KR100737434B1

KR100737434B1 - 돼지전염성위장염바이러스, 유행성설사바이러스 및로타바이러스의 혼합생백신 및 이를 이용한 백신접종방법

Info

Publication number: KR100737434B1
Application number: KR1020060022530A
Authority: KR
Inventors: 탁동섭; 김성희; 권준헌; 조수동; 양동군; 김병한
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2006-03-10
Filing date: 2006-03-10
Publication date: 2007-07-09

Abstract

본 발명은 돼지 바이러스성 설사병의 예방을 위한 혼합생백신 및 이를 이용한 백신접종방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 병의 주요 원인체인 돼지전염성위장염바이러스(transmissible gastroenteritis virus ; 이하, TGEV), 돼지유행성설사바이러스(porcine epidemic diarrhea virus ; 이하 PEDV) 및 로타바이러스(porcine rotavirus ; 이하 Rotavirus)를 순화시킨 순화주 및 바이러스 역가 손실을 최소화하는 보호제를 함유하는 혼합생백신 및 이를 이용한 백신접종방법에 관한 것이다.

돼지전염성위장염바이러스, 유행성설사바이러스, 로타바이러스, 혼합생백신, 백신 보호제, 백신접종법

Description

돼지전염성위장염바이러스, 유행성설사바이러스 및 로타바이러스의 혼합생백신 및 이를 이용한 백신접종방법{Mixed live vaccine of transmissible gastroenteritis virus, porcine epidemic diarrhea virus and porcine rotavirus, and the vaccination method using the same}

도 1은 TGEV 175L주와 표준주 Purdue 주와의 ORF3 유전자에 대한 염기서열을 비교한 결과를 보여준다.

도 2는 계대별 PEDV SM98주와 표준주 CV777주와의 막 유전자에 대한 아미노산 서열을 비교한 결과이다.

도 3은 PEDV 감별용 PCR 프라이머를 이용한 PCR 결과를 보여준다.

[1, SM10P; 2, SM20P; 3, SM50P; 4, SM60P; 5, SM70P; 6, SM80P; 7, SM81P; 8, SM82P; 9, SM83P; 10, SM84P; 11, SM85P; 12, SM88P; 13, SM92P; 14, SM95P; 15, SM100P; 16, SM105P; 17, SM110P; 18, SM115P; 19, SM116P; 20, CV777; 21, Wey; 22, P-5V; 23, DR-13; 24, TK.]

A : 모든 PEDV를 검출할 수 있는 공통 PCR 프라이머를 이용한 PCR 결과

B : PEDV 감별용 PCR 프라이머를 이용한 PCR 결과

도 4는 계대별 PEDV SM98주 및 표준주 CV777과의 ORF3 유전자에 대한 염기서열을 비교한 결과를 보여준다.

도 5는 로타바이러스 10주의 유전자형을 PCR로 분석한 결과를 보여준다.

도 6은 로타바이러스 10주의 염기서열 분석 결과 G9로 확인됨을 보여준다.

도 7은 로타바이러스 10주의 염기서열 분석 결과 P7로 확인됨을 보여준다.

TGE, PED 및 로타바이러스 감염증은 돼지전염성위장염바이러스(TGEV), 돼지유행성설사바이러스(PEDV) 및 로타바이러스(Rotavirus)에 의해 발병하는 설사병으로서 TGE 및 PED의 경우 성돈이나 육성돈보다는 주로 포유자돈에서 구토와 설사를 동반한 탈수로 인한 높은 폐사와 이병율을 특징으로 하며, 로타바이러스는 이유자돈에 발병하여 출하지연 등 경제적 손실을 유발한다.

TGEV는 1954년 경기도의 수입종돈으로부터 국내에 전파된 것으로 추정하고 있으며 이후 겨울철에 꾸준한 발생을 보였으며, PEDV는 1993년 국내에서 처음 발생 보고된 이후 TGE와 PED는 계절에 관계없이 연중 발생하고 있다. 근래에는 PED가 TGE 보다 월등히 많은 발생을 보이고 있어 양돈농가에 경제적인 피해를 유발하고 있다. 2003년 12월까지 한 해 동안 국립수의과학검역원에서 발표한 자료에 의하면 TGE는 1건에 300두에서 발생한 반면, PED의 경우 90건에 40,297두가 발생하였고 2004년도에도 45건에 9,195두에서 발생되었다.

이와 같이 지속적으로 발생하고 있는 돼지의 설사병을 예방하기 위해 현재까지 개발 시판되고 있는 국내백신은 TGE와 PED의 혼합불활화백신, TGE와 로타의 혼합생백신, TGE 또는 PED 단독 생백신이 있다. 백신 접종법도 불활화백신이나 생백신 단독으로 접종하는 접종법이 있다. 그러나 바이러스성 설사병은 예방하기가 어려워 세계적으로도 꾸준히 효과적인 백신을 개발하고자 노력하고 있다. 특히 PED의 경우는 아시아권에서 주로 문제가 되기 때문에 일본 및 한국에서 주로 연구가 진행되고 있다. 일본에서는 PED 생백신과 TGE와 PED의 혼합생백신이 개발되었다. 국내의 경우 TGE와 PED의 혼합생백신이 개발된 바 없고, 더욱이 TGE, PED 및 로타바이러스의 3종 혼합생백신은 세계적으로도 개발한 나라가 없다. 이 백신이 개발되면 돼지에 백신의 접종횟수를 줄임은 물론 TGE, PED 및 로타바이러스의 예방에도 큰 도움을 줄 것으로 기대된다. TGE, PED 및 로타바이러스 감염증은 주로 포유자돈이나 이유자돈에서 가장 큰 피해를 입힌다.

이에 따라, 상기 질병들을 효율적으로 예방하기 위해서는 포유 중인 자돈에게 충분한 방어항체를 초유를 통해서 전달해 줄 필요가 있다. 이를 위해서는 모돈에 효과적인 면역을 부여할 수 있고, 안전하게 사용할 수 있는 효율적인 예방백신 과 예방접종법이 절실히 필요하다.

이에 본 발명자들은 상기한 바와 같은 종래기술이 가지는 문제를 해결하기 위하여 돼지 바이러스성 설사병의 원인체인 TGEV, PEDV 및 로타바이러스를 충분히 예방할 수 있는 안전성과 효능이 우수하면서도 포유자돈에서의 설사병으로 인한 피해를 최소화하는 것이 가능한 TGE, PED 및 로타바이러스의 3종 혼합생백신을 개발하고자 노력한 결과, 돼지 바이러스성 설사병의 원인체인 TGEV, PEDV 및 로타바이러스를 백신주로서 이용 가능하도록 순화하여 기존의 TGEV 및 PEDV와 감별되는 백신 순화주인 TGEV 및 PEDV를 작성하였으며, 또한 일정기간 바이러스의 역가 손실을 최소화하기 위한 보호제로서 트레할로스를 상기 순화주들과 혼합하여 혼합생백신을 제조함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

또한 본 발명자들은 돼지 바이러스성 설사병의 원인체인 TGEV, PEDV 및 로타바이러스에 대한 방어항체가 백신접종된 모돈으로부터 자돈에 유효하게 전달되도록 하기 위한 백신접종방법을 개발하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 포유자돈에서의 설사병 예방 및 양돈농가의 경제적 피해 경감시키기 위한 돼지전염성위장염, 유행성설사 및 로타바이러스의 3종 혼합생백신을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은 상기 혼합생백신에서 바이러스 역가 손실을 최소화하기 위하여 트레할로스를 보호제로 사용하여 제조한 혼합생백신을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 혼합생백신을 모돈에 접종하여 생산된 방어 항 체가 자돈에게 유효하게 전달되도록 하는 백신접종방법을 제공하는 것이다.

본 발명에서는 국내에서 분리한 TGEV, PEDV 및 로타바이러스의 순화주를 이용하여 TGEV, PEDV 및 로타바이러스 3종 혼합생백신을 제공하고, 이를 이용하여 TGE, PED 및 로타바이러스 감염증을 예방하는 백신접종방법을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에서 사용하는 백신용 돼지전염성위장염바이러스(transmissible gastroenteritis virus ; TGEV) 순화주는 여러 종류의 조직배양세포 및 트립신을 첨가하지 않은 배지에서 169대이상 연속계대배양하여 작성한 것이다. TGEV의 안전성 및 백신주로서의 효능은 돼지에서 입증하였다. 또한 유전자 분석결과, 일부 유전자의 결손이 확인되어 다른 TGEV와 감별이 가능하여 마커 백신주로서 사용할 수 있다(도 1 참조).

본 발명에서 사용하는 백신용 돼지유행성설사바이러스(porcine epidemic diarrhea virus) 순화주는 혈청이 포함된 배지로서 베로세포(vero cell)에서 73대 이상 연속계대배양하여 작성한 것이다. 특히 기존의 PEDV 백신주는 혈청을 첨가하면 증식이 되지 않았으나, 본 발명에 의한 백신주는 혈청을 첨가하여도 배양이 가능하고 종래 알려진 백신주와 염기서열을 비교한 결과, 일부 유전자가 삽입되어 있음이 확인되어 다른 PEDV와 감별이 가능한 마커 백신주로서 사용할 수 있다(도 2 참조).

본 발명에서 사용하는 백신용 로타바이러스로는 2가지 순화주를 사용할 수 있으며, 보다 상세하게는 현재 로타바이러스 백신주로 사용하고 있는 로타바이러스 A1주 또는 본 발명자가 최초 발견한 로타바이러스 10주(Rotavirus 10)를 사용할 수 있다. 로타바이러스 10주(기탁번호 : KCTC 10890BP)는 사람 및 소 유래 유전자를 함유하는 것으로 확인되었다.

본 발명에서는 상기 3종의 바이러스를 혼합(TGEV : PEDV: Rota A1 또는 Rota 10 = 3 : 3 : 3)하여 혼합생백신을 제조하며, 이때 동결건조용 보호제로서 트레할로스 포스페이트 글루타메이트 젤라틴 혼합물(Trehalose Phosphate Glutamate Gelatin mixture, TPGG)을 사용하는데, 이때 트레할로스의 함량은 상기 혼합물 총 중량에 대하여 5~15 중량%로 사용되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 7.5 중량%로 사용할 수 있다. 트레할로스의 함량을 5 중량% 미만으로 사용하면 동결건조용 보호제로서의 기능을 제대로 발휘할 수 없으며, 15 중량% 초과로 사용하면 경제성이 떨어지는 단점이 있다.

일반적으로 생백신 제조시 동결건조용 보호제로서 락토오스 포스페이트 글루타메이트 젤라틴 혼합물(Lactose Phosphate Glutamate Gelatin mixture, LPGG)이 널리 사용되고 있으나, 본원발명에서는 락토오스 대신 트레할로스를 사용하여도 백신의 보존성에 차이가 없음을 확인하고, 제조면에서 편리하고 경제적인 트레할로스를 이용한 새로운 보호제를 개발하였다. 참고로 락토오스는 바이러스와 혼합하기 전에 여과를 해야하는 반면, 트레할로스의 경우 습윤멸균(atoclave)하여 편리하게 바로 준비할 수 있다.

또한 본 발명에서는 상기 3종의 혼합생백신을 이용하는 백신접종방법을 제공 한다. 상기 백신접종방법은 TGE 및 PED 불활화백신과 연계한 새로운 백신접종프로그램으로서 LKK 접종법 및 LLKK 접종법을 포함한다.

LKK 접종법은 1차 생백신을 먼저 1회 접종한 후 불활화백신을 2회 접종하는 방법이며, LLKK 접종법은 1차 생백신을 2회 접종한 후 불활화백신을 2회 접종하는 방법이다.

상기 과정에서 사용하는 TGE 및 PED 불활화백신은 특허출원된 상태이다.(특허출원 : 10-2004-0002757)

본 발명에서는 상기 백신접종방법을 통하여 주요 돼지 바이러스성 설사병의 원인체인 TGEV, PEDV 및 로타바이러스를 충분히 예방하여 안전성이 우수하면서도 포유자돈에서의 설사병으로 인한 피해를 최소화할 수 있었다.

이하 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다.

[실시예 1] 백신주 작성을 위한 TGEV, PEDV 및 로타바이러스의 약독화(순화)

1. TGEV 백신주 작성을 위한 세포내 계대 및 병원성 조사

조직배양을 통해 TGEV 순화주 작성을 위하여 여러 종류의 조직배양세포를 이용함과 동시에 바이러스 배양액에 트립신(trypsin)을 첨가하지 않고 연속 계대하여 감수성 일령의 자돈에서 병원성이 없는 백신 순화주를 작성하였다. 즉 110대까지는 트립신을 첨가하여 계대한 반면 이후로는 트립신 대신 혈청을 2~10% 첨가하여 돼지 초대신장세포, A72 세포, PK15 세포에 바이러스를 계대하였으며, 계대별 증식성을 조사하여 하기 [표 1]에 나타내었다.

또한 백신 후보주의 안전성 확보를 위하여 169대 계대한 바이러스를 TGEV 항체음성의 3일령 포유자돈에 경구투여하고 14일간 관찰한 결과, 설사 등 TGE와 관련된 임상 증상을 관찰할 수 없어 백신 후보주에 대한 안전성을 확인하였으며, 그 결과를 하기 [표 2]에 나타내었다.

2. PEDV 백신주 작성을 위한 세포내 계대 및 병원성 조사

PEDV 백신주 개발을 위하여 57대 계대부터는 3% 이상의 혈청을 포함한 배지로 바이러스를 배양한 후 계대별 증식성을 조사하여 하기 [표 3]에 나타내었다. 그 결과 PEDV 백신주는 혈청이 포함된 배지를 사용해도 증식이 가능하여 일반 PEDV는 트립신이 포함된 배지로 배양해야만 증식이 가능한 점을 감안하면 새로이 작성된 PEDV 백신주는 다른 PEDV와 차별화됨을 확인할 수 있었다.

백신주의 병원성 약화여부를 확인하기 위하여 61대 계대된 바이러스를 항체 음성 자돈에 경구 투여하고 14일간 관찰하였으며, 그 결과를 하기 [표 4]에 나타내었다. 그 결과 대부분의 자돈에서 설사와 관련된 임상 증상 및 병리조직학적 검사에서 PEDV로 인한 어떠한 소견도 확인할 수 없어 백신주가 약독 순화되었음을 확인하였다.

3. 로타바이러스 백신주 작성을 위한 세포내 계대 및 병원성 조사

돼지 로타바이러스 백신주 작성을 위하여 TF104 세포에서 연속계대를 실시한 결과[표 5], 10주의 경우 계대함에 따라 다소 증식성이 저하되는 경향을 보였으나 높은 역가를 유지하여 백신주 사용에는 문제가 없을 것으로 판단되었다.

한편 백신의 효능을 극대화하기 위하여 현재 로타바이러스 백신주로 사용하고 있는 A1주를 새로이 개발되는 TGE, PED 및 로타바이러스의 3종 혼합생백신에 추가로 혼합하였으며, 이러한 혼합은 현재 국내에서 분리되는 로타바이러스에 대한 교차중화시험법의 결과를 분석한 자료를 토대로 이루어졌다. 따라서 현재 사용 중인 로타바이러스 백신주에 새로이 분리 개발한 로타바이러스주(10주)를 혼합함으로 국내에서 발생하고 있는 로타바이러스를 효과적으로 예방할 수 있을 것으로 기대된다. 새로운 로타바이러스 백신주가 2일령의 무포유자돈에 약간의 병원성을 나타내는 경향이 조직학적소견[표 6]으로 나타났으나 모돈에 접종했을 경우에는 병원성을 보이지 않음이 증명되어 백신주로서의 사용이 가능하였다.

[실시예 2] TGE 및 PED 백신주의 유전자적 마커 확인

1. 백신주 TGEV의 유전자적 마커 확인

100대 이상 계대한 175L주의 ORF3에 대한 아미노산 서열을 표준주인 Purdue주와 비교하여 분석한 결과를 (도 1)에 나타내었다.

(도 1)을 살펴보면, ORF3 3b부분에서 414bp가 결여되어 있음을 확인하였다. 따라서, 본 발명에서 사용하고 있는 TGEV 175L 백신주가 표준주와의 감별이 가능함을 보여주고 있어 마커백신으로 사용할 수 있음을 알 수 있었다.

본 발명에서는 상기 TGEV 175L 백신주를 기탁기관인 한국생명공학연구원 유전자은행에 2006년 1월 12일자로 기탁하였으며, 그로부터 기탁번호 KCTC 10889BP를 부여받았다.

2. 백신주 PEDV의 유전자적 마커 확인

가) PEDV의 막(membrane)에 대한 아미노산 분석결과

100대 이상 계대한 SM주의 막에 대한 아미노산서열을 대표적인 PEDV의 표준주인 CV777과 비교 분석한 결과 82대부터 4개의 아미노산 즉 12개의 뉴클레오타이드가 삽입된 것을 확인하였다(도 2).

모든 PEDV를 검출할 수 있는 PCR 프라이머 및 백신주에만 삽입된 뉴클레오타이드를 검출할 수 있는 특이 프라이머를 작성하여 PCR을 수행한 결과를 하기 [표 7]에 나타내었다. 표 7에서 보여지는 바와 같이 모든 PEDV를 검출할 수 있는 프라이머를 사용하여 PCR을 수행한 실험에서는 표준주 CV777과 백신주 모두 검출된 반면(도 3의 A), 백신주에 삽입된 유전자를 검출할 수 있는 프라이머를 사용한 결과는 (도 3의 B)에서와 같이 82대 이상 계대한 백신주에서만 유전자가 확인될 뿐, 표준주 및 82대 미만의 계대된 백신주에서는 유전자가 검출되지 않은 결과를 얻었다. 이와 같은 결과는 본 발명에서 사용하고 있는 PEDV 백신주는 표준주와 감별이 가능한 백신주임이 증명되어 향후 삽입된 12개의 유전자를 백신주의 감별마커로서 사용할 수 있다는 결론을 내렸다.

나) PEDV의 ORF3에 대한 염기서열 분석결과

PEDV 백신주의 ORF3에 대한 염기서열 분석결과 52bp가 결손된 것을 확인하였다(도 4). 이러한 결과는 막에 삽입된 유전자와 더불어 ORF3에서 결손된 52개 유전자 모두 본 발명의 백신주에 대한 마커로서 활용이 가능함을 시사한다.

본 발명에서는 상기 PEDV를 기탁기관인 한국생명공학연구원 유전자은행에 2006년 1월 12일자로 기탁하였으며, 그로부터 기탁번호 KCTC 10891BP를 부여받았다.

[실시예 3] 로타바이러스 백신주의 유전자형 분석

로타바이러스 10주를 유전자형으로 PCR로 분석한 결과 G9, P7으로 확인되었다 (도 5). 이에 대한 염기서열 분석 결과는 각각 (도 6, G9)과 (도 7, P7)에 나타내었다. 한편 본 발명에서 사용한 또 다른 백신주인 로타바이러스 A1주는 G5, P7의 유전자형을 갖는 것으로 판명되었다. 본 발명에서는 상기 로타바이러스 10주를 기탁기관인 한국생명공학연구원 유전자은행에 2006년 1월 12일자로 기탁하였으며, 그로부터 기탁번호 KCTC 10890BP를 부여받았다.

[시험예 1] TGE, PED 및 로타바이러스 백신의 안전성 확인

TGEV, PEDV 및 로타바이러스 3종 혼합생백신을 이용하여 모돈(임신모돈 포함)에 예상 백신접종량의 10배를 근육접종한 다음 임상증상, 바이러스 배출유무 및 분만성적을 분석하였고[표 8], 또한 야외 4개 농장에서 사육중인 모돈을 대상으로 개발 백신을 근육접종한 다음 접종반응 및 임상증상 등을 관찰한 결과[표 9], 개발된 백신은 안전성에 문제가 없음을 확인하였다.

[시험예 2] 임신 모돈에서 TGE, PED 및 로타바이러스 백신의 면역원성 조사

백신을 4주 간격으로 2회 백신접종한 결과 TGEV에 대한 혈청중 항체가는 32~256배(초유 : 64~512)를 나타낸 반면(표 10), PEDV는 4~8(초유: 8~128)를 형성하였으며[표 11], 로타바이러스는 혈중 및 초유에서 높은 항체가를 형성하였다[표 12].

농장의 후보돈을 대상으로 개발된 TGEV, PEDV 및 로타바이러스의 3종 생혼합백신을 접종한 결과 TGEV의 경우 64~256배, PEDV는 32배 이상의 항체 형성을 확인하였으며, 로타바이러스에 대한 항체가 역시 접종전에 높은 항체가를 유지한 상태에서도 백신접종후 항체가의 상승이 인정되었다[표 13].

[시험예 3] TGEV, PEDV 및 로타바이러스의 3종 혼합생백신 접종 모돈에서 분만된 포유자돈의 방어 효능조사

개발백신의 효능을 평가하기 위하여 3일령된 자돈에 강독 TGEV를 접종한 결과, 대조군은 100% 폐사하였고, 백신접종돈의 자돈은 20%~38%의 생존율을 나타내었다[표 14]. 하기 [표 14]는 TGE, PED 및 로타바이러스 3종혼합생백신을 모돈에 분만 6주 전과 2주 전에 각각 접종한 다음 생산된 포유자돈에 강병원성 TGEV를 경구적으로 접종하고 10일간 관찰한 효능조사결과이다. PEDV 또한 강독바이러스를 경구접종한 결과 대조군은 100% 폐사하였고, 백신접종돈의 자돈은 67%의 생존율을 나타내었다[표 15]. 이상의 결과는 개발된 백신은 TGE 및 PED 질병에 대한 포유자돈의 피해 경감 및 예방에 효과가 있음을 증명하고 있다. 하기 [표 15]는 TGE, PED 및 로타바이러스의 3종 혼합생백신을 모돈에 분만 6주전과 2주전에 각각 접종한 다음 생산된 포유자돈에 강병원성 PEDV를 경구적으로 접종하고 10일간 관찰한 효능조사결과이다.

[시험예 4] 백신접종 프로그램에 따른 바이러스별 항체가 비교

기니아피그에서 백신접종방법에 따른 항체 형성능을 비교한 결과 LL법(생백신 2회 접종법)보다는 생백신과 불활화백신을 혼합하여 적용한 방법(LKK, LLKK)이 TGE, PED에 대해 높은 항체 형성율을 나타내었고, LKK법이 LLKK법보다 다소 높은 경향이 있었으나 두 방법간에 큰 차이는 인정되지 않았다[표 16]. 로타바이러스의 경우는 접종 전부터 높은 항체를 소장하고 있어서 정확한 항체가 비교를 할 수는 없었다. 임신모돈에서 백신접종 프로그램별로 백신을 투여한 다음 항체가를 비교한 결과 임신모돈 분만당시의 초유와 혈액 중의 항체가가 LKK법이 LL법보다 2배 이상 높게 나타남을 확인하였다[표 17]. 하기 [표 17]은 기존의 백신접종법(LL 접종법)과 새로운 백신접종법(LKK 접종법)을 비교하기 위하여 모돈에 백신접종법별로 백신을 접종한 다음 접종전과 분만시의 바이러스별 혈중항체가를 비교 분석한 것이다.

[시험예 5] 백신 보호제에 따른 보존성 비교조사

TGEV, PEDV 및 로타바이러스 3종 생혼합백신을 기존의 보호제(LPGG)와 새로이 개발된 보호제(TPGG)로 제조한 다음 제조 당시부터 4℃에 보관하면서 시간 경과별로 동결건조된 백신의 각 바이러스에 대한 역가 검사를 실시하였다. 그 결과 제조당일부터 16개월까지 각 바이러스에 대한 역가의 차이는 없는 것으로 확인되었다[표 18]. 상기 [표 18]은 새로이 개발된 보호제인 TPGG와 현재 생백신의 보호제로 사용하고 있는 LPGG와의 백신 보호제로써의 효능을 비교하기 위하여 백신제조 당시부터 16개월까지 4℃의 온도하에 보관하면서 바이러스의 역가를 비교한 것이다. 따라서, 기존의 보호제는 여과를 해야만 백신의 제조에 사용 가능함으로 제조공정상 시간과 인력이 많이 소모되는 것을 락토오스를 트레할로스로 대체함으로 고압멸균을 통해 보호제를 제조 가능하게 됨으로써 공정상의 번거러움을 생략할 수 있어 향후 백신 보호제로서 활용 가능성이 클 것으로 사료된다.

본 발명에 따른 백신은 주요 돼지 바이러스성 설사병의 원인체인 TGEV, PEDV 및 로타바이러스를 충분히 예방하여 안전성이 우수하면서도 포유자돈에서의 설사병으로 인한 피해를 최소화하는 것이 가능하다. 본 발명에서 개발된 백신은 일차적으로 야외바이러스와 감별이 가능한 마커백신주로서 백신의 평가에 유용하며, 이러한 백신주를 이용하여 개발된 TGE, PED 및 로타바이러스 3종 혼합생백신을 모돈에 접종함으로 질병의 예방에 유효한 항체를 자돈에 전달해 줄 수 있고, 상기의 바이러스로 인한 설사병으로부터 자돈의 폐사나 설사병 발병을 최소화하는데 유용한 백신임을 확인할 수 있다. 또한 개발 백신과 기 개발되어 시판되는 불활화백신을 혼용하여 사용할 경우 백신에 의한 항체형성수준을 상당히 높여줄 수 있음으로 새로이 개선된 백신 접종법인 LKK 또는 LLKK법은 자돈의 설사병 예방에 크게 도움이 될 것으로 기대된다. 또한 동결건조 생백신을 제조함에 있어 백신의 보호제로서 트레할로스를 사용할 경우, 기존의 락토오스를 사용한 경우보다 제조면에서 더 편리하고 경제적임을 확인할 수 있었으며, 또한 백신의 보존성에 있어서도 동등한 효능을 나타내어 앞으로 활용의 가치가 클 것으로 기대된다.

Claims

기탁번호 KCTC 10889BP의 돼지전염성위장염바이러스, 기탁번호 KCTC 10891BP의 유행성설사바이러스 및 기탁번호 KCTC 10890BP의 로타바이러스를 동량의 중량비로 혼합하고 백신 보호제로서 트레할로스 포스페이트 글루타메이트 젤라틴 혼합물을 혼합하여 제조한 혼합생백신.
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제 1항에 의한 혼합생백신을 모돈에 1회 먼저 접종한 후 기탁번호 KCTC 10889BP의 돼지전염성위장염바이러스, 기탁번호 KCTC 10891BP의 유행성설사바이러스 백신을 2회 접종하는 백신의 접종방법.
제 1항에 의한 혼합생백신을 모돈에 2회 먼저 접종한 후 기탁번호 KCTC 10889BP의 돼지전염성위장염바이러스, 기탁번호 KCTC 10891BP의 유행성설사바이러스 2회 접종하는 백신접종방법.