의 일종인 NIH3T3 세포에 대하여, 저농도에서 고농도까지 투여한 펩타이드에 의한 세포수의 감소는 관찰되지 않았으며, 세포들의 현미경적인 관찰에서도 별다른 변화가 관찰되지 않았다. 이를 통해 본 발명의 나이아신-펩타이드는 피부 관련 세포에 독성이 전혀 없음을 알 수 있으며, 이로써 본 펩타이드를 피부에 처리하여도 큰 영향을 끼치지 않으리라는 것을 예측할 수 있다.

실시예 8 : 나노화 펩타이드의 제조

상기 실시예에서 미백의 효능을 나타낸 니코티노일-VS, 니코티노일-PS, 니코티노일-ET 및 니코티노일-PG 펩타이드를 50 mg을 정확히 정량한 뒤 증류수 500 ml로 충분히 교반하여 용해하였다. 나이아신-펩타이드 용액을 하이드로지네이티드 레시틴 5 g 및 약간의 유상과 함께 혼합한 후, 총량이 1 L가 되도록 증류수로 양을 맞춰 준 다음, 마이크로플루다이저로 고압을 이용하여 유화시켜 사이즈 100 nm 정도의 나노좀을 제조하였다. 제조된 나노좀은 최종 농도가 약 50 ppm으로 화장품 제조용으로 사용되었다.

실시예 9 : 유연화장수

상기 실시예 2에서 제조한 나이아신-펩타이드류 나노좀들을 하나 또는 복수로 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 유연화장수를 일반적인 화장수 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
나이아신 펩타이드	0.001
1,3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
PEG 1500	1.0
소듐히알루로네이트	1.0
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	8.0
방부제, 색소	적량
벤조페논-9	0.05
향	미량
정제수	잔량
합계	100

실시예 10 : 영양크림

상기 실시예 2에서 제조한 나이아신-펩타이드류 나노좀들을 하나 또는 복수로 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 영양크림을 일반적인 영양크림 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
나이아신 펩타이드	0.001
메도우폼오일	3.0
세테아릴알콜	1.5
스테아린산	1.5
글리세릴스테아레이트	1.5
유동 파라핀	10.0
밀납	2.0
폴리솔베이트60	0.6
솔비탄 세스퀴올레이트	2.5
스쿠알란	3.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
글리세린	5.0
트리에탄올아민	0.5
토코페릴아세테이트	0.5
방부제, 색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

실시예 11 : 영양화장수

상기 실시예 2에서 제조한 나이아신-펩타이드류 나노좀들을 하나 또는 복수로 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 영양화장수를 일반적인 화장수 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
나이아신 펩타이드	0.002
1,3-부틸렌글리콜	4.0
글리세린	4.0
세테아릴알콜	0.8
글리세릴스테아레이트	1.0
트리에탄올아민	0.13
토코페릴아세테이트	0.3
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다미아너트오일	2.0
폴리솔베이트60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
카르복시비닐폴리머	1.0
방부제,색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

실시예 12 : 에센스

상기 실시예 2에서 제조한 나이아신-펩타이드류 나노좀들을 하나 또는 복수로 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 에센스를 일반적인 에센스 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
나이아신 펩타이드	0.005
글리세린	10.0
1,3-부틸렌글리콜	5.0
PEG 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
히드록시에틸 셀룰로오스	0.1
소듐히알루로네이트	8.0
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
옥틸도데세스-16	0.4
에탄올	6.0
향, 방부제, 색소	적량
정제수	잔량
합계	100

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims (9)

1. 니코티노일-EQ, 니코티노일-ET, 니코티노일-FP, 니코티노일-NI, 니코티노일-NL, 니코티노일-NP, 니코티노일-NY, 니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-QI, 니코티노일-VA, 니코티노일-VF, 니코티노일-VS, 니코티노일-VT, 니코티노일-WM, 니코티노일-YR, 니코티노일-YT, 니코티노일-AHK, 니코티노일-FWY, 니코티노일-GHR, 니코티노일-GPHyp, 니코티노일-TYR, 니코티노일-YGY, 니코티노일-PLG, 니코티노일-PLG-NH₂, 니코티노일-beta-AHSH, 니코티노일-DKYV, 니코티노일-GEPG, 니코티노일-GQPR, 니코티노일-GRKG, 니코티노일-KAKA, 니코티노일-SSNA, 니코티노일-VPAA, 니코티노일-YPFF, 니코티노일-YPFF-NH₂, 니코티노일-GPRPA, 니코티노일-GPRPA-NH₂, 니코티노일-ISELGW, 니코티노일-KLAKK, 니코티노일-KRGDR, 니코티노일-KRGKP, 니코티노일-KTTKS, 니코티노일-KVARP, 니코티노일-RKDVY, 니코티노일-YGGFL, 니코티노일-YGGFM, 니코티노일-SIKVAV, 니코티노일-VEPIPY, 니코티노일-VGVAPG, 니코티노일-EEMQRR, 니코티노일-EEMQRR-NH₂, 니코티노일-GPQGPQ 및 니코티노일-YGYTGA로 구성된 군으로부터 선택되는 피부 미백 활성을 나타내는 펩타이드.
   
2. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 멜라닌 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
   
3. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 티로시나아제의 활성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
   
4. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 TRP-1(tyrosinase-related protein-1)의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
   
5. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 TRP-2(tyrosinase-related protein-2)의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
   
6. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 MITF(microphthalmia-associated transcription factor)의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
   
7. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 N-말단의 니코티노일(nicotinoyl)에 의해 증가된 안정성을 갖는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
   
8. 니코티노일-EQ, 니코티노일-ET, 니코티노일-FP, 니코티노일-NI, 니코티노일-NL, 니코티노일-NP, 니코티노일-NY, 니코티노일-PG, 니코티노일-PS, 니코티노일-QI, 니코티노일-VA, 니코티노일-VF, 니코티노일-VS, 니코티노일-VT, 니코티노일-WM, 니코티노일-YR, 니코티노일-YT, 니코티노일-AHK, 니코티노일-FWY, 니코티노일-GHR, 니코티노일-GPHyp, 니코티노일-TYR, 니코티노일-YGY, 니코티노일-PLG, 니코티노일-PLG-NH₂, 니코티노일-beta-AHSH, 니코티노일-DKYV, 니코티노일-GEPG, 니코티노일-GQPR, 니코티노일-GRKG, 니코티노일-KAKA, 니코티노일-SSNA, 니코티노일-VPAA, 니코티노일-YPFF, 니코티노일-YPFF-NH₂, 니코티노일-GPRPA, 니코티노일-GPRPA-NH₂, 니코티노일-ISELGW, 니코티노일-KLAKK, 니코티노일-KRGDR, 니코티노일-KRGKP, 니코티노일-KTTKS, 니코티노일-KVARP, 니코티노일-RKDVY, 니코티노일-YGGFL, 니코티노일-YGGFM, 니코티노일-SIKVAV, 니코티노일-VEPIPY, 니코티노일-VGVAPG, 니코티노일-EEMQRR, 니코티노일-EEMQRR-NH₂, 니코티노일-GPQGPQ 및 니코티노일-YGYTGA로 구성된 군으로부터 선택되는 펩타이드를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
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