KR100946466B1

KR100946466B1 - 엔도페록시드 구조를 갖는 신규 구조의1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난베타체 화합물을 유효성분으로 함유하는 톡소플라즈마증의예방 및 치료용 조성물

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Publication number: KR100946466B1
Application number: KR1020070007511A
Authority: KR
Inventors: 박현; 김윤철; 강경화; 김혜숙; 유우스케 와타야; 마사키 카마타
Original assignee: 원광대학교산학협력단
Priority date: 2007-01-24
Filing date: 2007-01-24
Publication date: 2010-03-10
Also published as: KR20080069818A

Abstract

본 발명은 톡소포자충 억제 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 엔도페록시드(endoperoxide) 구조를 갖는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체(1,5-diphenyl-8-methyl-6,7-dioxa-bicyclo[3.2.2]nonane)화합물은 콕시디움, 즉 톡소포자충의 증식에 뛰어난 억제 효과를 나타내므로 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체, 엔도페록시드, 톡소포자충, 톡소플라즈마증

Description

엔도페록시드 구조를 갖는 신규 구조의 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 유효성분으로 함유하는 톡소플라즈마증의 예방 및 치료용 조성물 {A composition comprising 1,5-diphenyl-8-methyl-6,7-dioxa-bicyclo[3.2.2]nonane having endoperoxide ring for preventing and treating toxoplasmosis}

도 1은 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물이 생체 내에서 톡소포자충의 증식 억제를 나타낸 도이다.

본 발명은 항톡소포자충 활성을 갖는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 유효성분으로 함유하는 톡소플라즈마증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

콕시디움(coccidium)에 의해 일어나는 콕시디움증(Coccidiosis)은 현재 소, 양, 토끼 및 가금에 문제를 일으키는 원충성 질병 중 대표적인 질병으로 특히 가금 에 치명적인 손상을 유발한다. 콕시디움증은 치료 및 예방제로 항생제를 주로 사용하여 왔으나 그 치료 효율이 비교적 낮은데도 불구하고 항생제 내성균이 출현하였으며, 잔류독성 문제도 발생하였다.

한편, 1998년도에 말라리아 및 크립토스포리디움(Cryptosporidium)에 대한 전체 유전자가 밝혀지면서 원충이 미생물과는 많이 다른 특이구조가 존재한다는 것이 알려졌고, 이러한 원충의 성장, 분열 등에 대한 생물학 정보와 게놈 시퀀스(genome sequence)를 이용하여 첨복포자충류 질병에 효과적인 약제 개발이 세계 각국에서 시도되고 있다(Nature 및 GeneBank, 2002, 2004).

톡소포자충은 콕시디아아강(coccidia亞綱, subclass of coccidia)에 속하는 첨복포자충이다. 세포내에 기생하는 원충류인 톡소플라즈마(Toxoplasma gondii)는 전 세계적으로 분포하는 인체 및 동물의 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 원인 원충으로써 니콜 및 만시앙(Nicolle and Manceanx(1909))에 의하여 발견되었고 허치슨(Hutchison(1969)), 프랭클(Frenkel(1970))에 의하여 생활사가 밝혀졌으며, 우리나라에서는 1965년 돼지에서 분리되었다. 최근 후천성면역면역결핍증(AIDS) 환자에게서 문제가 되고 있는 톡소포자충은 톡소포자충성 뇌염 질환을 일으켜, AIDS 환자의 생존율을 감소시킴이 밝혀졌다(Dedicoat M et al., Cochrane Database Syst Rev ., 19;3:CD005420, 2006 ). 또한 톡소포자충은 임신 중인 포유동물의 태반을 통하여(transplacental irfection) 태아에 감염을 일으키는 선천성 감염의 중요한 원인 중 하나이다(Biesiada G et al., Przegl Lek ., 63(2), pp97-99, 2006). 이러한 임상적인 중요성이 있음에도 불구하고 지금까지 항톡소포자충제로 사용되는 설파제 나 피리메타민(Pyrimethamine) 등에 대한 내성은 계속 증가하고 있고, 감염형원충(bradyzoite) 단계의 톡소포자충에 대한 효과는 별로 없다. 그러므로 톡소포자충의 내성기전을 이해하고 내성을 일으키지 않는 구조의 신종 항톡소포자충제의 개발이 절실히 요구되고 있다. 따라서 신약은 살충 효과뿐만 아니라 사람과 동물의 세포에 독성 및 내성 등의 부작용이 없는 안전한 약물이어야 한다. 항생제는 효능이 우수하여도 시간이 지날수록 내성이 생기는데, 천연약물을 이용한다면 충분히 이런 문제를 해결할 수 있으리라 예상된다. 그 이유는 천연물은 현재까지 알려지지 않은 새로운 성분이며, 개개의 작용이 다양한 단일성분의 혼합물이므로 복합물 상호간의 약리 작용으로 내성 등의 부작용을 감소할 것이라고 사료된다.

최근 의약품의 연구 동향은 위와 같은 약제가 가지는 여러 가지 독성 및 내성 등의 심각한 부작용이 우려되면서, 세계적으로 천연물로부터의 의약품 개발에 관한 연구가 활발히 추진되고 있다. 이것들이 질병치료에 효과적으로 이용되기 위해서는 치료 용량이 숙주에게는 독성을 주지 않고, 감염원에게는 살충효과가 매우 커야 하나 독성은 적어야 하며, 내성 기생충에 유효한 새로운 항생물질을 연구 개발하고, 병용투여와 같은 방법으로 내성 기생충의 출현 및 독성을 감소시키기 위한 연구가 요구되고 있다.

이에 본 발명자는 천연약품자원으로부터 톡소포자충 억제 효과를 갖는 물질을 확인하던 중 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물이 톡소포자충 억제 효과가 뛰어남을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 항톡소포자충 활성을 갖는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 유효성분으로 함유하는 톡소플라즈마증의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 구조식 (A)로 표기되는 신규 구조의 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 입체이성질체를 제공한다:

(A)

상기 구조식 (A)로 표기되는 본 발명의 화합물은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.

염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또 는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산 (maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산 (citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산 (glycollic acid), 글루콘산 (gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산 (glutaric acid), 글루쿠론산 (glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

상기의 구조식 (A)의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 구조식 (A)의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로 마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트 (메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트 (토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

또한 상기의 구조식 (A)의 화합물은 8(R), 8(S) 메틸형의 이성질체형태를 포함하는 다양한 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 구조식 (A)의 화합물의 모든 기하 이성체, 입체 이성질체, 광학 이성질체 및 R 또는 S형 입체 이성질체, 라세믹체 및 이들의 혼합물도 본 발명의 범주내에 포함되는 것으로 한다. 본 발명은 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함하며, 이러한 이성질체의 제조(예를 들어, 비대칭적 합성법) 및 분리는(예를 들어, 분별결정 및 크로마토그래피법) 당업계에서 공지된 방법, 또는 본원에 교시된 방법 즉, 공지된 방법을 공지의 방식으로 채택함으로써 용이하게 수행될 수 있다.

이하, 본 발명의 화합물을 합성하는 방법을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명의 다른 목적은 상기 구조식 (A) 화합물의 제조방법을 제공하는 것으로, 하기의 반응식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만, 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

하기의 반응식은 본 발명의 대표적인 화합물의 제조방법을 제조 단계별로 나타내는 것으로 본 발명의 여러 화합물은 반응식 1의 합성과정에서 사용되는 시약, 용매 및 반응 순서를 바꾸는 등의 작은 변경으로 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물에 대한 상세한 합성 과정은 실시예에 설명되어 있다.

반응식 (1)은 상용 화합물 또는 기존의 알려진 방법에 의하여 합성된 화합물을 제조하기 위한 제조과정을 나타낸다.

제 1단계에서는 2,6-디페닐-1,6-옥타디엔의 E체(1) 및 Z체(2)에 디사이클로헥실카보디이미드, 디메틸아미노피리딘, 디클로로메탄 또는 무수 아세토니트릴 등의 용매제를 첨가하여 용해시켜 산소를 주입한 후, 크세논 램프를 이용하여 파장을 조사할 수 있다. 제 2단계에서는 용매를 감압농축하여 제거한 후, 조생성물을 얻어 TLC로 분리하여 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 (3) 및 입체이성체인 화합물 (4)를 얻을 수 있다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매의 존재 하에서 수행하며, 이러한 목적으로 사용될 수 있는 용매의 예로는 디클로로메탄, 클로로포름, 디메틸에테르, 테트라하이드로퓨란, 메탄올 또는 에탄올등의 용매를 사용하여 반응을 수행할 수 있다. 반응 온도는 특별히 제한되지는 않으나, 일반적으로 냉온 내지 상온에서 수행하고, 바람직하게는 상온에서 수행한다.

상기 제조방법으로 얻어진 구조식 (A)의 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 항톡소포자충 활성을 나타내어 톡소플라즈마증의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 항톡소플라즈마증 활성을 갖는 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

또한, 상기 톡소포자충의 대상 동물은 돼지, 소, 염소 등의 포유류; 잉어, 금붕어 등의 어류; 및 꿩, 닭, 오리, 칠면조 등의 가금류를 포함한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 약학조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되 며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제를 예로 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 및 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 및 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 및 올리브 오일과 같은 식물성 기름 및 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지 및 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물 또는 화합물은 1일 0.0001 내지 100㎎/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합 뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 약학조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 및 뇌혈관내 (Intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 1,5- 디페닐 -8- 메틸 -6,7- 디옥사 - 바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물의 합성

파이렉스(Pyrex)제 광조사관 (길이 190 mm, 직경 30 mm)에 2,6-디페닐-1,6-옥타디엔의 E체(1) 및 Z체(2)의 혼합물 52.5 mg (0.20 mmol)과 2,4,6-트리페닐피릴리 움테트라플루오르보레이트 15.8 mg (0.04 mmol), 디페닐 92.5 mg (0.60 mmol)을 넣고, 무수 아세토니트릴 20 ml에 용해시켰다. 이 용액에 산소를 5분 동안 주입한 다음, 계속해서 산소를 주입하면서 2 kw 크세논 램프(Xenon lamp)를 이용하여 360 nm이상의 장파장 광을 8분 동안 조사하였다. 반응 종료 후 용매를 감압농축하여 제거하여 조생성물을 얻었다. 이것을 Prep-TLC (전개용매: 디클로로메탄-헥산, 1:1)로 분리하여 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체(14.7 mg, 수율 25%, 화합물 3)과 그 입체이성질체인 화합물 4를 8.2 mg (수율 14%)을 얻었다. 화합물 3의 대량 합성은 본 조작을 10-20회 반복하였으며, 얻어진 조생성물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (용출용매: 디클로로메탄-헥산, 1:20 → 1:5)를 수행하여 분리하였고, 하기 물성치를 갖는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 얻어, 실험예의 시료로 사용하였다.

m.p. 64-66.5℃;

¹H-NMR (CDCl₃): d ppm 0.69 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.80-2.73 (m, 9H), 7.13-7.49 (m, 10H);

¹³C-NMR (CDCl₃): d ppm 20.51 (q, 1C), 21.13 (t, 1C), 32.03 (d, 1C), 39.67 (t, 1C), 39.98 (t, 1C), 42.18 (t, 1C), 83.09 (s, 1C), 85.41 (s, 1C), 124.29 (d, 2C), 124.96 (d, 2C), 126.28 (d, 1C), 126.98 (d, 1C), 127.81 (d, 2C), 128.21 (d, 2C), 144.49 (s, 1C), 146.78 (s, 1C).

참고예 1. 톡소포자충( Toxoplasma gondii )의 준비

항톡소포자충 실험에 사용된 톡소포자충(RH strain of Toxoplasma gondii, ATCC, No.50174)의 영양형(tachyzoite)은 KP100 CD-1 암컷 마우스(Female mouse)에서 얻었다. 1× 10⁶개의 톡소포자충의 영양형을 4주령 KP100 CD-1 암컷 마우스의 복강에 주입한 뒤, 4일 후 마우스를 경추탈골 사망시켰다. 그리고 2%의 우태혈청(Fetal bovin serum; 이하FBS, GIBCO, Lot No. 1315128)를 함유한 배지(RPMI 1640 medium; GIBCO, Lot No. 1346255) 5㎖을 복강에 주입하고 1분 30초 동안 가볍게 마사지 한 후, 주입한 복수액을 10㎖짜리 주사기로 전부 뽑아내고 500RPM 에서 5분간 1차 원심 분리하였다. 그 상등액을 새로운 50㎖ 튜브에 옮겨 500RPM 에서 5분간 2차 원심 분리 한 후, 다시 그 상등액을 새로운 50㎖ 튜브에 옮겨서 2400RPM에서 10분간 3차 원심 분리 하였다. 3차 원심 분리로 얻은 비교적 순수한 톡소포자충의 영양형을 10%의 FBS를 함유한 배지(RPMI 1640)에 재부유시키고 4℃에서 5 내지 6일간 보관하여 사용하였다. 이 중 일부는 생체 내(in vivo) 및 실험관 내(in vitro) 실험에 사용하였고 일부는 또 다시 새로운 KP100 CD-1 마우스에 주입하여 유지하였다(Young-ha Lee et al., The korean journal of parasitology, 42(4), pp185-193, 2004).

참고예 2. Hela 세포 배양

HeLa세포는 한국세포주은행(10002)에서 구매하였고 10% FBS가 함유된 RPMI 1640 배지를 사용하여 37℃의 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.

실험예 1. 1,5- 디페닐 -8- 메틸 -6,7- 디옥사 - 바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물의 항톡소포자충 활성 측정

상기 참고예 2의 HeLa 세포(한국세포주은행, 10002)을 10%의 FBS가 함유된 RPMI 1640 배지로 96 웰에 6*10³/㎖되게 접종하고, 37℃의 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 6시간 후, 2%의 FBS가 함유된 RPMI 1640 배지로 교환하고, 그로부터 18시간 후, 2%의 FBS가 함유된 RPMI 1640 배지로 교환 및 톡소포자충의 영양형을 Hela 세포수의 5배되게 처리하였다. 또한 동시에 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 농도별로 처리하고, 이때 대조군으로서 스피라마이신(spiramycin, SIGMA, China)을 사용하였다. 그 후 24시간 동안 배양한 뒤, 배지를 교환함과 동시에 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물과 스피라마이신(spiramycin, 시그마사, 중국)을 각각 처리하고 24시간 뒤, 세포증식분석(cell titer 96AQ_ueous one solution cell proliferation assay(PROMEGA, Lot No.: 22257902))을 실시하였고, 1시간 30분 후, 흡광광도계로 490㎚에서 흡광도(absorbance)를 측정하여 시그모이달 커브(sigmoidal curve)를 작성한 후, 톡소포자충의 증식을 억제하는 농도(EC₅₀; 50% 세포증식억제농도)를 산 출하였고, 하기 수학식 1을 이용하여 약효판정계수 선택성(selectivity)을 구하였다(Hyun Park et al ., Biological & pharmaceutical bulletin 26(11) 1623-1624, 2003).

선택성(selectivity)

= Hela 세포에 대한 각 시료의 EC₅₀값/ 톡소플라즈마(T.gondii)에 대한 각 시료의 EC₅₀값

실험결과, 하기 표 1에서 나타나는 바와 같이, 세포증식분석(cell titer 96AQ_ueous one solution cell proliferation assay)으로 선택성을 조사한 결과, 본 발명의 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물은 Hela 세포에서 현재 사용 중인 항톡소포자충 약물인 스피라마이신(spiramycin) 보다 1.64배의 선택성을 보임을 확인할 수 있었다.

	Hela 세포에서의 EC₅₀(㎍/㎖)	톡소플라즈마에서의 EC₅₀(㎍/㎖)	선택성
1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체	53.4	13.1	4.1
스피라마이신	766	305	2.5

실험예 2. 항톡소포자충 활성의 생체 내( in vivo ) 실험

상기 참고예 2에서 수득한 톡소포자충의 영양형 1× 10⁵개를 4주령 KP100 CD-1 암컷 마우스 복강에 주입하였다. 주입 2시간 후부터 실시예 1에서 수득한 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 존대로 경구 투입하였다. 300㎎/㎏/day로 연속 4일간 하루에 한 번씩 경구 투입하고, 4일째 마우스를 경추탈골 사망시키고, 참고예 1의 방법과 동일하게 3차 원심 분리시켜 복강 내의 비교적 순수한 톡소포자충의 영양형을 얻어 계량해 음성대조군으로 사용하였다.

양성대조군으로는 현재 대표적으로 톡소플라즈마증 치료에 병용하여 사용하는 술파디아제(Sulfadiazine sodium salt, SIGMA, Germany)와 피리메타민(Pyrimethamine, SIGMA, Germany)을 이용하여 술파디아제50㎎/㎏/day, 피리메타민 12.5㎎/㎏/day, 술파디아제50㎎/㎏/day + 피리메타민 12.5㎎/㎏/day을 처리하였고 각 처리구마다 6 마리의 마우스를 사용하였다.

상기 실험 결과, 본 발명의 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물은 생체 내에서 60.71%의 억제율을 나타냄을 확인하였다. 양성대조군 1은 97.13%, 양성대조군 2는 57.68%, 양성대조군 은 99.77%의 억제율을 나타냄을 확인할 수 있었다 (도 1 참조).

하기에 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 1의 화합물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 1의 화합물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 1의 화합물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 1의 화합물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 1의 화합물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

상기에 언급한 바와 같이, 본 발명의 1,5-디페닐-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물은 톡소포자충의 증식에 뛰어난 억제 효과를 나타내므로 톡소플라즈마증 예방 및 치료용 약학조성물로 이용될 수 있다.

Claims

하기 구조식 (A)로 표기되는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 입체이성질체:

(A)
제 1항의 구조식 (A)로 표기되는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 유효성분으로 함유하는 톡소플라즈마증 예방 및 치료용 약학조성물.
삭제
제 1항의 구조식 (A)로 표기되는 1,5-디페닐-8-메틸-6,7-디옥사-바이시클로[3.2.2]노난 베타체 화합물을 유효성분으로 함유하는 톡소플라즈마증 예방 및 치료를 위한 항원충보조제.