KR100820009B1 - Anti-oxidant and anti-inflammatory chinese cosmetic composition comprising diospyros kaki, glycyrrhiza glabra, opuntia ficus-indica, and morus alba and method for preparing the same - Google Patents

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정대현
모상현
이정훈
김수정
최선애
김현
박문정
손영기
이덕성
이건봉
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(주)바이오에프디엔씨
(주)나투젠
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Abstract

An oriental herb cosmetic composition for anti-oxidizing and skin soothing is provided to show no toxicity against keratinocyte and excellent chemical antioxidizing capability and oxidation inhibitory capacity of an enzyme, to require no antiseptic for a cosmetic capable of inducing skin irritation, and be effective for soothing damaged skin. A method for preparing an oriental herb cosmetic composition with anti-oxidizing and skin-soothing activities comprises the steps of: (a) extracting a mixture consisting of 20-40 parts by weight of Diospyros kaki, 20-40 parts by weight of Glycyrrhiza glabra, 10-30 parts by weight of Opuntia ficus-indica, and 10-30 parts by weight of Morus alba with hot water; and (b) heating the hot water extract to generate stem and cooling the stem to obtain distillate.

Description

감잎,감초,백년초,및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 화장료 조성물 및 그 제조방법{Anti-oxidant and Anti-inflammatory Chinese Cosmetic Composition Comprising Diospyros kaki, Glycyrrhiza glabra, Opuntia ficus-indica, and Morus alba and Method for Preparing the Same} Anti-oxidant and Anti-inflammatory Chinese Cosmetic Composition Comprising Diospyros kaki, Glycyrrhiza glabra, Opuntia ficus-indica, and Morus alba and Method for Preparing the Same}

도 1은 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 첨가 비율에 따른 인간 각질형성 세포에 대한 비세포 독성을 측정한 그래프이다. 1 is a graph measuring the non-cytotoxicity of human keratinocytes according to the addition ratio of the antioxidant and skin soothing herbal composition according to the present invention.

도 2는 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 항산화능에 의한 항염 및 피부 진정효과를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인한 그래프이다. Figure 2 is a graph confirming the anti-inflammatory and skin sedation effect by the antioxidant activity of the antioxidant and skin soothing herbal composition according to the present invention by the free radical scavenging ability of DPPH.

도 3은 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 에틸리놀리에이트의 산화에 대한 항산화능 정도를 측정한 그래프이다. Figure 3 is a graph measuring the degree of antioxidant capacity against the oxidation of ethyl linoleate of the herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention.

도 4는 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 L-DOPA(L-3,4-dihydrophenylalanine)의 산화 반응을 억제하는 항산화능 정도를 측정한 그래프이다. Figure 4 is a graph measuring the antioxidant activity of inhibiting the oxidation reaction of L-DOPA (L-3,4-dihydrophenylalanine) of the herbal composition for antioxidant and skin calming according to the present invention.

도 5은 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 자체 정균능을 측정한 그래프이다 (A 및 B: 본 발명에 따른 한방 조성물 제조 직후의 세균 및 진균; C 및 D: 상온에서 30일간 방치 후 세균 및 진균).Figure 5 is a graph measuring the self bacteriostatic ability of the antioxidant and skin soothing herbal composition according to the present invention (A and B: bacteria and fungi immediately after preparation of the herbal composition according to the present invention; C and D: left for 30 days at room temperature After bacteria and fungi).

본 발명은 감잎, 감초, 백년초, 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, ⅰ) 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 혼합하여 열수추출한 다음 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하거나, ⅱ) 감잎, 감초, 백년초 및 상백피 각각을 열수추출한 다음, 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 제조되는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 제조방법 및 그 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an anti-oxidant and skin soothing herbal composition containing persimmon leaf, licorice, baeknyeoncho, and evergreen skin, and more specifically, iii) hot water extract by mixing persimmon leaf, licorice, baeknyeoncho and baekbaekpi Heat the hot water extract to cool the resulting steam to obtain a distillate, or ii) hot water extract each of persimmon leaf, licorice, perennial herb and lettuce, and then heat the respective hot water extract to cool the resulting steam to cool each distillate. It relates to a method for producing an antioxidant and skin soothing herbal composition prepared by mixing after obtaining and the composition.

“아토피”는 1925년 코카(Coca)라는 학자가 처음으로 사용한 용어로, 음식물이나 기타 흡입성 물질에 대한 선천성 알러지(allergy) 반응을 의미한다. “아토피(atopy)"는 그리스어로 "알 수 없는", "괴상한" 이라는 뜻으로 그 의미에서도 알 수 있듯이 정확한 원인은 알 수 없고, 치료가 힘든 난치성 질환이다. 아토피성 피부염 (atopic dermatitis)은 보통 습진(eczema), 고초열(hayfever), 천식(asthma), 알레르기(allergy) 등을 잘 일으키는 유전적 경향을 보이는 체질을 가진 사람에게서 많이 발생되는 만성 피부염으로 흔히 태열이라 부르고 유아 습진으로 시작, 만성, 재발성 경과를 보인다. “Atopy” is the first term used by the scholar Coca in 1925 and refers to the congenital allergy response to food or other inhalable substances. "Atopy" means "unknown" or "weird" in Greek, and as the meaning suggests, the exact cause is unknown and difficult to treat.Atopic dermatitis is usually Chronic dermatitis, commonly found in people with genetic predispositions that cause eczema, hayfever, asthma, allergy, etc. , Relapse progress.

아토피의 발생 원인은 아직까지 확실히 밝혀져 있지 않다. 다만 유전적, 면 역학적 요인이 깊숙이 관계되리라 생각되며 동시에 환경적, 사회적, 정신적 요인 등 다양한 주변인자들도 연관이 있으리라고 생각되고 있다.The cause of atopy is not yet clear. However, genetic and immunological factors are thought to be deeply related, and at the same time, various peripheral factors such as environmental, social, and mental factors may be related.

소아와 성인기의 면역 체계의 특성이 아토피의 발생 및 병리적 특성과 연관될 수 있다. 우리나라 신생아의 70∼80%가 태열을 경험한다. 이들 중의 대부분은 자연스럽게 소아기에 접어들면서 치료되는 경향을 보인다. 그러나 일부 보고에 의하면 이들 중의 20∼30%는 소아 아토피로 진행이 된다. 이러한 현상은 면역계의 자연스러운 변화라고 생각이 되는데, 즉 유아기의 특이면역이 소아기에 접어들면서 자연면역이 회복이 되면서 아토피는 치유가 되는 것이다. 그래서 이 시기의 면역학적인 특징은 자연면역이 활발하게 성장을 하는 시기라고 볼 수 있다. 즉, 아이들이 감기와 같은 발열증상들을 경험 하면서 자연 면역계가 성장하는 과정인 것이다. 그러므로 아이들이 감기나 발열증상이 있을 때 해열제나 항생제를 오·남용하는 것은 바람직한 것이 아니다. 성인의 경우, 이 시기는 자연 면역계와 특이 면역 모두 어느 정도 성숙되어 있는 시기다. 다시 말하자면 건강하든 그렇지 않든 간에 면역계는 어느 정도는 고착화되어 있는 것이다. 또한 성인 아토피 피부염 환자의 경우에는 특이면역 중에서 TH2 세포가 활성화 되어있는 것을 볼 수 있다. 그래서 성인 아토피 환자들이 소아들에 비교해서 치료와 예후에 있어서 어려운 면역학적 이유가 여기에 있는 것이다. 즉 소아들은 아직은 미성숙한 단계이기 때문에 건강한 면역시스템으로 변화를 할 수 있는 가능성이 많지만, 성인의 경우에는 이미 면역계가 고착화 되어가는 과정에 있으므로 어려운 것이다. Characteristics of the immune system in children and adulthood may be associated with the development and pathological characteristics of atopy. Seventy to eighty percent of newborns in Korea experience febrile fever. Most of these tend to be cured naturally in childhood. However, some reports show that 20-30% of them progress to pediatric atopy. This phenomenon is thought to be a natural change of the immune system, that is, atopic dermatitis is healed as natural immunity recovers as childhood immunity enters childhood. Therefore, the immunological characteristics of this period can be seen as a period of active growth of natural immunity. That is, the natural immune system grows as children experience fever symptoms such as colds. Therefore, it is not desirable to misuse antipyretics or antibiotics when children have a cold or fever. In adults, this is a period of maturity, both natural and specific. In other words, whether it is healthy or not, the immune system is somewhat fixed. In addition, in the case of adult atopic dermatitis, it can be seen that TH2 cells are activated in specific immunity. This is why immunological reasons for treatment and prognosis are difficult for adult atopic patients compared to children. In other words, children are still immature, so there is a lot of possibility to change to a healthy immune system, but in adults, the immune system is already in the process of being fixed.

오늘날 아토피 피부염의 치료는 약물투여 방법에 따라 외용 방법, 내복 방 법, 그리고 면역 방법 등이 사용되고 있다. 외용 방법으로는 피부를 세정하는 방법, 스테로이드 계열의 연고제를 바르는 방법, 그리고 보습제를 바르는 방법등이 사용되고 있다. 특히 스테로이드는 일종의 부신피질 호르몬제로써 효과는 매우 우수하나 장시간 사용 시 부작용이 크므로 유의해야 한다. 보습제는 건조한 피부에 수분을 공급 및 유지하기 위한 화장품류를 바르는 것을 말한다. 내복 방법으로 주로 사용하는 아토피 치료약은 항히스타민제, 스테로이드계 의약품 혹은 한방 소재 치료약이 주로 사용되고 있다. 면역 방법은 신체의 면역력을 자연적으로 길러줄 수 있도록 주변 환경을 조정하거나 유도하는 것이다. Today, the treatment of atopic dermatitis depends on the drug administration method, such as external methods, oral methods, and immune methods. External methods include washing the skin, applying a steroid-based ointment, and applying a moisturizer. In particular, steroids are a type of corticosteroids, which are very effective, but should be noted because of their long-term side effects. Moisturizer refers to the application of cosmetics to moisturize and maintain dry skin. Anti-histamines, steroid-based medicines or herbal medicines are mainly used as atopic drugs used as an oral method. Immune methods are ones that adjust or induce the environment to naturally nourish the body's immunity.

이에 반해 한의학에서는 아토피 피부염이 생기는 원인에 대해 '몸 안에 뭉친 열이 독을 만들었기 때문'으로 보고 있다. 몸속 깊숙이 숨어 있던 열독이 피부층까지 올라와 각종 트러블을 일으키는 것이다. 따라서 열독이 풀리지 않는 한 아토피 피부염은 계속 재발할 수밖에 없다. 특히 임신 중에 맵고 짠 음식이나 과도한 카페인, 알코올, 인스턴트, 기름진 음식 등을 많이 섭취했거나, 자궁 안에 노폐물이 많이 쌓였거나, 자궁이 약한 경우 태내에 열이 쌓여 태아에게 아토피 피부염을 유발한다고 보고 있다. 열독은 피부 이상만을 일으키는 것이 아니라 몸의 면역력을 떨어뜨려 각종 합병증을 유발시키므로 단순히 증상만 치료하는 것이 아니라 아토피 피부염의 원인을 찾아 근본적인 치료를 해야 한다고 주장한다. 즉, 아토피 피부염의 원인이 되는 열독을 풀어 주고, 알레르기에 대항할 수 있는 자생력을 키우는 등 근본치료를 해야 재발을 막을 수 있다고 이야기 하고 있다.On the other hand, in Oriental medicine, the cause of atopic dermatitis is thought to be due to the fever inside the body. The heat poison that was hiding deep inside the body comes up to the skin layer and causes various troubles. Therefore, atopic dermatitis will continue to recur unless heat poisoning is resolved. Especially during pregnancy, spicy and salty foods, excessive caffeine, alcohol, instant, oily foods, ingested a lot of waste, uterus is a lot of waste, or if the uterus is weak in the fetus is said to cause atopic dermatitis in the fetus. Not only does it cause skin abnormalities, but it also lowers the body's immunity and causes various complications. Therefore, it does not merely treat symptoms but claims to find the cause of atopic dermatitis. In other words, it is said to be able to prevent recurrence by releasing the heat poison that causes atopic dermatitis and improving the self-sustaining ability to fight allergies.

다양한 아토피 피부염의 발병 원인들 중 최근 중요도가 높아지고 있는 점이 비정상적 체내 항산화 시스템과 과도한 반응성 자유라디칼의 발생이다. 원래 자유라디칼은 면역 시스템의 일환으로 체내로 침투한 외인성 병원균을 소멸시키는 방어 기작으로도 작용하나 아토피성 피부염 환자의 체내 및 피부에서는 발생 민감도가 크게 증가되어 과도한 자유라디칼이 발생되어 피부 보호막 혹은 피부 세포를 손상시키는 것으로 알려져 있다. 천연 소재인 한방 식물 소재에는 카페인산 유도체들, 플라보노이드류, 그리고 알칼로이드류가 풍부하게 함유되어 있다. 또한 발생된 자유라디칼과 반응하여 자유라디칼을 제거할 수 있는 다양한 유용성분들이 들어있다.Among the causes of the development of various atopic dermatitis, the recent increase in importance is the occurrence of abnormal body antioxidant system and excessive reactive free radicals. Originally, free radicals act as a defense mechanism to extinguish exogenous pathogens penetrating into the body as part of the immune system, but the sensitivity of the free radicals is greatly increased in the body and skin of patients with atopic dermatitis, resulting in excessive free radicals. It is known to damage. Natural herbal medicines are rich in caffeine derivatives, flavonoids, and alkaloids. It also contains various useful components that can react with the generated free radicals to remove them.

이러한 한방 복합체들이 보이는 자유라디칼 소거능은 (1) 개시작용을 하는 라디칼을 소거함으로써 연쇄반응의 개시를 억제한다. (2) 촉매작용을 하는 전이금속과 결합함으로써 라디칼 생성의 개시반응을 억제한다. (3) 개시작용을 하는 라디칼로 전환될 수 없도록 과산화물을 분해한다. (4) 활성을 가진 라디칼에 의한 계속된 수소탈취를 할 수 없도록 연쇄반응을 차단시키다. 또한 이러한 항산화 작용은 한방 식물 소재들에 공존하는 다양한 유용 생리물질들과 상승작용을 통해 라디칼의 생성을 차단, 생성된 라디칼의 소거, 및 손상된 세포의 회복 등의 다양한 작용을 동시에 수행하는 다기능성 원료로써 그 이용 가능성이 증대되고 있다.The free radical scavenging ability seen by these herbal complexes inhibits the onset of the chain reaction by scavenging radicals that initiate (1) initiation. (2) It inhibits the initiation reaction of radical formation by binding with the transition metal which catalyzes. (3) The peroxides are decomposed so that they cannot be converted into radicals which initiate the action. (4) Block the chain reaction to prevent continued hydrogen deodorization by active radicals. In addition, this antioxidant action is a multifunctional raw material that simultaneously performs various actions such as blocking the generation of radicals, eliminating the generated radicals, and repairing damaged cells through synergy with various useful physiological substances coexisting in herbal plant materials. As a result, its availability is increasing.

한편, 감잎에 관한 종래 특허로는 대한민국특허출원 제10-2005-0020260호 "항산화물질을 함유하는 식물체분말 또는 추출물을 포함하는 가축 사료 첨가제 조성물", 대한민국특허출원 제10-2002-0073180호 "숙취제거 및 피로회복을 위한 생약 조성물 및 이를 이용한 건강 보조식품"에 관한 것으로 감잎을 포함한 피부 진정용 항산화조성물에 관한 연구는 없었으며, 감초에 관한 종래 특허로는 피부노화 방지 에 관한 대한민국등록특허 제10-564108호가 있으나, 피부 진정에 관한 조성물 특허는 없으며, 백년초 또는 상백피를 포함한 종래의 한방 조성물 성분이 일부였을 뿐이며, 특히, 대한민국특허출원 제10-2003-2827호 "아토피 피부용 한방 조성물" 또한 단순히 열수추출에 의한 제조여서 피부염에 자극을 주는 유해인자를 차단하지 못하는 단점이 있었다.On the other hand, conventional patents on persimmon leaves include Korean Patent Application No. 10-2005-0020260 "Livestock feed additive composition comprising plant powder or extract containing antioxidants," Korea Patent Application No. 10-2002-0073180 "Hangover Herbal composition for removal and recovery of fatigue and health supplements using the same ", there was no study on the skin sedating antioxidant composition including persimmon leaves, the conventional patent for licorice is Korea Patent Registration No. 10 on skin aging prevention -564108, but there are no composition patents related to skin soothing, only a portion of the traditional herbal composition including baeknyeoncho or baekryepi, especially, Korean Patent Application No. 10-2003-2827 "Atopic composition for atopic skin" is also simply hot water Because of the manufacture by extraction there was a disadvantage that can not block harmful factors stimulating dermatitis.

이에 본 발명자들은 열수 추출 시 일정 온도 이상에서 휘발되는 증류성분을 냉각 회수하면, 정유성분, 방향족 성분, 그리고 항산화 성분이 풍부한 열수 증류 분획을 확보할 수 있다는 것을 확인하고, 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 항산화능이 강력하고, 피부 진정효과가 뛰어난 한방 조성물(INFLAX)을 개발하고, 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors confirmed that by cooling and recovering the distillation component volatilized at a predetermined temperature or more during hot water extraction, a hydrothermal distillation fraction rich in essential oil components, aromatic components, and antioxidant components can be obtained, and the keratinocytes can be obtained. It has been developed the herbal composition (INFLAX) is not toxic to, strong antioxidant capacity, excellent skin soothing effect, and completed the present invention.

결국, 본 발명의 주된 목적은 감잎, 감초, 백년초, 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 제조방법 및 그 조성물을 제공하는데 있다. After all, the main object of the present invention is to provide a method for producing an herbal composition for antioxidant and skin soothing containing persimmon leaf, licorice, baeknyeoncho, and baekryepi.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 제조방법을 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides a method for producing an herbal composition for antioxidant and skin soothing, containing persimmon leaf, licorice, zinnia and baekpi skin comprising the following steps:

(a) 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및(a) extracting hot water by mixing persimmon leaves, licorice, baeknyeoncho and lettuce; And

(b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여한방 조성물을 제조하는 단계. (b) preparing a herbal composition by cooling the steam generated by heating the hot water extract to obtain a distillate.

본 발명은 또한, 다음의 단계를 포함하는 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 제조방법을 제공한다:The present invention also provides a method for preparing an herbal composition for antioxidant and skin soothing, containing persimmon leaf, licorice, zinnia and zinnia skin comprising the following steps:

(a) 감잎, 감초, 백년초 및 상백피 각각을 열수추출하는 단계; 및(a) hydrothermal extraction of each of persimmon leaves, licorice, baeknyeoncho and lettuce; And

(b) 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 한방 조성물을 제조하는 단계.(b) preparing the herbal composition by cooling the steam generated by heating the respective hot water extracts to obtain respective distillates and mixing them.

본 발명에 있어서, 감잎 20~40중량부, 감초 20~40중량부, 백년초 10~30중량부 및 상백피 10~30중량부를 혼합하는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, 20 to 40 parts by weight of persimmon leaves, 20 to 40 parts by weight of licorice, 10 to 30 parts by weight of baeknyeoncho, and 10 to 30 parts by weight of lettuce may be mixed.

본 발명은 또한, 상기 방법으로 제조되고, 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 제공한다.The present invention also provides an herbal composition for antioxidant and skin soothing, prepared by the above method, and containing persimmon leaf, licorice, zinnia herb and lettuce.

본 발명에 있어서, 상기 한방 조성물은 감잎 20~40중량부, 감초 20~40중량부, 백년초 10~30중량부 및 상백피 10~30중량부를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the herbal composition may be characterized by containing 20 to 40 parts by weight, persimmon leaf 20 to 40 parts by weight, 10 to 30 parts by weight of baeknyeoncho and 10 to 30 parts by weight of lettuce.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 획득하기 위하여, 감잎 300g, 감초 300g, 백년초 200g 및 상백피 200g의 한약재들을 정제수에 충분히 세척한 후, 혼합하였다. 열탕증류기에서 20L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간동안 80 ~100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻는다. 추출 후, 사용된 한약재들을 제거하 고 열수 추출물을 90 ∼ 100℃로 가열하면서, 4 ∼ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 한방 증류액을 획득하였다. 획득된 한방 복합체 증류액을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거하고, 상등액을 아래의 실험에 사용하였다. 상기 한방 조성물은 각각의 한약재들을 상기와 같은 방법으로 먼저 한방 증류액을 획득한 후, 표 1에 제시된 함량비로 혼합하여도 동일한 항산화 및 피부 진정효과를 나타내었다.In order to obtain the herbal composition for antioxidant and skin calming according to the present invention, the herbal medicines of persimmon leaf 300g, licorice 300g, baeknyeoncho 200g and 200g of baekpi skin were sufficiently washed in purified water and then mixed. Hot water extract is obtained by heating to 80-100 ℃ for 8-48 hours using 20L purified water in a boiling water distillation machine. After extraction, the herbal medicines used were removed and the hot water extract was heated to 90 to 100 ° C., and an herbal distillate was obtained using a cold water cooling tube at 4 to 10 ° C. The obtained herbal composite distillate was centrifuged at 4 ° C. for 30 minutes at 12000 rpm to remove solids, and the supernatant was used for the following experiment. The herbal composition showed the same antioxidant and skin soothing effect even if the respective herbal medicines were first obtained in the same manner as described above, and then mixed in the content ratio shown in Table 1.

아토피성 피부염의 원인는 매우 다양하나 주로 면역계의 이상 반응 혹은 과반응에 의해 비롯된다. 자유라디칼은 면역계에서도 주요 방어수단으로 쓰이며 외부에서 체내로 침투한 세균을 용균하는 등의 순기능을 수행한다. 그러나 아토피성 피부염 환자에서는 일반적으로 외부자극에 대한 활성산소가 과잉 생산되어 피부 보습층을 파괴하여 피부를 건조하게 하고, 외부 자극에 민감한 면역 반응을 보이는 병리적 인자로 작용하게 된다. 또한 아토피성 피부염을 갖는 환자의 경우 그러한 활성산소를 분해하는 다양한 항산화 시스템이 감소되어있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본 발명에 따른 한방 조성물이 항산화능을 보임으로써 아토피성 피부염을 개선할 수 있는지는 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인가능하다.The causes of atopic dermatitis vary widely, but are mainly caused by adverse or overreaction of the immune system. Free radicals are also used as a major defense in the immune system and perform a net function such as lysing bacteria that have penetrated into the body from the outside. However, in patients with atopic dermatitis, the active oxygen for external stimulation is generally overproduced, destroying the skin moisturizing layer and drying the skin, and acting as a pathological factor showing an immune response sensitive to external stimuli. It is also known that in patients with atopic dermatitis, various antioxidant systems that degrade such free radicals are reduced. Therefore, it can be confirmed by the free radical scavenging ability of DPPH whether the herbal composition according to the present invention can improve atopic dermatitis by showing antioxidant capacity.

또한, 아토피 환자의 피부는 비정상적인 미생물 천이가 유발되며 이는 아토피가 만성 아토피염 피부질환으로 전환되어 피부상에 고착되는 중요한 요인이 된다. 아토피성 피부염의 특징 중의 하나로 피부 천연의 미생물 제어능이 현격히 떨어지고, 정상인의 피부에서 보이는 미생물 천이가 크게 바뀌는 것을 들 수 있다. 정상인의 피부에는 인간 천연 항생물질인 beta-defensin과 cathelicidine이라는 펩 타이드성 물질이 분비되나, 아토피성 피부염 환자의 피부에는 그것들의 발현이 현격히 감소됨이 보고되었다. 또한 정상인의 피부에서는 거의 천이를 보이지 않는 아토피 병원균 Staphylococcus aureus, 효모 Malazessia furfur 등이 높은 비율로 발생함이 보고되고 있다. 이에, 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 방부제 처리 없이도 미생물이 생존되지 않는 정균능이 세균 및 진균에 대하여 존재하는지를 확인가능하다. In addition, the skin of atopic patients causes abnormal microbial transition, which is an important factor in the atopy is converted to chronic atopic dermatitis and fixed on the skin. One of the characteristics of atopic dermatitis is that the natural microorganism control ability of the skin is greatly reduced, and the microbial transition seen in normal skin is greatly changed. Peptides such as beta-defensin and cathelicidine, which are human natural antibiotics, are secreted into normal human skin, but their expression is significantly reduced in the skin of patients with atopic dermatitis. In addition, the atopy pathogen Staphylococcus, which shows little transition in normal skin aureus , yeast Malazessia It is reported that furfur occurs at a high rate. Thus, the herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention can be confirmed whether the bacteriostatic ability that microorganisms do not survive without preservative treatment is present against bacteria and fungi.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.

특히, 하기 실시예에서는 표 1에 제시된 함유량에 따른 제조만이 기재되어 있으나, 이를 포함하여 상기 한방 조성물은 감잎 20~40중량부, 감초 20~40중량부, 백년초 10~30중량부 및 상백피 10~30중량부의 범위로 혼합하는 것 또한 당업자에게 용이할 것이다. Particularly, in the following examples, only the preparation according to the contents shown in Table 1 is described, but the herbal composition including this includes 20 to 40 parts by weight of persimmon leaves, 20 to 40 parts by weight of licorice, 10 to 30 parts by weight of baeknyeoncho, and Sangbaekpi 10 Mixing in the range of -30 parts by weight will also be readily available to those skilled in the art.

실시예Example 1: 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 제조 1: Preparation of antioxidant and skin soothing herbal composition according to the present invention

본 발명에서 사용된 한약재들은 선행시험을 통하여 단일 한방 증류액으로서 세포 독성을 보이지 않는 4가지로 구성되어 있다. 그 생약명, 사용부위, 학명, 함 유량은 표 1과 같다.The herbal medicines used in the present invention are composed of four kinds of single herbal distillates that do not show cytotoxicity through prior tests. The name of herbal medicine, used part, scientific name and contents are shown in Table 1.

한약재명Chinese medicine renaming 학명 및 사용부위Scientific name and use area 함유량 (%)Content (%) 감잎Persimmon leaf Diospyros kaki / leafDiospyros kaki / leaf 30 %30% 감초licorice Glycyrrhiza glabra / rootGlycyrrhiza glabra / root 30 %30% 백년초Centennial Opuntia ficus-indica / fruitOpuntia ficus-indica / fruit 20 %20% 상백피White skin Morus alba / barkMorus alba / bark 20 %20%

본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 획득하기 위하여, 상기 표 1의 한약재들를 정제수에 충분히 세척한 후, 상기에 제시된 함량비대로 혼합하였다. 구체적으로는, 감잎 300g, 감초 300g, 백년초 200g 및 상백피 200g의 한약재들을 정제수에 충분히 세척한 후, 혼합하였다. 열탕증류기에서 20L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간 정도, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, 사용된 한약재들을 제거하고 열수 추출물을 90 ∼ 100℃로 가열하면서, 4 ∼ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 한방 증류액을 획득하였다. 획득된 한방 복합체 증류액을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거하고, 상등액을 아래의 실험에 사용하였다. 상기 한방 조성물은 각각의 한약재들을 상기와 같은 방법으로 먼저 한방 증류액을 획득한 후, 표 1에 제시된 함량비로 혼합하여도 동일한 항산화 및 피부 진정효과를 나타내었다.In order to obtain the herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention, the herbal medicines of Table 1 were sufficiently washed in purified water, and then mixed in the content ratios given above. Specifically, 300 g of persimmon leaves, 300 g of licorice, 200 g of baeknyeoncho and 200 g of baekryepi were sufficiently washed in purified water and then mixed. In a boiling water distillation machine, 20L purified water was heated to 80 to 100 ° C. for 8 to 48 hours to obtain a hot water extract. After extraction, the herbal medicines used were removed and the hot water extract was heated to 90 to 100 ° C., and an herbal distillate was obtained using a cold water cooling tube at 4 to 10 ° C. The obtained herbal composite distillate was centrifuged at 4 ° C. for 30 minutes at 12000 rpm to remove solids, and the supernatant was used for the following experiment. The herbal composition showed the same antioxidant and skin soothing effect even if the respective herbal medicines were first obtained in the same manner as described above, and then mixed in the content ratio shown in Table 1.

실시예Example 2: 본 발명에 따른 한방 조성물의 세포 독성 시험 2: cytotoxicity test of herbal compositions according to the invention

(1) 인간 각질형성 세포 배양(1) Human keratinocyte cell culture

인간 각질형성 세포인 HaCaT 세포주(Cell Lines Service, Germany)는 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양되었다. 배양 용기의 85 ~ 90%의 면적만큼의 배양도를 보이면, trypsin 처리로 세포를 탈착시켜 계수 후, 5 × 103 cells/cm2으로 계대 배양하였다. 세포의 배양에는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO, Cat. No., 26140-079, USA)과 100 U/ml penicillin 및 100 ㎍/ml streptomycin이 첨가된 Delbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, GIBCO, Cat. No. 11995-065, USA)을 사용하였다. 계대 배양을 위하여 75 T-flask (NUNC, Cat. No. 156499, Danmark)가 사용되었으며, 세포 독성 시험을 위해서는 24 well plate (NUNC, Cat. No., 142475, Danmark)가 사용되었다.Human keratinocytes, HaCaT cell line (Cell Lines Service, Germany), were cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator. When the culture degree of 85 to 90% of the culture vessel was shown, the cells were detached by trypsin treatment, counted, and then subcultured at 5 × 10 3 cells / cm 2 . Cell cultures included Delbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, GIBCO, Cat) with 10% Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO, Cat.No., 26140-079, USA) and 100 U / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. No. 11995-065, USA). 75 T-flask (NUNC, Cat. No. 156499, Danmark) was used for subculture, and 24 well plate (NUNC, Cat. No., 142475, Danmark) was used for cytotoxicity test.

(2) 세포 독성 시험(2) cytotoxicity test

MTT 분석법은 살아있는 세포에서만 활성을 보이는 미토콘드리아의 탈수소 효소 작용을 이용하여 최종적으로 formazan이라는 색소 산물을 형성시켜 그것을 측정함으로 시험물질의 세포 독성 정도를 측정하는 방법이다.MTT assay is a method of measuring the cytotoxicity of a test substance by finally forming a pigment product called formazan by using the dehydrogenase action of mitochondria, which is active only in living cells.

실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 장기간 사용 시에도 피부자극 없이 개선 효과를 보일 수 있는 지를 확인하기 위하여, 인간 각질형성 세포에 대한 세포 독성 유무를 시험하였다. 상기에서 배양된 인간 각질형성 세포를 24 well plate에 5 × 103 cells/well 씩 동일하게 헤마사이토미터(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30%만큼 배양되면, 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 5% ~ 0.1% 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT, Sigma M5655, USA) 용액 (2.5 mg/ml)을 50㎕ 첨가하고 3시간 추가로 배양하였다. 그 후, 세포 배양액을 전부 버리고, 200㎕의 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA)를 각 well 당 200㎕ 처리하여 교반한 후, 100㎕ 씩을 96 well로 취하여 효소 결합 면역 흡수법(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.In order to confirm whether the herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention prepared in Example 1 can show an improvement effect without skin irritation even after long-term use, it was tested for cytotoxicity against human keratinocytes. Human keratinocytes cultured in the above were counted using a hemacytometer at 5 × 10 3 cells / well in 24 well plates and then aliquoted. After 48 hours of incubation in DMEM containing 10% FBS and incubated by 25 to 30% of the surface of the culture vessel, the herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention was replaced with FBS-free DMEM containing 5% to 0.1%. Incubation was further performed for 24 hours. After incubation, 50 μl of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT, Sigma M5655, USA) solution (2.5 mg / ml) was added and incubated for an additional 3 hours. Subsequently, discard all the cell cultures, treat 200 µl of dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA) with 200 µl of each well and stir, and then take 100 µl into 96 wells for enzyme-linked immunosorbent absorption (Enzyme-Linked). Absorbance was measured at 570 nm with Immunosorbent Assay (ELISA). The degree of cytotoxicity was expressed as a percentage based on the absorbance intensity of the control group using pure water.

그 결과, 웰 (well) 당 초기 배양 5 × 103 세포들이 배양용기 표면적의 25 ~ 30% 만큼 배양된 시점에서 10% 까지의 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 첨가하여 대조군과 비교한 세포 독성은 도 1에 나타난 바와 같다. 10%까지 처리한 결과 무처리군에 비해서 92.3 ± 2.6%의 증식 정도를 보였으나, 통계적으로 유의적이진 않았다. 또한 5%, 1%, 그리고 0.5% 처리 시 각각 92.7 ± 2.8%, 99.5 ± 3.7%, 그리고 100.3 ± 4.7%로 무처리군가 통계적인 차이가 없었다. 따라서, 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물은 장기간 사용하여도 세포독성에 의한 피부자극이 유발되지 않음을 알 수 있었다.As a result, when the initial cultured 5 × 10 3 cells per well were cultured by 25-30% of the surface of the culture vessel, up to 10% of the antioxidant and skin soothing herbal compositions were added and the cytotoxicity compared to the control group was As shown in FIG. Treatment up to 10% showed a proliferation of 92.3 ± 2.6% compared to the untreated group, but it was not statistically significant. There was no statistical difference in the untreated group with 92.7 ± 2.8%, 99.5 ± 3.7%, and 100.3 ± 4.7%, respectively. Therefore, it was found that the herbal composition for antioxidant and skin calming according to the present invention does not cause skin irritation due to cytotoxicity even after long-term use.

실시예Example 3: 본 발명에 따른 한방 조성물의  3: of the herbal composition according to the invention DPPHDPPH 를 이용한 항산화 시험Antioxidant Test

실시예 1에서 제조된 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 항산화능 정도를 조사하였다. 화합물 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA)는 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생한다. 제조된 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물과 일정 비율로 혼합하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지를 확인하였다. 에탄올을 0.4 ml에 에탄올로 제조된 0.1 mM DPPH 용액 0.5 ml 그리고 정제수를 이용하여 최종농도가 10% ~ 0.5%가 되게 한방 조성물을 함유하는 시험물질 0.1 ml을 첨가하였다. 10초간 강하게 교반하고, 냉암소에서 30분간 보관하였다. 효소결합면역흡수법 (ELISA)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.The antioxidant activity of the antioxidant and skin soothing herbal compositions prepared in Example 1 were investigated. Compound 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA) generates free radicals in ethanol. The amount of free radicals produced by mixing the prepared antioxidant and skin soothing herbal compositions with a certain ratio was confirmed. To 0.4 ml of ethanol, 0.5 ml of a 0.1 mM DPPH solution prepared with ethanol and purified water were used to add 0.1 ml of test substance containing the herbal composition to a final concentration of 10% to 0.5%. The mixture was stirred vigorously for 10 seconds and stored in a cool dark place for 30 minutes. Absorbance was measured at 517 nm using enzyme-linked immunosorbent absorption (ELISA). The degree of antioxidant activity was expressed as a percentage based on the absorbance intensity of the control group using pure water.

도 2에 나타난 바와 같이, 무처리군에 비교하여 10% 처리 시 반응계의 DPPH 자유라디칼이 86.2 ± 2.33%, 5% 처리 시 57.8 ± 1.1%, 그리고 1% 처리 시 17.4 ± 2.2% 감소됨을 확인할 수 있었다. 또한, 0.5% 처리 시도 대조군에 비해 10.6 ± 0.6% 감소로 그 수치는 낮아졌지만 유의적인 차이를 나타내었다. 상기 결과는 본 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 화장품 등에 응용할 경우, 5% 이상의 높은 함량에서도 세포 독성이 적으면서 유의적인 항산화능으로 항염 및 피부 진정효과가 높음을 보여주는 것이다.As shown in FIG. 2, the DPPH free radicals of the reaction system were reduced to 86.2 ± 2.33%, 57.8 ± 1.1% at 5% treatment, and 17.4 ± 2.2% at 1% treatment, compared to the non-treated group. there was. In addition, the value was lowered by 10.6 ± 0.6% compared to the 0.5% treatment trial control group, but showed a significant difference. The results show that the antioxidant and skin soothing herbal compositions for cosmetics, etc., have high anti-inflammatory and skin soothing effects with significant antioxidant activity while having less cytotoxicity even at high content of 5% or more.

실시예Example 4: 본 발명에 따른 한방 조성물의  4: of the herbal composition according to the invention EthylEthyl linoleatelinoleate 를 이용한 항산화 시험Antioxidant Test

본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 보호 효과의 주요 기전인 항산화능 정도를 에틸리놀리에이트 (ethyl linoleate)를 이용하여 조사하였다. 펜톤 시약 (Fenton's reagent)를 이용하여 에틸리놀리에이트를 산화시켰다. 1.5 mg/L 에틸리놀리에이트, 0.2% 소디움 도데실 셀페이트 (sodium dodecyl sulfate), 1 mmol 염화제일철 (ferrous chloride), 0.5 mmol 과산화수소 (hydrogen peroxide), 그리고 0.75 mmol 염화칼륨 (potassium chloride)을 함유하는 0.25 mmol 트리즈마-염산 (Trizma-HCl) 버퍼 (pH 7.4) 5 ml에 제조된 항산화 및 피부 진정용 한방 복합체 증류액이 10% ∼ 0.5%가 되게 첨가하였다. 대조군에는 동량의 정제수를 사용하였다. 반응액은 37℃에서 16시간동안 교반하면서 유지하였다. 에탄올에 녹인 4% 부틸화된 하이드록시톨루엔 (butylated hydroxytoluene, BHT) 50 ml를 첨가하여 추가적인 산화를 막았다. 산화의 정도는 티오바르비튜릭산 (thiobarbituric acid, TBA)법을 이용하여 측정하였다. 간단하게 상기의 반응액 0.2 ml과 8% 소디움 도데실 셀페이트 0.2 ml, 1 M 아세트산 버퍼 1.5 ml, 그리고 0.67% 티오바르비튜릭산 용액 1.5 ml를 혼합하였다. 혼합 후 90℃에서 60분간 가열하였다. 상온으로 냉각한 후, 포화된 부탄올 용액 5 ml을 첨가하였다. 혼합 후 3000 rpm으로 20분간 원심분리하고 상부의 부탄올층의 흡광도를 분광광도계를 이용하여 532 nm에서 측정하였다. 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조구의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.The degree of antioxidant activity, which is the main mechanism of the protective effect of the antioxidant and skin soothing herbal compositions according to the present invention, was investigated using ethyl linoleate. Ethyl linoleate was oxidized using Fenton's reagent. Contain 1.5 mg / L ethyllinoleate, 0.2% sodium dodecyl sulfate, 1 mmol ferrous chloride, 0.5 mmol hydrogen peroxide, and 0.75 mmol potassium chloride Antioxidant and skin soothing herbal complex distillate prepared in 5 ml of 0.25 mmol Trisma-HCl buffer (pH 7.4) was added to 10% to 0.5%. The same amount of purified water was used as a control. The reaction solution was kept stirring at 37 ° C. for 16 hours. 50 ml of 4% butylated hydroxytoluene (BHT) dissolved in ethanol was added to prevent further oxidation. The degree of oxidation was measured using thiobarbituric acid (TBA) method. Briefly, 0.2 ml of the reaction solution and 0.2 ml of 8% sodium dodecyl sulphate, 1.5 ml of 1 M acetic acid buffer, and 1.5 ml of 0.67% thiobarbituric acid solution were mixed. After mixing, the mixture was heated at 90 ° C. for 60 minutes. After cooling to room temperature, 5 ml of saturated butanol solution was added. After mixing, the mixture was centrifuged at 3000 rpm for 20 minutes, and the absorbance of the upper butanol layer was measured at 532 nm using a spectrophotometer. The degree of antioxidant activity was expressed as a percentage based on the absorbance intensity of the control using pure water.

도 3에 나타난 바와 같이, 반응계에 10%에서 0.5%까지의 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 존재할 경우, 정제수를 사용한 대조군에 비하여 유의적인 지질과산화 보호 효과 즉 항산화능이 존재함을 알 수 있었다.As shown in FIG. 3, when the herbal composition for antioxidant and skin soothing was present in the reaction system from 10% to 0.5%, it was found that there was a significant lipid peroxidation protective effect, that is, antioxidant activity, compared to the control group using purified water.

구체적으로는, 정제수를 사용한 대조군에 비하여 10% 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물 존재시 41.1 ± 3.1%의 지질과산화 억제를, 5%, 1%, 그리고 0.5% 존재 시 각각 20.6 ± 0.3%, 2.1 ± 0.9%, 그리고 2.2 ± 1.7% 지질과산화 억제 효과를 보였다. 1% 및 0.5% 존재 시에는 정제수의 대조군과 유의적인 차이를 보이지는 않았으나, 그 이상의 함량으로 존재할 때는 유의적으로 에틸리놀레이트의 산화를 저해함을 확인할 수 있었다.Specifically, 41.1 ± 3.1% lipid peroxidation inhibition in the presence of 10% antioxidant and skin soothing herbal compositions compared to the control using purified water, 20.6 ± 0.3%, 2.1 ± respectively in the presence of 5%, 1%, and 0.5% 0.9% and 2.2 ± 1.7% showed lipid peroxidation inhibitory effects. The presence of 1% and 0.5% did not show a significant difference from the control of the purified water, but when present in a higher content it was confirmed that significantly inhibit the oxidation of ethyl linoleate.

실시예Example 5: 본 발명에 따른 항산화 조성물의 L- 5: L- of the antioxidant composition according to the invention DOPADOPA 산화저해시험 Oxidation Inhibition Test

본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 산화반응에 대한 저해 효과를 효소 산화반응의 대표적 예인 티로시나아제 (tyrosinase)의 L-3,4-dihydrophenylalanine (L-DOPA) 산화에서 시험하였다. 100 mM 소디움 포스페이트 버퍼 (sodium phosphate buffer, pH 7.0) 0.85 ml에 버섯 티로시나아제 0.05 ml, 및 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 10%에서 0.5%까지 혼합하였다. 강하게 교반한 후, 37℃ 항온조에서 6분간 반응시켰다. 반응 후 기질이 되는 L-DOPA 0.05 ml을 첨가하여 강하게 교반하고 추가적으로 1분간 반응시켰다. 반응이 끝나면 전체 반응계에서 약 0.2 ml을 취하여 96 웰플레이트 (well plate)에 옮기고, 효소결합면역흡수법 (ELISA)을 이용하여 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 산화 저해능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조구의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.The inhibitory effect on the oxidation of antioxidant and skin soothing herbal compositions according to the present invention was tested in L-3,4-dihydrophenylalanine (L-DOPA) oxidation of tyrosinase, a representative example of enzyme oxidation. To 0.85 ml of 100 mM sodium phosphate buffer (pH 7.0), 0.05 ml of mushroom tyrosinase and herbal compositions for antioxidant and skin calming were mixed from 10% to 0.5%. After stirring vigorously, it was made to react for 6 minutes in 37 degreeC thermostat. After the reaction, 0.05 ml of L-DOPA serving as a substrate was added thereto, stirred vigorously, and further reacted for 1 minute. After the reaction, about 0.2 ml of the whole reaction system was taken and transferred to a 96 well plate, and the absorbance was measured at 475 nm by using enzyme-linked immunosorbent absorption (ELISA). The degree of oxidation inhibition was expressed as a percentage based on the absorbance intensity of the control using pure water.

본 실험은 티로신 (tyrosine)으로부터 최종산물로 멜라닌 (melanin)을 합성하는 주요 효소인 버섯 티로시나아제의 L-DOPA의 산화 반응을 억제하는 정도를 시험하는 것으로, 반응계 내에 10%에서 0.5%까지의 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 첨가할 경우 그 효소적 산화반응의 저해 정도를 도 4에 나타내었다.This experiment is to test the degree of inhibiting the oxidation reaction of L-DOPA of mushroom tyrosinase, a major enzyme that synthesizes melanin from tyrosine as a final product, from 10% to 0.5% in the reaction system. When the antioxidant and skin soothing herbal composition is added, the degree of inhibition of the enzymatic oxidation reaction is shown in FIG. 4.

도 4에서 나타난 바와 같이, 정제수를 사용한 대조군에 비하여 10% 사용 시 65.8 ± 0.6%, 5% 사용 시 56.4 ± 1.3%, 1% 사용 시 11.4 ± 1.7%, 그리고 0.5% 사용 시 1.5 ± 3.0%의 산화 반응 저해능을 확인하였다. 상기 결과를 통하여 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 효소에 의해서 매개되는 산화 반응에 대한 저해도 가능함을 확인할 수 있었다. 또한 티로시나아제의 L-DOPA 산화를 본 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 저해하는 능력은 미백 소재로 응용될 가능성도 제시하는 것이다.As shown in FIG. 4, 65.8 ± 0.6% when used with 10%, 56.4 ± 1.3% when using 5%, 11.4 ± 1.7% when using 1%, and 1.5 ± 3.0% when using 0.5% compared to the control group using purified water. The inhibition of oxidation reaction was confirmed. Through the above results, it was confirmed that the herbal composition for antioxidant and skin sedation can be inhibited by the enzyme-mediated oxidation reaction. In addition, the ability of the antioxidant and skin soothing herbal compositions to inhibit L-DOPA oxidation of tyrosinase suggests the possibility of application as a whitening material.

실시예Example 6: 본 발명에 따른 한방 조성물의 잔존 생균 시험을 통한  6: through the remaining live bacteria test of the herbal composition according to the invention 정균능Bacteriostatic

본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 방부제 처리 없이도 미생물이 생존되지 않는 정균능이 세균 및 진균에 대하여 존재하는지를 확인하였다. 한방 조성물 내 발생 가능한 생균의 수를 확인하기 위하여 증류액을 제조한 직후 그리고 30일간 상온에서 방치한 후 생균수 확인 시험을 실시하였다. 실시예 1에서 제조된 조성물 원액 0.1 ml을 레틴 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고 30℃에서 48시간 배양하여 세균의 존재를 확인하였으며, 0.1ml을 사브로우드 덱스트로즈 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고 25℃에서 72시간 배양하여 진균의 존재를 확인하였다.The herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention was confirmed whether the bacteriostatic ability that microorganisms do not survive without preservative treatment is present against bacteria and fungi. In order to confirm the number of viable bacteria in the herbal composition, a viable cell number identification test was performed immediately after preparing the distillate and left at room temperature for 30 days. 0.1 ml of the composition stock solution prepared in Example 1 was plated in a retinal agar medium (Difco, USA) and incubated at 30 ° C. for 48 hours to confirm the presence of bacteria, and 0.1 ml of Sabrowood dextrose agar medium (Difco, USA) and incubated for 72 hours at 25 ℃ to confirm the presence of fungi.

도 5에 나타난 바와 같이, 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 제조 직후 세균 (A)과 진균 (B)의 존재를 한천 배지에 도말 후 배양하는 방법으로 확인한 결과 생균이 존재하지 않았으며, 상온에서 30일간 방치 후에도 세균 (C)과 진균 (D)이 존재하지 못하였음을 확인할 수 있었다. As shown in FIG. 5, immediately after the preparation of the herbal composition for antioxidant and skin sedation, the presence of bacteria (A) and fungi (B) was confirmed by the method of culturing after plating on agar medium, and no viable bacteria existed at room temperature. It was confirmed that the bacteria (C) and fungi (D) did not exist even after the day standing.

따라서, 상온에서 장기간 보관에도 방부제의 첨가 없이 미생물의 천이를 억제하는 정균능은 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 아토피 피부염 환자의 피부에 비정상적으로 천이한 세균 및 효모를 억제함으로써 그 보호 효과를 촉진하게 할 것이며, 장기간 사용 시에도 보존용 방부제들에 의한 유발될 수 있는 피부 자극을 피할 수 있어 아토피 개선에 도움을 줄 것이다.Therefore, the bacteriostatic ability to inhibit the transition of microorganisms without the addition of preservatives even after long-term storage at room temperature is protected by the antioxidant and soothing herbal compositions according to the present invention by inhibiting bacteria and yeasts abnormally transitioned to the skin of atopic dermatitis patients. It will promote the effect, and even long-term use will help to improve atopic dermatitis by avoiding skin irritation caused by preservative preservatives.

실시예Example 7: 본 발명에 따른 한방 조성물의 염증 반응에 대한 피부 진정 효과시험 7: Skin soothing effect test on inflammatory response of herbal composition according to the present invention

본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물의 피부 진정 효과를 측정하기 위하여 실험용 마우스를 이용하였다. 실험용 마우스의 좌측 귀를 대조 부위로, 우측 귀를 시험 부위로 정하고, 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하였다. 제조된 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물 25㎕ 씩을 1일 1회, 4일간 지속적으로 도포하였다. 마지막 도포 1시간 후에는 좌측 귀에 에탄올을, 우측 귀에 아라키돈산(arachidonic acid) 2㎎을 도포하여, 1시간 후 귀의 부종(ear edema) 정도를 마이크로미터로 3회 반복 측정하였다. 아라키돈산은 염증을 유발하는 물질로, 본 연구에서는 아라키돈산을 처리한 귀를 음성대조군으로 사용하였다. 또한 소염제인 인도메타신(indomethacin)을 귀에 도포한 쥐도 준비하여 양성대조군으로 사용하였다. 항염증 진정 효과는 아라키돈산 처리군을 기준으로 하였을 때 부종이 억제된 정도를 비교하여 평가하고, 억제율(%)는 (A-B)/A ×100 (A : 대조군 귀의 평균두께(아라키돈산 처리귀의 두께-비처리 귀의 두께), B : 시료 도포군 귀의 두께(시료 처리귀의 두께-비처리 귀의 두께))로 계산하여, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Experimental mice were used to measure the skin soothing effect of the antioxidant and soothing herbal composition according to the present invention. The left ear of the experimental mouse was used as the control site, the right ear as the test site, and the ears were washed with ethanol. 25 μl of the antioxidant and soothing herbal compositions prepared were applied once daily for 4 days. One hour after the last application, ethanol was applied to the left ear, and 2 mg of arachidonic acid was applied to the right ear. After 1 hour, the degree of ear edema was repeated three times with a micrometer. Arachidonic acid is an inflammation-inducing substance. In this study, arachidonic acid-treated ears were used as a negative control. In addition, mice coated with an indomethacin (indomethacin) as an anti-inflammatory agent were also prepared and used as a positive control group. The anti-inflammatory sedative effect was evaluated by comparing the degree of suppression of edema based on the arachidonic acid treatment group, and the inhibition rate (%) was (AB) / A × 100 (A: average thickness of the control ear (thickness of arachidonic acid-treated ears). -Thickness of untreated ears), B: thickness of the sample coated group ears (thickness of sample-treated ears-thickness of untreated ears), and the results are shown in Table 2 below.

하기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 염증반응 유발 후 아무것도 처리하지 않은 경우에 비해 염증반응을 완화시키는 피부 진정효과가 뛰어남을 확인하였다. As shown in Table 2, it was confirmed that the herbal composition for antioxidant and skin calming according to the present invention had an excellent skin calming effect to alleviate the inflammatory response as compared to the case where nothing was treated after inducing the inflammatory response.

시료sample 농도(%)density(%) 용매menstruum 아라키돈산 비처리 귀두께 (um)(평균값)Arachidonic acid untreated ear thickness (um) (average value) 아라키돈산 처리 귀두께 (um) / 억제율 (%)Arachidonic acid treatment ear thickness (um) / inhibition rate (%) 아라키돈산Arachidonic acid 2mg/ml2mg / ml 에탄올ethanol 237237 468 / -468 /- 인도메타신Indomethacin 1.0 %1.0% 에탄올ethanol 228228 334 / 54.1 %334 / 54.1% 본 발명의 한방 조성물 Herbal Compositions of the Invention 100 %100% 정제수Purified water 241241 410 / 26.8 %410 / 26.8% 75%75% 정제수Purified water 244244 423 / 22.5 %423 / 22.5% 50%50% 정제수Purified water 236236 445 / 9.5 %445 / 9.5%

표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 한방 조성물을 100%, 75%, 및 50% 처리한 시험군에서 처리하지 않은 무처리군에 비해 현저히 증가된 항염 진정효과를 확인할 수 있었다. 특히 100% 처리군에서는 염증 완화를 통한 피부 진정효과가 소염작용을 나타내는 약물인 인도메타신의 49.5 % 수준까지 나타났다. 이러한 결과는 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물이 사용된 화장료가 강력한 항산화능을 통해 손상된 피부를 진정시키는 효과를 나타낼 수 있음을 의미하는 것이다.As shown in Table 2, in the test group treated with 100%, 75%, and 50% herbal composition according to the present invention, it was confirmed that the anti-inflammatory sedation effect was significantly increased compared to the untreated group. In particular, in the 100% treatment group, the soothing effect of the skin was reduced to 49.5% of indomethacin, an anti-inflammatory drug. These results indicate that the cosmetics using the herbal composition for antioxidant and skin soothing can have an effect of calming the damaged skin through the powerful antioxidant capacity.

이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명에 따른 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 화학적 항산화능 및 효소의 산화 저해능이 뛰어나며, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아 장기간 사용 시 피부 자극을 유발할 수 있는 화장품 첨가용 방부제 첨가가 불필요하다. 또한, 염증 반응에 대한 피부 진정 효과가 뛰어나 손상된 피부를 진정시키는 치료에 효과적이다. As described in detail above, the herbal composition for antioxidant and skin soothing according to the present invention is not toxic to keratinocytes, has excellent chemical antioxidant activity and enzyme's oxidation inhibiting ability, and microbial transition occurs even in long-term storage. As a result, it is not necessary to add a preservative for adding cosmetics, which may cause skin irritation during long-term use. In addition, the skin soothing effect on the inflammatory response is effective in soothing damaged skin.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.As described above in detail a specific part of the content of the present invention, for those of ordinary skill in the art, such a specific description is only a preferred embodiment, which is not limited by the scope of the present invention Will be obvious. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (8)

다음의 단계를 포함하는 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 화장료 조성물의 제조방법:Method for preparing an herbal composition for antioxidant and skin soothing containing persimmon leaf, licorice, zinnia and zinnia skin comprising the following steps: (a) 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및(a) extracting hot water by mixing persimmon leaves, licorice, baeknyeoncho and lettuce; And (b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여한방 화장료 조성물을 제조하는 단계. (b) preparing the herbal cosmetic composition by cooling the steam generated by heating the hot water extract to obtain a distillate. 다음의 단계를 포함하는 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 한방 화장료 조성물의 제조방법:Method for preparing an herbal composition for antioxidant and skin soothing containing persimmon leaf, licorice, zinnia and zinnia skin comprising the following steps: (a) 감잎, 감초, 백년초 및 상백피 각각을 열수추출하는 단계; 및(a) hydrothermal extraction of each of persimmon leaves, licorice, baeknyeoncho and lettuce; And (b) 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 한방 화장료 조성물을 제조하는 단계.(b) preparing the herbal cosmetic composition by heating the respective hot water extracts and cooling the resulting steam to obtain respective distillates and mixing them. 제1항에 있어서, 상기 (a)단계에서, 감잎 20~40중량부, 감초 20~40중량부, 백년초 10~30중량부 및 상백피 10~30중량부를 혼합하여 열수추출하는 것을 특징으로 하는 방법. The method of claim 1, wherein in step (a), 20 to 40 parts by weight of persimmon leaves, 20 to 40 parts by weight of licorice, 10 to 30 parts by weight of baeknyeoncho, and 10 to 30 parts by weight of lettuce extract are characterized in that hot water extraction . 제2항에 있어서, 상기 (b)단계에서, 각각의 증류액은 감잎 열수추출물의 증류액 20~40중량부, 감초 열수추출물의 증류액 20~40중량부, 백년초 열수추출물의 증류액 10~30중량부 및 상백피 열수추출물의 증류액 10~30중량부를 혼합하는 것을 특징으로 하는 방법. According to claim 2, wherein in step (b), each distillate is 20 to 40 parts by weight of the distillate of persimmon leaf hot water extract, 20 to 40 parts by weight of the distillate of licorice hot water extract, distillate of 10 ~ 100 years hot water extract 30 parts by weight and 10-30 parts by weight of distillate of hot water extract. 제1항의 방법으로 제조되고, 감잎, 감초, 백년초 및 상백피를 혼합한 혼합물의 열수추출물의 증류액을 함유하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 피부 진정용 한방 화장료 조성물.The herbal cosmetic composition for antioxidant and soothing skin, prepared by the method of claim 1, comprising a distillate of a hot water extract of a mixture of persimmon leaves, licorice, zinnia, and lettuce. 제5항에 있어서, 상기 감잎, 감초, 백년초 및 상백피의 혼합물은 상기 감잎 20~40중량부, 감초 20~40중량부, 백년초 10~30중량부 및 상백피 10~30중량부를 혼합한 것을 특징으로 하는 조성물.According to claim 5, The mixture of persimmon leaves, licorice, baeknyeoncho and lettuce leaves 20-20 parts by weight of the persimmon leaves, 20-40 parts by weight licorice, 10-30 parts by weight of baeknyeoncho and 10-30 parts by weight of lettuce Composition. 제2항의 방법으로 제조되고, 각각의 감잎, 감초, 백년초 및 상백피의 열수추출물의 증류액들이 혼합된 혼합증류액을 함유하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 피부 진정용 한방 화장료 조성물.The herbal cosmetic composition for antioxidant and skin calming, which is prepared by the method of claim 2 and comprises a mixed distillate of distillates of hot water extracts of persimmon leaves, licorice, zinnia and baekpi. 제7항에 있어서, 상기 혼합증류액은 상기 감잎 열수추출물의 증류액 20~40중량부, 감초 열수추출물의 증류액 20~40중량부, 백년초 열수추출물의 증류액 10~30중량부 및 상백피 열수추출물의 증류액 10~30중량부를 혼합한 것을 특징으로 하는 조성물.According to claim 7, wherein the mixed distillate is 20 to 40 parts by weight of the distillate of persimmon leaf hot water extract, 20 to 40 parts by weight of distillate of licorice hot water extract, 10 to 30 parts by weight of distillate of perennial hot water extract and hot water extract A composition comprising 10 to 30 parts by weight of a distillate of an extract.
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