KR100666606B1

KR100666606B1 - 클로트리마졸 함유 직장 좌제 조성물

Info

Publication number: KR100666606B1
Application number: KR1020050049286A
Authority: KR
Inventors: 김정애; 최한곤; 백승환; 권준범; 오유경; 정태천; 용철순; 류원석; 한성수
Original assignee: 영남대학교 산학협력단
Priority date: 2005-06-09
Filing date: 2005-06-09
Publication date: 2007-01-09
Also published as: KR20060130933A

Abstract

본 발명은 간독성을 유발하지 않는 클로트리마졸 함유 직장 좌제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 전체 조성물에 대하여 폴록사머 50 내지 70 중량%, 프로필렌글리콜 20 내지 40 중량%, 및 클로트리마졸 5 내지 20 중량%를 포함하는 직장 투여용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 직장 투여용 조성물은 클로트리마졸 경구 투여시 야기되는 간독성을 방지하면서도 뛰어난 항암효과를 발휘할 수 있다.

클로트리마졸, 직장 좌제, 항암효과, 간독성

Description

클로트리마졸 함유 직장 좌제 조성물{SUPPOSITORY COMPOSITION FOR RECTAL ADMINISTRATION COMPRISING CLOTRIMAZOLE}

도 1은 마우스에 클로트리마졸을 경구 투여하거나 클로트리마졸을 포함하는 좌제를 직장에 투여하고 24시간 후에 GOT(Glutamate oxaloacetate transaminase)를 측정한 결과를 나타낸 것이다(Vehicle은 클로트리마졸을 투여하지 아니한 경우, Suppository Base: 클로트리마졸 투여없이 좌제기제만을 투여한 경우, Clotrimazole Oral은 클로트리마졸을 경구 투여한 경우, Clotrimazole suppository은 클로트리마졸을 좌제형태로 직장에 투여한 경우를 나타냄).

도 2는 마우스에 클로트리마졸을 경구 투여하거나 클로트리마졸을 포함하는 좌제를 직장에 투여하고 24시간 후에 GPT(Glutamate pyruvate transaminase)를 측정한 결과를 나타낸 것이다(Control은 클로트리마졸을 투여하지 아니한 경우, Suppository Base: 클로트리마졸 투여없이 좌제기제만을 투여한 경우, Clotrimazole Oral은 클로트리마졸을 경구 투여한 경우, Clotrimazole suppository은 클로트리마졸을 좌제형태로 직장에 투여한 경우를 나타냄).

도 3은 마우스에 클로트리마졸을 경구 투여하거나 클로트리마졸을 포함하는 좌제를 직장에 투여하고 24시간 후 지질과산화 정도를 측정한 결과를 나타낸 것이다(Vehicle은 클로트리마졸을 투여하지 아니한 경우, Base: 클로트리마졸 투여없이 좌제기제만을 투여한 경우, Clotrimazole Oral는 클로트리마졸을 경구 투여한 경우, Clotrimazole suppository는 클로트리마졸을 좌제형태로 직장에 투여한 경우를 나타냄).

도 4는 세포내에서의 클로트리마졸의 항암활성을 측정한 결과를 나타낸 것이다(SK-N-SH는 신경암세포, HT-29는 대장암세포, A-172는 신경교암세포, HT-1376는 방광암세포, HepG2는 간암세포를 나타냄).

도 5는 마우스에 클로트리마졸의 경구 투여, 클로트리마졸 좌제 직장 투여, 5-플루오로우라실 좌제 직장 투여 후, 각각 종양세포의 생존률을 측정한 결과를 나타낸 것이다(Vehicle은 클로트리마졸을 투여하지 아니한 경우, Clotrimazole Oral은 클로트리마졸을 경구 투여한 경우, 5-FU suppository는 5-플루오로우라실을 좌제형태로 투여한 경우, Clotrimazole suppository는 클로트리마졸을 좌제형태로 투여한 경우를 나타냄).

도 6는 클로트리마졸 경구 투여, 클로트리마졸 좌제 직장 투여, 5-플루오로우라실 좌제 직장 투여 후, 종양보유 생쥐의 15일간 생존률에 미치는 영향을 측정한 결과를 나타낸 것이다(Clotrimazole Oral은 클로트리마졸을 경구 투여한 경우, Clotrimazole suppository는 클로트리마졸을 좌제형태로 투여한 경우, 5-FU suppository는 5-플루오로우라실을 좌제형태로 투여한 경우를 나타냄).

[산업상 이용분야]

본 발명은 간독성을 유발하지 않는 클로트리마졸 함유 직장 좌제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 항암효과가 있으나 경구 투여시 나타나는 클로트리마졸의 간독성을 방지하기 위하여 클로트리마졸을 직장 투여용으로 제조한 직장 좌제 조성물에 관한 것이다.

[종래기술]

환자의 편의와 생산기술의 측면에서, 정제는 약학적 제제의 경구 투여를 위해 가장 매력적인 형태이지만, 어떤 경우 좌약에 의한 직장내 투여도 유리할 수 있다. 클로트리마졸은 진균의 아미노산 운송을 방해하여 단백질 합성을 억제함으로써 세포막에 손상을 주어 항진균작용을 나타내는 물질로 광범위 살진균제, 무좀약 등에 사용되고 있다. 특히 클로트리마졸은 고용량의 경구 투여시 간독성이 나타나는 부작용이 있다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명의 목적은 간독성을 유발하지 아니하고 클로트리마졸을 함유하는 직장 좌제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 폴록사머 50 내지 70 중량%, 프로필렌글리콜 20 내지 40 중량%, 및 클로트리마졸 5 내지 20 중량%를 포함하는 직장 투여용 좌제 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

클로트리마졸은 1-[(2-클로로페닐)디페닐메틸]-1H-이미다졸 (1-[(2-Chlorophenyl)diphenylmethyl]-1H-imidazole)의 화합물로 클로트리마졸의 이미다졸 링이 간독성을 나타내는 것으로 알려져 있다. 따라서 클로트리마졸이 포함된 조성물을 경구투여 하는 경우, 간을 거치면서 독성이 나타나므로 본발명자들은 간 초회통과를 하지 아니하는 클로트리마졸을 포함하는 좌제 형태의 조성물에 착안하였다. 좌제의 경우는 간의 초회통과없이 표적조직에 도달하여 약효가 발현된 후 이미다졸 링이 대사되기 때문에 간독성이 나타나지 아니하고 약효가 나타나기를 원하는 조직에서 효과를 얻을 수 있게 된다. 이러한 좌제형태의 조성물에 있어서는 직장좌제 또는 질 좌제가 많이 사용된다. 이 중 질 좌제의 경우는 질을 표적조직으로 함으로써 질 내의 간염균 제거만이 가능하지만, 직장좌제는 직접 직장에 삽입하여 직장 내에 위치한 많은 혈관을 통하여 약물의 전신적 약효 또는 일정 표적조직에 대하여 항균치료를 원하는 경우에 사용할 수 있는 형태이다.

본 발명에 따른 직장 투여용 좌제 조성물에 함유되는 각 구성성분에 대하여 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따른 신규한 클로트리마졸을 함유한 직장 투여용 좌제 조성물 중에 기제로서 함유되는 폴록사머는 점막에 손상을 입히지 않는 것으로 알려져 있다. 본 발명에서는 상업적으로 사용할 수 있는 폴록사머 중에 선택할 수 있으며, 바람직하게는 폴록사머 188을 사용한다. 상기한 폴록사머 기제는 전체 조성물 중에서 50 내지 70 중량%로 함유하는 것이 바람직하다.

상기 조성물을 제조하는 경우 폴록사머 기제의 용용점은 30 내지 36℃인 것이 바람직하다. 만일 기제의 용융점이 30℃ 미만인 경우에는 직장 투여용 조성물이 고상이 되어 체내투여시 약물의 방출이 되지않고, 36℃를 초과하는 경우에는 직장 투여용 조성물이 액상으로 변환되기 때문에 약물투여의 어려움이 있다.

또한 상기 조성물 중 프로필렌글리콜은 실온에서는 맑은 점조성 액체이고, 체내에서 용융되거나 연화되어 유효성분을 방출하는 기제이다. 상기 프로필렌글리콜은 전체 조성물에 대하여 20 내지 40 중량%로 포함하는 것이 바람직하다. 20 중량% 미만인 경우에는 직장 투여용 조성물이 액상으로 되어 투여의 어려움이 있고, 40 중량% 초과인 경우에는 체내투여시 약물의 방출이 저해될 염려가 있기 때문이다.

상기 조성물 중 클로트리마졸은 전체 조성물에 대하여 5 내지 20 중량%를 포함한다.

본 발명에 따른 직장 투여용 좌제 조성물의 제제화 방법은 통상의 당업자들에게 잘 알려진 방법에 의하며, 통상의 부형제, 결합제, 및 붕해제로 이루어지는 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 포함할 수 있다.

상기 첨가제는 전체 조성물을 100중량부로 하는 경우 이에 대하여 50 내지 99.9 중량부, 바람직하게는 60 내지 85 중량부로 더욱 포함한다.

상기 부형제로는 유당, 백당, 포도당, 과당, 만니톨, 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 프리젤라티나이즈드전분, 미결정셀룰로오스, 셀룰로오스 유도체, 덱스트린, 인산일수소칼슘, 인산이수소칼슘, 탄산칼슘, 폴라크릴린칼륨, 아세트산, 탄산 암모늄, 인산암모늄, 붕산, 젖산, 구연산, 인산칼륨, 인산나트륨, 아세트산나트륨, 구연산나트륨, 젖산나트륨, 아스코르빈산, 아스코르빌파르미테이트 등을 사용할 수 있고, 상기 결합제로는 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시에칠셀룰로오스, 히드록시셀룰로오스, 메칠셀룰로오스, 에칠셀룰로오스, 히드록시에칠셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 젤라틴, 덱스트린, 미결정셀룰로오스 등을 사용할 수 있고, 상기 붕해제로는 미결정셀룰로오스, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스, 크로스카멜로오스나트륨, 전분글리콘산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 크로스포비돈 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 정제, 과립제, 건조시럽제 등의 경구 투여용 고형제제로 제형화 할 수 있고, 좌제의 형태로도 제형화 할 수 있다. 그러나 경구 투여시 간독성 부작용이 나타나므로 바람직한 형태로는 간을 거치지 않는 좌제형태의 직장투여이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 기재한다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명의 바람직한 일 실시예일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 클로트리마졸을 포함하는 직장 투여용 좌제 조성물의 제조

다음 표 1에 나타낸 바와 같은 조성으로 폴록사머와 프로필렌글리콜을 55℃에서 1시간동안 혼합하여 균질한 혼합물을 만든 다음, 클로트리마졸을 상기 혼합물에 현탁시켜 25℃ 실온에서 좌제틀에 부어 천천히 냉각시킴으로써 클로트리마졸을 포함하는 직장 투여용 조성물을 제조하였다.

구분	함량(중량%)
클로트리마졸	13.3
폴록사머 188	60.7
프로필렌글리콜	26
합계	100

실시예 2: GOT 및 GPT 측정에 의한 간독성 검토

마우스에 클로트리마졸 320mg/kg 용량을 경구로 투여하거나 또는 실시예 1에 의하여 제조된 클로트리마졸 좌제 320mg/kg 용량을 경구용 존대를 사용하여 직장에 투여하고 간 독성 여부를 확인하기 위하여 GOT와 GPT 수치 변화를 측정하였다. GOT 또는 GPT 기질액 250㎕가 함유된 튜브를 37℃에서 GOT의 경우 60분, GPT의 경우는 30분간 반응시켰다. 그 후 2,4-디니트로 페닐히드라진 250㎕를 혼합하고 흔들어 준 후, 실온에서 20분 배양하고 나서 0.4N NaOH 시약을 2.5ml을 혼합하고 다시 10분간 실온에서 반응시킨 후 505nm에서 흡광도를 측정하고 검량선을 이용하여 GOT 및 GPT값을 결정하여, 도 1 및 도 2에 나타냈다.

이에 도 1에서 나타나듯이, 클로트리마졸 경구 투여군에서는 GOT값이 클로트리마졸을 투여하지 아니한 군에 비하여 현저히 증가한 반면, 클로트리마졸 좌제 투여군에서는 클로트리마졸을 투여하지 아니한 군과 유사한 수치를 보였고, 도 2에 나타나듯이 GPT 수치에 있어서는 특별한 변화가 없었다.

실시예 3: 지질과산화 측정에 의한 간독성 검토

마우스에 클로트리마졸 320mg/kg 용량을 경구로 투여하거나 실시예 1에 의하여 제조된 클로트리마졸 좌제 320mg/kg 용량을 경구용 존대를 사용하여 직장에 투여하고 24시간 후에 간 독성 여부를 확인하기 위하여 지질과산화 정도를 측정하였다. 지질과산화의 정도를 측정하기 위하여 먼저 간조직 무게의 4배의 포스페이트 완충액(Phosphate buffered solution)을 넣어 분쇄하였다. 분쇄된 조직 0.4㎕과 동량의 포스페이트 완충액을 넣어 3 내지 4시간 동안 반응시킨다. 여기에 20% 초산완충액 1.5㎕, 0.8% TBA(2-Thiobarbituric acid) 1.5㎕과 8.1% SDS(Sodium dodecyl sulfate) 0.2㎕을 넣고 95℃에서 10분 동안 반응시킨 후, 4℃에서 5㎕의 n-부탄올:피리딘(14:1)의 혼합용액을 넣고 3000rpm에서 15분간 원심분리하여 층을 분리하였다. 분리된 층 중 상층액 3㎕을 취하여 UV-분광광도계를 이용하여 532nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정방법으로는 말론디알데히드(malondialdehyde; MDA)로 표준 곡선을 그린 후, 흡광도 값은 MDA nmloe/mg protein으로 환산하여 도 3에 나타냈다.

도 3에 나타나듯이, 클로트리마졸을 경구로 투여한 경우는 간조직의 지질과산화가 현저히 증가하나, 클로트리마졸 좌제를 직장에 직접 투여한 경우에는 간조직의 지질과산화의 변화가 없음을 알 수 있었다.

실시예 4: 클로트리마졸의 세포내 항암 활성

4-1. 세포배양

사람의 암 세포주로 HT-29 대장암세포, HT-1376 방광암세포, Hep2G 간암세포, SK-N-SH 신경암세포, A172 신경교암세포는 미국 타이프 컬처 콜렉션(ATCC, Rockville, MA)에서 구입한 것을 사용하였다. 세포를 10% FBS(fetal bovine serum, GIBCO), 200 IU/ml 페니실린, 200mg/ml 스트렙토마이신, 1mM 소듐 피루베이트(sodium pyruvate) 를 포함하는 MEM(powdered Eagle s minimum essential medium, Sigma Chemical CO.)에서 5% CO₂/95% 공기 하의 가습 배양기에서 37℃에서 배양하였다. 이때, 배양 배지는 하루걸러 한번씩 교체하여 주었다. 컨플루언트하게 성장시킨 후, 세포를 트립신처리하여 서브컬처하였다.

4-2. 세포 생존률 측정(MTT 분석법)

세포 생존률을 측정하기 위하여 먼저 4 내지 5일 배양된 세포를 24웰 플레이트에 5X10⁴ 세포/웰의 밀도로 분주하였고, 각 웰의 배지 용량은 1ml로 맞추었다. 그 후 48시간 동안 클로트리마졸 10,20,30,40,50㎕과 각각 배양한 후, 100㎕의 MTT(5g MTT/ℓin H₂O)를 첨가하고 4시간 더 세포를 배양하였다. 그 후, 각각의 세포에 디메틸설폭사이드(DMSO) 200㎕를 세포에 첨가하고 환원된 MTT결정을 용해하기 위하여 피펫으로 혼합하였다. 상대적인 세포 생존률을 540nm 필터를 가진 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Menlo Park, CA)로 스캐닝하여 측정하여 도 4에 나타냈으며, 하기 표 2에서는 각 암세포에 대한 클로트리마졸의 IC₅₀을 나타냈다.

그 결과, 도 4 및 표 2에 나타난 바와 같이 클로트리마졸의 농도 의존적으로 대장암세포, 방광암세포, 간암세포, 신경암세포, 신경교암세포의 생존율이 억제되는 것을 확인하였다.

클로트리마졸의 암세포 생존율 50% 억제(IC₅₀) 농도

암세포주	IC₅₀( M)
HT29	26
HT1376	27
SK-N-SH	26
A172	24
HepG2	30

실시예 5: 종양성장 억제활성 및 생존률 증가 효과 검토

마우스의 오른쪽 옆구리 표피하에 신제닉 뮤라인 콜론 아데노칼시노마 세포주(syngenic murine colon adenocarcinoma cell line) CT-26(1X10⁶, 100 ㎕ PBS)를 주입하여 종양이 0.2cm³ 크기로 자라도록 했다. 상기 종양을 갖는 마우스에 실시예 1에 의하여 제조된 클로트리마졸 좌제를 320mg/kg 용량으로 경구용 존대를 사용하여 직장에 투여한 후, 3일, 6일 및 9일째의 피부 종양의 크기를 측정하여 도 5에 나타냈다.

도 5에 나타나듯이, 클로트리마졸 좌제 조성물은 클로트리마졸을 경구로 투여하였을 때보다 종양억제 효과가 더 월등하였으며, 고형암 치료제로 임상에서 널리 쓰이는 5-플루오로우라실 좌제의 종양억제 효과와 동일하게 나타났다.

또한, 종양을 보유한 마우스에 실시예 1에 의하여 제조된 클로트리마졸 좌제를 320mg/kg 용량으로 경구용 존대를 사용하여 직장에 투여한 경우, 클로트리마졸 320mg/kg 용량을 경구 투여를 투여한 경우, 및 5-플루오로우라실 좌제를 120mg/kg 용량으로 투여한 경우에 대하여 각각 2주간 생존률을 측정하여 도 6에 나타내었다. 도 6에서 나타나듯이, 클로트리마졸을 경구 투여한 군에서는 생존률이 현저히 낮게 나타났으며, 클로트리마졸 좌제 조성물을 투여한 군에서는 5-플루오로우라실 좌제를 투여한 군과 큰 차이가 없는 것으로 보아 클로트리마졸을 포함하는 직장 좌제의 경우는 간 독성이 없으면서 항종양 효과가 5-플루오로우라실과 동등한 것으로 판단된다.

클로트리마졸을 함유하는 직장 투여용 좌제 조성물은 경구투여시 야기되는 클로트리마졸의 심각한 부작용인 간독성을 유발하지 않으면서 효율적인 종양억제 효과를 나타내므로 각종 암 치료에 매우 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

전체 조성물에 대하여 폴록사머 50 내지 70 중량%, 프로필렌글리콜 20 내지 40 중량%, 및 클로트리마졸 5 내지 20 중량%를 포함하는 직장 투여용 좌제 조성물.
제 1항에 있어서, 폴록사머의 용융점이 30 내지 36℃인 것을 특징으로 하는 직장 투여용 좌제 조성물.
제 1항에 따른 조성물 15 내지 40 중량%, 및 부형제, 결합제, 및 붕해제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제 60 내지 85 중량%를 함유하는 직장 투여용 좌제 조성물.