본 발명에 의하면, 보습 효과 및 진피 강화 효과를 갖는 화장료 조성물이 제공되며, 본 발명의 화장료 조성물은 바오밥 나무(Adansonia Digitata) 추출물, 인도센나 나무(Cassia Angustifolia) 추출물 및 완두(Pisum Sativum) 추출물을 유효성분으로 포함하거나, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물을 유효성분으로 추가로 포함한다.
본 발명의 조성물에 유효성분으로 포함되는 성분들을 각 성분별로 살펴본다.
바오밥나무(Adansonia Digitata)는 열대 아프리카 지역에 분포하고 5,000 ~ 6,000년의 수령에 이르러 생명의 나무라고 불리며 건조한 기후에서 살아남기 위해 수분을 저장하는 탁월한 능력을 지니고, 특히 잎에서 분리한 점액 성분은 물과 강력하게 결합하는 성질을 가지고 있다. 본 발명에 사용되는 바오밥나무 추출물은 바람직하게는 바오밥나무의 잎으로부터 추출하며, 바오밥 나무의 잎에서 추출 정제하여 점액 성분을 획득한다. 바오밥 나무의 잎은 피부에 유용한 미네랄, 비타민, 단백질, 및 플라보노이드를 다량 함유하고 있는 것으로 알려져 있다. 활성 성분인 점액질은 보습에 도움을 줄 뿐 아니라 피부 표면에 보호막을 형성하여 유연성과 부드러운 피부 사용감을 향상시키는 속성을 가지고 있다.
한편, 바오밥나무 추출물은 가수분해된 것을 사용하는 것이 바람직하며, 바오밥나무 추출 과정에 베타-글루코시데이즈 형태의 당분해 효소를 처리할 경우 더 풍부한 양의 점액 성분을 얻을 수 있을 뿐 아니라 그 안정성을 월등히 증가 시킬 수 있다.
인도센나 나무(Cassia Angustifolia)는 콩과의 소관목으로 인도, 아라비아, 아프리카의 일부 지역에서 자생한다. 본 발명에 사용되는 인도센나 나무 추출물을 바람직하게는 인도센나 나무의 종자로부터 추출하며, 인도센나 나무의 종자 추출물은 식물성 헤테로폴리사카라이드(heteropolysaccharide)를 주성분으로 하며, 하이알우론산(hyaluronic acid)과 유사한 사슬형 구조를 가지고 있다. 이러한 구조적 특성은 친수성을 띠게 하며, 보호막 형성을 돕고, 스킨케어 조성물로 사용하는 경우 보습 및 피부에 부드러운 사용감을 느낄 수 있게 하며 피부 윤기를 향상시키는 효과를 유발한다.
완두(Pisum Sativum) 추출물, 특히 완두의 종자인 완두콩으로부터 분리한 추출물의 주요 성분은 식물성 펩타이드 활성 성분으로 진피에 존재하는 단백질 분해 효소인 엘라스티나제(elastinase), 콜라제나제(collagenase) 둥을 억제하는 기능을 가지는 것으로 알려져 있고, 라디컬 소거능 (radical scavenger)도 나타내는 것으로 알려져 있다. 이와 같은 효능은 피부 조직의 단백질을 보호 및 복구할 뿐만 아 니라 피부의 유연성을 부여함으로써 항노화 효과를 보일 수 있다.
해바라기(Helianthus Annuus), 특히 해바라기 종자로부터 추출한 활성 성분은 피부 내부의 지질 성분과 유사한 성질을 가진 지질로 구성되어 있다. 대표 성분은 피토세라마이드-6 (phytoceramide-6)와 베타 시토스테롤(beta-sitosterol) 등이다. 피부 장벽에 존재하는 지질 성분과 유사한 성질을 가지고 있으므로 표피로부터 수분 증발을 억제해 주며, 망가진 피부 장벽을 신속히 복구할 수 있다. 상기와 같은 해바라기 종자 추출물을 추가로 포함하는 본 발명의 조성물은 보습 효과가 증진된다.
본 발명의 추출물은 당해 기술 분야에 알려진 어떠한 적절한 방법에 의해 추출될 수 있으며, 예를 들어 각 성분의 원재료를 획득하여 세척한 후 원재료 중량의 약 1 내지 30배에 달하는 부피의 물, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 헥산, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 함수부틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜 또는 함수글리세린 등의 용매를 첨가하여 열탕 추출, 환류 순환 추출, 침지 추출 또는 압력 추출 등의 추출 방법을 사용하여 추출한 후 원심분리, 감압여과, 농축 및 동결건조 하여 획득할 수 있으며, 다만 상기의 추출 방법에 제한되는 것은 아니다.
실시예 및 도 2 내지 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 본원 발명의 화장료 조성물은 진피층 세포 사이의 주요 단백질인 콜라겐, 진피층의 주요 매트릭스 프로테오글라이칸인 GAG 등의 진피 구조 단백질의 합성을 촉진하며, 콜라겐 매트릭스를 분해하는 주요 단백질 분해 효소인 세포 기질 단백질 분해 효소 (MMP-1)의 발현을 억제하는 것을 확인할 수 있으며, 그 결과 진피 강화 효과를 갖는다.
피부에 존재하는 상기 단백질 분해 효소(MMP-1)는 진피의 구조 단백질인 엘라스틴 또는 콜라겐 등을 분해하여 진피 구조를 변형시키는 역할을 하며, 표피층의 단백질 분해 효소는 표피 각질 세포의 분화, 각질화 및 보습 등에 영향을 준다. 표피의 각질 세포의 분화 촉진은 피부의 보습 인자의 생성 촉진과 함께 피부의 수분 증발을 표피에서 막아주는 역할을 하여 건강한 표피를 유지할 수 있다. 이러한 단백질 분해 효소는 활성이 조절되어 조직 재생 및 성장 등에 영향을 미치며, 단백질 분해 효소는 각각에 대한 억제제가 세포 내에 존재하여 단백질 분해능을 정확하게 조절하는 역할을 한다. 단백질 분해능의 조절이 잘 이루어지지 않으면, 피부에 여러 가지 문제를 야기하게 되는데, 대표적인 예가 노화와 함께 동반되는 피부 트러블, 탄력 감소 등과 주위 환경으로부터 반복적으로 노출되는 자외선, 화학물질 등이 야기하는 문제들이다.
또한, 본원 발명의 화장료 조성물은 도 5 및 6에 나타난 바와 같이 각질 세포의 분화를 촉진하며 도 5는 표피 각질 세포의 분화유도 실험을 형태학적으로 측정한 결과를 나타낸 것으로써 분화된 케라티노사이트(keratinocyte)는 미분화 된 경우에 비해 평편한 형태를 갖는 결과 미분화 케라티노사이트는 깊이 및 부피를 가지고 있어서 사진에서 세포 주변이 밝은 색으로 관찰된다. 본 발명의 조성물로 처리한 도 5(f)의 경우 분화된 세포들은 핵이 소실되며 평편한 형태를 가지므로 이들이 바닥에 평편하게 붙어서 세포 주변이 밝은색으로 거의 관찰되지 않는 것을 확인할 수 있다. 도 6은 이러한 표피 각질 세포의 분화유도 실험을 생화학적으로 측정한 결과를 나타낸 것이다. 분화된 세포에만 특이적으로 결합하는 인볼루크린을 사용하여 그 발현양을 관찰하였으며, 이때 액틴은 표피 각질 세포가 일정량 가지고 있는 세포 골격 단백질로서 상기 실험에서 동일량의 단백질로 보정하기 위해 액틴의 발현양을 같은 실험에서 정량하였다. 도 7은 본원 발명의 화장료 조성물의 보습 효과를 인공피부를 이용하여 실험하기 위한 장치를 나타낸다.
이를 위해 본 발명의 화장료 조성물은 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 0.3 중량% 내지 약 10 중량%, 바람직하게는 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.03 중량% 내지 약 10 중량% 및 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.03 중량% 내지 약 10 중량%를 유효성분으로 포함한다. 바람직하게는 상기 화장료 조성물은 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.1 중량% 내지 약 10중량%를 유효성분으로 추가로 포함한다. 상기 성분들이 각각 기술된 함량의 하한 미만의 양으로 포함되는 경우 본 발명의 효능을 기대하기 어려우며, 각각 기술된 함량의 상한을 초과하는 양으로 포함되는 경우 화장료 조성물의 제형에 문제가 생길 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상술한 추출물들을 유효성분으로 포함하여, 다양한 제형에 따라 유효 성분 이외의 잔부의 성분을 적절하게 배합할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게, 본 발명은 바디 에멀젼(body emulsion), 바디 모이스춰라이저(body moisturizer), 핸드 크림, 발(foot) 크림, 선블록 등의 리브-온(leave-on) 제형으로 제조되는 것이 바람직하며, 훼이셜폼클렌져(Facial Foam Cleanser) 또는 바디 워시(body wash) 등의 린스-오프(rinse-off) 제형으로도 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더 가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
나아가, 필요한 경우, 페녹시에탄올(phenoxyenthanol), 헤드록시에틸셀룰로오스(hydroxyethylecellulose), 카보머(carbomer), 글리세린(glycerin), 소듐시트레이트(sodium citrate), 클로르펜신(chlorphensin), 포타슘 소르베이트(potassium sorbate), 메틸파라벤(methylparaben), 옥틸도데카놀(octyldodecanol), 코코-글리세라이드(coco-glycerides), 부틸파라벤(butylparaben), 토코페릴아세테이트(tocopheryl acetate) 등 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되는 추가의 성분을 포함할 수 있다.
보다 상세하게, 본 발명의 화장료 조성물은 바디 에멀젼(body emulsion)의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 1 중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.5 중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.2중량%, 및 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.3 중량%를 포함하고;
바디 모이스춰라이저(body moisturizer)의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 1중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.5중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.1중량%, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.3 중량%를 포함하고;
핸드 크림의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 1중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.5중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.1중량%, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.5 중량%를 포함하고;
발(foot) 크림의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 1중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.5중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.1중량%, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.1 중량%를 포함하고;
선블록의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 0.3중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.03중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.03중량%, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.14 중량%로 포함하고;
훼이셜폼클렌져(Facial Foam Cleanser)의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 0.3중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.03중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.03중량%, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.14 중량%를 포함하고;
바디 워시(body wash)의 제형으로 하는 경우 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물 약 0.3중량%, 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 약 0.03중량%, 완두(Pisum Sativum) 추출물 약 0.03중량%, 해바라기(Helianthus Annuus) 추출물 약 0.14 중량%로 포함하도록 하는 것이 바람직하다.
이하에서는 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 더 자세히 설명하기로 하며, 하기 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 기술하기 위한 것으로서 본 발명이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예
1. 유효성분의 추출 과정
바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물은 20 kg의 정제수를 70 ℃까지 가열한 후, 파쇄한 2.0 kg의 바오밥나무 잎을 첨가하여 다시 온도를 90 - 95℃까지 올려 1시간 동안 추출하였다. 이후 상온까지 추출액을 식힌 후, 베타-글루코시데이즈 형태의 당분해 효소를 이용하여 가수분해 하였다. 그 후 이로부터 획득된 조질의 추출물을 5,000g의 원심력으로 원심분리하여 상층액으로 최종 추출물을 얻었다. 상기 가수분해 과정은 바오밥나무의 잎으로부터 보다 많은 양의 점액 성분을 추출할 수 있도록 하고 추출물의 안정성을 증가시켜 주는 효과가 있다.
인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물은 인도센나 나무의 종자를 건조시킨 다음 분말화 한 가루 1 kg을 물 5 L에 넣고 냉각 콘데서가 달린 추출기를 이용하여 5시간 동안 끓여서 (90℃) 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 사용하였다
완두(Pisum Sativum) 추출물은 1 kg의 건조한 완두콩을 분말화한 가루를 물 5 L에 넣고 냉각 콘데서가 달린 추출기를 이용하여 60℃에서 하루 동안 추출하고 400 메쉬 여과포로 여과한 후 상온으로 냉각한 후 사용하였다.
해바라기(Helianthus Annuus) 추출물은 채집한 해바라기 씨 건조한 후 분말화한 가루 1 kg을 5 L 옥틸도데카놀 (octyldodecanol)을 이용하여 상온에서 24시간 추출하였다. 이 후 추출물을 400 메쉬 여과포로 여과한 후 사용하였다.
2. 세포에서의 진피 강화 실험
(1) 콜라겐의 정량
본 발명의 화장료 조성물의 성분인 바오밥나무 추출물, 인도센나 나무 추출물, 완두콩 추출물 및 해바라기 추출물은 본 발명의 함량 범위 내에서 화장료 조성물의 최종 제형에 따라 적절하게 다른 비율로 혼합될 수 있으며, 따라서 각 추출물 의 조성물을 하기와 같이 별도로 제조하여 여러 화장료 조성물에서 다양한 비율로의 혼합이 용이하도록 할 수 있다.
바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출 조성물의 중량을 기준으로 페녹시에탄올 (phenoxyenthanol) 2 중량%, 카보머(carbomer) 0.3 중량% 및 잔부의 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출물을 포함하는 바오밥나무(Adansonia Digitata) 추출 조성물을 제조하였다.
인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출물 2.5 중량%, 페녹시에탄올 (phenoxyethanol) 2 중량%, 하드록시에틸셀루로스 (hydroxyethylecellulose) 0.45 중량%를 잔부의 정제수에 용해시켜 인도센나나무(Cassia Angustifolia) 추출 조성물을 제조하였다.
완두(Pisum Sativum) 추출 조성물의 중량을 기준으로 글리세린 (glycerin) 42 중량%, 소디움시트레이트 (sodium citrate) 1중량%, 클로펜신 (chlorphensin) 0.3중량%, 포타시움 소베이트 (potassium sorbate) 0.5중량%, 메틸파라벤 (methylparaben) 0,2 중량% 및 잔부의 정제된 완두(Pisum Sativum) 추출물을 함유하는 완두(Pisum Sativum) 추출 조성물을 제조하였다.
해바라기(Helianthus Annuus) 씨 추출 조성물의 중량을 기준으로 16 중량% 코코 글리세리드 (coco-glycerides), 12 중량% 해바라기 씨 추출물, 0.05 중량% 부틸파라벤 (butylparaben), 및 0.05 중량% 토코페릴 아세테이트 (tocopheryl acetate)를 포함하는 해바라기(Helianthus Annuus) 씨 추출 조성물과 잔부의 옥틸도데카놀을 포함하는 추출물을 제조하였다.
본 실험에서는 유효성분으로서 상기 인도센나 나무 추출 조성물 0.3 중량 %, 상기 바오밥 나무 추출 조성물 1 중량 %, 및 상기 완두 추출 조성물 0.2 중량 %만을 각각 포함하며 잔부의 세포 배양 배지로 이루어진 3 개의 추출 조성물을 대조구로 하고, 유효성분으로서 상기 성분을 모두 포함하는 본 발명의 화장료 조성물을 각각 2일간 사람의 진피로부터 유래된 섬유아세포를 배양 접시 면적의 약 80% 정도로 자라도록 배양한 배지에 처리한 후 배양액을 수거하였다.
수거한 배양액의 콜라겐을 정량하기 위해 콜라겐에 특이적으로 결합하는 염색 시약인 써콜(Sircol)로 각각 반응시켰다. 콜라겐과 염색 시약을 충분히 반응시킨 후 염색 시약과 결합한 콜라겐 결합체를 원심분리로 분리하고 콜라겐에 결합되어 있는 염색 시약을 녹일 수 있는 용해액으로써 알칼리 용액 0.5M NaOH에 녹여서 그 흡광도를 540nm에서 측정하여 정량하였다.
그 결과를 도 2에 나타내었으며, 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 조성물에서 증가된 양의 콜라겐이 정량되었다. 이러한 결과에 근거하여 본 발 명의 화장료 조성물은 각각의 개별적인 성분만으로 처리한 경우에 비하여 콜라겐의 합성을 현저하게 촉진하는 것을 알 수 있다.
(2) MMP-1의 정량
사람의 진피로부터 유래된 섬유아세포를 배양 접시에 넣고 배양 접시 면적의 약 80% 정도로 자라도록 배양하였다. 이후 유효성분으로서 인도센나나무 추출물 0.3 중량 %, 바오밥나무 추출물 1 중량 %, 및 완두 추출물 0.2 중량 %만을 각각 포함하며 잔부의 세포 배양 배지로 이루어진 3 개의 조성물을 대조구로 하고, 유효성분으로서 상기 성분을 모두 포함하는 본 발명의 화장료 조성물을 각각 2일간 처리한 후 배양액을 수거하였다.
콜라겐 매트릭스를 분해하는 주요 단백질 분해 효소인 섬유아세포 콜라게나제(fibroblast collagenase)인 MMP-1(Matrix metalloprotease)의 농도 변화를 측정하기 위해 면역화학적 정량법을 이용하였다. 먼저, MMP-1에 특이적으로 반응하는 항체(anti-MMP-1, GE Healthcare)를 세포 배양액과 반응시킨 후, 항체와 결합된 MMP-1과 반응하는 2차 항체(무우로부터 정제한 퍼옥시데이즈가 결합한 anti-rabbit 항체, GE Healthcare)를 다시 반응시키고 2차 항체에 표지된 효소에 반응하는 발색 시약(TMB substrate, 3,3',5,5'-tetramethylbenzindine/hydrogen peroxide 용액, GE Healthcare)으로 반응하여 발색 정도로 MMP-1의 배양액 내의 양을 측정하였다.
상기 실험 결과를 도 3에 나타내었으며, 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 조성물이 각각의 개별적인 성분만으로 처리한 경우에 비하여 현저하게 MMP-1 발현을 저해하는 것을 알 수 있다.
(3) 글라이코스아미노클라이칸(GAG)의 정량
사람의 진피로부터 유래된 섬유아세포를 배양 접시에 넣고 배양 접시 면적의 약 80% 정도로 자라도록 배양하였다. 이후 유효성분으로서 인도센나나무 추출물 0.3 중량 %, 바오밥나무 추출물 1 중량 %, 및 완두 추출물 0.2 중량 %만을 각각 포함하며 잔부의 세포 배양 배지로 이루어진 3 개의 조성물을 대조구로 하고, 유효성분으로서 상기 성분을 모두 포함하는 본 발명의 화장료 조성물을 각각 2일간 처리한 후 배양액을 수거하였다.
수거한 배양액의 글라이코스아미노클라이칸을 정량하기 위해 글라이코스아미노클라이칸에 특이적으로 결합하는 염색 시약인 블라이칸(Blycan)으로 각각 반응시켰다. 글라이코스아미노클라이칸과 염색 시약을 충분히 반응시킨 후 염색 시약과 결합한 글라이코스아미노클라이칸 결합체를 원심분리로 분리하고 글라이코스아미노클라이칸에 결합되어 있는 염색 시약을 녹일 수 있는 용해액(Dissociation reagent, Blycan assay kit의 구성품, Biocolor Ltd.)에 녹여서 그 흡광도를 656 nm에서 측정하여 정량하였다.
그 결과를 도 4에 나타내었으며, 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 조성물에서 증가된 양의 라이코스아미노클라이칸(GAG)이 정량되었다. 이러한 결과에 근거하여 본 발명의 화장료 조성물이 각각의 개별적인 성분만으로 처리한 경우에 비하여 라이코스아미노클라이칸의 합성을 현저하게 촉진하는 것을 알 수 있다.
상기 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이 본원 발명의 화장료 조성물은 진피 내에 콜라겐 및 GAG의 생성을 증가시키고 MMP-1의 발현을 억제함으로써 견고한 진피 구조를 형성을 도와 주고 차단막의 기능을 높여 진피 강화 효과를 나타내며, 그 결과 피부 내부의 수분이 밖으로 유출되는 것을 방지하고 피부의 강도를 높여주고 탄력성 및 유연성을 부여하여 피부를 건강하게 보호할 수 있다.
3. 표피 각질 세포의 분화유도 실험
(1) 형태학적 분화 측정
사람으로부터 유래된 각질 세포를 배양접시에 배양면적 대비 90% 정도 자라도록 배양하였다. 그 후 유효성분으로서 인도센나나무 추출물 0.5 중량 %(d), 바오밥나무 추출물 1 중량 %(c), 및 완두 추출물 0.2 중량 %(e)만을 각각 포함하며 잔부의 세포 배양 배지로 이루어진 3 개의 조성물 및 미처리구(a)를 음성 대조구로 하고, 세포 분화가 정상적으로 유도됨을 확인하기 위해 양성 대조군으로서 1.2 mM CaCl2(b)를 처리하였으며, 유효성분으로서 상기 성분을 모두 포함하는 본 발명의 화장료 조성물(f)을 각각 2일간 처리한 후 세포 모양을 관찰하여 각질 세포의 분화 정도를 확인하였고 그 결과를 도 5에 나타내었다(Eclipse TS100 현미경, Digital Sight 사진기 Nikon).
상기 도 5에 나타난 세포 모양에서 확인할 수 있는 바와 같이 각질 세포의 분화를 유도하면 납작한 모양의 분화 특이적인 형태를 보이며, 각각의 개별적인 성분만으로 처리한 경우(c, d, e)에는 확인할 수 없는 정도의 분화가 일어난 반면, 본 발명의 조성물로 처리한 경우(f)에는 명백한 분화를 관찰할 수 있었다.
(2) 생화학적 분화 측정
표피 각질 세포의 분화를 생화학적으로 측정하기 위해, 각질 세포 분화의 바이오 마커가 되는 인볼루크린(involucrin)의 발현 정도를 웨스턴 법으로 확인하였고 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6(a) 및 도 6(b)에서 확인할 수 있는 바와 같이, 각각의 개별적인 성분만으로 처리한 경우에 비하여 본 발명의 조성물로 처리한 경우에는 현저한 인볼루크린의 발현을 확인할 수 있었으며, 이는 각질 세포가 현저하게 분화한 것을 나타낸다. 이때 액틴은 표피 각질 세포가 일정량 가지고 있는 세포 골격 단백질로서 상기 실험에서 동일량의 단백질로 보정하기 위해 액틴의 발현양을 같은 실험에서 정량하였다.
상기 결과로부터 확인할 수 있는 바와 같이 본원 발명의 화장료 조성물은 표피의 각질 세포의 분화를 촉진하며, 이는 피부의 보습 인자의 생성을 촉진함과 동시에 피부의 수분 증발을 표피에서 막아주는 역할을 하여 건강한 표피를 유지할 수 있다.
한편, 상기 진피 강화 효과 및 각질 세포 분화의 이중 효과는 표피 수분 증발을 억제하는 보습보다 향상된 보습 효과 및 탄력성 및 유연성의 이점을 동시에 가져올 수 있다.
4. 인공피부에서 표피 수분 증발양 측정
도 7에 나타난 바와 같이 인공 피부 (VitroSkin N-19, IMS inc)를 적절한 크기로 자른 후 일정양의 정제수가 담긴 용기 위를 완전히 덮을 수 있도록 고정시켰다. 정제수가 담긴 반대쪽 인공피부 표면에 유효 성분으로서 인도센나 나무 추출물 0.5 중량 %, 바오밥나무 추출물 1중량 %, 완두 추출물 0.2중량 % 및 해바라기 추출물 0.3중량%만을 각각 포함하며 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol)과 에탄올(ethanol)을 7:3의 비로 섞은 잔부의 혼합액에 녹인 4 개의 조성물 및 미처리구를 대조구로 하고, 유효성분으로서 상기 성분을 모두 포함하는 본 발명의 화장료 조성물을 일정량 도포한 후 27 ℃, 50% 습도에서 수분 증발을 유도하였다. 3일간 수분 증발을 유도한 후 용기 내에 남아 있는 정제수의 무게를 측정하여 실험 전의 정제수 무게와 비교하여 표피 수분 증발 정도를 확인하고 그 결과를 도 8에 나타내었다.
상기 도8에서 확인할 수 있는 바와 같이, 각각의 개별적인 성분만으로 처리한 경우에 비하여 본 발명의 조성물을 도포하였을 때 수분 증발을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 본 발명의 화장료 조성물은 진피 및 표피에서 수분 손실을 억제하여 뛰어난 보습 효과를 보일 수 있는 바, 보습뿐만 아니라 피부의 탄력성 및 유연성을 증가시킨다.