KR100774089B1

KR100774089B1 - 주입형 연골세포치료제의 이식방법

Info

Publication number: KR100774089B1
Application number: KR1020050066026A
Authority: KR
Inventors: 고창권; 이은영; 최정용; 장재덕; 장정호; 김평민
Original assignee: 세원셀론텍(주)
Priority date: 2005-07-20
Filing date: 2005-07-20
Publication date: 2007-11-06
Also published as: CN101247815A; MX2008000787A; HRP20110321T1; BRPI0520520A2; ATE501744T1; DE602005027004D1; KR20070010990A; WO2007011094A1; ES2361420T3; DK1912661T3; PT1912661E; RS51951B; EP1912661A4; SI1912661T1; JP2009501605A; US20090254065A1; EP1912661A1; EP1912661B1; PL1912661T3; CY1111563T1

Abstract

본 발명은 주입형 연골세포치료제의 이식방법에 관한 것이다.

본 발명은 이를 위해 동물 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 주사기의 선단 믹싱팁을 이용하여 상호 혼합하면서 연골손상부위에 주입하여 이식함을 특징으로 하고, 또한 본 발명은 바이알 1(Red)의 세포배양액 중 1ml을 멸균된 1mL 주사기 안으로 집어 넣은 후, 바이알 2(Blue)의 백색 또는 미황색의 동결건조분말(Fibrinogen)을 수직으로 한 상태에서 주사기의 바늘을 삽입하여 주입하여 10∼200mg/ml의 농도로 만드는 단계; 상기 바이알 1(Red)의 세포배양액 중 1ml을 주사기를 이용하여 백색 동결 건조 분말(Thrombin)이 들어있는 바이알 3(Red, small)에 수직으로 한 상태에서 주사기의 바늘을 삽입하여 서서히 붉은색 액체를 주입하는 단계; 1mL 주사기를 이용하여 바이알 3(Red, small)의 내용물 1mL중 0.1cc를 채취하여 바이알 4(yellow)의 바닥에 주입하여 1∼200IU/ml의 농도로 만드는 단계; 연골세포 현탁액 바이알 2개를 멸균된 1mL 주사기를 이용하여 전량을 바이알 4(yellow)에 넣고 주사기를 이용하여 2~3회 혼합하는 단계; 상기 바이알 2(Blue)의 내용물이 전부 용해된 것을 확인한 후, 1mL 주사기에 전량을 주입하는 단계; 상기 바이알 4(Yellow)의 잘 혼합된 세포 치료제를 1mL 주사기에 주입하는 단계; 및 상기 바이알 2(Blue)와 바이알 4(Yellow)의 내용물이 충진된 2개의 1mL 주사기를 거치대에 장착한 후 장착된 주사기에 스크류 팁(screw tip)을 장착하고, 이어서 주사 기의 선단 믹싱팁을 이용하여 상호 혼합하면서 동물의 연골손상부위에 주입하여 이식하는 단계;가 포함됨을 특징으로 한다.

상기와 같이 구성된 본 발명은 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 혼합하여 이식함으로써 기존의 골막이식에 대한 불편을 해소하고, 광범위한 범위의 결손과 심화된 골 관절염도 치료 가능하며, 간단한 시술 방법으로 환자의 부담을 줄일 수 있도록 한 것이며, 이로 인해 보다 빠르고 효과적으로 연골 생성을 도모할 수 있도록 하여 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 것이다.

주입, 이식, 연골세포치료제.

Description

주입형 연골세포치료제의 이식방법{Simple Method of Autologous Chondrocyte Transplantation ； Injectable Chondrocyte Transplantation}

도 1 은 종래 연골세포치료제의 이식 방법을 보인 사진.

도 2 는 본 발명에 적용된 주입가능한 연골세포치료제의 이식 방법을 보인

사진.

도 3 은 본 발명에 적용된 연골세포치료제의 이식 방법을 보인 사진.

도 4 는 본 발명에 적용된 주입가능한 연골세포치료제를 주사기를 이용하여

이식하는 방법을 보인 사진.

도 5 는 본 발명 주입가능한 연골세포치료제의 물성 사진.

도 6 은 본 발명의 실시예에 따른 개 연골재생 3개월 후의 사진.

도 7 은 본 발명 연골세포치료제의 개이식 8주 후의 전자현미경 사진.

도 8 은 본 발명 연골세포치료제의 개이식 12주 후의 전자현미경 사진.

도 9 는 본 발명의 실시예에 따른 개 연골조직의 12주 후의 사진.

도 10 은 본 발명 연골세포치료제의 조직학적 검사의 사진.

도 11 은 본 발명 연골세포치료제의 면역조직학 검사의 사진.

본 발명은 주입형 연골세포치료제의 이식방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 혼합하여 이식함으로써 기존의 골막이식에 대한 불편을 해소하고, 광범위한 범위의 결손과 심화된 골 관절염도 치료 가능하며, 간단한 시술 방법으로 환자의 부담을 줄일 수 있도록 한 것이며, 이로 인해 보다 빠르고 효과적으로 연골 생성을 도모할 수 있도록 하여 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 것이다.

주지하다시피 최근 분자 생물학, 세포 생물학, 발생 생물학 등의 생물학과 공학적 요소가 가미된 조직공학(tissue engineering)의 학문은 인간의 손상된 조직과 장기의 기능을 향상, 유지 및 회복을 가능하게 하는 대체제의 개발로 인간의 삶의 질과 건강을 향상시키는데 기여해 왔다.

상기한 조직공학은 조직 대체제로 특정한 세포를 기본으로 한 기질(matrix)과의 상호작용에 의하여 세포유착(cell adhesion), 성장(growth), 분화(differentiation), 시토킨(cytokine)과 성장인자(growth factor)의 활성을 조절하여 세포내 신호전달 물질을 분비하여 조직 대체물을 만들게 된다. 초기의 조직공학은 세포만을 이용하거나 세포가 생산한 기질 복합체 형태인 세포요법(cell therapy)이 주를 이루어 응용분야에서 많은 제약을 가지고 있어 한 차원 높은 조직 대체물의 개발이 시급한 상황이며, 세포와 기질(matrix)의 혼합 형태의 연골세포 치료제를 개발하였다.

그리고 관절의 불안정성과 반월상 연골의 부분적 결손은 관절면의 마모와 손상을 촉진시킨다는 사실은 입증되어 왔으며, 한번 손상된 관절 연골은 생체 내에서 정상적으로 재생되지 않으며 손상된 관절 연골에 대한 만성적인 자극은 관절통과 관절 운동의 점진적인 제한으로 결국엔 퇴행성관절염을 초래하게 된다. 생체 내에서 증식할 수 없는 연골 세포를 생체 외에서 배양조건을 맞추어 분화와 증식을 유도하여 관절을 재생하는데 효과적으로 사용될 수 있으며 이식된 연골 세포는 정상관절의 연골과 비슷한 조직학적, 기계적 성질을 얻게 되어 거부반응이나 조직파괴는 관찰되지 않고 90% 이상의 환자에게 좋은 결과를 보였다

한편, 자기유래연골세포이식술 (Autologous chondrocyte transplantation, ACT)는 관절 연골의 손상을 치료하는데 있어 효과적인 치료법이다. 여기에는 관절성형술(abrasion arthroplasty), 천공술 및 미세골절술(drilling and microfracture), 골막 및 연골막 이식술(autograft of periosteum and perichondrium)과 같은 다른 치료법은 섬유연골(fibrocartilage) 또는 섬유연골성 조직(fibrocartilaginous tissue)으로 대체되며 유리연골(hyaline cartilage)은 거의 생성되지 않는다. 하지만 종래의 다른 기술과 비교하여 자기유래연골세포 이식술(ACT)은 유리연골(hyaline cartilage)을 생성한다는 가장 중요한 장점을 가지고 있다.

이와 같은 우수한 장점에도 불구하고 자기유래연골세포 이식술(ACT)은 도 1 에 도시된 바와 같이 약간의 기술적인, 그리고 이론적인 어려움을 가지고 있다.

즉, 첫번째로 이 기술은 수술과정에 있어 골막(periosteum)을 채취하여야 하기에 수술부위에 많은 절개를 필요로 한다. 이러한 많은 절개는 수술 후 극심한 통증을 수반하며 무릎의 운동성을 감소시킨다.

두번째로 연골 결손 부위의 경계에 연골막(periosteal patch)을 봉합하는 과정은 매우 복잡한 수술 기술이며, 때때로 골막 과대증식(periosteal hypertrophy)과 관절내 유착(intra-articular adhesion) 등이 보고 되었다. 골막의 봉합과정은 수술과정에서 가장 많은 시간을 소비하는 과정이다.

다른 단점으로는 수술 후 무릎의 운동과 같은 재활과정 중 이식한 부위에서 연골세포가 누수 되는 경우가 있으며, 이식한 부위에서 액상에 존재하는 이식된 연골세포가 중력에 의해 한쪽으로 치우쳐 불균일한 분포로 균질하지 않은 연골의 성장을 초래한다는 것이다.

위에서 언급한 단점들을 해결하기 위하여, 운반체(carrier) 또는 주형(scaffold)으로 생분해성(biodegradable)과 생체적합성(biocompatible) 중합체(polymer)를 이용한 많은 연구들이 이루어져 왔다. 예를 들어 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin)과 같은 천연 폴리머(polymer)를 생체 물질로 이용하거나, 폴리락틱 엑시드(polylactic acid) 또는 폴리글리콜릭엑시드(polyglycolic acid)와 같은 합성 폴리머(polymer)를 이용하여 시험관(in vitro) 및 생체내(in vivo)에서 연골에 관한 많은 조직공학을 연구하고 있다.

주형(scaffold)은 세포의 성장 및 증식에 필요한 다공성 구조(pore structure) 및 연골세포의 표현형을 유지하는데 중요한 역할을 한다. 피브린(Fibrin) 및 히알루로닉산(hyaluronic acid)는 이러한 요건을 충족시키는 적합한 폴리머(polymer)이다. 피브린(Fibrin)은 천연 물질이며 연골세포 이식술에 있어 매우 적합한 생물학적인 운반체이다. 또한 생체적합성(biocompatibility), 생분해성(biodegradability), 그리고 subchondrol bone (구조적으로 연골과 인접한 뼈)에 결합할 수 있는 능력과 같은 장점들이 이미 보고되어 졌다. 게다가 피브린(fibrin) 구조물은 모양을 만들기가 쉽고 주입용으로 사용하기가 용이하다. 히알루로닉산(hyaluronic acid)는 무릎 연골의 윤활제로서 수분함량을 조절한다.

하지만 여전히 하나의 문제점이 남아있다. 대부분의 조직공학(tissue engineering)용 주형(scaffold)이 patch, sponge, sheet와 같은 고체형(solid type)이기에, 조직공학용 연골치료제는 인접한 정상 연골(native cartilage)에 결합하기가 힘들다. 이것은 결손부위에 이식된 치료제가 경계부분에서 불완전한 치유를 한다는 점에서 중요한 점이다.

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 제반 문제점을 해소하기 위하여 안출한 것으로, 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 혼합하여 이식함으로써 기존의 골막이식에 대한 불편을 해소하도록 함을 제1목적으로 한 것이고, 제2목적은 주입 가능한 연골세포치료제를 이식하는 순간 약 1~5분 내로 겔(GEL)화 되는 특성으로 인해 그 자리에서 편리하게 이식 가능하도록 한 것이며, 제3목적은 이식부위가 인접한 정상연골과 완전히 결합하게 할 수 있도록 함은 물론 광범위한 범위의 결손과 심화된 골 관절염도 치료가 가능한 것이고, 제4목적은 간단한 시술 방법으로 환자의 부담을 줄일 수 있도록 한 것이며, 제5목적은 이로 인해 보다 빠르고 효과적으로 연골 생성을 도모할 수 있도록 하여 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 주입형 연골세포치료제의 이식방법을 제공한다.

이러한 목적 달성을 위하여 본 발명은 동물 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 주사기의 선단 믹싱팁을 이용하여 상호 혼합하면서 연골손상부위에 주입하여 이식함을 특징으로 한다.

또한 본 발명은 DMEM 배양액, Ham`s F-12, DMEM/F-12, IMDM, McCoy`s 5A Medium, MEM, α-MEM, RPMI 1640, Leibovitz`s L-15 Medium, Eagle`s basal Medium으로부터 선택된 세포배양액 1㎖를 피브리노겐(Fibrinogen) 동결건조분말이 함유되어 있는 바이알에 주입하여 10∼200㎎/㎖ 농도의 피브리노겐 용액을 제조하는 단계(바이알 1); 상기 DMEM 배양액, Ham`s F-12, DMEM/F-12, IMDM, McCoy`s 5A Medium, MEM, α-MEM, RPMI 1640, Leibovitz`s L-15 Medium, Eagle`s basal Medium으로부터 선택된 세포배양액 1㎖를 트롬빈(Thrombin) 동결 건조 분말이 함유되어 있는 바이알에 주입하여 트롬빈 용액을 제조하는 단계(바이알 2); 상기 바이알 2의 트롬빈 용액 1㎖ 중 0.1㎖를 채취하여 연골세포가 함유된 세포배양액을 혼합하여 1∼200lU/㎖ 농도의 트롬빈 용액을 제조하는 단계(바이알 3); 상기 바이알 1의 피브리노겐 용액을 1㎖의 주사기에 충진하는 단계; 상기 바이알 3의 연골세포를 함유하는 트롬빈 용액을 별도의 1㎖ 주사기에 충진하는 단계; 및 상기 충진된 2개의 주사기를 거치대에 장착한 후 장착된 주사기에 스크류팁(screw tip)을 장착하고 이어서 주사기의 선단 믹싱팁을 이용하여 상호 혼합하면서 동물의 연골손상부위에 주입하여 이식하는 단계;가 포함됨을 특징으로 하는 주입형 연골세포치료제의 이식방법을 제공한다.

이하에서는 이러한 목적 달성을 위한 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면에 따라 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 적용된 주입형 연골세포치료제의 이식방법은 도 2 내지 도 12 에 도시된 바와 같이 구성되는 것이다.

하기에서 본 발명을 설명함에 있어, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략할 것이다.

그리고 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 설정된 용어들로서 이는 생산자의 의도 또는 관례에 따라 달라질 수 있으므로 그 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다.

본 발명은 동물 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 주사기의 선단 믹싱팁을 이용하여 상호 혼합하면서 연골손상부위에 주입하여 이식함을 특징으로 한다.

즉, 상기와 같은 본 발명은 주입 가능한 연골세포치료제를 이식하는 순간 약 1~5분 내로 겔(GEL)화 되는 특성으로 인해 그 자리에서 편리하게 이식 가능하도록 한 것이며, 이식부위가 인접한 정상연골과 완전히 결합하게 할 수 있도록 함은 물론 광범위한 범위의 결손과 심화된 골 관절염도 치료가 가능한 것이고, 간단한 시술 방법으로 환자의 부담을 줄일 수 있도록 한 것이며, 이로 인해 보다 빠르고 효과적으로 연골 생성을 도모할 수 있도록 한 것이다.

또한 본 발명은 다음과 같은 실시예로 본 발명 연골세포치료제를 주입하여 이식하는 방법을 제공하게 된다.

[실시예]

본 발명은 다음과 같은 순서에 의해 동물(개)의 연골세포를 이용하여 실험을 진행하였고 3개월 후 평가를 하였다. 즉, 도 2 에 도시된 바와 같이,

1. 연골 결손 부위 주변을 다듬고 크기를 측정한 후 다음을 실시한다.

2. Kit안의 내용물 중 바이알 1(Red)의 알루미늄 뚜껑을 제거하고 70% 알코올로 표면과 뚜껑을 닦는다. 이때 상기 바이알 1(Red)은 붉은색의 세포 배양액(세포배양액+hyaluronic acid+aprotinin+collagen type 2 등)이 들어 있다.

3. 바이알 2(Blue)의 알루미늄 뚜껑을 제거하고 70% 알코올로 표면과 뚜껑을 닦는다. 이때 상기 바이알 2(Blue)는 백색 혹은 미황색의 동결건조분말 (Fibrinogen)이 들어있는 무색 바이알이다.

4. 바이알 1(Red)의 내용물 중 1ml을 멸균된 1mL 주사기 안으로 집어 넣은 후, 바이알2(Blue)를 수직으로 한 상태에서 주사기의 바늘을 삽입한다. 이때 바늘 끝이 동결 건조물에 닿지 않도록 하고 바이알의 내벽을 따라 주입하지 말고 동결건조물 위에 직접 주입한다. 이때 바이알 2(Blue) 안의 동결 건조물이 전부 용해 될 때 까지 바이알을 손으로 감싸 가볍게 흔들어 녹인다.

5. 바이알 3(Red, small)의 알루미늄 뚜껑을 제거하고 70% 알코올로 표면과 뚜껑을 닦는다. 이때 상기 바이알 3(Red, Small)은 백색 동결 건조 분말(Thrombin)이 들어있는 무색 바이알이다.

6. 바이알 1(Red)의 용액 중 1㎖을 주사기를 이용하여 바이알 3(Red, small)을 수직으로 한 상태에서 주사기의 바늘을 삽입하여 서서히 붉은색 액체인 세포배양액을 주입한다.

7. 바이알 4(yellow)의 알루미늄 뚜껑을 제거하고 70% 알코올로 표면과 뚜껑을 닦은 후, 1㎖ 주사기를 이용하여 바이알 3(Red, small)의 내용물 1㎖중 0.1㎖를 채취하여 바이알 4(yellow)의 바닥에 주입한다.

8. 연골세포가 함유된 세포배양액 바이알 2개를 멸균된 1㎖ 주사기를 이용하여 전량을 바이알 4(yellow)에 넣고 주사기를 이용하여 2~3회 혼합한다.

9. 바이알 2(Blue)의 내용물이 전부 용해 된 것을 확인한 후, 1mL 주사기에 전량을 넣는다.

10. 바이알 4(Yellow)의 잘 혼합된 세포 치료제를 1mL 주사기에 넣는다.

11. 바이알 2(Blue)와 바이알 4(Yellow)의 내용물이 충진된 2개의 1mL 주사기를 Syringe 거치대에 장착한다.

12. 장착된 주사기에 screw 연결 tip을 장착한 후 Screw tip과 피스톤 지지대를 장착한다.

13. 조립이 완료 된 후 이식을 시작한다. 단, 주입시에는 되도록 멈추지 않고 한번에 이식을 마친다.

14. 이식이 완료 된 후 약 5분 정도 대기한 후 주변을 다듬는다.

상기한 결과 본 발명은 종래와 비교해 다음과 같은 결과를 얻게 되었다.

기존 ACT	개발한 ACT (Injectable 연골세포치료제)
액상의 주사제	Gel type (이식하는 순간 1분 5분 내로 gel 화 되는 특성으로 이식이 편리하며 모양을 만들기가 쉽다.)
연골세포 + 배양액	연골세포 + 생체적합물질
골막 이식 필요	골막 불필요 (최소한의 절개로 이식 가능)
연골 재생 능력 우수	진일보한 연골재생 능력
무릎 절개 필요(골막 채취 및 이식 시 suture의 이유로 15 cm 이상의 절개 필요)	최소한의 절개(5 cm)로 수술 가능 관절경으로도 수술 가능
Non-even distribution (액상에 세포가 부유하는 상태이기에 중력에 의한 한쪽으로의 쏠림 현상으로 불균형한 연골 재생 가능성이 있다.)	Even distribution (이식하는 순간 1분 5분 내로 gel 화 되는 특성으로 이식이 되는 순간 고른 분포를 띠며 그 상태에서 고른 연골 형성 능력을 보인다.)
Suture (수술 과정 중 가장 많은 시간을 소비 하며 과정도 복잡하다.)	No suture
Long Operation time	Short Operation time
Bleeding에 의한 fibrocartilage의 생성 가능	Bone wax로 bleeding control (거의 대부분 hyaline cartilage생성)
	기둥 생성 과정이 추가 (연골치료제 조성물 및 사용방법 참고)
	Defect 모양에 관계없이 이식 가능
	불완전한 surture로 인한 누수현상 제거
	Periosteum suture를 하지 않기에 체중부하의 시기 단축

한편, 상기 세포배양액은, DMEM 배양액 (Dulbecco`s Modified Eagle`s Medium)을 비롯한 Ham`s F-12, DMEM/F-12, IMDM (Iscove`s Modified Dulbecco`s Medium), McCoy`s 5A Medium, MEM (Minimum Essential Medium), -MEM, RPMI 1640, Leibovitz`s L-15 Medium, Eagle`s basal Medium과 같이 일반적으로 사용하는 세포 배양액이다.

그리고 상기 동결건조분말(Fibrinogen)은 10-200mg/ml가 바람직한 것으로, 이는 10mg/ml 이하일때는 matrix로서의 성질을 발현하기에 농도가 너무 낮고, 200mg/ml 이상일때는 용해 시 어려움이 따르며 점성이 매우 높아 사용하기 힘들어 상기 10-200mg/ml가 바람직하다.

또한 백색동결건조분말(Thrombin)은 1-200IU/ml가 바람직한 것으로, 이는 1IU/ml 이하일때는 fibrin을 형성하기에 농도가 너무 낮아 수분내에 gel 화 시킬수가 없고, 200IU/ml 이상일때는 혼합 즉시 고체화 되기에 injectable 치료제를 사용하기에 적절치 않아, 1-200IU/ml가 바람직하다.

또한 아프로티닌(Aprotinin)은 100-20,000KIU/ml가 바람직한 것으로, 이는 100KIU/ml 이하일때는 fibrin의 분해를 억제하는데 별 도움이 안되며, 20,000KIU/ml 이상일때는 세포독성을 나타낼 수 있어, 100-20,000KIU/ml가 바람직하다.

더하여 상기 히알루로닉산(Hyaluronic acid)은 0.01-2%(W/V)가 바람직한 것으로, 이는 0.01% 이하일때는 matrix로서의 역할이 충분치 않으며, 2% 이상일때는 구조적으로 fibrin의 결합작용에 영향을 미쳐 matrix의 강도, 경도에 영향을 미치므로, 0.01-2%(W/V)가 바람직하다.

또한 제 2형 콜라겐(Collagen type 2)은 50ug/ml - 1mg/ml가 바람직한 것으 로, 이는 50ug/ml이하에서는 역할이 충분치 않으며, 1mg/ml 이상일때는 특성상 fibrin의 결합작용에 영향을 미쳐 matrix의 강도, 경도에 영향을 미치므로, 50ug/ml - 1mg/ml가 바람직하다.

본 발명은 상기의 구성부를 적용함에 있어 다양하게 변형될 수 있고 여러 가지 형태를 취할 수 있다.

그리고 본 발명은 상기의 상세한 설명에서 언급되는 특별한 형태로 한정되는 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 오히려 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 정신과 범위 내에 있는 모든 변형물과 균등물 및 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

상기에서 상세히 살펴본 바와 같이 본 발명은 연골의 주성분을 이루는 콜라겐(collagen), 히알루로닉산(hyaluronic acid), 피브린(fibrin) 등의 기질(matrix)을 혼합하여 이식함으로써 기존의 골막이식에 대한 불편을 해소하도록 한 것으로, 특히 주입 가능한 연골세포치료제를 이식하는 순간 약 1~5분 내로 겔(GEL)화 되는 특성으로 인해 그 자리에서 편리하게 이식 가능하도록 한 것이며, 이식부위가 인접한 정상연골과 완전히 결합하게 할 수 있도록 함은 물론 광범위한 범위의 결손과 심화된 골 관절염도 치료가 가능한 것이고, 간단한 시술 방법으로 환자의 부담을 줄일 수 있도록 한 것이며, 이로 인해 보다 빠르고 효과적으로 연골 생성을 도모할 수 있도록 하여 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims

삭제
주입형 연골세포치료제의 이식방법에 있어서,

DMEM 배양액, Ham`s F-12, DMEM/F-12, IMDM, McCoy`s 5A Medium, MEM, α-MEM, RPMI 1640, Leibovitz`s L-15 Medium, Eagle`s basal Medium으로부터 선택된 세포배양액 1㎖를 피브리노겐(Fibrinogen) 동결건조분말이 함유되어 있는 바이알에 주입하여 10∼200㎎/㎖ 농도의 피브리노겐 용액을 제조하는 단계(바이알 1);

상기 DMEM 배양액, Ham`s F-12, DMEM/F-12, IMDM, McCoy`s 5A Medium, MEM, α-MEM, RPMI 1640, Leibovitz`s L-15 Medium, Eagle`s basal Medium으로부터 선택된 세포배양액 1㎖를 트롬빈(Thrombin) 동결 건조 분말이 함유되어 있는 바이알에 주입하여 트롬빈 용액을 제조하는 단계(바이알 2);

상기 바이알 2의 트롬빈 용액 1㎖ 중 0.1㎖를 채취하여 연골세포가 함유된 세포배양액을 혼합하여 1∼200lU/㎖ 농도의 트롬빈 용액을 제조하는 단계(바이알 3);

상기 바이알 1의 피브리노겐 용액을 1㎖의 주사기에 충진하는 단계;

상기 바이알 3의 연골세포를 함유하는 트롬빈 용액을 별도의 1㎖ 주사기에 충진하는 단계; 및

상기 충진된 2개의 주사기를 거치대에 장착한 후 장착된 주사기에 스크류팁(screw tip)을 장착하고 이어서 주사기의 선단 믹싱팁을 이용하여 상호 혼합하면서 동물의 연골손상부위에 주입하여 이식하는 단계;가 포함됨을 특징으로 하는 주입형 연골세포치료제의 이식방법.
제 2 청구항에 있어서,

상기 주사기의 바늘을 삽입하여 주입하는 단계는, 바늘 끝이 동결 건조물에 닿지 않도록 하고, 바이알의 내벽을 따라 주입하지 말고 동결 건조물 위에 직접 주입함을 특징으로 하는 주입형 연골세포치료제의 이식방법.
삭제