KR101071154B1 - 산조인 추출물을 포함하는 항 스트레스 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
산조인 추출물을 포함하는 항 스트레스 조성물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 산조인 추출물 100 중량부에 대하여, 지황 추출물 30 내지 50 중량부, 당귀 추출물 30 내지 50 중량부 및 울금 추출물 10 내지 30 중량부를 혼합하는 단계, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50시간 동안 추출하는 단계 및 35내지 45℃의 수조에서 감압 농축하여 복합 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 항 스트레스 조성물의 제조방법 및 이에 따른 항 스트레스 조성물을 제공한다.
Description
본 발명은 산조인 추출물을 포함하는 항 스트레스 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
산조인(酸棗仁)은 산대추(일명: 멧대추) (Zizyphus vulgaris Lamarck var. spinosus Bunge)의 씨앗을 의미하며, 산대추는 국내에서 일반적으로 재배 및 생산되는 대추(Zizyphus vulgaris Lamarck var. inermis Bunge)와 그 종류 및 효능에는 차이가 있다. 산대추는 낙엽관목으로서 키는 2 내지 4 m 정도로 자라며 어린 가지는 녹색이고 가지에는 바늘모양과 반곡형(反曲形)의 가시가 대생 (對生)하며 잎은 호생이며 난형이고 잔거치가 있으며 윤채를 띤다. 대추나무의 잎새와 비슷하나 좀 작다. 5, 6 월에 황록색의 작은 꽃이 되고 과실은 9, 10 월에 성숙한다. 대추와는 달리 이 식물의 종자는 장타원형이며 색은 엷은 적갈색이며 과육이 거의 없고 과실은 얇은 과피를 지니고 전부가 종자로 되어 있으며 과실의 길이는 0.8 내지 1 cm 내외이고 지름은 이보다 더 짧다. 이 식물의 잎은 산조엽(酸棗葉)이라고 하고 뿌리 껍질은 산조근피(酸棗根皮)라 해서 약용으로 사용된다. 특히, 멧대추의 종인(種仁) 은 산조인(酸棗仁)이라 해서 고래로부터 정신과 영역의 명약으로 전해져 내려오고 또 잘 쓰여지고 있다. 산조인은 가을철에 과실을 따서 하루 동안 물에 담그었다가 과육을 제거한 뒤 과실 껍질을 부수어 종인(種仁)을 빼내 햇빛에 말린 것인데 이것을 그대로 약용할 수도 있으며 때로는 초(炒)해서 쓰기도 한다. 산조인의 성분으로는 시클로펩타이드계의 알칼로이드인 산조이닌 (sanjoinine) A, B, D, F 및 G, 마우리틴(mauritine) A, 무크로닌(mucronin) D, 주바닌(jubanine) A, B가 있고, 펩타이드계 알칼로이드로서 산조이닌(sanjoinine), 아포핀(aporphine)계 알칼로이드로서는 지지퍼신(zizyphusine) 등이 있다. 한편 에벨린락톤(ebelinlactone)은 가수분해되어 주주보게닌(jujubogenin)이 생성된다. 주주보게닌은 주주보사이드(jujuboside) A, B 와 더불어 담마란 글리코사이드 (dammarane glycoside)에 속하며 그 작용도 기대되고 있다. 과실에는 플라본 글리코사이드 (flavone glycoside)가 0.06% 함유되며 0.35%의 쿠마린 유도체 (coumarin derivatives)도 들어 있다. 기타 성분으로 베툴산 베툴린 (betulic acid betulin), 스피노신-6-p-쿠마릴 스피노신 (spinosin-6-pcoumaryl spinosin), 6-페룰로일 스피노신 (6-feruloyl spinosin) 등이 함유되어 있어 그 성분의 다양성이 엿보인다. 중국의 고전인 본초강목에는 열매에서 얻어지는 종인은 신경강장제로 쓰이며 실면(失眠)을 고치고 위에도 좋은 약효를 제공할 뿐 아니라 진정약으로서의 성과를 지닌다고 하였다. 또 종인의 생품 (生品)은 간장의 강화약에 쓰이며 또한 보담 (補膽)의 효과도 있다고 했다. 따라서 불면노번은 물론이고 신경과민에도 좋은 진정효과를 지닌다고 하여, 산조인은 항 스트레스 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명은 스트레스 완화 작용이 있는 산조인을 포함하는 항 스트레스 조성물 및 그 제조방법을 제공한다.
본 발명은 산조인 추출물 100 중량부에 대하여, 지황 추출물 30 내지 50 중량부, 당귀 추출물 30 내지 50 중량부 및 울금 추출물 10 내지 30 중량부를 혼합하는 단계, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50시간 동안 추출하는 단계 및 35내지 45℃의 수조에서 감압 농축하여 복합 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 항 스트레스 조성물의 제조방법을 개시한다.
본 발명에 있어서, 산조인 추출물은 산조인과 미강을 1:1로 혼합하여 95 내지 100℃에서 20 내지 40분 간 교반 가열하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다.
본 발명에 있어서, 지황 추출물은 지황 100 중량부에 대하여, 재강 100 중량부 및 꿀 25 중량부를 혼합하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 발효시킨 후, 20 내지 40 분간 증숙하고, 냉각 후 50 내지 70℃에서 4 내지 6시간 동안 열풍 건조하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다.
본 발명에 있어서, 당귀 추출물은 당귀와 미강을 1:1로 혼합하여 95 내지 100℃에서 20 내지 40분 간 교반 가열하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다.
본 발명에 있어서, 울금 추출물은 울금 100 중량부에 대하여, 재강 100 중량부 및 꿀 25 중량부를 혼합하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 발효시킨 후, 20 내지 40 분간 증숙하고, 냉각 후 50 내지 70℃에서 4 내지 6시간 동안 열풍 건조하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다.
본 발명에 따르면, 식물성 항산화물질인 페놀성 화합물의 추출율이 현저히 높은, 뛰어난 면역 활성과 항산화 효과를 갖는 조성물을 제공하여, 스트레스로 인한 정신적 불안 감정 해소에 도움이 되는 다양한 형태의 식품 가공이 가능해진다. 또한, 본 발명의 조성물은 심신의 안정을 이루어 소화기 기능의 활성과 숙면에 도움을 주어 근본적인 스트레스 해소에 도움을 준다.
본 발명에 따른 항 스트레스 조성물의 제조 방법은, 산조인 추출물 100 중량부에 대하여, 지황 추출물 30 내지 50 중량부, 당귀 추출물 30 내지 50 중량부 및 울금 추출물 10 내지 30 중량부를 혼합하는 단계, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50시간 동안 추출하는 단계 및 35내지 45℃의 수조에서 감압 농축하여 복합 추출물을 수득하는 단계를 포함한다.
상기 산조인 추출물은 산조인과 미강을 1:1로 혼합하여 95 내지 100℃에서 20 내지 40분 간 교반 가열하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동 안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다. 이하, 본 명세서에서, 상기와 같은 방법으로 추출물을 수득하는 방법을 초법이라 한다.
상기 지황 추출물은 지황 100 중량부에 대하여, 재강 100 중량부 및 꿀 25 중량부를 혼합하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 발효시킨 후, 20 내지 40 분간 증숙하고, 냉각 후 50 내지 70℃에서 4 내지 6시간 동안 열풍 건조하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다. 이하, 본 명세서에서 상기와 같은 방법으로 추출물을 수득하는 방법을 재강법이라 한다.
상기 당귀 추출물은 상기 초법에 따라, 당귀와 미강을 1:1로 혼합하여 95 내지 100℃에서 20 내지 40분 간 교반 가열하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다.
상기 울금 추출물은 상기 재강법에 따라, 울금 100 중량부에 대하여, 재강 100 중량부 및 꿀 25 중량부를 혼합하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 발효시킨 후, 20 내지 40 분간 증숙하고, 냉각 후 50 내지 70℃에서 4 내지 6시간 동안 열풍 건조하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득한다.
상기 추출 용매로는 정제수 또는 에탄올을 사용할 수 있다.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다.
실시예
산조인 추출물 제조
산조인과 미강(쌀겨)을 동량으로 혼합하여 95 내지100℃에서 30분간 교반 한다. 혼합물을30분간 침수하고, 실온에서 48시간 추출한 후, 40℃ 수조에서 감압 농축하여 동결 건조물을 제조한다.
지황 추출물 제조
지황:재강:꿀을 1:1:0.25 비율로 혼합하여 실온에서 48시간 발효시킨다. 발효 후 30분간 증숙시켜 냉각하고 다시 60℃에서 5시간 동안 열풍 건조 시킨다. 이어서 사기 혼합물을 30분간 침수시키고 실온에서 48시간 추출한 후, 40℃ 수조에서 감압 농축하여 동결 건조물을 제조한다.
당귀 추출물 제조
산조인 대신 당귀를 사용하는 것을 제외하고는 상기 산조인 추출물 제조방법과 동일한 방법으로 당귀 추출물을 제조한다.
울금
추출물 제조
지황 대신 울금을 사용하는 것을 제외하고는 상기 지황 추출물 제조방법과 동일한 방법으로 울금 추출물을 제조한다.
복합 추출물 제조
상기 산조인 추출물:지황 추출물:당귀 추출물:울금 추출물을 50%:20%: 20%:10% 비율로 혼합한 후, 48시간 추출하고, 감압 농축하여 동결 건조물을 제조한다.
상기 복합 추출물을 포함하는 항 스트레스 조성물의 항산화 활성 성분 확인시험, 면역 활성 측정 시험, 스트레스 기능 시험을 수행하였다. 항산화 활성 성분 확인을 위하여, 총 폴리페놀 함량과 DPPH 측정을 하였다. 면역 활성 측정을 위하여, 대식세포로 산화질소 저해능 및 세포독성 검증하였다. 스트레스 기능 검정을 위하여, 스트레스 부과 래트의 강제 수영 검사를 수행하였다.
총 폴리페놀 함량 측정
총 폴리페놀 함량 측정을 위해 폴린-시오칼토(Folin-Ciocalteu's)법을 이용하여 측정하였다. 복합 추출물 용액 1mL에 1N 폴린-시오칼토 페놀 시약(Folin-Ciocalteau's phenol reagent) 2mL를 넣고 혼합하여 실온에서 5분간 반응시키고, 반응 용액에 35% Na2CO3 2mL를 넣고 실온에서 30분간 정치한 후 750nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도는 갈산(gallic acid)을 이용하여 작성된 표준곡선을 이용하여 검량선을 작성하여 총 페놀 함량을 계산하였다. 표 1에 산조인, 지황, 당 귀, 울금, 복합 추출물에 있어서, 무처리의 경우와 초법 및 재강법에 의한 추출법으로 수득한 경우의 총 폴리페놀 함량을 나타내었다.
| 시료 | 무처리 ( mg/g ) |
초법 ( mg/g ) |
재강법 ( mg/g ) |
| 산조인 | 107 | 207 | 120 |
| 지황 | 23 | 11 | 53 |
| 당귀 | 57 | 52 | 117 |
| 울금 | 19 | 28 | 58 |
| 복합제 | 53 | 75 | |
표 1을 참조하면, 산조인은 초법에 의한 경우, 지황, 당귀, 울금은 재강법에 의한 경우, 복합제는 법제한 추출물에서 항산화 성분인 총 폴리페놀 함량이 향상되었음을 알 수 있었다.
DPPH
측정
항산화도를 측정하기 위해 전자공여능을 블로이드(Bloid) 방법으로 측정하였다. 각 추출시료를 에탄올에 용해시킨 후 시료 2.5mL에 300μM DPPH 용액 1mL를 가한 후 볼텍스 믹서(voltex mixer)로 10초간 진탕하고 10분간 방치 후 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료첨가구와 무첨가구의 흡광도 차이를 백분율(%)로 나타내었다.
전자공여능(%) = 〔1-(A-C)/B〕× 100
A: 시료 첨가구의 흡광도
B: 무 첨가구의 흡광도
C: 시료 자체의 흡광도
전자공여능이 증가할수록 항산화 효과가 증가되며, 상기 각 경우의 전자공여능(%)을 하기 표 2에 나타내었다.
| 시료 | 무처리 (%) | 초법 (%) | 재강법 (%) |
| 산조인 | 80.57 | 86.15 | 89.44 |
| 지황 | 82.86 | 72.45 | 88.55 |
| 당귀 | 77.71 | 96.88 | 90.8 |
| 울금 | 62.69 | 77.37 | 88.39 |
| 복합제 | 73.7 | 91.9 | |
표 2를 참조하면, 산조인, 지황 및 울금은 재강법에 의한 경우, 당귀는 초법에 의한 경우, 복합제는 법제한 추출물에서 항산화도가 더 많이 증가함을 확인할 수 있었다. 이는 법제에 의해 항산화도가 향상되었음을 나타낸다.
세포독성 및 증식 측정
MTT법을 이용하여 추출물에 대한 세포 독성 및 증식을 측정하였으며 Mosmann 방법을 변형시켜 측정하였다.
96-웰 플레이트(well-plate)의 각 웰(well)에 대식세포 Raw 264.7을 1×105를 100μL씩 분주한 후 한약 추출물 시료를 50μL(1μg/ml)씩 혼합하여 37℃에서 48시간 배양하고 MTT시약을 15μL를 넣고 37℃에서 4시간 배양한 후 거품이 안 나게 피펫팅한 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
하기 표 3에 MTT 분석 결과를 나타내었다.
| 시료 | 무처리 | 초법 | 재강법 |
| 대조군 | 0.4200 | ||
| 산조인 | 0.4403 | 0.6343 | 0.4172 |
| 지황 | 0.4730 | 0.4453 | 0.4042 |
| 당귀 | 0.5226 | 0.4245 | 0.4351 |
| 울금 | 0.4637 | 0.4492 | 0.4563 |
| 복합제 | 0.5026 | 0.4954 | |
표 3을 참조하면, 대조군(Control)에 비해 무처리 및 법제한 추출물에서 높은 세포 증식이 나타나 세포 독성이 없을 뿐 아니라 면역 활성이 증가됨을 알 수 있었다.
산화질소
저해능
측정
산화질소(NO)를 측정하기 위해 96-웰 플레이트(well plate)의 각 웰(well)에 대식세포 Raw 264.7을 5×106로 조제하여 100μL씩 분주하고 추출물 시료를 50μL(1μg/mL)씩 혼합하여 37℃에서 48시간 배양하고 상층액 100μL를 취해서 각 웰에 그레스 시약(Gress reagent) 50μL씩 혼합하여 실온에서 10분 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
산화질소(NO)는 자유 라디칼(Free radical) 중의 하나로, 산소나 SOD(superoxide)에 의해 안정한 산화질소(nitrogen oxide)로 전환된다. 대식세포는 항원의 침입 시 면역반응으로 침입한 항원을 잡아먹는 식세포 작용을 하는데, 이 때 대식세포 활성화될 때 분비되는 과산화물의 일종인 NO가 분비된다. 하기 표 4에 NO 분석 결과를 나타내었다.
| 결과시료 | 무처리 | 초법 | 재강법 |
| Control | 0.1723 | ||
| 산조인 | 0.1789 | 0.2206 | 0.1725 |
| 지황 | 0.1859 | 0.2137 | 0.1780 |
| 당귀 | 0.1878 | 0.1728 | 0.1773 |
| 울금 | 0.1882 | 0.1770 | 0.1718 |
| 복합제 | 0.1724 | 0.1765 | |
표 4를 참조하면, 각 시료 추출물의 NO 분비능을 측정한 결과 모두 대조군(Control)에 비해 생성이 높아짐을 알 수 있었다.
스트레스 부과
래트의
강제 수영
실험동물은 체중 200g 좌우의 웅성 Sprague Dawley 계 수컷 흰쥐로 각 군당 8마리씩 나눠 28일간 만성 스트레스를 주었으며 음수에 각 시료를 100mg/kg 배합하여 28일간 투여하였다. 높이 40cm, 지름이 20cm의 투명한 아크릴 원통형 수조에 25℃의 물에 흰쥐의 꼬리가 바닥에 닿지 않을 정도의 물 높이에 강제로 빠뜨린 다음 10분간 있게 하였다. 처음 수분간은 심한 저항을 보이나 시간이 흐를수록 점점 부동자세를 보이는 시간이 늘어난다. 1차 강제수영 일주일 후 2차 강제수영을 시행했으며 같은 조건에서 5분간 수조에 있게 하였다. 2차 시행 시 흰 쥐는 1차 시행 시보다 더 많은 시간 동안 부동 상태를 보인다.
도 1은 각 시료를 투여한 래트의 강제 수영 시험에서의 부동시간을 나타낸 그래프이다.
도 1을 참조하면, 본 발명의 항 스트레스 조성물은 우울 및 스트레스로 인한 증상 지표인 부동시간을 감소시키며 이는 본 발명에 따른 조성물이 스트레스 완화에 도움을 주었음을 나타낸다.
도 1은 각 시료를 투여한 래트의 강제 수영 시험에서의 부동시간(immobilization time)을 나타낸 그래프이다.
Claims (8)
- 산조인 추출물 100 중량부에 대하여, 지황 추출물 30 내지 50 중량부, 당귀 추출물 30 내지 50 중량부 및 울금 추출물 10 내지 30 중량부를 혼합하는 단계;추출 용매를 가하여 실온에서 추출하는 단계; 및35내지 45℃의 수조에서 감압 농축하여 복합 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 항 스트레스 조성물의 제조방법.
- 제1항에 있어서,상기 산조인 추출물은 산조인과 미강을 1:1로 혼합하여 95 내지 100℃에서 20 내지 40분 간 교반 가열하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득하는 것을 특징으로 하는 항 스트레스 조성물의 제조방법.
- 제1항에 있어서,상기 지황 추출물은 지황 100 중량부에 대하여, 재강 100 중량부 및 꿀 25 중량부를 혼합하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 발효시킨 후, 20 내지 40 분간 증숙하고, 냉각 후 50 내지 70℃에서 4 내지 6시간 동안 열풍 건조하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득하는 것을 특징으로 하는 항 스트레스 조성물의 제조방법.
- 제1항에 있어서,상기 당귀 추출물은 당귀와 미강을 1:1로 혼합하여 95 내지 100℃에서 20 내지 40분 간 교반 가열하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득하는 것을 특징으로 하는 항 스트레스 조성물의 제조방법.
- 제1항에 있어서,상기 울금 추출물은 울금 100 중량부에 대하여, 재강 100 중량부 및 꿀 25 중량부를 혼합하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 발효시킨 후, 20 내지 40 분간 증숙하고, 냉각 후 50 내지 70℃에서 4 내지 6시간 동안 열풍 건조하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 45 내지 50 시간 동안 추출한 후, 35 내지 45℃ 수조에서 감압 농축하여 수득하는 것을 특징으로 하는 항 스트레스 조성물의 제조방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,상기 추출 용매는 정제수 또는 에탄올인 항 스트레스 조성물의 제조방법.
- 산조인 추출물 100 중량부에 대하여, 지황 추출물 30 내지 50 중량부, 당귀 추출물 30 내지 50 중량부 및 울금 추출물 10 내지 30 중량부를 혼합하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 추출한 후, 35 내지 45℃의 수조에서 감압 농축하여 수득한 복합 추출물을 포함하는 항 스트레스 조성물.
- 산조인 100 중량부에 대하여, 지황 30 내지 50 중량부, 당귀 30 내지 50 중량부 및 울금 10 내지 30 중량부를 혼합하고, 추출 용매를 가하여 실온에서 추출한 후, 35 내지 45℃의 수조에서 감압 농축하여 수득한 추출물을 포함하는 항 스트레스 조성물.
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| KR20230079692A (ko) | 2021-11-29 | 2023-06-07 | 농업회사법인 주식회사 아그로스 | 산조인을 주원료로 하는 한방혼합 추출물 및 그 제조방법과 이를 이용한 한방차 및 그 제조방법 |
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| 논문;J. OF ORIENTAL NEUROPSYCHIATRY |
| 논문;KOREAN J. ORIENTAL PHYSIOLOGY AND PATHOLOGY |
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