KR101095966B1 - 고려인삼종자의 청정육성법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 무색, 무취, 무자극성이며 물과 유기용매에 용해도가 크며 열안정성이 큰 4급 염화암모늄을 함유하는 고려인삼종자의 소독제제와 이를 이용한 고려인삼종자 유식물의 청정육성법에 관한 것이다.

고려인삼종자, 발아, 종자소독, 청정재배

Description

고려인삼종자의 청정육성법{Asceptic germination method of Korea ginseng seed}

본 발명의 고려인삼종자의 청정육성법에 관한 것이다.

더욱 상세하게는, 본 발명은 4급 염화암모늄화합물인 알킬디메틸벤질염화암모늄과 알킬디메틸에틸벤질염화암모늄의 단독 또는 혼합물을 주재로 한 고려인삼종자 소독제 및 이를 이용한 고려인삼종자의 청정발아법에 관한 것이다.

지금까지 고려인삼종자의 인공발아법의 연구는 전무한 실정이며 본 발명자들의 연구결과에 따르면, 인공 발아 후 주위환경에 따라 발아물이 용이하게 부패하여 폐기되기 쉽고 1㎝ 이상 길이가 되도록 성장시 발아물의 선도유지가 용이하지 않았다.

본 발명자들은 고려인삼종자의 연중발아법에 관하여 이미 10-581729 호로 특허등록한 바 있으며, 캘러스와 엽아 혼용물 인공배양에 관하여도 국내특허 제 307503 호로 개시한 바 있다.

본 발명자들은 이와 같이 종래의 연구결과들을 통하여 예의 연구한 결과 4급 염화암모늄화합물의 처리가 고려인삼종자의 고온 및 저온 과습 및 건조상태의 광차 단된 밀실배양 또는 발아처리과정에서 어렵게 캘러스 또는 발아된 유식물이 곰팡이 등 진균이나 병원성 세균에 의해 부패 되는 것을 방지할 필요가 있었음을 절감한 바 있어 이에 공표하는 것이다.

종래에도 종자소독제로 에틸알콜이 사용되었으나 발아과정에서 병원성 세균의 감염증식을 억제하기 곤란함이 확인되었다.

또 본 발명자들은 일반적으로 두과식물 종자의 부패를 유발하는 원인균의 멸균을 위해 흔히 사용되는 지오람수화제(아벤티스사, 호마이 제품), 카보람분제(동방아그라사, 비타지람 제품), 만코지수화제(경농, 다이센엠 45 제품) 등을 사용하여 보았으나 이들은 살균효과는 우수하나 고려인삼종자의 캘러스나 엽아를 식용이나 약용으로 사용하고자 하는 본 발명에서는 이들의 잔류 독성으로 인하여 적합하지 않았음을 확인하였다.
한편, 콩나물 콩과 숙주나물 콩종자 소독제로 4급 염화암모늄화합물이 국내공개특허번호 제10-2004-48202호로 공지된 바 있으나, 식물의 분류가 다르고 특히, 종자껍질이 두꺼운 인삼종자에도 그 효력이 있는지의 유무와 나아가 종실에 약제가 침투된 뒤에 발아율 저하 및 그 후의 고려인삼 유식물 및 캘러스 형성, 생육에 하자가 있는지 여부에 대하여는 지금까지 전혀 연구된 실정이 없었다.

나아가, 고려인삼종자 캘러스 또는 발아물을 식용이나 약용으로 하는 경우에는 부패원인균에 대한 살균력이 확실하고 저독성이면서 인체에 무해하며 잔류 독성이 적어 안전성에 문제가 없으며 처리법이 간편하고 가격이 저렴한 것이 요구되며 또 고려인삼종자의 캘러스 또는 발아유도에는 저온과 고온조건 저습과 고습 조건의 반복처리가 필요하고 압 조건과 환기가 어려운 무료 밀폐공간이 사용되어야 한다는 특성이 있으므로 이들 조건을 모두 만족할만한 화학물질이 특히 요구되어 왔다.

본 발명의 상기 목적은 무색, 무취, 무자극성이며 물과 유기용매에 용해도가 크며 열안정성이 큰 4급 염화암모늄 제제를 함유하는 수용액 또는 유기용매 용액에 고려인삼종자를 9시간 ~ 12시간 침지한 다음 무균실에 옮겨 발아시킴으로써 달성하였다.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 구체적인 실시예를 통하여 설명하지만 이에 유사한 화합물을 사용하거나 발아처리상 단순한 수치변경은 본 발명의 권리범위에 속하는 것은 물론이다.

<실시예 1> 고려인삼종자 살균소독제제의 제조

n-알킬디메틸벤질염화암모늄과 n-알킬디메틸에틸벤질염화암모늄을 중량비 1:1(가장 바람직하게는 100g:100g)로 혼합한 후, 분산제인 에틸알콜과 용제인 정제수 중량비 1:1(가장 바람직하게는 500g:500g)로 혼합한 용액 1L에 투입하여 1시간 균일하게 혼합한 액상 살균제 스톡(Stock)을 제조하였다.

크린벤치상에서 상기 액상제제 100mL를 10L의 물에 희석하여(100×액) 여기에 고려인삼종자 10㎏을 10시간 침지하여 액상제제가 종실에 잘 침투되도록 한 다음 무균육성실로 이송하였다.

<실시예 2> 고려인삼종자 유식물의 무균육성

공지된 무균육성실내의 온도와 습도는 자동조절기에 의하여 제어(control)되도록 하였다.

상기 실시예 1에 따라 제조된 살균소독제제로 소독한 고려인삼종자를 무균적으로 육성하기 위하여 크린벤치에서 자동적으로 무균육성실로 콘베이어벨트로 이송하였다.

무균육성실로 이동된 고려인삼종자에 대하여 상대습도 60% 조건으로 -5℃에 서 5시간 저온처리시킨 다음, 다시 상대습도 90% 조건으로 20℃로 3시간 고온처리하였다.

고온처리된 고려인삼종자를 -5℃로 다시 조절하여 상기 동일한 60% 상대습도 조건하에서 5시간 저온처리한 다음 다시 상대습도 90% 조건의 20℃에서 3시간 고온처리하는 방법으로 1일 3회 반복처리(repeat treatment) 하기를 3주간 계속한 결과 엽아길이 0.9~3.0㎝의 고려인삼종자 발아유식물을 얻을 수 있었다.

<실시예 3> 고려인삼종자로부터 무균 캘러스-엽아 혼용물 세포배양

실시예 1에서 얻은 살균제제로 무균처리한 인삼종자를 실시예 2의 방법으로 얻은 발아유식물로부터 1~2㎜ 크기의 자엽을 절취하여 크린벤치상에서 아가(agar) 5 ~ 10g/L, IAA 1 ~ 3㎎/L, 키네틴(kinetin) 5~15㎎/L, 수크로스(Sucrose) 20 ~ 40g/L를 함유한 pH 5.5 ~ 6.0의 MS 고체배지에 치상하고 6개월 후에 캘러스와 엽아가 혼화된 신초단계의 유식물을 취득하였다.

상기 실시예 1의 배지 2를 통하여 얻은 발아유식물 또는 신초단계의 유식물의 종래 무처리(소독실시 아니함) 또는 에틸알콜 단독처리(통제구)에 비하여 실험군을 대조구로하여 육성 또는 배양실험을 난괴법(randomised block design)으로 3회 반복하여 얻은 결과를 고려인삼종자 100립에 대한 이병율 및 약해유무의 달관검사(field test)를 조사한 비교자료는 표 1과 같다.

[표 1]

	이병율(%)			약해유무	생육상태
	1반복	2반복	3반복
무처리구	87	85	92	없음	부패
에틸알콜단독처리구	55	47	51	없음	갈변
본 발명 소독제제처리구	0.5	0.7	0.3	없음	양호

이상 실시예와 실험예를 통하여 알 수 있는 바와 같이 본 발명의 4급 염화암모늄화합물의 혼합물을 유효성분으로 하는 고려인삼종자 살균소독제는 고려인삼종자의 살균소독효과가 크고 발아유식물이나 신초유기단계의 캘러스-엽아 혼합물의 갈변현상이 없는 양호한 무균육성과 세포배양이 가능한 효과가 있다.

따라서, 희귀한 인삼종자의 유용성을 제고하며 무균 고려인삼종자 유식물을 제공함으로서 건강 음료 및 의약품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (2)

1. 삭제
2. 크린벤치에서 4급 염화암모늄화합물을 함유하는 액상살균제를 고려인삼종자의 종실에 침투할 수 있을 만큼 침지하여 소독한 다음, 온도와 습도가 자동조절기에 의하여 자동제어되는 무균 육성실로 콘베어벨트로 이송시켜 상대습도 60%조건의 -5℃에서 5시간 저온처리시킨 후 다시 상대습도 90%조건의 20℃에서 3시간 고온처리를 1일 3회 3주간 반복처리하여 고려인삼종자의 발아유식물을 배양하거나 상기 단계를 거쳐 획득한 발아유식물로부터 1~2mm 크기의 자엽을 절취하여 크린벤치상에서 아가 5~10g/L, IAA 1~3mg/L, 키네틴 5~15mg/L, 수크로스 20~40g/L를 함유한 pH 5.5~6.0의 MS고체배지에 치상하고 배양하여 캘러스와 엽아가 혼화된 신초단계의 유식물을 배양함을 특징으로 하는 고려인삼종자의 청정육성법.