KR100764886B1

KR100764886B1 - 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를위한 약제의 제조를 위한 파모산 또는 그의 유도체들 중하나 또는 그의 동족체들 중 하나의 용도

Info

Publication number: KR100764886B1
Application number: KR1020027017421A
Authority: KR
Inventors: 갈로마리아그라지아; 시마마리아그라지아; 기오르기페브리지오; 틴티마리아오넬라; 피오베산파올라; 기라르디올란도
Original assignee: 시그마타우 인두스트리에 파르마슈티케 리우니테 에스.피.에이.
Priority date: 2000-06-23
Filing date: 2001-06-15
Publication date: 2007-10-09
Also published as: CZ20024123A3; JP2004501893A; BR0111933A; HK1058515A1; ITRM20000340A1; US20040029963A1; EP1301463A1; AU6942101A; ITRM20000340A0; AU784980B2; CN1185210C; WO2002000603A1; US20080293812A1; US20060205967A1; IT1317048B1; CA2412568A1; MXPA02012730A; PL360492A1; CN1449375A; SK18312002A3

Abstract

아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 하기 화학식 I의 파모산 또는 그의 유도체들 중 하나, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염들 중 하나의 용도를 개시한다:

화학식 I

상기 식에서,

그룹 R1 및 R5는 상세한 설명에 개시된 바와 같다.

아밀로이드 응집체, 침착, 파모산

Description

아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 파모산 또는 그의 유도체들 중 하나 또는 그의 동족체들 중 하나의 용도{USE OF PAMOIC ACID OR ONE OF ITS DERIVATIVES, OR ONE OF ITS ANALOGUES, FOR THE PREPARATION OF A MEDICAMENT FOR THE TREATMENT OF DISEASES CHARACTERISED BY DEPOSITS OF AMYLOID AGGREGATES}

본 발명은 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 파모산 또는 그의 유도체들 중 하나, 또는 그의 동족체들 중 하나, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염들 중 하나의 용도에 관한 것이다.

아밀로이드 침착과 신경세포의 세포골격 이상의 존재는 알쯔하이머 병(AD)의 가장 현저한 징후들이다. 초기 단계에서 주로 대뇌피질에 영향을 미치는 이들 2 개의 사건은, 마지막 병리 상태가 전체 중추 신경계에 영향을 미친다 할지라도, 그 자체로서 상기 질병의 개시에 필요 조건이며 충분 조건은 아니다(Chen M.(1998) Frontiers in Bioscience 3a, 32-37).

일반적으로, 아밀로이드 물질은 상기가 생성되는 단백질에 관계없이 직경이 7 내지 8 ㎚인 섬유로 구성되고, 콩고 레드에 대해 친화성이 있으며, 수용성이 아니라는 특징들을 갖는다. AD에서, 아밀로이드 섬유는 세포 외부, 대뇌의 세포내 공간 및 피질과 뇌막 소동맥의 중막에 축적되어, 3 개의 상이한 거시적인 이상, 즉 중심적인 아밀로이드 침착물의 존재 또는 달리 상기 침착물 주위의 신경 과정의 이상에 따라 상이한 노인성 반과 확산 반, 및 아밀로이드가 평활근 섬유와 내부 탄력판 사이의 동맥 벽 내로 침투하는 것을 나타내는 아밀로이드 혈관병증을 발생시킨다.

아밀로이드 및 나선형 필라멘트의 형성과 별도로, 매우 심각한 시냅스 희박화가 AD를 앓고 있는 환자의 피질에서 검출되었다. 신경세포 접촉의 약 80 내지 90%가 상기 질병의 최종 단계에서 파괴되며 이러한 이상은 치매와 실제적으로 병적인 상관성이 있다. 치매 경향의 분석 시, 아밀로이드는 상기 질병의 초기의 주요 이상이며, 신경세포 내 나선형 필라멘트는 신경세포의 고통에 대한 중간적인 표현으로, 상기 신경세포는 결국 그의 시냅스 접촉을 상실하여 지능의 퇴화에 대한 임상적인 효과를 생성시킴이 확실한 듯 하다.

지금까지 오직 응집체 형태에서만 독성으로서 간주되었던 특정 유형의 β 아밀로이드, βA_1-42의 가용성 형태가 알쯔하이머 환자의 기억 및 인식 기능의 점진적인 상실과 관련된다. 상기 질병의 초기 단계에서 생성되는 βA_1-42는 아세틸-CoA의 운반을 제공하고, 신경전달물질의 방출을 감소시키고, 시냅스 연결을 변형시키고, 상기 질병을 초래하는 콜린 결핍을 일으키는 ACh의 합성을 촉진시키는 피루베이트 데하이드로게나제의 활성을 억제한다(Hoshi M., Takashima A., Murayama M., Yasutake K., Yoshida N., Ishiguro K., Hoshino T., Imahori K.(1997) The Journal of Biological Chemistry 272:4, 2038-2041).

아밀로이드 섬유에 특정한 방식으로 결합하는 다수의 염료가 공지되어 있으며, 이들 중 가장 중요한 것은 콩고 레드(CR)이다(Lorenzo A. and Yankner B.A, 1994 PNAS 91; 12243-12247).

상기 염료는 아밀로이드 섬유의 복굴절의 증가를 일으키고 조직 중의 아밀로이드증의 진단적 검출을 용이하게 하는 상기 염료와 기질(섬유) 간의 특정한 상호작용을 지시하는 특징적인 환상 2 색성을 발생시킨다.

상기 β-아밀로이드 단백질(βA)은 상기 아밀로이드 단백질의 전구체(βAPP)에 대한 다수의 특정 효소들의 단백질 분해 작용으로부터 유래한다(Vassar R. et al. 1999 Science 286:735-740).

β-아밀로이드 단편이 신경독성 효과를 유도할 수 있는 기전은 복합적이다. 첫째로, 면역조직화학적 연구는 노인성 반에서 염증성 인터류킨(IL-1, IL-6), 보완 인자, 다른 염증성 인자 및 리소솜 하이드롤라제의 존재를 밝혔다. 상기 β-아밀로이드 단백질은 소교세포에 의한 IL-1, IL-6 및 IL-8의 합성과 분비를 자극하고 따라서 급성 염증의 세포독성 기전을 활성화시킬 수 있음이 입증되었다(Sabbagh, M.N., Galasko D., Thal J.L.(1997) Alzheimer's Disease Review 3, 1-19).

아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병들에는 알쯔하이머 병 이외에 다운 증후군, "네덜란드 형" 아밀로이드증과 관련된 유전성 뇌출혈, 만성 염증 과 관련된 아밀로이드증, 다발성 골수종 및 조혈성 B 림프구의 다른 혈액질환과 관련된 아밀로이드증, II 형 당뇨병과 관련된 아밀로이드증, 크로이츠펠트-야콥병, 게르스트만-스트라우슬러 증후군과 같은 프리온 질병, 쿠루 및 양 질병 진전병과 관련된 아밀로이드증이 포함된다.

그러나, 일반적으로 βA에 의해 야기된 손상을 하기와 같이 요약할 수 있다:

1. 아밀로이드생성의 이상;

2. 엑소세포독성으로의 신경세포의 취약성의 증가;

3. 저혈당성 손상으로의 신경세포의 취약성의 증가;

4. 칼슘 항상성의 이상;

5. 산화적 손상의 증가;

6. 염증 기전의 활성화;

7. 미세신경교의 활성화;

8. 리소솜 프로테아제의 유도;

9. tau 단백질 인산화의 이상;

10. 세포소멸의 유도;

11. 세포막에 대한 손상.

엄격한 이론적 관점으로부터, βA 유도된 손상의 감소는 하기의 상이한 치료학적 접근방법을 통해 다루어질 수 있다:

1. APP 대사를 변경(α 세크레타제의 증가 또는 β 및 γ 세크레타제의 감소)시키기 위해 세크레타제 억제제를 사용한 βA 생산의 감소;

2. βA 응집의 방지 또는 차단;

3. βA 소거의 증가;

4. 칼슘 항상성의 복원에 의한 βA의 신경독성 효과의 차단;

5. 유리 라디칼에 의해 생성된 세포독성의 방지;

6. 엑소세포독성의 방지;

7. 염증 반응에 의해 야기된 손상의 감소;

8. 변경된 구리-아연 평형의 보정;

9. 신경세포 세포소멸의 억제

(Sabbagh M.N., Galasko D., Thal J.L.(1997) Alzheimer's Disease Review 3, 1-19).

지금까지 알쯔하이머 병의 근원인 아밀로이드 생성 과정을 방지, 지체 또는 정지시킬 수 있는 특정한 요법이 존재하지 않고 있다.

실제로, 현재 상기 질병의 치료에 사용되는 요법은 오로지 징후적인 것이며 상이한 태양들에 대해 작용한다 하더라도 근본적으로는 오직 학습과 기억을 조절하는 신경전달물질 기전만을 방해한다. 가장 통상적으로 사용되는 분자들 중에는 가역적인 아세틸콜린에스테라제 억제제, 예를 들어 타크린, 도네제필 및 리바스티그민이 있다.

더욱 또한, 요즘에는 알쯔하이머 병의 진단에 이용할 수 있는 유일한 진단 장비가 행동검사와 임상 평가인 반면, 방사선 촬영 또는 신티그램 촬영 과정은 여전히 알쯔하이머 유형의 퇴행과 다른 퇴행성 현상을 정확하게 구별하는데 이용할 수 없으며, 이에 대한 정확한 이유는 적합한 모사의 결여이다.

알쯔하이머 병의 관리에서 만나게되는 어려움, 그의 중증도 및 그의 진단 곤란성은 상기 질병을 치유하거나 그의 과정을 지체시킬 수 있는 새로운 약물의 동정뿐만 아니라 그의 진단을 위한 방사선 사진 촬영 또는 신티그램 촬영 과정에 사용되는 화합물의 발견을 원하게 만든다.

따라서, 파모산, 또는 그의 유도체들 중 하나, 또는 그의 동족체들 중 하나, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염들 중 하나, 또는 문헌에 개시되고 공지된 상기 산의 유도체가 알쯔하이머 병 및 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료 및 예방에 잠재적으로 유효한 약물로 판명된 것은 놀라운 일이다.

이러한 발견과 관련하여, 파모산의 신규 유도체들이 발견되었으며, 하기에 개시되었고, 이들은 상기 언급한 질병의 치료에 잠재적으로 유효하고 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 약제의 제조에 유용한 약제인 것으로 판명되었다.

실제로, 하기 화학식 I의 파모산의 유도체들:

상기 식에서,

1. R1=R5= -COOCH₂C₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

2. R1=R5= -COOCH(CH₃)₂

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

3. R1=R5= -COOC₂H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

4. R1=R5= -COOC₆H₁₁

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

5. R1=R5= -COOCH₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

6. R1=R5= -COOC(CH₃)₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

가 특허 ES 432416에 개시되어 있고, 이들 화합물에 대한 용도는 개시되거나 청구되어 있지 않으며;

7. R1=R5= -CONHC₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

가 특허 JP 7138347에 나일론 섬유의 제조에 유용한 약제로서 개시되어 있고;

8. R1=R5= -CONH-CH(CH(CH₃)₂)-COOH

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

가 HIV-1 프로테아제의 억제제로서 문헌[Reetz, Manfred T. et al; Chem. Commun, (Cambridge)(1998), (19), 2075-2076]에 개시되어 있으며;

9. R1=R5= -COOH

R2=R4= -OCOCH₃

R3= -CH₂-

가 소염 활성을 갖는 약제로서 문헌[Poupelin, Jean Pierre; Eur. J. Med. Chem. -Chim. Ther. (1978), 13(4), 381-5]에 개시되어 있고;

10. R1=R5= -COOH

R2=R4= -OCOCH₂CH₃

R3= -CH₂-

가 특허 DE 1945254에 개시되어 있으며, 상기 특허는 상기 화합물의 스트렙토마이신과의 염이 결핵 치료제로서 그의 효과를 보다 오래 지속시킴을 진술하고;

11. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOC₆H₅

R3= -CH₂-

12. R1=R5= -H

R2=R4=

R3= -CH₂-

가 문헌[Dorogov, M.V.; Khim. Khim. Tekhnol. (1996), 39(4-5), 170-172]에 개시되어 있고, 이에 대한 용도는 지적되어 있지 않으며;

13. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOCH=CH₂

R3= -CH₂-

가 문헌[Kielkiewicz, Jedrzej, et al.; Polimery(Warsaw)(1984), 29(6), 216-19]에 개시되어 있고, 이에 대한 용도는 지적되어 있지 않으며;

14. R1=R5= -H

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

(상기 화합물은 1,1'-메틸렌-디(2-나프톨)이다)가 소염제 및 진통제로서 US 4,147,806에 개시되어 있다.

15. R1=R5= -COOH

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

(상기 화합물은 파모산이다)는 구충제(피란텔 파모에이트)로서 또는 암의 치료(옥트레오티드 파모에이트)에 사용되는 약물 중에 대이온으로서 유용한 약제로서 개시된다.

따라서, 본 발명의 목적은 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병 의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 하기 화학식 I의 파모산, 또는 그의 유도체들 중 하나, 또는 그의 동족체들 중 하나 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염들 중 하나의 용도이다:

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 동일하거나 상이할 수 있으며, COOR6, CONHR6, SO₂R6, SO₂NHR6, SO₃R6, OR6, COR6, NHR6, R6이고; 여기에서

R6는 H, 또는 R7에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된, 포화되거나 불포화된 알킬 쇄 또는 페닐이고; 여기에서

R7은 OH, COOH, SO₃H, NR8R9,

이고; 여기에서

R8 및 R9는 동일하거나 상이할 수 있으며, H, 탄소수 1 내지 5의 알킬이고;

R2 및 R4는 동일하거나 상이할 수 있으며, H, OH, NHR6, OCO-R10-NR8R9,

이고; 여기에서

R10은 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된, 포화되거나 불포화된 알킬 쇄이고;

R3은 -[CH₂]_n-, -CH₂-O-, -CH(R11)-이고; 여기에서

n은 1 내지 4의 정수이고,

R11은 아미노 그룹, 알킬아미노 C₁-C₅, 디알킬아미노 C₁-C₅, OH, 알킬옥시 C₁-C₅에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된 알킬이다.

화학식 I의 화합물들 중에서 바람직한 것은 파모산, 특히 나트륨 파모에이트이다.

본 발명의 추가의 목적은 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 진단을 위한 진단 키트의 제조를 위한 상기 화학식 I 화합물의 용도이다.

실제로, 본 발명에 따른 화합물은 그의 분자 구조 내에 진단 영상 과정에 통상적으로 사용되는 원소들의 원자를 함유할 수 있다. 예를 들어, 탄소, 수소, 질소, 산소, 요오드 및 인듐의 방사성 동위원소들을 상기 화합물의 분자 구조 내에 도입시킬 수 있다. 보다 정확하게는, 화학식 I의 화합물은 그 자신의 분자 구조에 상응하는 방사성 동위원소로 치환된 탄소, 수소, 질소, 산소 원소들 중 하나 이상을 갖거나; 또는 하나 이상의 방사성 요오드의 원자를 갖거나; 또는 방사성 인듐 과의 착체 형태일 수 있다.

상기와 같은 동위원소들은 PET(양전자 방출 단층 촬영), SPECT(단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영) 및 2 차원 신티그램 촬영과 같은 기법에 유용하다. 한편으로, 본 발명에 따른 화합물은, 상기가 방사성 동위원소 또는 방사선 불 투과성 물질(예: 요오드)로서 유용한 원소들의 원자를 함유하든지 혹은 함유하지 않든지 간에, 진단 영상 기법에 통상적으로 사용되는 원소들, 예를 들어 가돌리늄(NMR) 및 테크네슘(신티그램 촬영 기법)에 대한 착화제로서 사용될 수 있다.

이러한 진단 용도를 기본으로, 본 발명에 따른 화합물은 또한 상기 나타낸 질병들의 예방에 유용하다.

본 발명의 추가의 목적은 하기 화학식 I의 신규 화합물이다:

화학식 I

상기 식에서,

R7은 OH, COOH, SO₃H, NR8R9,

이고; 여기에서

이고; 여기에서

R3은 -[CH₂]_n-, -CH₂-O-, -CH(R11)-이고; 여기에서

n은 1 내지 4의 정수이고,

R11은 아미노 그룹, 알킬아미노 C₁-C₅, 디알킬아미노 C₁-C₅, OH, 알킬옥시 C₁-C₅에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된 알킬이나; 단

치환체 R1, R2, R3, R4 및 R5는

1. R1=R5= -COOCH₂C₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

2. R1=R5= -COOCH(CH₃)₂

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

3. R1=R5= -COOC₂H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

4. R1=R5= -COOC₆H₁₁

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

5. R1=R5= -COOCH₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

6. R1=R5= -COOC(CH₃)₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

7. R1=R5= -CONHC₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

11. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOC₆H₅

R3= -CH₂-

12. R1=R5= -H

R2=R4=

R3= -CH₂-

13. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOCH=CH₂

R3= -CH₂-

14. R1=R5= -H

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

15. R1=R5= -COOH

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

가 아니다.

본 발명의 추가의 목적은 R6가 H인 화학식 I의 화합물을 할로겐화제, 예를 들어 SOCl₂ 또는 PCl₅로 처리하여 상응하는 아실 클로라이드를 수득하고, 이어서 25 내지 60 ℃ 범위의 온도에서 2 내지 24 시간 범위의 시간 동안 교반하면서 R6-OH 알콜과 1 대 6의 몰비로 반응시키거나 또는 화학량론적 양의 R6-OH와 함께 불활성 무수 용매, 예를 들어 디메틸포름아미드 중에서 반응시킴을 특징으로 하는, 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법이다:

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 -COOR6이고,

R2, R3, R4 및 R5는 상기 정의한 의미를 갖는다.

본 발명의 추가의 목적은 R6가 H인 화학식 I의 화합물을 할로겐화제, 예를 들어 SOCl₂ 또는 PCl₅로 처리하여 상응하는 아실 클로라이드를 수득하거나, 또는 커 플링제, 예를 들어 DCC, EEDQ로 처리하고, 이어서 25 내지 60 ℃ 범위의 온도에서 2 내지 24 시간 범위의 시간 동안 교반 하에 R6-NH₂ 아민과 6 대 1의 몰비로 반응시키거나 또는 화학량론적 양의 R6-NH₂와 함께 불활성 무수 용매 중에서 반응시킴을 특징으로 하는, 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법이다:

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 CONHR6이고,

R2, R3, R4 및 R6은 상기 정의한 의미를 갖는다.

본 발명의 추가의 목적은 하기 반응식 1에 따라 수행함을 특징으로 하는 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법으로, 반응식 1에서 화학식 "a"의 화합물을 R11-COH 알데히드와 빙초산 중에서 90 내지 150 ℃ 범위의 온도에서 반응시켜 화학식 "b"의 화합물을 수득하고, 이어서 상기 화학식 "b"의 화합물을 할로겐화제, 예를 들어 SOCl2 또는 PCl5로 처리하여 상응하는 설포닐 클로라이드를 수득하고, 이어서 R6-OH 알콜과 반응시켜 화학식 "d"의 화합물을 수득하거나, 또는 R6-NH₂ 아민과 반 응시켜 화학식 "e"의 화합물을 수득한다:

화학식 I

상기 식에서,

R2 및 R4는 OH이고;

R1 및 R5는 SO₃R6, SO₂NHR6이고;

R3는 -CH(R11)-이고; 이때

R11은 상기 정의한 의미를 갖는다.

본 발명의 추가의 목적은 하기 반응식 2에 따라 수행함을 특징으로 하는 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법으로, 반응식 2에서 화학식 A의 화합물을 산 환경, 예를 들어 아세트산 중에서 R11-CHO 알데히드와 반응시켜 화학식 B, C 및 D에 상응하는 화합물들의 혼합물을 수득하고, 이들을 크로마토그래피에 의해 분리 및 정제시키고, 이들 화합물을 염기의 존재 하에서 알킬 할라이드 R6-X와 반응시키고 이어서 산 또는 염기 환경 하에서 탈보호시켜 상응하는 나프틸 에테르 E, F 및 G를 수득하고, 이들을 황산 중에서 NaNO₂로 처리한 후에 화합물 H, I 및 L을 수득한다:

화학식 I

상기 식에서,

R1, R2, R4 및 R5는 OR6 및/또는 NHR6이고;

R3는 -CH(R11)-이고, 이때

R6 및 R11은 상기 정의한 의미를 갖는다.

PG=보호 그룹(예: 아세틸, 토실)

본 발명의 추가의 목적은 유효 성분으로서 하기 화학식 I의 화합물, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제 및/또는 희석제를 함유하는 약학 조성물이다:

화학식 I

상기 식에서,

R1, R2, R3, R4 및 R5는 상기 정의한 의미를 가지나, 단

R1, R2, R3, R4 및 R5는

1. R1=R5= -COOCH₂C₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

2. R1=R5= -COOCH(CH₃)₂

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

3. R1=R5= -COOC₂H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

4. R1=R5= -COOC₆H₁₁

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

5. R1=R5= -COOCH₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

6. R1=R5= -COOC(CH₃)₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

7. R1=R5= -CONHC₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

11. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOC₆H₅

R3= -CH₂-

12. R1=R5= -H

R2=R4=

R3= -CH₂-

13. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOCH=CH₂

R3= -CH₂-

14. R1=R5= -H

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

15. R1=R5= -COOH

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

가 아니다.

본 발명을 추가로 예시하는 다수의 실시예들을 하기에 제공한다.

실시예 1

(2R)-2-(아세틸옥시)-4-({3-카복시-1-[(3-카복시-2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2- 나프틸}옥시)-N,N,N-트리메틸-4-옥소-1-부탄아미늄 클로라이드(ST1722)의 제조

아세틸 L-카르니틴 클로라이드 2.39 g(0.01 몰), 무수 CH₂Cl₂ 2 ㎖ 및 염화 티오닐 1.1 ㎖(0.015 몰)의 용액을 주변 온도에서 4 시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류 고체를 무수 CH₂Cl₂로 3 회 세척하였다. 오일, 즉 아세틸 L-카르니틴 클로라이드의 아실 클로라이드를 수득하고 이를 그 자체로서 다음 단계에 사용하였다.

아세틸 L-카르니틴 클로라이드의 아실 클로라이드 2.58 g(0.01 몰), 파모산 3.88 g(0.01 몰) 및 N-메틸-2-피롤리디논 10 ㎖의 현탁액을 하룻밤동안 교반시켰다. 에틸 에테르로 침전시킨 후에, 황색 고체(7 g)를 수득하였다. 상기와 같이 수득된 조 생성물을 실리카겔 컬럼 상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켜 먼저 CH₂Cl₂-MeOH(90:10)로 용출시켜 반응되지 않은 파모산을 수거하고 이어서 CH₂Cl₂-MeOH(85:15)로 용출시켜 생성물을 수거하였다. 용매를 제거한 후에 (2R)-2-(아세틸옥시)-4-({3-카복시-1-[(3-카복시-2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-N,N,N-트리메틸-4-옥소-1-부탄아미늄 클로라이드 1.2 g을 수득하였다.

수율=19.7%, 융점=185 ℃(분해), [α]_D ²⁰=-17.5°,

¹H NMR(DMSO, 300 MHz), δ 7.1-8.5(m, 10H, H-Ar), 5.50(m, 1H, -C-CH-C-N), 4.76(s, 2H, Ar-CH ₂ -Ar), 3.70(m, 2H, -CH ₂ -N), 3.11(s, 9H, -N-CH ₃ ), 2.85(m, 2H, -CH ₂ -COO-), 2.01(s, 3H, CH ₃ -COO-).

K.F.=1.4%

C₃₂H₃₂NO₉Cl에 대해 계산되고 존재하는 물의 양에 대해 보정된 C,H,N 값: C, 63.00; H, 5.29; N, 2.30; 실측치 C, 60.45; H, 5.83; N, 2.87.

실시예 2

(2R)-2-(아세틸옥시)-4-({1-[(2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-N,N,N-트리메틸-4-옥소-1-부탄아미늄 클로라이드(ST1745)의 제조

아세틸 L-카르니틴 클로라이드 2.39 g(0.01 몰), 무수 CH₂Cl₂ 2 ㎖ 및 염화 티오닐 1.1 ㎖(0.015 몰)의 용액을 주변 온도에서 4 시간 동안 교반하였다. 용매 를 제거하고 잔류 고체를 무수 CH₂Cl₂로 3 회 세척하였다. 오일, 즉 아세틸 L-카르니틴 클로라이드의 아실 클로라이드를 수득하고 이를 그 자체로서 다음 단계에 사용하였다.

CH₃CN(5 ㎖) 중의 아세틸 L-카르니틴 클로라이드의 아실 클로라이드 2.58 g(0.01 몰) 용액에 1,1'-메틸렌-디(2-나프톨)(ST1859) 3 g(0.01 몰)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 에틸 에테르로 침전시킨 후에 조 생성물을 수득하였다. 상기 생성물을 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에서 건조시키고 실리카-겔 크로마토그래피(9:1 CH₂Cl₂/MeOH 혼합물)에 의해 정제시켰다. TLC에 의해 조절된, 생성물을 함유하는 분획들을 합하였다. 용매를 제거하여 (2R)-2-(아세틸옥시)-4-({1-[(2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-N,N,N-트리메틸-4-옥소-1-부탄아미늄 클로라이드(ST1745) 2 g(0.0038 몰)을 수득하였다.

수율=38%

¹H NMR(DMSO, 300 MHz), δ 10.05(s, 1H, -OH), 7.15-8.3(m, 12H, H-Ar), 5.55(m, 1H, -C-CH-C-N), 4.65(s, 2H, Ar-CH ₂ -Ar), 3.6-3.9(m, 2H, -CH ₂ -N), 3.10(s, 9H, -N-CH ₃ ), 2.95(m, 2H, -CH ₂ -COO-), 2.00(s, 3H, CH ₃ -COO-)

K.F.=4.4%

C₃₀H₃₂NO₅Cl에 대해 계산되고 존재하는 물의 양에 대해 보정된 C,H,N 값: C, 69.02; H, 6.18; N, 2.68; 실측치 C, 68.6; H, 6.3; N, 2.61.

실시예 3

2-({1-[(2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-2-옥소에탄아미늄 클로라이드(ST1913)의 제조

톨루엔 2 ㎖ 중의 N-(3급-부톡시카보닐)-글리신(BOC-GLY-OH) 2 g(0.011 몰) 용액에 KOH 0.62 g(0.011 몰) 및 H₂O 2 ㎖을 가하였다.

혼합물을 물을 제거하기 위해서 공비 증류(150 ℃)시켰다. 수득된 용액을 0 ℃에서 냉각시키고, 이소부탄올 0.85 ㎖, N-메틸-모르폴린 11 ㎕(d=0.92, 0.1 밀리몰) 및 이소부틸 클로로포르메이트 1.68 ㎖(d=1.044, 0.0128 몰)을 가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다.

후속적으로, H₂O 15 ㎖ 중의 1,1'-메틸렌-디(2-나프톨)(ST1859) 1.65 g(0.0055 몰) 및 KOH 0.62 g 용액을 제조하였다. 상기와 같은 용액을 반응 혼합물에 가하고 실온에서 교반하였다. 1 시간 후에 pH를 HCl 3N으로 3으로 조절하고 상들을 분리시켰다. 유기 상인 톨루엔을 H₂O 20 ㎖로 추출하고 NaOH 3N으로 pH 9 로 조절하고, 중성으로 될 때까지 H₂O로 세척하였다. 분리된 유기 상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 용매를 제거하여 조 생성물을 수득하였다. n-헥산/에틸 아세테이트(8:2)로 재결정시킨 후에 생성물 0.2 g을 수득하고 이를 3급-부톡시-카르코닐 가수분해를 위해 트리플루오로아세트산 1 ㎖에 용해시켰다. 20 분 후에 고체 침전물을 수득하고 이를 여과하고 n-헥산/디에틸 에테르(8:2)의 혼합물로 세척하였다. 수득된 생성물을 메탄올에 용해시키고 MeOH 100 ㎖로 용출시키면서 A21/Cl-수지에 통과시켜 2-({1-[(2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-2-옥소에탄아미늄 클로라이드(ST1913) 60 ㎎을 수득하였다.

¹H NMR(DMSO, 300 MHz), δ 9.6(s, 1H, -OH), 8.7(s, 3H, -NH ₃ ), 7.2-8.4(m, 12H, H-Ar), 4.7(s, 2H, Ar-CH ₂ -Ar), 3.72(s, 2H, C-CH ₂ -N).

K.F.=1.2%

C₂₃H₂₀NO₃Cl에 대해 계산되고 존재하는 물의 양에 대해 보정된 C,H,N 값: C, 70.14; H, 5.12; N, 3.56; 실측치 C, 69.1; H, 5.4; N, 3.3.

실시예 4

2-({4-[(3-{[2-(디에틸암모니오)에톡시]카보닐}-2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-3-하 이드록시-2-나프토일}옥시)-N,N-디에틸에탄아미늄 디클로라이드(ST1800)의 제조

파모산(ST1641) 3.88 g(0.01 몰)을 염화 티오닐 4.36 ㎖(0.06 몰)에 현탁시키고 80 ℃에서 5 시간 동안 환류시켰다. 끝에서 용매를 진공 하에 제거하고 잔사를 디에틸 에테르로 세척하였다. 수득된 아실 클로라이드를 CH₂Cl₂ 30 ㎖에 현탁시키고 N,N-디에틸 에탄올 0.7 ㎖을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 끝에서 백색 고체를 수득하고 이를 여과하고 n-헥산/에틸 아세테이트(8:2)의 혼합물로 세척하여 2-({4-[(3-{[2-(디에틸암모니오)에톡시]카보닐}-2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-3-하이드록시-2-나프토일}옥시)-N,N-디에틸에탄아미늄 디클로라이드(ST1800) 0.5 g을 수득하였다.

¹H NMR(CDCl₃, 300 MHz), δ 10.05(s, 2H, -OH), 7.1-8.4(m, 10H, H-Ar), 4.85(s, 2H, Ar-CH ₂ -Ar), 4.55(t, 4H, -O-CH ₂ -CH₂-N), 3.0(t, 4H, -O-CH₂-CH ₂ -N), 2.75(m, 8H, -N-CH ₂ -CH₃), 1.0(t, 12H, -N-CH₂-CH ₃ ).

K.F.=0.8%

C₃₅H₄₄N₂O₆Cl₂에 대해 계산되고 존재하는 물의 양에 대해 보정된 C,H,N 값: C, 63.72; H, 6.72; N, 4.24; 실측치 C, 63.5; H, 5.87; N, 4.6.

실시예 5

β-아밀로이드 _25-35 펩티드에 대한 나트륨 파모에이트(ST1641)의 항응집 효과에 대한 평가

나트륨 파모에이트 2 mM 및 포스페이트 완충액 200 mM(pH 5)로 이루어진 용액 250 ㎕에 βA_25-35 2mM(촉매 Bachem n°H-1192.0001) 수용액 250 ㎕을 가하였다. 따라서 나트륨 파모에이트 1 mM, βA_25-35 1 mM 및 포스페이트 완충액 100 mM(pH 5)의 용액 500 ㎕를 수득하였다.

동일한 과정을 나트륨 파모에이트가 존재하지 않는 대조용 샘플에 대해 수행하였다.

주변 온도에서 24 시간 후에, 상기 샘플과 대조군을 12000 rpm에서 20 분 동안 원심분리시켜 상등액으로부터 침전된 고체를 분리시켰다. 상기 침전된 고체에 물 250 ㎕를 가하였다. 주변 온도에서 3 시간 후에 샘플들을 다시 12000 rpm에서 20 분 동안 원심분리시켰다. 원심분리시킨 후에, 대조군과 달리 상기 샘플에서 어떠한 고체도 발견되지 않았다. 상기 결과는 나트륨 파모에이트에 의한 피브릴 중의 βA_25-35 펩티드의 완전한 응집 억제를 입증하였다.

실시예 6

β-아밀로이드 _1-42 펩티드에 대한 나트륨 파모에이트(ST1641)의 항응집 효과에 대한 평가

βA_1-42 펩티드에 대한 나트륨 파모에이트의 항응집 효과를 하기 과정에 따라 티오플라빈 T 결합을 측정함으로써 평가하였다.

0.22 mM 농도의 βA_1-42 펩티드(촉매 Bachem n°H-1368.0500)를 37 ℃에서 트리스 완충액 100 mM(pH 7.4) 중에서 단독으로 또는 나트륨 파모에이트의 존재 하에서 5 일간 배양하였다. 펩티드 대 나트륨 파모에이트의 몰비는 일반적으로 1:8, 1:4 및 1:2이었다.

상기 용액을 13000 rpm에서 5 분간 원심분리시키고 상등액을 제거하였다. 침전물을 H₂O 500 ㎕로 세척하고 13000 rpm에서 5 분간 원심분리시켰다. 침전물에서 피브릴 형태의 응집체가 글리신-NaOH 완충액 50 mM(pH 9.4) 중에 용해된 티오플라빈 T(ThT) 2 μM 600 ㎕에 의해 검출되었다. 5 분 배양 후에 샘플 500 ㎕를 수정 큐벳으로 옮기고 분광광도형광계에서 420 ㎚ 여기 및 480 ㎚ 방출에서 형광 신호를 측정하였다. 이러한 조건에서 상기 형광신호는 아밀로이드 응집체의 양에 비례한다(Le Vine, Methods in Enzymology, vol. 309 pp 274-284).

상기 실험에서 나트륨 파모에이트는 피브릴 형태의 βA_1-42 응집체의 형성을 일정하고 용량 의존적으로 감소시킬 수 있음이 입증되었다. 상기 효과는 현저하며 그 감소는 대조군에 비해 70% 정도에 달한다.

피브릴 형성의 억제를 또한 배양 시간의 함수로서 측정하였다. 1 내지 5 일간 배양 진행 시 나트륨 파모에이트는 티오플라빈 T 결합의 감소에서 점진적인 효능의 증가를 나타내었다.

실시예 7

β-아밀로이드 _1-42 펩티드에 대한 ST 화합물들의 항응집 효과에 대한 평가

βA_1-42 중합을 방해할 수 있는 ST1641, ST1722, ST1859, ST1745, ST1800, ST1913의 능력을 하기 과정에 따라 티오플라비나 "T" 결합 분석을 사용하여 평가하였다(M.A. Findeis, S.M. Molineaux; Methods in Enzymology 309, 487-488(1999)): βA_1-42 펩티드(1 ㎎/㎖)를 H₂O/CH₃CN(1:1)에 용해시키고, 동결건조시키고, DMSO + PBS에 용해시키고 37 ℃에서 8 일간 배양하였다. 이어서 펩티드를 초음파처리하고 PBS(1:5)에 용해시켰다. 96 웰 플레이트를 βA_1-42(40 ㎕/웰)과 ST 시험 화합물(50 ㎕/웰, 농도 0.8 내지 100 μM)의 용액을 사용하여 준비하였다. 응집되지 않은 βA_1-42 50 ㎕를 가하고 15 분 후에 각 웰과 플레이트를 교반하면서 37 ℃에서 밤새 배양하였다. 이어서 티오플라비나 "T"(10 μM) 및 Na₂HPO₄ x 2H₂O(50 μM) 용액(pH 6.5)을 함유하는 반응 혼합물 200 ㎕를 각 웰에 가하였다. 96 웰 형 광측정 플레이트 판독기를 사용하여 60 초 내에 450 ㎚의 여기 및 482 ㎚의 방출에서 형광성을 측정하였다. 상기 실험 조건에서 형광측정치는 βA_1-42 중합된 펩티드의 양과 관련되었다.

표 1은 ST 시험된 화합물들의 DE₅₀ 값들을 나타낸다.

화합물	DE₅₀(μM)
ST1641	38.2
ST1745	90.3
ST1859	5.4
ST1745	8.0
ST1800	>50
ST1913	7.8

실시예 8

나트륨 파모에이트(ST1641)에 의한 피브릴 형태의 예비형성된 β-아밀로이드 _1-42 의 응집체의 용해

본 실험을 하기 과정에 따라, 앞서 응집시킨 βA_1-42 펩티드에 대한 나트륨 파모에이트의 항응집 능력을 평가하기 위해서 수행하였다.

βA_1-42 펩티드를 실시예 6에 개시된 조건 하에 37 ℃에서 48 시간 동안 응집시켰다. 나트륨 파모에이트를 가하였다(펩티드:파모에이트 비 1:8).

상기 조건 하에서, 나트륨 파모에이트는 티오플라빈 T 결합의 감소에 대단히 활성임이 입증되었다.

나트륨 파모에이트와의 배양은 나트륨 파모에이트 없이 배양된 대조군에 비 해 형광성을 70% 감소시켰다.

이러한 결과는 나트륨 파모에이트가 βA_1-42의 섬유 구조에 대해 후천적인 항응집 효과를 발휘할 수 있음을 입증한다.

실시예 9

나트륨 파모에이트(ST1641)에 의해 유도된 트립신 절단에 대한 β-아밀로이드 _1-42 펩티드의 내성의 감소

βA_1-42 펩티드를 NaOH 0.1 M 15 ㎕로 용해시켰다. 상기 용액을 트리스 완충액 100 mM 15 ㎕로 pH 7.4로 만들고 여기에 완충액 30 ㎕을 단독으로 또는 나트륨 파모에이트를 함유하는 완충액 30 ㎕를 가하였다. βA_1-42 펩티드의 최종 농도는 0.22 mM이었으며, 나트륨 파모에이트의 최종 농도는 0.055 내지 1.76 mM의 범위였고, 따라서 βA_1-42 펩티드:나트륨 파모에이트의 비는 4:1 내지 1:8의 범위였다.

상기와 같이 제조된 샘플을 37 ℃에서 5 일간 배양하였고; 이러한 조건 하에서 형성된 βA_1-42 펩티드는 피브릴의 형태로 응집하여 그의 구조가 랜덤 코일에서 β-시트로 변한다(Zagorski M.G. et al. 1999 "Methodological and Chemical Factors Affecting Amyloid β Peptide Amyloidogenicity" Methods in Enzymology 309:189-204). 5 일의 배양 후에, 트립신(Merck) 24 ㎍을 각 샘플에 가하고 13000 rpm에서 1 분간 교반하고 원심분리시키고; 이어서 샘플들을 37 ℃에서 1 시 간 동안 배양시켰다.

상기 기간이 경과했으면, 혼합물을 13000 rpm에서 5 분간 원심분리시켜 상등액 50 ㎕를 제거하고 침전물을 HCOOH 40 ㎕ 및 0.1%의 트리플루오로아세트산(TFA)을 함유하는 H₂O 10 ㎕로 용해시켰다.

이 시점에서 샘플은 정량적인 HPLC 분석이 용이하였다. 나트륨 파모에이트와 배양한 샘플의 HPLC 프로파일을 펩티드 단독에 의해 수득된 것과 비교하여 βA_1-42 펩티드를 정량분석하였다.

상술한 조건 하에서 트립신은 βA_1-42 펩티드의 30 내지 50%를 가수분해시킬 수 있었다. βA_1-42의 트립신 가수분해는 나트륨 파모에이트에 의해 최고 용량(펩티드:파모에이트 비 1:8)에서 50% 이상 및 최저 용량(1:4)에서 40% 이상까지 증가하였다.

실시예 10

β-아밀로이드 _25-35 에 의해 유도된 신경독성의 나트륨 파모에이트(ST1641) 억제

나트륨 파모에이트의 잠재적인 신경보호 활성을 입증하기 위해서, 임신 16 내지 18 일째의 래트 태아 뇌의 현미해부에 의해 수득된 1 차 피질 신경 배양액을 사용하였다. 상기 대뇌 조직을 송아지 태아 혈정의 존재 하에서 배양하고 글리아 증식을 상기 배양 배지에 3 일 및 5 일 째에 세포 분열 저지제인 시토신 아라비노 사이드를 가하여 억제시켰다(Andreoni et al. 1997 Exp. Neurology 148:281-287). 상기 세포 배양액을 나트륨 파모에이트의 존재 또는 부재 하에서 5 내지 7 일간 βA_25-35 펩티드에 노출시켰다. 상기 신경보호 작용을 상기 신경독성제에 대한 나트륨 파모에이트의 작용 특이성과 그의 유효한 항응집 활성을 입증하기 위해서 카인산에 의해 유도된 신경독성 조건 하에서 평가하였다. 세포를 퇴행에 대해 보호하는 나트륨 파모에이트의 능력을 또한 상기 배양 배지에서 송아지 태아 혈청의 부재 하에 배양된 신경 세포에서 평가하였다. 이 경우, 시딩 후 24 시간째에 배지를 혈청 없이 글루타민, 인슐린, 트랜스페린, 푸트레신, 프로제스테론, 나트륨 셀레나이트 및 Hepes를 함유하는 것으로 대체하였다.

실험 과정

소뇌 피질의 신경세포의 1 차 배양액을 임신 16 내지 18 일째의 래트 태아 뇌로부터 취하여 송아지 태아 혈청에서 배양하였다. 배양 3 및 5 일째에, 글리아 증식을 세포 분열 저지제로서 시토신 아라비노사이드를 사용하여 억제하였다.

상기 배양액을 시딩 후 5 내지 7 일로부터 25 내지 50 μM 농도의 βA_25-35 펩티드에 노출시켰다.

βA_25-35 펩티드를 상기 펩티드와 동몰 농도 또는 이보다 낮은 농도의 나트륨 파모에이트와 함께 상기 배양액에 가하였다.

신경독성에 대한 보호를 비색측정 방법 및 상 분석기를 사용하는 농도측정 분석을 사용하여 평가하였다.

수득된 결과는 나트륨 파모에이트가 βA_25-35에 의해 유도된 독성에 대해 완전한 보호를 제공할 수 있음을 나타낸다. 수득된 결과를 표 2에 나타낸다.

대조군	βA_25-35 50 μM	나트륨 파모에이트 25 μM	나트륨 파모에이트 25 μM + βA_25-35 50 μM
% S	% S	% S	% S
100	16	88	100
% S: 생존율

실시예 11

K ⁺ 결핍에 의해 유도된 소뇌 과립의 세포소멸의 나트륨 파모에이트(ST1641) 감소

8 일된 래트의 소뇌로부터 단리된 과립은 대략 1 주일 내에 생화학적으로 및 형태학적으로 분화되어 형태학적으로 성숙되고 글루타메이트 생성 중간신경세포 표현형을 갖게된다(Gallo et al. 1982 PNAS 79:7919-7923). 혈청의 배양 배지를 제거하고 칼륨 이온의 세포 외 농도(25 mM)를 상기가 비-탈분극 조건(5 mM)으로 감소할 정도로 감소시키면 대략 24 시간 내에 세포소멸에 의한 세포사가 얻어진다.

프로그램화된 신경 세포사는 다수의 생리적 과정들뿐만 아니라 다수의 신경퇴행성 질병들, 예를 들어 AD, 파킨슨병, 헌팅톤 무도병 및 근위축성 측삭 경화증에서 관찰되는 현상이다. AD의 경우에, 세포소멸과, 아밀로이드 자체의 생산을 조절하는 프레세닐 2(PS2) 유전자의 βA 돌연변이의 존재간에 밀접한 관련의 존재 가 탐지된다. 실제로, PS2 돌연변이가 존재하는 AD의 경우에, 대뇌 및 혈장 βA_1-42의 전형적인 증가가 또한 탐지될 수 있고(Scheuner D., Eckman C., Jensen M., Song X., Citron M., Suzuki N., Bird T.D., Hardy J., Hutton M., Kukull W., Laeson E., Levy-Lahad E., Viitanen M., Peskind E., Selkoe D., Yunkin S.(1996) Nat. Med. 2, 864-870.); 더욱이, PC12에서 발현된 PS2 유전자의 변이된 형태가 세포소멸을 일으킨다(Wolozin B., Iwasaki K., D'Adamio L.(1996) Science 274, 1710-1713).

상기 실험 모델은 소뇌 과립의 신경세포 세포소멸이 아밀로이드 전구체 APP의 진행을 변화시키는 "자기-가속화" βA 생산 시스템을 수득할 수 있게 하며, 상기와 같은 성질은 아밀로이드 생성 대사의 과정을 촉진시킨다. 차례로 βA 수준의 증가는 프로그램화된 세포사를 촉진시킨다. 본 실험의 작성 시, 시험 물질의 잠재적인 효능을 배지 중의 KCl 감소 후 소정의 시간(24, 48 및 72 시간째)에서 세포 생존에 대해 측정하였다.

실험 과정

KCl 25 mM을 함유하는 배양 배지에서 유지시킨, 8 일된 래트의 소뇌 과립의 1 차 배양액에서, 세포들을 배양 6 일 후에 ³⁵S-메티오닌으로 표지하였다.

상기 혈청을 제거하고 상기 KCl 농도를 25 mM에서 5 mM로 감소시켜 세포소멸을 유도하였다.

이러한 상황은 신경세포의 생체 외 탈 수입 상태 또는 신경 조직 세포를 들어가고 나오는 수지상 및 축삭 가지의 절제를 나타내었다.

세포소멸의 결과 βA가 과생산되었다.

상기 배양액을 1 μM 내지 100 μM 범위 농도의 나트륨 파모에이트와 함께 배양하였다.

독성에 대한 보호를 24, 48 및 72 시간째의 세포 생존력에 대해서 평가하였다.

결과

상기 실험에서 얻은 결과는 나트륨 파모에이트가 10 μM의 농도에서 세포소멸 과정 중의 아밀로이드 형성에 의해 유도된 손상에 대해 보호 효과(89% 보호)를 가짐을 입증하였다.

실시예 12

"생체 내" 혈액 뇌 차단을 방해하는 ST1859 능력

AD 뇌 부분에 대한 검시는 섬유성 아밀로이드 응집체로 구성된 풍부한 세포 외 노인성 반의 존재를 밝힌다. 베타 아밀로이드 펩티드의 존재와 상기 질병의 중증도 간의 관계는 펩티드 피브릴 형성의 억제가 상기 질병의 요법에 잠재적인 도구일 수 있음을 시사한다. ST1859는 "생체 외" 베타 아밀로이드 응집을 억제하며 완전한 혈액-뇌 차단층을 통한 그의 투과성을 시험하기 위해서 ¹⁴C(S.A. 50 μCi/mM)로 표지된 ST1859를 18 μCi/래트의 용량으로 정상의 래트에게 정맥 내 주입하였다. 상기 뇌와 혈액을 주입 후 30' 째에 취하고, 이어서 상기 혈액을 원심분리(3000 RPM x 15 분)시키고 수득된 혈청을 물로 1:20으로 희석하는 반면 뇌 조직은 물로 1:20 w/v로 균질화시켰다. 이어서 각각의 샘플에 수성 샘플용 섬광 액 4 ㎖을 가하였다. 방사능의 양을 자동 β-계수기(Packard 4600)로 측정하였다. DPM으로 보고된 데이터(표 1)를 각 샘플의 중량 또는 부피에 대해 표준화시켰다. 상기 실험에서 수득된 결과는 ST1859가 <1의 혈청/뇌 속도로 혈액 뇌 차단을 방해할 수 있음을 보였다(표 3).

	혈청(DPM/㎖)	뇌(DPM/g)	혈청/뇌
평균	29.776	35.643	0.833
표준 오차	±1253	±1349	±0.042

Claims

하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 동일하거나 상이할 수 있으며, COOR6, CONHR6, SO₂R6, SO₂NHR6, SO₃R6, OR6, COR6, NHR6, R6이고; 여기에서

R6는 H, 또는 R7에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된, 포화되거나 불포화된 알킬 쇄 또는 페닐이고; 여기에서

R7은 OH, COOH, SO₃H, NR8R9,

이고; 여기에서

R8 및 R9는 동일하거나 상이할 수 있으며, H, 탄소수 1 내지 5의 알킬이고;

R2 및 R4는 동일하거나 상이할 수 있으며, H, OH, NHR6, OCO-R10-NR8R9,

이고; 여기에서

R10은 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된, 포화되거나 불포화된 알킬 쇄이고;

R3은 -[CH₂]_n-, -CH₂-O-, -CH(R11)-이고; 여기에서

n은 1 내지 4의 정수이고,

R11은 아미노 그룹, 알킬아미노 C₁-C₅, 디알킬아미노 C₁-C₅, OH, 알킬옥시 C₁-C₅에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된 알킬이나; 단

치환체 R1, R2, R3, R4 및 R5는

1. R1=R5= -COOCH₂C₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

2. R1=R5= -COOCH(CH₃)₂

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

3. R1=R5= -COOC₂H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

4. R1=R5= -COOC₆H₁₁

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

5. R1=R5= -COOCH₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

6. R1=R5= -COOC(CH₃)₃

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

7. R1=R5= -CONHC₆H₅

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

11. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOC₆H₅

R3= -CH₂-

12. R1=R5= -H

R2=R4=

R3= -CH₂-

13. R1=R5= -H

R2=R4= -OCOCH=CH₂

R3= -CH₂-

14. R1=R5= -H

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

15. R1=R5= -COOH

R2=R4= -OH

R3= -CH₂-

가 아니다.
(2R)-2-(아세틸옥시)-4-({3-카복시-1-[(3-카복시-2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-N,N,N-트리메틸-4-옥소-1-부탄아미늄 클로라이드.
(2R)-2-(아세틸옥시)-4-({1-[(2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-N,N,N-트리메틸-4-옥소-1-부탄아미늄 클로라이드.
2-({1-[(2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-2-나프틸}옥시)-2-옥소에탄아미늄 클로라이드.
2-({4-[(3-{[2-(디에틸암모니오)에톡시]카보닐}-2-하이드록시-1-나프틸)메틸]-3-하이드록시-2-나프토일}옥시)-N,N-디에틸에탄아미늄 클로라이드.
삭제
R6가 H인 화학식 I의 화합물을 할로겐화제로 처리하여 상응하는 아실 클로라이드를 수득하고, 이어서 이를 교반 하에 R6-OH 알콜과 1 대 6의 몰비로 반응시키 거나 또는 화학량론적 양의 R6-OH와 함께 불활성 무수 용매 중에서 반응시킴을 특징으로 하는, 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법:

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 -COOR6이고,

R2, R3, R4 및 R5는 제 1 항에서 정의한 의미를 갖는다.
R6가 H인 화학식 I의 화합물을 할로겐화제로 처리하여 상응하는 아실 클로라이드를 수득하거나, 또는 커플링제로 처리하고, 교반 하에 R6-NH₂ 아민과 6 대 1의 몰비로 반응시키거나 또는 화학량론적 양의 R6-NH₂와 함께 불활성 무수 용매 중에서 반응시킴을 특징으로 하는, 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법:

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 CONHR6이고,

R2, R3, R4 및 R6은 제 1 항에서 정의한 의미를 갖는다.
하기 반응식 1에 따라 수행함을 특징으로 하는 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법으로, 반응식 1에서 화학식 "a"의 화합물을 R11-COH 알데히드와 빙초산 중에서 90 내지 150 ℃ 범위의 온도에서 반응시켜 화학식 "b"의 화합물을 수득하고, 이어서 상기 화학식 "b"의 화합물을 할로겐화제로 처리하여 상응하는 설포닐 클로라이드를 수득하고, 이어서 R6-OH 알콜과 반응시켜 화학식 "d"의 화합물을 수득하거나, 또는 R6-NH₂ 아민과 반응시켜 화학식 "e"의 화합물을 수득하는 방법:

화학식 I

상기 식에서,

R2 및 R4는 OH이고;

R1 및 R5는 SO₃R6, SO₂NHR6이고;

R3는 -CH(R11)-이고; 이때

R11은 제 1 항에서 정의한 의미를 갖는다:

반응식 1
하기 화학식 I의 파모산, 또는 그의 유도체들 중 하나, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염을 함유하며, 알쯔하이머 병, 다운 증후군, 네덜란드 형 아밀로이드증과 관련된 유전성 뇌출혈, 만성 염증과 관련된 아밀로이드증, 다발성 골수종 및 조혈성 B 림프구의 다른 혈액질환과 관련된 아밀로이드증, II 형 당뇨병과 관련된 아밀로이드증, 및 프리온 질병, 쿠루 또는 양 질병 진전병과 관련된 아밀로이드증으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료용 약제조성물 :

화학식 I

상기 식에서,

R1 및 R5는 동일하거나 상이할 수 있으며, COOR6, CONHR6, SO₂R6, SO₂NHR6, SO₃R6, OR6, COR6, NHR6, R6이고; 여기에서

R6는 H, 또는 R7에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된, 포화되거나 불포화된 알킬 쇄 또는 페닐이고; 여기에서

R7은 OH, COOH, SO₃H, NR8R9,

이고; 여기에서

R8 및 R9는 동일하거나 상이할 수 있으며, H, 탄소수 1 내지 5의 알킬이고;

R2 및 R4는 동일하거나 상이할 수 있으며, H, OH, NHR6, OCO-R10-NR8R9,

이고; 여기에서

R10은 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된, 포화되거나 불포화된 알킬 쇄이고;

R3은 -[CH₂]_n-, -CH₂-O-, -CH(R11)-이고; 여기에서

n은 1 내지 4의 정수이고,

R11은 아미노 그룹, 알킬아미노 C₁-C₅, 디알킬아미노 C₁-C₅, OH, 알킬옥시 C₁-C₅에 의해 치환된, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지된 알킬이다.
삭제
제 10 항에 있어서, 프리온 질병과 관련된 아밀로이드증이 크로이츠펠트-야콥병 및 게르스트만-스트라우슬러 증후군으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제 10 항에 있어서, 화합물이 파모산 나트륨 염인 조성물.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 개시된 화합물을 함유하고, 아밀로이드 응집체의 침착을 특징으로 하는 질병의 진단용 키트.
제 14 항에 있어서, 화합물의 탄소, 수소, 질소 및 산소 원소들 중 하나 이상이 상응하는 방사성 동위원소로 치환된 키트.
제 15 항에 있어서, 화합물이 하나 이상의 방사성 요오드 원자를 갖는 키트.
제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 금속 방사성 동위원소와의 착체의 형태인 키트.
제 17 항에 있어서, 금속이 인듐, 가돌리늄 및 테크네슘으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 키트.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 개시된 화합물을 함유하고, 진단 영상 기법을 사용하여 진단하기 위한 키트.
제 19 항에 있어서, 진단 영상 기법이 PET, SPECT, NMR 및 신티그램 촬영 기법으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 키트.
제 20 항에 있어서, 신티그램 촬영 기법이 2 차원 신티그램 촬영인 키트.
제 19 항에 있어서, 화합물의 탄소, 수소, 질소 및 산소 원소들 중 하나 이상이 상응하는 방사성 동위원소로 치환된 키트.
제 22 항에 있어서, 하나 이상의 방사성 요오드 원자를 갖는 키트.
제 22 항 또는 제 23 항에 있어서, 진단영상에 사용되는 원소들과 착화된 형태인 키트.
제 24 항에 있어서, 착화된 원소가 인듐, 가돌리늄 및 테크네슘으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 키트.
하기 반응식 2에 따라 수행함을 특징으로 하는 하기 화학식 I 화합물의 제조 방법으로, 반응식 2에서 화학식 A의 화합물을 산 환경에서 R11-CHO 알데히드와 반응시켜 화학식 B, C 및 D에 상응하는 화합물들의 혼합물을 수득하고, 이들을 분리 및 정제시키고, 이들 화합물을 염기의 존재 하에서 R6-X 알킬 할라이드와 반응시키고 이어서 산 환경에서 탈보호시켜 상응하는 나프틸 에테르 E, F 및 G를 수득하고, 이들을 황산 중에서 NaNO₂로 처리한 후에 화합물 H, I 및 L을 수득하는 방법 :

화학식 I

상기 식에서,

R1, R2, R4 및 R5는 OR6 및/또는 NHR6이고;

R3는 -CH(R11)-이고, 이때

R6 및 R11은 제 1 항에서 정의한 의미를 갖는다.

반응식 2

PG=보호 그룹