KR101166250B1 - 글리코펩티드 포스포네이트 유도체의 염산염 - Google Patents

글리코펩티드 포스포네이트 유도체의 염산염 Download PDF

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Abstract

약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염이 개시된다. 상기 개시된 염은 다른 염산염에 비하여 주변 온도에서 저장시 개선된 안정성을 갖는다. 또한 그러한 염의 제조방법이 개시된다.

Description

글리코펩티드 포스포네이트 유도체의 염산염{Hydrochloride salts of a glycopeptide phosphonate derivative}
본 발명은 글리코펩티드 항생제의 포스포네이트 유도체의 염산염에 관한 것으로서, 상기 염은 항생 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 제조하는 데에 유용하다. 본 발명은, 또한, 상기 염을 제조하는 방법에 관한 것이다.
글리코펩티드 (예를 들면, 달바헵티드 (dalbaheptide))는 다양한 미생물에 의해 생산되는, 잘 알려져 있는 부류의 항생제이다 (Glycopeptide Antibiotics, R. Nagarajan 편집, Marcel Dekker, Inc. New York (1994) 참조). 이러한 복합적 다중-고리 펩티드 화합물은 대부분의 그람 양성균 (Gram-positive bacteria)에 대한 매우 효과적인 항균성 약제이다.
본 명세서에서 그 전체로서 인용에 의해 통합된 것으로서, 미국 특허번호 제6,635,618호는 글리코펩티드 포스포네이트 유도체의 신규한 부류를 개시하는데, 이는 광범위한 그람 양성균에 대하여 효과적인 항균 활성을 갖는 강력한 항균제이다.
구체적으로, 상기 출원은 화학식 1의 화합물을 개시한다.
Figure 112006027639186-pct00001
상기 화합물은 당해 분야에서 텔라반신 (telavancin)으로 알려져 있다.
약제학적 조성물 및 제제를 제조하는 데에 텔라반신을 효과적으로 사용하기 위해서는, 주위 온도에서 저장시 개선된 안정성을 갖는 염의 형태를 얻는 것이 매우 바람직하다. 이전에는 그러한 염의 어떠한 형태도 개시된 적이 없다.
본 발명은 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 제공한다. 놀랍게도, 그러한 염산염이 다른 텔라반신 염산염에 비하여, 주위 온도에서 저장할 때 개선된 안정성을 갖는다는 사실이 밝혀졌다.
따라서, 본 발명의 일 구현예는, 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염에 관한 것이다.
다른 태양에서, 본 발명은 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염의 제조방법으로서, 상기 방법은:
(a) 약 4.8 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염 및 수성 용매계를 포함하고, 약 2.0 이하의 pH를 갖는 조성물을 제공하는 단계;
(b) 상기 조성물의 pH를 양 2.5 내지 약 5.0으로 조절하여, 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 형성하는 단계; 및
(c) 상기 (b) 단계에서 제조된 텔라반신 염산염을 분리하는 단계를 포함하는 제조방법에 관한 것이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 텔라반신 염산염 및 수성 용매계를 포함하고, pH가 약 2.5 내지 약 5.0 범위인 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 주위 온도에서 개선된 저장 안정성을 갖는 텔라반신의 특정 염산염에 관한 것이다. 그러한 염은 약제학적 조성물 및 제제를 제조하는 데에 유용하다.
본 발명의 서술에 있어서, 하기 용어들은 본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 하기에서 정의된 의미를 갖는다.
본 명세서에서 언급된 "염산염 (hydrochloride salt)" 또는 "하이드로클로라이드 (hydrochloride)"라는 용어는 염산 (hydrochloric acid)과 대상 화합물, 즉 텔라반신을 반응시켜서 제조된 염을 의미한다. 명확히 언급되지 않는 한, 상기 용어를 사용함으로써 임의의 특정 화학양론을 암시하지는 않는다.
"염화 이온 함량"이라는 용어는 염산염 형태로서 대상 화합물의 시료 내에 존재하는 염화 이온의 중량% (wt.%)를 의미한다. 상기 용어는 대상 화합물 내에 존재하는 공유결합된 염소 치환체, 즉, 텔라반신 방향족 고리 (고리 C 및 E) 상의 염소 치환체의 중량은 포함하지 않는다. 따라서, "염화 이온 함량"이라는 용어는 시료의 비-공유결합성 염화 이온 함량을 의미한다. 본 발명의 화합물을 설명하는데 사용되는 경우, 염화 이온 함량은 본질적으로 시료의 무수물 중량에 기초하여 계산되는데, 다시 말해서, 시료의 수분 함량은 시료의 전체 중량으로부터 제외된다.
본 명세서에서 언급된 "불활성 용매" 및 "불활성 희석제"라는 용어는 이들이 용매 또는 희석제로서 사용되는 반응의 반응조건 하에서 본질적으로 불활성인 용매 또는 희석제를 의미한다.
"수성 용매계"라는 용어는 물 및 적어도 하나의 불활성 유기 용매 또는 불활성 유기 희석제를 포함하는 용액을 의미한다.
수치 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한 및 하한 사이에 개재된 각각의 수치 (달리 명백하게 언급되지 않는 한, 하한 단위의 10분의 1까지) 및 임의의 다른 언급된 값 또는 그 언급된 범위 내의 사이 값은 본 발명에 포함된다. 이러한 더 작은 범위의 상한 및 하한은, 독립적으로, 그러한 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한, 본 발명에 포함되며, 기재된 범위 내에서 특히 배제된 한계에 종속된다. 기재된 범위가 하나 또는 두 개의 한계를 포함한다면, 그 포함된 한계들의 하나 또는 두 개를 배제하는 범위도 또한 본 발명에 포함된다.
일 태양에서, 본 발명은 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염에 관한 것이다.
다른 태양에서, 본 발명은 약 2.4 중량% 내지 약 4.7 중량%, 바람직하게는 약 2.4 중량% 내지 약 4.6 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 약 3.7 중량% 내지 약 4.6 중량%, 바람직하게는 약 3.7 중량% 내지 약 4.4 중량%, 예를 들면, 약 3.9 중량% 내지 약 4.4 중량% 또는 약 3.7 중량% 내지 약 3.9 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염에 관한 것일 수 있다.
시료 내에 존재하는 염화 이온의 중량%는, 예를 들면, United States Pharmacopeia (USP)23, section 221, page 1726 (1995)에서 개략적으로 설명된 방법, 또는 당업자에게 공지된 다수의 기술에 의해서 결정될 수 있다. 예를 들면, 통상적인 기술의 하나는 질산은을 사용하는 전위차적정 (potentiometric titration)이다. 또 다른 기술은, 질산은을 첨가하여 시료에서 침전된 염화은 함량을 측정하는 중량결정법 (gravimetric determination)에 기초한다. 대안으로, 시료 내에 존재하는 염화은의 중량%를 측정하는 임의의 적당한 기타 방법이 사용될 수 있다.
텔라반신 염산염의 시료 내에 존재하는 수분의 함량은 상당하게 변할 수 있기 때문에, 시료 내에 존재하는 어떠한 수분 함량도 시료의 염화 이온 함량이 계산되기 전에 제외된다.
부가적으로, 시료의 중량으로부터 염화 이온 함량이 계산되는데, 이러한 시료의 중량은 텔라반신 염산염 내에 존재하는 임의의 불순물을 포함한다.
텔라반신 염산염의 시료 내에 존재하는 불순물 함량은 통상적으로 약 15% 이하로서, 예를 들면 12% 이하이다.
따라서, 시료의 염화 이온 함량은 하기와 같이 측정된다:
시료의 중량 × (100 - 시료중 물의 중량%)/100 = 텔라반신 하이드로클로라이드의 중량.
시료의 중량 × (염화 이온의 중량%)/100 = 염화 이온의 중량.
염화 이온 함량 = (염화 이온의 중량 / 텔라반신 하이드로클로라이드의 중량) × 100.
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수분 함량은 통상적으로 United States Pharmacopeia (USP)25, section 921, page 2085-2088 (2002)에서 개략적으로 설명된 바와 같이, Karl Fischer 전위차법을 사용하여 측정되나, 또한, 당업자에게 공지된 다른 기술을 사용하여서도 측정될 수 있다.
참고적으로, 텔라반신 일염산염 (분자량: 1792.06) (0% H2O)은 1.98 중량%의 염화 이온 함량을 갖는다. 상응하여, 텔라반신 이염산염 (몰 중량 1828.52) 및 텔라반신 삼염산염 (몰 중량 1864.98)은 각각 3.88 중량% 및 5.70 중량%의 염화 이온 함량을 갖는다.
따라서, 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 본 발명의 염산염은 텔라반신 몰당량당 약 1 내지 약 3의 몰당량에 해당한다. 일 태양에서, 본 발명은 텔라반신 몰당량당 약 1.5 내지 약 2.5 몰당량의 하이드로클로라이드를 갖는 텔라반신 염산염에 관한 것이다. 본 발명의 염산염에 대한 바람직한 화학양론은 텔라반신 몰당량당 약 2 몰당량의 하이드로클로라이드이다.
글리코펩티드와 같은 약제학적 화합물의 분해 산물 (degradation product)이 관심의 대상이 되는데, 이는 그러한 분해 산물은 모 분자 (parent molecule)와는 그 생물학적 활성 (biological activity) 또는 치료 효과가 다를 수 있기 때문이다. 예를 들면, J.Diana 등에 의한 Journal of Chromatography A, 996: 115-131 (2003)에서는 반코마이신 (vancomycin) 불순물에 대하여 설명하고 있다.
주위 온도에서 저장하는 경우, 특정 텔라반신 염산염은 바람직하지 않은 분해 산물 및 불순물을 생산하는 것이 알려져 있다. 두 개의 주요 분해 산물은 (1) 텔라반신의 유사아글리콘 (pseudoaglycone) 불순물; 및 (2) 텔라반신의 아글리콘 (aglycone) 불순물 (그 구조는 하기에 도시됨)이다. 유사아글리콘 불순물은 텔라반신의 지질화된 반코사민 (lipidated vancosamine) 모이어티가 가수분해되어 생성되고, 아글리콘 불순물은 텔라반신의 글루코스 모이어티가 가수분해되어 생성된다.
Figure 112006027639186-pct00005
텔라반신의 유사아글리콘 (pseudoaglycone)
Figure 112006027639186-pct00006
텔라반신의 아글리콘 (aglycone)
종래에 개시된 텔라반신 제조방법은 약 2 이하의 pH를 갖는 용액으로부터 텔라반신 염산염을 분리하여, 그로부터 약 5 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 얻는 것으로, 즉, 대략 텔라반신 삼염산염인 텔라반신 염산염을 제공하는 것이다. 20-30℃에서 이틀 동안 건조한 후, 상기 염의 시료 로트 (lot)는 유사아글리콘 및 아글리콘 분해 산물을 합해서, 약 8 중량% 함유한다. 약 5 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 25℃에서 이틀 동안, 조절된 조건 하에서 저장하는 경우, 0.6% 이상의 유사아글리콘 및 0.4% 이상의 아글리콘이 증가하였다.
반면, 유사한 조건 하에서, 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염의 경우, 0.2% 이하의 유사아글리콘 불순물, 0.07% 이하의 아글리콘 불순물이 증가하였다. 따라서, 본 발명의 염을 주위 온도에서 저장하는 경우에 생성된 유사아글리콘 및 아글리콘 불순물의 함량은 종래에 개시된 염산염에 의해 생성된 것에 비해 현저하게 작다.
제2 구현예에서는, 본 발명은 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염의 제조방법에 관한 것이다. 상기 방법은 제1 단계 (a)에서 약 4.8 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 포함하는 조성물을 제공하는 단계, 및 제2 단계 (b)에서 상기 조성물의 pH를 조절하는 단계를 포함한다.
본 발명의 방법은 본 명세서에서 설명된 텔라반신 염산염의 일반적 합성 개요로부터 직접 얻은 용액을 사용할 수 있거나, 상기 조성물은 분리된 텔라반신 염산염을 재용해시켜서 형성될 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 태양에서는, 단계 (a)의 조성물을 텔라반신 염산염의 합성 방법으로부터 직접 얻는다. 본 발명의 다른 태양에서는, 4.8 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 분리된 텔라반신 염산염을 재용해시켜 단계 (a)의 조성물를 포함하게 한다. 예를 들면, 동결건조된 4.8 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 재용해시켜, 단계 (a)의 조성물을 포함하게 할 수 있다.
상기 방법의 단계 (a)에서, 조성물은 텔라반신 염산염 및 수성 용매계를 포함하고, 상기 조성물은 약 2.0 이하의 pH를 갖는다. 단계 (a)에서 사용되는 수성 용매계는, 통상적으로 물 및 하나 이상의 유기 희석제를 포함한다. 물과 조합하여 사용하기에 적당한 유기 희석제는: (1) 물과 혼화성이 있고; 및 (2) 텔라반신 염산염에 대하여 화학적으로 불활성이다. 바람직한 유기 희석제는, 아세토니트릴, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, tert-부탄올, 디옥산 등을 포함한다. 예를 들면, 유기 희석제는 아세토니트릴, 메탄올 및 에탄올로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 예로서, 단계 (a)의 조성물은 아세토니트릴 및 물을 포함한다. 단계 (a)의 수성 용매계가 물에 대하여 약 40% 내지 약 60%의 (v/v) 아세토니트릴 용액인 경우, 특별히 관심의 대상이 된다.
단계 (a)의 조성물 내 텔라반신 염산염의 바람직한 농도는 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL이다. 예를 들면, 단계 (a)의 초기 조성물 내 텔라반신 염산염의 농도는 약 20 mg/mL 내지 약 30 mg/mL이다.
본 발명의 단계 (b)에서, 조성물의 pH는 약 2.5 내지 약 5.0 범위로 조절된다. 본 발명의 일 태양에서는, 단계 (b)에서, 조성물의 pH가 약 3.0 내지 약 5.0의 범위로 조절된다. 예를 들면, 단계 (b)에서, 조성물의 pH는 약 3.0 내지 약 4.5로 조절될 수 있고, 예를 들어 약 3.0 내지 약 4.0으로 조절될 수 있다. 단계 (b)에서, 조성물의 pH는 약 3.5 내지 약 4.5의 범위로 조절될 수 있다. 예를 들면, 조성물의 pH는 약 3.5 내지 약 4.0의 범위로 조절될 수 있다. 일 태양에서, 조성물의 pH는 약 4.0 내지 약 4.5의 범위로 조절된다.
단계 (b)에서, 조성물의 pH는 통상적으로 단계 (a)의 조성물에 알칼리 수산 화물을 적가하여 조절된다. 임의의 적당한 알칼리 수산화물이 사용될 수 있고, 예를 들면, 수산화바륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬 등을 포함한다. 조성물의 pH를 조절하기 위해, 특히, 수산화나트륨을 사용한다.
마지막으로, 세 번째 단계 (c)에서, 단계 (b)의 조성물로부터 당업계에 공지된 다수의 임의의 방법에 의해 텔라반신 염산염을 분리한다. 예를 들면, 텔라반신 염산염이 침전될 수 있고, 원심분리되거나 여과될 수 있다.
본 발명의 일 태양에서는, 단계 (c)에서, 침전 또는 여과에 의해서 상기 조성물로부터 텔라반신 염산염을 분리한다. 예를 들면, 상기 조성물로부터 텔라반신 염산염을 침전시키기 위해서 과량의 유기 희석제가 사용될 수 있다. 단계 (b)의 상기 조성물로부터 텔라반신 염산염을 침전시키기 위한 단계 (c)에서 사용할 수 있는 적당한 유기 희석제는: (1) 물과 혼화성이 있고; (2) 텔라반신 염산염에 화학적으로 불활성이고; 또한 (3) 단계 (b)의 조성물에 첨가되면, 텔라반신 염산염이 침전되는 그러한 것들이다. 예를 들면, 유용한 희석제로서, 아세토니트릴, 메탄올, 에탄올, 아세톤 등이 포함된다. 본 발명의 일 태양에서는, 단계 (c)에서, 단계 (b)의 조성물에 아세토니트릴을 첨가하여 텔라반신 염산염을 침전시킨다. 본 발명의 또 다른 태양에서는, 단계 (b)의 조성물에 아세톤을 첨가하여, 텔라반신 염산염을 침전시킨다.
원하는 경우, 단계 (c)에서 분리된 침전물을, 선택적으로, 적당한 유기 희석제로 세척할 수 있다. 예를 들면, 아세토니트릴을 단계 (b)의 조성물에 첨가하여 텔라반신 염산염을 침전시키는 경우, 결과적인 침전물을, 선택적으로, 아세토니트릴로 세척하고, 이어서, 메틸 tert-부틸 에테르 (MTBE)로 세척한다. 대안으로, 아세톤을 사용하여 텔라반신 염산염을 침전시키고, 결과적인 침전물을 선택적으로 아세톤으로 세척한 다음, MTBE로 세척한다.
본 명세서에 서술된 본 발명의 방법의 단계 (a), (b) 및 (c)는, 일반적으로 약 15℃ 내지 약 30℃의 내부 온도에서, 통상적으로 약 20℃ 내지 약 25℃의 범위에서 수행된다.
통상적으로, 본 발명의 방법을 수행하는 경우, 여과, 세척, 건조 및 체로 거르는 것 (sieving)은 모두 질소, 아르곤 등과 같은 불활성 분위기 하에서 행해진다.
본 발명은, 다른 구현예에서, 텔라반신 염산염 및 수성 용매계를 포함하는 조성물로서, 상기 조성물의 pH가 약 2.5 내지 약 5.0의 범위에 있는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 태양에서는, 본 발명은 상기 조성물로서, 본 명세서에서 서술된 특정 pH 값 중 어느 하나를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현예는, 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량 또는 본 명세서에서 서술된 특정 염화 이온 함량 범위 중 어느 하나의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 제조하기 위한, 본 명세서에 서술된 방법 중 어느 하나에 의해서 제조된 산물에 관한 것이다.
일반적인 합성 절차
텔라반신 또는 그 염은 용이하게 입수할 수 있는 출발 물질로부터 하기 일반적인 방법 및 절차를 사용하여 제조될 수 있다. 통상적인, 또는 바람직한 공정 조건 (즉, 반응 온도, 시간, 반응물의 몰비, 용매, 압력 등)이 주어지는 경우에도, 달리 언급되지 않는 한, 기타 반응 조건도 함께 적용될 수 있다. 최적 반응 조건은 사용되는 특정 반응물 또는 용매에 따라 변할 수 있으나, 그러한 조건은 당업자라면 일반적인 최적화 절차에 의해서 결정할 수 있다. 또한, 특정 관능기가 바람직하지 않은 반응을 겪지 않게 하기 위해서, 통상적인 보호기 (protecting group)가 필요할 수도 있다는 것은 당업자에게 명백하다.
텔라반신 또는 그 염의 제조방법에 대한 상세한 공정은 2002년 8월 23일 출원된 미국 특허출원 번호 제10/226,988호; 2002년 8월 23일 출원된 미국 특허출원 번호 제10/226,676호; 2002년 8월 23일 출원된 미국 특허출원 번호 제10/226,428호에 설명되어 있고, 상기 인용문헌들에서 개시된 것은 그 전체로서 본 명세서에서 인용에 의해 통합되어 있다. 상기 간행물들에서 개시된 임의의 절차를 사용하여 텔라반신 또는 그 염을 제조할 수 있다.
예시적으로, 반코마이신 또는 그 염은 먼저, N-보호된-데실아미노아세트알데히드를 사용하여 반코마이신 아미노 말단 (terminus)에서 환원적으로 알킬화된다. 예를 들면, 반코마이신 또는 그 염의 1 몰당량은 N-Fmoc-데실아미노아세트알데히드와 같은 1 몰당량 이상의 N-보호된-데실아미노아세트알데히드 및 불활성 희석제 내의 과량의 적당한 염기와 결합되어서, 조성물을 형성한다. 바람직하게는, 상기 방 법의 단계에서, 알데히드 약 1 내지 약 2 몰당량이 사용된다. 상기 조성물에서, 알데히드와 반코마이신의 염기성 질소 원자, 즉, 반코사민 (vancosamine) 질소 원자 및 N-말단 (루시닐 (leucinyl)) 질소 원자의 사이에서 이민 및/또는 헤미아미날 (hemiaminal)의 혼합물이 형성되는 것으로 보인다.
통상적으로, 반코마이신 또는 그 염 및 알데히드는 과량의 적당한 염기 존재 하에서 불활성 희석제 내에서 결합되어, 혼합물을 형성한다. 적당한 불활성 희석제 또는 용매의 조합은, 예를 들면, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리디논, 아세토니트릴/물 등 또는 그 혼합물을 포함한다.
상기 단계에서, 반코마이신염을 중화하고, 이민 및/또는 헤미아미날의 형성을 촉진하기 위하여 임의의 적당한 염기가 사용될 수 있는데, 아민, 알칼리 금속 카르복실산염 (즉, 소듐 아세테이트 등)과 같은 유기 염기 및 알칼리 금속 카보네이트 (즉, 리튬 카보네이트, 포타슘 카보네이트 등)과 같은 무기 염기가 이에 포함된다. 통상적으로, 이러한 단계에서 사용되는 염기는 3차 아민이고, 그 예로서, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸몰폴린 등을 들 수 있다.
본 발명의 방법의 상기 첫 번째 단계는 통상적으로 약 0℃ 내지 약 75℃의 범위에서, 바람직하게는 주위 온도 (즉, 약 20-25℃)에서, 약 1 내지 24 시간, 바람직하게는 약 6 내지 12시간 동안, 또는 이민 및/또는 헤미아미날의 형성이 실질적으로 완료될 때까지 수행된다.
이민 및/또는 헤미아미날 혼합물의 형성이 실질적으로 완료되면, 상기 혼합물을 과량의 산으로 산성화한다. 본 발명의 방법의 상기 단계에서 임의의 적당한 산이 사용될 수 있고, 그 예로서, 카르복실산 (예를 들면, 아세트산, 트리클로로아세트산, 구연산, 포름산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산 등), 미네랄 산 (예를 들면, 염산, 황산 또는 인산) 등을 들 수 있다. 일반적으로 상기 단계에서 사용되는 산은 트리플루오로아세트산 또는 아세트산이다. 산은 통상적으로 반코마이신 (및 염기)에 비해서 과량의 몰을 첨가한다.
상기 산성화 단계는 통상적으로 약 0℃ 내지 약 30℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 약 25℃에서, 약 0.25 내지 약 2.0 시간, 바람직하게는 약 0.25 내지 약 1.5 시간 동안 수행된다.
일반적으로, 극성, 양성자성 용매를 상기 단계 동안 첨가하는데, 그 예로서,메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌글리콜 등을 들 수 있다. 대안으로, 메탄올/테트라히드로퓨란, 메탄올/1,2-디메톡시에탄 등과 같은 혼합된 극성 양성자성/비-양성자성 (non-protic) 용매가 사용될 수 있다.
산성화 단계 후, 이어서, 혼합물을 환원제와 접촉시켜 이민 및/또는 헤미아미날을 환원시킨다. 상기 단계에서 글리코펩티드 내에 존재하는 관능기와 상용성이 있는 임의의 적당한 환원제를 사용할 수 있다. 예를 들면, 적당한 환원제는 소듐 보로하이드라이드, 소듐 시아노보로하이드라이드, 아연 보로하이드라이드, 소듐 트리아세트옥시보로하이드라이드, 피리딘/보란, tert-부틸아민/보란, N-메틸몰폴린/보란, 암모니아/보란, 디메틸아민/보란, 트리에틸아민/보란, 트리메틸아민/보란 등과 같은 아민/보란 복합체를 포함한다.
통상적으로, 환원 (즉, 환원제로 처리)은, 예를 들면, 알콜 (예를 들어, 메 탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올 또는 부탄올), 물 등과 같은 양성자성 용매의 존재 하에서 수행된다. 일반적으로, 상기 환원 단계 동안, 극성, 양성자성 용매가 존재한다. 극성, 양성자성 용매는 전술한 산성화 단계 동안에 첨가할 수 있다.
본 발명의 상기 환원 단계는 통상적으로 약 0 내지 약 30℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 약 25℃에서, 약 0.5 내지 약 24시간 동안, 바람직하게는 약 1 내지 약 6시간 또는 환원이 실질적으로 완료될 때까지 수행된다.
원하는 경우, 환원성 알킬화 반응 산물의 n-데실아미노에틸 쪽에 존재하는 보호기는 다음 합성 단계 전에 제거될 수 있다. 예를 들면, 9-플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc) 보호기가 사용되는 경우, 상기 기 (group)는 통상적으로 tert-부틸아민과 같은 아민으로 처리하여 제거된다. 상기 반응은 일반적으로 N3"-[2-(데실아미노)에틸]반코마이신을 얻기 위한 환원성 알킬화 반응이 수행되는 반응 용기와 같은 반응 용기에서 수행된다.
이어서, 환원성 알킬화 반응에 기인한 글리코펩티드 유도체는, 염기성 반응 조건 하에서, 레조르시놀 (resorcinol) 모이어티에서 아미노메틸포스폰산 및 포름알데히드와 결합하여, 텔라반신 또는 그 염을 생성한다. 상기 단계는, 통상적으로, 약 2 내지 약 10 몰당량의 과량의 아미노메틸포스폰산을, 예를 들어 약 0.9 내지 약 1.1 몰당량과 같은 약 1 몰당량의 포름알데히드 및 염기 존재 하의 환원성 알킬화 반응에 기인한 약 1 몰당량의 글리코펩티드 유도체 또는 그 염과 접촉시킴으로써 수행된다.
본 발명의 상기 단계에서 사용되는 포름알데히드는, 예를 들면, 약 5 내지 약 15 중량% 메탄올을 선택적으로 포함하는 37 중량% 수용액과 같은 수성 용액 (즉, 포르말린)으로서 통상적으로 첨가된다.
상기 반응에서 임의의 적당한 염기가 사용될 수 있는데, 이러한 염기에는 예를 들면, 3차 아민과 같은 유기 염기, 및 알칼리 금속 수산화물 (즉, 수산화나트륨)과 같은 무기 염기가 포함된다. 통상적으로, 상기 염기는, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 등과 같은 3차 아민이다. 아민을 포함하는 포스포노에 대한 염기의 몰비는 약 3:1 내지 5:1이다. 통상적으로, 상기 혼합물의 pH는 약 10 내지 약 11이다. 상기 반응은 물, 아세토니트릴/물 등과 같은 불활성 희석제에서 수행된다. 예를 들면, 상기 단계는 약 3:2 내지 순수한 물의 v/v 비율 범위를 갖는 아세토니트릴/물 또는 물에서 수행될 수 있다.
상기 단계는, 통상적으로 약 -20℃ 내지 약 30℃ 범위의 온도에서, 예를 들면, 약 -10℃ 내지 약 -5℃에서, 약 6 내지 약 48 시간 동안 또는 반응이 실질적으로 완료될 때까지 수행된다.
결과적인 화합물 또는 염을 통상적인 방법에 따라 분리하며, 이러한 통상적인 방법에는 침전, 여과 등이 포함된다. 통상적인 분리 절차에서, 수성 염산과 같은 적당한 산을 첨가하여 혼합물의 pH를 약 2 내지 약 3으로 조절한다. 산성화 단계 동안, 일반적으로 혼합물의 온도를 약 5℃ 이하로 유지한다. 이어서, 아세토니트릴과 같은 유기 희석제를 첨가하여 반응 산물의 침전을 촉진하고, 결과적인 침전물을 여과에 의해서 수집하고, 선택적으로 추가적인 희석제로 세척한다. 대안으로, 상기 용액을 직접 사용하여 본 발명의 염산염을 형성할 수 있다.
원하는 경우, 상기에서 형성된 침전을 역상 HPLC, 또는 예를 들어 수지 크로마토그래피와 같은 기타 크로마토그래피법을 사용하여 더 정제한다. 수지 크로마토그래피용으로 적당한 다양한 폴리스티렌-디비닐 벤젠 수지가 상업적으로 입수 가능한데, 그 예로서, TosoHaas (Montgomery, PA), Rohm & Haas (Philadelphia, PA), Mitsubishi Chemical Industries LTD. (Tokyo, Japan); 및 Dow Chemical Co. (Midland, MI)를 들 수 있다.
수지는 과량의 물로 적시고, 산성화된 물 및/또는 산성화된 극성 유기 용매의 수성 용액으로 세척하여 제조한다. 정제할 텔라반신 시료는 극성 유기 용매를 선택적으로 포함할 수 있는 산성화된 물에 용해시킨다.
적당한 극성 유기 용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알콜, 아세토니트릴 등을 포함한다. 제1 및 제2 수성 용액을 산성화하기 위한 적당한 산은 아세트산, 트리플루오르아세트산, 염산, 황산, 인산 등을 포함한다. 시료 용액의 pH는, 바람직하게는 약 2 내지 약 5이다. 시료 용액의 소량 일부를 수거하여 분석용 기준으로 사용한다.
시료 용액을 칼럼에 넣고, 제2 용액으로서 산성화된 극성 유기 용매로써 용리하는데, 상기 제2 용액의 분획들을 칼럼으로부터 수집한다. 통상적으로, 제2 산성화된 수성 용액은 약 10 mM의 산 농도를 갖고, 비례적으로 약 1:3 내지 약 1:15의 극성 유기 용매 : 물의 비를 갖는다.
각각의 분획은, 예를 들어 박막 크로마토그래피 또는 HPLC에 의해 시료의 존재 여부, 농도 및 순도가 모니터링된다. 예를 들면, 약 85% 순도 텔라반신 (또는 그 염)과 같이, 설정된 임계치보다 높은 시료 순도를 갖는 분획들을 수집하였다. 통상적으로, 분획들 내에서 수집되는 화합물 1의 농도는 약 0.5 - 5.0 mg/mL이다.
텔라반신의 농도를 증가하기 위해 상기에서 수집된 수집된 분획들을 제2 폴리스티렌 수지 칼럼으로 넣는다. 이러한 절차는, 또한 임의의 제2 염 (상기 정제 단계 동안 산 및 텔라반신의 상호작용에 의해서 형성됨)을 염산염으로 변환하기 위한 염 교환 과정으로서 작용한다. 통상적으로, 텔라반신 염산염으로서 제조된다. 그러나, 상기 정제 단계 동안에 미량의 다른 염이 생성될 수 있다.
앞에서의 정제 단계 동안 수집된 수집 분획들을 물로 희석한다. 예를 들면, 분획들을 약 2배 희석할 수 있고, 이어서, 제2 수지 크로마토그래피 칼럼으로 넣는다. 예를 들어 10:90:0.5 부피비의 아세토니트릴:물:염산 용액을 사용하여 칼럼을 세척한다. 분획들을 모니터링하면서 ~40-60:60-40 부피비의 아세토니트릴-물 용액을 사용하여 대상 화합물을 칼럼으로부터 용리한다. 예를 들어 5 mg/mL와 같은, 원하는 임계치보다 높은 시료 농도를 갖는 분획들을 수집했다. 더욱 정제 또는 농축하기 위해, 상기 수지 크로마토그래피 정제 단계를 여러 번 반복할 수 있다. 대안으로, 침전 및 여과 또는 당업자에 공지된 방법에 의해 정제된 산물을 용출액 (eluate)으로부터 분리할 수 있다.
통상적으로, 결과적인 수집된 분획들은 텔라반신 삼염산염으로, 아세토니트릴 수용액 내 5.0 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖고, 약 2.0 이하의 pH를 갖는다.
본 명세서에서 설명된 본 발명의 방법에 있어서, 단계 (a)의 조성물은 전술한 농축 및 염 교환 단계에서 수집된 수집 분획들일 수 있거나, 또는 분획들에 대해 건조하거나 동결 건조하는 것과 같은 처리를 더 할 수 있다. 이어서, 수성 용매계 내에 재용해시켜서, 단계 (a)의 조성물을 포함하게 한다.
상기 반응에 사용된 방법은 당업계에 공지되어 있다. 적당한 시약은 상업적으로 입수 가능하거나, 또는 상업적으로 입수 가능한 출발 물질 및 통상적인 시약을 사용하여 통상적인 절차에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, Jerry March의 Advanced Organic Claemistry, 제4판, 1992, John Wiley and Sons, New York, 959쪽; 및 Frank R. Hartley (ed.)의 The Chemistry of Organophosphorous Compounds, 1-4권, John Wiley and Sons, New York (1996) 및 그 참고문헌들을 참조할 수 있다.
본 발명의 화합물을 제조하기 위한 추가적 세부사항 및 방법은 하기 실시예에서 설명된다.
하기 실시예들은 본 발명을 예시하기 위해서 제공되며, 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
도 1은 시료를 25℃에서 저장하는 경우, 8 개 텔라반신 염산염 시료에 존재하는 유사아글리콘의 HPLC 면적% vs. 시간을 도시한 그래프이다.
도 2는 시료를 25℃에서 저장하는 경우, 8 개 텔라반신 염산염 시료에 존재하는 아글리콘의 HPLC 면적% vs. 시간을 도시한 그래프이다.
이하 실시예에서, 하기 약어는 다음과 같은 의미를 갖는다. 정의되지 않은 임의의 약어는 일반적으로 통용되는 의미를 갖는다. 달리 정의되지 않는다면, 모든 온도는 섭씨 (℃)이다.
ACN = 아세토니트릴
BV/h = 시간당 층 부피 (bed volume)
DMF = N,N-디메틸포름아미드
eq. = 몰당량
Fmoc = 9-플루오레닐메톡시카르보닐
MTBE = 메틸 tert-부틸 에테르
TLC = 박막 크로마토그래피
TFA = 트리플루오로아세트산
하기 서술된 실시예에서, HPLC 시료 분석은 Agilent사가 제조한 것으로서, 5 미크론 공극 크기를 갖고, C14 실리카로 충진된 Zorbax RP-Bonus 4.6mm×250mm 칼럼을 구비하고 있는 Agilent (Palo Alto, CA) Series 1100 기기를 사용하여 분석하였다. 254nm에서 UV 흡광도에 의해 검출하였다. 이동상 A는 2%-98%-0.1% ACN-H2O-TFA이었고; 이동상 B는 90%-10%-0.1% ACN-H2O-TFA이었다. 하기와 같은 농도 구 배의 이동상 B를 포함하는 이동상 A를 1.0 mL/분의 유속으로 사용하였다: 10 내지 43% B는 30분 동안; 43% B는 5분 동안; 43 내지 100% B는 5분 동안; 100 내지 10% B는 1분 동안; 및 10% B는 14분 동안 행하였다.
하기 실시예에서, 반코마이신 하이드로클로라이드 세미-수화물을 Alpharma, Inc. Fort Lee, NJ 07024 (Alpharma AS, Oslo Norway)로부터 구입하였다. 다른 시약 및 반응물들은 Aldrich Chemical Co., (Milwaukee,WI)로부터 입수하였다. 또한, 달리 언급되지 않은 경우는 시약, 출발물질 및 용매는 상업적 입수처 (예를 들면, Aldrich, Fluka, Sigma 등)로부터 구입하였고, 더 정제하지 않고 사용하였다.
Model 703 펌프/교반기를 구비한 Brinkmann Metrohm Karl Fischer Model 831 Coulometer를 사용하여 테스트 시료의 수분 함량을 측정하였다. 테스트 시료의 염화 이온 중량 퍼센트는 0.1 N 질산은을 사용하는 전위차적정 및 Metrohm Ltd. (Herisau, Switzerland)에서 제조한 736 GP Titrino Potentiometric Titrator를 사용하여 측정하였다. 기기를 정기적으로 기지의 시료들에 대하여 캘리브레이션하여 정확성을 확보하였다.
실시예 1
약 4.8 이상의 염화 이온 함량을 갖는
텔라반신 염산염의 합성
a. N van -2-(n- 데실아미노 )에틸 반코마이신 하이드로클로라이드의 제조
기계적 교반기, 온도계 및 질소 기포 발생기 (bubbler)를 구비한 5L 3구 플 라스크에 DMF (760 g, 800 mL)를 넣고, 30-35℃까지 가열하였다. 교반하는 동안, 디이소프로필에틸아민 (18.1 g, 0.14 몰, 2 당량) 및 반코마이신 하이드로클로라이드 (100 g, 0.067 몰, 1 당량)을 (부분으로 나누어서) 연속으로 첨가하였다. 첨가 깔대기를 DMF (114 g, 120 mL)로 세척하였다. 혼합물을 30-35℃에서 0.5 시간 동안 교반한 후, 20-25℃로 냉각하였다. N-Fmoc-데실아미노아세트알데히드 (29.7 g, 0.07 mol, 1.05 당량)를 상기 혼합물에 첨가하였고, 20-25℃에서 6-8 시간 동안 교반하였다. 이어서, 메탄올 (220 g, 280 mL)을 첨가하였고, 트리플루오로아세트산 (31.2 g, 21 mL, 0.272 mol, 4 당량)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 약 15분 동안 교반한 후, 보란 tert-부틸아민 복합체 (5.7 g, 0.067 mol, 1 당량)를 첨가하였고, 상기 혼합물을 약 2 시간 동안 교반하였다. tert-부틸아민 (29.8 g, 0.403 mol, 6 당량)을 첨가하였고, 결과적인 혼합물을 약 55℃로 가열하였고, 2-3 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 약 20-25℃로 냉각하고, 약 20-25℃에서 0.5 N HCl (540 mL)을 첨가하여 용액을 pH 7.25-7.35로 조절하였다. 10% 염류 용액 (brine solution) (2400 g)을 약 20-25℃에서 온도를 유지하면서 대략 4 시간에 걸쳐서 첨가한 후, 상기 현탁액을 0-5℃로 냉각하였고, 3-4 시간 동안 교반하였다. 결과적인 슬러리를 Whatman #2 필터 페이퍼 (18.5 cm 직경, 8 미크론)로 여과하였다. 습괴 (wet cake)를 물 (2 × 200 g) 및 메틸 tert-부틸 에테르 (2 × 200 g)를 사용하여 연속적으로 세척하였다. 습괴를 에틸 아세테이트 (600g)로 8-12 시간 동안 재슬러리화하였다. 상기 혼합물을 여과한 후, 에틸 아세테이트 (2 × 100 g)로 세척하였다. 상기 습괴를 가정용 진공청소기 (40-50 mmHg)로 수분 함량이 약 10% 이 하의 검출 한계 (limit of detection: LOD)에 도달할 때까지 약 40℃에서 건조하였다. 회색(황색)을 띤 백색 (off-white) 분말로서 표제 화합물 (102 g, ~85 % 순도)을 얻었고, 정제하지 않고 다음 반응에 사용하였다.
b. 미정제 ( crude ) 텔라반신 하이드로클로라이드의 제조
기계적 교반기, 온도계 및 질소 기포 발생기 (bubbler)를 구비한 12L 3구 플라스크에 아미노메틸포스폰산 (47.7 g, 0.43 mol, 5 당량)을 첨가하였다. 아세토니트릴 (786 g, 1L) 및 물 (1000g, 1L)을 첨가하였고, 상기 혼합물을 교반하여 20-25℃에서 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민 (222 g, 0.3 L, 20 당량)을 첨가하였고, 상기 혼합물을 20-25℃에서 20분 동안 교반하였다. 상기 (a)의 제조 산물인, Nvan-2-(n-데실아미노)에틸 반코마이신 하이드로클로라이드 (200 g, 0.086 mol (분석결과), 1 당량)를 첨가하였고, 상기 혼합물을 20-25℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 물 (9.08 g, 0.111 mol, 1.3 당량)에 37 중량% 포름알데히드를 첨가하기 전에, 상기 혼합물을 -5℃로 냉각하였다. 상기 혼합물을 질소 하에서 12-24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 3N HCl (615 mL)를 적가하여, 혼합물의 pH를 10.8 내지 2.8로 조절하였다. 상기 혼합물을 20-25℃로 가열하였다. 에탄올 (95%, 8L)을 ~2.5 시간에 걸쳐서 상기 혼합물에 첨가하였다. 결과적인 현탁액을 5-10℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 상기 현탁액을 Whatman #2 필터 페이퍼 (24 cm 직경, 8 미크론)로 여과하였다. 습괴를 에틸 아세테이트 (2 × 200 mL)로 세척하여, 미세한 회색(황색)을 띤 백색 (off-white) 분말을 얻었다. 상기 습괴를 25 ℃에서 건조하여 텔라반신 하이드로클로라이드를 제조하였고, HPLC 분석에 의해 표제 화합물임을 확인하였다 (184 g, 76.5% 순도).
c. 정제 단계
후방 압력제어기 (back pressure regulator), 튜브연동식 펌프 (peristaltic pump), UV 검출기 및 분획 수집기 (fraction collector)를 구비한 2" × 25 cm 칼럼으로 HP20SS 폴리스티렌-디비닐 벤젠 수지 (Agilent사)를 넣었다.
100% 에탄올의 3 층 부피 (bed volume: BV)를 약 2-3 BV/h의 유속으로 칼럼을 통과하도록 펌핑하여 칼럼을 미리 조정하였다. 시료를 넣기 전에, 2-3 BV/h 유속으로, 이동상 A {15% 에탄올 (190 프루프 (proof), 5% 메탄올로 변성됨), 85% 물, 1% 아세트산} 3-5 BV로 칼럼을 평형상태로 만들었다.
상기 제조 단계 (b)로부터의 산물 용액을 20-25 mg/mL 농도에서 80:10:10 (v/v/v) 물:에탄올:아세트산과 혼합하였고, 1-2 시간 동안 교반하였다. 상기 용액을 Celite (5g/L 용액)와 15분 동안 혼합하였고, 1 미크론 필터로 여과하였고, 1.5 BV/h로 칼럼에 넣었다. 이동상 A를 사용하여 20 mL/분의 속도로 30분 동안 (~1 BV) 칼럼을 세척하였다. 이동상 B (26% 에탄올, 72% 물, 1% 에틸 아세테이트, 1%아세트산)를 ~1 BV/h (Biotage 75M 카트리지에 대하여 13.5 mL/분)의 유속으로 ~5 시간에 걸쳐서 사용하여, 각각 대략 27 mL 부피를 갖는 분리된 분획들을 용리하였다.
각 분획들을 박막 크로마토그래피를 사용하여 텔라반신의 존재에 대하여 분석하였다. 이어서, 텔라반신을 포함하는 분획들을 HPLC를 사용하여 분석하였고, 분획 내의 텔라반신 농도 및 순도를 측정하였다. 85% 이상 순도를 갖는 상기 분획들을 수집하였다. 수용가능한 순도를 갖는 수집된 분획의 전체 부피는 ~ 5 BV이었다.
d. 농도 및 염 교환
Amberlite XAD-1600 폴리스티렌-디비닐 벤젠 수지 (Rohm & Haas)를 90% 탈이온수, 10% 에탄올 및 0.1% 아세트산 (v/v/v) 혼합물로 3일 동안 세척하였다. 상기 수지를 칼럼에 넣고, 이어서, 100% 에탄올의 3 층 부피 (BV)를 약 2 BV/h의 유속으로 칼럼을 통과하도록 펌핑하여 칼럼을 미리 조정하였다. 시료를 넣기 전에, ~2 BV/h 유속으로, 이동상 A {15% 에탄올 (190 프루프 (proof), 5% 메탄올로 변성됨), 85% 물, 0.6% 아세트산} 3-5 BV로 칼럼을 평형상태로 만들었다.
상기 정제 단계 (c)에서 수집된 풀링된 시료들을 물 (2 × 수집된 분획 부피)로 희석하였고, 상기 용매 조성물에 물을 첨가하여 ~25% 수성 에탄올로부터 85% 물, 15% 에탄올로 조절하였다. 이어서, 상기 용액을 ~1 BV/h의 유속으로 칼럼에 펌핑하였다. UV 검출기에 의해 모니터링된 수집 효율 (catch efficiency)은 98% 이상이었다.
10:90:0.5 부피비의 아세토니트릴-물-농축 수성 염산 용액을 제조하였고, ~1 BV/h의 유속으로 2 BV를 칼럼에 펌핑하였다.
이어서, 농축 HCl로 pH 2.0으로 조절된, 부피비 50:50의 아세토니트릴-물 용액을 ~1 BV/h의 유속으로 칼럼으로 펌핑하여, 칼럼으로부터 텔라반신 염산염을 용리하였다.
각 분획을 수집하였고, 텔라반신 염산염이 존재하는지에 대하여 테스트하였다. 텔라반신 염산염이 더 이상 검출되지 않을 때까지 분획들을 수집하였다. 약 20-30% 텔라반신 염산염을 포함하는 분획들을 수집하였다. 포착된 시료의 95% 이상을 회수하는데에 이탈 용액 (release solution) 2-3 BV로 충분하였다. 수집된 분획들을 하기 실시예 2에서 서술된 방법에 직접 사용하였거나, 또는 동결 건조하였고, 이어서 실시예 2에서 서술된 방법에 사용하기 위하여 재용해시켰다.
실시예 2
4.1 중량%의 염화 이온 함량을 갖는
텔라반신 염산염의 제조 및 분리
텔라반신 염산염 (1.14 L) (실시예 1에서 서술된 바에 따라 제조되었음)을 1:1 (v/v) 아세토니트릴 및 물 (pH 1.93, 농도 ~30 mg/mL)에 용해시켰다. 용액의 pH를 22℃에서 10 N 수성 NaOH (~3 mL)로 pH 3.78에 조절하였다. 상기 용액에 22℃에서 3.5 시간에 걸쳐서 아세토니트릴 (3.42 L)을 적가하여, 우유빛의 현탁액으로서 침전을 얻었다. 상기 혼합물을 1.5 시간 동안 교반한 후, 교반 없이 약 14 시간 동안 방치하였다. 이어서, 침전 혼합물을 여과하였고, 결과적인 습괴를 아세토니트릴 및 MTBE (각각 200 mL)로 연속적으로 세척하였다. 질소 하에서 1 시간 동안 습괴를 건조하였고, 이어서, 체 (500 미크론)로 걸렀다. 결과적인 분말을 22℃, 45-50 mmHg 진공하에서, 96 시간 동안 건조하여, 미세한 회색(황색)을 띤 백색 분말로서 표제 화합물 32.5 g (~40%)을 얻었다. (HPLC 순도 91.3%, 3.84 중량% 염소, 5.84 중량% 물). 상기 물질은 수분 함량에 대하여 조절한 후, 4.1 중량%의 염화 이온 함량을 가졌다.
전술한 방법을 사용하고, 첨가된 NaOH 함량을 변화시켜서, 5.74, 5.60, 4.69, 4.59, 4.41, 3.94, 3.68 및 2.42 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염을 1.8, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5 및 5.0의 pH를 갖는 용액으로부터 각각 분리하였다.
실시예 3
안정성에 대한 염화 이온 함량의 효과
-20℃, 5℃ 및 25℃에서 저장된 텔라반신 염산염의 안정성에 대한 염화 이온 함량의 효과를 측정하였다.
실시예 2에서 설명된 바와 같이 제조된 텔라반신 염산염의 8 개의 로트 (lot)를 동일한 유리병 (glass vial)에 놓고, 기타 다른 조건을 동일하게 하고 -20℃, 5℃ 및 25℃에서 2주 동안 저장하였다. 유사아글리콘 및 아글리콘 불순물에 대한 HPLC 면적%의 변화량을 사용하여 상대 안정성을 평가하였다.
가장 높은 온도, 25℃에서 저장된 시료들에 대한 결과를 표 1에 나타내었다. 낮은 온도에서 저장된 시료들에 대한 유사아글리콘 및 아글리콘 불순물의 증가는 그 크기가 비교적 작았으나, 동일한 경향을 보여주었다.
25℃에서 2주일에 걸쳐 저장된 텔라반신 염산염의 실험 데이터

pH		 화합물 1
염화 이온
함량
(%)		 화합물 1의 유사아글리콘
(HPLC 면적%)		 화합물 2의 아글리콘
(HPLC 면적%)
초기 2주 2주간
변화량		 초기 2주 2주간
변화량
1.8 5.74 0.89 1.94 +1.05 0.43 1.08 +0.65
2.0 5.60 0.48 1.11 +0.63 0.15 0.41 +0.26
2.5 4.69 0.45 0.62 +0.17 0.07 0.13 +0.06
3.0 4.59 0.52 0.72 +0.20 0.10 0.17 +0.07
3.5 4.41 0.42 0.53 +0.11 0.06 nd* nd*
4.0 3.94 0.43 0.56 +0.13 0.04 0.09 +0.05
4.5 3.68 0.43 0.51 +0.08 0.06 0.08 +0.02
5.0 2.42 0.32 0.40 +0.08 0.03 0.05 +0.02
*측정되지 않았음
표 1에서 나타난 염화 이온 함량은 시료의 수분 함량을 제외하고 계산하였다. 혼합물로부터 분리된 각 시료에 있어서, 상기 혼합물의 pH를 나타내었다. "2주간 변화량"으로 표시된 칼럼은 2주 후 측정된 값 및 초기 값의 HPLC 면적% 차이이고, 도 1 및 2에서 도시하였다.
도 1 및 2에서 나타내듯이, 4.8 중량% 이상 (5.74 중량% 및 5.60 중량%)의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염, 즉, 낮은 pH 조건 (pH 1.8 및 2.0)에서 침전된 텔라반신 염산염은 25℃에서 2주에 걸쳐서 가수분해된 부산물의 정도가 증가하였다. 특히, 2주 후에, 낮은 pH에서 침전된 텔라반신 염산염에 있어서, 유사아글리콘 불순물에 대한 HPLC 면적%는 0.6 이상 증가하였고; 아글리콘 불순물에 대한 HPLC 면적%는 0.3 이상 증가하였다.
놀랍게도, 약 2.4 중량% 내지 약 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염은 동일한 조건에서 훨씬 안정적이었다. 그러한 염에 대하여, 유사아글리콘 불순물에 대한 HPLC 면적%의 2주간 변화량은 0.1 내지 0.2 범위였다. 유사하게, 아글리콘 불순물에 대한 HPLC 면적%의 변화량은 0.1 이하였다. 따라서, 본 발명의 염산염은 이전에 개시된 염에 비하여 매우 개선된 안정성을 보여주었다.
본 발명을 그 특정한 구현예를 참조하여 설명하였지만, 당업자라면 다양한 변형을 할 수 있고, 본 발명의 사상 및 범위를 이탈하지 않고, 균등물로서 치환할 수 있다. 또한, 본 발명의 목적, 사상 및 범위에 적용하기 위해, 특정한 상황, 물질, 물질의 조성물, 방법, 방법 단계 또는 단계들을 다양하게 수정할 수 있다. 그러한 모든 수정은 이하 첨부되는 청구항의 범위 내이다.
또한, 본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 서류는 비록 개별적으로 인용되었지만, 그 전체로서 인용에 의해 통합된다.

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  8. (a) 4.8 중량% 이상의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염 및 수성 용매계를 포함하고, 2.0 이하의 pH를 갖는 조성물을 제공하는 단계;
    (b) 상기 조성물의 pH를 2.5 내지 5.0으로 조절하여, 2.4 중량% 내지 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신의 염산염을 형성하는 단계; 및
    (c) 상기 (b) 단계에서 제조된 텔라반신 염산염을 분리하는 단계를 포함하는 2.4 중량% 내지 4.8 중량%의 염화 이온 함량을 갖는 텔라반신 염산염의 제조방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 조성물의 pH를 3.5 내지 5.0의 범위로 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 조성물의 pH를 3.0 내지 4.0의 범위로 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 조성물의 pH를 3.5 내지 4.5의 범위로 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 조성물의 pH를 3.5 내지 4.0의 범위로 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 조성물의 pH를 4.0 내지 4.5의 범위로 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제8항에 있어서, 상기 단계 (a)의 수성 용매계가 아세토니트릴 및 물을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 알칼리 수산화물을 사용하여 pH를 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제8항에 있어서, 상기 단계 (c)에서, 텔라반신 염산염을 침전 및 여과에 의해 분리하는 것을 특징으로 하는 방법.
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