KR100937489B1 - 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법 - Google Patents

비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR100937489B1
KR100937489B1 KR1020070102055A KR20070102055A KR100937489B1 KR 100937489 B1 KR100937489 B1 KR 100937489B1 KR 1020070102055 A KR1020070102055 A KR 1020070102055A KR 20070102055 A KR20070102055 A KR 20070102055A KR 100937489 B1 KR100937489 B1 KR 100937489B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
pullulan
busy
producing
solution
culture
Prior art date
Application number
KR1020070102055A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20090036797A (ko
Inventor
신달하
김진목
김영식
임정대
Original Assignee
신달하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 신달하 filed Critical 신달하
Priority to KR1020070102055A priority Critical patent/KR100937489B1/ko
Publication of KR20090036797A publication Critical patent/KR20090036797A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100937489B1 publication Critical patent/KR100937489B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C12P19/10—Pullulan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0018—Pullulan, i.e. (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-glucan; Derivatives thereof

Abstract

본 발명은 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 비지를 분쇄시킨 용액을 고압멸균하고, 가수분해효소를 첨가하고 발효시켜 생산된 비지 가수분해물 용액을 준비하는 단계; 풀루란 생산균주를 비지 가수분해물 용액이 함유된 제1배지에 접종하고, 배양하여 풀루란을 생산하는 미생물을 준비하는 단계; 풀루란을 생산하는 미생물을 비지 가수분해물 용액이 함유된 제2배지에서 배양하여 풀루란 배양액을 생산하는 단계; 풀루란 배양액을 원심 분리하여 얻어진 상등액을 유기용매와 혼합하여 풀루란을 추출하고 침전시키는 단계; 침전된 풀루란을 원심 분리하여 얻어진 침전물을 증류수에 용해시킨 후 여과하는 단계; 및 여과된 풀루란에 유기용매를 가하여 얻어진 풀루란을 침전시키고, 진공여과 및 동결건조하는 단계를 포함한다.
본 발명에 의하면, 식품가공부산물에서 발생된 비지를 발효시켜 미생물의 영양원으로 사용하여 풀루란을 생산하므로 보다 우수한 생산성을 얻을 수 있다는 장점이 있다.
풀루란, 비지, 발효물, 탄소원, 질소원

Description

비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법{Preparation method of pullulan using fermented material of soybean curd residue}
본 발명은 식품가공부산물에서 발생된 물질을 이용한 풀루란의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 식품가공부산물에서 발생되는 물질을 발효시켜 미생물의 영양원으로 이용하여 고분자 중합체인 풀루란을 제조하는 방법에 관한 것이다.
풀루란은 글루코스 삼량체인 말토트리오스를 반복단위로 하는 고분자 선상 중합체로서, α-1,6 결합에 의해 반복 결합하여 상기 삼량체화를 이룬다. 상기 풀루란은 검정색 효모인 pullularia pullulans(일명 aureobasidium pullulans)에 의해 배양 합성된 천연 다당류의 일종이다.
미생물은 성장할 수 있는 조건이 확립이 되면 세포내, 세포벽 또는 그 외에서 상당한 다당류를 생산한다.
세포내에서 생산하는 물질인 다당류는 주로 글리코겐으로 이루어져 있는데 이는 성장하는데 필요한 에너지를 얻는데 중요하다. 또한, 세포벽의 다당류는 세포의 형태를 갖추는데 중요한 물질이다.
근래에 들어서 산업적으로 미생물에 의해서 다당류를 생산하는 기술이 활발하게 진행되고 있다. 이러한 미생물 다당류는 구성하는 종류에 따라서 호모형 다당류, 헤테로형 다당류 등으로 구분을 할 수가 있는데 상기 호모형 다당류는 단일당으로 구성이 되어 있으며, 기본이 되는 당을 세포외로 배출을 한 다음 효소에 의해서 합성이 된다. 이러한 당으로 풀루란, 덱스트린, 커들란 등이 있다.
이 중에서도 풀루란은 중금속 흡착능, 유화안정성, 겔 형성능, 물 흡수능, 접착능, 윤활능 및 필름형성능 등의 다양한 기능을 가지고 있기 때문에 제약, 식품, 화장품 등의 산업에 광범위하게 이용되고 있을 뿐 아니라 항암, 항바이러스 및 면역활성 효능에 의하여 고부가가치 의약용 소재로 개발되어 활용될 수 있는 천연소재이다.
풀루란은 100℃ 미만에서 방사 작업을 하면 유연성이 떨어지며, 수용성이 너무 커지므로 이러한 결점을 보완하기 위하여 유연제를 첨가하는 법, 비수용성인 키토산을 첨가하는 법 또는 풀루란을 요구하는 물성에 맞게 변성작업을 하여 물성이 양호한 복합제를 제조하는 방법 등 다양한 사용방안들이 연구되고 있다.
대부분의 미생물들은 설탕, 물엿, 전분 및 포도당과 같은 탄소원을 이용하여 배양 생산을 하거나 황산암모늄, 염화암모늄 또는 초산암모늄 등의 무기질소나 펩톤, 폐당밀 또는 효모 추출액 등과 같은 유기질소원을 이용하여 배양생산을 하여 얻어진다.
그러나 이와 같은 영양원들을 구입하는 데에는 비용이 많이 들기 때문에 근래에는 식품산업에서 발생하는 부산물을 이용하여 풀루란을 생산하는 방법이 연구 되고 있는데, 질소원으로 활용될 수 있는 간장박이나 탄소원으로 활용될 수 있는 사과박 등의 부산물을 이용한 풀루란 생산방법이 개발되고 있다.
그러나 식품산업에서 대규모 공정으로 대량생산되어 판매되고 있는 과정 중에 생산 공정상 고농도의 당을 포함한 폐기물이 배출되어 활용되지 않고 있는 실정에서 이와 같은 폐기물을 이용하여 부가가치가 높은 미생물을 생산하는 기술에 대한 필요성은 지속적으로 요구되고 있으며, 저비용으로 풀루란의 생산성을 보다 높일 수 있는 방법의 개발이 요구되고 있다.
본 발명은 상술한 필요성에 따라 창출된 것으로서, 식품가공부산물에서 발생되는 비지를 발효시켜 미생물의 영양원으로 이용하여 풀루란을 생산함으로써 보다 높은 생산성을 나타내는 풀루란 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법은 a)비지를 분쇄시킨 용액을 고압멸균하고, 가수분해효소를 첨가하고 발효시켜 생산된 비지 가수분해물 용액을 준비하는 단계; b)풀루란 생산균주를 상기 비지 가수분해물 용액이 함유된 제1배지에 접종하고, 배양하여 풀루란을 생산하는 미생물을 준비하는 단계; c)상기 풀루란을 생산하는 미생물을 상기 비지 가수분해물 용액이 함유된 제2배지에서 배양하여 풀루란 배양액을 생산하는 단계; d)상기 풀루란 배양액을 원심 분리하여 얻어진 상등액을 유기용매와 혼합하여 풀루란을 추출하고 침전시키는 단계; e)상기 침전된 풀루란을 원심 분리하여 얻어진 침전물을 증류수에 용해시킨 후 여과하는 단계; 및 f)상기 여과된 풀루란에 유기용매를 가하여 얻어진 풀루란을 침전시키고, 진공여과 및 동결건조하는 단계를 포함한다.
여기서, 상기 가수분해효소는 아밀라아제, 펩신 및 프로티아제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이고, 상기 비지 100중량부에 대하여 0.1~1중량부로 첨가된 것이 바람직하다.
또한, 상기 제1배지는 상기 비지 가수분해물 용액 0.1~5중량%가 함유되고, 상기 제2배지는 상기 비지 가수분해물 용액 5~60중량%가 함유된 것이 바람직하다.
게다가, 상기 풀루란 생산균주는 아우레오바시디움 풀루란스(Aureobasidium pullulans)인 것이 바람직하다.
또한, 상기 제1배지 또는 제2배지는, 제2인산칼륨(K2HPO4), 황산마그네슘(MgSO4), 황산암모늄(NH4SO4), 염화나트륨(NaCl) 또는 효모 추출물 중에서 선택된 하나 이상의 물질이 더 첨가된 것이 바람직하다.
아울러, 상기 풀루란을 생산하는 미생물은 20~50℃의 배양온도, pH 3~7, 교반속도 150~400rpm 및 배양시간 3~7일의 배양조건하에서 배양되는 것이 바람직하다.
나아가, 상기 유기용매는 이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 메틸 알콜 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유기용매를 혼합한 것이 바람직하다.
상술한 바와 같은 본 발명의 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법은,
첫째, 식품가공부산물인 비지를 폐기하지 않고 미생물의 영양원으로 개발하여 풀루란 제조에 사용함으로써 다양한 활용가치를 가진 풀루란의 생산성을 높일 수 있다.
둘째, 상기 비지는 질소원 및 탄소원으로 활용이 될 수 있는 고효율의 영양원으로 활용할 수 있다.
셋째, 식품가공부산물인 비지를 폐기하지 않고, 고부가가치의 산업에 활용하 므로 환경오염의 원천적인 방지할 수 있다는 장점이 있다.
국내에서 두부를 만드는 콩은 약 20만톤 정도가 되는데 두부를 제조하고 부산물로 버려지는 비지는 콩 중량의 120%가 된다. 비지에는 각종 섬유소물질 외에 단백질, 수용성 및 지용성 물질이 포함되어 있으며 또한 기능성 물질인 이소플라빈, 올리고당, 펩티드 및 사포닌 등이 포함되어 있다.
따라서 두부의 부산물에 포함된 양질의 영양분을 그대로 폐기하는 것은 경제적으로 대단한 손실에 해당되며, 부산물이 폐기되면서 환경오염을 유발할 수 있다는 점을 고려하면 이와 같은 부산물을 재활용하는 기술의 개발은 경제적 이익 창출과 함께 친환경사업으로서 대단히 중요한 의미를 가지고 있다고 볼 수 있다.
비지는 전통식품인 두부 또는 두유를 제조하는 과정에서 대량 생산되는 부산물로 콩 1kg당 4~126.8kg 정도의 부산물이 생산된다. 이와 같은 비지에는 인체의 생리적 기능에 관여하는 중요한 성분이 많이 포함되어 있으며, 그 일반적인 성분으로는 건조물량을 기준으로 할 때, 단백질 24~30중량%, 지방 13~15중량%, 탄수화물 50~60중량% 및 회분 4~5중량%가 포함된다.
이하 첨부된 도면을 참조로 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
따라서 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
이하, 도 1을 참고하여 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법을 설명하도록 한다. 도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법을 나타낸 블록흐름도이다.
도 1을 참고하면, 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법은 a)비지 가수분해물 용액 준비단계(S110), b)풀루란을 생산하는 미생물 준비단계(S120), c)풀루란 배양액 생산단계(130), d)풀루란 추출 및 침전 단계(S140), e)풀루란 여과단계(S150) 및 f)진공여과 및 동결건조단계(S160)를 포함한다.
식품가공 부산물에서 발생되는 비지를 20~90 mesh의 입자단위가 되도록 분쇄를 시킨 용액을 80~150℃에서 고압멸균을 한 후, 가수분해효소를 첨가하여 20~50℃에서 3~7일간 발효를 시켜 비지 가수분해물 용액을 준비한다(S110).
여기서, 상기 가수분해효소는 아밀라아제, 펩신 및 프로티아제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이고, 상기 비지 100중량부에 대하여 0.1~1중량부로 첨가된 것이 바람직하다.
상기 가수분해효소가 상기 비지 100중량부에 대하여 0.1중량부 미만으로 첨가되는 경우 비지의 분해 효율성이 떨어진다는 문제가 있고, 1중량부를 초과하여 첨가되는 경우 상기 가수분해효소의 가격과 대비하여 얻어지는 분해 효율성이 크지 않아 경제적이지 않다는 문제가 있다.
상기 비지 가수분해물 용액이 0.1~5중량% 함유된 제1배지에 풀루란 생산균주를 배지 전체의 3~8중량%가 되도록 접종을 하고, 20~50℃에서 3~5일간 계대배양을 한 후, 4℃에서 보관하여 본 배양에서 풀루란을 생산하는 데 사용될 수 있도록 시드 배양된 풀루란을 생산하는 미생물을 준비한다.(S120).
상기 풀루란 생산균주는 아우레오바시디움 풀루란스를 사용하는 것이 바람직하고, 상기 제1배지에는 제2인산칼륨(K2HPO4), 황산마그네슘(MgSO4), 황산암모늄(NH4SO4), 염화나트륨(NaCl) 또는 효모 추출물 중에서 선택된 하나 이상의 물질을 첨가하는 것이 풀루란 생산균주를 보다 잘 배양시킬 수 있다.
또한, 상기 제1배지는 전체 배지 조성물 100중량부에 대하여 제2인산칼륨(K2HPO4) 0.1~0.5중량부, 황산마그네슘(MgSO4) 0.02~0.07중량부, 황산암모늄(NH4SO4) 0.06~0.12중량부, 염화나트륨(NaCl) 0.05~0.4중량부 및 효모 추출물 0.05~0.2중량부가 포함된 것이 보다 바람직하다.
이어서, 상기 시드 배양된 풀루란을 생산하는 미생물은 제2배지에서 본 배양을 통하여 풀루란 배양액을 생산한다(S130).
상기 제2배지는 전체 배지 조성물 100중량부에 대하여 상기 비지 가수분해물 용액이 5~60중량부로 함유되고, 제2인산칼륨(K2HPO4), 황산마그네슘(MgSO4), 황산암 모늄(NH4SO4), 염화나트륨(NaCl) 또는 효모 추출물 중에서 선택된 하나 이상의 물질이 첨가된 것이 바람직하다.
또한, 상기 풀루란을 생산하는 미생물은 20~50℃의 배양온도, pH 3~7, 교반속도 150~400rpm 및 배양시간 3~7일의 배양조건하에서 배양되는 것이 바람직하다.
상기 풀루란을 생산하는 미생물인 아우레오바시디움 풀루란스는 상기와 같은 배양조건하에서 보다 잘 번식을 하여 풀루란의 생산량을 높일 수 있다.
상기 풀루란 배양액을 원심 분리하여 상등액을 모으고, 이때 발생된 침전물은 버린다. 상기 얻어진 상등액에 1~3배의 비율로 유기용매를 혼합하여 풀루란을 추출하고 침전시킨 후, 3~8℃의 온도에서 1~5일간 정치 보관한다(S140).
상기와 같이 침전된 풀루란을 다시 원심 분리하여 상등액은 버리고 침전물을 모은다. 상기 침전물에 증류수를 가하여 완전히 용해시킨 후에 마이크로필터를 이용하여 여과를 시킨다(S150).
상기 여과에 의해 얻어진 여과액에 다시 상기와 같은 유기용매를 혼합하여 풀루란을 침전시키고, 이어서 침전된 풀루란을 진공여과하고, 진공동결건조시켜서 건조된 풀루란을 얻는다(S160).
여기서, 상기 사용된 유기용매는 이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 메틸 알콜 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유기용매를 혼합한 것이 바람직하다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제 조방법에 있어서, 가수분해물 용액에서 비지 가수분해물의 함유량 및 배양조건에 변화를 준 경우 생산된 풀루란의 생산량을 비교하도록 한다.
실시예 1
식품산업용 가공 부산물에서 발생한 비지를 80mesh로 분쇄하여 얻은 비지 분쇄물 용액을 100℃에서 고압멸균하고, 가수분해효소로 아밀라아제(Junsei, 377A0136) 5g/kg을 첨가하여 30℃에서 3일간 발효를 시켜 비지 가수분해물 용액을 제조하였다.
이어서, 풀루란 생산균주인 아우레오바시디움 풀루란스(Aureobasidium pullulans; ATCC 42023)를 분양받아 제1배지에 5중량%가 되도록 접종을 하고, 30℃에서 4일간 계대배양을 한 후 4℃에서 보관하여 시드 배양된 아우레오바시디움 풀루란스를 준비하였다.
상기 제1배지는 전체 배지 조성물의 0.3중량%가 되도록 상기 비지 가수분해물 용액 3g/ℓ가 함유된 ME배지(Malt extract agar plates)를 사용하였다.
이어서, 상기 시드 배양된 아우레오바시디움 풀루란스 50g/ℓ를 제2배지에 가하고, 배양하여 풀루란 배양액을 제조하였다.
상기 제2배지는 전체 배지 조성물의 10중량%가 되도록 상기 비지 가수분해물 용액 100g/ℓ를 증류수와 혼합하여 사용하였다. 또한, 상기 제2배지에는 1g/ℓ의 효모 추출물(yeast extract; Difco, 268y0001)을 첨가하였다.
배양기(Total volume 7ℓ, Pyrex glass SUS)는 모든 배양조건이 자동 조절되는 배양기를 사용하였는데, 본 배양 시에 배양조건으로 배양온도는 30℃, pH는 6, 교반속도는 200rpm, 배양기간은 4일로 하였다.
상기 풀루란 배양액을 원심 분리하여 침전물은 버리고 상등액을 모았다. 상기 얻어진 상등액의 1.5배의 비율이 되도록 이소프로필 알콜 800㎖/ℓ와 아세톤 700㎖/ℓ를 혼합한 혼합액을 가하여 풀루란을 추출하고 침전시킨 후, 4℃의 온도에서 2일간 정치 보관하였다.
상기 풀루란을 다시 원심 분리하여 상등액은 버리고 침전물을 모았다. 상기 침전물에 증류수를 가하여 완전히 용해를 시킨 후 마이크로필터를 이용하여 여과를 시켰다.
그리고 상기 여과된 여과액의 1.5배가 되도록 이소프로필 알콜 800㎖/ℓ와 아세톤 700㎖/ℓ를 혼합한 혼합액을 가하여 풀루란을 침전시켰다.
이어서, 상기 침전된 풀루란을 진공여과 및 동결건조를 거쳐서 건조된 풀루란을 생산하였다.
그 결과, 하기 표1과 같이 실시예 1에 따라 제조된 풀루란의 생산량은 350g/ℓ이었다.
실시예 2
제2배지에 전체 배지 조성물의 20중량%가 되도록 상기 비지 가수분해물 용액 200g/ℓ를 증류수와 혼합하여 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건하에 풀루란을 생산하였다.
그 결과, 하기 표1과 같이 실시예 2에 따라 제조된 풀루란의 생산량은 363g/ℓ이었다.
실시예 3
제2배지에 전체 배지 조성물의 30중량%가 되도록 상기 비지 가수분해물 용액 300g/ℓ를 증류수와 혼합하여 사용하고, 배양온도는 35℃, pH는 5, 교반속도는 220rpm, 배양시간은 4일로 하여 배양을 한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건하에 풀루란을 생산하였다.
그 결과, 하기 표1과 같이 실시예 3에 따라 제조된 풀루란의 생산량은 383g/ℓ이었다.
실시예 4
제2배지에 전체 배지 조성물의 40중량%가 되도록 상기 비지 가수분해물 용액 400g/ℓ를 증류수와 혼합하여 사용하고, 배양온도는 35℃, pH는 5, 교반속도는 220rpm, 배양시간은 4일로 하여 배양을 한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건하에 풀루란을 생산하였다.
그 결과, 하기 표1과 같이 실시예 4에 따라 제조된 풀루란의 생산량은 410g/ℓ이었다.
실시예 5
제2배지에 전체 배지 조성물의 50중량%가 되도록 상기 비지 가수분해물 용액 500g/ℓ를 증류수와 혼합하여 사용하고, 배양온도는 35℃, pH는 5, 교반속도는 220rpm, 배양시간은 4일로 하여 배양을 한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건하에 풀루란을 생산하였다.
그 결과, 하기 표1과 같이 실시예 5에 따라 제조된 풀루란의 생산량은 388g/ ℓ이었다.
비지 가수분해물 용액 첨가량(g/l) 균주 첨가량 (g/l) 배양시간 (시간) 배양온도 (℃) 풀루란 생산량 (g/l)
실시예 1 100 50 96 30 350
실시예 2 200 50 96 30 363
실시예 3 300 50 96 35 383
실시예 4 400 50 96 35 410
실시예 5 500 50 96 35 388
이상과 같이, 본 발명은 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 본 발명은 이것에 의해 한정되지 않으며 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 본 발명의 기술 사상과 아래에 기재될 특허 청구범위의 균등 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능함은 물론이다.
도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법을 나타낸 블록흐름도이다.

Claims (7)

  1. a)비지를 분쇄시킨 용액을 고압멸균하고, 가수분해효소를 첨가하여 발효시켜 생산된 비지 가수분해물 용액을 준비하는 단계;
    b)풀루란 생산균주를 상기 비지 가수분해물 용액이 함유된 제1배지에 접종하고, 배양하여, 시드 배양된 풀루란을 생산하는 미생물을 준비하는 단계;
    c)상기 시드 배양된 풀루란을 생산하는 미생물을 상기 비지 가수분해물 용액이 함유된 제2배지에서 배양하여 풀루란 배양액을 생산하는 단계;
    d)상기 풀루란 배양액을 원심 분리하여 얻어진 상등액을 유기용매와 혼합하여 풀루란을 추출하고 침전시키는 단계;
    e)상기 침전된 풀루란을 원심 분리하여 얻어진 침전물을 증류수에 용해시킨 후 여과하는 단계; 및
    f)상기 여과된 풀루란에 유기용매를 가하여 얻어진 풀루란을 침전시키고, 진공여과 및 동결건조하는 단계를 포함하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 가수분해효소는,
    아밀라아제, 펩신 및 프로타아제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이고, 상기 비지 100중량부에 대하여 0.1~1중량부로 첨가된 것을 특징으로 하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 제1배지는 상기 비지 가수분해물 용액 0.1~5중량%가 함유되고,
    상기 제2배지는 상기 비지 가수분해물 용액 5~60중량%가 함유된 것을 특징으로 하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 풀루란 생산균주는 아우레오바시디움 풀루란스(Aureobasidium pullulans)인 것을 특징으로 하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 제1배지 또는 제2배지는,
    제2인산칼륨(K2HPO4), 황산마그네슘(MgSO4), 황산암모늄(NH4SO4), 염화나트륨(NaCl) 또는 효모 추출물 중에서 선택된 하나 이상의 물질이 더 첨가된 것을 특징으로 하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 시드 배양된 풀루란을 생산하는 미생물은,
    20~50℃의 배양온도, pH 3~7, 교반속도 150~400rpm 및 배양시간 3~7일의 배양조건하에서 배양되는 것을 특징으로 하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 유기용매는,
    이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 메틸 알콜 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유기용매를 혼합한 것을 특징으로 하는 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법.
KR1020070102055A 2007-10-10 2007-10-10 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법 KR100937489B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020070102055A KR100937489B1 (ko) 2007-10-10 2007-10-10 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020070102055A KR100937489B1 (ko) 2007-10-10 2007-10-10 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20090036797A KR20090036797A (ko) 2009-04-15
KR100937489B1 true KR100937489B1 (ko) 2010-01-19

Family

ID=40761659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020070102055A KR100937489B1 (ko) 2007-10-10 2007-10-10 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100937489B1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5860480B2 (ja) 2011-01-11 2016-02-16 キャプシュゲル・ベルジウム・エヌ・ヴィ プルランを含む新しい硬カプセル
EP3610028A1 (en) 2017-04-14 2020-02-19 Capsugel Belgium NV Process for making pullulan
US11576870B2 (en) 2017-04-14 2023-02-14 Capsugel Belgium Nv Pullulan capsules

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0138703B1 (ko) * 1994-11-15 1998-04-30 유영학 대두박 효소 분해물의 미생물 배양용 배지로서의 용도
KR100339715B1 (ko) 2000-02-17 2002-06-05 이상재 고농도 당성분을 포함하는 식품가공 부산물을 이용한고분자 중합체 풀루란의 제조방법
KR100414952B1 (ko) * 2001-02-09 2004-01-14 (주)케이비피 식품가공 부산물인 간장박을 이용한 고분자 중합체풀루란의 제조방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0138703B1 (ko) * 1994-11-15 1998-04-30 유영학 대두박 효소 분해물의 미생물 배양용 배지로서의 용도
KR100339715B1 (ko) 2000-02-17 2002-06-05 이상재 고농도 당성분을 포함하는 식품가공 부산물을 이용한고분자 중합체 풀루란의 제조방법
KR100414952B1 (ko) * 2001-02-09 2004-01-14 (주)케이비피 식품가공 부산물인 간장박을 이용한 고분자 중합체풀루란의 제조방법

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bioresour. Technol.(2004) Vol.95, pp.293-299.

Also Published As

Publication number Publication date
KR20090036797A (ko) 2009-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104086305B (zh) 一种蛹虫草子实体培养基
CN104087531A (zh) 一株粪产碱杆菌突变株及用它制备可得然胶的方法
KR100937489B1 (ko) 비지 발효물을 이용한 풀루란의 제조방법
EP1471148B1 (en) Production of chitosan and chitin
Prajapati et al. Production, optimization, partial-purification and pyrolysis kinetic studies of exopolysaccharide from a native brown-rot fungi Fomitopsis meliae AGDP-2
US5424201A (en) Method for preparing an antitumor dextran using Lactobacillus confusus
CN104357332A (zh) 黑曲霉jh-2及在生物转化合成积雪草酸中应用
KR101804317B1 (ko) 자외선 조사를 이용하여 제조된 변이균주 아우레오바시디움 풀루란스 YK1 및 이를 이용한 β-글루칸 생산 방법
CN102239246A (zh) 通过原生质体融合得到的乙醇抗性酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GP-01，其生产方法，通过利用酿酒酵母GP-01和作为锗来源的高水溶性偏锗酸钠生产包含高含量生物有机锗的酵母的方法
JP2004321177A (ja) 水溶性低粘度β−Ｄ−グルカン含有培養液の調製方法
JP5081485B2 (ja) 抗癌剤及び抗癌剤の製造方法
CN1888054A (zh) 一种产碱杆菌及其在制备威兰胶中的应用
KR101958017B1 (ko) 고농도 세포 배양 방법을 이용한 다당체의 생산 방법
JP2008054580A (ja) デフェリフェリクリシン高生産変異株、シデロフォア生産用の液体培地、シデロフォアの製造方法
KR101687985B1 (ko) 아임계추출법을 이용한 버섯의 베타 글루칸 추출방법
JPH07102100B2 (ja) キチン分解物の食品素材
EP0067000B1 (en) Production of a nitrogen-containing polysaccharide having antitumour activity
KR101089291B1 (ko) 버섯 발효 식이 섬유의 제조 방법
KR102062005B1 (ko) 버섯의 소화 흡수율 향상을 위한 프로바이오틱스 세포 다당류의 제조방법
JP2908356B2 (ja) 菌糸体含有培地からの有用成分の抽出方法
CN100360038C (zh) 一种利用废弃菌渣生产微生物杀虫剂和壳聚糖酶的方法
WO2011111920A1 (en) Composition comprising rice bran protein hydrolysate for use in culturing of microorganisms
JP2908357B2 (ja) 菌糸体含有培地からの有用成分の抽出方法
CN114410714B (zh) 一种两步发酵虾壳制备壳聚糖的方法
JP2772815B2 (ja) 微生物セルロース性物質の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee