KR100777464B1

KR100777464B1 - 엑티나시딘 화합물의 합성적인 제조 방법

Info

Publication number: KR100777464B1
Application number: KR1020027014555A
Authority: KR
Inventors: 쿠에바스카르멘; 페레즈마르타; 프란세스크안드레스; 페르난데츠카롤리나; 치차로요세루이스; 갈레고필라; 자르주엘로마리아; 만자나레스이그나시오; 마틴마리아지저스; 문트사이몬
Original assignee: 파르마 마르, 에스.에이.
Priority date: 2000-05-15
Filing date: 2001-05-15
Publication date: 2007-11-27
Also published as: UA75597C2; AU5649301A; EA006369B1; PT1289999E; EP1496060A1; SI1289999T1; PT1287004E; ES2290583T3; NZ532793A; DK1496060T3; EP1289999A1; MXPA02010701A; KR100830717B1; ATE300547T1; PL215769B1; AU783563B2; PT1496060E; DE60129753T2; HU228789B1; AU2001256496B2

Abstract

하기 화학식 XIV의 축합된 고리 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:

화학식 XIV

상기와 같은 생성물은 엑티나시딘을 포함하며, 스피로아민-1,4-가교를 갖는다. 상기 방법은 1-불안정한, 10-하이드록시, 18-보호된 하이드록시, 디-6,8-엔-5-온 축합된 고리 화합물을 사용하여 1,4-가교를 형성시킴을 포함한다. 1,4-가교의 형성 후에, C-18 보호를 제거하고 스피로아민을 도입시킨다.

엑티나시딘

Description

엑티나시딘 화합물의 합성적인 제조 방법{SYNTHETIC PROCESS FOR THE MANUFACTURE OF AN ECTEINASCIDIN COMPOUND}

본 발명은 합성 방법, 특히 엑티나시딘 화합물의 합성적인 제조 방법에 관한 것이다.

유럽 특허 제 309,477 호는 엑티나시딘 729, 743, 745, 759A, 759B 및 770에 관한 것이다. 상기 엑티나시딘 화합물들은 항균성 및 다른 유용한 성질을 갖는 것으로 개시되어 있다. 엑티나시딘 743은 현재 항종양제로서 임상적인 시험이 진행 중이다.

엑티나시딘 743은 하기 화학식 I의 복잡한 트리스(테트라하이드로이소퀴놀린페놀) 구조를 갖는다:

화학식 I

상기는 현재 해양성 피낭동물인 엑티나시딘 투르비나타(Ecteinascidin turbinata)의 추출물로부터 단리되어 제조되고 있다. 그 수율은 낮으며, 대체적인 제조 방법이 모색되고 있다.

엑티나시딘 화합물의 합성적인 제조 방법이 미국 특허 제 5,721,362 호에 개시되어 있으며, 또한 본 발명에 참고로 인용된 WO 9812198 호를 참조하시오. 상기 청구된 방법은 길고 복잡하며, 38 개의 실시예들에는 각각 엑티나시딘 743에 도달하기 위한 하나 이상의 합성 단계들이 개시되어 있다.

공지된 합성 방법에서, 1-불안정한, 10-하이드록시, 18-보호된 하이드록시, 디-6,8-엔-5-온 축합된 고리 화합물을 사용하여 1,4 가교를 형성시킨다. 실시예 33에 나타낸 바와 같이, 화합물 13을 화합물 14로 전환시킨다:

공지된 합성 방법에 따라, 실시예 34 내지 36의 단계에 의해 1,4 가교에 스피로퀴놀린을 형성시키고, 18-MOM 보호 그룹을 제거하여 엑티나시딘 770을 수득하고, 이어서 상기를 엑티나시딘 743으로 전환시킬 수 있다.

미국 특허 제 5,721,362 호의 청구항 25는 소정의 화학식 11의 중간체 페놀 화합물에 관한 것으로, 본 출원인들은 또한 이를 중간체 11 또는 Int-11이라 칭한다. 상기는 하기 화학식 II의 비스(테트라하이드로이소퀴놀린페놀) 구조를 갖는다:

화학식 II

상기 식에서,

MOM은 메톡시메틸 치환체이고,

TBDPS는 3급-부틸디페닐실릴 치환체이다.

중간체 11로부터, 또 다른 흥미있는 항종양제인 프탈라시딘을 합성할 수 있다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999). 프탈라시딘은 하기 화학식 III의 비스(테트라하이드로이소퀴놀린페놀) 유도체이다:

화학식 III

엑티나시딘 743 및 770에서, 1,4 가교는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는다:

화학식 IV

다른 공지된 엑티나시딘들로는 상이한 가교된 환상 고리 시스템, 예를 들어 엑티나시딘 722 및 736(이때 가교는 하기 화학식 V의 구조를 갖는다):

화학식 V

엑티나시딘 583 및 597(이때 가교는 하기 화학식 VI의 구조를 갖는다): 및

화학식 VI

액티나시딘 594 및 596(이때 가교는 하기 화학식 VII의 구조를 갖는다):

화학식 VII

중에 존재하는 시스템을 갖는 화합물들을 포함한다.

이들 및 관련 화합물에 대한 완전한 구조들은 문헌[J. Am. Chem. Soc.(1996) 118, 9017-9023]에 제공되어 있다.

엑티나시딘 화합물들에 대한 다른 문헌들로는 하기의 것들이 있다: Corey, E.J., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118 pp. 9202-9203; Rinehart, et al., Journal of National Products, 1990, "Bioactive Compounds from Aquatic and Terrestrial Sources", vol. 53, pp. 771-792; Rinehart et al., Pure and Appl. Chem., 1990, "Biologically active natural products", vol 62, pp. 1277-1280; Rinehart, et al., J. Org. Chem., 1990, "Ecteinascidins 729, 743, 745, 759A, 759B 및 770: Potent Antitumor Agents from the Caribbean Tunicate Ecteinascidia turbinata", vol. 55, pp. 4512-4515; Wright et al., J. Org. Chem., 1990, "Antitumour Tetrahydroisoquinoline Alkaloids from the Colonial Ascidian Ecteinascidia turbinata", vol. 55, pp. 4508-4512; Sakai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992, "Additional antitumor ecteinascidins from a Caribbean tunicate: Crystal structures and activities in vivo", vol. 89, 11456-11460; Science 1994, "Chemical Prospectors Scour the Seas for Promising Drugs", vol. 266, pp. 1324; Koenig, K.E., "Asymmetric Synthesis", ed. Morrison, Academic Press, Inc., Orlando, EL, vol. 5, 1985, p. 71; Barton, et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1, 1982, "Synthesis and Properties of a Series of Sterically Hindered Guanidine Bases", pp. 2085; Fukuyama et al., J. Am. Chem. Soc., 1982, "Stereocontrolled Total Synthesis of (+)-Saframycin B", vol. 104, pp. 4957; Fukuyama et al., J. Am Chem Soc., 1990, "Total Synthesis of (+)-Saframycin A", vol. 112, p. 3712; Saito, et al., J. Org. Chem., 1989, "Synthesis of Saframycins. Preparation of a Key Tricyclic Lactam Intermediate to Saframycin A", vol. 54, 5391; Still, et al., J. Org. Chem., 1978, "Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution", vol. 43, p. 2923; Kofron, W.G.; Baclawski, L.M., J. Org. Chem,. 1976, vol. 41, 1879; Guan et al., J. Biomolec. Struc. & Dynam., vol. 10 pp. 793-817(1993); Shamma et al., "Carbon-13 NMR Shift Assignments of Amines and Alkaloids", p. 206(1979); Lown et al., Biochemistry, 21, 419-428(1982); Zmijewski et al., Chem. Biol. Interactions, 52, 361-375(1985); Ito, CRC CRIT. Rev. Anal. Chem., 17, 65-143(1986); Rinehart et al., "Topics in Pharmaceutical Sciences 1989" pp. 613-626, D.D. Breimer, D.J. A. Cromwelin, K.K. Midha, Eds., Amsterdam Medical Press B.V., Noordwijk, The Netherlands(1989); Rinehart et al., "Biological Mass Spectrometry", 233-258 eds. Burlingame et al., Elsevier Amsterdam(1990); Guan et al., Jour. Biomolec. Struct. & Dynam. vol. 10pp. 793-817(1993); Nakagawa et al., J. Amer. Chem. Soc., 111: 2721-2722(1989); Lichter et al., "Food and Drugs from the Sea Proceedings"(1972), Marine Technology Society, Washington, D.C. 1973, 117-127; Sakai et al., J. Amer. Chem. Soc. 1996, 118, 9017; Garcia-Rocha et al., Brit. J. Cancer, 1996, 73:875-883; and Pommier et al., Biochemistry, 1996, 35:13303-13309.

가교된 환상 고리 시스템이 없는 추가의 화합물들이 공지되어 있다. 이들은 비스(테트라하이드로이소퀴놀린퀴논) 항종양-항균성 항생제인 사프라신 및 사프라마이신, 및 배양된 미생물 또는 해면으로부터 단리된 해양성의 천연 산물인 레니에라마이신 및 제스토마이신을 포함한다. 이들은 모두 공통적인 이량체성 테트라하이드로이소퀴놀린 탄소 골격을 갖는다. 이들 화합물을 방향족 고리의 산화 패턴에 따라 유형 I에서 IV의 4 가지 유형으로 분류할 수 있다.

I 형인, 이량체성 이소퀴놀린퀴논은 상기 부류 화합물에서 가장 흔하게 존재하는 화학식 VIII의 시스템이며, 하기 표 I을 참조하시오.

^a 지정은 호환 가능하다.

^b 이때 Q 그룹은 하기 화학식 IX를 갖는다:

화학식 IX

I 형의 방향족 고리는 사프라마이신 A, B 및 C; G 및 H; 및 소량 성분으로서 스트렙토마이세스 라벤둘라에(Streptomyces lavendulae)로부터 단리된 S에서 볼 수 있다. 시아노퀴논아민이라 칭하는 사프라마이신 A의 시아노 유도체가 일본 공개 공보 JP-A2 59/225189 및 60/084288에 공지되어 있다. 사프라마이신 Y₃, Yd₁, Ad ₁ 및 Yd₂는 배양 배지를 적합하게 보충시켜 유도한 생합성에 의해, 에스 라벤둘라에에 의해 생산되었다. 하나의 단위의 C-25 상의 질소를 다른 단위의 C-14에 결합시킴으로써 형성된 사프라마이신 Y_2b 및 Y_2b-d 이량체가 또한 에스 라벤둘라에의 보충된 배양 배지에서 생산되었다. 로도코커스 아미도필러스(Rhodococcus amidophilus)에 의해 생산된 C-25에서의 사프라마이신 A의 미생물에 의한 환원 산물인 사프라마 이신 AR₁(=AH₂)을 또한 에피머들의 1:1 혼합물로서 사프라마이신 A의 붕수소화 나트륨에 의한 비 입체선택적인 화학적 환원에 이어 크로마토그래피에 의한 분리(다른 이성체인 AH₁이 덜 극성이다)에 의해서 제조한다. 추가적인 환원 산물인 사프라마이신 AR₃, 21-데시아노-25-디하이드로사프라마이신 A(=25-디하이드로사프라마이신 B)가 동일한 미생물 전환에 의해 생산되었다. 노카르디아(Nocardia) 종을 사용한 사프라마이신 A의 또 다른 유형의 미생물 전환에 의해 사프라마이신 B가 생산되었고 마이코박테리움(Mycobacterium) 종에 의한 추가적인 환원에 의해 사프라마이신 AH¹Ac가 생산되었다. 상기 사프라마이신 AH₂ 및 AH₁의 25-O-아세테이트가 또한 생물학적 연구를 위해서 화학적으로 제조되었다.

화학식 X의 I 형 화합물이 또한 해양성 해면으로부터 단리되었으며, 하기 표 II를 참조하시오.

레니에라마이신 A 내지 D가, 생물유전학적으로 관련된 단량체성 이소퀴놀린 레니에론 및 관련 화합물과 함께, 멕시코에서 채집된 레니에라 종 해면의 항균 추출물로부터 단리되었다. 레니에라마이신 A의 구조를 초기에는 C-3, C-11 및 C-13에서 전화된 입체화학으로 정하였다. 그러나, 팔라우에서 채집된 동일한 해면으로부터 단리된, 신규의 관련 화합물인 레니에라마이신 E 및 F에 대한 ¹H NMR 데이터의 조심스러운 검사로 레니에라마이신의 고리 접합이 사프라마이신의 것과 동일함을 밝혔다. 이 결과 레니에라마이신 A 내지 D에 대해 이전에 정한 입체 화학이 사프라마이신의 것과 동일해야 한다는 결론을 얻었다.

제스토마이신이 스리랑카 바다로부터 채집된 제스토스폰지아(Xestospongia)에서 발견되었다.

환원된 하이드로퀴논 고리를 갖는 화학식 XI의 II 형 화합물은 에스 라벤둘라에로부터 단리된 사프라마이신 D 및 F, 및 믹소코커스 잔투스(Myxococcus xanthus)로부터 단리된 사프라마이신 Mx-1 및 Mx-2를 포함한다. 표 III을 참조하시오.

III 형 골격은 배양된 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens)로부터 단리된 항생제인 사프라신 A 및 B에서 발견된다. 하기 화학식 XII의 상기 항생제는 테트라하이드로이소퀴놀린-퀴논 서브유닛과 테트라하이드로이소퀴놀린페놀 서브유닛으로 이루어진다.

화학식 XII

R²¹은 사프라신 A에서 -H이고 사프라신 B에서 -OH이다.

IV 형 골격으로서 유일하게 분류된 화합물인 사프라마이신 R이 또한 에스 라벤둘라에로부터 단리되었다. 페놀 산소들 중 하나에 글리콜 에스테르 측쇄를 갖는 하이드로퀴논 고리로 이루어진 하기 화학식 XIII의 상기 화합물은 추정 상 그의 보통의 독성 때문에 사프라마이신 A의 전구약물인 듯 하다:

화학식 XIII

이들 공지된 모든 화합물들은 하기 화학식 XIV에 나타낸 바와 같은 5 개의 고리(A) 내지 (E)가 축합된 시스템을 갖는다:

화학식 XIV

고리 A 및 E는 엑티나시딘 및 일부 다른 화합물에서 페놀인 반면, 다른 화합물, 특히 사프라마이신에서는 퀴놀이다. 상기 화합물에서, 고리 B 및 D는 테트라하이드로인 반면, 고리 C는 퍼하이드로이다.

[발명의 목적]

상기 엑티나시딘 화합물 및 관련 화합물에 대한 대안적인 합성 경로들이 여전히 필요하다. 상기와 같은 합성 경로들은 공지된 항종양제에 대해 보다 경제적인 경로를 제공할뿐만 아니라 신규의 활성 화합물들에 대한 제조를 허용할 수 있다.

[발명의 요약]

본 발명은 엑티나시딘 또는 다른 테트라하이드로이소퀴놀린페놀 화합물의 중간체, 유도체 및 관련 구조들의 합성적인 제조 방법에 관한 것이다.

하나의 태양에서, 본 발명은 스피로아민-1,4-가교를 갖는 엑티나시딘 생성물 의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 1-불안정한, 10-하이드록시, 18-보호된 하이드록시, 디-6,8-엔-5-온 축합된 고리 화합물(이때 상기 축합된 고리는 화학식 XIV를 갖는다)을 사용하여 1,4-가교를 형성시킴을 포함한다. 본 발명에서, 상기 C-18의 보호는 스피로아민의 도입 전에 제거된다.

상기 신규의 합성 방법에 적합한 출발 물질은 천연 비스(테트라하이드로이소퀴놀린)알칼로이드와 관련된 화합물을 포함한다. 상기와 같은 출발 물질을 WO 0069862에 상세히 개시되어 있는 상이한 배양 브로쓰로부터, 또는 다른 합성 또는 생화학적 방법에 의해 입수할 수 있는 상이한 군의 사프라마이신 및 사프라신 항생제로부터 제조할 수 있다. 이 점에 있어서, WO 0069862는 본 발명에 내용 전체가 참고로 인용되어 있다. 본 PCT 출원은 WO 0069862로서 공개된 출원 PCT/GB 00/01852에 대해 우선권을 주장한다. 상기 출원의 내용이 본 명세서에 존재하지 않는 한은 이를 참고로 인용한다.

하나의 특정 태양에서, 본 발명은 엑티나시딘 743 및 관련 화합물의 제조를 위한 다수의 신규 합성 방법들에서의 중간체 21 화합물의 용도에 관한 것이다:

상기 중간체 21은 5-알릴옥시 그룹을 가지며, 이때 상기 알릴 그룹은 5-하이드록시 그룹을 보호하는 작용을 한다. 다른 보호 그룹들을 용이하게 사용할 수 있으며, 본 발명을 일반적으로, 다른 상기와 같은 5-보호된 하이드록시 화합물들의 사용으로 확장함은 물론이다.

엑티나시딘 743 및 관련 화합물의 제조

일반적으로, 중간체 21 또는 관련 화합물의 엑티나시딘 생성물로의 전환은 하기의 주요 변환들을 수반한다:

(a) 예를 들어 아세트산 중의 아질산 나트륨과의 반응에 의한 NH₂의 OH로의 전환.

(b) E-고리 페놀 보호.

(c) 보호된 시스테인 측쇄를 사용한 1 차 1-하이드록시 작용기의 보호에 의한 에스테르화.

(d) 알릴 그룹의 탈보호 및 산화.

(e) 환화 반응에 의한 가교된 고리의 생성.

(f) E-고리 페놀 및 시스테인 잔기의 탈보호.

(g) 트랜스 아민화 및 페터 스팽글러(Petter Spengler) 반응에 의한 퀴놀린 도입.

상기 중간체 화합물의 높은 작용성은 불필요한 부 반응들을 방지하기 위해서 E-고리 페놀 및 시스테인 측쇄에 대해 보호 그룹을 사용할 것을 필요로 한다.

상기와 같은 것으로서, 다수의 대체 중간체들을 특정 보호 그룹의 선택에 따 라 제조할 수 있다.

주로 페놀 고리 및 시스테인 측쇄의 아민에 대해 선택된 보호 그룹에 따라 상기 변환들을 결합시키는데 상이한 시퀀스들이 가능하다.

전체 합성 변환의 수는 또한 선택된 보호 그룹들의 함수이다.

예시로서, 보호 그룹들의 상이한 조합들에 대한 사용을 중간체 21(본 원에서는 SF21로서 지칭됨)로부터의 ET-743의 제조를 위한 6 개의 전형적인 경로들에 대해 하기에 개시한다.

경로	페놀 보호	시스테인 보호	단계 수
1	MOM	Boc	12
2	MEM	Boc	10
3	MEM	Cbz	11
4	MOM	Alloc	13
5	MEM	Alloc	13
6	MOM	Cbz	15

당해 분야의 숙련가들이 쉽게 알 수 있는 바와 같이, 본 원에 개시된 반응식들을 다양한 방식으로 변경 및/또는 결합시킬 수 있으며, 이로부터 생성된 단계들의 대안적인 시퀀스 및 화합물들은 본 발명의 일부이다.

또한, 상세히 나타내지 않은 다른 보호 그룹 전략의 사용도 본 발명의 일부이다.

6 개의 전형적인 합성 경로에 대한 상세한 과정

각 경로에 대한 완전한 반응식들을 하기 반응식 1 내지 6으로 나타낸다.

경로 1에서, E-고리 페놀의 보호를 Troc에 의한 SF21의 아민의 보호/탈보호 를 수반하는 3 개의 단계로 수행한다.

경로 1 및 2에 대해서, Boc에 의한 시스테인 측쇄의 보호는 페놀과 시스테인 그룹을 2 개의 별도의 단계보다는 단일 단계로 탈보호시킨다. 상기 나머지 경로들에 대해서, 추가적인 탈보호 단계가 요구된다.

경로 2에 대해서, 중간체 25는 직접적인 에스테르화 방법 및 MEM 그룹에 의한 페놀의 후속적인 보호의 사용을 통해 회피된다.

경로 2 및 3에서 E-고리 페놀의 보호는 디아조화 및 에스테르화 단계 후에 페놀이 경로 1의 3 단계 시퀀스에 의해서 보다는 단일 단계로 보호될때까지 지연된다.

경로 1, 2 및 3에서, 시스테인 유도체에 의한 1 차 알콜의 직접적인 에스테르화는 실릴 그룹에 의한 1 차 알콜의 비 생산적인 보호/탈보호 단계(경로 4 및 5)를 제거하여 상기 시퀀스를 2 개의 단계로 단축시킨다.

경로 6은 본 발명에서 단지 중간체 161로부터의 최종 단계로 간주되며, 이 중간체는 중간체 21로부터 쉽게 수득될 수 있다.

경로 4 및 5에서, 초기 디아조화 단계에 의해 생성된 1 차 알콜을 규소로 보호하여 E-고리 페놀을 선택적으로 보호하고 중간체 25를 피한다. A-고리의 변경(탈보호/산화)에 이어서, 상기 규소 그룹이 제거되고 1 차 알콜은 시스테인 유도체에 의해 에스테르화된다.

이러한 변화는 WO 0069862에 제공된 경로의 규모 확대에서 발견된 문제들의 직접적인 결과이다. 이러한 변화의 결과로서 전체 경로 2는 세 단계 더 짧으며 따라서 통상적인 제조에 대해서 잠재적으로 보다 적합하고/하거나 보다 저렴하다.

방법의 개요

따라서, 경로 1 내지 6에 비추어, 본 발명은 스피로아민-1,4-가교를 갖는 엑티나시딘 생성물의 제조 방법으로 연장되며, 상기 방법은 1-불안정한, 10-하이드록시, 18-보호된 하이드록시, 디-6,8-엔-5-온 축합된 고리 화합물을 사용한 1,4 가교의 형성을 포함하고, 이때 C-18 보호는 스피로아민의 도입 후에 제거된다.

하나의 변형 방법에서, 엑티나시딘 생성물은 21-하이드록시 그룹을 가지며, 상기 방법은 21-시아노 그룹을 21-하이드록시 그룹으로 전환시킴을 포함한다.

전형적으로는 스피로아민은 스피로퀴놀린, 특히 엑티나시딘 743의 스피로퀴놀린이다.

바람직한 방법에서 상기 1-불안정한, 10-하이드록시, 18-보호된 하이드록시, 디-6,8-엔-5-온 축합된 고리 화합물의 18-보호된 그룹을 MOM, 메톡시메틸; 또는 MEM, 메톡시에톡시메틸 그룹으로 보호시킨다.

적합하게는 상기 1-불안정한 그룹은 하기 화학식의 N-보호된 시스테이닐옥시메틸렌 그룹이다:

-CH₂-O-CO-CNHProt¹-CH₂-S-H

상기 식에서,

Prot¹은 전형적으로는 Boc, t-부틸옥시카보닐; Troc, 2,2,2-트리클로로에틸옥시카보 닐; Cbz, 벤질옥시카보닐; 또는 Alloc, 알릴옥시카보닐이다.

상기 방법의 일부 실시태양들의 경우에, Prot¹은 C-18 보호와 동일한 단계에서 제거된다.

상기 1-불안정한 그룹은 하기 화학식의 1-치환체로부터 생성될 수 있다:

-CH₂-O-CO-CNHProt¹-CH₂-S-Prot²

상기 식에서,

Prot²는 전형적으로는 Fm, 9-플루오레닐메틸이다.

화학식 -CH₂-O-CO-CNHProt¹-CH₂-S-Prot²의 1 치환체를 -CH₂-O-H 치환체의 에스테르화에 의해 형성시킬 수 있다.

상기 에스테르화는 상기 10-하이드록시, 디-6,8-엔-5-온-구조의 형성 전 또는 후에 수행될 수 있다.

하나의 변형 방법에서, 청구된 방법은 1-아미노메틸렌, 5-보호된 하이드록시, 7,8-디옥시메틸렌, 18-하이드록시, 21-시아노 축합된 고리 화합물로부터 출발한다.

상기 1-아미노메틸렌 그룹의 일시적인 보호는 상기 18-하이드록시 그룹에서의 보호를 허용하며 상기 일시적인 보호는 제거될 수 있다.

한편으로, 상기 C-18 하이드록시 그룹을 1-에스테르 작용기의 형성 후에 보호할 수 있다.

또 다른 변형 방법에서, 1-아미노메틸렌 그룹을 1-하이드록시메틸렌 그룹으로 전환시키고 상기 1-하이드록시메틸렌 그룹을 일시적으로 보호하여 상기 18-하이드록시 그룹을 보호하고 상기 일시적인 보호를 제거한다.

상기 축합된 고리 구조는 적합하게는 하기 화학식, 특히 R¹⁵가 H인 화학식을 갖는다:

나머지 치환체들 중 하나 이상 또는 전부는 엑티나시딘 743에서와 같을 수 있다.

반합성

본 발명은 반합성적 합성에서 공지된 화합물인 사프라신 B(또한 퀴논아민이라고도 칭함)의 사용을 허용한다.

보다 일반적으로는, 본 발명은 엑티나시딘 또는 천연 비스(테트라하이드로이소퀴놀린)알칼로이드로부터 출발하는 다른 테트라하이드로이소퀴놀린페놀 화합물의 중간체, 유도체 및 관련 구조의 형성을 위한 반합성적 방법에 관한 것이다. 상기 반합성 방법에 적합한 출발 물질은 상이한 배양 브로쓰로부터 입수할 수 있는 사프라마이신 및 사프라신 항생제 군, 및 또한 해양성 해면으로부터 입수할 수 있는 레 니에라마이신 및 제스토마이신 화합물 군을 포함한다.

출발 화합물에 대한 일반적인 화학식 XV는 하기와 같다:

상기 식에서,

R¹은 아미도메틸렌 그룹, 예를 들어 -CH₂-NH-CO-CR^25aR^25bR ^25c이고, 여기에서 R^25a 및 R^25b는 케토 그룹을 형성하거나, 또는 하나는 -OH, -NH₂ 또는 -OCOCH₃이고 다른 하나는 -CH₂COCH₃, -H, -OH 또는 -OCOCH₃이나, 단 R^25a가 -OH 또는 -NH₂인 경우 R^25b는 -OH가 아니고 R^25c는 -H, -CH₃ 또는 -CH₂CH₃이거나, 또는

R¹은 아실옥시메틸렌 그룹, 예를 들어 -CH₂-O-CO-R이고, 여기에서 R은 -C(CH₃)=CH-CH₃ 또는 -CH₃이고;

R⁵ 및 R⁸은 독립적으로 -H, -OH 및 -OCOCH₂OH 중에서 선택되거나, 또는 R⁵ 및 R⁸은 모두 케토이고 고리 A는 p-벤조퀴논 고리이며;

R^14a 및 R^14b는 모두 -H이거나, 또는 하나는 -H이고 다른 하나는 -OH, -OCH₃ 또는 -OCH₂CH₃이거나, 또는

R^14a 및 R^14b가 함께 케토 그룹을 형성하고;

R¹⁵ 및 R¹⁸은 독립적으로 -H 및 -OH 중에서 선택되거나, 또는 R⁵ 및 R⁸은 모두 케토이고 고리 A는 p-벤조퀴논 고리이며;

R²¹은 -OH 또는 -CN이다.

이들 화합물군에 대해 보다 일반적인 화학식을 하기에 제공한다:

상기 식에서,

R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀에 의해 정의된 치환체 그룹들은 각각 독립적으로, H, OH, OCH₃, CN, =O, CH₃로 이루어진 그룹 중에서 선택되고;

X는 언급된 천연 생성물 중에 함유된 상이한 아미드 또는 에스테르 작용기이고;

각각의 점선으로된 원은 1, 2 또는 3 개의 임의적인 이중 결합을 나타낸다.

따라서, 본 발명에 따라 이제 중간체 11 또는 12를 포함한 중간체의 제조, 및 따라서 엑티나시딘 화합물뿐만 아니라 프탈라시딘 및 추가적인 화합물들의 제조를 위한 반합성 경로를 제공한다. 본 발명의 반합성 경로들은 각각 목적하는 생성물에 도달하기 위한 다수의 변환 단계들을 포함한다. 각 단계들은 원래 본 발명에 따른 공정들이다. 본 발명은 예시된 경로들로 제한되지 않으며, 예를 들어 적합한대로 변환 단계들의 순서를 변화시키거나 또는 사용되는 보호 그룹들을 변화시킴으로써 대체 경로들을 제공할 수도 있다.

특히, 본 발명은 하기 화학식 XVI의 21-시아노 출발 물질을 제공함을 포함한다:

화학식 XVI

상기 식에서,

R¹, R⁵, R⁸, R^14a, R^14b, R¹⁵ 및 R¹⁸은 정의된 바와 같다.

21 번 위치에 상이한 치환체를 갖는 화학식 XVI의 다른 화합물들이 또한 가 능한 출발 물질들을 나타낼 수 있다. 일반적으로, R²¹이 하이드록시 그룹인 화학식 XV 화합물의 21-하이드록시 그룹의 친핵성 치환에 의해 생성될 수 있는 임의의 유도체가 후보이다. 적합한 21-치환체의 예로는 비 제한적으로 하기와 같은 것들이 있다:

머캅토 그룹;

알킬티오 그룹(탄소수 1 내지 6의 알킬 그룹);

아릴티오 그룹(탄소수 6 내지 10을 갖고, 예를 들어 탄소수 1 내지 6의 알킬 그룹, 탄소수 1 내지 6의 알콕시 그룹, 할로겐 원자, 머캅토 그룹 및 니트로 그룹 중에서 선택된 하나 내지 5 개의 치환체로 치환되거나 비 치환된 아릴 그룹);

아미노 그룹;

모노- 또는 디알킬아미노(상기 또는 각각의 알킬 그룹이 탄소수 1 내지 6을 갖는다);

모노- 또는 디아릴아미노 그룹(상기 또는 각각의 아릴 그룹이 아릴티오 그룹과 관련하여 상기 정의한 바와 같다);

화학식 -C(R^a)(R^b)-C(=O)R^c[이때 R^a 및 R^b는 수소 원자, 탄소수 1 내지 20의 알킬 그룹, 아릴 그룹(아릴티오 그룹과 관련하여 상기 정의된 바와 같음) 및 아르알킬 그룹(이때 탄소수 1 내지 4의 알킬 그룹이 아릴티오 그룹과 관련하여 상기 정의한 바와 같은 아릴 그룹에 의해 치환됨) 중에서 선택되나, 단 R^a 및 R^b 중 하나는 수소 원자이고, R^c는 수소 원자, 탄소수 1 내지 20의 알킬 그룹, 아릴 그룹(아릴티오 그룹과 관련하여 상기 정의된 바와 같음), 아르알킬 그룹(이때 탄소수 1 내지 4의 알킬 그룹이 아릴티오 그룹과 관련하여 상기 정의한 바와 같은 아릴 그룹에 의해 치환됨), 탄소수 1 내지 6의 알콕시 그룹, 아미노 그룹, 및 상기 정의한 바와 같은 모노- 또는 디알킬아미노 그룹 중에서 선택된다]의 α-카보닐알킬 그룹.

따라서, 보다 일반적인 태양에서, 본 발명은 제 1 단계가 친핵성 시약을 사용하여 21-유도체를 형성시키는 것인 방법에 관한 것이다. 본 출원인들은 상기와 같은 화합물을 21-Nuc 화합물로서 지칭한다.

21-시아노 그룹의 존재는 몇몇 최종 생성물, 특히 엑티나시딘 770 및 프탈라시딘에 필요한 반면, 다른 최종 생성물의 경우에 상기는 또 다른 치환체, 예를 들어 엑티나시딘 743 또는 21-하이드록시프탈라시딘의 21-하이드록시 그룹으로 쉽게 전환될 수 있는 보호 그룹으로서 작용한다. 출발 물질로서 상기 21-시아노 화합물을 채택하는 것은 상기가 임의로 제거될 때까지 후속의 합성 단계들 동안 상기 분자를 효과적으로 안정화시킨다. 다른 21-Nuc 화합물들이 상기 및 다른 이점들을 제공할 수 있다.

하나의 중요한 태양에서, 본 발명은 비스- 또는 트리스-(테트라하이드로이소퀴놀린페놀) 화합물에서 화학식 XVI의 21-시아노 화합물의 용도이다. 제조될 수 있는 생성물로는 중간체 11 또는 21과 같은 중간체, 및 엑티나시딘뿐만 아니라 관련 구조의 신규 화합물 및 공지된 화합물이 있다.

바람직한 출발 물질은 R^14a 및 R^14b가 모두 수소인 화학식 XV 또는 XVI의 화합물들을 포함한다. 바람직한 출발 물질은 또한 R¹⁵가 수소인 화학식 XV 또는 XVI의 화합물들을 포함한다. 더욱또한, 바람직한 출발 물질은 고리 E가 페놀 고리인 화학식 XV 또는 XVI의 화합물들을 포함한다. 바람직한 출발 물질은 R⁵, R⁸, R¹⁵ 및 R¹⁸ 중 하나 이상, 양호하게는 2 또는 3 개 이상이 수소가 아닌 화학식 XV 또는 XVI의 화합물을 추가로 포함한다.

본 발명에 적합한 출발 물질의 예로는 사프라마이신 A, 사프라마이신 B, 사프라마이신 C, 사프라마이신 G, 사프라마이신 H, 사프라마이신 S, 사프라마이신 Y₃, 사프라마이신 Yd₁, 사프라마이신 Ad₁, 사프라마이신 Yd₂, 사프라마이신 AH₂, 사프라마이신 AH₂Ac, 사프라마이신 AH₁, 사프라마이신 AH₁Ac, 사프라마이신 AR ₃, 레니에라마이신 A, 레니에라마이신 B, 레니에라마이신 C, 레니에라마이신 D, 레니에라마이신 E, 레니에라마이신 F, 제스토마이신, 사프라마이신 D, 사프라마이신 F, 사프라마이신 Mx-1, 사프라마이신 Mx-2, 사프라신 A, 사프라신 B 및 사프라마이신 R이 있다. 바람직한 출발 물질은 R²¹ 그룹의 경우 21 번 위치에 시아노 그룹을 갖는다.

특히 바람직한 태양에서, 본 발명은 변환 단계를 사프라신 B에 적용시키는 반합성 방법을 포함한다:

사프라신 B는 엑티나시딘과 밀접하게 관련된 고리 시스템을 나타낸다. 상기 화합물은 동일한 5환 구조를 가지며 오른쪽 방향족 고리인 고리 E에 동일한 치환 패턴을 갖는다. 또한 사프라신 B는 ET-743의 전체 합성에서 합성 중간체들 중 일부, 특히 중간체 11 또는 21과 매우 근사한 유사성을 제공한다. 상기와 같은 중간체를 잘 확립된 방법을 사용하여 Et-743으로 변환시킬 수 있다. 따라서 사프라신 B의 중간체 11 또는 21로의 합성적 전환은 ET-743을 수득하기 위한 반 합성 방법을 제공한다.

따라서, 본 출원인들은 상기 화합물 사프라신 B로부터 제조된 중간체 11 또는 21, 및 중간체 11 또는 21로부터 유도된 화합물, 특히 엑티나시딘 화합물을 제공한다. 또한, 사프라신 B로부터 제조된 프탈라시딘을 제공한다. 본 발명은 또한 중간체 11 또는 21, 엑티나시딘 화합물 및 본 발명의 다른 중간체들의 제조에서 사프라신 B의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 다른 제시된 출발 물질들로부 터 유도된 본 원에 개시된 화합물, 및 상기와 같은 화합물의 제조에서 상기와 같은 화합물들의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 보다 바람직한 출발 물질은 21 시아노 그룹을 갖는다. 현재 가장 바람직한 본 발명의 화합물은 하기 화학식 2의 화합물이다. 이 화합물은 사프라신 B로부터 직접 수득되며, 반합성 공정에서 중요 중간체로 간주된다:

화학식 2

관련된 태양에서, 본 출원인들은 슈도모나스 플루오레센스의 사프라신 B 생산 균주의 발효 및 시아나이드 이온을 사용한 배양된 브로쓰의 후처리에 의한 시아노사프라신 B를 제공한다. 상기 슈도모나스 플루오레센스의 바람직한 균주는 균주 A2-2, FERM BP-14로, 이는 EP 055 299의 과정에 사용된다. 시아나이드 이온의 적합한 공급원은 칼륨 시아나이드이다. 전형적인 후처리에서, 상기 브로쓰를 여과하고 과잉의 시아나이드 이온을 가한다. 적합한 교반 간격, 예를 들어 1 시간의 간격 후에, pH를 알칼리성, 즉 pH 9.5로 만들고, 유기 추출에 의해 조 추출물을 수득하고, 이를 추가로 정제하여 시아노사프라신 B를 수득할 수 있다.

의구심을 피하기 위해서, 본 특허 명세서에 나타낸 입체 화학들은 천연 생성물의 정확한 입체 화학에 대한 이해를 바탕으로 한다. 지정된 입체화학에서 오차가 발견된다는 점에서, 본 특허 명세서 전체를 통해 제공된 화학식에서 적합한 보정을 수행할 필요가 있다. 더욱또한, 합성 방법을 변경시킬 수 있다는 점에서 본 발명은 입체이성체까지 확장된다.

본 발명의 생성물은 전형적으로 하기 화학식 XVIIb를 가지며, 특히 R⁵가 아세틸옥시 또는 탄소수 4 이하의 다른 아실옥시 그룹인 아실 유도체를 포함한 유도체를 포함한다:

상기 식에서,

R¹ 및 R⁴는 함께 하기 화학식 IV, V, VI 또는 VII의 그룹을 형성하고:

R⁵는 -H 또는 -OH이고;

R⁷ 및 R⁸은 함께 -O-CH₂-O- 그룹을 형성하고;

R^14a 및 R^14b는 모두 -H이거나, 또는 하나는 -H이고 다른 하나는 -OH, -OCH₃ 또는 -OCH₂CH₃이거나, 또는 R^14a 및 R^14b가 함께 케토 그룹을 형성하고;

R¹⁵는 -H 또는 -OH이고;

R²¹은 -H, -OH 또는 -CN이다.

화학식 XVIIb에서, 전형적으로 R⁴를 갖는 R¹은 화학식 IV 또는 V를 형성한다. 그룹 R¹⁸은 대개 보호된다. 대개 R²¹은 시아노이다.

바람직하게는 R^14a 및 R^14b는 수소이다. 바람직하게는 R¹⁵는 수소이다. O-아실 유도체는 특히 5 번 위치에서 적합하게는 지방족 O-아실 유도체, 특히 탄소수 1 내지 4의 아실 유도체 및 전형적으로는 O-아세틸 유도체이다.

페놀 및 하이드록시 그룹에 대해 적합한 보호 그룹으로는 에테르 및 에스테르, 예를 들어 알킬, 알콕시알킬, 아릴옥시알킬, 알콕시알콕시알킬, 알킬실릴알콕시알킬, 알킬티오알킬, 아릴티오알킬, 아지도알킬, 시아노알킬, 클로로알킬, 헤테로사이클릭, 아릴아실, 할로아릴아실, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 알크아릴알킬, 알콕시아릴알킬, 니트로아릴알킬, 할로아릴알킬, 알킬아미노카보닐아릴알킬, 알킬설피닐아릴알킬, 알킬실릴 및 다른 에테르, 및 아릴아실, 아릴 알킬 카보네이트, 지방족 카보네이트, 알킬설피닐아릴알킬 카보네이트, 알킬 카보네이트, 아릴 할로알킬 카보네이트, 아릴 알케닐 카보네이트, 아릴 카바메이트, 알킬 포스피닐, 알킬포스피노티오일, 아릴 포스피노티오일, 아릴 알킬 설포네이트 및 다른 에스테르가 있다. 상기와 같은 그룹들은 R¹에 대해 앞서 언급한 그룹들에 의해 임의로 치환될 수도 있다.

아민에 대해 적합한 보호 그룹으로는 카바메이트, 아미드 및 다른 보호 그룹, 예를 들어 알킬, 아릴알킬, 설포- 또는 할로-아릴알킬, 할로알킬, 알킬실릴알킬, 아릴알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬아릴알킬, 헤테로사이클릴알킬, 니트로아릴알킬, 아실아미노알킬, 니트로아릴디티오아릴알킬, 디사이클로알킬카복스아미도알킬, 사이클로알킬, 알케닐, 아릴알케닐, 니트로아릴알케닐, 헤테로사이클릴알케닐, 헤테로사이클릴, 하이드록시헤테로사이클릴, 알킬디티오, 알콕시- 또는 할로- 또는 알킬설피닐 아릴알킬, 헤테로사이클릴아실 및 다른 카바메이트, 및 알카노일, 할로 알카노일, 아릴알카노일, 알케노일, 헤테로사이클릴아실, 아로일, 아릴아로일, 할로아로일, 니트로아로일 및 다른 아미드뿐만 아니라 알킬, 알케닐, 알킬실릴알콕시알킬, 알콕시알킬, 시아노알킬, 헤테로사이클릴, 알콕시아릴알킬, 사이클로알킬, 니트로아릴, 아릴알킬, 알콕시- 또는 하이드록시- 아릴알킬 및 다수의 다른 그룹들이 있다. 상기와 같은 그룹들은 R¹에 대해 앞서 언급한 그룹들로 임의로 치환될 수도 있다.

상기와 같은 보호 그룹의 예를 하기 표에 나타낸다.

-OH 그룹에 대한 보호
에테르	약어
메틸
메톡시메틸	MOM
벤질옥시메틸	BOM
메톡시에톡시메틸	MEM
2-(트리메틸실릴)에톡시메틸	SEM
메틸티오메틸	MTM
페닐티오메틸	PTM
아지도메틸
시아노메틸
2,2-디클로로-1,1-디플루오로에틸
2-클로로에틸
2-브로모에틸
테트라하이드로피라닐	THP
1-에톡시에틸	EE
펜아실
4-브로모펜아실
사이클로프로필메틸
알릴
프로파길
이소프로필
사이클로헥실
t-부틸
벤질
2,6-디메틸벤질
4-메톡시벤질	MPM 또는 PMB
o-니트로벤질
2,6-디클로로벤질
3,4-디클로로벤질
4-(디메틸아미노)카보닐벤질
4-메틸설피닐벤질	Msib
9-안트릴메틸
4-피콜릴
헵타플루오로-p-톨릴
테트라플루오로-4-피리딜
트리메틸실릴	TMS
t-부틸디메틸실릴	TBDMS
t-부틸디페닐실릴	TBDPS
트리이소프로필실릴	TIPS

에스테르
아릴 포르메이트
아릴 아세테이트
아릴 레불리네이트
아릴 피발로에이트	ArOPv
아릴 벤조에이트
아릴 9-플루오로카복실레이트
아릴 메틸 카보네이트
1-아다만틸 카보네이트
t-부틸 카보네이트	BOC-OAr
4-메틸설피닐벤질 카보네이트	Msz-Oar
2,4-디메틸펜트-3-일 카보네이트	Doc-Oar
아릴 2,2,2-트리클로로에틸 카보네이트
아릴 비닐 카보네이트
아릴 벤질 카보네이트
아릴 카바메이트
디메틸포스피닐	Dmp-OAr
디메틸포스피노티오일	Mpt-OAr
디페닐포스피노티오일	Dpt-Oar
아릴 메탄설포네이트
아릴 톨루엔설포네이트
아릴 2-포르밀벤젠설포네이트

-NH ₂ 그룹에 대한 보호
카바메이트	약어
메틸
에틸
9-플루오레닐메틸	Fmoc
9-(2-설포)플루오레닐메틸
9-(2,7-디브로모)플루오레닐메틸
17-테트라벤조[a,c,g,i]플루오레닐메틸	Tbfmoc
2-클로로-3-인데닐메틸	Climoc
벤즈[f]인덴-3-일메틸	Bimoc
2,7-디-t-부틸[9-(10,10-디옥소-10,10,10,10-테트라하이드로티옥산틸)메틸	DBD-Tmoc
2,2,2-트리클로로에틸	Troc
2-트리메틸실릴에틸	Teoc
2-페닐에틸	hZ
1-(1-아다만틸)-1-메틸에틸	Adpoc
2-클로로에틸
1,1-디메틸-2-클로로에틸
1,1-디메틸-2-브로모에틸
1,1-디메틸-2,2-디브로모에틸	DB-t-BOC
1,1-디메틸-2,2,2-트리클로로에틸	TCBOC
1-메틸-1-(4-비페닐)에틸	Bpoc
1-(3,5-디-t-부틸페닐)-1,1-메틸에틸	t-Burmeoc
2-(2'- 및 4'-피리딜)에틸	Pyoc
2,2-비스(4'-니트로페닐)에틸	Bnpeoc
n-(2-피발로일아미노)-1,1-디메틸에틸
2-[(2-니트로페닐)디티오]-1-페닐에틸	NpSSPeoc
2-(n,n-디사이클로헥실카복스아미도)에틸
t-부틸	BOC
1-아다만틸	1-Adoc
2-아다만틸	2-Adoc
비닐	Voc
알릴	Aloc 또는 Alloc
1-이소프로필알릴	Ipaoc
신나밀	Coc
4-니트로신나밀	Noc
3-(3'-피리딜)프로프-2-에닐	Paloc
8-퀴놀릴
n-하이드록시피페리디닐
알킬디티오
벤질	Cbz 또는 Z
p-메톡시벤질	Moz
p-니트로벤질	PNZ
p-브로모벤질
p-클로로벤질
2,4-디클로로벤질
4-메틸설피닐벤질	Msz
9-안트릴메틸
디페닐메틸
페노티아지닐-(10)-카보닐
n'-p-톨루엔설포닐아미노카보닐
n'-페닐아미노티오카보닐

아미드
포름아미드
아세트아미드
클로로아세트아미드
트리플루오로아세트아미드	TFA
페닐아세트아미드
3-페닐프로판아미드
펜트-4-엔아미드
피콜린아미드
3-피리딜카복스아미드
벤즈아미드
p-페닐벤즈아미드
n-프탈이미드
n-테트라클로로프탈이미드	TCP
4-니트로-n-프탈이미드
n-디티아숙신이미드	Dts
n-2,3-디페닐말레이미드
n-2,5-디메틸피롤
n-2,5-비스(트리이소프로필실록시)피롤	BIPSOP
n-1,1,4,4-테트라메틸디실아자사이클로펜타네이트 부가물	STABASE
1,1,3,3-테트라메틸-1,3-디실라이소인돌린	BSB

특정한 -NH 보호 그룹
n-메틸아민
n-t-부틸아민
n-알릴아민
n-[2-트리메틸실릴에톡시]메틸아민	SEM
n-3-아세톡시프로필아민
n-시아노메틸아민
n-(1-이소프로필-4-니트로-2-옥소-3-피롤린-3-일)아민
n-2,4-디메톡시벤질아민	Dmb
2-아자노르보르넨
n-2,4-디니트로페닐아민
n-벤질아민	Bn
n-4-메톡시벤질아민	MPM
n-2,4-디메톡시벤질아민	DMPM
n-2-하이드록시벤질아민	Hbn
n-(디페닐메틸)아미노	DPM
n-비스(4-메톡시페닐)메틸아민
n-5-디벤조수베릴아민	DBS
n-트리페닐메틸아민	Tr
n-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아미노	MMTr
n-9-페닐플루레닐아민	Pf
n-페로세닐메틸아민	Fcm
n-2-피콜릴아민 n'-옥사이드
n-1,1-디메틸티오메틸렌아민
n-벤질리덴아민
n-p-메톡시벤질리덴아민
n-디페닐메틸렌아민
n-(5,5-디메틸-3-옥소-1-사이클로헥세닐)아민
n-니트로아민
n-니트로소아민
디페닐포스핀아미드	Dpp
디메틸티오포스핀아미드	Mpt
디페닐티오포스핀아미드	Ppt
디벤질 포스포르아미데이트
2-니트로벤젠설펜아미드	Nps
n-1-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디페닐)에틸설펜아미드	TDE
3-니트로-2-피리딘설펜아미드	Npys
p-톨루엔설폰아미드	Ts
벤젠설폰아미드

본 발명의 특별한 엑티나시딘 생성물은 하기 화학식 XVIII의 화합물 및 그의 아실 유도체, 보다 특히 5-아세틸 유도체를 포함한 5-아실 유도체를 포함한다:

상기 식에서,

R¹ 및 R⁴는 하기 화학식 IV, V, VI 또는 VII의 그룹, 보다 특히 IV 또는 V의 그룹을 형성하고:

화학식 IV

화학식 V

화학식 VI

화학식 VII

R²¹은 -H, -OH 또는 -CN, 보다 특히 -OH 또는 -CN이다.

일반적으로, 21-시아노 출발 화합물의, 예를 들어 화학식(XVIII)의 엑티나시 딘 생성물로의 전환은 하기를 포함한다:

a) 경우에 따라 고리 E의 퀴논 시스템의 페놀 시스템으로의 전환;

b) 경우에 따라 고리 A의 퀴논 시스템의 페놀 시스템으로의 전환;

c) 고리 A의 페놀 시스템의 메틸렌디옥시페놀 고리로의 전환;

d) 고리 B의 1 번 및 4 번 위치에 교차하여 화학식 IV, VI 또는 VII의 가교된 스피로 고리 시스템의 형성; 및

e) 적합하게는 아실화와 같은 유도체화.

단계 (a)의, 경우에 따라 고리 E의 퀴논 시스템의 페놀 시스템으로의 전환을 통상적인 환원 과정에 의해 수행할 수 있다. 적합한 시약 시스템은 팔라듐-탄소 촉매와 수소이지만, 다른 환원 시스템들을 사용할 수 있다.

단계 (b)의, 경우에 따라 고리 A의 퀴논 시스템의 페놀 시스템으로의 전환은 단계 (a)와 유사하며, 보다 상세한 설명은 필요하지 않다.

단계 (c)의, 고리 A의 페놀 시스템의 메틸렌디옥시페놀 고리로의 전환을 추정 상 단계 (b)와 함께 다수의 방식으로 수행할 수 있다. 예를 들어, 퀴논 고리 A를 7 번 위치에서 메톡시 치환체로 탈메틸화시키고 디하이드로퀴논으로 환원시키고 적합한 친전자성 시약, 예를 들어 CH₂Br₂, BrCH₂Cl 또는 유사한 2 가 시약으로 포착하여 메틸렌디옥시 고리 시스템을 직접 수득하거나, 또는 티오카보닐디이미다졸과 같은 2 가 시약을 사용하여 치환된 메틸렌디옥시 고리 시스템을 수득하고 이를 목적하는 고리로 전환시킬 수 있다.

단계 (d)를, 전형적으로는 1 번 위치에서 목적하는 가교의 형성을 지원할 수 있는 가교 시약에 의해 적합하게 치환시키고, 4 번 위치에 엑센도 퀴논 메티드를 형성시키고, 상기 메티드를 1-치환체와 반응시켜 가교된 구조를 생성시킴으로써 수행한다. 바람직한 가교 시약은 하기 화학식 XIX를 갖는다:

상기 식에서,

Fu는 보호된 작용기, 예를 들어 -NHProt^4a 그룹을 가리키고,

Prot³은 보호 그룹이고,

점선은 임의의 이중 결합을 나타낸다.

적합하게는 상기 메티드를 먼저 고리 A와 B 접합부의 10 번 위치에 하이드록시 그룹을 도입시켜 하기 화학식 XX의 부분 구조 또는 보다 바람직하게는 하기 화학식 XXI의 부분 구조를 형성시킴으로써 제조한다:

상기 식들에서,

R" 그룹은 화학식 IV, V, VI 또는 VII의 목적하는 그룹에 대해서 선택된다.

처음 2 개의 상기와 같은 그룹에 대해서, R" 그룹은 전형적으로는 -CHFu-CH₂-SProt³의 형태를 취한다. 이어서 보호 그룹을 제거하고 적합한대로 변형시켜 목적하는 화합물을 수득할 수 있다.

단계 (d)에 전형적인 과정은 본 발명에 참고로 인용된 미국 특허 제 5,721,362 호에 제공되어 있다. 특히 상기 미국 특허의 컬럼 8, 단계 (1) 및 실 시예 33의 구절 및 관련 구절을 참고로 한다.

단계 (e)의 유도체화는 예를 들어 R^a-CO-에 의한 아실화를 포함할 수 있으며, 이때 R^a는 다양한 그룹, 예를 들어 알킬, 알콕시, 알킬렌, 아릴알킬, 아릴알킬렌, 아미노산 아실 또는 헤테로사이클릴일 수 있고, 이들 각각은 할로, 시아노, 니트로, 카복시알킬, 알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴옥시, 알킬, 아미노 또는 치환된 아미노로 임의로 치환된다. 다른 아실화제들로는 이소티오시아네이트, 예를 들어 아릴 이소티오시아네이트, 특히 페닐 이소시아네이트가 있다. R^a의 알킬, 알콕시 또는 알킬렌 그룹은 적합하게는 탄소수 1 내지 6 또는 12를 갖고, 선형이거나, 분지되거나 환상일 수 있다. 아릴 그룹은 전형적으로는 페닐, 비페닐 또는 나프틸이다. 헤테로사이클릴 그룹은 방향족이거나 또는 부분 또는 완전히 불포화되고 적합하게는 4 내지 8 개의 고리 원자, 보다 바람직하게는 5 또는 6 개의 고리 원자를 가지며, 이때 하나 이상의 헤테로원자는 질소, 황 및 산소 중에서 선택된다.

비 제한적으로, 전형적인 R^a 그룹으로는 알킬, 할로알킬, 알콕시알킬, 할로알콕시알킬, 아릴알킬렌, 할로알킬아릴알킬렌, 아실, 할로아실, 아릴알킬, 알케닐 및 아미노산이 있다. 예를 들어, R^a-CO-는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐, 이소발레릴카보닐, 트랜스-3-(트리플루오로메틸)신나모일카보닐, 헵타플루오로부티릴카보닐, 데카노일카보닐, 트랜스-신나모일카보닐, 부티릴 카보닐, 3-클로로프로피오닐카보닐, 신나모일카보닐, 4-메틸신나모일카보닐, 하이드로신나모일카보닐, 또는 트랜스-헥세노일카보닐, 또는 알라닐, 아르기닐, 아스파틸, 아스파라길, 시스틸, 글루타밀, 글루타미닐, 글리실, 히스티딜, 하이드록시프롤릴, 이소류실, 류실, 리실, 메티오닐, 페닐알라닐, 프롤릴, 세릴, 쓰레오닐, 티로닐, 트립토필, 티로실, 발릴뿐만 아니라 다른 덜 통상적인 아미노산 아실 그룹뿐만 아니라 프탈이미도 및 다른 환상 아미드일 수 있다. 다른 예를 목록화된 보호 그룹들 중에서 찾을 수 있다.

-CO-R^a가 아미노산으로부터 유도되고 아미노 그룹을 포함하는 화합물은 스스로 아실 유도체를 형성할 수 있다. 적합한 N-아실 제어부는 디펩티드를 포함하며, 차례로 이는 N-아실 유도체를 형성할 수 있다.

예시로서, 이제 화학식 2의 시아노사프라신 B 화합물을 ET-743으로 변환시켜 앞서 개시된 방법들보다 더 짧고 보다 간단한 ET-743의 제조를 수행할 수 있다.

화합물 29를 사용하여 ET-743을 제조하기 위한 역합성적인 분석을 반응식 I에 나타낸다.

상기 반응식 I에 따라서, 21 개의 선형 단계로 ET-743을 수득할 수 있다. 이 방법은 시아노사프라신 B를 (1) 고리 A 중의 메톡시 그룹의 제거, (2) 단일 용기에서의 고리 A의 환원 및 메틸렌-디옥시 그룹의 형성, (3) 탄소 1 상에 놓인 아미드 작용기의 가수분해, (4) 생성된 아민 그룹의 하이드록실 그룹으로의 변환을 필수적으로 포함하는 반응 시퀀스를 통해 중간체 25로 변환시킨다. 더욱 또한, 상기 방법은 시스테인 잔기 29를 직접 사용하여 화합물 25의 고리 B의 1 번 위치에서 1 차 알콜 작용기의 보호 및 탈보호를 피하여 중간체 27을 형성시킨다. 시스테인 유도체 29를 기존의 알릴 및 MOM 그룹과의 혼화성을 갖기 위해 β-β-β-트리클로로에톡시카보닐 보호 그룹으로 아미노 그룹에서 보호시킨다. 중간체 27은 직 접 산화되고 환화된다. 이러한 상황은 나중의 합성 단계에서 상이한 탈보호 방법과 함께 상기 경로를 US 5,721,362의 방법보다 신규하고 보다 산업적으로 발달될 수 있게 만든다.

2-시아노 화합물의 중간체 25로의 전환은 대개 하기의 단계들(반응식 II 참조)을 수반한다:

2와 3급-부톡시카보닐 무수물을 반응시켜 화학식 14의 보호된 화합물을 형성시키는 단계;

14를 아세토니트릴 중의 브로모메틸메틸 에테르 및 디이소프로필에틸아민과 반응시켜 화학식 15의 이중 보호된 화합물로 전환시키는 단계;

수산화 나트륨의 메탄올 용액과의 반응에 의해 15의 퀴논 시스템의 메톡시 그룹을 선택적으로 제거하여 화학식 16의 화합물을 수득하는 단계;

16을 하기의 바람직한 시퀀스를 사용하여 화학식 18의 메틸렌-디옥시 화합물로 변환시키는 단계: (1) 화합물 16의 퀴논 그룹을 수소 분위기 하에서 10% Pd/C로 환원시키고; (2) 하이드로퀴논 중간체를 수소 분위기 하에서 브로모클로로메탄 및 세슘 카보네이트와 반응시켜 화학식 17의 메틸렌디옥시 화합물로 전환시키고; (3) 17을 OCH₂R 그룹으로서 유리 하이드록시 그룹을 보호시켜 화학식 18의 화합물로 변환시키고, 이때 상기 반응을 BrCH₂R 및 세슘 카보네이트를 사용하여 수행하며, 상기 R은 아릴, CH=CH₂, OR' 등일 수 있고;

디옥산 중의 HCl 용액과의 반응에 의해 18의 3급-부톡시카보닐 및 메틸옥시 메틸 보호 그룹을 제거하여 화학식 19의 화합물을 수득하는 단계로, 이때 상기 반응을 또한 18을 디클로로메탄 중의 트리플루오로아세트산 용액과 혼합하여 수행하며;

19를 페닐이소티오시아네이트와 반응시켜 화학식 20의 티오우레아 화합물을 형성시키는 단계;

화학식 20의 화합물을 디옥산 중의 염화 수소 용액과 반응시켜 화학식 21의 아민 화합물로 전환시키는 단계;

화학식 21의 화합물을 트리클로로에틸 클로로포르메이트 및 피리딘과 반응시켜 N-Troc 유도체 22로 변환시키는 단계;

22를 브로모메틸메틸에테르 및 디이소프로필에틸아민과 반응시켜 화학식 23의 보호된 하이드록시 화합물을 형성시키는 단계;

화학식 23의 화합물을 아세트산 및 아연과 반응시켜 N-H 유도체 24로 변환시키는 단계;

화학식 24의 화합물을 아세트산 중의 아질산 나트륨과 반응시켜 화학식 25의 하이드록시 화합물로 전환시키는 단계.

한편으로, 아세트산 및 아세토니트릴의 혼합물 중의 질소 테트록사이드에 이어서 수산화 나트륨에 의한 처리를 사용할 수 있다. 또한, 아세트산 무수물-아세트산의 혼합물 중의 아질산 나트륨에 이어서 수산화 나트륨에 의한 처리를 사용할 수 있다.

시스테인 유도체 29를 사용하는 중간체 25 화합물의 ET-743으로의 전환은 대개 하기의 단계들을 포함한다(반응식 III 참조).

1 차 하이드록시 작용기를 (S)-N-2,2,2-트리클로로에톡시카보닐-S-(9H-플루오렌-9-일메틸)시스테인 29로 보호시켜 화학식 24의 화합물을 유도체 30으로 변환 시키는 단계;

화학식 30의 보호된 화합물을 트리부틸틴 하이드라이드 및 디클로로팔라듐-비스(트리페닐포스핀)에 의한 알릴 그룹의 절단에 의해 페놀 유도체 31로 전환시키는 단계;

화학식 31의 페놀 화합물을 저온에서 벤젠셀레닌산 무수물에 의한 산화에 의해 화학식 32의 화합물로 변환시키는 단계;

화학식 32의 하이드록시 화합물을 하기 시퀀스에 의해 락톤 33으로 변환시키는 단계: (1) 화학식 32의 화합물을 2 당량의 트리플산 무수물 및 5 당량의 DMSO와 반응시킨 다음, (2) 8 당량의 디이소프로필에틸아민과 반응시킨 다음, (3) 4 당량의 t-부틸 알콜과 반응시킨 다음, (4) 7 당량의 2-3급-부틸-1,1,3,3-테트라메틸구아니딘과 반응시킨 다음, (5) 10 당량의 아세트산 무수물과 반응시키고;

락톤 화합물 33을 TMSI에 의한 MOM 보호 그룹의 제거에 의해 하이드록실 화합물 34로 변환시키는 단계;

화학식 34 화합물의 N-트리클로로에톡시카보닐 그룹을 Zn/AcOH와의 반응에 의해 화합물 35로 절단시키는 단계;

아미노 화합물 35를 N-메틸 피리디늄 카복스알데히드 클로라이드에 이어서 DBU와의 반응에 의해 상응하는 α-케토 락톤 화합물 36으로 변환시키는 단계;

화학식 36의 화합물을 3-하이드록시-4-메톡시페닐에틸아민과 반응시켜 ET-770을 형성시키는 단계;

ET-770을 AcN/H₂O의 혼합물 중의 질산 은과 반응시켜 ET-743으로 변환시키는 단계.

중간체 11 및 관련 중간체의 제조

역합성 분석을 하기의 시퀀스로 나타낸다:

본 발명에서, 주요 중간체 군은 중간체 11을 포함하며, 하기 화학식 XXI를 갖는다:

화학식 XXI

상기 식에서,

Prot¹ 및 Prot²는 바람직하게는 상이한 하이드록시 보호 그룹이다.

중간체 11 자체에 대해서, Prot¹ 그룹은 메톡시메틸 그룹이고, Prot²는 t-부틸디페닐실릴 그룹이다.

상기 21-시아노 화합물의 중간체 11 또는 화학식 XXI를 갖는 관련 중간체로의 전환은 대개 하기의 단계들을 포함한다:

a) 경우에 따라 고리 E의 퀴논 시스템의 페놀 시스템으로의 전환,

b) 고리 E에서 18 번 위치에의 -OProt¹ 그룹의 형성,

c) 고리 B에서 1 번 위치에의 -CH₂-OProt² 그룹의 형성,

d) 경우에 따라 고리 A의 퀴논 시스템의 페놀 시스템으로의 전환,

e) 고리 A의 페놀 시스템의 메틸렌디옥시페놀 고리로의 전환.

단계 (b)인, 고리 E에서의 18 번 위치에의 -OProt¹ 그룹의 형성은 페놀 그룹에 전형적인 보호 반응이며, 특별히 언급할 필요는 없다. 상기 보호 그룹의 성질에 따라 적합한 조건들을 선택한다. 다른 단계들은 다른 반응들과 유사하다.

단계 (b)인, 고리 B에서의 1 번 위치에의 -OProt² 그룹의 형성은 통상적으로 그룹 -CH₂NH₂를 1 번 위치에 형성시키고 이어서 상기 아민 작용기를 하이드록시 작용기로 전환시키고 보호시킴으로써 수행된다. 따라서, 출발 물질이 -CH₂-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c인 그룹 R¹을 갖는 경우 상기 N-아실 그룹을 제거하는 것이 문제이다. 상기 출발 물질이 -CH₂-O-CO-R인 그룹 R¹을 갖는 경우에는 치환체 R¹이 동일한 엑티나시딘 생성물에 대해서 변화가 필요 없을 수도 있다. 다른 생성물의 경우, 상기 O-아실 그룹을 제거하는 것이 문제이다. 다양한 과정들을 상기와 같은 탈아실화에 이용할 수 있다. 하나의 변형으로, 상기 탈아실화 및 하이드록시 작용기로의 전환을 한 단계로 수행한다. 그 후에, 상기 하이드록시 그룹을 아실화시키거나 또는 달리 전환시켜 적합한 R¹ 그룹을 수득할 수 있다.

미국 특허 제 5,721,362 호에는 긴 다 단계 합성을 통한 ET-743의 합성적인 제조 방법이 개시되어 있다. 상기 합성의 중간체들 중 하나가 중간체 11이다. 출발 물질로서 시아노사프라신 B를 사용하여 중간체 11을 얻을 수 있으며, 이는 상기와 같은 중간체에 대해 훨씬 더 짧은 제조 방식을 제공하며 따라서 ET-743의 제조 방법을 개선시킨다.

시아노사프라신 B를 상술한 방법에 의해 중간체 25로 전환시킬 수 있다. 중간체 25로부터 하기 단계들(반응식 VII 참조)을 사용하여 중간체 11을 얻을 수 있다.

25를 염기의 존재 하에서 3급-부틸디페닐실릴 클로라이드와 반응시켜 화학식 26의 보호된 하이드록시 화합물을 형성시키고;

상기 26에서 상기 알릴 그룹을 트리부틸틴 하이드라이드 및 디클로로팔라듐-비스(트리페닐포스핀)으로 최종 절단시켜 중간체 11을 형성시킨다.

사프라신 B를 중간체 11로 변환시키기 위한 본 발명의 합성 방법에 대한 하나의 실시태양은 반응식 VIII의 변형 및 연장으로, 하기의 연속적인 단계들을 포함한다:

화합물 사프라신 B를 산성 매질 중에서 KCN과 반응시킴으로써 OH의 CN에 의한 선택적인 치환에 의해 화학식 2의 화합물로 입체특이적으로 전환시키는 단계;

화학식 2의 화합물을 페닐 이소티오시아네이트와 반응시켜 화학식 3의 티오우레아 화합물을 제조하는 단계;

화학식 3의 티오우레아 화합물을 산 매질 중의 가수분해에 이어서 아세트산 무수물의 첨가에 의해 화학식 5의 아세트아미드로 전환시키는 단계로, 화학식 4의 중간체 아민 화합물을 상기 산성 매질에서의 가수분해를 중탄산 나트륨으로 급냉시킴으로써 단리시킬 수 있으나, 상기 중간체는 매우 불안정하며 화합물 6이라 칭하는 5원 환상 이민으로 신속히 변환되고;

브로모메틸메틸 에테르 및 디이소프로필에틸아민과 디클로로메탄 중에서 반응시켜 화학식 7의 보호된 화합물을 제조하는 단계;

화학식 7 화합물의 퀴논 시스템의 메톡시 그룹을 수산화 나트륨의 메탄올 용액과의 반응에 의해 선택적으로 탈 메틸화시키는 단계;

바람직한 하기 시퀀스에 의해 화학식 8의 화합물을 화학식 9의 메틸렌디옥시 화합물로 변환시키는 단계: (1) 화합물 8의 퀴논 그룹을 수소 분위기 하에서 10% Pd/C로 환원시키고; (2) 상기 하이드로퀴논 중간체를 수소 분위기 하에서 브로모클로로메탄 및 탄산 세슘과의 반응에 의해 화학식 9의 메틸렌-디옥시 화합물로 전환시키고; (3) 화학식 9의 화합물을 BrCH₂R(이때 R은 아릴, CH=CH₂, OR' 등이다) 및 탄산 세슘과의 반응에 의해 유리 하이드록시 그룹을 OCH₂R 그룹으로서 보호함으로써 화학식 10의 화합물로 변환시키고;

화학식 10 화합물의 아세트아미드 그룹을 아세트산 및 아세틱 아세테이트와의 혼합물 중의 질소 테트록사이드와의 반응에 이어서 수산화 나트륨 처리에 의해 화학식 25의 상응하는 하이드록실 그룹으로 전환시키거나; 한편으로, 아세트산 무수물 아세트산 혼합물 중의 아질산 나트륨을 사용한 다음 수산화 나트륨으로 처리하거나; 한편으로, 화학식 10 화합물의 아세트아미드 그룹을 히드라진 또는 Boc₂O, DMAP와의 반응에 이어서 히드라진과 반응시켜 1 차 아민 그룹으로 전환시킬 수 있는 단계로, 상기와 같은 1 차 아민을, 상기 1 차 아민의 4-포르밀-1-메틸피리디늄 벤젠설포네이트 또는 다른 피리디늄 이온에 의한 상응하는 알데히드로의 산화적 전환, 이어서 DBU 또는 다른 염기 처리 및 추가적인 가수분해, 이어서 상기 알데히드의 리튬 알루미늄 하이드라이드 또는 다른 환원제에 의한 상응하는 하이드록실 그룹으로의 환원에 의해 상응하는 하이드록실 그룹(화학식 25의 화합물)으로 전환시킬 수 있고;

디클로로메탄 중의 t-부틸디페닐실릴 클로라이드 및 디메틸아미노피리딘과의 반응에 의해 화학식 26의 보호된 화합물을 제조하는 단계(반응식 VII);

OCH₂R 보호 그룹의 환원적 조건 또는 산 조건 하에서의 반응에 의해 탈보호시켜 중간체 11로 변환시키는 단계.

전형적인 과정들은 수소 분위기 하의 팔라듐 블랙, 또는 수성 TFA, 또는 트리부틸틴 하이드라이드 및 디클로로비스(트리페닐포스핀 팔라듐)을 사용한다.

더욱 또 다른 바람직한 변형에서, 화학식 2의 시아노 화합물을 하기 추가의 단계들을 포함하는 반응식 II의 연장 반응식을 사용하여 중간체 11로 변환시킬 수 있다:

25를 염기의 존재 하에서 3급-부틸디페닐실릴 클로라이드와 반응시켜 화학식 26의 보호된 하이드록시 화합물을 제조하는 단계;

26에서 트리부틸틴 하이드라이드 및 디클로로팔라듐-비스(트리페닐포스핀)으로 알릴 그룹을 최종적으로 절단시켜 중간체 11을 제조하는 단계.

따라서, 상기 및 다른 경로들에 의해 시아노사프라신 B를 효능있는 항종양 치료 활성을 갖는 다수의 중간체 및 유도체들로 변환시킬 수 있다. 이들 중간체를 이미 개시한 화합물들로부터 출발하거나 또는 대체 경로들을 사용하여 제조할 수 있다.

신규의 중간체 화합물

선행 설명에 비추어, 본 발명은 신규의 중간체 화합물들을 제공한다. 고리 A에 따라서, 상기 중간체들은 하기 화학식 XXIIa 또는 XXIIb를 갖는다:

상기 식들에서,

R¹은 -CH₂NH₂ 또는 -CH₂OH, 또는 상기와 같은 그룹의 보호되거나 유도체화된 변형 그룹이고, R⁴는 -H이거나; 또는

R^1a 및 R⁴는 함께 하기 화학식 IV, V, VI 또는 VII의 그룹을 형성하고:

화학식 IV

화학식 V

화학식 VI

화학식 VII

R⁵는 -OH 또는 상기와 같은 그룹의 보호되거나 유도체화된 변형 그룹이고;

R^14a 및 R^14b는 모두 -H이거나, 또는 하나는 -H이고 다른 하나는 -OH, 또는 상기와 같은 그룹의 보호되거나 유도체화된 변형 그룹, -OCH₃ 또는 -OCH₂CH₃이거나, 또는 R^14a 및 R^14b가 함께 케토 그룹을 형성하고;

R¹²는 -H-, -CH₃- 또는 -CH₂CH₃-이고;

R¹⁵는 -H, -OH 또는 상기와 같은 그룹의 보호되거나 유도체화된 변형 그룹이고;

R¹⁸은 -OH 또는 상기와 같은 그룹의 보호되거나 유도체화된 변형 그룹이다.

하나의 실시태양에서, 바람직하게는 R¹, R⁵, R^14a, R^14b, R ¹⁵ 및 R¹⁸ 중 하나 이상은 보호되거나 유도체화된 그룹이다.

본 발명의 하나의 변형에서, 그룹 R¹은 3급-부틸디페닐실릴 치환체가 아니고/아니거나 그룹 R¹⁸은 메톡시메틸 그룹이 아니다.

바람직하게는 R¹은 -CH₂NH₂ 또는 -CH₂OH, 또는 상기와 같은 그룹의 보호되거나 유도체화된 변형 그룹이고, R⁴는 -H이거나; 또는

R^1a 및 R⁴는 함께 하기 화학식의 그룹을 형성한다:

바람직하게는 R^14a 및 R^14b는 모두 -H이다.

하나의 바람직한 중간체 군은 본 출원인들이 하기 화학식의 화합물 25로서 나타내는 화합물을 포함한다:

따라서 바람직한 군은 MOM 그룹이 임의의 다른 보호 그룹으로 치환된 화학식들을 갖는다.

다른 바람직한 중간체들은 본 출원인들이 화합물 45 및 43으로서 나타내는 화합물을 포함한다(반응식 IX):

다른 N-아실 유도체들을 화합물 45로부터 쉽게 제조할 수 있으며 이는 본 발명의 중요한 일부이다. 적합한 아실 그룹들로는 앞서 언급한 것들이 있다. 상응하는 21-하이드록시 화합물이 또한 유용하며 이 중에는 본 출원인들이 밝힌 유효 화합물 들이 있다.

신규의 유효 화합물

본 출원인들은 초기에 중간체로서 제조한 본 발명의 몇몇 화합물들이 암, 예를 들어 백혈병, 폐암, 결장암, 신장암 및 흑색종의 치료에 특별한 활성을 가짐을 추가로 밝혔다.

따라서, 본 발명은 따라서, 본 발명은 암에 걸린 임의의 포유동물, 특히 인간에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물 또는 그의 약학 조성물을 투여함을 포함하는 상기 병에 걸린 개인을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 유효 성분으로서 본 발명의 화합물 또는 화합물들을 함유하는 약학 제제뿐만 아니라 이의 제조 방법에 관한 것이다.

약학 조성물의 예로는 적합한 조성을 갖거나 또는 경구, 국소 또는 비경구 투여에 적합한 임의의 고체(정제, 환제, 캡슐, 과립 등) 또는 액체(용액, 현탁액 또는 유화액)를 포함하고, 순수한 화합물 또는 임의의 담체 또는 다른 약리학적으로 유효한 화합물과의 조합을 함유할 수 있다. 이들 조성물을 비 경구 투여할 경우 멸균시킬 필요가 있을 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 조성물을 임의의 적합한 방법, 예를 들어 정맥내 주입, 경구 제제, 복강내 및 정맥내 투여에 의해 투여할 수 있다. 24 시간 이하의 주입 시간을 사용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 2 내지 12 시간, 가장 바람직하게는 2 내지 6 시간을 사용한다. 병원에서 밤새 머무를 필요없이 치료를 가능하게 하는 짧은 주입 시간이 특히 바람직하다. 그러나, 경우에 따라 12 내지 24 시간 또는 훨씬 더 길게 주입할 수도 있다. 주입을 2 내지 4 주의 적합한 간격으로 수행할 수 있다. 본 발명의 화합물을 함유하는 약학 조성물을 리포솜 또는 나노구 캡슐화에 의해, 서방성 제형으로 또는 다른 표준 전달 수단에 의해 전달할 수 있다.

상기 화합물들의 바른 용량은 특정 제형, 적용 방식, 및 치료하려는 특정 위치, 숙주 및 종양에 따라 변할 것이다. 연령, 체중, 성별, 식이, 투여 시간, 분비 속도, 숙주의 조건, 약물 조합, 반응 감도 및 질병의 중증도와 같은 다른 인자들이 고려될 것이다. 투여를 최대로 허용되는 용량 내에서 연속적으로 또는 주기적으로 수행할 수 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물을 다른 약물들과 함께 사용하여 복합 요법을 제공할 수 있다. 상기 다른 약물은 동일 조성물의 일부를 형성하거나, 또는 동시에 또는 상이한 시간에 투여되는 별도의 조성물로서 제공될 수도 있다. 상기 다른 약물의 정체가 특별히 중요한 것은 아니며, 적합한 후보로 하기의 것들이 포함된다:

a) 세포분열 저지 효과를 갖는 약물, 특히 세포골격 요소들을 표적으로 하는 약물, 예를 들어 미소관 조절제, 예를 들어 탁산 약물(예: 탁솔, 패클리탁셀, 탁소테레, 도세탁셀), 포도필로독소 또는 빈카 알칼로이드(빈크리스틴, 빈블라스틴);

b) 대사억제 약물, 예를 들어 5-플루오로우라실, 사이타라빈, 젬시타빈, 퓨린 동족체, 예를 들어 펜토스타틴, 메토트렉세이트;

c) 알킬화제, 예를 들어 질소 겨자(예: 사이클로포스파미드 또는 이포스파미드);

d) DNA를 표적으로 하는 약물, 예를 들어 안트라사이클린 약물인 아드리아마이신, 독소루비신, 파모루비신 또는 에피루비신;

e) 국소이성화효소를 표적으로 하는 약물, 예를 들어 에토포시드;

f) 호르몬 및 호르몬 작용물질 또는 길항물질, 예를 들어 에스트로겐, 항에스트로겐(타목시펜 및 관련 화합물) 및 안드로겐, 플루타미드, 류프로렐린, 고세렐린, 사이프로트론 또는 옥트레오티드;

g) 항체 유도체를 포함한 종양 세포에서 형질도입 신호를 표적으로 하는 약물, 예를 들어 헤르셉틴;

h) 알킬화 약물, 예를 들어 백금 약물(시스-플라틴, 카본플라틴, 옥살리플라틴, 파라플라틴) 또는 니트로소우레아;

i) 종양의 전이에 강하게 작용하는 약물, 예를 들어 기질 메탈로프로테이나제 억제제;

j) 유전자 요법 및 안티센스 약제;

k) 항체 요법제;

l) 해양성 기원의 다른 생물활성 화합물, 특히 아플리딘과 같은 디뎀닌;

m) 스테로이드 동족체, 특히 덱사메타손;

n) 소염 약물, 특히 덱사메타손; 및

o) 구토 억제제, 특히 덱사메타손.

본 발명을 또한 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물, 및 암 치료를 위한 화합물의 제조에서 상기 화합물의 용도로 확장시킨다.

세포독성 활성

세포 배양.

세포를 10% 송아지 태아 혈청(FCS), 10^-2 M 중탄산 나트륨 및 0.1 g/ℓ의 페니실린 G + 스트렙토마이신 설페이트가 보충된, 얼(Earle)의 균형 염, 2.0 mM L-글루타민, 불필수 아미노산이 있고, 중탄산 나트륨은 없는 이글의 최소 필수 배지(EMEM/neaa)에서 대수 증식기로 유지시켰다.

문헌[Bergeron et al., 1984]에 개시된 적합한 형태의 방법을 사용하여 간단한 선별 과정을 수행하여 상기 화합물들의 항종양 활성을 측정하고 비교하였다. 사용된 종양 세포 주는 P-388(DBA/2 마우스로부터의 림프 종양의 현탁 배양물), A-549(인간 폐 암종의 단층 배양물), HT-29(인간 결장 암종의 단층 배양물) 및 MEL-28(인간 흑색종의 단층 배양물)이었다.

P-388 세포를 지시된 농도의 약물을 함유하는 MEM 5FCS 1 ㎖ 분액 중에서 웰 당 1 x 10⁴ 세포로 16 ㎜ 웰에 시딩하였다. 약물이 없는 별도의 배양물 세트를 대조군 생육으로서 시딩하여 세포를 지수 증식기에서 유지시켰다. 모든 측정을 중복 수행하였다. 37 ℃, 10% CO₂, 98% 습도 분위기 하에서 3 일간 배양한 후에 약 물이 있는 웰에서의 생육과 대조용 웰에서의 생육을 비교하여 대략적인 IC₅₀을 측정하였다.

A-549, HT-29 및 MEL-28을 지시된 농도의 약물을 함유하는 MEM 10FCS 1 ㎖ 분액 중에서 웰 당 2 x 10⁴ 세포로 16 ㎜ 웰에 시딩하였다. 약물이 없는 별도의 배양물 세트를 대조군 생육으로서 시딩하여 세포를 지수 증식기에서 유지시켰다. 모든 측정을 중복 수행하였다. 37 ℃, 10% CO₂, 98% 습도 분위기 하에서 3 일간 배양한 후에 상기 웰들을 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 염색하였다. 약물이 있는 웰에서의 생육과 대조용 웰에서의 생육을 비교하여 대략적인 IC₅₀을 측정하였다.

1. [Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline. Robert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot and Carl W. Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984, 121(3), 848-854].

2. [Alan C. Schroeder, Robert G. Hughes, Jr. and Alexander Bloch. Effects of Acyclic Pyrimidine Nucleoside Analoges. J. Med. Chem. 1981, 24 1078-1083].

세포독성 활성

따라서 본 발명의 유효 화합물들은 10-하이드록시 그룹 및 1-불안정한 그룹을 갖는 화합물들을 포함한다.

본 발명의 중요한 방법은 하기 반응을 포함한다:

본 발명의 또 다른 중요한 방법은 하기 반응을 포함한다:

본 발명의 또 다른 중요한 방법은 그룹 R¹이 아미노메틸렌인 화합물을 하이드록시메틸렌 그룹으로 전환시키는 반응을 포함한다.

본 발명의 또 다른 중요한 방법은 그룹 R¹이 하이드록시메틸렌인 화합물을 하기 화학식 XIX의 시약과 반응시키는 반응을 포함한다:

화학식 XIX

상기 식에서,

Fu는 보호된 작용기를 가리키고,

Prot³은 보호 그룹이고,

점선은 임의의 이중 결합을 나타낸다.

본 발명의 또 다른 중요한 방법은 하기 화학식 XV의 화합물을 시아나이드 이온의 공급원과 반응시켜 목적하는 21-시아노 화합물을 수득함을 포함하는 화학식 XVI의 21-시아노 화합물의 제조를 위한 반응을 포함한다:

화학식 XV

상기 식에서,

R¹, R⁵, R⁸, R^14a, R^14b, R¹⁵ 및 R¹⁸은 정의한 바와 같고,

R²¹은 하이드록시 그룹이다.

또한, 21 번이 또 다른 친핵성 그룹인 21-Nuc 그룹으로 보호된 유사한 화학식 XVI의 화합물을 제조하기 위해서 다른 친핵성 그룹 함유 화합물을 사용하는 방법이 또한 고려된다. 예를 들어, 21 번 위치에 알킬아미노 치환체를 갖는 화학식 XVI의 21-Nuc 화합물을 R²¹이 하이드록시 그룹인 화학식 XV의 화합물과 적합한 알킬아민을 반응시켜 제조할 수 있다. 21 번 위치에 알킬티오 치환체를 갖는 화학식 XVI의 21-Nuc 화합물을 또한 R²¹이 하이드록시 그룹인 화학식 XV의 화합물과 적합한 알칸티올을 반응시켜 제조할 수 있다. 한편으로, 21 번 위치에 □-카보닐알킬 치환체를 갖는 화학식 XVI의 21-Nuc 화합물을 R²¹이 하이드록시 그룹인 화학식 XV의 화합물과 적합한 카보닐 화합물을 전형적으로는 염기의 존재 하에서 반응시켜 제조할 수 있다. 다른 21-Nuc 화합물에 대한 다른 경로들을 이용할 수 있다.

본 발명의 또 다른 중요한 반응은 본 발명의 21-시아노 생성물을 처리하여 21-하이드록시 화합물을 제조함을 포함한다. 상기와 같은 화합물은 흥미로운 생체 내 성질을 갖는다.

본 발명을 하기의 실시예들로 예시한다.

실시예 1

에탄올(200 ㎖) 중의 2(21.53 g, 39.17 ㎖) 용액에 3급-부톡시카보닐 무수물(7.7 g, 35.25 ㎖)을 가하고 혼합물을 23 ℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 이어서 반응물을 진공 하에서 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 6:4)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 14(20.6 g, 81%)를 수득하였다.

실시예 2

CH₃CN(159 ㎖) 중의 14(20.6 g, 31.75 ㎖)의 교반된 용액에 디이소프로필에틸아민(82.96 ㎖, 476.2 ㎖), 메톡시메틸렌 브로마이드(25.9 ㎖, 317.5 ㎖) 및 디메틸아미노피리딘(155 ㎎, 1.27 ㎖)을 0 ℃에서 가하였다. 상기 혼합물을 23 ℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응물을 0 ℃에서 수성의 0.1 N HCl(750 ㎖)(pH=5)로 급냉시키고, CH₂Cl₂(2 x 400 ㎖)로 추출하였다. 유기 상을 건조(황산 나트륨)시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 4:1에서 헥산:에틸 아세테이트 3:2 구 배)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 15(17.6 g, 83%)를 수득하였다.

실시예 3

메탄올(1.6 ℓ) 중의 15(8 g, 1.5 ㎖)를 함유하는 플라스크에 1 M 수산화 나트륨 수용액(3.2 ℓ)을 0 ℃에서 가하였다. 반응물을 상기 온도에서 2 시간 동안 교반하고, 이어서 6 M HCl로 pH=5로 급냉시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 1 ℓ)로 추출하고 합한 유기 층들을 황산 나트륨 상에서 건조시키 고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, CHCl₃에서 CHCl₃:에틸 아세테이트 2:1 구배)에 의해 정제시켜 16(5.3 ㎎, 68%)을 수득하였다.

실시예 4

DMF(221 ㎖) 중의 화합물 16(1.8 g, 2.64 ㎖)의 탈기된 용액에 10% Pd/C(360 ㎎)를 가하고 H₂(대기압) 하에서 45 분간 교반하였다. 상기 반응물을 셀라이트를 통해 아르곤 하에서 무수 Cs₂CO₃(2.58 g, 7.92 ㎖)를 함유하는 플라스크에 여과하였다. 이어서, 브로모클로로메탄(3.40 ㎖, 52.8 ㎖)을 가하고 튜브를 밀폐시키고 100 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 건조(황산 나트륨)시켜 갈색 오일로서 17을 수득하고 이를 다음 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다.

실시예 5

DMF(13 ㎖) 중의 17(1.83 g, 2.65 ㎖) 용액을 함유하는 플라스크에 Cs₂CO₃(2.6 g, 7.97 ㎖) 및 알릴 브로마이드(1.15 ㎖, 13.28 ㎖)를 0 ℃에서 가하였다. 생성된 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축시켰다(황산 나트륨). 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, CHCl₃:에틸 아세테이트 1:4)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 18(1.08 ㎎, 56%)을 수득하였다.

실시예 6

디옥산(2 ㎖) 중의 18(0.1 g, 0.137 ㎖) 용액에 4.2 M HCl/디옥산(1.46 ㎖)을 가하고 혼합물을 23 ℃에서 1.2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응물을 0 ℃에서 포화된 수성 중탄산 나트륨(60 ㎖)으로 급냉시키고 에틸 아세테이트(2 x 70 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 건조(황산 나트륨)시키고 진공 하에서 농축시켜 백색 고체로서 19(267 ㎎, 95%)를 수득하고, 이를 후속 반응에서 추가의 정제 없이 사용하였다.

실시예 7

CH₂Cl₂(1.5 ㎖) 중의 19(250 ㎎, 0.42 ㎖) 용액에 페닐 이소티오시아네이트(0.3 ㎖, 2.51 ㎖)를 가하고 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에서 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산에서 헥산:에틸 아세테이트 5:1 구배)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 20(270 ㎎, 87%)을 수득하였다.

실시예 8

디옥산(1 ㎖) 중의 20(270 ㎎, 0.37 ㎖) 용액에 4.2 N HCl/디옥산(3.5 ㎖)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 30 분간 교반하였다. 이어서, 에틸 아세테이트(20 ㎖) 및 H₂O(20 ㎖)를 가하고 유기 층을 경사분리시켰다. 수성 상을 포화된 수성 중탄산 나트륨(60 ㎖)(pH=8)으로 0 ℃에서 염기성으로 만들고, 이어서 CH₂Cl₂(2 x 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조(황산 나트륨)시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 에틸 아세테이트:메탄올 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 21(158 ㎎, 82%)을 수득하였다.

실시예 9

CH₂Cl₂(6.13 ㎖) 중의 21(0.64 g, 1.22 ㎖) 용액에 피리딘(0.104 ㎖, 1.28 ㎖) 및 2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트(0.177 ㎖, 1.28 ㎖)를 -10 ℃에서 가하였다. 상기 혼합물을 상기 온도에서 1 시간 동안 교반하고, 이어서 반응물을 0.1 N HCl(10 ㎖)을 가하여 급냉시키고 CH₂Cl₂(2 x 10 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 1:2)에 의해 정제시켜 백색 포움 고체로서 22(0.84 g, 98%)를 수득하였다.

실시예 10

CH₃CN(2.33 ㎖) 중의 22(0.32 g, 0.46 ㎖) 용액에 디이소프로필에틸아민(1.62 ㎖, 9.34 ㎖), 브로모메틸 메틸 에테르(0.57 ㎖, 7.0 ㎖) 및 디메틸아미노피리딘(6 ㎎, 0.046 ㎖)을 0 ℃에서 가하였다. 상기 혼합물 을 30 ℃에서 10 시간 동안 가열하였다. 이어서 상기 반응물을 디클로로메탄(30 ㎖)으로 희석하고 pH=5에서 HCl의 수용액(10 ㎖)에 부었다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 용매를 감압 하에서 제거하여 잔사를 수득하고 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 2:4)에 의해 정제시켜 백색 포움 고체로서 23(0.304 g, 88%)을 수득하였다.

실시예 11

90% 수성 아세트산(4 ㎖) 중의 23(0.304 g, 0.41 ㎖)의 현탁액에 아연 분말(0.2 g, 6.17 ㎖)을 가하고 상기 반응물을 23 ℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 이를 CH₂Cl₂로 세척하였다. 유기 층을 중탄산 나트륨의 포화 수용액(pH=9)(15 ㎖)으로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하여 백색 고체로서 24(0.191 g, 83%)를 수득하였다.

실시예 12

H₂O(0.7 ㎖) 및 THF(0.7 ㎖) 중의 24(20 ㎎, 0.035 ㎖) 용액에 NaNO₂(12 ㎎, 0.17 ㎖) 및 90% 수성 AcOH(0.06 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 0 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석한 후에, 유기 층을 물(1 ㎖)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 2:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 25(9.8 ㎎, 50%)를 수득하였다.

실시예 13

출발 물질(2.0 g, 5.90 ㎖)을 THF(40 ㎖) 중의 수소화 나트륨(354 ㎎, 8.86 ㎖)의 현탁액에 23 ℃에서 가한 다음, 상기 현탁액을 23 ℃에서 알릴 클로로포르메 이트(1.135 ㎖, 8.25 ㎖)로 처리하고 이어서 3 시간 동안 환류시켰다. 상기 현탁액을 냉각시키고, 여과하고, 고체를 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 세척하고 여액을 농축시켰다. 조 오일을 헥산(100 ㎖)으로 연마하고 4 ℃에서 밤새 유지시켰다. 그 후에, 용매를 경사분리시키고 담황색 슬러리를 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 처리하고, 헥산(100 ㎖)으로 침전시켰다. 10 분 후에, 용매를 다시 경사분리시켰다. 상기 과정을 백색 고체가 나타날때까지 반복하였다. 백색 고체를 여과하고 건조시켜 백색 고체로서 화합물 29(1.80 g, 65%)를 수득하였다.

실시예 14

화합물 25(585 ㎎, 1.03 ㎖) 및 화합물 Int-29(1.47 ㎎, 3.11 ㎖)의 혼합물 을 무수 톨루엔(3 x 10 ㎖)과 공비증류시켰다. 무수 CH₂Cl₂(40 ㎖) 중의 25 및 29 용액에 DMAP(633 ㎎, 5.18 ㎖) 및 EDC·HCl(994 ㎎, 5.18 ㎖)을 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 23 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 중탄산 나트륨(50 ㎖)의 포화 수용액으로 분배시키고 층들을 분리시켰다. 수성 층을 CH₂Cl₂(50 ㎖)로 세척하였다. 합한 유기 층들을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 1:3)에 의해 정제시켜 옅은 크림색 황색 고체로서 30(1.00 g, 95%)을 수득하였다.

실시예 15

무수 CH₂Cl₂(20 ㎖) 중의 30(845 ㎎, 0.82 ㎖), 아세트산(500 ㎎, 8.28 ㎖) 및 (PPh₃)₂PdCl₂(29 ㎎, 0.04 ㎖) 용액에 23 ℃에서 Bu₃SnH(650 ㎎, 2.23 ㎖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 상기 온도에서 15 시간 동안 교반하고, 발포하였다. 조 생성물을 물(50 ㎖)로 급냉시키고 CH₂Cl₂(3 x 50 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산, 1:5에서 1:3의 구배)에 의해 정제시켜 옅은 크림색 황색 고체로서 31(730 ㎎, 90%)을 수득하였다.

실시예 16

무수 CH₂Cl₂(15 ㎖) 중의 31(310 ㎎, 0.32 ㎖) 용액에 -10 ℃에서 캐뉼라를 통해 무수 CH₂Cl₂(7 ㎖) 중의 70% 벤젠셀레닌산 무수물 용액(165 ㎎, 0.32 ㎖)을 가 하고 온도를 -10 ℃에서 유지시켰다. 상기 반응 혼합물을 -10 ℃에서 5 분간 교반하였다. 중탄산 나트륨(30 ㎖)의 포화 용액을 상기 온도에서 가하였다. 수성 층을 보다 많은 CH₂Cl₂(40 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산, 1:5에서 1:1의 구배)에 의해 정제시켜 옅은 크림색 황색 고체 및 2 개의 이성체들의 혼합물(65:35)로서 32(287 ㎎, 91%, HPLC:91.3%)를 수득하고 이를 다음 단계에 사용하였다.

실시예 17

반응 플라스크를 2 회 화염처리하고, 진공/아르곤으로 수 회 퍼징시키고 상기 반응을 아르곤 분위기 하에서 유지시켰다. 무수 CH₂Cl₂(4.5 ㎖) 중의 DMSO(39.1 ㎖, 0.55 ㎖, 5 당량) 용액에 트리플산 무수물(37.3 ㎖, 0.22 ㎖, 2 당량)을 -78 ℃에서 가하였다. 상기 반응 혼합물을 -78 ℃에서 20 분간 교반하고, 이어서 무수 CH₂Cl₂(주 첨가에 대해 1 ㎖, 세척을 위해 0.5 ㎖) 중의 32(110 ㎎, 0.11 ㎖, HPLC:91.3%) 용액을 캐뉼라를 통해 가하였다. 첨가 중에 온도를 상기 두 플라스크 모두에서 -78 ℃에서 유지시키고 색상이 황색에서 갈색으로 변하였다. 상기 반응 혼합물을 -40 ℃에서 35 분간 교반하였다. 이 기간 동안 용액의 색상이 황색에서 짙은 녹색으로 변하였다. 이 시간 후에, iPr₂NEt(153 ㎖, 0.88 ㎖, 8 당량)를 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 45 분간 유지시키고, 상기 용액의 색상이 이 기간 동안 갈색으로 변하였다. t-부탄올(41.6 ㎖, 0.44 ㎖, 4 당량) 및 2- t-부틸-1,1,3,3-테트라메틸구아니딘(132.8 ㎖, 0.77 ㎖, 7 당량)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 시간 후에, 아세트산 무수물(104.3 ㎖, 1.10 ㎖, 10 당량)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 더 유지시켰다. 이어서 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 희석하고 NH₄Cl(50 ㎖), 중탄산 나트륨(50 ㎖) 및 염화 나트륨(50 ㎖)의 수성 포화 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층들을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(용출제: 에틸 아세테이트:헥산, 1:3에서 1:2의 구배)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 33(54 ㎎, 58%)을 수득하였다.

실시예 18

무수 디클로로메탄(1.2 ㎖) 및 HPLC 등급 아세토니트릴(1.2 ㎖) 중의 33(12 ㎎, 0.014 ㎖) 용액에 23 ℃에서 요오드화 나트륨(21 ㎎, 0.14 ㎖) 및 새로 증류시킨(대기압에서 수소화 칼슘 상에서) 트리메틸실릴 클로라이드(15.4 ㎎, 0.14 ㎖)를 가하였다. 상기 반응 혼합물이 오렌지 색으로 변하였다. 15 분 후에, 상기 용액을 디클로로메탄(10 ㎖)으로 희석하고 새로운 Na₂S₂O₄(3 x 10 ㎖)의 수성 포화 용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 농축시켰다. 담황색 고체로서 화합물 34(13 ㎎, 정량적임)를 수득하고 이를 추가의 정제없이 사용하였다.

실시예 19

아세트산/H₂O(90:10, 1 ㎖)의 혼합물 중의 34(13 ㎎, 0.016 ㎖) 용액에 아연 분말(5.3 ㎎, 0.081 ㎖)을 23 ℃에서 가하였다. 상기 반응 혼합물을 70 ℃에서 6 시간 동안 가열하였다. 이 시간 후에, 상기를 23 ℃로 냉각시키고, CH₂Cl₂(20 ㎖)로 희석하고, 중탄산 나트륨의 포화 수용액(15 ㎖) 및 Et₃N의 수용액(15 ㎖)으로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 실리카-NH₂와 함께 플래시 컬럼 크로마토그래피(용출제: 에틸 아세테이트:헥산, 0:100에서 50:50의 구배)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 35(6.8 ㎎, 2 단계 에 대해서 77%)를 수득하였다.

실시예 20

무수 DMF(5.8 ㎖) 중의 N-메틸 피리딘-4-카복스알데히드 요오다이드(378 ㎎, 1.5 밀리몰) 용액을 무수 톨루엔(2 x 10 ㎖)으로 처리하여 상기 톨루엔의 공비 증류 제거에 의한 물의 양을 제거하였다. 무수 CH₂Cl₂(CaH₂ 상에서 증류된 것, 7.2 ㎖) 중의, 무수 톨루엔(2 x 10 ㎖)으로 선행 처리된 (35)(134 ㎎, 0.21 밀리몰) 용액을 23 ℃에서 캐뉼라를 통해 상기 오렌지색 용액에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 23 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 이 시간 후에 DBU(32.2 ℓ, 0.21 밀리 몰)를 23 ℃에서 적가하고 이를 23 ℃에서 15 분간 교반하였다. 새로운 옥살산의 수성 포화 용액(5.8 ㎖)을 상기 반응 혼합물에 가하고 23 ℃에서 30 분간 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 NaHCO₃를 나누어 가한다음 NaHCO₃의 수성 포화 용액을 가하였다. 상기 혼합물을 Et₂O로 추출하였다. K₂CO₃를 수성 층에 가하고 상기를 Et₂O로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(AcOEt/헥산, 1:3에서 1:1의 구배)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 화합물 36(77 ㎎, 57%)을 수득하였다.

실시예 21

에탄올(2.5 ㎖) 중의 36(49 ㎎, 0.08 밀리몰) 및 2-[3-하이드록시-4-메톡시페닐]에틸아민(46.2 ㎎, 0.27 밀리몰) 용액에 실리카겔(105 ㎎)을 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 23 ℃에서 14 시간 동안 교반하였다. 상기를 헥산으로 희석하고 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산, 1/3 내지 1/1)의 컬럼에 부어 담황색 고체로서 Et-770(55 ㎎, 90%)을 수득하였다.

실시예 22

CH₂Cl₂(0.8 ㎖) 중의 21(22 ㎎, 0.042 밀리몰) 용액에 프탈산 무수물(6.44 ㎎, 0.042 밀리몰)을 가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 카보닐디이미다졸(1 ㎎, 0.006 밀리몰)을 가하고 혼합물을 23 ℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 이어서, 카보닐디이미다졸(5.86 ㎎, 0.035 ㎖)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 추가로 17 시간 동안 교반하였다. 상기 용액을 CH₂Cl₂(15 ㎖)로 희석하고 0.1 N HCl(15 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 2:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 27(26.4 ㎎, 96%)을 수득하였다.

실시예 23

CH₂Cl₂(11 ㎖) 중의 27(26 ㎎, 0.041 밀리몰) 용액에 아세트산(11 ㎖), (PPh₃)PdCl₂(2.36 ㎎) 및 Bu₃SnH(28 ㎖, 0.10 밀리몰)를 23 ℃에서 가하였다. 상기 온도에서 2 시간 동안 교반한 후에, 반응물을 플래시 컬럼(SiO₂, 헥산에서 헥산:에틸 아세테이트 2:1의 구배)의 패드에 부어 백색 고체로서 28(24.7 ㎎, 99%)을 수득 하였다.

실시예 24

CH₂Cl₂(3 ㎖) 중의 28(357 ㎎, 0.058 밀리몰) 용액에 염화 아세틸(41.58 ㎖, 0.58 밀리몰) 및 피리딘(47.3 ㎖, 0.58 ㎖)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서, 상기 용액을 CH₂Cl₂(15 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(15 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(RP-18, CH₃CN:H₂O 60:40)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 프탈라시딘(354 ㎎, 94%)을 수득하였다.

실시예 25

CH₂Cl₂(2 ㎖) 중의 17(300 ㎎, 0.432 밀리몰) 용액에 염화 아세틸(30.7 ㎖, 0.432 밀리몰) 및 피리딘(34.9 ㎖, 0.432 ㎖)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물 을 2 시간 동안 교반하고 이어서, 상기 용액을 CH₂Cl₂(15 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(15 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하여 백색 고체로서 42(318 ㎎, 100%)을 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 후속 반응들에 사용하였다.

실시예 26

CH₂Cl₂(2.16 밀리몰) 중의 42(318 ㎎, 0.432 밀리몰) 용액에 트리플루오로아세트산(1.33 ㎖, 17.30 밀리몰)을 가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 3.5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 0 ℃에서 포화된 수성 중탄산 나트륨(60 ㎖)으로 급냉시키고 CH₂Cl₂(2 x 70 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조(황산 나트륨)시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 에틸 아세테이트:메탄올 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 43(154 ㎎, 60%)을 수득하였다.

실시예 27

CH₂Cl₂(1.3 ㎖) 중의 43(154 ㎎, 0.26 밀리몰) 용액에 페닐 이소티오시아네이트(186 ㎖, 1.56 밀리몰)를 가하고 혼합물을 23 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에서 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산에서 헥산:에틸 아세테이트 1:1의 구배)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 44(120 ㎎, 63%)를 수득하였다.

실시예 28

디옥산(0.9 ㎖) 중의 44(120 ㎎, 0.165 밀리몰) 용액에 5.3N HCl/디옥산(1.8 ㎖)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 2.5 시간 동안 교반하였다. 이어서, CH₂Cl₂(10 ㎖) 및 H₂O(5 ㎖)를 상기 반응물에 가하고 유기 층을 경사분리하였다. 수성 상을 0 ℃에서 포화 수성 중탄산 나트륨(20 ㎖)(pH=8)으로 염기성으로 만들고 이어서 CH₂Cl₂(2 x 15 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조(황산 나트륨)시키고 진공 하에서 농축시켜 백색 고체로서 45(75 ㎎, 87%)를 수득하고 이를 추가의 정제 없이 후속 반응들에 사용하였다.

실시예 29

CH₂Cl₂(0.4 ㎖) 중의 45(10 ㎎, 0.02 밀리몰) 용액에 프탈산 무수물(2.84 ㎎, 0.02 밀리몰)을 가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 카보닐디이미다졸(0.5 ㎎, 0.003 밀리몰)을 가하고 혼합물을 23 ℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 이어서, 카보닐디이미다졸(2.61 ㎎, 0.016 밀리몰)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 추가로 17 시간 동안 교반하였다. 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(RP-18, CH₃CN:H₂O 60:40)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 프탈라시딘(11.7 ㎎, 93%)을 수득하였다.

실시예 30

DMF(0.05 ㎖) 중의 25(18 ㎎, 0.032 밀리몰) 용액에 촉매량의 DMAP(0.5 ㎎, 0.004 밀리몰), 이미다졸(5 ㎎, 0.08 밀리몰) 및 3급-부틸디페닐실릴 클로라이드(12.5 ㎖, 0.048 밀리몰)를 0 ℃에서 가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 물(10 ㎖)을 0 ℃에서 가하고 수성 상을 헥산:에틸 아세테이트(1:10, 2 x 10 밀리몰)로 추출하였다. 유기 층을 건조(황산 나트륨)시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 3:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 26(27 ㎎, 88%)을 수득하였다.

실시예 31

CH₂Cl₂(0.15 ㎖) 중의 26(7 ㎎, 0.0087 밀리몰) 용액에 아세트산(2.5 ㎖, 0.044 밀리몰), (PPh₃)PdCl₂(0.5 ㎎, 6.96 x 10^-4 밀리몰) 및 Bu₃SnH(3.5 ㎖, 0.013 밀리몰)를 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 상기 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 용액을 헥산:에틸 아세테이트(5:1, 0.5 ㎖)의 혼합물로 희석하고 플래시 컬럼(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 5:1 내지 1:1의 구배)의 패드에 부어 백색 고체로서 ET-11(5 ㎎, 75%)을 수득하였다.

실시예 32

CH₂Cl₂(27 ㎖) 중의 2(3.0 g, 5.46 밀리몰) 및 페닐 이소티오시아네이트(3.92 ㎖, 32.76 밀리몰) 용액을 23 ℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(10 ㎖)와 H₂O(5 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산 내지 2:3 헥산:에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 3(3.29 g, 88%)을 수득하였다.

실시예 33

6.5 M HCl/디옥산(150 ㎖) 중의 3(0.143 g, 0.208 밀리몰) 용액을 23 ℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 이어서, 톨루엔(3 ㎖)을 상기 반응물에 가하고 유기 층을 경사분리하였다. 잔사를 포화된 수성 중탄산 나트륨(3 ㎖)과 CHCl₃(3 x 3 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 건조시키고 농축시켜 표제 화합물을 4와 6의 혼합 물(4:6, 90:10)로서 수득하고 이는 정치 시 6으로 서서히 환화되었다.

실시예 34

6.5M HCl/디옥산(150 ㎖) 중의 3(0.143 g, 0.208 밀리몰) 용액을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켜 잔사를 수득하고 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/메탄올/트리에틸아민 100:25:0.1)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 6(80 ㎎, 83%)을 수득하였다.

실시예 35

디옥산(5 ㎖) 중의 3(2.38 g, 3.47 밀리몰) 용액에 디옥산(34 ㎖) 중의 5.3M HCl을 가하고 반응물을 23 ℃에서 45 분간 교반하였다. 이어서 Ac₂O(51 ㎖, 539.5 밀리몰)를 가하고 혼합물을 4 시간 동안 교반하였다. 반응물을 0 ℃에서 냉각시키고 상기 온도에서 수성의 포화된 Na₂CO₃(300 ㎖)와 에틸 아세테이트(300 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 상을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, CH₂Cl₂에서 CH₂Cl ₂:에틸 아세테이트 1:2의 구배)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 5(1.75 g, 97%)를 수득하였다.

실시예 36

CH₂Cl₂(17 ㎖) 중의 5(1.75 g, 3.36 밀리몰) 용액에 디이소프로필에틸아민(11.71 ㎖, 67.23 밀리몰), DMAP(20 ㎎, 0.17 밀리몰) 및 브로모메틸 메틸 에테르(4.11 ㎖, 50.42 밀리몰)를 0 ℃에서 가하였다. 23 ℃에서 6 시간 후에, 반응물을 CH₂Cl₂(50 ㎖)와 수성의 포화된 중탄산 나트륨(25 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(RP-18, CH₃CN/H₂O 1/1)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 7(1.32 g, 70%)을 수득하였다.

실시예 37

메탄올(74 ㎖) 중의 7(0.37 g, 0.65 밀리몰) 용액에 0 ℃에서 1M 수산화 나트륨(130 ㎖)을 가하였다. 반응물을 15 분간 교반하고 이어서 0 ℃에서 6M HCl로 pH=5로 급냉시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 50 ㎖)로 추출하고 합한 유기 층들을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(RP-C18, CH₃CN:H₂O 1/1)에 의해 정제시켜 황색 오일로서 8(232 ㎎, 65%)을 수득하였다.

실시예 38

DMF(30 ㎖) 중의 화합물 8(240 ㎎, 0.435 밀리몰)의 탈기된 용액에 10% Pd/C(48 ㎎)를 가하고 반응물을 H₂(대기압) 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 아르곤 하에서 셀라이트 패드를 통해 슐렝크 튜브로, 무수 Cs₂CO₃(240 ㎎, 0.739 밀리몰)를 함유하는 무색 용액으로서 여과하였다. 이어서, 브로모클로로메탄(0.566 ㎖, 8.71 밀리몰)을 가하였다. 상기 튜브를 밀폐시키고 90 ℃에서 3 시 간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각시키고 셀라이트를 통해 여과하고 CH₂Cl₂로 세척하였다. 유기 층을 농축 및 건조(황산 나트륨)시켜 갈색 오일로서 9를 수득하고 이를 다음 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다.

실시예 39

DMF(4 ㎖) 중의 9(245 ㎎, 0.435 밀리몰)를 함유하는 플라스크에 탄산 세슘(425 ㎎, 1.30 밀리몰) 및 알릴 브로마이드(376 ㎖, 4.35 밀리몰)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(25 ㎖)와 H₂O(10 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 상을 건조(황산 나트륨)시키고 감압 하에서 농축시켜 잔사를 수득하고 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, CHCl₃:에틸 아세테이트 1:2)에 의해 정제시켜 황색 오일로서 10(113 ㎎, 43%)을 수득하였다.

실시예 40

CH₂Cl₂(0.2 ㎖) 중의 9(22 ㎎, 0.039 밀리몰) 용액에 염화 아세틸(2.79 ㎖, 0.039 밀리몰) 및 피리딘(3.2 ㎖, 0.039 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하여 백색 고체로서 46(22 ㎎, 93%)을 수득하였다.

실시예 41

디옥산(0.1 ㎖) 중의 46(8 ㎎, 0.013 밀리몰) 용액에 5.3N HCl/디옥산(0.5 ㎖)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이어서, 상기 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하여 백색 고체로서 47(5 ㎎, 70%)을 수득하였다.

실시예 42

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 45(10 ㎎, 0.0192 밀리몰) 용액에 염화 이소발레릴(2.34 ㎖, 0.0192 밀리몰) 및 피리딘(1.55 ㎖, 0.0192 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래 피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 1:2)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 48(11 ㎎, 95%)을 수득하였다.

실시예 43

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 45(10 ㎎, 0.0192 밀리몰) 용액에 염화 이소발레릴(3.98 ㎖, 0.0192 밀리몰) 및 피리딘(1.55 ㎖, 0.0192 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래 피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 1:2)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 49(12.4 ㎎, 96%)를 수득하였다.

실시예 44

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 45(14.5 ㎎, 0.0278 밀리몰) 용액에 트랜스-3-트리플루오로메틸 신나모일 클로라이드(4.76 ㎖, 0.0278 밀리몰) 및 피리딘(2.25 ㎖, 0.0278 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황 산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 1:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 50(18.7 ㎎, 94%)을 수득하였다.

실시예 45

CH₂Cl₂(0.4 ㎖) 중의 43(33 ㎎, 0.0557 밀리몰) 용액에 염화 이소발레릴(6.79 ㎖, 0.0557 밀리몰) 및 피리딘(4.5 ㎖, 0.0557 밀리몰)을 0 ℃에 서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 1:2)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 51(34 ㎎, 91%)을 수득하였다.

실시예 46

CH₂Cl₂(0.4 ㎖) 중의 43(33 ㎎, 0.0557 밀리몰) 용액에 트랜스-3-트리플루오 로메틸 신나모일 클로라이드(9.52 ㎖, 0.0557 밀리몰) 및 피리딘(4.5 ㎖, 0.0557 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 1:2)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 52(40 ㎎, 92%)를 수득하였다.

실시예 47

CH₂Cl₂(0.2 ㎖) 중의 43(10 ㎎, 0.0169 밀리몰) 용액에 트리플루오로아세트산 무수물(2.38 ㎕, 0.0169 밀리몰)을 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 5 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 3:2) 에 의해 정제시켜 백색 고체로서 53(10.7 ㎎, 93%)을 수득하였다.

실시예 48

CH₂Cl₂(0.2 ㎖) 중의 19(11 ㎎, 0.0169 밀리몰) 용액에 트리플루오로아세트산 무수물(2.38 ㎖, 0.0169 밀리몰)을 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 5 시간 동안 교반하고 이어서 용액을 CH₂Cl₂(5 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(3 ㎖)로 세척하였 다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:에틸 아세테이트 3:2)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 54(10.7 ㎎, 93%)를 수득하였다.

실시예 49

CH₂Cl₂(4 ㎖) 중의 54(100 ㎎, 0.415 밀리몰) 용액에 아세트산(40 ㎖), (PPh₃)PdCl₂(8.4 ㎎, 0.012 밀리몰) 및 Bu₃SnH(157 ㎖, 0.56 밀리몰)를 23 ℃에서 가 하였다. 상기 온도에서 2 시간 동안 교반한 후에, 반응물을 플래시 컬럼(SiO₂, 헥산에서 헥산:에틸 아세테이트 2:1의 구배)의 패드에 부어 백색 고체로서 55(90 ㎎, 96%)를 수득하였다.

실시예 50

CH₂Cl₂(1.44 ㎖) 중의 17(200 ㎎, 0.288 밀리몰) 용액에 트리플루오로아세트산(888 ㎖, 11.53 밀리몰)을 가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 4 시간 동안 교반하 였다. 반응물을 포화된 수성의 중탄산 나트륨(60 ㎖)으로 0 ℃에서 급냉시키고 에틸 아세테이트(2 x 70 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켜 백색 고체로서 56(147 ㎎, 93%)을 수득하고 이를 후속의 반응들에 추가의 정제 없이 사용하였다.

실시예 51

CH₂Cl₂(0.4 ㎖) 중의 56(10 ㎎, 0.018 밀리몰) 용액에 페닐 이소티오시아네이트(13 ㎖, 0.109 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산에서 1:1 헥산:에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 57(8 ㎎, 65%)을 수득하였다.

실시예 52

CH₂Cl₂(0.5 ㎖) 중의 57(45 ㎎, 0.065 밀리몰) 용액에 염화 아세틸(4.67 ㎖, 0.065 밀리몰) 및 피리딘(5.3 ㎖, 0.065 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 3 시간 동안 교반하고 이어서, 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(RP-18, CH₃CN:H₂O 40:60)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 58(14 ㎎, 28%)을 수득하였다.

실시예 53

디옥산(1 ㎖) 중의 57(130 ㎎, 0.189 밀리몰) 용액에 5.3 N HCl/디옥산(1.87 ㎖)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 이어서, CH₂Cl₂(15 ㎖) 및 H₂O(10 ㎖)를 상기 반응물에 가하고 유기 층을 경사분리시켰다. 수성 상을 포화된 수성 중탄산 나트륨(60 ㎖)(pH=8)으로 0 ℃에서 염기성으로 만들고, 이어서 에틸 아세테이트(2 x 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조(황산 나트륨)시키고 진공 하에서 농축시켜 백색 고체로서 59(63 ㎎, 70%)를 수득하였다.

실시예 54

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 43(20 ㎎, 0.0338 밀리몰) 용액에 염화 신나모일(5.63 ㎎, 0.0338 밀리몰) 및 피리딘(2.73 ㎖, 0.0338 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 60(22 ㎎, 90%)을 수득하였다.

실시예 55

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 45(19 ㎎, 0.0364 밀리몰) 용액에 헵타플루오로부티릴 클로라이드(5.44 ㎖, 0.0364 밀리몰) 및 피리딘(2.95 ㎖, 0.0364 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 61(11.7 ㎎, 45%)을 수득하였다.

실시예 56

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 43(24 ㎎, 0.04 밀리몰) 용액에 염화 부티릴(4.15 ㎖, 0.04 밀리몰) 및 피리딘(3.28 ㎖, 0.04 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 62(24 ㎎, 90%)를 수득하였다.

실시예 57

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 43(19 ㎎, 0.0364 ㎖) 용액에 염화 신나모일(6.06 ㎎, 0.0364 밀리몰) 및 피리딘(2.95 ㎖, 0.0364 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하 고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 63(20.1 ㎎, 85%)을 수득하였다.

실시예 58

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 43(20 ㎎, 0.0338 밀리몰) 용액에 3-클로로프로피오닐 클로라이드(3.22 ㎖, 0.0338 밀리몰) 및 피리딘(2.73 ㎖, 0.0338 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 64(20.5 ㎎, 89%)를 수득하였다.

실시예 59

CH₂Cl₂(0.3 ㎖) 중의 43(19 ㎎, 0.0364 ㎖) 용액에 염화 부티릴(3.78 ㎖, 0.0364 밀리몰) 및 피리딘(2.95 ㎖, 0.0364 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 상기 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 여과하 고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 20:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 64(19 ㎎, 87%)를 수득하였다.

실시예 60

CH₃CN/H₂O(1.5 ㎖/0.5 ㎖) 중의 50(31.7 ㎎, 0.044 밀리몰) 용액에 AgNO₃(225 ㎎, 1.32 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 17 시간 동안 교반하였다. 이어서 염수(10 ㎖) 및 수성 포화 NaHCO₃(10 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 세척하였다. 상기 용액을 경사분리시키고 유기 층을 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 66(16 ㎎, 51%)을 수득하였다.

실시예 61

CH₃CN/H₂O(1.5 ㎖/0.5 ㎖) 중의 53(57 ㎎, 0.0828 밀리몰) 용액에 AgNO₃(650 ㎎, 3.81 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어 서 염수(10 ㎖) 및 수성 포화 NaHCO₃(10 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 세척하였다. 상기 용액을 경사분리시키고 유기 층을 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 67(28 ㎎, 50%)을 수득하였다.

실시예 62

CH₃CN/H₂O(1.5 ㎖/0.5 ㎖) 중의 48(32 ㎎, 0.0529 밀리몰) 용액에 AgNO₃(270 ㎎, 1.58 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어서 염수(10 ㎖) 및 수성 포화 NaHCO₃(10 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 세척하였다. 상기 용액을 경사분리시키고 유기 층을 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 68(18 ㎎, 56%)을 수득하였다.

실시예 63

CH₃CN/H₂O(1.5 ㎖/0.5 ㎖) 중의 51(27 ㎎, 0.04 밀리몰) 용액에 AgNO₃(204 ㎎, 1.19 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어서 염수(10 ㎖) 및 수성 포화 NaHCO₃(10 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 세척하였다. 상기 용액을 경사분리시키고 유기 층을 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 69(10 ㎎, 38%)를 수득하였다.

실시예 64

CH₃CN/H₂O(1.5 ㎖/0.5 ㎖) 중의 63(15 ㎎, 0.023 밀리몰) 용액에 AgNO₃(118 ㎎, 0.691 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어서 염수(10 ㎖) 및 수성 포화 NaHCO₃(10 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 세척하였다. 상기 용액을 경사분리시키고 유기 층을 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래 시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 70(20.1 ㎎, 85%)을 수득하였다.

실시예 65

CH₃CN/H₂O(1.5 ㎖/0.5 ㎖) 중의 65(25 ㎎, 0.042 밀리몰) 용액에 AgNO₃(215.56 ㎎, 1.269 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어서 염수(10 ㎖) 및 수성 포화 NaHCO₃(10 ㎖)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 CH₂Cl₂(20 ㎖)로 세척하였다. 상기 용액을 경사분리시키고 유기 층을 건조시키고 진공 하에서 농축시켰다. 잔 사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 71(16 ㎎, 65%)을 수득하였다.

발효 과정

실시예 A

1% 글루코스; 0.25% 쇠고기 추출물; 0.5% 박토-펩톤; 0.25% NaCl; 0.8% CaCO₃를 함유하는 시드 배지 YMP3에 슈도모나스 플루오레센스의 A2-2 균주 미생물의 동결된 성장성 모 균주 0.1%를 접종하고 회전 진탕기(250 rpm)에서 27 ℃에서 배양시켰다. 30 시간 배양시킨 후에, 시드 배양물을, 2% 덱스트로즈; 4% 만니톨, 2% 건조된 양조 효모(Vitalevor(등록상표) Biolux, Belgium); 1% (NH₄)₂SO₄; 0.04% K₂HPO₄; 0.8 KCl; 0.001% FeCl₃; 0.1% L-Tyr; 0.8% CO₃Ca; 0.05% PPG-2000; 0.2% 소포성 실리콘(ASSAF-100, RHODIA UK)으로 구성된 생산 배지를 갖는 교반식 용기 발효기에 가하였다. 122 ℃에서 30 분간 멸균을 수행하였다. 접종 부피는 2%(v/v)이었다. 온도는 27 ℃(0 내지 16 시간) 및 24 ℃(16 시간 내지 최종 과정(41 시간))이었다. 용해 산소압은 25% 이하였다. pH를 28 시간에서 최종 과정까지 묽은 황산으로 6.0으로 조절하였다. 과압은 0.5 바였다. 1% 만니톨 또는 솔비톨을 16 시간 내지 최종 과정까지(이틀간 계속실시) 가하고 2%는 3 일의 발효과정 동안 가하였다.

41 시간 또는 64 시간 후에, 발효 브로쓰를 사프라신 B의 회수를 위해 추출하거나 또는 사프라신 B-시아노의 회수를 위해서 등명한 브로쓰에서 KCN 처리를 해야 한다.

실시예 B

조 추출물로부터 사프라신 B 시아노의 획득

pH 6에서 발효 브로쓰로부터의 등명화 또는 여과에 의해 고체를 제거한다. 상기 등명화된 브로쓰를 묽은 수산화 나트륨으로 pH 9.5로 조절하고 2:1(v/v) 에틸 아세테이트, 염화 메틸렌 또는 부틸 아세테이트로 2 회 추출하였다. 추출을 20' 동안 교반식 용기로 수행하고, 상기 혼합물의 온도를 8 내지 10 ℃에서 유지시켰다. 2 개의 상을 액체-액체 원심분리에 의해 분리시켰다. 유기 상을 무수 또는 동결된 황산 나트륨으로 건조시키고 이어서 여과하여 얼음을 제거하였다. 상기 유기 상(에틸 아세테이트 층)을 오일-조 추출물이 수득될때까지 증발시켰다.

실시예 C

등명화된 브로쓰로부터 사프라신 B 시아노의 획득

pH 6에서 발효 브로쓰로부터의 등명화 또는 여과에 의해 고체를 제거한다. 상기 등명화된 브로쓰의 pH를 농 아세트산으로 3.9로 조절하였다. KCN 0.5 g/ℓ를 상기 등명화된 브로쓰에 가하고 20 ℃에서 교반하면서 1 시간 동안 배양시켰다. 이어서, 온도를 15 ℃로 감소시키고 pH를 묽은 수산화 나트륨으로 9.5로 조절하고 2:1.5(v/v) 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출을 20 분 동안 교반식 용기에서 수행하고, 상기 혼합물의 온도를 8 내지 10 ℃에서 유지시켰다. 2 개의 상을 액체-액체 원심분리에 의해 분리시켰다. 유기 상을 무수 황산 나트륨으로 건조시켰다. 상기 유기 상(에틸 아세테이트 층)을 오일-조 추출물이 수득될때까지 증발시켰다. 상기 추출물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 20:1에서 10 내지 5:1의 에틸 아세테이트:메탄올의 구배)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 정량적인 화합물 2를 수득하였다.

실시예 D

덱스트로즈(2%), 만니톨(4%), 건조 양조 효모(2%), 황산 암모늄(1%), 칼륨 2 차 포스페이트(0.04%), 염화 칼륨(0.8%), 철(III) 클로라이드 6-수화물(0.001%), L-티로신(0.1%), 탄산 칼슘(0.8%), 폴리(프로필렌 글리콜) 2000(0.05%) 및 소포성 ASSAF 1000(0.2%)을 총 75 ℓ 용량의 단지-발효기에 붓고, 멸균 후에 A2-2 균주(FERM BP-14)의 시드 배양물(2%)로 접종하고, 교반 하에서 산소 공급 배양을 27에서 24 ℃로 64 시간동안 수행하였다(산소 공급 75 ℓ/분 및 교반 350 내지 500 rpm). pH를 묽은 황산을 자동 공급함으로써 27 시간 내지 최종 과정까지 조절하였다. 2% 만니톨을 16 시간 내지 최종 과정까지 첨가하였다. 상기와 같이 수득된 배양된 배지(45 ℓ)를 원심분리에 의해 세포를 제거한 후에 묽은 수산화 나트륨으로 pH 9.5로 조절하고, 에틸 아세테이트 25 ℓ로 2 회 추출하였다. 상기 혼합을 8 ℃에서 교반식 용기에서 20 분간 수행하였다. 상기 2 개의 상을 액체-액체 원심분리에 의해 분리시켰다. 유기 상을 -20 ℃에서 동결시키고 얼음을 제거하기 위해 여과하고 얼음을 증발시키고 오일-짙은-조 추출물 40 g이 수득될때까지 증발시켰다. 시아나이드 그룹을 도입시키고 정제시킨 후에, 사프라신 B 시아노 3.0 g을 수득하였다.

실시예 E

덱스트로즈(2%), 만니톨(4%), 건조 양조 효모(2%), 황산 암모늄(1%), 칼륨 2 차 포스페이트(0.02%), 염화 칼륨(0.2%), 철(III) 클로라이드 6-수화물(0.001%), L-티로신(0.1%), 탄산 칼슘(0.8%), 폴리(프로필렌 글리콜) 2000(0.05%) 및 소포성 ASSAF 1000(0.2%)을 총 75 ℓ 용량의 단지-발효기에 붓고, 멸균 후에 A2-2 균주(FERM BP-14)의 시드 배양물(2%)로 접종하고, 교반 하에서 산소 공급 배양을 27에서 24 ℃로 41 시간동안 수행하였다(산소 공급 75 ℓ/분 및 교반 350 내지 500 rpm). pH를 28 시간 내지 최종 과정까지 묽은 황산을 자동 공급함으로써 조절하였다. 1% 만니톨을 16 시간 내지 최종 과정까지 첨가하였다. 상기와 같이 수득된 배양된 배지(45 ℓ)를 원심분리에 의해 세포를 제거한 후에 농 아세트산 200 ㎖로 pH 3.9로 조절하였다. 97% 칼륨 시아나이드 25 g을 가하고 20 ℃에서 1 시간 교반한 후에, pH를 10% 수산화 나트륨 용액 1500 ㎖으로 9.5로 조절하였다. 이어서 에틸 아세테이트 35 ℓ로 추출하였다. 혼합을 8 ℃에서 교반식 용기에서 20 분간 수행하였다. 상기 2 개의 상을 액체-액체 원심분리에 의해 분리시켰다. 유기 상을 무수 황산 나트륨에 의해 건조시키고 오일-짙은-조 추출물 60 g이 수득될때까지 증발시켰다.

크로마토그래피 후에, 사프라신 B 시아노 4.9 g을 수득하였다.

실시예 66

디클로로메탄(535 ㎖) 중의 25(7.83 g, 0.0139 몰) 및 상업적으로 입수할 수 있는 Boc-Cys(Fm) 유도체(Bachem)(8.33 g, 35.04 밀리몰)의 교반된 용액에 아르곤 하에서 디메틸아미노피리딘(4.28 g, 35.04 밀리몰) 및 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(6.66 g, 35.04 밀리몰)를 23 ℃에서 가하였다. 이어서 상기 혼합물을 23 ℃에서 2.5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화된 수성 중탄산 나트륨 용액(500 ㎖)을 가하여 급냉시키고, 유기 상을 분리시키고 수성 층을 디클로로메탄(250 ㎖)으로 역 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발건고시켰다. 조 생성물을 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:4에서 2:1의 구배 방식으로 용출시키면서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 142(12.21 g, 93%)를 수득하였다.

실시예 67

디클로로메탄(318 ㎖) 중의 142(12.01 g, 0.0127 몰)의 교반된 용액에 디클로로비스(트리페닐포스핀) 팔라듐(II)(0.71 g, 1.015 밀리몰) 및 아세트산(3.6 ㎖, 0.176 몰)을 아르곤 하에서 23 ℃에서 가하였다. 이어서, 트리부틸 틴 하이드라이드(10.27 ㎖, 0.037 몰)를 적가 방식으로 가하였다. 혼합물을 23 ℃에서 10 분간 교반하였다. 이어서 반응물을 헥산으로 충전된 실리카 겔 컬럼을 통해 여과하였다. 143(10.89 g, 95%)을, 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:4, 1:1 내지 7:3의 구배 방식으로 연속적으로 용출시킴으로써 황색 고체로서 수득하였다.

Rf: 0.25(헥산:EtOAc 2:1)

실시예 68

무수 디클로로메탄(185 ㎖) 중의 143(10 g, 0.011 몰) 용액에 -10 ℃(욕 온도 -15 ℃)에서 무수 디클로로메탄(185 ㎖) 중의 벤젠셀레닌산 무수물(5.7 g, 0.011 몰) 용액을 가하고, 상기 용액 중에 존재하는 임의의 백색 고체를 경사분리시켰다. 상기 혼합물을 동일한 온도에서 10 분간 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄(200 ㎖)으로 희석하고 포화된 수성 중탄산 나트륨 용액(500 ㎖)을 -10 ℃에서 가하였다. 유기 상을 분리시키고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:1, 3:2, 7:3에서 4:1의 구배 방식으로 용출시키면서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 황색 고체로서 144(9.34 g, 92%)를 수득하였다. 크로마토그래피로부터 정제된 고체를 디클로로메탄(250 ㎖)에 용해시키고, 목탄(3.3 g)을 가하고 현탁액을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 상기 셀라이트를 디클로로메탄(80 ㎖)으로 세척하였다. 용매를 온도를 25 내지 30 ℃에서 유지시키면서 감압 하에서 증발시켜 황색 고체로서 144(8.96 g, 88%)를 수 득하였다.

Rf: 0.30 및 0.25(이성체들의 혼합물)(헥산:EtOAc 1:1)

실시예 69

무수 디클로로메탄(396 ㎖) 중의 DMSO(3.44 ㎖) 용액에 트리플산 무수물(3.27 ㎖, 19.45 밀리몰)을 아르곤 하에서 -78 ℃에서 가하고 혼합물을 상기 온도에서 20 분 동안 교반하였다. 이어서, 무수 디클로로메탄(124 ㎖) 중의 144(8.92 g, 9.6 밀리몰) 용액을 -78 ℃에서 가하고 혼합물을 -40 ℃에서 아르곤 하에 35 분간 교반하였다. 디이소프로필에틸아민(13.5 ㎖, 73.43 밀리몰)을 가하고 혼합물을 0 ℃에서 45 분간 아르곤 하에서 교반하였다. 3 급 부탄올(3.65 ㎖, 38.6 밀리몰) 및 3 급 부틸 테트라메틸 구아니딘(11.6 ㎖, 67.46 밀리몰)을 가하고 혼합물을 23 ℃에서 40 분간 아르곤 하에서 교반하였다. 이어서 아세트산 무수물(9.15 ㎖, 96.78 밀리몰)을 가하고 반응물을 23 ℃에서 추가로 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄(250 ㎖)으로 희석하고 포화된 수성 염화 암모늄 용액(500 ㎖)을 가하였다. 유기 층을 분리시키고 포화된 수성 중탄산 나트륨 용액(500 ㎖) 및 포화된 수성 염화 나트륨 용액(500 ㎖)으로 연속적으로 세척하였 다. 온도를 25 내지 30 ℃에서 유지시키면서 유기 층을 분리시키고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건고시켰다. 이어서 조 고체를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:4에서 2:3의 구배 방식으로 용출시키면서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 황색 고체로서 145(4.99 g, 68%)를 수득하였다.

Rf: 0.44(헥산:EtOAc 3:2)

실시예 70

아세토니트릴(50 ㎖) 중의 145(1.0 g, 1.3 밀리몰) 및 디클로로메탄(25 ㎖) 용액에 요오드화 나트륨(1.52 g, 10.01 밀리몰)을 23 ℃에서 가하였다. 이어서 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 알루미늄 트리클로라이드(1.33 g, 10.01 밀리몰)를 온도를 0 ℃에서 유지시키면서 조금씩 나누어 가하였다. 이어서 상기 혼합물을 0 ℃에서 2.5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄(25 ㎖)으로 희석하고 포화된 나트륨 칼륨 타르트레이트 수용액(100 ㎖)을 가하였다. 수성 상을 분리시키고 디클로로메탄(2 x 75 ㎖)으로 추출하였다. 이어서 포화된 중탄산 나트륨 수용액(50 ㎖)을 수성 상에 가하고 이를 디클로로메탄(2 x 50 ㎖)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발 건고시키며, 이때 온도를 25 ℃ 이하로 유지시켰다. 이어서 조 고체를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 구배 방식으로 용출시키면서 아미노-실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 35(487 ㎎, 60%)를 황색 고체로서 수득하였다. 35의 실험 데이터는 PCT/GB00/01852에 선행 개시되었다.

36, ET-770 및 ET-743을 PCT/GB00/01852에 선행 개시된 것과 동일한 과정에 따라 제조하였다.

경로 2

실시예 71

THF(569 ㎖) 및 H₂O(285 ㎖) 중의 21(9.84 g, 18.97 밀리몰) 용액을 0 ℃에서 빙욕으로 냉각시켰다. 이어서, NaNO₂(1.96 g, 28.45 밀리몰) 및 90% 수성 AcOH(18.97 ㎖, 0.33 몰)를 0 ℃에서 가하고 혼합물을 23 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응물을 0 ℃로 냉각시킨 후에, 포화된 중탄산 나트륨 수용액(300 ㎖, 염기성 pH) 및 디클로로메탄(500 ㎖)을 가하였다. 추출한 후에, 수성 상을 디클로로메탄(2 x 300 ㎖)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 이어서 조 고체를 MeOH(379 ㎖)에 용해시키고 1M NaOH(38 ㎖)를 0 ℃에서 가하였다. 혼합물을 4 시간 동안 23 ℃에서 교반하였다. 0 ℃에서 EtOAc(600 ㎖)로 희석한 후에, 유기 층 을 물(400 ㎖)과 포화된 중탄산 나트륨 수용액(100 ㎖, 염기성 pH)의 혼합물로 세척하였다. 추출한 후에, 수성 상을 EtOAc(3 x 300 ㎖)로 추가로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:EtOAc 3:1 내지 2:1의 구배)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 146(4.55 g, 46%)을 수득하였다.

Rf: 0.33(헥산:EtOAc 1:1)

실시예 72

디클로로메탄(2.8 ℓ) 중의 146(47.35 g, 0.091 몰) 및 상업적으로 입수할 수 있는 Boc-Cys(Fm) 유도체(54.6 g, 0.137 몰)의 교반된 용액에 아르곤 하에서 디메틸아미노피리딘(5.6 g, 0.046 몰) 및 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(43.6 g, 0.227 몰)를 23 ℃에서 1.5 시간 동안 적가하였다. 이어서 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 더 교반하였다. 반응물을 포화된 중탄산 나트륨 수용액(1 ℓ)을 가하여 급냉시키고 유기 상을 분리시켰다. 수성 층을 디클로로메탄(2 x 500 ㎖)으로 역 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 조 생성물을 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:4에서 3:1의 구배 방식으로 용출시키면서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 백색 고체로서 147(74.3 g, 93%)을 수득하였다.

Rf: 0.5(헥산:EtOAc 1:1)

실시예 73

CH₃CN(3.12 ㎖) 중의 147(0.562 g, 0.624 몰) 용액에 MEMCl(1.07 ㎖, 9.36 밀리몰), DIPEA(2.17 ㎖, 12.48 밀리몰) 및 DMAP(0.0076 g, 0.06 밀리몰)를 0 ℃에 서 가하였다. 혼합물을 23 ℃에서 5.5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 CH₂Cl₂(50 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(50 ㎖)로 추출하였다. 수성 상을 CH₂Cl ₂(50 ㎖)로 다시 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켜 잔사를 수득하고 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(CH₂Cl₂:EtOAc 10:1, 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 148(539 ㎎, 87%)을 수득하였다.

Rf: 0.50(CH₂Cl₂:AcOEt 6:1)

실시예 74

디클로로메탄(1 ℓ) 중의 148(38.32 g, 0.039 몰)의 교반된 용액에 디클로로비스(트리페닐포스핀) 팔라듐(II)(2.17 g, 0.0031 몰) 및 아세트산(11.1 ㎖, 0.195 몰)을 23 ℃에서 아르곤 하에서 가하였다. 이어서, 트리부틸 틴 하이드라이드(36.5 ㎖, 0.136 몰)를 적가 방식으로 가하였다. 혼합물을 23 ℃에서 15 분간 교반하였다. 이어서 반응물을 헥산으로 충전된 실리카 겔 컬럼을 통해 여과하였다. 149(35.07 g, 95%)를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 0:100, 1:4, 1:3, 2:5, 2:3, 1:1, 2:1, 3:1에서 100:0의 구배 방식으로 연속적으로 용출시킴으로써 백색 고체로서 수득하였다.

Rf: 0.25(헥산:EtOAc 2:1)

실시예 75

무수 디클로로메탄(265 ㎖) 중의 149(15 g, 0.0158 몰) 용액에 -10 ℃(욕 온도 -15 ℃)에서 무수 디클로로메탄(265 ㎖) 중의 벤젠셀레닌산 무수물(7.4 g, 0.0143 몰) 용액을 30 분 동안 적가하고, 상기 용액 중에 존재하는 임의의 백색 고 체를 경사분리시켰다. 상기 혼합물을 동일한 온도에서 추가로 10 분간 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄(200 ㎖)으로 희석하고 포화된 수성 중탄산 나트륨 용액(500 ㎖)을 -10 ℃에서 가하였다. 유기 상을 분리시키고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:2에서 100:0의 구배 방식으로 용출시키면서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 황색 고체로서 150(14.20 g, 89%)을 수득하였다. 크로마토그래피로부터 정제된 고체를 디클로로메탄(250 ㎖)에 용해시키고, 목탄(4.95 g)을 가하였다. 이어서 현탁액을 23 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 상기 셀라이트를 디클로로메탄(80 ㎖)으로 세척하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켜 백색 고체로서 150(13.72 g, 86%)을 수득하였다.

Rf: 0.37(헥산:EtOAc 1:2)

실시예 76

반응 플라스크를 2 회 화염처리하고, 진공/아르곤으로 수회 퍼징시키고, 상기 반응을 아르곤 분위기 하에서 유지시켰다. 무수 CH₂Cl₂(42 ㎖) 중의 DMSO(385.0 ㎕) 용액에 -78 ℃에서 트리플산 무수물(366.5 ㎕, 2.16 밀리몰)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78 ℃에서 20 분간 교반하였다. 이어서, 무수 CH₂Cl₂(주 첨가에 대해서 10 ㎖, 및 세척에 대해서 5 ㎖) 중의 150(1 g, 1.03 밀리몰) 용액을 -78 ℃에서 캐뉼라(첨가 시간: 5 분)를 통해 첨가하였다. 첨가하는 동안 상기 온도를 상기 두 플라스크 모두에서 -78 ℃에서 유지시키고 색상이 황색에서 갈색으로 변하였다. 반응 혼합물을 -40 ℃에서 35 분간 교반하였다. 상기 기간 동안 용액의 색상이 황색에서 짙은 녹색으로 변하였다. 이 시간 후에, iPr₂NEt(1.51 ㎖, 9.55 밀리몰)를 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 45 분간 유지시키고, 상기 용액의 색상이 이 기간 동안 갈색으로 변하였다. 이어서 tBuOH(409.5 □L, 4.33 밀리몰) 및 3 급 부틸 테트라메틸 구아니딘(1.31 ㎖, 7.61 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 시간 후에, 아세트산 무수물(1.03 ㎖, 10.89 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 더 유지시켰다. 이어서 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(25 ㎖)로 희석하고 NH₄Cl(50 ㎖), NaHCO₃(50 ㎖) 및 NaCl(50 ㎖)의 포화 수용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(내부 직경: 2.0 ㎝, 실리카 높이 9 ㎝; 용출제: 에틸 아세테이트/헥산 20:80, 30:70 내지 40:60의 구배 방식)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 151(832.6 ㎎, 99%)을 수득하였다.

Rf: 0.48(헥산:EtOAc 3:2)

실시예 77

CH₂Cl₂(120 ㎖) 중의 151(2.9 g, 3.57 밀리몰) 용액에 MeSO₃H(1.4 ㎖, 21.46 밀리몰)를 23 ℃에서 가하였다. 반응물을 23 ℃에서 30 분간 교반한 후에, 포화 된 중탄산 나트륨 수용액(200 ㎖)을 0 ℃에서 가하였다. 유기 상을 분리시키고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축건고시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 0:1에서 1:0의 구배로 용출시키면서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 35(1.43 g, 64%)를 수득하였다. 35의 실험 데이터는 PCT/GB00/01852에 선행 개시되어 있다.

경로 3

본 경로의 첫 번째 단계(21의 146으로의 변환)는 상기 실시예 71에 개시되어 있다.

실시예 78

아세톤(500 ㎖) 및 물(500 ㎖) 중의 상업적으로 입수할 수 있는 HO.Cys(Fm)-H.HCl(Bachem)(40 g, 0.119 몰) 용액에 1M Na₂CO₃ 용액(238 ㎖) 및 BnCO₂Cl(18.7 ㎖, 0.131 몰)을 0 ℃에서 가하였다. 상기 반응물을 60 ℃에서 30 분간 교반한 후에, 혼합물을 1N HCl(pH 0.1)로 급냉시키고 에테르(3 x 400 ㎖)로 추출하였다. 유기 상을 분리시키고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건고시켰다. 조 고체를 EtOAc/CH₂Cl₂(1:1)의 혼합물에 용해시키고, 헥산으로 침전시키고 4 ℃에서 밤새 유지시켰다. 이어서, 현탁액을 여과하고, 고체를 헥산(200 ㎖)으로 세척하고 여액을 진공 하에서 건조시켜 백색 고체로서 152(50.16 g, 97%)를 수득하였다.

실시예 79

디클로로메탄(800 ㎖) 중의 146(10 g, 19.2 밀리몰) 및 152(12.5 g, 28.8 밀리몰)의 교반된 용액에 아르곤 하에서 디메틸아미노피리딘(705 ㎎, 5.77 밀리몰), 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(9.2 g, 48.1 밀리몰) 및 디이소프로필에틸 아민(7.4 ㎖, 42.3 밀리몰)을 0 ℃에서 1 시간 동안 적가하였다. 이어서 상기 혼합물을 23 ℃에서 1.5 시간 더 교반하였다. 반응물을 포화된 중탄산 나트륨 수용액(600 ㎖)의 첨가에 의해 급냉시켰다. 유기 상을 분리시키고 포화된 염화 암모늄 수용액(500 ㎖) 및 포화된 염화 나트륨 용액(500 ㎖)으로 다시 세척하였다. 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 조 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(RP18, CH₃CN:H₂O 4:1)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 153(13.89 g, 77%)을 수득하였다.

실시예 80

CH₃CN(74.3 ㎖) 중의 153(13.89 g, 14.85 밀리몰) 용액에 MEMCl(25.4 ㎖, 223 밀리몰), DIPEA(52 ㎖, 297 밀리몰) 및 DMAP(0.181 g, 0.15 밀리몰)를 0 ℃에서 가하였다. 혼합물을 23 ℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 CH₂Cl₂(400 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(300 ㎖) 및 3N HCl(pH=3)로 추출하였다. 수성 상을 CH₂Cl₂(2 x 50 ㎖)로 다시 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO ₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켜 잔사를 수득하고 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, CH₂Cl₂:EtOAc 10:1, 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 154(13.47 g, 88%)를 수득하였다.

Rf: 0.27(CH₂Cl₂:AcOEt 6:1)

실시예 81

디클로로메탄(530 ㎖) 중의 154(20.84 g, 0.02 몰)의 교반된 용액에 디클로로비스(트리페닐포스핀) 팔라듐(II)(1.14 g, 1.63 밀리몰) 및 아세트산(11.64 ㎖, 0.2 몰)을 23 ℃에서 아르곤 하에서 가하였다. 이어서, 트리부틸 틴 하이드라이드(27.44 ㎖, 0.1 몰)를 적가 방식으로 가하였다. 혼합물을 23 ℃에서 15 분간 교반하였다. 이어서 반응물을 헥산으로 충전된 실리카 겔 컬럼을 통해 여과하였다. 155(18.78 g, 94%)를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:4, 1:1, 3:2에서 7:3의 구배 방식으로 연속적으로 용출시킴으로써 담황색 고체로서 수득하였다.

실시예 82

무수 디클로로메탄(530 ㎖) 중의 155(18.5 g, 18.82 밀리몰) 용액에 -10 ℃(욕 온도 -15 ℃)에서 무수 디클로로메탄(290 ㎖) 중의 벤젠셀레닌산 무수물(9.68 g, 18.82 밀리몰) 용액을 적가하고, 상기 용액 중에 존재하는 임의의 백색 고체를 경사분리시켰다. 상기 혼합물을 동일한 온도에서 10 분간 교반하였다. 이어서 반응물을 포화된 중탄산 나트륨 수용액(600 ㎖)으로 급냉시켰다. 유기 상을 분리시키고, 수성 상을 CH₂Cl₂(2 x 300 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:1, 3:2, 7:3에서 4:1의 구배 방식으로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 156(17.62 g, 88%)을 수 득하였다.

실시예 83

반응 플라스크를 2 회 화염처리하고, 진공/아르곤으로 수회 퍼징시키고, 상기 반응을 아르곤 분위기 하에서 유지시켰다. 무수 CH₂Cl₂(20 ㎖) 중의 DMSO(178 ㎕) 용액에 -78 ℃에서 트리플산 무수물(169 ㎕, 1 밀리몰)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78 ℃에서 20 분간 교반하였다. 이어서, 무수 CH₂Cl₂(주 첨가에 대해서 4 ㎖, 및 세척에 대해서 1.5 ㎖) 중의 156(0.5 g, 0.5 밀리몰) 용액을 -78 ℃에서 캐뉼라(첨가 시간: 5 분)를 통해 첨가하였다. 첨가하는 동안 상기 온도를 상기 두 플라스크 모두에서 -78 ℃에서 유지시키고 색상이 황색에서 갈색으로 변하였다. 반응 혼합물을 -40 ℃에서 35 분간 교반하였다. 상기 기간 동안 용액의 색상이 황색에서 짙은 녹색으로 변하였다. 이 시간 후에, iPr₂NEt(0.7 ㎖, 4.42 밀리몰)를 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 45 분간 유지시키고, 상기 용액의 색상이 이 기간 동안 갈색으로 변하였다. 이어서 tBuOH(189 ㎕, 2 밀리몰) 및 3 급 부틸 테트라메틸 구아니딘(0.6 ㎖, 3.49 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 시간 후에, 아세트산 무수물(0.47 ㎖, 4.97 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 더 유지시켰다. 이어서 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(15 ㎖)로 희석하고 NH₄Cl(25 ㎖), NaHCO₃(25 ㎖) 및 NaCl(25 ㎖)의 포화 수용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(내부 직경: 2.0 ㎝, 실리카 높이 9 ㎝; 용출제: 에틸 아세테이트/헥산 1:4, 1:3, 1:2 내지 1:1의 구배 방식)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 157(128 ㎎, 30%)을 수득하였다.

Rf: 0.37(헥산:EtOAc 3:2)

실시예 84

CH₂Cl₂(2 ㎖) 및 CH₃CN(2 ㎖)중의 157(100 ㎎, 0.118 밀리몰) 용액에 NaI(71 ㎎, 0.472 밀리몰) 및 TMSCl(60 □ℓ, 0.472 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 반응물을 23 ℃에서 50 분간 교반한 후에, 혼합물을 물(30 ㎖)로 급냉시키고 CH₂Cl₂(2 x 20 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화된 NaCl 용액(20 ㎖) 및 포화된 나트륨 디티오나이트 용액(20 ㎖)으로 연속적으로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 용출제로서 에틸 아세테이트:헥산 1:4, 1:2에서 1:1 의 구배를 사용하여 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 백색 고체로서 158(62 ㎎, 70%)을 수득하였다.

Rf: 0.21(헥산:EtOAc 1:1)

실시예 85

MeOH(6.8 ㎖) 중의 158(100 ㎎, 0.132 밀리몰) 용액에 HCO₂H(360 ㎕) 및 10% Pd/C(140 ㎎, 0.132 밀리몰)를 23 ℃에서 가하고 혼합물을 15 분간 교반하였다. 이어서, 톨루엔(7 ㎖)을 반응물에 가하고 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 톨루엔과의 공비증류를 3 회 반복하였다. 이어서 잔사를 디클로로메탄(15 ㎖)으로 희 석하고 포화된 중탄산 나트륨 수용액(15 ㎖)을 가하였다. 수성 상을 분리시키고 디클로로메탄(2 x 10 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증발 건고시켰다. 이어서 잔사를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:2, 1:1에서 2:1의 구배 방식으로 용출시키면서 아미노 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 황색 고체로서 35(57 ㎎, 70%)를 수득하였다. 35의 실험 데이터는 PCT/GB00/01852에 선행 개시되어 있다.

경로 4

실시예 86

DMF(0.05 ㎖) 중의 146(18 ㎎, 0.032 밀리몰), 촉매량의 DMAP 및 이미다졸(5 ㎎, 0.08 밀리몰) 용액에 0 ℃에서 3 급 부틸디페닐실릴 클로라이드(12.5 ㎕, 0.048 밀리몰)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 이어서 물(30 ㎖)을 0 ℃에서 가하고 혼합물을 헥산:EtOAc(1:10, 2 x 40 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 상을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:EtOAc 3:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 159(27 ㎎, 88%)를 수득하였다. Rf: 0.29(헥산:EtOAc 3:1)

실시예 87

CH₃CN(16 ㎖) 중의 159(2.4 g, 3.17 밀리몰) 용액에, MOMBr(2.6 ㎖, 31.75 밀리몰), DIPEA(8.3 ㎖, 47.6 밀리몰) 및 DMAP(16 ㎎, 0.127 밀리몰)를 0 ℃에서 가하였다. 혼합물을 23 ℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응물을 CH₂Cl₂(50 ㎖)로 희석하고 0.1N HCl(50 ㎖)로 추출하였다. 수성 상을 CH₂Cl₂(50 ㎖)로 다시 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켜 잔사를 수득하고 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, CH₂Cl₂:EtOAc 15:1, 5:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 26(1.78 g, 70%)을 수득하였다. 26의 실험 데이터가 PCT/GB00/01852에 선행 개시되어 있다.

중간체 11, 160, 161, 162 및 163에 대한 실험 과정이 미국 특허 제 5,721,362 호에 선행 개시되어 있다.

실시예 88

무수 CH₂Cl₂(250 ㎖) 및 아세토니트릴(300 ㎖) 중의 163(15.8 g, 0.02 몰) 용액에 NaI(31.5 g, 0.21 몰) 및 CITMS(CaH₂ 상에서 새로 증류시킨 것, 26.7 ㎖, 0.21 몰)를 아르곤 분위기 하에 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 40 분간 교반하였다. 이어서 반응물을 CH₂Cl₂(200 ㎖)와 물(300 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 포화된 NaCl 수용액(2 x 300 ㎖)으로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 생성물을 용출제로서 에틸 아세테이트/헥산 2:3을 사용하여 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 164(10.74 g, 76%)를 수득하였다. Rf: 0.25(헥산:EtOAc 3:2)

실시예 89

디클로로메탄(142 ㎖) 중의 164(2 g, 2.85 밀리몰)의 교반된 용액에 디클로로비스(트리페닐포스핀) 팔라듐(II)(0.2 g, 0.28 밀리몰) 및 아세트산(0.65 ㎖, 11.4 몰)을 23 ℃에서 아르곤 하에서 가하였다. 이어서, 트리부틸 틴 하이드라이드(4.51 ㎖, 17.02 밀리몰)를 25 분 동안 적가 방식으로 가하였다. HsnBu₃를 첨가한 후에, 혼합물을 23 ℃에서 20 분 더 교반하였다. 반응물을 헥산으로 충전된 실리카 겔 컬럼을 통해 여과하였다. 35(1.38 g, 78%)를 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물로 1:2에서 15:1의 구배 방식으로 연속적으로 용출시킴으로써 수득하였다. 35의 실험 데이터는 PCT/GB00/01852에 선행 개시되었다.

경로 5

실시예 90

DMF(20.1 ㎖) 중의 146(8.72 g, 16.78 밀리몰) 용액에 이미다졸(3.43 g, 50.34 밀리몰), 3 급 부틸 디메틸 클로로실란(7.58 ㎖, 50.34 밀리몰) 및 DMAP(0.2 g, 1.7 밀리몰)를 0 ℃에서 가하였다. 23 ℃에서 3.5 시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 물(100 ㎖)로 급냉시키고 EtOAc/헥산 1:3(2 x 75 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 0.1M HCl(50 ㎖)로 세척하고 수성 상을 EtOAc/헥산 1:3(40 ㎖)으로 다시 추출하였다. 합한 유기 상을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(헥산:EtOAc 10:1, 3:1)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 165(9.85 g, 93%)를 수득하였다. Rf: 0.39(헥산:EtOAc 2:1)

실시예 91

THF(87.64 ㎖) 및 물(0.24 ㎖) 중의 165(7.62 g, 12.02 밀리몰) 용액에 MEMCl(2.33 ㎖, 20.43 밀리몰)을 -6 ℃에서 가하였다. 60% NaH(0.72 g, 18.03 밀 리몰)를 45 분에 걸쳐 나누어 첨가한 후에, 혼합물을 상기 온도에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(150 ㎖)로 급냉시키고 CH₂Cl₂(2 x 100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켜 백색 고체로서 166(8.69 g, 100%)을 수득하고 이를 다음 단계에 추가의 정제없이 사용하였다. Rf: 0.24(헥산:AcOEt 2:1)

실시예 92

무수 CH₂Cl₂(275 ㎖) 중의 166(10.76 g, 14.90 밀리몰) 용액에 Pd(PPh₃P)₂Cl₂(837 ㎎, 1.19 밀리몰), 아세트산(4.26 ㎖, 74.5 밀리몰) 및 트리부틸틴 하이드라이드(11.85 ㎖, 44.7 밀리몰)를 아르곤 분위기 하에 23 ℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 23 ℃에서 15 분간 교반하였다(TLC AcOEt/헥산 1:1은 출발 물질이 없음을 보였다). 헥산(100 ㎖)을 가하고 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:헥산 0:100, 1:4, 2:3에서 1:1의 구배 방식)에 부어 황색 고체로서 167(9.95 g, 98%)을 수득하였다. Rf: 0.42(헥산:EtOAc 3:7)

HPLC: 조건: 컬럼: 대칭 C18; 이동상; AcN-인산염 완충액 25 mM, pH=5, AcN(65%)으로 5 분간 동등하게, 및 AcN을 65에서 92%의 구배로 31 분간, Ø: 0.6 ㎖/분, t^a: 40 ℃; 체류시간: 27.89 분; HPLC 순도 면적: 89.62%.

실시예 93

무수 CH₂Cl₂(300 ㎖) 중의 167(9.95 g, 14.6 밀리몰) 용액에 무수 CH₂Cl ₂(120 ㎖) 중의 벤젠셀레닌산 무수물(7.51 g, 14.6 밀리몰, 시약 순도 70%) 용액을 아르곤 분위기 하에 -15 ℃에서 적가하였다(나머지 백색 고체는 경사분리시켰다). 이어서 상기 용액을 -15 ℃에서 15 분간 교반하였다(TLC EtOAc/헥산 2:3은 출발 물질이 없음을 보였다). 포화된 중탄산 나트륨 수용액(500 ㎖)을 상기 온도에서 반응 혼합물에 가하였다. 유기 상을 분리시키고 수성 상을 CH₂Cl₂(500 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 제거하고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 반응 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:헥산 2:3에서 3:1의 구배)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 168(9.86 g, 97%)을 수득 하였다. Rf: 0.33(헥산:EtOAc 3:7)

HPLC: 조건: 컬럼: 대칭 C18; 이동상; AcN-인산염 완충액 25 mM, pH=5, AcN을 30에서 100%의 구배로 50 분간, Ø: 1.2 ㎖/분, t^a: 40 ℃; 체류시간: 30.70 분 및 30.95 분(2 개의 이성체); HPLC 순도 면적: 60.77% 및 31.99%.

실시예 94

무수 THF(272 ㎖, 0.03 M) 중의 168(16.38 g, 23.47 밀리몰) 용액에 1M THF(59 ㎖, 59 밀리몰) 중의 TBAF 용액을 23 ℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 23 ℃에서 45 분간 교반하였다. 이어서 상기 혼합물을 포화된 수성 NaCl 용액(850 ㎖) 및 CH₂Cl₂(950 ㎖) 사이에 분배시켰다. 상기 두 층을 분리시키고 유기 층을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:헥산 40:60, 50:50, 70:30, 90:10에서 100:0의 구배 방식)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 169(12.17 g, 89%)를 수득하 였다. Rf: 0.1(헥산:EtOAc 3:7)

실시예 95

무수 CH₂Cl₂(688 ㎖) 중의 169(11.49 g, 19.69 밀리몰) 및 Alloc-Cys-(Fm)(11.32 g, 29.53 밀리몰)(이의 제조에 대해 문헌[Kruse, C.H.; Holden, K.G., J. Org. Chem., 1985, 50, pp. 2792-2794]을 참조하시오) 용액에 DMAP(2.4 g, 19.69 밀리몰) 및 EDC·HCl(9.44 g, 49.22 밀리몰)을 23 ℃에서 가하였다. 이어서 DIPEA(5.14 ㎖, 29.53 밀리몰)를 0 ℃에서 가하고 반응물을 23 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화된 NaHCO₃(500 ㎖) 수용액, NaCl(400 ㎖) 및 NH₄Cl(2 x 300 ㎖)로 연속적으로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, AcOEt:헥산 1:1, 6:4에서 7:3의 구배 방식)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 170(14.76 g, 79%)을 수득하였다. Rf: 0.31 및 0.40(헥산:EtOAc 3:7)(이성체들의 혼합물).

실시예 96

반응 플라스크를 2 회 화염처리하고, 진공/아르곤으로 수 회 퍼징시키고 상기 반응을 아르곤 분위기 하에서 유지시켰다. 무수 CH₂Cl₂(554 ㎖) 중의 DMSO(5.4 ㎖) 용액에 트리플산 무수물(5.11 ㎖, 30.4 밀리몰)을 -78 ℃에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 -78 ℃에서 20 분간 교반하였다. 이어서 무수 CH₂Cl₂(188 ㎖) 중의 170(14.43 g, 15.2 밀리몰) 용액을 캐뉼라를 통해 가하였다. 첨가 중에 온도를 상기 두 플라스크 모두에서 -78 ℃에서 유지시키고 반응물의 색상은 황색이었다. 상기 반응 혼합물을 -40 ℃에서 35 분간 교반하였다. 이 기간 동안 용액의 색상이 황색에서 짙은 녹색으로 변하였다. 이 시간 후에, iPr₂NEt(21.2 ㎖, 121.6 밀리몰)를 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 45 분간 유지시키고, 상기 용액의 색상이 이 기간 동안 담갈색으로 변하였다. 이어서, t-부탄올(5.8 ㎖, 60.8 밀리몰) 및 3 급 부틸 테트라메틸 구아니딘(18.3 ㎖, 106.4 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 시간 후에, 아세트산 무수물(14.34 ㎖, 152 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 더 유지시켰다. 이어서 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(38 ㎖)로 희석하고 NH₄Cl(500 ㎖), NaHCO₃(500 ㎖) 및 염화 나트륨(500 ㎖)의 수성 포화 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층들을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 에틸 아세테이트:헥산, 3:7에서 4:6의 구배)에 의해 정제시켜 담황색 고체로서 171(6.24 g, 52%)을 수득하였다. Rf=0.38(헥산:EtOAc 1:1).

HPLC: 조건: 컬럼: 대칭 C18; 이동상; AcN-인산염 완충액, pH=5, AcN을 45에서 65%의 구배로 15 분간 및 65에서 90%로 36 분간, Ø: 0.8 ㎖/분, t^a: 40 ℃; 체류시간: 19.734 분; HPLC 순도 면적: 83.17%.

실시예 97

무수 CH₂Cl₂(74 ㎖) 및 아세토니트릴(74 ㎖) 중의 171(2.26 g, 2.85 밀리몰) 용액에 NaI(3.42 g, 22.8 밀리몰) 및 TMSCI(CaH₂ 상에서 새로 증류시킨 것)(2.6 ㎖, 22.8 밀리몰)를 0 ℃에서 가하고 반응물을 35 분간 교반하였다. 중탄산 나트륨의 포화 수용액(150 ㎖)을 상기 온도에서 반응 혼합물에 가하였다. 유기 상을 분리시키고 수성 상을 CH₂Cl₂(2 x 100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하여 담황색 고체로서 164(2.4 g, 100%)를 수득하고 이를 추가의 정제 없이 후속 반응들에 사용하였다. 164의 실험 데이터는 상기 실시예 88에 개시되어 있다.

164의 35로의 변환은 상기 실시예 89에 개시되어 있다.

중간체 35, 36, ET-770 및 ET-743을 PCT/GB00/01852에 선행된 것과 동일한 과정에 따라 제조하였다.

경로 6

실시예 98

MeOH(140 ㎖) 중의 144(7 g, 7.6 밀리몰) 용액에 1M NaOH(15.1 ㎖)를 가하고 반응물을 23 ℃에서 10 분간 교반하였다. NH₄Cl(100 ㎖)의 포화된 수용액을 상기 반응 혼합물에 가하였다. 유기 상을 분리시키고 색상이 황색으로 변할때까지 5% HCl로 세척하였다. 유기 추출물을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:헥산 0:1, 1:3, 1:2, 1:1, 1:1에서 3:1의 구배)에 의해 정제시켜 161(3.76 g, 85%)을 수득하였다. 161의 실험 데이터는 미국 특허 제 5,721,362 호에 개시되어 있다.

실시예 99

무수 CH₂Cl₂(20 ㎖) 중의 161(200 ㎎, 0.37 밀리몰) 및 시스테인 152(240 ㎎, 0.55 밀리몰) 용액에 DMAP(110 ㎎, 0.925 밀리몰) 및 EDC·HCl(170 ㎎, 0.925 밀리몰)을 23 ℃에서 가하고 반응물을 1.5 시간 동안 상기 온도에서 교반하였다. 상기 혼합물을 NaHCO₃(15 ㎖), NaCl(15 ㎖) 및 NH₄Cl(2 x 10 ㎖)의 포화 수용액으로 연속적으로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔(SiO₂, AcOEt/헥산 1:4에서 1:2의 구배)을 사용하여 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 백색 고체로서 172(285 ㎎, 80%)를 수득하였다. Rf=0.3(헥산:EtOAc 2:1).

실시예 100

반응 플라스크를 2 회 화염처리하고, 진공/아르곤으로 수 회 퍼징시키고 상기 반응을 아르곤 분위기 하에서 유지시켰다. 무수 CH₂Cl₂(118 ㎖) 중의 DMSO(977 ㎕) 용액에 트리플산 무수물(930 □ℓ, 5.5 밀리몰)을 -78 ℃에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 -78 ℃에서 20 분간 교반하였다. 이어서, 무수 CH₂Cl₂(주 첨가에 대해 26 ㎖, 및 세척에 대해 13 ㎖) 중의 172(2.63 g, 2.75 밀리몰) 용액을 캐뉼라를 통해 -78 ℃에서 가하였다(첨가 시간: 5 분). 첨가 중에 온도를 상기 두 플라스크 모두에서 -78 ℃에서 유지시키고 색상이 황색에서 갈색으로 변하였다. 상기 반응 혼합물을 -40 ℃에서 35 분간 교반하였다. 이 기간 동안 용액의 색상이 황색에서 짙은 녹색으로 변하였다. 이 시간 후에, iPr₂NEt(3.48 ㎖, 22 밀리몰)를 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 45 분간 유지시키고, 상기 용액의 색상이 이 기간 동안 갈색으로 변하였다. 이어서, t-부탄올(1.04 ㎖, 11 밀리몰) 및 3 급 부틸 테트라메틸 구아니딘(3.31 ㎖, 19.25 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 시간 후에, 아세트산 무수물(2.6 ㎖, 27.5 밀리몰)을 적가하고 반응 혼합물을 23 ℃에서 1 시간 더 유지시켰다. 이어서 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(70 ㎖)로 희석하고 NH₄Cl(180 ㎖), NaHCO₃(180 ㎖) 및 염화 나트륨(180 ㎖)의 수성 포화 용액으로 연속 세척하였다. 합한 유기 층들을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, 헥산:EtOAc 4:1, 3:1에서 2:1의 구배)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 173(1.145 g, 52%)을 수득하였다. Rf=0.31(헥산:EtOAc 3:2).

실시예 101

CH₂Cl₂(2 ㎖) 및 CH₃CN(2 ㎖) 중의 173(100 ㎎, 0.125 밀리몰) 용액에 NaI(75 ㎎, 0.5 밀리몰) 및 TMSCI(63 □ℓ, 0.5 밀리몰)를 0 ℃에서 가하였다. 반응물을 23 ℃에서 50 분간 교반한 후에, 혼합물을 물(30㎖)로 급냉시키고, CH₂Cl₂(2 x 20 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 상을 NaCl의 포화된 수용액(20 ㎖) 및 나트륨 디티오나이트(20 ㎖)로 연속적으로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하 에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO₂, EtOAc:헥산 1:4, 1:2에서 1:1의 구배)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 158(66 ㎎, 70%)을 수득하였다. Rf=0.21(헥산:EtOAc 1:1). 158의 실험 데이터는 상기 실시예 19에 개시되어 있다.

158의 35로의 변환은 상기 실시예 85에 개시되어 있다.

중간체 36, ET-770 및 ET-743을 PCT/GB00/01852에 선행된 것과 동일한 과정에 따라 제조하였다.

참고문헌

Claims

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하기 반응식에 따른 단일단계를 수행하여, 2개의 보호 그룹을 제거하여 구조식 35의 α-아미노락톤을 얻는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.

상기 반응식에서,

Prot^NH는 아미노 보호 그룹이고, Prot^OH는 하이드록시 보호 그룹이다.
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제 28 항에 있어서, 상기 Prot^NH는 t-부틸옥시카보닐이고, Prot^OH 는 메톡시메틸인 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 28 항에 있어서, 상기 Prot^NH는 t-부틸옥시카보닐이고, Prot^OH 는 메톡시에톡시메틸인 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 28 항에 있어서, 상기 구조식 35의 α-아미노락톤을 산화하여 구조식 36의 α-케토락톤을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 32 항에 있어서, 상기 구조식 36의 α-케토락톤을 피텟-스팽글러(pictet-spengler) 반응하여 입체특이성 구조를 갖는 화합물 Et770의 스피로테트라하이드로이소퀴놀린을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 33 항에 있어서, 상기 Et770의 C-21의 니트릴을 Et743의 하이드록시로 치환하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
다음 구조식 35의 α-아미노락톤을 산화하여 구조식 36의 α-케토락톤을 형성하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 35 항에 있어서, 상기 구조식 36의 α-케토락톤을 피텟-스팽글러(pictet-spengler) 반응하여 입체특이성 구조를 갖는 화합물 Et770의 스피로테트라하이드로이소퀴놀린을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 36 항에 있어서, 상기 Et770의 C-21의 니트릴을 Et743의 하이드록시로 치환하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
다음 구조식 36의 α-케토락톤을 피텟-스팽글러(pictet-spengler) 반응하여 입체특이성 구조를 갖는 화합물 Et770의 스피로테트라하이드로이소퀴놀린을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
제 38 항에 있어서, 상기 Et770의 C-21의 니트릴을 Et743의 하이드록시로 치환하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 에티나시딘 화합물의 제조방법.
다음 구조식 35로 표시되는 에티나시딘 화합물 제조를 위한 중간체.
다음 화학식 36으로 표시되는 에티나시딘 화합물 제조를 위한 중간체.