본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 유효성분으로서 욱리인 추출물 또는 욱리인 용매 분획물을 포함하는 탈모방지 또는 육모 촉진용 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 탈모방지 또는 육모를 촉진시킬 수 있는 신규한 물질을 개발하기 위하여, 수 천 종의 천연 식물 추출물 또는 분획물을 대상으로 스크리닝 하였고, 그 결과 욱리인 추출물 및 욱리인 분획물이 케라티노사이트 세포증식 촉진작용을 가짐을 확인하였고 또한 상기 추출물 또는 분획물이 육모 촉진에 유용하게 이용할 수 있다는 것을 동물 개체 수준으로 확인하였다.
본 발명의 유효성분으로 이용되는 추출물 또는 분획물의 재료로서의 “욱리인(郁李仁)”은, 장미과(Rosaceae)에 속한 낙엽 교목인 이스라지(Prunus nakii Leveille), 양이스라지나무(Prunus humillis Bunge) 또는 산앵도나무(Prunus japonica Thunb var . nakaii)의 종자를 나타내며, 산앵도나무의 종자를 나타낸다.욱리인은 쓰고 매운 맛이 나며, 독성은 없는 것으로 알려져 있으며, 윤활성으로 인 한 완만한 사하작용, 동물의 혈압강화 작용, 조혈작용, 그리고 간장과 신장의 강화촉진 작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 민간에서는 욱리인은 부종을 가라앉히고 체기를 낫게 하며 이뇨 작용을 하여 이뇨제로 사용된다. 욱리인을 소재로 한 특허는 당뇨 치료(대한민국 특허출원 제10-2003-0045053호 및 제10-2002-0000504호)와 체중 조절 (대한민국 특허출원 제10-2000-0039373호)에 대한 작용과 항산화제인 글루타티온의 증강(대한민국 특허출원 제10-2004-7005269호)에 대하여 출원된 바 있으나, 욱리인 추출물 및 분획물의 케라티노사이트의 증식 촉진 효과 또는 육모 촉진 작용에 대한 선행특허 문헌은 없다.
본 명세서에서, 용어 “욱리인 추출물”은 이스라지, 양이스라지나무 또는 산앵도나무의 종자, 바람직하게는 산앵도나무의 종자에서부터 추출하여 얻은 것을 의미한다. 추출물은 당업계에 공지된 통상적인 추출용매, 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 1,3-부틸렌글리콜, (h) 헥산, (i) 디에틸에테르, 또는 (j) 부틸아세테이트를 이용하여 얻을 수 있다.
본 명세서에서, 용어 “욱리인 용매 분획물”은 상기 추출 시 이용하였던 용매와 다른 용매를 이용하여 상기 욱리인 추출물로부터 본 발명에서 목적으로 하는 활성을 분획하여 얻은 활성 분획물(fraction)을 의미한다. 욱리인 용매 분획물을 얻기 위하여 사용되는 용매는 당업계에서 통상적으로 이용되는 어떠한 추출용매도 가능하며, 바람직하게는, (a) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (b) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름, (f) 1,3-부틸렌글리콜, (g) 헥산, (h) 디에틸에테르, 또는 (i) 부틸아세테이트이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “추출물”은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 상술한 용매 분획물도 포함한다.
본 발명의 욱리인 추출물 또는 용매 분획물은 상술한 용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 욱리인 추출물 또는 분획물에 포함되는 것이다.
본 발명의 욱리인 추출물 또는 분획물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물은 탈모 방지 또는 육모 촉진에 매우 효과적으로 작용한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “탈모 방지” 또는 “육모 촉진”은 동일한 의미로 사용되며, 이는 당업계에서 이용되는 또 다른 용어 양모 또는 발모 촉진과 동일한 의미를 가진다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 약제학적 조성물, 화장료 조성물 또는 식품 조성물로 제공될 수 있다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여 (topical application) 방식으로 적용된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함된 생리활성물질인 욱리인추출물 및 분획물의 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg, 바람직하게는 0.1-100 ㎎/kg, 보다 바람직하게는 5-50 mg/kg 범위 내이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 욱리인 추출물 또는 분획물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 또한, 본 발명의 조성물은 상술한 욱리인 추출물 또는 분획물 이외에, 그 작용 (욱리인 추출물에 의한 육모 작용)을 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 양모제 또는 육모제를 함께 혼합하여 사용할 수 있다.
상기 담체로서, 정제수, 일가 알코올류(에탄올 또는 프로필 알코올), 다가 알코올류(글리세롤, 1,3-부티렌글리콜 또는 프로필렌글리콜), 고급 지방산류(팔미틸산 또는 리놀렌산), 유지류(소맥 배아유, 동백기름, 호호바유, 올리브유, 스쿠알 렌, 해바라기유, 마카데미아땅콩유, 아보가드유, 대두 수첨가 레시틴 또는 지방산 글리세라이드) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한 필요에 따라 계면활성제, 살균제, 산화방지제, 자외선 흡수제, 소염제 및 청량제를 첨가할 수 있다.
계면활성제는 폴리옥시에틸렌, 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌, 올레일에테르, 모노올레인산폴리옥시에틸렌, 폴리옥시에틸렌, 글리세릴모노스테아레이트, 모노스테아린산소르비탄, 모노올레인산폴리옥시에틸렌, 소르비탄, 자당지방산에스테르, 모노라우린산헥사글리세린, 폴리옥시에틸렌 환원라놀린, POE, 글리세릴피로글루타민산, 이소스테아린산, 디에스테르, N-아세틸글루타민 및 이소스테아릴에스테르로 이루어진 군에서 선택적으로 포함할 수 있다.
살균제는 히녹티올, 트리크로산, 크롤헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아즐렌 (azulene), 살리실산 및 징크피리타온으로 이루어진 군에서 선택적으로 포함할 수 있다.
산화방지제는 부틸히드록시아니솔, 몰식자산, 몰식자산프로필 및 에리소르빈산 중에서 어떠한 것도 사용가능하다.
자외선 흡수제는 디히드록시벤조페논 등의 벤조페논류, 멜라닌, 파라아미노벤조산에틸, 파라디메틸아미노벤조산 2-에틸헥실에스테르, 시녹사이트, 파라메톡시계피산 2-에틸헥실에스테르, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐) 벤조트리아졸, 우로카닌산 및 금속산화물 미립자 중에서 어떠한 것도 사용가능하다.
소염제로는 글리틸리틴산디칼륨 또는 알란토인을 사용할 수 있고, 청량제로 는 고추틴크 또는 1-멘톨을 사용할 수 있다.
상기 조성물의 제형은 욱리인 추출물 또는 분획물을 유효 성분으로서 배합할 수 있는 임의의 제형으로서 탈모방지 또는 육모용 화장품의 형태로는 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어에어졸, 포마드, 분말, 젤 등과 같이 용액, 솔젤, 에멀젼, 오일, 왁스, 에어졸 등 다양한 형태로 제조될 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 욱리인 추출물 또는 분획물뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 욱리인 추출물 또는 분획물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명의 탈모방지 또는 육모용 조성물은, 케라티노사이트 세포증식을 촉진 하며 궁극적으로 생체에서 탈모를 방지하고 육모를 촉진하는데 매우 우수한 작용을 한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
1:
욱리인
조추출물의
제조
실온 건조한 100 g의 욱리인을 믹서로 분쇄하여 분말화 한 후 100% 메탄올 1,000 ㎖로 4회 반복하여 추출하였다. 상기 추출원액을 여과한 후 농축하여 욱리인 조추출물 31.3 g을 제조하였다.
실시예
2:
욱리인
헥산
가용
분획물의
제조
상기 실시예 1의 욱리인 조추출물 31.3 g을 물 500 ㎖에 현탁시킨 후 헥산 500 ㎖로 3회 추출하고 그 상층액을 여과 농축하여 욱리인 헥산 가용 분획물 3.0 g을 수득하였다.
실시예
3:
욱리인
클로로포름 가용
분획물의
제조
상기 실시예 2에서 얻은 수가용성 분획물을 500 ㎖ 클로로포름으로 3회 추출 하고 그 상층액을 여과 농축하여 클로로포름 가용 분획물 1.0 g을 수득하였다.
실시예
4:
욱리인
에틸아세테이트 가용
분획물의
제조
상기 실시예 3에서 얻은 수가용성 분획물을 500 ㎖ 에틸아세테이트로 3회 추출하고 그 상층액을 여과 농축하여 에틸아세테이트 가용 분획물 0.97 g을 수득하였다.
실시예
5:
욱리인
부틸알코올 가용
분획물의
제조
상기 실시예 4에서 얻은 수가용성 분획물을 500 ㎖ 부틸알코올로 3회 추출하고 그 상층액을 여과 농축하여 부틸알코올 가용 분획물 2.2 g을 수득하였다.
실시예
6:
욱리인
물 가용
분획물의
제조
상기 실시예 5에서 얻은 수가용성 분획물을 여과 농축하여 물 가용 분획물 13.8 g을 수득하였다.
실험예
1:
케라티노사이트
세포증식 활성 실험
욱리인
추출물 및 용매
분획물에
따른 세포증식 활성 실험
96-웰 플레이트에서 SCC-25 세포주(ATCC)는 10% FBS(fetal bovine serum) 함유하는 DMEMM:F-10(1:1) 배지를 사용하여 배양하였고, 사람 유래의 HaCaT 케라티노사이트(고려대학교 생명공학원에서 분양 받음)는 10% FBS 함유하는 DMEM 배지를 사 용하여 배양한 후, FBS가 없는 배지로 교체하여 욱리인 추출물 및 분획 추출물을 농도별로 처리하고 72시간 (SCC-25) 또는 48시간 (HaCaT)동안 배양하였다. 이후 CCK-8 시약(Dojindo)을 10 ㎕씩 가하고 3시간 배양한 다음 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 욱리인 추출물 및 분획추출물이 케라티노사이트 세포증식에 미치는 영향을 욱리인을 처리하지 않은 대조군의 흡광도에 대한 %로 표시하였다.
실험결과는 실시예 1, 2, 3 , 4 , 5 및 6을 처리했을 때 케라티노사이트 세포의 증식률을 대조군과 대비한 %로 나타내었다.
시료 (조추출물) |
케라티노사이트 증식률(% 대조군) |
대조군 |
100 |
10 ㎍/㎖ |
140 |
30 ㎍/㎖ |
145 |
시료 (헥산 분획물) |
케라티노사이트 증식률(% 대조군) |
대조군 |
100 |
5 ㎍/㎖ |
162.5 |
10 ㎍/㎖ |
155.6 |
30 ㎍/㎖ |
87.8 |
시료 (클로로포름 분획물) |
케라티노사이트 증식률(% 대조군) |
대조군 |
100 |
5 ㎍/㎖ |
155.2 |
10 ㎍/㎖ |
149.3 |
30 ㎍/㎖ |
100.2 |
시료 (에틸아세테이트 분획물) |
케라티노사이트 증식률(% 대조군) |
대조군 |
100 |
5 ㎍/㎖ |
97.9 |
10 ㎍/㎖ |
102.2 |
30 ㎍/㎖ |
102.9 |
시료 (부틸알코올 분획물) |
케라티노사이트 증식률(% 대조군) |
대조군 |
100 |
5 ㎍/㎖ |
96.1 |
10 ㎍/㎖ |
109.6 |
30 ㎍/㎖ |
106.9 |
시료 (물 분획물) |
케라티노사이트 증식률(% 대조군) |
대조군 |
100 |
5 ㎍/㎖ |
98.1 |
10 ㎍/㎖ |
118.8 |
30 ㎍/㎖ |
96.2 |
상기 표 1 내지 표 6에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 욱리인 추출물 및 분획물은 케라티노사이트 세포증식을 유도하였고, 특히 욱리인 헥산 분획물과 클로로포름 분획물은 케라티노사이트 세포증식 효과가 매우 우수하였다.
실험예
2:
욱리인
헥산
분획물의
육모 촉진 효과 실험
(1) 실험방법
육모촉진 실험동물 모델을 제작하기 위하여, 15 g 폴리에틸렌글리콜 (polyethylen glycol: PEG) 3350 (Fluka) 및 85 g 폴리에틸렌글리콜 400을 수조상에서 65℃로 가온하여 녹인 후 여기에 탈모유발 물질인 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone: DHT, TCI사) 20 mg/kg b.w.를 첨가하여 잘 혼합하여 최종적으로 15% 폴리에틸렌글리콜 연고제제를 제조하였다. 실험동물은 C57BL/6 마우스(25± 5 g, 암컷, n=10)를 사용하였으며 등 부위를 미리 제모하고 상기 연고제제를 7일간 처리하여, 케라티노사이트가 증식되기 전인 성장기(anagen stage)가 되도록 유발하였다. 디하이드로테스토스테론(DHT) 20 mg/kg b.w. 및 분획물중 가장 효과가 우수한 욱리인 헥산 분획물 50 mg/kg b.w.를 에탄올 80%와 글리콜 20%가 혼합된 용매에 용해하여 제조된 스프레이 제제를 10일 동안 하루에 1회 도포하여 모발의 성장 정도를 관찰하였다. 대조군으로는 욱리인 헥산 분획추출물을 처리하지 않은 실험동물을 이용하였다.
(2) 실험결과
실험동물을 제모한 후 19일이 경과한 후 관찰한 결과, 제모만 실시한 군에서는 정상적으로 털이 자라는 것을 확인하였고(도 1), 디하이드로테스토스테론(DHT)을 7일간 처리하고 14일이 경과한 군은 시간이 경과하여도 거의 털이 자라지 않았으나(도 2), 디하이드로테스토스테론(DHT)을 7일간 처리하고 2일 동안 관찰한 후, 실시예 2에서 획득한 욱리인 헥산 가용 분획물을 14일간 처리한 군에서는 시간이 경과함에 따라 정상군과 유사하게 털이 자라는 것을 관찰하였다(도 3). 따라서, 본 발명의 욱리인 헥산 분획물은 생체 실험에서도 육모 촉진 효과가 매우 우수하다는 것을 알 수 있다.