본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 베르게닌 (Bergenin, 4-methoxy-2-[tetrahydro-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)pyran-2-yl]-α-resorcylic acid δ-lactone)을 유효성분으로 포함하는 비타민 C 또는 그의 유도체에 대한 안정화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 비타민 C 또는 그의 유도체 및 (b) 상기 비타민 C 또는 그의 유도체에 대한 안정화제로서의 베르게닌을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물에 포함되는 베르게닌은 하기 화학식 1로 표시되며, 예덕나무에서 분리된 것이나, 화학적으로 합성된 것도 동일한 효과를 나타낼 수 있 다는 것은 당업자에게 있어서 자명하다.
예덕나무는 대극과 (Euphorbiaceae) 식물로서, 일명 야오동 (野梧桐) 또는 적아백 (赤芽柏)이라 불리는 낙엽 소교목으로 우리나라 남부의 산기슭 및 산골짜기에 서식한다. 키는 10 m 되는 것도 있으나 대개 관목 모양이다. 예덕나무는 일반적으로 나무껍질이 위궤양이나 위염, 간 기능 개선 보조제로 사용되고 있다.
예덕나무의 주성분은 베르게닌으로, 간 독성을 억제하거나 (Kim HS et al., J Ethnopharmacol, 2000, Jan;69(1):79-83; 일본특허공개 제11209282호), 또는 혈중 지질을 개선하고 체지방을 감소시키는 것으로 알려져 있다 (일본특허공개 제1180869호). 그러나, 베르게닌이 비타민 C를 안정화하는데 기여할 수 있다는 사실에 대해서는 공지된 바 없다.
본 발명의 조성물에 포함되는 베르게닌이 예덕나무로부터 분리되는 경우는 다음과 같은 단계에 의해 분리될 수 있다:
(ⅰ) 예덕나무를 깨끗한 물로 세척한 다음 건조하여 분말화하는 단계;
(ⅱ) 상기 예덕나무 분말을 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 1,3-부틸렌글리콜, (h) 헥산 및 (i) 디에틸에테르로 구성된 군으로부터 선택되는 유기용매를 추출용매로 사용하여 추출하는 단계; 및
(ⅲ) 크로마토그래피를 이용하여 상기 단계 (ⅱ)의 추출물로부터 베르게닌을 분리 및 정제하는 단계.
상기 단계 (ⅰ)에 있어서, 예덕나무는 예덕나무의 다양한 기관 또는 부분 (예: 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지, 껍질 및 과실 등)을 의미하고, 바람직하게는 줄기, 가지, 껍질 또는 뿌리, 보다 바람직하게는 줄기를 의미한다.
상기 단계 (ⅱ)에 있어서, 유기용매를 추출용매로 이용한 추출 단계는 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서 수행할 수 있다.
한편, 예덕나무로부터 베르게닌을 분리하는 방법은 상술한 분리 방법뿐만 아니라 통상적인 정제 과정도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리 방법, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 방법 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 베르게닌은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정을 수행함으로써 분말 상태로 제조될 수도 있다.
또한, 본 발명의 조성물에 포함되는 베르게닌은 화학적으로 합성된 베르게닌을 사용하여도 동일한 효과를 얻을 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 시그마사의 베르게닌 모노하이드레이트 (시그마사, B6776)를 사용하나, 반드시 상기 제조사에서 제조된 것에만 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 베르게닌의 양은 화장료 조성물의 총 중량에 대해 0.00001-20.0 중량%로 포함되며, 0.0001-5.0 중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 화장료 조성물에 베르게닌과 함께 포함되는 상기 비타민 C 및 그의 유도체의 양은 화장료 조성물의 총 중량에 대해 0.0001-20.0 중량%로 포함되며, 0.1-10.0 중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 비타민 C를 안정화하기 위해 조성물에 포함되는 베르게닌의 함량이 0.00001 중량% 이하이면 비타민 C를 안정화하기에 부족하고, 20.0 중량% 이상이면 비타민 C 안정화에 상승적인 효과를 나타내지 못하며 제형의 안정화에도 큰 영향을 미칠 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서 유효성분으로 이용되는 비타민 C 또는 그의 유도체는 화장료 원료로서 개발된 종래의 어떠한 비타민 C 유도체도 포함한다. 예를 들어, 상기 비타민 C 또는 그의 유도체는 아스코르브산, 아스코르브산의 다양한 염 (예: 소듐 아스코베이트, 마그네슘 아스코베이트, 소듐 아스코빌 포스페이트 및 아 스코빌 마그네슘 포스페이트) 및 아스코르브산의 에스테르 (예: 아스코빌 아세테이트, 아스코빌 프로피오네이트, 아스코빌 팔미테이트 및 아스코빌 스테아레이트)를 포함한다.
본 명세서에서, 비타민 C 또는 그의 유도체를 언급하면서 사용되는 용어 "안정"은 열, 빛 및 산소와 같은 산화-유발 인자에 의해 비타민 C 또는 그의 유도체가 산화되는 것을 억제하는 작용을 의미한다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물은 비타민 C 또는 그의 유도체를 유효성분으로 포함하기 때문에, 본 발명의 화장료 조성물은 비타민 C 또는 그의 유도체에 대하여 종래에 알려진 다양한 용도로 표시될 수 있다.
따라서, (a) 비타민 C 또는 그의 유도체 및 (b) 상기 비타민 C 또는 그의 유도체에 대한 안정화제로서의 베르게닌을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은, 주름개선용 화장료 조성물, 미백용 화장료 조성물, 피부노화 방지용 화장료 조성물 및 자외선 차단용 화장료 조성물로 표시될 수 있다.
본 발명의 조성물 및 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 베르게닌 이외에 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파 우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 사용될 때에는 유연 화장수 (스킨), 수렴 화장수, 영양 화장수 (밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸 렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 베르게닌에 의해 비타민 C 또는 그의 유도체가 안정화됨으로써 온도 변화에 따른 제형의 안정성이 뛰어나고, 온도 변화 및 시간에 따른 역가 보존성이 우수하다.
따라서, 비타민 C를 효과적으로 안정화하는 베르게닌과 비타민 C를 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 비타민 C의 생리활성 즉, 미백 효과 (예; 티로시나제 활성 저해), 주름개선 효과 및 항산화 효과 (예; 자유 라디칼 소거능) 등을 효과적으로 피부에 전달할 수 있다. 또한, 베르게닌을 유효성분으로 함유하는 비타민 C 안정화용 조성물은 비타민 C 제제와 함께 피부에 도포됨으로써 불안정한 비타민 C 제제의 안정화에 기여할 수 있으며, 이에 의해 비타민 C의 생리활성을 효과적으로 나타내도록 할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
이하 아래의 처방예를 통하여 베르게닌과 비타민 C를 함유하는 화장료의 처방예를 제시하나 모든 처방이 이에 한정되는 것은 아니다.
본원발명의 처방예에 사용된 베르게닌은 시그마사의 베르게닌 모노하이드레이트 (시그마사, B6776)를 이용하였다
처방예 1: 유연 화장수
비타민 C와 베르게닌을 함유한 화장료 중 유연 화장수의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(중량%) |
비타민 C
|
2.0
|
1,3-부틸렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
PEG 1500 |
1.0 |
소듐히알루로네이트 |
1.0 |
폴리솔베이트 20 |
0.5 |
에탄올 |
8.0 |
베르게닌
|
0.1
|
방부제, 색소 |
적량 |
벤조페논-9 |
0.05 |
향 |
미량 |
정제수 |
잔량 |
합계 |
100 |
처방예 2: 영양화장수
비타민 C와 베르게닌을 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(중량%) |
비타민 C
|
2.0
|
1,3-부틸렌글리콜 |
5.0 |
글리세린 |
4.0 |
세테아릴알콜 |
0.8 |
글리세릴스테아레이트 |
1.0 |
트리에탄올아민 |
0.13 |
토코페릴 아세테이트 |
0.3 |
유동 파라핀 |
5.0 |
스쿠알란 |
3.0 |
마카다미아 너트 오일 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄 세스퀴올레이트 |
0.5 |
카르복시비닐 폴리머 |
1.0 |
베르게닌
|
1.0
|
방부제, 색소 |
적량 |
향 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합계 |
100 |
처방예 3: 영양 크림
비타민 C와 베르게닌을 함유한 화장료 중 영양 크림의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(중량%) |
비타민 C
|
3.0
|
세테아릴알콜 |
1.5 |
스테아르산 |
1.5 |
글리세릴 스테아레이트 |
1.5 |
유동 파라핀 |
10.0 |
밀납 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
2.5 |
솔비탄 세스퀴올레이트 |
0.6 |
스쿠알란 |
3.0 |
1,3-부틸렌글리콜 |
3.0 |
글리세린 |
5.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
검은콩 추출물 |
2.0 |
베르게닌
|
1.0
|
토코페릴 아세테이트 |
0.5 |
방부제, 색소 |
적량 |
향 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합계 |
100 |
처방예 4: 맛사지 크림
비타민 C와 베르게닌을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(중량%) |
비타민 C
|
2.0
|
1,3-부틸렌글리콜 |
4.0 |
소듐 마그네슘 실리케이트 |
0.3 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
0.15 |
밀납 |
2.0 |
바셀린 |
5.0 |
글리세릴 스테아레이트 |
1.5 |
토코페릴 아세테이트 |
0.1 |
폴리솔베이트 60 |
2.0 |
솔비탄 세스퀴올레이트 |
0.8 |
세테아릴알콜 |
2.0 |
유동 파라핀 |
40.0 |
베르게닌
|
1.0
|
방부제 |
적량 |
향 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합계 |
100 |
처방예 5: 팩
비타민 C와 베르게닌을 함유한 화장료 중 팩의 처방예는 다음과 같다
성분 |
함량(중량%) |
비타민 C
|
2.0
|
글리세린 |
2.0 |
PEG 4000 |
1.5 |
폴리비닐알콜 |
12.5 |
에탄올 |
7.0 |
경화피마자유 |
0.8 |
셀룰로오스검 |
0.3 |
베르게닌
|
1.0
|
방부제, 색소 |
적량 |
향 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합계 |
100 |
처방예 6: 에센스
비타민 C와 베르게닌을 함유한 화장료 중 에센스의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(중량%) |
비타민 C
|
2.0
|
1,3-부틸렌글리콜 |
5.0 |
PEG 1500 |
2.0 |
알란토인 |
0.1 |
DL-판테놀 |
0.3 |
EDTA-2Na |
0.02 |
히드록시에틸 셀룰로오스 |
0.1 |
소듐히알루로네이트 |
8.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
0.2 |
트리에탄올아민 |
0.18 |
옥틸도데세스-16 |
0.4 |
에탄올 |
6.0 |
베르게닌
|
1.0
|
향, 방부제, 색소 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합계 |
100 |
비교 처방예 1
베르게닌을 함유하지 않고 비타민 C만을 함유하는 에센스 제형의 비교 처방예 1, 2 및 3은 다음과 같다.
성분 |
비교처방예 1
|
비교처방예 2
|
비교처방예 3
|
함량(중량%) |
함량(중량%) |
함량(중량%) |
비타민 C
|
2.0
|
-
|
-
|
글리세린 |
10.0 |
10.0 |
10.0 |
1,3-부틸렌글리콜 |
5.0 |
5.0 |
5.0 |
PEG 1500 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
알란토인 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
DL-판테놀 |
0.3 |
0.3 |
0.3 |
EDTA-2Na |
0.02 |
0.02 |
0.02 |
히드록시에틸 셀룰로오스 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
소듐히알루로네이트 |
8.0 |
8.0 |
8.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
트리에탄올아민 |
0.18 |
0.18 |
0.18 |
옥틸도데세스-16 |
0.4 |
0.4 |
0.4 |
에탄올 |
6.0 |
6.0 |
6.0 |
베르게닌
|
-
|
2.0
|
-
|
향, 방부제, 색소 |
적량 |
적량 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
잔량 |
잔량 |
합계 |
100 |
100 |
100 |
실험예 1: 온도 변화에 따른 안정성 시험
본 발명에서 제조한 화장료 제형의 안정성을 시험하기 위하여, 비타민 C만을 함유한 에센스 (비교 처방예 1) 및 비타민 C와 베르게닌을 함유한 에센스 (처방예 6)를 각각 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 1주 동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 1주 동안 보관한 후 변색 정도를 비교 측정하였다
이때 제품 변색 정도는 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.
0: 변화 없음 1: 극히 조금 변함 2: 조금 변함
3: 조금 심하게 변함 4: 심하게 변함 5: 극히 심하게 변함
온도 변화에 따른 변색 평가 안정성 시험 결과
온도 |
실험물질 변색 정도 |
비교 처방예 1 |
처방예 6 |
45℃ |
4.0 |
1 |
4℃ |
3.0 |
0 |
상기 표 8에서 보는 바와 같이, 비타민 C와 함께 베르게닌을 함유하는 처방예 6의 화장료는 베르게닌을 함유하지 않고 비타민 C만을 함유하는 비교 처방예 1의 화장료에 비해 변색 정도가 훨씬 약함을 알 수 있었다. 따라서, 비타민 C에 의한 화장료의 온도 안정성의 저하가 베르게닌의 첨가에 의해 극복됨을 알 수 있었다.
실험예 2: 온도 변화와 시간에 따른 역가 보존성 시험
비타민 C를 함유하는 화장료에 베르게닌이 함유되었을 때의 화장료 제형의 안정성을 시험하기 위하여, 비타민 C만을 함유한 에센스 (비교 처방예 1) 및 비타민 C와 베르게닌을 함유한 에센스 (처방예 6)를 각각 0℃, 20℃ 및 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 보관하였다. 12주 동안 보관한 후 잔존하는 L-아스코르브산의 양을 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 사용하여 측정하였다.
온도 변화 및 시간 경과에 따른 제형의 역가 보존성
처치군 |
0 주/잔존율 |
1 주/잔존율 |
2 주/잔존율 |
4 주/잔존율 |
비교 처방예 1 |
0℃ |
100% |
93% |
85% |
71% |
20℃ |
100% |
89.1% |
77.4% |
50.1% |
45℃ |
100% |
82.1% |
51.1% |
5.1% |
처방예 6 |
0℃ |
100% |
98.9% |
98.7% |
98.1% |
20℃ |
100% |
98.7% |
97.8% |
97.7% |
45℃ |
100% |
98.1% |
97.9% |
97.3% |
상기 표 9에서 알 수 있는 바와 같이, 비타민 C와 베르게닌을 함유하는 본 발명의 에센스 (처방예 6)는 1주 정도까지는 L-아스코르브산의 함량이 거의 변화하지 않으며 (잔존율 98% 이상), 4주 경과 후에도 약 97.3%이상의 L-아스코르브산이 검출되었다. 반면, 비타민 C 만을 함유한 에센스 (비교 처방예 1)는 1주 경과 후 L-아스코르브산의 잔존율이 적어지기 시작하여 4주에는 매우 적은 잔존율을 보였다.
실험예 3: 미백 효과 실험
베르게닌에 의한 비타민 C의 안정화 효과를 확인하기 위해 비타민 C의 생리활성인 미백 효과를 확인하였다.
상온조건에서 L-티로신 (0.3 ㎎/㎖, 시그마사) 1.0 ㎖에 포타슘포스페이트 버퍼 용액 (pH 6.8, 0.1 M, 시그마사) 1.0 ㎖과 각각의 샘플을 넣은 뒤, 37℃에서 10-20분간 유지한 후 티로시나제 (1250 units/㎖, 시그마사) 0.1 ㎖을 넣고 10분간 유지한 후 얼음물로 구성된 냉동조건에서 반응을 종결지었다. 반응한 각 샘플을 475 nm에서 흡광도를 측정한 뒤 하기 수학식 1에 따라 티로시나제 활성 저해율 (%)을 계산하였다. 각 샘플들은 제형을 포타슘포스페이트 버퍼 용액으로 전처리한 후 0.5 ㎛ 필터로 필터한 후 사용하였다. 화장료를 처리하지 않은 것을 대조군으로 사용하였다.
샘플 |
처리 농도 |
티로시나제 저해율 (%) |
평균 저해율 (%) |
처방예 6 |
1.5 ㎍/㎖ |
20.0 |
17.7 |
15.4 |
17.7 |
14 ㎍/㎖ |
43.4 |
42.8 |
45.1 |
43.8 |
28 ㎍/㎖ |
74.8 |
70.5 |
77.5 |
74.2 |
42 ㎍/㎖ |
94.7 |
94.0 |
95.9 |
94.8 |
60 ㎍/㎖ |
96.8 |
95.7 |
96.9 |
96.4 |
비교 처방예 1 |
14 ㎍/㎖ |
21.7 |
24.0 |
23.0 |
22.9 |
28 ㎍/㎖ |
61.3 |
66.9 |
60.5 |
62.9 |
42 ㎍/㎖ |
93.2 |
94.0 |
95.9 |
93.4 |
60 ㎍/㎖ |
95.5 |
95.7 |
95.9 |
95.7 |
70 ㎍/㎖ |
95.9 |
95.9 |
95.9 |
95.9 |
비교 처방예 2 |
10.5 ㎎/㎖ |
2.1 |
1.2 |
2.7 |
2.0 |
15.0 ㎎/㎖ |
3.0 |
4.0 |
3.5 |
3.5 |
45.0 ㎎/㎖ |
3.5 |
4.5 |
3.5 |
3.83 |
75.0 ㎎/㎖ |
4.5 |
5.5 |
4.5 |
4.83 |
80.0 ㎎/㎖ |
5.4 |
6.4 |
8.4 |
6.73 |
비교 처방예 3 |
10.0 ㎎/㎖ |
1.2 |
2.3 |
4.0 |
2.5 |
30.0 ㎎/㎖ |
3.0 |
5.0 |
4.0 |
4.0 |
60.0 ㎎/㎖ |
4.0 |
4.0 |
5.4 |
4.5 |
120.0 ㎎/㎖ |
5.4 |
5.4 |
3.0 |
4.6 |
240.0 ㎎/㎖ |
5.4 |
6.4 |
3.0 |
5.6 |
상기 표 10에서 보는 바와 같이, 비교 처방예 2 및 3은 티로시나제 저해 효과가 거의 없음을 알 수 있고, 비타민 C와 베르게닌을 함께 포함하는 처방예 6은 비타민 C만을 포함하는 비교예 1에 비해 티로시나제 저해율이 약 20%이상 높았다. 따라서, 베르게닌이 비타민 C를 효과적으로 안정화시킴을 알 수 있었다.
실험예 4: 자유 라디칼 소거능
상기 처방예 6과 비교 처방예 1, 2 및 3에 대하여 자유 라디칼 소거능을 다음과 같이 측정하였다. 블로이스에 의한 네이쳐 잡지 (Blois, M. S., Nature (1958) vol 181, 1190)에 기재된 1,1-디페닐-2-피크릴-히드라진 (DPPH)을 이용하는 방법으로 자유 라디칼 소거능을 측정하였다. DPPH는 비교적 안정한 자유 라디칼로서, 라디칼 상태로 존재시에는 517 ㎚에서 최대 흡광을 보이며, 소거되면 흡광성을 잃는다. DPPH는 시그마사의 제품을 사용하였으며, 0.15 mM의 농도로 메틸알코올에 녹여 사용하였다. 먼저 상기 처방예 6과 비교 처방예 1, 2 및 3의 제형을 포타슘포스페이트 버퍼 용액으로 전-처리하여 0.5 μm 필터로 필터한 후, 각각 1% 농도로 제조하여 96-웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕씩 넣었다. 여기에 DPPH 용액을 100 ㎕씩 첨가한 다음 상온에서 30분간 방치한 후 마이크로 플레이트 리더 (Micro platereader, 바이오텍 EL-340)를 이용하여 517 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때 대조군으로는 처방예 6과 비교 처방예의 제형 대신 같은 농도의 전분용액 100 ㎕를 사용하였다.
처치군 |
자유 라디칼 소거능 (%) |
평균 소거능(%) |
1차 실험 |
2차 실험 |
3차 실험 |
처방예 6 |
94.5 |
95.7 |
94.7 |
95.0 |
비교 처방예 1 |
90.5 |
92.7 |
91.9 |
91.7 |
비교 처방예 2 |
9.4 |
9.8 |
10.1 |
9.77 |
비교 처방예 3 |
3.3 |
2.7 |
3.5 |
3.20 |
상기 표 11에서 보는 바와 같이, 비타민 C와 베르게닌을 함께 포함하는 처방예 6은 비타민 C만을 포함하는 비교예 1에 비해 자유 라디칼 소거능이 훨씬 높았으며, 베르게닌만을 함유하는 비교예 2와 아무것도 함유하지 않는 비교예 3은 자유 라디칼 소거능이 거의 없었다. 따라서, 베르게닌에 의해 비타민 C가 안정화됨으로써 비타민 C의 항산화력이 보다 증가함을 알 수 있었다.