KR101142838B1

KR101142838B1 - 향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101142838B1
Application number: KR1020100024332A
Authority: KR
Inventors: 오명숙; 김효근; 황덕상; 이창훈; 이경섭; 홍종기
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2010-03-18
Filing date: 2010-03-18
Publication date: 2012-05-08
Also published as: KR20110105206A

Abstract

본 발명은 향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 본 발명은 향부자 추출물을 포함하는 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 치매 및 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환에서 일어나는 행동장애를 예방하며, 조직학적으로 베타 아밀로이드의 축적을 막고 도파민세포 보호 효과가 있어 퇴행성 뇌질환 및 폐경기의 뇌질환에 대한 예방 또는 치료 효과를 가진다.

Description

향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물 {Composition comprising Cyperus rotundus for preventing or treating of neurodegenerative disease and menopausal brain disorder}

본 발명은 향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 본 발명은 향부자 추출물을 포함하는 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

치매란 뇌의 만성적 진행성 변성질환에 의해 흔히 기억장애 및 기타 지적기능의 상실이 일어나는 임상 증후군을 말하며 좀 더 넓은 의미로는 지적 황폐화뿐 만 아니라 행동 이상 및 인격 변화를 초래하며, 정서적 기능 상실과 진행성인 지적 황폐화가 사회적 혹은 직업적 기능의 장애를 초래하게 되는 상태를 말한다. 그 원인에 따라 알츠하이머형 치매(Alzheimer's dementia, AD), 혈관성 치매, 파킨슨병, 헌팅턴 병 등으로 나눌 수 있으며, 주로 뇌의 감염, 비타민 부족, 종양 등에 의해 발병되는 것들이 알려져 있다.

알츠하이머병은 노인 인구에서 치매를 유발하는 가장 흔한 질환이다. 65세에서 85세 범위 내에서는 나이가 5세 증가할 때마다 알츠하이머병의 발병률이 2배씩 높아진다. 알츠하이머병은 일단 발병하면 계속 진행되고 근본적인 치료법이 없으며 연령대별 정상군에 비해 평균기대수명이 단축된다. 알츠하이머병은 아밀로이드와 같은 신경 독성물질의 축적으로 인한 양측 측두엽의 기능 저하로 시작되고, 점차 비정상적으로 뭉쳐있는 특징적인 단백질 덩어리 즉, 노인판(신경세포 밖에 베타 아밀로이드가 쌓여 있음)과 신경섬유 농축체(신경세포 안에 비정상적인 타우단백질이 실타래처럼 꼬여있음) 등이 전반적인 뇌의 피질부로 확산되면서 병이 진행된다.

파킨슨병은 뇌의 흑질(substantia nigra, SNc)에 분포하는 도파민의 신경세포가 흑질에 존재하는 도파민의 신경세포가 파괴되어 점차 소실되며 선조체(striatum)의 도파민 함량이 현저하게 감소되는 것이 특징인 질병이다. 안정 떨림, 경직, 운동 완만(서동) 및 자세 불안정성이 특징적으로 나타나는 신경계의 만성 진행성 퇴행성 질환이다. 파킨슨병 환자는 60세 이상에서 인구의 약 1% 정도로 추정된다.

이러한 퇴행성 뇌질환은 그 원인이 뚜렷이 밝혀지지 않고 있으나 폐경 이후 여성에게 치매가 걸릴 확률이 남성에 비해 3배나 높아 에스트로겐이 치매의 예방에 영향을 미친다는 것이 알려져 있다. 최근에는, 조기 폐경이 온 경우 조기 치매가 올 수 있다는 연구 결과가 발표되면서 에스트로겐과 치매의 관련성이 다시 한 번 확인되었다.

퇴행성 뇌질환은 일단 발병하면 근본적인 치료법이 없기 때문에 도파민 세포를 보호하고 베타 아밀로이드의 축적을 막아 치매를 예방하고 이미 시작된 치매가 진행되는 것을 막는 치료제의 연구가 계속되고 있으며, 특히 종래 알려진 한방 약제들을 이용하여 신경 세포를 보호하고자 하는 연구가 있어 왔다.

본 발명의 목적은 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환의 예방 또는 치료효과를 가지는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 알츠하이머병, 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환을 예방하고 치료하기 위한 연구를 계속하던 중 여성의 생리불순 치료에 특히 효험이 있어 부인병의 선약이라고 알려진 향부자가 퇴행성 뇌질환과 관련된 세포 보호에 효능이 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서 상기와 같은 과제를 해결하기 위해 본 발명은 향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다. 상기 뇌질환은 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환인 것이 바람직하다.

이하, 본 발명을 자세히 설명한다.

향부자는 사초과의 다년초로 뿌리줄기 전체에 정유, 알칼로이드, 강심배당체, 플라보노이드, 당분, 펙틴, 기름, 수지, 유기산이 들어있다. 뿌리줄기의 유동엑스는 진통작용과 자궁의 긴장성을 낮추는 작용이 있고, 강심작용과 이뇨작용이 있으며 피를 잘 돌게 한다. 부인병의 선약(仙藥)이라하여 통경약, 정혈약으로 월경불순, 월경통, 산전산후의 부인병에 널리 쓰인다. 또한 해열진정약, 소화약으로 처방에 넣어 감기, 두통, 복통, 밥맛이 없을 때 쓴다.

본 발명의 향부자 추출물은 향부자를 물 또는 유기용매로 추출하여 얻을 수 있는데, 유기용매로는 저급 알코올, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 헥산 등을 사용할 수 있다. 저급 알코올로는 탄소수 1-4인 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 사용할 수 있으며, 그중 에탄올이 가장 바람직하다.

보다 구체적으로 향부자 추출물은 물 1리터 당 향부자를 80~120g 비율로 넣고 1시간 이상 달여서 준비한다. 바람직하게는 1시간 반 내지 2시간 반 동안 달인다. 또한 1시간 반 내지 2시간 반 동안 80 내지 100℃의 온도로 환류추출하여 만들어낼 수도 있다.

또한 향부자를 유기용매로 추출하는 경우, 예를 들어 향부자를 상온의 유기용매에 넣고 1일 내지 10일간 진탕하면서 추출할 수 있다. 향부자의 유효성분의 추출을 위하여 1회 이상 침출할 수 있다.

바람직하게는 사용을 편리하게 하기 위하여 상기 추출물을 50~85℃에서 감압농축한 후에 건조시켜서 분말로 만들어 사용한다. 건조방법으로는 열풍, 분무, 피막, 동결 건조법 등을 이용할 수 있으나 유효성분을 가장 잘 보존할 수 있는 동결건조가 바람직하다.

본 발명은 상기의 제조 방법으로 얻어진 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 상기 뇌질환은 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환인 것이 바람직하다.

본 발명의 상기 향부자 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 향부자 추출물은 1일 30 내지 120 ㎎/kg용량으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 상기 향부자 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebro ventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 향부자 추출물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 향부자 추출물을 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 환제, 캡슐제, 현탁액, 엑스제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 향부자 추출물을 포함하는 약학조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 향부자 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에서 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환은 상기 퇴행성 뇌질환은 알쯔하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병 및 기타 요인에 의한 치매를 포함하는 개념이다.

또한, 본 발명은 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌질환의 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다. 상기 뇌질환은 퇴행성 뇌질환 및 폐경기 뇌질환인 것이 바람직하다.

본 발명의 향부자 추출물은 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 건강식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 향부자 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 식품류 등이 있다. 본 발명의 향부자 추출물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다. 본 발명의 향부자 추출물은 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 향부자 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 30 g, 바람직하게는 0.3 내지 10 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 조성물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 발효물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 향부자 추출물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 향부자 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 향부자 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만, 본 발명의 향부자 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

아밀로이드-β의 축적에 의하여 생성되는 아밀로이드반은 뇌에 축적되어 뇌신경세포를 죽이는 물질로 알려져 있으며, 알쯔하이머 연구에 이용되는 물질이다.

본 발명의 일 실시예에서는 아밀로이드 베타(25-35)를 인위적으로 응집시킨 물질을 이용하여 배아 피질 세포에 대한 독성을 일으켜 본 발명의 향부자 추출물의 세포 보호 효과를 MTT 검사법을 이용하여 측정하였다. 피질 세포에 향부자 추출물을 단독으로 0.1, 1, 10, 100 /mL의 농도로 처리한 결과, 10, 100 /mL 농도에서 세포 생존율에 영향을 미침을 알 수 있었다. 아밀로이드 베타 독성처리의 경우 세포 생존율은 음성 대조군에 비하여 71.52±2.13%로 감소하였으며 본 발명의 향부자 추출물 전처리 군의 경우 10, 100 /mL의 농도에서 세포 보호 효과를 나타내었다(도 1).

피질 세포에 향부자 70% 에탄올 추출물을 단독으로 0.1, 1, 10, 100 /mL의 농도로 처리한 결과, 세포 생존율에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 아밀로이드 베타 독성처리의 경우 세포 생존율은 음성 대조군에 비하여 60.32±2.09%로 감소하였으며 본 발명의 향부자 추출물 전처리 군의 경우 10, 100 /mL의 농도에서 세포 보호 효과를 나타내었다(도 2).

본 발명의 다른 실시예에서는 향부자 추출물의 원시 해마 세포에 대한 보호효과를 실험하였다. 해마 세포에 향부자 추출물만 0.1, 1, 10, 100 /mL의 농도로 처리한 결과, 세포생존율에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 아밀로이드 베타 독성 처리군은 그렇지 않은 음성 대조군에 비하여 49.91±0.76%로 해마 세포의 생존이 현저히 감소했는데, 향부자 추출물을 처리한 경우 0.1, 1, 10, 100 /mL의 전 농도에서 통계적으로 유의한 보호 효과를 나타내었음을 알 수 있었다(도 3).

해마 세포에 향부자 에탄올 추출물만 0.1, 1, 10, 100 /mL의 농도로 처리한 결과, 세포생존율에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 아밀로이드 베타 독성 처리군은 그렇지 않은 음성 대조군에 비하여 52.08±1.37%로 해마 세포의 생존이 현저히 감소했는데, 향부자 추출물을 처리한 경우 1, 10, 100 /mL의 농도에서 통계적으로 유의한 보호 효과를 나타내었음을 알 수 있었다(도 4).

이와 같이 배아 피질 세포와 해마 세포에서 MTT 검사법으로 세포생존율을 측정한 결과, 본 발명의 향부자 추출물은 아밀로이드 유발 독성에 대하여 보호 효과를 가지는 것을 알 수 있으며 또한 피질 세포에서 세포생존율을 증가시킨 것으로 나타나 신경발생(neurogenesis) 효과도 있음을 알 수 있다.

다른 실시예에서는 본 발명의 향부자 추출물의 도파민세포에 대한 영향을 실험하였다. PC12 세포에 향부자 추출물을 단독으로 4시간 처리한 결과, 세포 생존율에는 영향을 미치지 않았다. 반면, 향부자 추출물로 1시간 전처리한 경우 6-OHDA(6-히드록시도파민) 독성에 대하여 50, 100 /mL의 농도에서 유의한 보호효과를 나타냈다(도 5).

또한 향부자 에탄올 추출물을 PC12 세포에 단독으로 4시간 처리한 결과, 세포 생존율에는 영향을 미치지 않았다. 반면, 향부자 유기용매 추출물로 1시간 전처리 한 경우 6-OHDA(6-히드록시도파민) 독성에 대하여 50, 100 /mL의 농도에서 유의한 보호효과를 나타냈다(도 6).

또한 본 발명자들은 PC12 세포에서 6-OHDA에 의해 유발된 ROS(reactive oxygen species)와 NO의 과생성을 본 발명의 향부자 추출물이 25-100 /mL의 농도에서 억제하면서 유의한 항산화 효과를 나타냄을 확인하였다. 또한 25 /mL의 농도에서 6-OHDA에 의해 GSH의 활성이 억제되는 것을 효과적으로 막아서 GSH의 활성을 유지시키는 것을 확인하였다(도 7).

본 발명자들은 6-OHDA에 의해 손상된 PC12 세포에 대해서 본 발명의 향부자 추출물의 미토콘드리아막 전위에 대한 영향을 실험하였다. 본 발명의 향부자 추출물을 전처리함으로써 6-OHDA에 의한 미토콘드리아막 전위 교란이 억제되었으며, 6-OHDA에 의해 활성화된 카스파제-3의 활성을 실험한 25-100 /mL 전 농도에서 억제하였다(도 8).

MPP+(1-메틸-4-페닐피리딘)는 도파민 신경세포에 작용하여 미토콘드리아 복합체 I 채널에 영향을 미쳐 세포독성을 나타내는 물질로 파킨슨병 연구에 많이 사용하는 물질이다.

본 발명의 일 실시예에서는 태아 중뇌 도파민세포를 이용하여 본 발명의 향부자 추출물의 6-OHDA 및 MPP+에 대한 세포 보호 효과를 측정하였다. 6-OHDA와 MPP+에 의해 감소한 TH-양성 세포수가 CRE 전처리에 의하여 6-OHDA 독성에 대해서는 1, 5 /mL 농도에서, MPP+ 독성에 대해서는 0.2, 1 /mL 농도에서 보호효과를 나타냈다(도 9).

또한 태아 중뇌 세포에서 6-OHDA 및 MPP+에 의한 TNF-α와 NO 생성을 본 발명의 향부자 추출물이 억제하는 효과에 대한 실험을 수행한 결과, 6-OHDA 및 MPP+로 처리한 도파민세포에서 TNF-α와 NO 농도는 음성대조군에 비해 유의하게 증가한 반면, 본 발명의 향부자 추출물을 전처리하였을 때는 유의하게 감소하였음을 알 수 있었다(도 10).

이와 같이 TH-양성 뉴런을 측정하여 본 발명의 향부자 추출물의 도파민 세포에 대한 보호효과를 평가한 결과, 향부자 추출물 전처리에 의해서 6-OHDA와 MPP+ 독성에 대하여 TH-양성 뉴런의 개수가 통계적으로 유의하게 증가하였으며 독성에 의해 생성된 TNF-α와 NO 양은 유의적으로 감소하였으므로 본 발명의 향부자 추출물이 도파민 세포에 대해 보호효과를 가짐을 알 수 있다.

MPTP(1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘)는 향정신성 의약품인 메페리딘의 합성부산물로, MPP+로 전환되는 과정 및 MPP+가 재산화되는 과정에서 활성산소가 생성되거나 내뉴런(intraneuron)에 슈퍼옥사이드가 생성되어 뇌의 흑질에서 도파민세포를 파괴함으로써 영구적인 파킨슨병 증상을 일으키는 신경 독소로 동물 실험에서 질환 유발 물질로 쓰이고 있다.

본 발명의 다른 실시예에서는 MPTP로 파킨슨병을 유발한 동물 모델을 가지고 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 평가하였다.

선조체 부분에서의 TH-양성 섬유의 광학적 밀도를 측정한 결과, MPTP로 처리한 군은 음성대조군에 비하여 유의하게 감소하였으나, 향부자추출물 투여군은 MPTP군에 대하여 유의한 효과를 나타내었다(도 11). 이는 흑색질 부위에서 TH-양성 세포체를 측정한 결과와도 유사하게 나타나 본 발명의 향부자추출물을 전처리함으로써 MPTP독성에 대하여 효과가 있음을 알 수 있었다. 즉, 본 발명의 향부자 추출물은 MPTP로 유도한 신경독성에 대하여 신경 보호 작용을 한다고 생각된다.

본 발명의 다른 실시예에서는 난소절제술로 만든 폐경기 모델에 MPTP 유발 파킨슨병 실험을 수행하였다. MPTP 투여 5일째 되는 날 측정한 서동 실험에서 독성 투여 군은 음성대조군과의 유의한 차이를 나타내었으며, 에스트로겐군과 향부자 추출물 50mg/kg 전처리 군에서 행동장애를 억제하는 효과를 나타냈다(도 12).

이와 같이 MPTP 유발 파킨슨병 마우스 모델의 뇌조직 중 선조체 부분에서의 TH-양성 섬유의 광학적 밀도를 측정한 결과, MPTP군은 음성대조군에 비하여 밀도가 53.61±5.00%로 유의하게 감소하였으나, 에스트로겐 그룹의 경우 90.19±5.22% 정도로 상당한 보호효과를 나타냈고, 본 발명의 향부자 추출물을 50 및 100 mg/kg의 농도로 전처리한 군에서도 TH-양성 섬유에 대해 유의적인 보호효과를 나타내었다(도 13). 또한 흑색질에서의 TH-양성 세포수를 확인해 본 결과 MPTP 군은 음성대조군에 비해 66.07±2.52%로 유의한 TH-양성 세포의 감소를 나타냈으나, 에스트로겐 군은 83.40±1.75%로, 향부자 추출물 100 mg/kg 전처리군도 역시 통계적으로 유의한 양성 세포수를 보여 MPTP에 대한 도파민성 뉴런 보호효과를 나타냄을 알 수 있었다(도 14).

또한 같은 실시예에서 MPTP에 의해 일어난 아포토시스 단백질들의 발현 및 이동을 본 발명의 향부자 추출물로 전처리함으로써 통계적으로 유의하게 억제하였는데, 도파민세포 보호효과는 이로 인한 것이라고 생각된다(도 12).

본 발명의 향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 치매 및 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환에서 일어나는 행동장애를 예방하며, 조직학적으로 베타 아밀로이드의 축적을 막고, 도파민세포 보호 효과가 있어 퇴행성 뇌질환 및 폐경기의 뇌질환에 대한 예방 또는 치료 효과를 가진다.

도 1은 실시예 2에 따른 본 발명의 향부자 추출물(CRE)의 세포 생존율에 대한 영향을 나타낸 그래프이다. 생존율은 용매로만 처리한 음성대조군에 대한 %로 나타내었다. A: 아밀로이드 베타를 처리하지 않은 피질 세포의 생존율, B: 아밀로이드 베타를 처리한 피질 세포의 생존율. 10-100/mL 농도의 향부자 추출물이 아밀로이드 베타 유발성 신경독성에 대해 보호 효능을 가짐을 알 수 있다. 결과값은 평균±S.E.M으로 나타냈다. 대조군과 비교했을 때 ***P<0.001이고, 아밀로이드 베타 처리군과 비교했을 때 ## P<0.01, ###P<0.001이다.
도 2은 실시예 2에 따른 본 발명의 향부자 에탄올 추출물의 세포 생존율에 대한 영향을 나타낸 그래프이다. 생존율은 용매로만 처리한 음성대조군에 대한 %로 나타내었다. A: 아밀로이드 베타를 처리하지 않은 피질 세포의 생존율, B: 아밀로이드 베타를 처리한 피질 세포의 생존율. 10-100/mL 농도의 향부자 에탄올 추출물이 아밀로이드 베타 유발성 신경독성에 대해 보호 효능을 가짐을 알 수 있다. 결과값은 평균±S.E.M으로 나타냈다. 대조군과 비교했을 때 ***P<0.001이고, 아밀로이드 베타 처리군과 비교했을 때 # P<0.05, ## P<0.01이다.
도 3는 실시예 2에 따른 본 발명의 향부자 추출물의 세포 생존율에 대한 영향을 나타낸 그래프이다. 생존율은 음성대조군에 대한 %로 나타내었다. A: 아밀로이드 베타를 처리하지 않은 해마 세포의 생존율, B: 아밀로이드 베타를 처리한 해마 세포의 생존율. 0.1-100 /mL 농도의 향부자 추출물이 아밀로이드 베타 유발 신경 독성에 보호 효과를 가짐을 알 수 있다. 결과값은 평균±S.E.M으로 표시하였으며 대조군과 비교하였을 때***P<0.001이고, 아밀로이드 베타 처리군과 비교하였을 때 #P<0.05, ##P<0.01, ###P<0.001이다.
도 4는 실시예 2에 따른 본 발명의 향부자 에탄올 추출물의 세포 생존율에 대한 영향을 나타낸 그래프이다. 생존율은 음성대조군에 대한 %로 나타내었다. A: 아밀로이드 베타를 처리하지 않은 해마 세포의 생존율, B: 아밀로이드 베타를 처리한 해마 세포의 생존율. 1-100 /mL 농도의 향부자 에탄올 추출물이 아밀로이드 베타 유발 신경 독성에 보호 효과를 가짐을 알 수 있다. 결과값은 평균±S.E.M으로 표시하였으며 대조군과 비교하였을 때***P<0.001이고, 아밀로이드 베타 처리군과 비교하였을 때 # P<0.05, ## P<0.01이다.
도 5은 실시예 3에 따른 본 발명의 향부자 추출물의 세포 생존율에 대한 영향을 나타낸 그래프이다. A: 본 발명의 향부자 추출물로만 4시간 처리한 PC12 세포의 생존율, B: 향부자 추출물로 1시간 처리한 후에 100μM의 6-OHDA로 처리한 PC12 세포의 생존율. 세포 생존율은 MTT 분석을 통해 측정하였으며, 결과 값은 평균±SEM으로 나타냈다. 음성대조군과 비교하였을 때 ***p <0.001, 6-OHDA만 처리한 군과 비교하였을 때 ###p <0.001이다.
도 6은 실시예 3에 따른 본 발명의 향부자 에탄올 추출물의 세포 생존율에 대한 영향을 나타낸 그래프이다. A: 본 발명의 향부자 에탄올 추출물로만 4시간 처리한 PC12 세포의 생존율, B: 향부자 에탄올 추출물로 1시간 처리한 후에 100μM의 6-OHDA로 처리한 PC12 세포의 생존율. 세포 생존율은 MTT 분석을 통해 측정하였으며, 결과 값은 평균±SEM으로 나타냈다. 음성대조군과 비교하였을 때 ***p <0.001, 6-OHDA만 처리한 군과 비교하였을 때 ##p <0.01이다.
도 7는 실시예 3에 따른 6-OHDA로 독성을 유발한 PC12 세포 기능에 대한 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 나타낸 그래프이다. A: 1시간 동안 6-OHDA를 처리한 후 DCF의 형광 강도를 이용하여 측정한 ROS 값, B: GSH 분석 키트를 이용하여 측정한 GSH 값을 나타낸 그래프, C: 6-OHDA로 6시간 동안 처리한 후에 그리스 시약을 이용하여 측정한 NO 값. 측정값은 평균±SEM으로 나타내었으며, 음성대조군과 비교하였을 때 ***p<0.001, 6-OHDA로만 처리한 군과 비교하였을 때 ###p<0.001, ##p<0.01, #p<0.05이다.
도 8는 본 발명의 실시예 3에 따른 본 발명의 향부자 추출물로 1시간 전처리 한 후 6-OHDA로 3시간 동안 추가로 처리하여 독성을 유발한 PC12 세포에 대한 미토콘드리아막 전위 변화를 나타낸 도면이다. A: 카스파제-3 활성도, B: 적색 및 녹색 형광 강도, C:분해된 카스파제-3의 웨스턴 블롯. 측정값은 평균±SEM으로 나타내었고, 음성대조군과 비교하였을 때 *** p<0.001, 6-OHDA만 처리한 군과 비교하였을 때 ###p <0.01이다.
도 9은 실시예 4에 따른 원시 중뇌 세포의 6-OHDA 및 MPP+ 유발 독성에 대한 본 발명의 향부자 추출물의 보호효과를 나타낸 도면이다. A: 본 발명의 향부자 추출물로 전처리(0, 0.2, 1 및 5 /mL, 6 시간)한 후 6-OHDA(10 , 18 시간)로 독성 유발시킨 세포 중 TH-양성인 세포의 수, B: 본 발명의 향부자 추출물으로 전처리(0, 0.2. 1 및 5 /mL, 1시간)하고 MPP+(10 , 23시간)로 독성 유발된 세포 중 TH-양성인 세포의 수, C: 4% PFA(파라포름알데히드)로 고정한 후 항-TH 항체로 염색한 세포 사진.
도 10은 실시예 4에 따른 원시 중뇌 세포의 6-OHDA 및 MPP+에 의해 야기된 TNF-α 및 NO의 생성에 대한 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 나타낸 그래프이다. A: 6-OHDA로 처리한 세포의 TNF-α 생성, B: MPP+로 처리한 세포의 TNF-α 생성, C: 6-OHDA로 처리한 세포의 NO 생성. 결과값은 평균±S.E.M으로 나타냈고, 음성대조군과 비교했을 때 ***P<0.001이고, MPP+로만 처리한 군과 비교했을 때 ###P<0.001이다.
도 11은 실시예 5에 따른 파킨슨병 유발 동물 모델에서의 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 나타낸 도면이다. 생리식염수 또는 50 또는 100 mg/kg의 향부자 추출물을 5일간 경구 투여하였고, 같은 날 MPTP(20 mg/kg, 복강 투여 1일 4회)를 투여하였다. 도파민성 뉴런은 TH-면역염색으로 가시화된다. 흑질에서의 TH-양성 뉴런의 수, ST에서의 광학적 밀도. 결과 값은 평균±SEM으로 나타냈으며, 음성대조군과 비교하였을 때 ***p< 0.001, MPTP만 처리한 군과 비교하였을 때 ###p < 0.001이었다.
도 12는 실시예 6에 따른 MPTP-유발 신경 독성 폴 테스트의 T-턴(A) 및 T-LA(B) 결과를 나타낸 그래프이다.
도 13은 실시예 6에 따른 MPTP-유발 신경 독성에 대한 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 나타내는 선조체 부분에서의 TH-면역조직화학적 결과를 보여주는 그래프이다. 본 발명의 향부자 추출물은 MPTP에 의해 유발된 선조체에서의 도파민성 섬유의 감소를 상당히 예방함을 알 수 있다. 결과 값은 평균±SEM이다.
도 14은 본 발명의 실시예 6에 따른 MPTP-유발 신경 독성에 대한 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 나타내는 흑질 부분에서의 TH-면역조직화학적 결과를 보여주는 그래프이다. 본 발명의 향부자 추출물은 MPTP에 의해 유발된 흑질에서의 도파민성 섬유의 감소를 상당히 예방함을 알 수 있다. 결과 값은 평균±SEM이다.
도 15는 본 발명의 실시예 6에 따른 MPTP-유발 신경 독성에 대한 본 발명의 향부자 추출물의 영향을 나타내는 흑질 부분에서의 웨스턴 블롯 결과이다. 흑색질 부분에서의 A: Bcl-2/베타 액틴 비율, B: Bax/베타 액틴 비율, C: Bcl-2/Bax 비율. 본 발명의 향부자 추출물은 MPTP에 의해 유발된 흑색질에서의 세포 아포토시스를 상당히 예방함을 알 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예들은 본 발명을 더욱 쉽게 이해할 수 있도록 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>

향부자 추출물 제조

정도약업사(Seoul, Korea)에서 구입한 크기를 균질화 한 향부자 100 g에 증류수 1000 mL를 가하여 2 시간 동안 100℃에서 환류추출 또는 70% 에탄올 1000 mL를 가하여 24 시간 상온에서 침출 후 여과하였다. 물 추출물의 여과액을 80℃, 에탄올 침출물의 여과액은 50℃에서 감압 농축(Rotavapor R-200, heating bath B-490, BUCHI; Flawil, Swizerland)하여 얻은 시료를 동결건조하여 -20℃에서 보관하였다. 향부자 추출물은 실험시 용시조제하여 사용하였으며 수득율은 물 추출물이 9.19 %, 에탄올 추출물이 8.45 % 였다.

<실시예 2>

아밀로이드-β 유발 치매모델에 미치는 효과 실험

2.1 배아 피질 세포 In vitro 실험

스프라그 돌리 래트(Orient Bio., Osan, Korea)의 18일된 배아에서 피질 부위만 분리한 뒤, 기계적으로 분해하여 세포를 얻었다. 폴리-L-리신으로 미리 코팅한 96 웰 플레이트에 1x10⁴ /웰의 농도로 세포를 심은 후 7일을 배양하였다. 0.1% DMSO/B27 프리 뉴로바살(neurobasal) 배지에 실시예 1에서 만들어진 향부자 추출물을 0.1, 1, 10, 100 /mL 농도로 처리 30 분 후, 아밀로이드-β(Abeta, 8 )를 처리 또는 비처리(음성대조군)하여 총 24시간 배양하였다. 1mg/mL MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐-2H-테트라졸리움 브로마이드)로 처리하고 3시간 후, DMSO로 포르마잔을 녹여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.

2.2 배아 해마 세포 In vitro 실험

스프라그-돌리 래트(Orient Bio., Osan, Korea)의 18일된 배아에서 해마 부위만 분리한 뒤, 기계적으로 분해하여 세포를 얻었다. 폴리-L-리신으로 미리 코팅한 96 웰 플레이트에 1x10⁴/웰의 농도로 세포를 심은 후 7일을 배양하였다. 0.1% DMSO/B27 프리 뉴로바살 배지에 실시예 1을 따라 만들어진 향부자 추출물을 0.1, 1, 10, 100 /mL로 처리 30 분 후, Abeta(8 )를 처리 또는 비처리하여 총 24시간 배양하였다. 1mg/mL의 MTT 처리하고 3시간 후, DMSO로 포르마잔을 녹여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.

<실시예 3>

PC12 세포 보호에 미치는 영향

3.1. 도파민 독성 유발 PC12 세포의 생존율

PC12 세포를 96 웰 플레이트에 1.5x10⁴/웰의 농도로 심은 후 1일을 배양하였다. 향부자 추출물을 25, 50, 100 /mL로 무 FBS 배지에 녹여 1 시간 전처리한 후, 100μM 6-OHDA를 처리하여 3시간 더 배양하였다. 반응이 끝난 세포에 MTT를 1 mg/mL 농도로 3시간 처리한 후 570 nm에서 흡광도를 측정하고 이를 세포 생존율로 나타내었다.

3.2 NO (nitric oxide)의 분석

PC12 세포에 25-100 μg/mL의 본 발명의 추출물과 100μM 6-OHDA를 처리한 후, 배양액을 회수하여 배양액에 그리스 시약을 동량으로 반응시켜 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 아질산나트륨을 이용해 표준곡선을 그려 NO 농도를 계산하였다.

3.3 활성산소종 (ROS, Reactive oxygen species)의 분석

PC12 세포에 25-100 μg/mL의 향부자 추출물과 100μM 6-OHDA를 처리한 후, 20μM의 H₂DCF-DA를 넣고 30 분 배양하였다. PBS로 세척 후, 형광 여기 495 nm, 발광 530 nm로 측정하였다.

3.4 GSH 분석

PC12 세포에 25 μg/mL의 향부자 추출물과 100μM 6-OHDA를 처리한 후 반응이 끝난 세포를 수집하였다. GSH 검사 키트(Dojindo)를 이용하여 GSH 수치를 측정하였다.

3.5 미토콘드리아 막 전위

PC12 세포에 25, 50, 100 μg/mL의 향부자 추출물과 100μM 6-OHDA를 처리한 후 반응이 끝난 세포를 JC-1을 이용하여 적색 파장과 녹색 파장의 형광을 측정하였다.

3.6 카스파제(Caspase)-3 활성도 검사

PC12 세포에 25, 50, 100 μg/mL의 향부자 추출물과 100μM 6-OHDA를 처리한 후 반응이 끝난 세포를 카스파제-3 키트(Biovision)를 이용하여 DEVE 절단 활성도를 측정하였다.

3.7 웨스턴 블롯

PC12 세포에 0.1-1 μg/mL의 향부자 추출물과 100μM 6-OHDA를 처리한 후, 반응이 끝난 세포에 대해서 전체 단백질을 용해시켜 절단된 카스파제-3을 측정하였다.

<실시예 4>

원시 중뇌(Primary Mesencephalic) 세포에 대한 영향

4.1 배아 중뇌 세포의 생존율

스프라그-돌리 래트(Orient Bio., Osan, Korea)의 14일된 배아로부터 중뇌 부위만 분리한 뒤, 기계적으로 분해하여 세포를 얻었다. 폴리-L-리신으로 미리 코팅한 24 웰 플레이트에 1x10⁵ /웰의 농도로 세포를 심은 후 6일을 배양하였다. 무 FBS 배지에 녹인 향부자 추출물을 0.2, 1, 5/mL로 처리하고 한 시간 후, MPP+(10 )를 처리하여 24시간 더 배양하였다. 6-OHDA 독성의 경우 향부자 추출물을 농도별로 6시간 동안 처리하고, 6-OHDA(10 )을 넣어 18시간 더 배양하였다. 세포를 4% PFA로 고정한 후에 토끼 항-티로신 히드록실라제(TH)로 염색하여 TH-양성인 세포를 100배 비율의 현미경 상에서 셌다.

4.2 6-OHDA와 MPP+에 의한 TNF-α 생성

래트의 TNF-α 생성은 래트 TNF-α ELISA 키트(Invitrogen)를 사용하여 측정하였다. 회수된 세포 배양액 100 에 항-TNF-α를 붙인 뒤, 비오티닐화 항 TNF-α를 반응시켰다. 그 다음 스트렙타비딘-HRP(horseradish peroxidase)와 안정화 크로모젠(stabilized chromogen)을 순서대로 반응 시킨 후, 반응 종료 용액으로 반응을 종료시켰다. 이때, 래트 TNF-α 표준은 0 pg/mL부터 1000 pg/mL까지 반응하였으며, 표준곡선은 4-변수 알고리즘을 이용해 그렸다. 450nm 파장에서의 흡광도를 표준곡선에 대입하여 TNF-α의 농도를 구하였다.

4.3 6-OHDA에 의한 NO 생성

회수된 세포 배양액 100에 그리스 시약을 동량 반응 시킨 뒤 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 아질산나트륨을 이용해 표준곡선을 그리고 NO 농도를 계산하였다.

<실시예 5>

MPTP 유발 파킨슨병 모델 실험

5.1 실험동물

실험동물은 수컷 C57BL/6 마우스(23~25g, Daehan Biolink)를 사용하였다. 실시예에 따라 만들어진 동결 건조된 향부자 추출물은 생리식염수에 현탁시킨 후 사용하였으며 MPTP는 생리식염수에 용해하여 사용하였다. 향부자 추출물은 모두 실험 당일에 조제하여 사용하였다. 실험군은 표 1과 같이 총 4군이며, 모든 실험군에 용매(생리식염수) 및 생리식염수에 현탁한 향부자 추출물을 5일간 경구투여 하였다. 투여한지 3시간 후, MPTP(20 mg/kg)를 2시간 간격으로 하루에 4번 복강 투여 하였다.

실험 그룹

그룹	p.o.	MPTP
음성대조군	생리식염수	생리식염수 4회
MPTP	생리식염수	MPTP 20 mg/kg/4회
향부자 추출물 50 mg/kg	향부자 추출물 50 mg/kg	MPTP 20 mg/kg/4회
향부자 추출물 100 mg/kg	향부자 추출물 100 mg/kg	MPTP 20 mg/kg/4회

5.2 폴 테스트(pole test)

MPTP를 투여하고 7일째 되는 날, 실험 마우스에 대한 폴 테스트(pole test)를 수행했다. 폴 테스트는 파킨슨병 모델에서 서동(bradykinesia)과 관련된 항목의 효과를 검증할 수 있는 방법으로 길이 55 cm, 지름 0.8 cm 의 막대 위에 실험 마우스를 머리가 위로 가도록 놓고, T-턴과 T-LA을 측정하였다. 각 마우스를 5분 간격으로 2회씩 연습시킨 후 본 실험을 행하였으며, 5회 실험한 것을 분석하였다.

5.3 조직검사

역시 MPTP를 투여하고 7일째 되는 날, 조직실험을 위해 각 군의 마우스들을 0.5M PBS와 4% PFA를 사용하여 관류 고정하였다. 적출한 뇌조직은 동일한 PFA 용액에 하루 동안 후고정을 하였다. 이후 조직을 30% 수크로오스 용액에 3일 동안 담가 둔 후 30 μm로 동결절편을 만들었다. 절편된 조직은 보관 용액에 넣어 4℃에서 보관하였다. 토끼 항 티로신-히드록실라제(TH, 1:2000)로 면역조직염색을 했다. 선조체(Striatum) 부위의 조직은 TH-양성 섬유의 광학적 밀도를 측정하였으며, 흑질(Substantia nigra pars compacta, SNc) 부분은 TH-양성 세포를 200배 비율의 현미경 상에서 셌다.

<실시예 6>

폐경기 모델에서의 MPTP 유발 파킨슨병 실험

6.1 실험동물

실험동물은 암컷 C57BL/6 마우스(22~24g, Daehan Biolink)를 사용하였다. 1주간 사육 후, 난소절제술을 시행하였다. 체내 에스트로겐 제거를 위해 3주간 더 사육한 뒤, MPTP를 아만성(subchronic) 방법(30 mg/kg, 5 일간 1일 1회 복강투여) 으로 주입했다. MPTP 투여 5일 후 각 그룹별 실험 마우스에 대해 행동실험을 했고, MPTP 투여 7일 후 조직실험을 위해 관류 고정하였다. 마우스를 표 2와 같이 총 5군으로 나누어 모든 실험군에 용매(생리식염수) 및 생리식염수에 현탁한 향부자 추출물을 5일간 경구투여 하였으며, 경구투여 3시간 후 MPTP 30 mg/kg를 복강 투여하였다. 에스트로겐군은 17 β-에스트라디올 50 μg/kg를 생리식염수와 혼합하여 향부자 추출물 투여시에 복강 투여했다.

실험 그룹

그룹	p.o. 또는 i.p.	MPTP(5회/5일)
음성대조군	생리식염수(p.o.)	생리식염수
MPTP	생리식염수(p.o.)	MPTP 30 mg/kg
17β-에스트라디올	50 μg/kg(i.p.)	MPTP 30 mg/kg
향부자 추출물 50 mg/kg	향부자 추출물 50 mg/kg(p.o.)	MPTP 30 mg/kg
향부자 추출물 100 mg/kg	향부자 추출물 100 mg/kg(p.o.)	MPTP 30 mg/kg

6.2 폴 테스트

MPTP 마지막 투여 후 5일째 되는 날 실시예 5의 방법과 같은 방법으로 폴 테스트를 수행했다.

6.3 조직검사

MPTP 투여 7일째 되는 날, 실험 마우스를 0.5 M PBS와 4% PFA를 사용하여 관류고정하였다. 적출한 뇌조직은 동일한 PFA 용액에 하루 동안 후고정을 하였다. 이후 조직을 30% 수크로오스 용액에 3일 동안 담가 둔 후 동결절편을 만들었다. 조직은 30 μm로 잘랐으며, 절편된 조직은 보존 용액에 넣어 4℃에서 보관하였다. 조직은 토끼의 항-TH(1:2000)로 면역조직염색을 했다. 선조체(Striatum) 부위의 조직은 TH-양성 섬유의 광학적 밀도를 40배 비율의 현미경으로 측정하였으며, 흑색질(Substantia nigra pars compacta, SNpc) 부분은 TH-양성 세포체를 100배 비율의 현미경 상에서 셌다.

또한, MPTP 투여 7일째 되는 날, 실험쥐의 뇌를 적출하고, 적출한 뇌조직을 용해시켜 Bax, Bcl-2, 사이토크롬 C, 절단된 카스파제-3 항체를 이용하여 아포토시스를 측정하였다.

이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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제 1항에 있어서, 상기 향부자 추출물은 향부자를 정제수를 포함한 물 또는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 추출한 것인 식품 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올은 에탄올인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 향부자 추출물은 향부자를 80-120g/ℓ의 비율로 물에 넣고 80~100℃의 온도로 1시간 내지 2시간 30분 동안 추출한 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
삭제
향부자 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제 9항에 있어서, 상기 향부자 추출물은 향부자를 정제수를 포함한 물 또는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 추출한 것인 약학 조성물.
제 9항에 있어서, 상기 조성물은 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 현탁액, 과립제 또는 엑스제로 제형화되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 10항에 있어서, 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올은 에탄올인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 10항에 있어서, 상기 향부자 추출물은 향부자를 80-120g/ℓ의 비율로 물에 넣고 80~100℃의 온도로 1시간 내지 2시간 30분 동안 추출한 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
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