KR100912038B1 - 돼지 β-카제인 게놈 ＤＮＡ, 및 이를 포함하는 재조합벡터 및 형질전환체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 돼지 β-카제인 게놈 DNA(genomic DNA), 및 이를 포함하는 재조합 벡터 및 형질전환체에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 돼지 β-카제인 게놈 DNA는 3,101bp의 프로모터 부위와, 9개의 엑손 및 8개의 인트론 부위를 모두 포함하고 있으므로, 돼지 유선 특이적 발현을 위한 넉-인(knock-in) 벡터의 제작에 사용될 수 있다.

돼지 β-카제인 게놈 DNA, 넉-인 벡터, 프로모터, 엑손, 인트론, 유전자 타켓팅, 유선 특이적 발현

Description

돼지 β-카제인 게놈 ＤＮＡ, 및 이를 포함하는 재조합 벡터 및 형질전환체{Porcine β-casein genomic DNA, and recombinant vectors and transformants containing the same}

본 발명은 돼지 β-카제인 게놈 DNA(porcine β-casein genomic DNA), 및 이를 포함하는 재조합 벡터 및 형질전환체에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 3,101bp의 프로모터 부위, 9개의 엑손 및 8개의 인트론으로 이루어지는 돼지 β-카제인 게놈 DNA, 및 이를 포함하는 재조합 벡터 및 형질전환체에 관한 것이다.

유전공학적 방법에 의해 제조되는 바이오 의약품은 주로 대장균이나 동물세포 배양을 통해 생산되므로 생산단가가 높다. 특히, 대장균을 이용한 시스템에서 생산된 단백질은 '번역 후 수식'(posttranslational modification)의 문제점을 가지고 있다. 동물세포를 이용하는 경우에는, 생산에 막대한 투자비가 필요하며 이에 비해 생산성은 극히 낮다는 문제점이 있다.

이러한 문제점을 근본적으로 해결하기 위한 방안으로, 형질전환 가축(transgenic animals)을 생체반응기(bioreactor)로 이용하려는 노력이 있어 왔다. 현재 형질전환 가축을 생산하는데 이용되는 방법은 수정란 전핵에 외래 유전 자를 미세주입(microinjection)하는 방법, 외래 유전자를 체세포에 도입하고 그 체세포를 이용하여 복제동물을 생산하는 방법, 레트로바이러스 벡터(retroviral vector)를 수정란에 감염시키는 방법 등이 이용되고 있다. 그러나 이러한 방법은 외래 유전자 발현벡터가 염색체 내에 무작위로 삽입되어 그 유전자의 발현이 불안정하고 발현량이 적어 산업화에 문제점이 있다. 또한, 벡터 구축 시 프로모터를 적절하게 선정하여도 생체 내에서 원하지 않은 발현이 나타나는 문제점이 있다. 아울러, 미세주입 방법과 레트로바이러스를 이용하는 방법은 유전자가 모자이크(mosaic)로 세포에 삽입되어 생식세포로부터 그 자손을 얻는데 어려움이 있을 수도 있다. 최근 형질전환 동물 생산에 많이 이용되는 체세포 복제방법은 외래 유전자를 도입한 체세포의 선별 시 다양한 문제로 복제동물 생산에 적절한 유전자가 도입된 체세포를 확보하는데 어려움이 있다.

넉-인(knock-in) 시스템은 유전자 타켓팅(gene targeting) 방법의 하나로서, 특정 유전자를 넉-아웃(knock-out)시키고 그 유전자의 위치에 정확하게 발현시키고자 하는 외래 유전자를 도입하는 방법이다. 넉-인 시스템은 외래 유전자를 원하는 위치에 삽입할 수 있는 시스템으로, 넉-인 시스템에 의하여 삽입된 외래 유전자는 삽입된 위치의 게놈 상에 위치한 유전자 발현조절 영역의 모든 부분을 이용할 수 있으므로, 원래 그 위치에 존재하는 유전자의 발현량 만큼 발현될 가능성이 있다.

유용한 재조합 단백질을 대량 생산하기 위하여 생체반응기로서 형질전환 동물의 유즙, 소변 등이 주목받아 왔으며, 포유동물의 유선에서 분비되는 유즙에 대해서는 가장 많은 연구가 이루어졌다. 유즙 내 단백질의 주성분은 카제인 단백질, 즉 칼슘-감수성 카제인들(α-S1-, β-, α-S2-카제인) 및 κ-카제인이다. β-카제인은 소, 산양, 면양의 유즙의 주성분으로서, 그 프로모터는 형질전환동물의 유선에서 형질전환 유전자의 발현을 조절하는데 사용하기에 적합한 후보로 여겨진다. 소 β-카제인 유전자의 3.8kb 프로모터가 수유시기의 생쥐 유선에서 시기- 및 조직특이적 발현을 일으키는 것이 확인되었으며, 산양의 β-카제인 프로모터를 이용하여 사람의 tPA(tissue plasminogen activator)를 형질전환 산양의 유선에서 발현시키는데 성공한 예가 보고되어 있다. 소와 산양의 β-카제인 유전자의 인트론 1의 발현수준 향상효과가 보고된 바 있다. 인트론 1 상에는 C/EBPb와 STAT과 같은 몇 가지 발현증진인자들이 존재하며, 이들 인자들은 히스톤 아세틸 트랜스퍼라제를 끌어들여 유단백질 유전자의 발현을 증가시키는 것으로 보인다.

돼지 β-카제인 cDNA 서열(1110bp)은 젠뱅크(GenBank)에 X54974로 등록되어 있으며, 돼지 β-카제인 프로모터 및 엑손 1을 포함하는 부분 서열(5544bp)이 AY452035로 등록되어 있다. 돼지의 β-카제인 프로모터 3.2kb 서열과 이를 이용한 형질전환 벡터가 보고되어 있으나, 이는 프로모터만을 사용하고 있으므로 다양한 개선의 여지를 가지고 있다. 한국등록특허 제646222호(2005. 12. 7 공개)는 돼지 β-카제인 유전자의 프로모터 및 인트론 1의 염기서열을 결정 분석하고, 돼지 β-카제인 유전자 프로모터 염기서열 3,101bp와 인트론 1의 2,398bp를 루시퍼라아제 리포터 유전자에 결합한 발현벡터 및 이를 이용한 형질전환 동물 유선에서 유전자 발현방법을 개시한 바 있다. 그러나 이 또한 돼지 β-카제인 유전자의 부분 서열(partial sequence)을 이용한 것으로서, 여전히 개선의 여지를 안고 있다.

돼지 β-카제인의 전체 게놈 DNA 서열을 동정함으로써, 전체 돼지 β-카제인 유전자를 유전자 타켓팅 기술의 하나의 넉-인 벡터 개발에 이용할 수 있을 것이다. 그러나 지금까지 프로모터, 9개의 엑손 및 8개의 인트론을 포함하는 돼지 β-카제인의 전체 게놈 DNA 서열은 알려진 바 없었다. 넉-인 벡터를 구축하기 위해서는 개시코돈(start codon)인 ATG로부터 5'쪽의 상동영역 약 5kb와 3'쪽의 상동영역 2~5kb가 필요하다. 돼지 β-카제인 유전자의 ATG 위치는 엑손 2에 위치하고 있다. 기존에 보고된 프로모터, 인트론 1, 엑손 1 등의 염기서열은 5'쪽 상동영역의 구축에는 이용 가능하지만 ATG를 포함하는 엑손 2로부터 3'쪽 염기서열에 대해서는 보고된 바가 없다. 따라서 돼지 β-카제인 유전자의 ATG 위치로부터 3'쪽 염기서열의 확보는 매우 중요하다.

본 발명자들은 돼지 β-카제인 유전자를 이용하여 넉-인 벡터를 구축하기 위하여 지속적인 연구를 수행한 결과, 프로모터, 9개의 엑손 및 8개의 인트론으로 이루어지는 돼지 β-카제인 유전자의 전체 게놈 DNA를 최초로 동정하고, 이를 포함하는 재조합 벡터 및 형질전환체를 제작하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명의 목적은 돼지 β-카제인 유전자의 전체 게놈 DNA를 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 다른 목적은 돼지 β-카제인 유전자의 전체 게놈 DNA를 포함하는 재조합 벡터를 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 돼지 β-카제인 유전자의 전체 게놈 DNA를 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 미생물을 제공하기 위한 것이다.

첫째, 본 발명은 서열번호 1의 염기서열로 이루어지는 돼지 β-카제인 게놈 DNA에 관한 것이다.

둘째, 본 발명은 상기 돼지 β-카제인 게놈 DNA를 포함하는 재조합 벡터에 관한 것이다.

셋째, 본 발명은 상기 돼지 β-카제인 게놈 DNA를 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 미생물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 돼지 β-카제인 게놈 DNA는 3,101bp의 프로모터 부위와, 9개의 엑손 및 8개의 인트론 부위를 모두 포함하고 있으므로, 돼지 유선 특이적 발현을 위한 넉-인 벡터의 제작에 사용될 수 있다. 본 발명의 돼지 β-카제인 게놈 DNA를 이용한 넉-인 벡터는 프로모터를 포함하는 내인성 유전자 조절 DNA 염기를 모두 이용하여 유전자 발현을 유도할 수 있기 때문에, 기존의 형질전환 동물의 발현율 보다 높은 발현율을 나타낼 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서는 돼지 β-카제인 게놈 DNA 영역을 이용하여 넉-인 벡터를 구축하고자 돼지 β-카제인 유전자를 동정하고 분석하였다. 먼저 돼지 β-카제인 cDNA 를 돼지 유선조직으로부터 제조한 총 RNA(total RNA)를 이용하여 RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)로 동정하였다. 동정된 cDNA는 722bp로 NCBI에 등록된 유전자(accession No. X54974)와 약 98% 동일하여 정상적으로 β-카제인 cDNA가 클로닝되었음을 알 수 있었다(도 1 및 서열번호 4 참조).

돼지 게놈 DNA를 체세포로부터 제조하고 게놈 라이브러리(genome library)를 구축하였다. β-카제인 cDNA를 프로브로 이용하여 제조된 돼지 게놈 라이브러리를 스크리닝한 결과 2개의 양성 클론을 확보하였다(도 2 참조). 동정된 β-카제인 게놈 DNA는 엑손 6부터 9까지 포함된 부분이었다(도 5의 A) 참조). 그러므로 전체 β-카제인 게놈 DNA를 동정하고자 롱 PCR(long PCR)을 수행하여 각각 약 6.8kb 및 약 5.5kb의 밴드를 검출하였다(도 3 참조). 각 DNA 밴드를 서브클로닝하여 전 염기서열을 결정하였으며 그 결과 β-카제인 DNA임을 확인하였다(도 4a 내지 4e 및 서열번호 1 참조). 돼지 β-카제인 게놈은 전체 9개의 엑손과 8개의 인트론으로 구성되어 있다(도 5의 B) 내지 D) 참조). 또한 엑손-인트론 접합 부위를 조사한 결과 각 엑손은 1번 45bp, 2번, 63bp, 3번 27bp, 4번 27bp, 5번 24bp, 6번 45bp, 7번 519bp, 8번 42bp, 9번 305bp로서 7번과 9번을 제외하고는 매우 짧은 엑손으로 구성되어 있다. 또한 인트론은 1번 2398bp, 2번 735bp, 3번 118bp, 4번 1325bp, 5번 94bp, 6번 1307bp, 7번 606bp, 8번 734bp로 구성되어 있었다. 상기 결과를 종합하면 β-카제인 게놈은 1번 엑손부터 9번 엑손까지 전체 8,410bp였다. 또한 프로모터 영역은 전체 3,107bp로 프로모터를 포함하면 동정된 β-카제인 영역은 전체 11,517bp가 동정되었다(표 1 참조).

본 발명에서 얻어진 돼지 β-카제인 게놈 DNA는 넉-인 벡터 구축에 활용할 수 있다. 또한 본 발명에서 동정된 돼지 β-카제인 게놈 DNA는 3,101bp의 프로모터를 포함하고 있다. 그러므로 이 영역은 돼지 β-카제인 유전자 발현에 대한 유전자 조절 DNA 염기서열 분석에 이용하여 β-카제인 발현 기작을 DNA 레벨에서 연구하는데 이용할 수 있다. 넉-인 시스템은 프로모터를 포함하는 내인성 유전자 조절 DNA 염기를 모두 이용하여 유전자 발현을 유도할 수 있기 때문에, 기존의 형질전환 동물의 발현율 보다 높은 발현율을 나타낼 수 있을 것으로 기대된다. 따라서 안정적으로 생리활성 물질을 생산할 수 있는 시스템이 확립되어 바이오신약 개발에 획기적 진전이 있을 것으로 기대된다.

이하, 본 발명을 구체적인 실시예에 의해 보다 상세히 설명하나, 이들에 의해 본 발명의 범위가 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 돼지 β-카제인 cDNA 동정

돼지 β-카제인 cDNA는 암컷 돼지의 유선조직으로부터 아래와 같이 총 RNA를 제조하고 RT-PCR에 의하여 동정하였다. 먼저 1 ㎖의 트리졸 시약(Gibco BRL)에 0.1 g의 유선 조직을 넣고 1 분 동안 균질화한 후 에탄올 침전을 수행하여 총 RNA를 회수하고 RNase-프리 워터(RNase-free water)에 녹여 사용 전까지 -70 ℃에 보존하였다. RT-PCR을 위한 제1쇄 cDNA의 합성은 유선조직 총 RNA 5 ㎍을 사용하여 슈퍼스크립트 Ⅱ RNaseH-역전사효소(Superscript Ⅱ RNaseH-reverse transcriptase)(Invitrogen)와 랜덤 프라이머(random primer)(Takara)를 이용하여 합성하였다. PCR은 제1쇄 cDNA 1 ㎕를 이용하여 돼지 β-카제인 유전자(accession No. X54974)에 상응하는 20 pmol 센스(서열번호 2: AAAGGACTTGATCGCCATGAAGCTCCTCAT)와 안티센스(서열번호 3: AATCCTCTTAGACAAGGTTGTAAACTGGGG) 프라이머, 1×PCR-완충액, 0.5U Ex Taq 중합효소(Takara), 각 200 μM dNTP 조성으로 변성 94 ℃ 30 초, 어닐링 68 ℃ 30 초, 연장 72 ℃ 1분, 33 주기의 반응조건으로 수행하였다. PCR 산물은 0.8% 아가로스 젤에서 전기영동하여 확인하였으며, 염기서열 결정을 위하여 pGEM T-이지 벡터(pGEM T-easy vector)(Promega)에 서브클로닝하였다. 염기서열은 ABI PRISM 377 시퀀서(Applied Biosystems)를 사용하여 결정하였다. 결정된 염기서열의 분석은 진틱스-윈(Genetyx-win)(version 4.0)을 이용하여 분석하였다.

그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 동정된 돼지 β-카제인 cDNA는 NCBI에 등록된 유전자와 약 98% 동일하여 정상적으로 β-카제인 cDNA가 동정되었음을 알 수 있었다. 동정된 돼지 β-카제인 cDNA의 염기서열을 서열번호 4에 나타내었다. 이 유전자를 β-카제인 게놈 DNA를 동정하는데 프로브로 이용하였다.

실시예 2: 돼지 태아섬유아세포로부터 게놈 라이브러리의 제작

돼지 태아섬유아세포(암컷)로부터 일반적인 방법에 의하여 게놈 DNA를 정제하고 Sau3AⅠ 제한효소로 부분 분해(partial digestion)실험을 실시하였다. 50 ㎍ 의 게놈 DNA를 1 유닛의 제한효소로 37 ℃에서 보온하면서 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 90 분간 처리한 후 5 ㎍에 상당하는 DNA를 회수하고 바로 제한효소 반응을 중지시킨 다음 일부분의 DNA를 전기영동하여 적당한 크기로 부분 분해된 처리구(15 분)를 이용하여 삽입체(insert)를 준비하였다. 삽입체는 CIAP(Calf intestine-alkaline phosphatase)를 처리하였다. CIAP 처리된 삽입체는 BamHⅠ 제한효소로 절단된 람다 DASHⅡ 벡터(Stratagene)에 결찰하였다. 결찰된 람다 DNA는 기가팩 Ⅲ XL 패키징 엑스트랙트(Gigapack III XL packaging extract)에 패키징한 후 XL1-블루 MRA(P2) 호스트에 감염시켜 역가를 측정하였다. 이들 라이브러리를 다시 한 번 증폭하였으며 증폭된 라이브러리의 역가를 측정한 후 스크리닝에 이용하였다.

실시예 3: β-카제인 게놈 DNA의 동정 및 해석

먼저 1차 스크리닝을 위하여 라이브러리를 NZCYM 플레이트당 50,000 pfu가 되도록 플레이팅하여 전체 500,000 라이브러리를 스크리닝에 이용하였다. 각 플레이트당 두 장의 니트로셀룰로스 막을 이용하여 플라크를 들어 올렸으며(lifted) 막은 변성 용액(1.5M NaCl, 0.5M NaOH)에서 2 분, 중화 용액(1.5M NaCl, 0.5M Tris-HCl(pH8.0))에서 5 분 처리한 다음 0.2M Tris-HCl(pH 7.5)를 포함하는 2×SSC 완충액에서 30 초간 세척하고 UV 가교결합제를 이용하여 DNA를 막에 가교결합하였다. 막은 5×SSPE, 5×덴하르츠(Denhardt's), 1% SDS(w/v), 50% 포름아미드(w/v)를 포함하는 용액에서 42 ℃, 15 시간 혼성화를 실시하였다. 프로브는 클로닝된 β-카 제인 cDNA/HindⅢ 160bp의 DNA 단편, 랜덤 라벨링 키트(random labelling kit)(Amersharm사)와 [α-³²P]dCTP(110 TBq/mmol, Amersham사)를 이용하여 제조하고, 혼성화 시 프로브는 100만 cpm/㎖ 혼성화 용액을 사용하였다. 막은 혼성화 후 0.2% SSC, 0.1% SDS(w/v)에서 68 ℃, 30 분, 3회 세척한 다음 72 시간 동안 -80 ℃에서 X-선에 노출한 후 현상을 실시하였다.

2차 스크리닝에서는 1차로부터 확보된 양성 신호를 NZCYM 플레이트당 1,000 pfu가 되도록 플레이팅하고 각 플레이트당 두 장의 니트로셀룰로스 막을 이용하여 플라크를 들어올렸다. 막은 1차 스크리닝과 동일하게 처리하여 동일한 조건으로 혼성화, 세척, 오토래디오그래피를 실시하였다.

3차 스크리닝에서는 2차로부터 확보된 양성 신호를 NZCYM 플레이트당 100 pfu가 되도록 플레이팅하고 각 플레이트당 두 장의 니트로셀룰로스 막을 이용하여 플라크를 들어올렸다. 막은 1, 2차 스크리닝과 동일하게 처리하여 동일한 조건으로 혼성화, 세척, 오토래디오그래피를 실시하였다. 그 결과 2개의 양성 클론을 확보하였다(도 2).

파지 DNA를 정제하기 위해서는 양성 파지를 XL1-블루 MRA(P2) 호스트에 감염시켰으며 파지 DNA를 람다 미디 키트(Lamda midi kit)(Qiagen)를 이용하여 정제하였다. 정제된 파지 DNA는 제한효소 Not I, Sal I으로 절단한 후 0.8% 아가로스 젤에 전기영동한 다음 삽입체의 크기를 측정하였으며, 서던 블랏팅을 위하여 제타-프로브 막(zeta-probe membrane)(Bio-Rad사)에 전이시켰다. 막은 스크리닝 때와 동 일한 조건으로 β-카제인 cDNA/HindⅢ 160bp의 프로브를 이용하여 혼성화를 실시하였다.

혼성화 결과 양성 신호를 보이는 밴드를 pBluescript SK-(Stratagene)에 서브클로닝하기 위하여 파지 DNA를 제한효소 SalⅠ으로 처리한 후 0.5% 아가로스 젤에서 전기영동한 다음 삽입체를 진 클린 키트(Gene clean kit) Ⅱ를 이용하여 삽입체를 제조하였다. 벡터 pBluescript SK-를 동일한 제한효소 SalⅠ으로 처리한 다음 알칼라인 포스파타제를 처리하였다. 결찰을 위하여 벡터와 삽입체의 몰비를 1:2 이상으로 하여 DNA 결찰 키트 ver2(Takara)를 이용하여 하루 밤 동안 16 ℃에서 보온한 다음 XL10-골드 울트라컴피턴트(XL10-Gold Ultracompetent) 세포를 이용하여 형질전환을 실시하였다. 형질전환에서 출현한 콜로니를 취하여 플라스미드를 정제한 후 제한효소 SalⅠ으로 절단하여 삽입체의 삽입 여부를 확인하였다. 서브클로닝된 DNA는 각 제한효소로 처리하여 제한효소 지도를 작성하였다.

동정된 게놈 DNA는 제한효소 SalⅠ과 NotⅠ으로 절단한 후 0.8% 아가로스 젤에 전기영동한 다음 삽입체의 크기를 측정한 결과 약 16kb였다. 16kb의 삽입체를 pBluescript SK-에 서브클로닝하여 제한효소 지도와 염기서열 결정에 의하여 분석하였다. 그 결과 도 5의 A)에 나타낸 바와 같이 엑손 6에서부터 9까지 삽입된 클론이었다. 넉-인 벡터의 구축에는 메티오닌 부위가 있는 엑손 2 부분의 상류와 하류 부분이 필요하므로 NCBI의 게놈 및 cDNA의 정보를 이용하여 LA-PCR(Long & Accurate PCR)에 의하여 β-카제인 게놈 DNA를 동정하기로 하였다.

실시예 4: LA-PCR에 의한 돼지 β-카제인 게놈 DNA의 동정

돼지 β-카제인 게놈 DNA는 회수된 돼지의 태아섬유아세포를 이용하여 게놈 DNA를 회수하고 PCR을 수행하여 동정하였다. PCR은 NCBI에 보고된 돼지 β-카제인 프로모터 부위(accession No. AY452035)와 cDNA 분석 결과를 바탕으로 프라이머를 제조하여 롱 PCR을 수행하였다. PCR은 돼지 β-카제인 프로모터 상류 센스(서열번호 5: CCCACTATTTCCTGATTCTTGATTAACTTT) 프라이머, β-카제인 엑손 6으로 추정되는 안티센스(서열번호 6: TGTTGTTCCTCCCGCTTTAGCTTCTCAATT) 프라이머, 엑손 2를 포함하는 센스(서열번호 7: GACTTGATCGCCATGAAGCTCCTCATCCTT) 프라이머와 마지막 엑손 9를 포함하는 안티센스(서열번호 8: GCCTAAGGATTAATTTATTGAAATGACTGG) 프라이머를 제작하여 수행하였다. 돼지의 태아섬유아세포에서 회수된 게놈 DNA 100 ng을 사용하여 10 pmol의 센스, 안티센스 프라이머, 0.5U i-Max Ⅱ DNA 중합효소(Intron), 1×PCR-완충액, 200 μM dNTP 조성으로 변성 94 ℃ 30 초, 어닐링 63 ℃ 30 초, 연장 72 ℃ 7분 30초, 30 주기의 반응조건으로 롱 PCR을 수행하였다. PCR 산물은 0.8% 아가로스 젤에서 전기영동하여 확인하였다. 그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 약 6.8kb 및 약 5.5kb의 밴드를 검출하였다.

염기서열 결정을 위하여 pGEM T-이지 벡터(Promega)에 서브클로닝하였다. 염기서열 결정은 ABI PRISM 377 시퀀서(Applied Biosystems)를 사용하여 결정하였다. 결정된 염기서열의 분석은 진틱스-윈(version 4.0)을 이용하여 분석하고, 그 결과 β-카제인 DNA임을 확인하였다(도 4a 내지 4e 및 서열번호 1 참조). 동정된 돼지 β-카제인 게놈은 전체 9개의 엑손과 8개의 인트론으로 이루어져 있으며 사람 과 설치류에서 보고되는 결과와 일치하였다(도 5). 또한 전 염기서열을 분석하고 엑손 인트론 접합부위를 조사하여 아래 표 1에 나타낸 바와 같은 결과를 얻었다.

표 1에 나타낸 바와 같이, 각 엑손은 1번 45bp, 2번, 63bp, 3번 27bp, 4번 27bp, 5번 24bp, 6번 45bp, 7번 519bp, 8번 42bp, 9번 306bp로서 7번과 9번을 제외하고는 매우 짧은 엑손으로 구성되어 있었다. 또한 인트론은 1번 2398bp, 2번 735bp, 3번 118bp, 4번 1325bp, 5번 94bp, 6번 1307bp, 7번 606bp, 8번 734bp로 구성되어 있었다. 상기 결과를 종합하면 β-카제인 게놈은 1번 엑손부터 9번 엑손까지 전체 8,410bp였다. 또한 프로모터 영역은 전체 3,107bp로 프로모터를 포함하면 동정된 β-카제인 영역은 전체 11,517bp가 동정되었다. 상기 결과는 β-카제인 넉-인 벡터 구축에 필요한 엑손 2를 포함하는 상류와 하류 5kb 이상을 포함하고 있음을 나타내고 있다.

실시예 5: 돼지 β-카제인 게놈 DNA를 포함하는 대장균의 생산

돼지 β-카제인 게놈 DNA를 포함하는 pGEM T-이지 벡터(Promega)를 대장균 DH5α와 혼합하여 얼음 위에서 30 분간 방치한 다음 42 ℃에서 30초간 반응시켜 유전자를 대장균 내로 도입하였다. 유전자가 도입된 대장균을 37 ℃에서 1 시간 동안 LB 액체배지에서 배양한 후 LB 고체배지에서 하룻밤 배양하여 선별하였다. 선별된 대장균을 다시 액체배지에서 하룻밤 동안 배양하여 동결 보존하였다.

도 1은 돼지 β-카제인 cDNA의 동정 결과를 보여주는 도면이고;

도 2는 돼지 β-카제인 게놈 라이브러리의 스크리닝 결과를 보여주는 도면이며;

도 3은 LA-PCR에 의한 돼지 β-카제인 게놈 DNA의 클로닝 결과를 보여주는 도면이고;

도 4a 내지 4e는 돼지 β-카제인 게놈 DNA의 염기서열을 보여주는 도면이며;

도 5는 돼지 β-카제인 게놈 DNA의 구조 및 제한효소 지도를 보여주는 도면이다.

<110> Industry Foundation of Chonnam National University <120> Porcine beta-casein genomic DNA, and recombinant vectors and transformants containing the same <160> 8 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 11517 <212> DNA <213> Sus scrofa <220> <221> gene <222> (1)..(11517) <223> Porcine beta-casein gDNA <400> 1 cccactattt cctgattctt gattaacttt ataaattaat ctcaatagcc atatttatca 60 taaatcagat gttattttat gtggctaatc ttatggaaag aattaaaata ttccatctat 120 ataaataatg ctatgcaatc tcatggaaag aattaaaata ttacatctat ataaataatg 180 ctatgctacc tattcttaac taataatttg gtggaattaa caaattttgt tttacattgt 240 tgccatatct gaatcattat ataaacttca ctcttttttt atcctatttc cacccccgcc 300 catgttttgg aagttattaa acagagtctc aaatattatt tagaaaaatg aagtttttag 360 taacagctct atttctaaag agctgcagtc tcctgaaaaa aaacaatgca aattcacagg 420 ccctctgttt ctttgcctct aaaatatatt taaaacatca tatggatgat atctagggtc 480 tcttctagtc cttattttct gaacaatttt tggtcctttt attgtacttt ttatccagct 540 tttctttctt tctttctttc tttttttttc tttttaggcc cacacttgtg gcatatggag 600 gttcaggcta gggatcaaat cagagttgta gctgctgacc tacaccacag ccacagccac 660 gcaggatcct atctgcatgg gtgctggtca gatttgctaa ccactgagtc acgacaggaa 720 ctcccttatc agcttttcta ttactctatt tcttgagggt gttattcaca tggtttcagc 780 tattaccttt ttgctttacc tatatctcat gcctgcatat ttcagattca tcatccaata 840 ttggaaaaag ctttgactga acaaattctg cttataacaa atagtactag aacactttgc 900 atagatcata tattactcct cacccagggt tgtcttataa aatttctgtg gatgaaattc 960 tcactttgat atataaaaat ggcaacgctt gggttattca ttgcaaaagc ttggtttgcc 1020 catatggcac tttgctcctt actggtcatt gtgctctgag gcttacctgg ccagtggcac 1080 ctgatgttat cttaaatctc tggcttttca actctccctt gggcaagtct ttttctctgg 1140 tgtattgtta gtgatttcct tgatcaaggt tttacctact tttctggccc aatcaagtcc 1200 ataactgtat ctattcatat aattcaaaat tggtgagcga tagtcataag ggaatgttgt 1260 atttattgca caataggtaa agcatcttgc tgagaaaaca caaaggaagt atcaaatggt 1320 tagggcacac ttgcttttgt attccttttc ttagaaatta tactcttttg cctatggcct 1380 tggcaaccaa gagctaacac ataaaggcac agtgaacagc caagaccttt tctagttata 1440 cctatgacac tggggtcatt tcatcatttc ttttcatggc ttcctcctgg ctccatatga 1500 acactcttag aattaatatt agctgaataa tttgaataca cagtagacac tgagttgggt 1560 ttctgaggaa tacaaaacct atatgacagt caggaatatt ctcctcccac atacatctag 1620 catgatatga atgcaaggta tcttatgaag aaaaatcatt aattatgccg atactctact 1680 tgcttacttc ataacagcat ctatctatct atacttaagt actgaatata tctttacagg 1740 caatgaatag aagaaataaa gataaaaatg agtagtctaa tacaatcagc caattacatt 1800 tatgaacatc tatcactaaa gaggcaaaga aacttgaaga caacttttat acgtgggcaa 1860 ctaagaaata cttttgaggc ctggctcaga ctctattata gcacgttagg tgagaccctc 1920 ctcctgtctg ggctttcatc ttctttcctc cttccatcat ttggccttca tgaatattag 1980 ctgacataca ttgattcact atagaagata tgagaccaaa cttgagagga tcgatttgtt 2040 tttcttttct ttctttcttc ttcttcttct tctttttttt tttttttttt tttttttttt 2100 tttaaggctg cccccaaagc actgggaagt ttccaggcca ggggtcaaat cagagttgca 2160 gctgtggtct ataccacagc cataacaaca ccgaactgaa actgcacctg tgaccaaggt 2220 ctcttgtggg gatgcggatt cttaacccaa tgagcaaggc ccgggattga acctgcatcc 2280 tcatggacac catgttttgt tcttgacccg ctgagccaca aagggaattc ctagaagcac 2340 cactttaata aatttgtacc agtatcattt ttttctctag aaatattctc taaatgctac 2400 tttctgtctt aaaacccttc aaaaagtcct cactatctag agaataaaat ttgcactcmt 2460 tagaattctt tgcccactgt tatgtcaccc ctttgtcttt cttctcatct ccatctactc 2520 gctactcctt gcacttcata acctaaattc actatttgat ttagttgtag tgactttgtt 2580 atcatgttca agaccatatt cttcctttcg ttttagccta catctctctt tcttccttag 2640 gtctgagctg tcatcacagg cttgtcatgt cattttctcc attatggcat aaaatggtaa 2700 catctattta gttagcatga aatagtgacc ttcgtgtggc ctgtgtatct ccaataccta 2760 ttagaatttc cccacaagaa agctcttgaa aacctaccaa gtgctaaaga gaccttattg 2820 tggctaccat aacttgggga ctgggccaga atgtcactgt cccccagcca acgtctgtac 2880 ttattgaaca gtttcatttc ctggatggat tttctttatc agatggtaaa ttatccactt 2940 gttaaaatgc tcctcagaat ttctggggat agataatagg aagaaatcat tttctaatca 3000 tgcagatttc ttggaattca aactcactat tgattttatt ttccaaccac acaattagca 3060 tgtcattaaa tactgtataa aaatagccac agaagtggat gattatccat tcacctcctc 3120 cttcacttct tgtcctccac tttggagaaa aggtaagaat ttcagattca attcaatgta 3180 tcctctcatc ctgatcttaa actacgttga gatatagaaa gaacatagtt gcttaaaaat 3240 atgtatttaa tatatagggt atttgtgggt atttaagata gtgctgatac tattttcagt 3300 acttagttta aaaaaataga agtgcctgta aagatttgat aaaaatttaa atgaccgtgt 3360 tgtatgaatc taacaaaatg tagtaatggt gactgctatt tcctttagta aaagactagt 3420 taacaggctg tattaaaaga tacatttctt gaattatatg tctctcaaat tgattaaaca 3480 taccacagcc ataaaggcaa atacatttaa tttatagcat gagtatatga ataatcatta 3540 ttaagaaagt tttagcccac aaatagttta tagatgttgc atgtcagtca agaaatggag 3600 agatttgttt gggaacatgt gctccttaaa atatttataa ataatatttt tagaagaaga 3660 gcatatttgt cagaattgtt taaaatatcc aaattctcaa tttaccattt atattatgat 3720 atttcaaaac tattaaaata gattcataaa atacagaatt aaattaaaga caaacaaaat 3780 gtttactttg tgaaaaaaaa aaaaatccta gggggaacag agtttatctg ggaacaaaaa 3840 agaaggaaaa catgatctga aataaagaat agtttaaaat tcatggagtt cctgttgtgg 3900 ctcagtggta atgaacccta ctagtatcca tgaggacatg ggtttgatcc ctggacctgc 3960 tcagtgggtt aaggatccag cattgctgtg gctgtggcat gggccagcag ctacagcttc 4020 aattcaatcc ctagcctagg aatttcaata tgccaaaaaa aaaaaaggca ataataaaaa 4080 tcctggctta caaatttata aataaaatta taattataaa ataaagaaca tgtaataata 4140 tcttccctac ttgtaaagaa ttctaataaa gtactatatt ctttttttca gtctctacag 4200 taaaaaatat ttggaaatgt ttgagaattt ctgcataaag taaaatcaat aaggaataag 4260 acagcaccca tgagaaaaat ctagggcgaa aagtcttaat ttagtaaaaa tcttggattg 4320 aagattgcgt gtcaagggat attggtggca caaacattat ttttttacaa aacttttaga 4380 aatgcagtaa aatctaccat ttagtacatt ttggtcaaaa gtattaacat attttatgct 4440 atgcagccag gagaagtagc ctagagtggg gaagtagcct ggagtgggga agtagcctgg 4500 agtggggagg tagcctggag tggggagata gcctggagtg gtaagcagcc tagagtgggg 4560 attgggcaag tgaacctgac cttttggtaa atcatcaaga gacaagtgca cacatgttca 4620 cagagatgaa agaaggagag tgtataatct ccacaattat gtggcacaaa ggagaagaga 4680 tgctgttagg tatgggggat taagactgtg aggtggatat atatggagaa gaaacaaacc 4740 aatccgccca agaaaacatc tggataagtg gagcaagtaa acgaaatact aaaatgaaaa 4800 gctcagtctt atggaaataa aaagctatgt ataagccaat tatccatata aatcatttag 4860 ttcaataaag ctaaaataaa atatgacctt ctttgtatgc attttatctg ataactttcc 4920 tctctgtaga actgaggctc caatagggct gagaccttac tattttgttc actgctaaca 4980 ttccagcaca taagcaaagt ctggcaataa aaagtgctaa ataataagca ctgagaaact 5040 gctgtacagc acagagaact ctatccaatc acttgtgata aaacatgata gaagataata 5100 tgagaaaaag aatgtttaca tatgtatgac tgggtcactt tgctgtagag cagaaatcga 5160 cagaacattg taaatcaact gtacttcaat tttaaaaaat tttaaaaggt gccaaataaa 5220 tatttttgaa tctattaatt aagctttctg tcaatatttg tagcttctgt atttcaaaag 5280 aaaaaaccaa catgtactgt gaaatgagat gaaaaagatt gaagtaggat aaggctgtta 5340 gtggaaaaaa tctgaatggc tggcaatgaa ataggaactt gacatgtaag attaaggagt 5400 catagtagat gttgaccctg gtcatatgac aaaatttcta tcagacattt ttattacacc 5460 tttggtttct tttagaggaa ataaaataag aaatatatta gattgaccag tcatatacat 5520 tttttccctc atttccccat tcacaggact tgatcgccat gaagctcctc atccttgcct 5580 gcctcgtgac tcttgccctt gcaagagcgg taagtacaga aaaaaaatct ctgaataaat 5640 aaggaatagt actacctgcc tatgggtaga aaatggtatt accaacactg taaaggtata 5700 aataatgcag aagagcaggt ttgtttttgt ttgtttattt tttcacttct aagaaaattc 5760 cttgcattca cccaccatct caacaatatc cactggggcc acacatctgg atcaaatgct 5820 ttctgtagta ttgtgccacc agtgcctaag gtaaacaagc aaaccaataa gcaacagata 5880 aacaagaaga aacacatatg agaacaataa aaagagtaat attacacaaa tacacttcca 5940 tcttcttcca gtgatgaaat atatgatctc tagggcaccc agttaaatcc tacctgtgtc 6000 tattgaacag agaatgatac tccagaagat ggggtatcag acaataatca caaacatatt 6060 cataatcata atgaaagtat tcaatacaaa tgaaaataac ttttttttct gttatccata 6120 aaaaactcct cattaaggaa aaataaaaat ataccagtaa aaagttaata catttaaata 6180 atgtaaaagc aattacaagt ctctcaaaag acatagaaca tattttttca gtttgtgaaa 6240 tagatagctc tgcataagga aggtaaaatt cagataggaa aaatgtttaa taatgagtca 6300 actatgggga ctaaaatgct ggtttttctt ttttttctct atagaaggaa gaactcaatg 6360 catctggtga ggtaagatat ttttattcag agaaaaattc ccaagcataa aatagtaaaa 6420 ctttctgatg atctagcaga tttagctgga ggttgaattt caacttttcc tttctttttt 6480 ccttttcaga ctgtggaaag cctttcaagc agtgaggtaa gccaatgttt attcataggt 6540 aatttcccaa attagaacta ttaaaaaaac tgcactatct ttcttttagt gtgaacacga 6600 acatgcattg atgaagctat catatctata ttctgacact taagttccaa tgtaaatttc 6660 cattgtatat atttaaagag agaatacatg tccggaggat ttaacgttct agccatttct 6720 gagttgactg gctacttgaa attgtggcac tgtgctccgc ttcttcttct ttttttttaa 6780 tgaactgtac agtctttttt tctatcttga tctctctcta tattaacctc attcactgtt 6840 ttgacattta ttgatacatt tatgtatcag actttaacta gagctgcggt acaaactgga 6900 aagagggaag cccataagaa agatctcgca gcgtagtcag ggggcggatg tgcaaatgga 6960 cacattttgt cattataata gcataatagc agtctagtaa ataagaggta gttagactta 7020 gtctagtcct aaatctgccc agggtgtcag tcaggtagat attaaccctc acatcactct 7080 ttgagtctgt tatcacctgt tagtgaaatg gtacatcact aaactttgac tcttcacaaa 7140 ggttatgaga tcctagaggg aggatatgta tttcttataa ttcataacaa gcggactaag 7200 aatgagtaac aaaggtatca gtgattatat atatacacac acatattttt gtctttttgc 7260 cttttctagg gctgttcctg cagcatatgg aggttcccag gttaggggcc taatcagagc 7320 tgtagccgct ggcctacacc agagccacag caatgtggga gtgggatctg agccgcatct 7380 gcgacctaca ccacaactca tggcaacgcc aaatccttaa cccactgagc aaggccagga 7440 atcgaaccca caaactcatg gttcctagtc ggatttgtta accactgggc cacgacagga 7500 actctgatta ctgtattttc aatgactgtt attcttttca aatcagatgg gttattagag 7560 atcctttgtt attgtaagaa gggtaataga gagaaattag tatctgttac aggcctctgt 7620 tgttactatg ctcactcatt ttctttcctt ttatgactgc atcatctgtt cttcttttat 7680 acaatagatt tattcagaat agtgtaacat aaatttccag caattaaaat aatattatca 7740 aacaaggtgt ccacattaac ctataaaatg tcatttgctg acttatattg acaaataaga 7800 attgttcatt aaaactcaat cttattttta tttttctaaa ggaatctatt actcacatca 7860 gcaaggtaaa gacttcatcc ttaaatacgc ctattttcaa aacttcctgt tcacttgtta 7920 caaatagcaa catttatttt ggtgtgatct gttttctagg agaaaattga gaagctaaag 7980 cgggaggaac aacaacaaac agaggtaatt tgttcatgat gagcatattt tgaaaattat 8040 tattaaacat gatatatgca aaatgtttat atgttcactc aaaaacatgg tattaatata 8100 aatcagtgta agaaattaaa ctatgacaaa gtgaaaagat tttaaagaca tagacacatt 8160 taaatacata atcaacttcc agagtaaaga ataagtacct gtgaataact attgatttat 8220 tcattttacc aacagtatac ctgttttcag taagtgcact taatgggaac atttccggtt 8280 cggggctgtg atccccttga tgaaagagta gggaggtggt gcaccacgaa tcctgattgg 8340 atcctatatc agctgtataa ccctggtccc aagtttctct gtacctcaat ttcttcttct 8400 gtaaaattga gaaaattcat aagccaatag ggtggatgag ctggcacaca gtgactatcc 8460 aatgatttta cgttaacatt ctgtagcttt tatactcatt tatgaatgtg tgaaggtctt 8520 aaaaaaattt ccattacaca gttgagaaaa gtaagataca gaacaattga gtacacaatt 8580 gtgtgacaac ttgcatagtt attaataagc agggcttgct taaaaacaag gatttgagga 8640 tgaaataaaa ttctttaatt aaattactct tgtggtaaca tatttatcca atcatgatat 8700 ttaagctttc ctgttttacc aatgaagttg gattatttgg tacttacccc aaatattttc 8760 taaatcaaaa tgaatttaca aatttatgcc tctttaaaaa ctcaagatta ccactttata 8820 ccaagggaag tagtgctgga agtttgccat taagtacctc cttgaattaa aaacacaaaa 8880 ttaagattta aacaatataa atcttggagt tatccaagcc ttttttggga agaactcttc 8940 cttcattata tgaaaacaat ttggtctatt atcaacacat tgttgtaaag tctgtaccct 9000 ctgaagacca aagtaagtag ctacagctcc gcaggcagct caggaaaagg tgaaacaaat 9060 cttgacatct ccaaacactg atttcccttg gctctgcgca ttgcctagga aggaaggggt 9120 tagggagcag tccctccatg agcattttac ccagtaatcc tcacatggta tgactcctaa 9180 accaaaagaa gtgaacaatt tgttctcttt tcacttaatt atgagtgttc aaaaaaagag 9240 gccgctaatt catcatgaat gacagttgta gctgcattac ggactcaacg attctttttc 9300 cttctttcca ggatgaacgc cagaataaaa tccaccagtt tccccagcct cagcctctag 9360 cccatcctta caccgagccc atcccttacc ccatccttcc acaaaacatc ctgcctcttg 9420 cccaggtccc tgtggtggtg cctcttcttc atcctgaagt aatgaaagat tccaaagcta 9480 aggagaccat tgttcccaag cgtaaaggaa tgcccttccc taaatctcca gcagagcctt 9540 ttgtggaagg ccagagccta actctcacca attttgaagg cctttctctg cctctgctcc 9600 agtccctgat gcaccagatt ccccagcctg ttcctcagac ccccatgttt gctcctcagc 9660 ccctgctgtc cctgcctcag gccaaagtcc tgcctgttcc ccagcaagtg gtgcccttcc 9720 cccagagaga tatgcccttc caggcccttc tgctctacca ggatcctcta cttggccctc 9780 tccgagggtt ctaccctgtg cctcaaccag ttgccccagt ttacaaccct gtaagtccaa 9840 gtttattcac tgtgctgttt cacttatgat gtttagttgc tgttagagta attaagcaag 9900 aactctagaa taaaagagac aatgaataat aagtggttcc aaaatgcaca tagtttagat 9960 agtgattctc aacatttgct acaaatagaa taaccaataa ctgggagatt tcctcccaaa 10020 tctcaaagtc caggattacc cacaaagatt cgacataatt gtacttacct ctatatgtag 10080 gggaaattga atattgggaa gagataattt cagggattat gatttaattg gtctgttgag 10140 aattgagata aagagagagg atttaaggta tactaaagcc agaattaaat gtaacaatct 10200 catgtggctt ggaataacaa acctaagaag gtttgttatt atctgcaatt ttgaagtttt 10260 ccttatgtgc aattatttcc ccacatgcct catttcacat cttgttttga tatatgaaca 10320 tttgagggca agatactgag atgcctattt caatactcat ggaatactca gggaaattgt 10380 tcttgccaaa agatgaactg tatatttatt cgctttttta ttttttaatt tttaaggtct 10440 aagaggattt caaagttaat gccctctcct cacttttggt aagctttaag agtttgaaaa 10500 tcagattaat catttttata gttagtatct ttctgcactt cattctcctg gataagccta 10560 aaataaaggc aaattccatc aatatggcaa cctaattatt aattatcaat ttattctcat 10620 tgattgatta tttactgaat cttttaatta gctatgaatc ttttctattt caaatcattc 10680 aaaattgtat ttatgtactg ttggcagatt tgattggttt tctttcagtt gcctatacac 10740 ttacacttga ttttcatcat tgttatggaa aactaaaaat aatttatttt acttttatgt 10800 aaatatagta gagctatttt aaagaccaac tgcattcaca tttctaactt aggctttatg 10860 aacttcaagt atttttaatc tcatttaaaa tgtataaatt ttctcttaat tcatgagtca 10920 aaatgcagtt cactagtcca gatataaagc ttaaaaaagg aagtcaatac agttttgaga 10980 ttcttaaaac acacaccctt ttgtgatcat gatatagtaa acattttaat aaaacaattc 11040 taggtgagat gatatttttt cctagaggaa cttttatatg cctccaagat agggcacagc 11100 atggaacatt tgtaataaaa tttctcttat gaattagtca tatcagaatt acagagggga 11160 agagattagt tttataacat aattaattct atatttgttc tctattccgc agaattgact 11220 gcgactggaa atgtgacaac ttttcaatct ttgcatcatg ctaccaaata atttttaaat 11280 gagtctacat gaaaaaaatg aaactttatt ctcttattta ttttatgctt tatatggcct 11340 tcatcttaat ttgaatttga ctcagaaatt ctctattttc aaaattttaa ttcaactaat 11400 agcacagaat ttcaattttg agttggaaat accatgaata tttcaaaaat atgtataaaa 11460 ataatttatg gaattataat ttcctaacca gtcatttcaa taaattaatc cttaggc 11517 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer <400> 2 aaaggacttg atcgccatga agctcctcat 30 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense primer <400> 3 aatcctctta gacaaggttg taaactgggg 30 <210> 4 <211> 722 <212> DNA <213> Sus scrofa <220> <221> gene <222> (1)..(722) <223> Porcine beta-casein cDNA <400> 4 aaaggacttg atcgccatga agctcctcat ccttgcctgc ctcgtgactc ttgcccttgc 60 aagagcgaag gaagaactca atgcatctgg tgagactgtg gaaagccttt caagcagtga 120 ggaatctatt actcacatca gcaaggagaa aattgagaag cttaagcggg aggaacaaca 180 acaaacagag gatgaacgcc agaataaaat ccaccagttt ccccagcctc agcctctagc 240 ccatccttac accgagccca tcccttaccc catccttcca caaaacatcc tgcctcttgc 300 ccaggtcccg gtggtggtgc ctcttcttca tcctgaagta atgaaagatt ccaaagctaa 360 ggagaccatt gttcccaagc gtaaaggaat gcccttccct aaatctccag cagagccttt 420 tgtggaaggc cagagcctaa ctctcaccga ttttgaaggc ctttctctgc ctctgctcca 480 gtccctgatg caccagattc cccagcctgt tcctcagacc cccatgtttg ctcctcagcc 540 cctgctgtcc ctgcctcagg ccaaagtcct gcctgttccc cagcaagtgg tgcccttccc 600 ccagagagat atgcccttcc aggcccttct gctctaccag gatcctctac ttggccctct 660 ccgagggttc taccctgtgc ctcaaccagt tgccccagtt tacaaccctg tctaagagga 720 tt 722 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer <400> 5 cccactattt cctgattctt gattaacttt 30 <210> 6 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense primer <400> 6 tgttgttcct cccgctttag cttctcaatt 30 <210> 7 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer <400> 7 gacttgatcg ccatgaagct cctcatcctt 30 <210> 8 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense primer <400> 8 gcctaaggat taatttattg aaatgactgg 30

Claims (3)

1. 서열번호 1의 염기서열로 이루어지는 돼지 β-카제인 게놈 DNA(porcine β-casein genomic DNA).
2. 제1항에 따른 돼지 β-카제인 게놈 DNA를 포함하는 재조합 벡터.
3. 제2항에 따른 재조합 벡터로 형질전환된 미생물.

Images