KR100804827B1

KR100804827B1 - 티아졸리딘-4-온 유도체, 그 제조방법 및 약제학적 조성물

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Publication number: KR100804827B1
Application number: KR1020020027332A
Authority: KR
Inventors: 조일환; 임지웅; 박상욱; 노지영; 유형철; 김종훈; 채명윤; 박현정; 정성학; 연규정; 진해탁
Original assignee: 씨제이제일제당 (주)
Priority date: 2002-05-17
Filing date: 2002-05-17
Publication date: 2008-02-20
Also published as: EP1506180A4; CN1296361C; KR20030089221A; AU2003230429A1; JP4183045B2; EP1506180A1; CN1653055A; WO2003097620A1; US6777434B2; US20030216454A1; JP2005533025A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염 및 이들의 제조방법에 관한 것이다.

[화학식 1]

상기 화학식 1에서,

R¹ 및 R²는 각각 수소, C₁-C₃알킬, 할로겐, 할로겐으로 치환된 메틸, 할로겐으로 치환된 C₁-C₃알콕시, 시아노 또는 니트로를 나타낸다.

본 발명에 따르면 해열,진통,소염작용을 가지며 부작용이 개선된 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염 및 이들의 제조방법 그리고 이들을 함유한 약제학적 조성물을 제공할 수 있다.

Description

티아졸리딘-4-온 유도체, 그 제조방법 및 약제학적 조성물{Thiazolidine derivatives, processes for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing the same}

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염에 관한 것이다.

상기 화학식 1에서, R¹ 및 R²는 각각 수소, C₁-C₃알킬, 할로겐, 할로겐으로 치환된 메틸, 할로겐으로 치환된 C₁-C₃알콕시, 시아노 또는 니트로를 나타낸다.

비스테로이드성 항염증제의 대부분은 사이클로옥시게나제(COX) 또는 프로스타글란딘 G/H 신타제라 불리는 효소의 저해를 통해 그들의 소염, 진통, 해열 작 용을 나타내며, 또한 호르몬에 의해 일어나는 자궁 수축을 저해하고 몇몇 종류의 암의 성장을 저해한다. 처음에는 소에서 발견된 구성적 효소인 사이클로옥시게나제-1(COX-1)만이 알려져 있었는데, 최근에 유발성 형태의 사이클로옥시게나제-2(COX-2)가 밝혀졌다. 사이클로옥시게나제-2는 사이클로옥시게나제-1과는 확실히 다르며, 마이토젠, 내독소, 호르몬, 성장인자 및 싸이토카인 등에 의해 쉽게 유발된다.

프로스타글란딘은 병리학적 및 생리학적 역할을 하는데, 구성적 효소인 사이클로옥시게나제-1은 기본적인 내인성 프로스타글란딘의 분비에 관여하고 위장의 상태 유지 및 신장의 혈액 순환 등 생리학적인 측면에서 중요한 역할을 한다. 반면에, 사이클로옥시게나제-2는 염증인자, 호르몬, 성장인자 및 싸이토카인 등에 의해 유발되며, 따라서 프로스타글란딘의 병리학적인 효과에 주된 역할을 한다. 그러므로 사이클로옥시게나제-2에 선택적인 저해제는 기존의 비스테로이드성 항염증제에 비해 작용기전에 의한 부작용이 없을 것으로 예상되고, 소염, 진통, 해열 작용을 나타낼 것이 예상되며, 또한 호르몬에 의해 일어나는 자궁 수축의 저해와 몇몇 종류의 암 성장을 저해할 것으로 예상된다. 특히 위장 독성, 신장 독성 등의 부작용이 적을 것으로 예상된다. 또한 수축성 프로스타노이드의 합성을 방지하여 프로스타노이드에 의해 유발되는 평활근의 수축을 저해할 수 있을 것이며, 따라서 조산, 월경 불순, 천식 및 호산구에 연관된 질병에 유용할 것이 예상된다. 그 외에도 골다공증, 녹내장, 대장암 및 치매의 치료에도 유용할 것이 예상되는데, 사이클로옥시게나제-2에 선택적인 저해제의 유용성에 대해서는 문헌(참조: John Vane, "Towards a better aspirin" in Nature, 367권, 215-216쪽, 1994; Bruno Battistini, Regina Botting and Y.S. Bakhle, "COX-1 and COX-2: Toward the Development of More Selective NSAIDs" in Drug News and Perspectives, 7권, 501-512쪽, 1994; David B. Reitz and Karen Seibert, "Selective Cyclooxygenase Inhibitors" in Annual Reports in Medicinal Chemistry, James A. Bristol, Editor, 30권, 179-188쪽, 1995)에 잘 기술되어 있다.

사이클로옥시게나제-2에 선택적으로 작용하는 저해제로서 공지된 기존의 약물들은 그 구조에 있어서 매우 다양한 형태를 취하고 있다. 그 중 가장 일반적으로 연구되고 따라서 가장 많은 후보물질이 설계된 구조는 디아릴 헤테로사이클의 구조, 즉 트리사이클릭 시스템으로서 이 구조는 특징적으로 하나의 페닐에 술폰아미드 혹은 메틸술폰기가 필수적으로 존재한다.

미국특허번호 5,466,823에 따르면 하기 화학식 4의 화합물(셀레콕시브)을 개시하고 있다. 하기 셀레콕시브는 치환된 피라졸 벤젠 설폰아미드 유도체이다.

WO 95/00501에 따르면, 하기 화학식 5를 갖는 화합물(로페콕시브)을 개시하고 있다. 로페콕시브는 상기 셀레콕시브와 같이 디아릴 헤테로사이클 구조지만 헤토로고리로서 퓨란온 구조를 갖는다.

미국특허번호 5,633,272에서는 하기 화학식 6과 같은 화합물(발데콕시브)을 기재하고 있다. 발데콕시브는 로페콕시브와 같이 메탄술포닐 벤질구조를 갖지만 헤테로고리로서 옥사졸 구조를 갖는다.

상기 화학식 4 내지 6의 화합물은 모두 COX-2에 대한 선택적 억제제로서 기존의 비스테로이드성 항염증제에 비해 부작용이 없는 소염진통치료 효과를 갖는다.

이에 본 발명자들은 사이클로옥시게나제-2의 저해제로서 선택성이 뛰어난 신규 화합물들을 개발하고자 지속적인 연구를 수행하였으며, 그 결과 상기 종래 화합물의 특징적인 구조 중 하나인 메틸술폰 구조를 포함하지만 티아졸리딘-4-온을 갖는 유도체가 COX-2에 대하여 우수한 선택적 억제효과를 갖고 있음을 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서, 본 발명은 화학식 1의 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명의 목적은 상기 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염의 제조방법을 제공하는 것을 포함한다.

또한 본 발명의 목적은 COX-2에 대한 선택적인 억제효과를 갖음으로써, 해열,진통,소염 치료에 효과가 있는 상기 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염과 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 해열,진통,소염 효과를 갖는 약제학적 조성물을 제공하는 것을 포함한다.

[화학식 1]

상기 화학식 1에서,

상기 화합물 중, R¹ 및 R²가 각각 수소, C₁-C₃알킬, 할로겐, 또는 시아노인 것을 특징으로 하는 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염이 바람직하다.

R¹ 및 R²의 위치는 각각 3- 및 4-, 2- 및 4-, 3- 및 5-, 또는 3- 및 2-인 것이 바람직하며, 3- 및 5- 또는 3- 및 4-인 것이 더욱 바람직하다.

상기 화학식 1의 화합물은 순수한 광학이성질체이거나 광학이성질체들의 혼합물일 수 있다.

상기 2-(4-메탄술포닐페닐)-3-페닐티아졸리딘-4-온 유도체는:

3-(4-클로로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온;

3-(3-플루오로-4-메틸페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온;

3-(4-플루오로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온;

2-(4-메탄술포닐페닐)-3-페닐티아졸리딘-4-온;

3-(4-시아노페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온; 및

3-(3,5-디플루오로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것이 바람직하다.

본 발명은 하기 화학식 2의 4-메탄술포닐벤즈알데히드와 하기 화학식 3의 아닐린 유도체를 머캅토아세트산 존재하에서 반응시키는 단계를 포함하는 화학식 1의 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염의 제조방법을 포함한다.

상기 식에서 R¹ 및 R²는 앞에서 정의한 바와 같다.

상기 제조방법을 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.

화학식 2의 메탄술포닐벤즈알데히드 화합물과 화학식 3의 아닐린 유도체 화합물을 머캅토아세트산의 존재 하에서 탈수 반응시키는 단계에서 R 치환기가 무엇인지에 관계없이 동일한 조건에서 수행할 수 있다.

또한, 반응용매는 통상적으로 유기합성에서 사용되는 비반응성 유기용매 중에서 딘-스탁 트랩에 의해 반응 중 생성되는 물을 분리할 수 있는 용매가 선호된다. 그러한 것의 대표적인 예로서 벤젠, 톨루엔, 크실렌 등이 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 그 중 톨루엔을 사용하는 것이 가장 바람직하다.

반응온도는 사용하는 용매의 끓는점까지 가열함으로서 반응을 완결시키는 것이 바람직하며, 톨루엔을 용매로 사용하여 끓는점에서 가열, 환류시킴으로써 반응을 완결시키는 것이 가장 바람직하다.

반응 생성물의 분리 및 정제는 유기합성에서 통상적으로 수행되는 농축, 추출 등의 과정을 통해 이루어지며, 필요에 따라 실리카겔 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의한 별도의 정제 작업을 통해 분리 및 정제를 행할 수도 있다.

본 발명은 치료학적으로 유효한 양의 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 유효성분으로 함유하고 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 해열,진통,소염 효과를 갖는 약제학적 조성물을 제공한다.

이러한 약제학적 조성물은 상기의 사이클로옥시게나제-2에 대한 선택적인 억제활성을 갖는 상기 화학식 1의 화합물 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하고 있으므로 부작용을 최소화한 해열,진통,소염제로서 사용할 수 있다.

종래의 비스테로이드성 소염제는 병리학적 프로스타글란딘의 합성에 관여하는 COX-2 뿐만 아니라 기본적인 내인성 프로스타글란딘의 분비에 관여하고 위장의 상태 유지 및 신장의 혈액순환 등 생리학적인 측면에서 중요한 역할을 하는 COX-1까지 무차별적으로 억제하였기 때문에 여러가지 부작용을 가지고 있었다.

이에 비하여, 상기 화학식 1의 화합물 및 그들의 약학적으로 허용 가능한 염은 사이클로옥시게나제-2에 선택적인 저해활성을 가지므로 COX-2까지 무차별적으로 저해하는 종래의 비스테로이드성 해열,진통,소염제가 갖는 부작용을 최소화 할 수 있다.

그러므로 화학식 1의 화합물 및/또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염과 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물은 전형적인 비스테로이드성 항염증제의 대체약으로 쓰일 수 있으며, 특히 기존의 비스테로이드성 해열,진통,소염제의 부작용이 개선된 대체 약물로서 소화성 궤양, 위염, 부분적인 장염, 궤양성 대장염, 게실염, 위장내 출혈, 저프로트롬빈혈증 등이 있는 환자들에게 유용하다.

본 발명의 약제학적 조성물은 병리학적 프로스타글란딘 관련 염증질환 모두에 사용될 수 있으며, 특히 고용량의 투여를 요하는 골관절염, 류마티스 관절염에 유용하다.

상기 약제학적 조성물은 상기 활성성분인 화학식 1의 화합물 혹은 그들의 염을 기준으로 성인에게 50mg/kg 내지 400mg/kg 투여할 수 있으며, 질병의 심각정도에 따라 증감할 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 정제, 발포성 정제, 캡슐제, 과립제, 산제, 서방성 정제, 서방성 캡슐제(단독 및 복합 단위 제제), 정맥 내 및 근육 내 주사용 앰풀제의 형태로 및 주입액, 현탁액, 좌제의 형태로 또는 기타 적합한 약제학적 형태로 투여할 수 있다.

서방성 약제학적 형태는 최초 투여 함유량을 갖거나 갖지 않는 완전하거나 부분적인 서방성 형태로 활성 화합물을 함유할수 있다.

활성 화합물은 함께 존재하거나, 부분적으로 또는 완전히 서로 분리된 제형으로서 존재하여, 개별 투여 또는 시간 단위로 단계화된 투여가 또한 가능할 수 있다.

상기 완전히 분리된 제형이 존재하는 경우, 이들은 서로 협력하며, 이들이 배합된 혼합물내에서 존재할 수 있는 동일한 양 및 상응하는 중량비로 투여 단위내에 각각의 활성 화합물을 함유한다.

지시된 배합물이 함유된 경구 투여가능한 약제학적 조성물이 바람직하다.

상기 배합물을 함유하는 약제학적 제제를 제조하기 위해서, 활성 화합물은 생리학적으로 내성이 있는 부형제 및/또는 희석제 및/또는 보조제와 함께 바람직한 방식으로 지시된 양으로 제형화된다.

부형제 및 보조제의 예는 젤라틴, 자당 또는 락토오스 같은 천연 당, 레시틴, 펙틴, 전분(예를 들면, 옥수수 전분 또는아밀로오스), 사이클로덱스트린 및 사이클로덱스트린 유도체, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 아세테이트, 아라비아 고무, 알긴산, 틸로오스, 활석, 리코포듐, 실리식산, 인산수소칼슘, 셀룰로오스, 메톡시프로필셀룰로오스 같은 셀룰로오스 유도체, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트, 탄소원자수 12 내지 22개의 지방산, 에멀션화제, 오일 및 지방, 특히 또한 포화 지방산의 식물성 글리세롤 에스테르 및 폴리글리세롤 에스테르, 1가 또는 다가 알콜 및 폴리에틸렌 글리콜 같은 폴리글리콜, 탄소 원자 수 1 내지 20개의 1가 지방족 알콜, 또는 글리콜, 글리세롤, 디에틸렌 글리콜, 1,2-프로필렌 글리콜, 소르비톨, 만니콜 같은 다가 알콜을 갖는 탄소 원자 수 2 내지 22개의 지방족 포화 또는 불포화 지방산의 에스테르가 있다.

추가로 적합한 보조제는 또한 붕해를 야기하는 물질(소위 붕해제), 교차 결합된 폴리비닐피롤리돈, 카르복시메틸전분 나트륨, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, 미세결정성 셀룰로오스가 있다. 공지된 피복 물질을 또한 사용할 수 있다. 아크릴산 및/또는 메타크릴산 및/또는 이의 에스테르의 중합체 및 공중합체, 제인(zein), 에틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 석시네이트, 셸락 등이 있다.

피복 물질로서 적합한 가소제는 시트르산 에스테르 및 타르타르산 에스테르, 글리세롤 및 글리세롤 에스테르, 다양한 쇄길이의 폴리에틸렌 글리콜이 있을 수 있다. 물 또는 생리학적으로 허용되는 유기 용매, 예를 들면, 알콜 및 지방 알콜이용액 또는 현탁액의 제조에 적합하다.

액체 제형에 있어서, 솔베이트 칼륨, 메틸 4-하이드록시벤조에이트 또는 프로필 4-하이드록시벤조에이트 같은 보존제, 아스코르브산 같은 항산화제 및 페퍼민트 오일 같은 방향 강화제를 사용할 필요가 있을 수 있다.

제제의 제조에 있어서, 폴리비닐피롤리돈 및 폴리솔베이트 80 같은 공지되고 통상적인 용해제, 또는 에멀션화제를 사용할수 있다.

적합한 부형제 및 보조제의 추가적인 예는 문헌을 참조할 수 있다(Dr. H.P. Fiedler "Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie,Kosmetik und angrenzende Gebiete" [Encyclopaedia of auxiliaries for pharmacy, cosmetics and related fields]).

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.

(실시예)

실시예 1

3-(4-클로로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온의 제조

[화학식 7]

4-메탄술포닐벤즈알데히드 200mg(1.09mmol), 4-클로로아닐린 150mg (1.18mmol)을 톨루엔 10ml에 현탁시키고 딘-스탁 트랩 장치 하에 4시간 동안 가열, 환류시켰다. 머캅토아세트산 0.083ml(1.19mmol)을 투입한 후 다시 5시간 동안 가열, 환류시켰다. 상온으로 냉각하고 감압하에 용매를 증류, 제거한 다음 에틸 아세테이트 20ml로 희석시켰다. 2N-염산 20ml, 포화된 탄산수소나트륨 수용액 20ml, 포화 소금물로 차례로 세척한 후, 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 다음 감압하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용리제: 에틸아세테이트/n-헥산=1/1, v/v)로 정제하여 표제화합물 230mg(수율 57.6%)을 백색 결정으로 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ3.05(s,3H), 3.85(d,J=16Hz,1H), 4.00(d,J=16Hz,1H), 6.15(s,1H), 7.15(d,J=8Hz,2H), 7.30(d,J=8Hz,2H), 7.50(d,J=8Hz,2H), 7.95(d,J=8Hz,2H)

융점: 231-233℃

실시예 2

3-(3-플루오로-4-메틸페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온의 제조

[화학식 8]

상기 실시예 1에서 4-클로로아닐린 150mg(1.18mmol) 대신 3-플루오로-4-메틸아닐린 0.137ml(1.19mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 표제화합물 310mg(수율 78.1%)을 백색 결정으로 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ2.20(s,3H), 3.05(s,3H), 3.85(d,J=15Hz,1H), 4.00(d,J=15Hz,1H), 6.15(s,1H), 6.80-7.10(m,3H), 7.50(d,J=8Hz,2H), 7.90(d,J=8Hz,2H)

융점: 203-206℃

실시예 3

3-(4-플루오로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온의 제조

[화학식 9]

상기 실시예 1에서 4-클로로아닐린 150mg(1.18mmol) 대신 4-플루오로아닐린 0.113ml (1.18mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 표제화합물 280mg(수율 73.4%)을 백색 결정으로 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ3.05(s,3H), 3.85(d,J=15Hz,1H), 4.00(d,J=15Hz,1H), 6.10(s,1H), 6.95-7.15(m,4H), 7.50(d,J=8Hz,2H), 7.90(d,J=8Hz,2H)

융점: 210-213℃

실시예 4

2-(4-메탄술포닐페닐)-3-페닐티아졸리딘-4-온의 제조

[화학식 10]

상기 실시예 1에서 4-클로로아닐린 150mg(1.18mmol) 대신 아닐린 0.11ml (1.18mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 표제화합물 239mg(수율 66.0%)을 백색 결정으로 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ3.05(s,3H), 3.85(d,J=15Hz,1H), 4.00(d,J=15Hz,1H), 6.15(s,1H), 7.15-7.30(m,5H), 7.50(d,J=8Hz,2H), 7.90(d,J=8Hz,2H)

융점: 196-199℃

실시예 5

3-(4-시아노페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온의 제조

[화학식 11]

상기 실시예 1에서 4-클로로아닐린 150mg(1.18mmol) 대신 4-시아노아닐린 141mg(1.18mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 표제화합물 240mg(수율 61.7%)을 백색 결정으로 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ3.05(s,3H), 3.90(d,J=16Hz,1H), 4.00(d,J=16Hz,1H), 6.25(s,1H), 7.45(d,J=8Hz,2H), 7.50(d,J=8Hz,2H), 7.65(d,J=8Hz,2H), 7.95(d,J=8Hz,2H)

융점: 190-192℃

실시예 6

3-(3,5-디플루오로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온의 제조

[화학식 12]

상기 실시예 1에서 4-클로로아닐린 150mg(1.18mmol) 대신 3,5-디플루오로아닐린 154mg(1.18mmol)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 표제화합물 230mg(수율 57.3%)을 백색 결정으로 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ3.05(s,3H), 3.90(d,J=15Hz,2H), 4.00(d,J=15Hz,2H), 6.15(s,1H), 6.10-6.20(m,1H), 6.80-6.90(m,2H), 7.50(d,J=8Hz,2H), 7.95(d,J=8Hz,2H)

융점: 168-171℃

약리학적 실험예

사이클로옥시게나제-2에 대한 선택적 저해활성 측정

1. 실험 방법

본 발명에 따른 화합물의 사이클로옥시게나제-2 효소에 대한 선택적 저해활성을 약리학적으로 검증하기 위하여, 사이클로옥시게나제-1 및 사이클로옥시게나제-2에 대한 효소 저해작용을 각각 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

1) U-937을 이용한 사이클로옥시게나제-1의 억제 효과 검색

배양된 U-937(Human lymphoma cell)(한국세포주은행, 기탁번호: 21593)을 원심분리하여 모은 후 1xHBSS(Hank's balanced salt solution)를 이용하여 1x10⁶ cells/ml 농도로 희석하여 12-웰 플레이트의 각 웰 당 1ml씩 분주하였다. 여기에 DMSO에 녹여 1μM로 희석한 검색시료 용액과 DMSO를 5μl씩 넣고 섞은 후, CO₂ 배양기에서 37℃로 15분간 배양하였다. 기질로 사용되는 아라키돈산를 10mM 농도로 에탄올에 녹여서 만든 스탁용액을 1xHBSS로 10배 희석하여 1mM 용액을 준비하였다. 물질을 처리한 각 웰에 1mM 아라키돈산 용액을 10μl씩 가하여 섞은 후 CO₂ 배양기에서 37℃로 30분간 배양하였다. 각 웰의 세포용액을 원심분리 시험관에 모은 후 4℃, 10,000rpm에서 5분간 원심분리하였다. 원심분리로 모아진 세포와 분리된 상층액 중에 존재하는 PGE2의 농도를 모노클로날 키트(Cayman Chemicals사)를 이용하여 정량하고, 실험물질 처리군의 농도를 DMSO 군의 농도와 비교하여 각 물질의 PGE2 생성 억제율을 구함으로서 사이클로옥시게나제-1 효소에 대한 물질의 억제효과를 구하였다.

2) Raw 264.7 세포주를 이용한 사이클로옥시게나제-2 억제 효과 검색

Raw 264.7 세포(입수처 : 한국세포주은행, 기탁번호 : 40071)를 12 웰 플 레이트의 각 웰 당 2x10⁶ 개씩 접종한 후 아스피린 250μM을 처치하여, 37℃에서 2시간 배양하였다. 새로운 배지로 갈아준 후, 각각의 검색시료(10nM)를 처리하고 30분 배양하였다. 여기에 각 웰 당 인터페론 γ(100 유닛/ml)와 리포폴리사카라이드(LPS, 100ng/ml)를 처치한 후 18시간 배양하였다. 그 다음 배지를 다른 시험관에 옮겨 담은 후, EIA 키트(Cayman Chemicals)를 이용하여 PGE2 정량을 하였다.

2. 실험 결과

실험결과를 하기 표 1에 나타내었다.

%억제 = (인터페론γ 및 LPS에 대한 보정된 PGE2 농도 - 검색시료에 대한 보정된 PGE2 농도) / (인터페론γ 및 LPS에 대한 보정된 PGE2 농도) X 100

사이클로옥시게나제(COX) 저해 효과(단위: % 억제)

화합물	COX-1(1μM)	COX-2(10nM)
기준물질(Valdecoxib)	28.8	5.47
실시예 2	29.2	16.04
실시예 4	26.0	16.04
실시예 5	10.1	6.54
실시예 6	38.0	12.08

3. 평가

상기 사이클로옥시게나제-1 및 사이클로옥시게나제-2의 저해에 관한 in vitro 실험결과를 고찰해보면 다음과 같다.

상기 실험결과에 의하면, 실시예 2, 4, 5, 및 6에 있어서 사이클로옥시게나제-1의 억제%에 대한 사이클로옥시게나제-2의 억제%의 비율이 기준물질(valdecoxib)보다 현저히 우수한 것으로 나타났다. 이는 사이클로옥시게나제-1에 대한 사이클로옥시게나제-2의 선택적 억제효과가 기준물질보다 우수함을 나타낸다. 또한 실시예 5를 제외한 실시예 2, 4, 6의 경우에는 선택적 억제효과 뿐 아니라 각 사이클로옥시게나제에 대한 억제% 수치가 큰 것으로나 나타나 기준물질보다 부작용이 개선되었을 뿐만 아니라 해열소염진통 효과면에서도 더 우수한 것으로 판명되었다.

본 발명에 따르면 종래의 비스테로이드성 소염제의 부작용이 개선되어 특히 소화성 궤양, 위염, 부분적인 장염, 궤양성 대장염, 게실염, 위장내 출혈 또는 저트롬빈혈증 등이 있는 환자들에게 유용하게 사용할 수 있으며 해열,진통,소염 효과를 갖는 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염, 이들의 제조방법 그리고 이들을 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물을 제공할 수 있다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염:

[화학식 1]

상기 화학식 1에서, R¹ 및 R²는 각각 수소, C₁-C₃알킬, 할로겐, 할로겐으로 치환된 메틸, 할로겐으로 치환된 C₁-C₃알콕시, 시아노 또는 니트로를 나타낸다.
제 1 항에 있어서, R¹ 및 R²가 각각 수소, C₁-C₃알킬, 할로겐, 또는 시아노인 것을 특징으로 하는 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염.
제 1 항에 있어서,

3-(4-클로로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온;

3-(3-플루오로-4-메틸페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온;

3-(4-플루오로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온;

2-(4-메탄술포닐페닐)-3-페닐티아졸리딘-4-온;

3-(4-시아노페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온; 및

3-(3,5-디플루오로페닐)-2-(4-메탄술포닐페닐)-티아졸리딘-4-온으로 구성된 군으로부터 선택된 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염.
하기 화학식 2의 4-메탄술포닐벤즈알데히드와 하기 화학식 3의 아닐린 유도체를 머캅토아세트산 존재 하에서 반응시키는 단계를 포함하는 화학식 1의 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염의 제조방법.

[화학식 1]

[화학식 2]

[화학식 3]

상기 R¹ 및 R²는 각각 수소, C₁-C₃알킬, 할로겐, 할로겐으로 치환된 메틸, 할로겐으로 치환된 C₁-C₃알콕시, 시아노 또는 니트로를 나타낸다.
치료학적으로 유효한 양의 제 1항에 따른 티아졸리딘-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 유효성분으로 함유하고 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 해열,진통,소염 효과를 갖는 약제학적 조성물.