KR101136059B1 - 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물 - Google Patents
자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 개시는, 자색 고구마를 사카로마이세스 효모균주로 60～70℃에서 42～54시간 발효시킨 후 여과한 고구마 효모 발효여과물(SPF)로부터 안토시아닌을 분리 제거하여 얻어지는 안토시아닌 제거 분획을 포함하는 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
자색고구마, 발효, 알코올, 위궤양, 숙취, 안토시아닌
Description
본 개시는, 자색 고구마로부터 분리 추출되어 얻어지는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
숙취란 취할 때까지 술을 마신 사람들이 경험하는 현상으로 빈번히 나타나면서도 유쾌하지 못한 신체적, 정신적 증상을 말한다. 원인으로는 알코올 및 그 중간 대사산물인 아세트알데히드의 독성, 탈수, 흡수 장애로 인한 영양소의 결핍(혈당, 무기질 및 비타민 결핍)으로 알려져 있다. 숙취의 정도는 개인에 따른 편차(유전적 소양), 환경상태(영양상태, 운동상태, 탈수 정도, 건강상태 등)에 따라 그 차이가 매우 심하게 나타난다. 대표적인 증상으로는 목마름, 구토, 피로, 현기증, 두통 등이 있고, 이러한 요소들이 복합적으로 작용하기도 한다.
알코올은 간에서 알코올 데하이드로게나제 (ADH)와 조효소인 NAD+에 의해 숙취의 원인물질로 알려진 아세트알데히드로 산화되며, 알데히드 데하이드로게나제 (ALDH)와 NAD+에 의해서 아세트산으로 분해된다.
또한 사이토크롬 P-450 type 2E1 (CYP2E1)과 카탈라아제에 의해서도 아세트알데히드로 산화되는데, 아세트알데히드와 아세트산은 지질 과산화반응 등을 통해 세포독성, 두통이나 복통, 삼투압 변화에 따른 탈수현상 등을 일으킨다. 또한 현대인의 주요 질환 중 하나인 소화성 위궤양(peptic ulcers)은 점막이 위산(gastric HCl)과 펩신에 잠겨 있는 부위의 손상을 의미하는 것으로, 이 부위는 정상적으로 점막 세포가 분비하는 뮤신에 의해 덮여 있다. 따라서 위산 분비 촉진, 펩신의 침습에 대항하는 뮤신 층의 약화 혹은 고갈, 국소 혈액순환 장애, 세포손상 및 염증반응 등 다양한 원인에 의해 위 점막 미란(erosions)과 궤양이 유발된다.
그러므로 위궤양을 일으키는 원인물질로는 뮤신 층을 강화시키고 국소 혈행을 원활하게 해 주는 PGs을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제(COX)를 억제하는 비스테로이드성 소염제(NSAIDs) 등의 약물, 심리적 스트레스, 위산 과다분비 및 저류, 위장운동성 증가 및 아세트산 축적, 헬리코박터 파이로리와 같은 세균감염 등을 들 수 있다. 특히 고농도의 알코올은 위 점막의 울혈을 초래하여 직접적인 출혈 및 괴사를 유발함은 물론 라디칼 반응에 따른 지질 과산화반응도 관여하는 것으로 알려져 있다.
위궤양 치료제로는 벽세포로부터의 산 분비를 차단하는 수소 이온 펌프 억제제, 제산제(antacids), 산 분비를 촉진시키는 히스타민의 수용체 차단제(H2-antagonists), 뮤신층 강화제인 PGs와 그 유도체, 그리고 헬리코박터 파이로리를 근절할 수 있는 항생제류가 대표적이다(Wallace와 Granger, 1996; Neal, 2003).
알코올성 숙취와 위궤양은 현대인에 있어 빼놓을 수 없는 질환 중 하나로 많은 사람들이 겪고 있다. 특히 사회적 스트레스에 더해 빈번한 알코올의 섭취는 심각한 위궤양과 함께 간질환을 동반하는 경우가 많아 이를 개선하기 위한 많은 의약품과 건강기능성식품들이 판매되고 있다. 즉, ADH 및 ALDH를 활성화시켜 알코올 혈중농도를 낮추기 위한 노력이 집중적으로 이루어지고 있다. 하지만 단기간의 복용으로 효소를 활성화시켜 유의한 해독효과를 나타내는 효과적인 물질은 거의 찾아 볼 수 없다. 특히 수소 이온 펌프 억제제인 판토프라졸과 같은 위궤양 치료제의 경우에도 다른 원인에 의한 위궤양에는 효과적이지만 알코올성 위궤양에는 효과가 미약한 것으로 알려져 있다(Cao 등, 2004).
따라서 위 및 간에서 알코올분해를 촉진시키는 효과와 더불어 라디칼 반응으로부터 세포 및 조직을 보호함으로써 속쓰림 등 숙취 및 위궤양 증상을 완화시킬 수 있는 항산화물질에 관심이 집중되고 있다. 이중에서도 우리의 식단에서 가장 풍부한 항산화제인 폴리페놀은 소비자나 식품 제조업자들로부터 큰 관심을 받고 있다. 특히 알려진 폴리페놀류 중 안토시아닌은 하루에 100 mg 이상 섭취됨으로써 다른 물질들보다 월등히 많은 소비량으로 인해 특별한 관심의 대상인 바, 포도, 딸기, 버찌, 오디, 양배추 등 많은 과일, 채소, 꽃 등에 존재하는 보라색을 띠는 수용성 색소이다.
안토시아닌은 페닐-2-벤조피릴리움(benzopyrylium) 또는 플라빌리움(flavylium) 염의 하이드록시화 및 메톡시화 유도체인 플라보노이드이다. 최근까지 17종의 자연 안토시아닌 및 아글리콘이 알려졌으며, 화학구조적으로 600여종이 존재하지만 이중 시아이딘(cyanidin), 페오니딘(peonidin), 펠라고니딘(pelargonidin), 말비딘(malvidin), 델피니딘(delphinidin) 및 페투니딘(petunidin)의 6종이 주요 성분이다(Giusti와 Wrolstad, 2003; Kong 등, 2003; Harada 등, 2004; Mazza, 2007).
안토시아닌은 세포노화의 원인이 되는 활성산소의 제거, 암의 원인이 되는 돌연변이 억제, 고혈압, 동맥경화, 심근경색 등 심혈관계 질환을 일으키는 데에 관 여하는 안지오텐신 전환효소(ACE)의 억제 작용, 혈중 콜레스테롤, 특히 동맥경화의 원인이 되는 저밀도 지단백(LDL)의 제거 및 비만개선, 지방간, 간경화 및 알코올성 간질환의 예방 및 치료, 혈액순환 촉진에 따른 뇌대사기능의 증진 및 치매 예방, 변비 해소, 및 시력개선 작용 등이 알려져 있다(Mazza, 2007). 특히 최근에는 자색 고구마(sweet potato)에 다량의 안토시아닌이 존재하는 것으로 확인되었으며(Harada 등, 2004), 흑차의 안토시아닌은 알코올 중독에 따른 산화반응을 억제하는것으로 보고되었다(Luczaj와 Skrzydlewska, 2004).
그러나, 본 개시의 발명자들은, 상술한 안토시아닌의 효능에 대한 보고들을 바탕으로 자색고구마로부터 분리 추출되는 여러 분획에 따른 숙취 및 위궤양 개선 효과의 관련성을 연구하던 중, 상술한 안토시아닌의 효능에 대한 보고들과 차이를 가지는 결과를 얻어 본 개시에 따른 발명을 완성하게 되었다.
본 개시는, 자색 고구마로부터 분리 추출되어 얻어지는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물의 제공을 일 목적으로 한다.
삭제
본 개시의 일 예에 따른 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물은, 자색 고구마를 사카로마이세스 효모균주로 60～70℃에서 42～54시간 발효시킨 후 여과한 고구마 효모 발효여과물(SPF)로부터 안토시아닌을 분리 제거하여 얻어지는 안토시아닌 제거 분획을 포함한다.
여기서, 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물은, 상기 안토시아닌 제거 분획으로부터 분리 수득되는 부탄올 분획 물질을 포함하는 것이 바람직하다.
한편, 상기 안토시아닌 제거 분획은 상기 고구마 효모 발효여과물(SPF)을 단계별 Sepadex 컬럼 분획방법에 의해 안토시아닌이 제거된 액상 분획인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 부탄올 분획 물질은 상기 안토시아닌 제거 분획을 40℃에서 건조시킨 후 분리 수득되는 물 분획층, 메탄올 분획층 및 부탄올 분획층으로부터 부탄올 분획층을 건조시켜 얻어지는 물질인 것을 특징으로 한다.
여기서, 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물은, 상기 안토시아닌 제거 분획으로부터 분리 수득되는 부탄올 분획 물질을 포함하는 것이 바람직하다.
한편, 상기 안토시아닌 제거 분획은 상기 고구마 효모 발효여과물(SPF)을 단계별 Sepadex 컬럼 분획방법에 의해 안토시아닌이 제거된 액상 분획인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 부탄올 분획 물질은 상기 안토시아닌 제거 분획을 40℃에서 건조시킨 후 분리 수득되는 물 분획층, 메탄올 분획층 및 부탄올 분획층으로부터 부탄올 분획층을 건조시켜 얻어지는 물질인 것을 특징으로 한다.
삭제
삭제
삭제
본 개시에 따른, 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물에 의하면, 안토시아닌을 포함하는 물질에 의한 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 억제 효과보다 향상된 효과를 가지는 이점을 가진다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
이하의 설명에서, 고구마 효모 발효여과물(SPF)은, 자색 고구마를 사카로마이세스 효모균주로 60～70℃에서 42～54시간 발효시킨 후 여과하여 얻어지는 물질을 의미한다.
또한, 안토시아닌 제거 분획(SPF-액상 성분)은, 고구마 효모 발효여과물(SPF)로부터 안토시아닌을 분리 제거하여 얻어지는 물질을 의미한다.
이하의 설명에서, 고구마 효모 발효여과물(SPF)은, 자색 고구마를 사카로마이세스 효모균주로 60～70℃에서 42～54시간 발효시킨 후 여과하여 얻어지는 물질을 의미한다.
또한, 안토시아닌 제거 분획(SPF-액상 성분)은, 고구마 효모 발효여과물(SPF)로부터 안토시아닌을 분리 제거하여 얻어지는 물질을 의미한다.
숙취해소 효능
정상동물에서 3 mL/kg (20%로 15 mL/kg)의 에탄올 경구투여 후 1시간에는 평균 0.13%, 3시간에는 0.13%, 그리고 5시간에는 0.10%의 혈중농도를 보여 줌으로써 1-3시간에 최고치에 도달한 후 서서히 감소하는 것으로 나타났다(도. 1).
이에 비해 240 mg/kg (15%로 1.6 mL/kg)의 SPF를 에탄올 투여 30분전에 경구투여한 경우의 혈중 에탄올 농도는 1시간에 0.10%, 3시간에 0.11%, 그리고 5시간에 0.07%로 모든 시간대에 걸쳐 20-25%의 저하효과를 나타내었다. 특히 750 mg/kg (15%로 5 mL/kg)의 SPF를 사전에 투여한 군에서는 1시간에 0.05%, 3시간에 0.07%, 그리고 5시간에 0.05%의 혈중 에탄올 농도를 나타내어 50-60%의 감소효과를 보였다.
한편, 안토시아닌이 제거된 SPF-액상 성분 역시 SPF과 유사한 효과를 나타냈다.
이 결과로부터, 숙취해소의 효과에 큰 영향을 주는 성분으로, SPF 중 안토시아닌 성분이 아닌 다른 성분이 있음을 예상할 수 있다.
참고로, 동일 용량(750 mg/kg)의 정제된 안토시아닌은 효과가 미약하였다.
특히 기존에 시판되고 있는 헛개나무 추출물(HDE) 또한 상대적으로 낮은 효과를 보여 주었다.
이에 비해 240 mg/kg (15%로 1.6 mL/kg)의 SPF를 에탄올 투여 30분전에 경구투여한 경우의 혈중 에탄올 농도는 1시간에 0.10%, 3시간에 0.11%, 그리고 5시간에 0.07%로 모든 시간대에 걸쳐 20-25%의 저하효과를 나타내었다. 특히 750 mg/kg (15%로 5 mL/kg)의 SPF를 사전에 투여한 군에서는 1시간에 0.05%, 3시간에 0.07%, 그리고 5시간에 0.05%의 혈중 에탄올 농도를 나타내어 50-60%의 감소효과를 보였다.
한편, 안토시아닌이 제거된 SPF-액상 성분 역시 SPF과 유사한 효과를 나타냈다.
이 결과로부터, 숙취해소의 효과에 큰 영향을 주는 성분으로, SPF 중 안토시아닌 성분이 아닌 다른 성분이 있음을 예상할 수 있다.
참고로, 동일 용량(750 mg/kg)의 정제된 안토시아닌은 효과가 미약하였다.
특히 기존에 시판되고 있는 헛개나무 추출물(HDE) 또한 상대적으로 낮은 효과를 보여 주었다.
한편, 혈중 아세트알데히드 농도는 에탄올 경구투여 후 1시간에는 평균 2.50 ppm, 3시간에는 2.09 ppm, 그리고 5시간에는 3.20 ppm으로 점차 증가하는 추세를 유지하여 상당기간 체내에 머무는 것으로 나타났다(도 2).
흥미롭게도 240 mg/kg의 SPF를 30분 전에 투여한 경우에는 1시간에 평균 3.72 ppm, 3시간에 2.44 ppm, 그리고 5시간에는 1.96 ppm을 나타내어 초기에 급격한 상승을 나타냈다가 5시간 후에는 대조군보다 낮은 수준으로 빠르게 감소하였다. 750 mg/kg의 SPF를 투여한 경우에는 1시간에 평균 4.85 ppm, 3시간에 4.46 ppm, 그리고 5시간에는 2.42 ppm으로 더 높이 상승하였다가 빠르게 회복되어 대조군보다 낮아졌다.
흥미롭게도 240 mg/kg의 SPF를 30분 전에 투여한 경우에는 1시간에 평균 3.72 ppm, 3시간에 2.44 ppm, 그리고 5시간에는 1.96 ppm을 나타내어 초기에 급격한 상승을 나타냈다가 5시간 후에는 대조군보다 낮은 수준으로 빠르게 감소하였다. 750 mg/kg의 SPF를 투여한 경우에는 1시간에 평균 4.85 ppm, 3시간에 4.46 ppm, 그리고 5시간에는 2.42 ppm으로 더 높이 상승하였다가 빠르게 회복되어 대조군보다 낮아졌다.
숙취해독 효능을 평가하기 위해 에탄올 농도가 최고치에 도달하는 1시간 후에 SPF를 투여한 경우에는 에탄올의 혈중농도가 급속도로 감소하여 240 mg/kg에서는 약 2.8배, 750 mg/kg에서는 약 3.1배의 빠른 소실속도를 보여 주었다(도 3).
SPF-액상 성분 또한 SPF에 버금가는 수준으로 에탄올 혈중농도를 빠르게 소실시키는 효과를 가진다.
그러나, 안토시아닌의 효과는 상대적으로 미약하였다. 또한 기존에 시판중인 HDE의 효능은 매우 미미하였다.
한편, 혈중 아세트알데히드 농도 역시 SPF 투여에 의해 용량의존성으로 대조군에 비해 소실속도가 빨라지는 것으로 확인되었다(도 4).
SPF-액상 성분 또한 SPF에 버금가는 수준으로 에탄올 혈중농도를 빠르게 소실시키는 효과를 가진다.
그러나, 안토시아닌의 효과는 상대적으로 미약하였다. 또한 기존에 시판중인 HDE의 효능은 매우 미미하였다.
한편, 혈중 아세트알데히드 농도 역시 SPF 투여에 의해 용량의존성으로 대조군에 비해 소실속도가 빨라지는 것으로 확인되었다(도 4).
알코올성 위궤양 억제효능
수컷 랫드에 원액의 에탄올 (3mL/kg)을 경구투여하고 1시간이 경과한 후 위를 적출하여 관찰한 결과, 심한 출혈성 위궤양이 확인되었다(도 5). 이러한 위점막 손상은 위궤양지수로 환산했을 때 82.3ㅁ10.4mm를 나타났다(표 1).
한편, 에탄올 투여 전 SPF를 투여했을 때는 용량의존성으로 위궤양 발생을 억제하였는 바, 특히 100 mg/kg 이상에서는 거의 완벽한 효과를 나타내었다.
특히 이러한 위궤양 완화효과는 SPF-액상 성분에 의해서도 동일한 수준으로 나타났는데, 30 mg/kg에서는 48.0%의 억제효과를 보여 주었으며, 100 mg/kg 이상에서는 거의 완전한 억제효과를 발휘하였다.
반면, 정제된 안토시아닌은 30 mg/kg의 저용량에서는 전혀 효과를 나타내지 못하였으며, 300 mg/kg의 고용량에서도 30.0%의 미약한 효과만을 보여 주었다.
특히 이러한 위궤양 완화효과는 SPF-액상 성분에 의해서도 동일한 수준으로 나타났는데, 30 mg/kg에서는 48.0%의 억제효과를 보여 주었으며, 100 mg/kg 이상에서는 거의 완전한 억제효과를 발휘하였다.
반면, 정제된 안토시아닌은 30 mg/kg의 저용량에서는 전혀 효과를 나타내지 못하였으며, 300 mg/kg의 고용량에서도 30.0%의 미약한 효과만을 보여 주었다.
이러한 시험결과로부터 위궤양 억제 유효성분을 함유하고 있는 것으로 확인된 SPF-액상 성분을 물, 부탄올 및 메탄올 층으로 분획하였다.
이들 분획에 대한 위궤양 예방효능 평가결과, 100 mg/kg의 물 분획과 메탄올 분획은 각각 42.4% 및 32.3%의 억제효능을 나타내어 상대적으로 효과가 낮았다(도 6 및 표 2).
이에 비해, 100 mg/kg의 부탄올 분획은 74.7%의 높은 효과를 나타내어 고용량(300 mg/kg) SPF의 92.9%에는 못미쳤지만, 3가지 분획 중 가장 효과적이었다.
이들 분획에 대한 위궤양 예방효능 평가결과, 100 mg/kg의 물 분획과 메탄올 분획은 각각 42.4% 및 32.3%의 억제효능을 나타내어 상대적으로 효과가 낮았다(도 6 및 표 2).
이에 비해, 100 mg/kg의 부탄올 분획은 74.7%의 높은 효과를 나타내어 고용량(300 mg/kg) SPF의 92.9%에는 못미쳤지만, 3가지 분획 중 가장 효과적이었다.
위궤양에 따르는 출혈량을 정량적으로 제시하기 위해 누출된 Evan's blue를 용출시켜 측정한 결과, 물, 부탄올 및 메탄올 분획 투여군에서 각각 34.4, 76.8 및 28.4%의 억제효과를 보여 줌으로써 위궤양지수와 거의 일치하는 경향을 나타내었다
이상과 같이, SPF, SPF-액상성분 및 그 분획의 알코올성 숙취와 위궤양에 대한 개선효능을 비교평가하였다.
결과를 종합해 볼 때, 숙취예방 효과에서 SPF-액상 성분 투여로 혈중 알코올 농도가 크게 감소하고 해독효능에서 있어서 알코올 및 아세트알데히드 청소율이 증가함으로써 기존에 개발된 HDE보다 우수한 것으로 나타났으며, 이러한 효능은 안토시아닌이 아닌 SPF-액상 성분 내에 존재하는 다른 성분에 의한 것으로 확인되었다.
또한 알코올성 위궤양에 있어서도 SPF-액상 성분에서 탁월한 효능이 나타났으며, 유효성분은 부탄올 분획에 상대적으로 높은 수준으로 함유되어 있는 것으로 보였다.
따라서 본 시험으로부터 SPF, SPF-액상 성분 및 SPF-액상 성분의 부탄올 분획은 과도한 알코올섭취로 인한 숙취 및 위궤양 개선을 위한 새로운 기능성 소재로의 개발 가능성이 입증되었으며, 더 나아가 부탄올 분획으로부터 유효성분을 분리하고 그 작용기전을 규명한다면 더 탁월한 유효 신물질을 얻을 수 있을 것으로 기대된다.
또한 알코올성 위궤양에 있어서도 SPF-액상 성분에서 탁월한 효능이 나타났으며, 유효성분은 부탄올 분획에 상대적으로 높은 수준으로 함유되어 있는 것으로 보였다.
따라서 본 시험으로부터 SPF, SPF-액상 성분 및 SPF-액상 성분의 부탄올 분획은 과도한 알코올섭취로 인한 숙취 및 위궤양 개선을 위한 새로운 기능성 소재로의 개발 가능성이 입증되었으며, 더 나아가 부탄올 분획으로부터 유효성분을 분리하고 그 작용기전을 규명한다면 더 탁월한 유효 신물질을 얻을 수 있을 것으로 기대된다.
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이하 실시예를 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이러한 실시예들로 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
실험동물
Sprague-Dawley (SD) 계통의 수컷 6주령 랫드를 (주)오리엔트바이오(경기도 가평)로부터 구입하여 7일 동안 사육장과 조제사료에 순화기간을 거쳐 건강한 동물만을 골라 한 케이지에 2마리씩 수용하였다. 시험 시작 시점의 동물체중은 220-240 g이었다. 동물은 온도(23.2℃), 상대습도(50.5%) 및 12시간 명암주기(07:00 점등, 19:00 소등)가 조절되는 환경에서 사육하였다. 사료는 실험동물용 고형사료를, 음수는 여과된 정제수를 자유섭취시켰다. 본 연구에서의 모든 동물실험은 충북대학교 실험동물 연구지원센터 동물실험윤리위원회(Institutional Animal Care and Use Committee, IACUC)의 승인 하에 동 센터의 표준작업지침서(Standard Operation Procedures, SOP)에 따라 수행하였다.
시험물질
경남 함양군에서 재배한 자색 고구마를 효모균주(Saccharomyces HM2104)로 60-70℃에서 48시간 발효시킨 후 여과하여 자색 고구마 발효여과물(SPF)을 얻었다. 이 발효물로부터 단계별 Sepadex 컬럼 분획방법으로 안토시아닌만을 정제하였고, 안토시아닌이 완전히 제거된 SPF-액상 성분을 얻었다. 이 액상 성분을 40℃에서 건조시킨 다음 메탄올:물(1:1)로 3회 추출하고 메탄올 층을 건조시켜 메탄올 분획을 얻었다. 물층을 다시 부탄올:물(1:1)로 3회 추출하고 부탄올 층을 건조시켜 부탄올 분획을 얻었으며, 잔류한 물 층을 건조시켜 물 분획을 얻어 실험에 사용하였다. 별도로 헛개나무 물추출물(Hovenia dulcis extract, HDE)을 (주)생명의 나무(경기도 수원)로부터 구입하였다. 시험물질 중 건조분말은 멸균정제수에 용해하여 사용하였다.
(실시예 1) 숙취 해소효능 평가
숙취 예방효능 평가를 위해 랫드에 SPF [240 mg/kg(15%로 1.6 mL/kg) 또는 750 mg/kg (15%로 5 mL/kg)], 안토시아닌 (750 mg/kg) 또는 SPF-액상 성분 (750 mg/kg)을 경구투여하였다. 30분 후 3 mL/kg (20%로 15 mL/kg)의 에탄올을 경구투여한 다음, 1, 3 및 5시간 후 에탄올과 아세트알데히드의 혈중농도를 기체 크로마토그래피를 이용하여 측정하였다(Chen, 1995).
해독효능 평가를 위해서는 에탄올 투여 후 최고 혈중농도 도달시간인 1시간에 시험물질을 투여하였으며, 에탄올 투여 1, 3 및 5시간 후 에탄올과 아세트알데히드의 혈중농도를 기체 크로마토그래피를 이용하여 측정하였다. 숙취해소 효능은 체내 흡수정도와 배설속도로 평가하였다. 혈중 에탄올과 아세트알데히드 분석을 위한 기체 크로마토그래피의 조건은 다음과 같다.
- 가스 크로마토그래피: Varian CP-3800
- 컬럼: Innowax (15 m, 0.25 mm, 0.5 ㎛)
- 오븐 온도: 50℃, 3분 (등온선)
- 압력: 8.8 psi
- 매체 가스: He
- 주입 온도: 230℃
- 검지 온도: 250℃
- 헤드 스페이스 오토샘플러 (65℃ 인큐베이션) 사용
(실시예 2) 알코올성 위궤양 억제효능 평가
위궤양 예방효능 평가를 위해 랫드에 우선 SPF (30, 100 또는 300 mg/kg), 안토시아닌 (300 mg/kg) 또는 SPF-액상 성분 (300 mg/kg)을 경구투여하였다. 30분 후 원액의 에탄올을 3 mL/kg으로 경구투여하고, 에탄올 투여 1시간 후에 디에틸 에테르로 과마취하여 동물을 희생시켰다. 위를 적출한 후 10 mL의 포르말린(1%)을 주입하여 용액으로 부풀린 다음, 대만곡부를 따라 종으로 절개하였다. Cork board에 위를 펼쳐 핀으로 고정한 다음 위궤양 병변의 길이를 측정하되, 점상출혈인 경우는 5개를 1 mm로 계산하여 위궤양 지수(mm 궤양병변)를 산정하였다(Qui 등, 2004).
SPF-액상 성분과 정제 안토시아닌의 효능을 비교 평가한 후, 유효성분 함유 분획을 알아내기 위해 100 mg/kg의 SPF 분획(물, 부탄올 및 메탄올 분획)에 대한 위궤양 개선 효능을 비교평가하였다. 이 과정에서는 에탄올 경구투여 직후 0.5 mL/kg의 1% Evan's blue를 정맥투여하였다. 위궤양 지수를 판정한 후 위조직을 5 mL의 포름아마이드에 담가 24시간 동안 Evan's blue를 추출하였다(Filaretova 등, 2002). 분광광도계로 620 nm에서 흡광도를 측정하여 표준검량선으로부터 누출된 Evan's blue를 정량하였다.
도 1은 자색 고구마 효모 발효여과물(SPF: ■, 240 mg/kg; ◆, 750 mg/kg), 액상 성분 분획(△, 750 mg/kg), 정제 안토시아닌(○, 750 mg/kg), HDE(▽, 750 mg/kg) 투여 후 30분 후에 에탄올(●, 3 mL/kg)을 투여했을 때 랫드에서의 알코올 혈중농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 자색 고구마 효모 발효여과물(SPF: ■, 240 mg/kg; ◆, 750 mg/kg) 투여 후 30분 후에 에탄올(●, 3 mL/kg)을 투여했을 때 랫드에서의 아세트 알데히드 혈중농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3은 에탄올(●, 3 mL/kg) 투여 후 1시간 후에 자색 고구마 효모 발효여과물(SPF: ■, 240 mg/kg; ◆, 750 mg/kg), 액상 성분 분획(△, 750 mg/kg), 정제 안토시아닌(○, 750 mg/kg), HDE(▽, 750 mg/kg)를 투여했을 때 랫드에서의 알코올 혈중농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 에탄올(●, 3 mL/kg) 투여 후 1시간 후에 자색 고구마 효모 발효여과물(SPF: ■, 240 mg/kg; ◆, 750 mg/kg)을 투여했을 때 랫드에서의 아세트 알데히드 혈중농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5상은 에탄올(3 mL/kg) 단독으로 처치한 위장관 출혈을 나타낸 도면이고, 도 5하는 에탄올과 자색 고구마 효모 발효여과물(300 mg/kg)을 함께 투여하였을 때 위장관 조직을 나타낸 사진이다.
도 6은 자색 고구마 효모 발효여과물(SPF)과 SPF 액상성분 분획을 함께 투여하였을 때 에탄올(3 mL/kg)으로 유도된 위장관 궤양의 상태를 나타낸 사진이다.
도 6좌상은 에탄올 단독 투여, 도 6우상은 SPF 액상성분 분획 중 물 분획 100 mg/kg, 도 6좌하는 부탄올 분획 100 mg/kg, 도 6우하는 메탄올 분획 100 mg/kg을 투여한 랫드의 궤양상태를 나타낸 것이다.
Claims (4)
- 자색 고구마를 사카로마이세스 효모균주로 60～70℃에서 42～54시간 발효시킨 후 여과한 고구마 효모 발효여과물(SPF)로부터 안토시아닌을 분리 제거하여 얻어지는 안토시아닌 제거 분획을 포함하는 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물.
- 청구항 1에 있어서,상기 안토시아닌 제거 분획으로부터 분리 수득되는 부탄올 분획 물질을 포함하는 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물.
- 청구항 1에 있어서,상기 안토시아닌 제거 분획은 상기 고구마 효모 발효여과물(SPF)을 단계별 Sepadex 컬럼 분획방법에 의해 안토시아닌이 제거된 액상 분획인 것을 특징으로 하는 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물.
- 청구항 2에 있어서,상기 부탄올 분획 물질은 상기 안토시아닌 제거 분획을 40℃에서 건조시킨 후 분리 수득되는 물 분획층, 메탄올 분획층 및 부탄올 분획층으로부터 부탄올 분획층을 건조시켜 얻어지는 물질인 것을 특징으로 하는 자색고구마 추출물을 유효 성분으로 하는 숙취 해독 및 알코올성 위궤양 개선용 식품 조성물.
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