KR100636578B1 - 치료용 유전자 발현 염기서열 및 유전자 치료용 약제 - Google Patents
치료용 유전자 발현 염기서열 및 유전자 치료용 약제 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100636578B1 KR100636578B1 KR1020017012338A KR20017012338A KR100636578B1 KR 100636578 B1 KR100636578 B1 KR 100636578B1 KR 1020017012338 A KR1020017012338 A KR 1020017012338A KR 20017012338 A KR20017012338 A KR 20017012338A KR 100636578 B1 KR100636578 B1 KR 100636578B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- gene
- seq
- dna
- nucleotide sequence
- therapeutic
- Prior art date
Links
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 59
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 123
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 43
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 43
- 210000004085 squamous epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 239000002585 base Substances 0.000 description 39
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 30
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 108010088201 squamous cell carcinoma-related antigen Proteins 0.000 description 15
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 6
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 102100036383 Serpin B3 Human genes 0.000 description 5
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 4
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 4
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 3
- 101150076489 B gene Proteins 0.000 description 3
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 3
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 206010014970 Ephelides Diseases 0.000 description 3
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 3
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 3
- -1 nucleic acid compound Chemical class 0.000 description 3
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 2
- 101150064015 FAS gene Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108010046163 Glycogen Phosphorylase Proteins 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 208000003019 Neurofibromatosis 1 Diseases 0.000 description 2
- 208000024834 Neurofibromatosis type 1 Diseases 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 102100033571 Tissue-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 2
- 108010051583 Ventricular Myosins Proteins 0.000 description 2
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009391 cell specific gene expression Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-ZVUFCXRFSA-N 1,25-dihydroxy vitamin D3 Chemical compound C1([C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=CC=C1C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-ZVUFCXRFSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150000874 11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 1
- 101800000504 3C-like protease Proteins 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101150106774 9 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090001067 Angiotensinogen Proteins 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 101710191059 Ankyrin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010008150 Apolipoprotein B-100 Proteins 0.000 description 1
- 108010024284 Apolipoprotein C-II Proteins 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 101150065175 Atm gene Proteins 0.000 description 1
- 108091005753 BiP proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150029409 CFTR gene Proteins 0.000 description 1
- 101150098688 CLCN5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010022514 Collagen Type V Proteins 0.000 description 1
- 101150065984 Comp gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 101100044298 Drosophila melanogaster fand gene Proteins 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 108700041152 Endoplasmic Reticulum Chaperone BiP Proteins 0.000 description 1
- 102100021451 Endoplasmic reticulum chaperone BiP Human genes 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000044168 Fibroblast Growth Factor Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000003975 Fibroblast growth factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000378 Fibroblast growth factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101150112743 HSPA5 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005331 Hepatitis D Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101001050039 Homo sapiens Anosmin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000635878 Homo sapiens Myosin light chain 3 Proteins 0.000 description 1
- 101100518996 Homo sapiens PAX3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001074444 Homo sapiens Polycystin-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 101100444898 Mus musculus Egr1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 1
- 108010000591 Myc associated factor X Proteins 0.000 description 1
- 101710150912 Myc protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005604 Myosin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 102000016349 Myosin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101150083321 Nf1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000981993 Oncorhynchus mykiss Myelin proteolipid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 1
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 101150081664 PAX6 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101100335198 Pneumocystis carinii fol1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 description 1
- 241000205156 Pyrococcus furiosus Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101150077555 Ret gene Proteins 0.000 description 1
- 101150091821 SLC3A1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100111629 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) KAR2 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000053227 Themus Species 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- 108050006955 Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 108010030743 Tropomyosin Proteins 0.000 description 1
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000726445 Viroids Species 0.000 description 1
- 101150023625 WAS gene Proteins 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 101150049512 ald gene Proteins 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 101150076397 blm gene Proteins 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 101150102771 gch gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 101150028578 grp78 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000029570 hepatitis D virus infection Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150087532 mitF gene Proteins 0.000 description 1
- 108010059725 myosin-binding protein C Proteins 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 101800000607 p15 Proteins 0.000 description 1
- 108700042657 p16 Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101150091331 plp gene Proteins 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004808 supercritical fluid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 108010014402 tyrosinase-related protein-1 Proteins 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4731—Recognins, e.g. malignin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
치료용 유전자 발현 염기서열 및 유전자 치료용 약제가 개시된다. 편평상피세포에 치료용 유전자를 특이적으로 발현시키는, 하기 (a) ∼ (d) 중 어느 하나의 치료용 유전자 발현 염기서열이 개시된다.
(a) 서열번호 1 로 표시되는 염기서열
(b) 서열번호 18 로 표시되는 염기서열
(c) 서열번호 17 로 표시되는 염기서열
(d) 서열번호 16 로 표시되는 염기서열.
또한 상기 어느 하나의 염기서열의 하류영역에 치료용 유전자를 갖고, 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 유전자 치료용 약제가 개시된다.
편평상피세포*유전자치료*조직특이적
Description
본 발명은 치료용 유전자를 편평 상피세포에 특이적으로 발현시키는 염기서열 및 이 염기서열을 사용한, 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 유전자 치료용 약제에 관한 것이다.
유전자 치료는 질병의 치료를 목적으로 하여 유전자 또는 유전자를 도입한 세포를 사람 내에 투여하는 치료법이며, 현재의 치료법을 대신하는 새로운 치료법으로서 주목받고 있다. 1990 년에 미국에서 아데노신 디아미나아제 (ADA) 결손에 의한 선청성 중증복합형 면역부전증인 두 아이에 대한 유전자 치료가 실시된 이래, 1996 년말까지 세계에서 2100 건 이상의 유전자 치료가 실시되고 있다. 일본에서도 ADA 결손환자에 대해 1995 년 8 월, 일본 최초의 유전자 치료가 개시되었다.
유전자 치료연구에서, 유전자 치료용 약제의 안전성을 높이는 연구는 필요불가결한 기술이며, 예컨대 치료의 대상인 세포에만 치료용 유전자를 도입한다는 타깃팅 수법은 투여한 유전자 치료용 벡터의 쓸데없는 확산을 방지함으로써 유효성을 높일 뿐만 아니고, 부작용의 원인이 될 수 있는 외래 유전자의 바람직하지 않은 장기, 조직에서의 발현을 저감한다는 의미에서도 필요불가결한 기술이다.
예컨대 사람 면역부전 바이러스 (HIV) 를 기초로 제작된 HIV 벡터는 그 표면에 존재하는 외피 단백질 (Envelope proteins) 이 CD4 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 성질을 이용하여 CD4 양성 세포에만 유전자 도입이 가능한 것 (Shimada T., et al., J. Clin. Invest., 88, 1043, 1991), 몰로니마우스 백혈병 바이러스 (Molony murine leukemia virus) 의 외피를 헤레글린 (heregulin) 으로 수식한 재조합 바이러스 벡터는 상피세포 성장인자 (Epidermal growth factor receptor : EGFR) 를 과잉 발현하고 있는 폐암세포 등의 세포에만 유전자 도입이 가능한 것 (Han X. L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 21, 9747, 1995), 그리고 암세포에 엽산수용체가 과잉 발현하고 있는 것을 이용하여 암세포에 대한 친화성을 높인 엽산결합 폴리-L-리신 (Gottschalk S., et al., Gene Ther., 1, 3, 185, 1994, Lee R. J., Huang L., J. Biol. Chem., 271, 14, 8481, 1996) 등의 기술이 개시되어 있다.
한편, 치료용 유전자가 치료의 대상이 되는 조직에 대하여 특이적으로 발현되는 시스템 (조직 특이적 발현 시스템) 의 개발도 진행되고 있다. 조직 특이적 발현 시스템은 특정 장기, 조직에서만 발현되는 단백질에 주목하고, 이 단백질을 코드하는 유전자의 프로모터 및/또는 인핸서 (Enhancer) 등의 유전자 발현을 제어하는 유전자 서열을 이용하는 기술이다.
이들 기술은 이미 공지되어 있는 총설 (Gabi U. Dachs, etal., Oncology Res., 9, 313, 1997) 등에 의해 개시되어 있다. 조직 특이적인 프로모터/인핸서로서는 간세포암에서 특이적으로 발현이 발견되는 α- 페토프로테인 (Alpha-Fetoprotein : AFP) 의 프로모터/인핸서, 전립선암에서 발현이 증가하는 전립선암 특이항원 (Prostate specific antigen : PSA) 의 프로모터영역, 내피세포에서 특이적인 폰 빌레브란드 (von Willebrand) 인자 (vWf) 의 프로모터 및 tie-2/tek 의 프로모터, 유방암에서 발현증가가 발견되는 DF3 의 프로모터, 간장 특이적으로 발현되는 알부민의 인핸서, 흑색종(Melanoma) 세포에서의 특이적 발현이 가능한 티로시나아제 (Tyrosinase) 의 프로모터, 신경교종(Glioma) 세포에 특이적인 미엘린 염기성 단백질 (Myelin Basic Protein : MBP) 의 프로모터, 골육종세포 (Osteosarcoma) 특이적인 오스테오칼신 (Osteocalcin) 의 프로모터 등이 알려져 있다.
질환 특이적인 것으로는, 다양한 암에서 발현성의 증가가 발견되는 암태아성 항원 (Carcinoembryonic Antigen : CEA) 의 프로모터, 유방암 또는 췌장암에서 발현성의 상승이 발견되는 HER/neu 의 프로모터, 세포의 증식, 분화, 아폽토시스 (Apoptosis) 에 관련한 Myc 단백질 패밀리/Max 단백질 복합체가 작용하여 전사를 촉진하는 Myc-Max 반응요소 (response element) 를 들 수 있다. 또 다양한 조건에 의해 발현이 조절되는 것으로서, 방사선을 조사했을 때의 초기 성장 반응-1 유전자 (Early Growth Response-1 Gene: Egr-1) 의 프로모터 또는 조직형 플라스미노겐 활성화제 (Tissue type plasminogen activator : t-PA), 글루코오스의 고갈 또는 산소결핍상태 등의 종양 특이적 조건에서 유도되는 GRP78/BiP 단백질의 프로모터, 저산소상태에서 특이적으로 발현이 발견되는 저산소증 반응요소 (Hypoxia Response Element : HRE) 등이 보고되고 있다.
그러나, 전체 암의 약 60 % 에 이른다고 하는 자궁경부암, 피부암, 두경부암, 식도암, 폐암 등의 편평상피암에 대해서는, 특이적으로 유전자를 발현시키는 시스템이 존재하지 않아 이들 편평상피암에 대해서 유효한 유전자 치료를 실시하는 시스템이 없었다.
(발명의 개시)
본 발명은 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 염기서열을 제공하는 것을 목적으로 한다. 또 이 염기서열을 사용하는 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 유전자 치료용 약제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 상기 과제에 대하여 예의 검토한 결과, 편평상피세포에만 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 것이 가능한 신규 염기서열을 발견하였다. 또한 이러한 신규 염기서열은 정상 편평상피세포와 비교하여 SKGⅢa 등의 편평상피암세포에서 유전자 발현능력이 더욱 증강되는 것을 발견하고 본 발명의 완성에 이른 것이다.
즉, 본 발명은 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 치료용 유전자 발현 염기서열에 관한 것이다.
보다 상세하게는 편평상피세포에 치료용 유전자를 특이적으로 발현시키는, 하기 (a) ∼ (d) 중 어느 하나의 치료용 유전자 발현 염기서열에 관한 것이다.
(a) 서열번호 1 로 표시되는 염기서열
(b) 서열번호 18 로 표시되는 염기서열
(c) 서열번호 17 로 표시되는 염기서열
(d) 서열번호 16 로 표시되는 염기서열.
또, 본 발명은 하기 (a) ∼ (d) 중 어느 하나로 표시되는 염기서열에서, 1 또는 수개의 염기가 결실, 치환 또는 부가된 염기서열로서, 편평상피세포에 치료용 유전자를 특이적으로 발현시키는 치료용 유전자 발현 염기서열에 관한 것이다.
(a) 서열번호 1 로 표시되는 염기서열
(b) 서열번호 18 로 표시되는 염기서열
(c) 서열번호 17 로 표시되는 염기서열
(d) 서열번호 16 로 표시되는 염기서열.
또한, 본 발명은 상기 치료용 유전자 발현 염기서열의 하류영역에 치료용 유전자를 갖고, 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 유전자 치료용 약제에 관한 것이다. 또 이 약제를 사용하여 특정 편평상피세포에 발현시키고자 하는 치료용 유전자를 발현시키는 방법도 포함하는 것이다.
도 1 은 본 발명에 관한 세포종 특이적 발현 플라스미드에서의 SCC-A1 유전자 상류영역의 삽입단편길이의 차이를 나타내는 도면이다. 화살표는 Cap 사이트를 나타낸다. 숫자는 서열번호 5 에서의 염기의 순번을 기준으로 한 숫자이다.
도 2 는 본 발명에 관한 세포종 특이적 발현 플라스미드의 각종 세포에서의 유전자 발현성의 비교를 나타내는 그래프이다.
도 3 은 본 발명에 관한 세포종 특이적 발현 플라스미드의 편평상피세포에서의 유전자 발현 활성의 비교를 나타내는 그래프이다.
도 4 는 본 발명에 관한 세포종 특이적 발현 플라스미드의 편평상피암 세포에서의 유전자 발현 활성의 비교를 나타내는 그래프이다.
도 5 는 본 발명에 관한 세포종 특이적 발현 플라스미드의 난소암세포에서의 유전자 발현 활성의 비교를 나타내는 그래프이다.
(발명을 실시하기 위한 최선의 형태)
이하, 본 발명을 발명의 실시형태에 입각하여 상세하게 설명한다.
(염기서열)
본 발명의 편평상피세포에 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 염기서열 (이하, 본 발명의 염기서열이라고 함) 은 편평상피암 관련 항원 단백질[Squamous Cell Carcinoma Antigen l (이하, SCC-A1 이라고 약기)] 의 아미노산 서열을 규정하는 구조유전자보다도 상류영역의 연속염기서열이다. 여기서 SCC-A 는 자궁경부암 등의 편평상피암의 종양 메이커로서 널리 사용되고 있는 단백질이며, 유전자 서열에 약 95 % 의 상동성을 갖는 SCC-A1 및 SCC-A2 가 존재하고, 이들은 함께 염색체 상의 18q21. 3 에 존재한다 (S. S. Schneider, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 3147, 1995). Sakaguchi 등은 SCC-A2 프로모터를 해석하고, 편평상피암 세포인 SKGⅢa 의 세포에서의 유전자의 발현은, 전사개시점으로부터 500 bp 상류까지의 길이의 DNA 단편을 사용함으로써 가장 강한 전사활성이 얻어진다는 것을 보고하고 있다 (Sakaguchi Y., Biochemica et Biophysica Acta, 1444, 111-116, 1999). 또 Shirato 등은 방사선치료를 받은 편평상피세포암 환자의 혈청중의 SCC-A 단백질 농도를 측정한 결과, 자궁경부암 환자에서 SCC-A 단백질 농도와 예후가 상관된다는 것을 발견하고, 치료후의 모니터링에 유용하다고 보고하고 있다 (Shirato H., et al., Acta Oncologica 32, 6, 663, 1993). SCC-A 단백질의 아미노산 서열 및 그것을 코드하는 유전자 서열은 일본 공개특허공보 평 4-200387 호에 의해 개시되어 있다.
본 발명의 염기서열은 서열번호 1 에 나타나는 4324개 염기의 연속염기서열의 전체 또는 그 일부의 염기서열을 포함하고, 또한 편평상피세포에 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 염기서열이다. 또한 서열번호 18 에 나타나는 1000개 염기의 연속염기서열의 전체 또는 그 일부의 염기서열을 포함하고, 또한 편평상피세포에 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 염기서열이다. 또 서열번호 17 에 나타나는 500개 염기의 연속염기서열의 전체 또는 그 일부의 염기서열을 포함하고, 또한 편평상피세포에 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 염기서열이다. 그리고 서열번호 16 에 나타나는 250개 염기의 연속염기서열의 전체 또는 그 일부의 염기서열을 포함하고, 또한 편평상피세포에 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 염기서열이다.
또, 편평상피세포에만 특이적으로 치료용 유전자를 발현시키는 기능을 갖는 것이면, 상기 어느 하나의 서열에서 1 또는 수개의 염기가 결실, 치환 또는 부가, 혹은 수식되어 있는 염기서열도 본 발명의 염기서열에 포함된다.
본 발명의 염기서열을 얻는 방법으로서는 특별히 한정되지 않는다. 본 명세서에 개시된 염기서열에 기초하여 종래 공지의 방법을 바람직하게 적용할 수 있다. 예컨대 적절한 농도로 조정한 마그네슘 이온 등의 염류와 dATP, dGTP, dCTP, dTTP 등을 함유하는 완충액 중에서, SCC-A1 유전자 상류게놈영역을 주형으로 하고, 주형 DNA 서열의 목적 영역을 증폭가능하도록 디자인한 프라이머 및 내열성 DNA 폴리머라제를 사용하여, 통상 시행되는 PCR 법에 의해 조제할 수 있다.
이 때, 사용하는 내열성 DNA 폴리머라제로는, 테무스 아쿠아티쿠스 (Themus aquaticus) 유래의 Taq DNA 폴리머라제, 피로코쿠스 푸리오수스 (Pyrococcus furiosus) 유래의 Pfu DNA 폴리머라제 또는 이들의 대장균에 의한 재조합형 내열성 DNA 폴리머라제 등을 들 수 있다. 또 PCR 법은 시판되고 있는 PCR 용 장치를 사용하여 시행할 수 있다.
본 발명의 염기서열은 서열번호 1, 18, 17 또는 16 에 나타나는 염기서열의 일부로 구성되어 있어도 되므로 100개 이하 염기수이어도 되고, 이 경우는 핵산 화합물로서 본 발명의 염기서열을 합성하는 것도 가능하다.
핵산 화합물로서는, 천연형 올리고데옥시리보누클레오티드, 포스포로티오에이트형 올리고데옥시리보누클레오티드, 메틸포스포네이트형 올리고데옥시리보누클레오티드, 포스포로아미데이트형 올리고데옥시리보누클레오티드, H-포스포네이트형 올리고데옥시리보누클레오티드, 트리에스테르형 올리고데옥시리보누클레오티드 등을 들 수 있다.
또한, 핵산 합성하는 경우에는 상기 방법외의 DNA/RNA 합성기를 사용하여 포스포아미다이트법에 의해서도 합성할 수 있다.
포스포아미다이트법이란, 수식 데옥시리보누클레오시드의 3' 말단에 시아노에틸기 등으로 보호한 포스포아미다이트를 결합한 시약을 사용하여 별도의 수식 데옥시리보누클레오시드, 올리고수식 데옥시리보누클레오시드 등의 5' 말단 등에 축합하는 것을 기본으로 하는 합성법으로, 최종 사이클에서 5' 말단의 당수산기의 보호기가 결합한 상태에서 합성을 종료한다. 실온 하에서 합성한 올리고머를 서포터로부터 절단한 후, 염기부분 및 인산부분의 탈보호를 실시하여 조(粗)정제물을 얻는다. 조정제물은 통상의 정제방법, 예컨대 에탄올 침전법을 사용하거나, 역상 크로마토그래피, 이온교환 크로마토그래피 및 겔여과 크로마토그래피의 원리에 기초한 고속액체 크로마토그래피, 초임계 크로마토그래피 등 다양한 방법으로 정제된다.
(치료용 유전자)
본 발명의 염기서열은 편평상피세포에 치료용 유전자를 특이적으로 발현시키기 위한 프로모터로서 유용하다.
구체적으로는 편평상피세포에 특이적으로 발현시키고자 하는 치료용 유전자를 본 발명의 염기서열의 하류에 위치시키고, 예컨대 바이러스 벡터의 바이러스 게놈서열의 일부에 삽입함으로써 사용하는 것이 가능하다.
치료용 유전자로서는 치료효과가 기대되는 유전자면 특별히 한정되지 않지만, 이와 같은 유전자로서는 예컨대 XPA ∼ XPG 유전자, 케라틴 유전자, 콜라겐 유전자, 티로시나아제 유전자, NF1 유전자, CTLA4Ⅰg 유전자, ATM 유전자, PLP 유전자, DM20 유전자, GCH 유전자, 슈퍼록시드 디스뮤타제(Superoxide Dismutase : SOD) 1 유전자, ALD 유전자, 프로테오리피드 프로테인 유전자, KCNA 1 유전자, 선유아세포 증식인자-3, COMP 유전자, DSDST 유전자, 피브릴린 1 유전자, 선유아세포 증식인자 수용체, 모노아민옥시다아제 A 또는 B 유전자, ADMLX 유전자, 안드로겐 수용체 유전자, 심근 β미오신 중쇄 유전자, 심근 트로포닌 T 유전자, α트로포미오신 유전자, 심근 미오신 결합 단백질 C 유전자, 심실형 미오신 알칼리 경쇄 유전자, 심실형 미오신 조절 경쇄 유전자, 심근 트로포닌 I 유전자, LQT1-4 유전자, 엘라스틴 유전자, PKD1, 2 유전자, 포스파티딜이소시톨 (Phosphatidylinositol) 클래스 A 유전자, 1,25-(OH)2D3 수용체 유전자, CLCN5 유전자, 적혈구형 안키린 (Ankyrin) 유전자, CFTR 유전자, 홀로카르복실라아제 합성효소 유전자, ATP8A 또는 B 유전자, PAX3 유전자, MITF 유전자, PAX6 유전자, 크리스털린 유전자, SLC3A1 유전자, WAS 유전자, 인터류킨-2 수용체-γ쇄 유전자, 아데노신데아미나아제 유전자, OCRL-1 유전자, RET 유전자, 엔도셀린 B 형 유전자, BLM 유전자, 앤지오텐시노겐 유전자, 앤지오텐신 변환효소 유전자, 앤지오텐신 Ⅱ 타입 I 수용체 유전자, 리포 단백질 리파아제 유전자, apo C-Ⅱ 유전자, 저밀도 리포 단백질 수용체 유전자, 클로소 유전자, 렙틴 유전자, 렙틴 수용체 유전자, 뇌 글리코겐 포스포릴라아제 유전자, fas 유전자, fas 리간드 유전자, 사람 백혈구 항원 유전자, p53 유전자, p15 유전자, p16 유전자, 티로시나아제 관련 단백질-1 또는 2, VEGF 유전자, 인자 Ⅷ 유전자, 인자 Ⅸ 유전자, apo E 유전자, apo B-100 유전자 등을 들 수 있고, 이들을 1 종 또는 2 종 이상 조합하여 사용가능하다.
또한, 치료용 유전자는 치료효과가 기대되는 유전자면 사람유래의 유전자일 필요는 없고, 이와 같은 예로서, 예컨대 사람 단순 헤르페스 바이러스 유래 티미딘키나아제 유전자, 사람 델타형 간염 바이러스 등의 바이러스·바이로이드 또는 테트라히메나 등의 원생동물 섬모충류 유래의 리보자임 등을 들 수 있다.
상기중, 편평상피세포에 특히 치료효과가 기대되는 유전자로서는, 예컨대 색소성 건피증에서는 누클레오티드 제거수복기구에 관한 XPA 내지 XPG 중 어느 하나의 유전자를, 표피수포증에서는 케라틴 유전자 또는 Ⅶ 형 콜라겐 유전자를, 티로시나아제 음성형 백피증에서는 티로시나아제 유전자를, 신경섬유종증 1 형에서는 NF1 유전자를 일례로서 들 수 있다.
또, 편평상피암세포에 특히 치료효과가 기대되는 유전자로서는, 예컨대 사람단순 헤르페스 바이러스유래 티미딘 키나아제 유전자 등의 자살 유전자, 뇌 글리코겐 포스포릴라아제 유전자 등의 암특이적 항원을 코드하는 유전자, fas 유전자 등의 아폽토시스(apoptosis)를 촉진하는 유전자, 사람 백혈구 항원 유전자 등의 암세포의 면역원성을 높이기 위한 유전자, p53 유전자 등의 암억제 유전자, 암 유전자에 대한 안티센스 또는 리보자임 등의 편평상피암세포에 대하여 길항적으로 작용하는 것을 일례로서 들 수 있다.
또한, 본 발명은 주름의 생성억제, 보습성의 향상, 기미·주근깨의 생성억제, 지성·여드름의 억제 등의 미용을 목적으로 한 치료에도 적용가능하다. 예컨대 주름의 생성억제, 보습성의 향상을 위해 케라틴 유전자 또는 콜라겐 유전자를 1 종 또는 2 종 이상 조합하여 사용가능하다. 또 기미, 주근깨의 생성억제를 위해 티로시나아제 유전자 등의 멜라닌 생성에 관한 일련의 효소 유전자에 대한 안티센 스 또는 리보자임 등을 1 종 또는 2 종 이상 조합하여 사용가능하다.
또, 본 발명의 치료용 유전자에는 마커 유전자도 포함된다. 마커 유전자로서는 CAT, GUS, β-gal, GFP, EGFP 등이 사용가능하다.
발현된 치료용 유전자의 세포내에서의 안정성을 제어하기 위해 폴리 A 시그널을 치료용 유전자의 하류에 더 삽입하는 것도 가능하다.
(치료용 유전자의 도입방법)
본 발명의 염기서열의 하류에 치료용 유전자를 도입하고, 이러한 치료용 유전자를 정상 편평상피세포 또는 편평상피암세포 등으로 송달하는 수법으로는 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 바이러스 벡터를 사용하는 경우, 또는 합성 폴리아미노산, 양이온성 지질 등의 비바이러스 벡터의 담체를 사용하는 경우가 있다.
바이러스 벡터를 사용하는 경우는, 레트로 바이러스 벡터, 아데노 바이러스 벡터, 아데노 수반 바이러스 벡터, 재조합 HIV 벡터, 단순 헤르페스 바이러스 벡터 등의 바이러스유래의 벡터를 사용할 수 있다. 바이러스 벡터에서는 바이러스 게놈서열의 일부에 본 발명의 염기서열을 삽입하여 사용한다. 예컨대 레트로 바이러스 벡터 중, 백혈병 바이러스 벡터의 경우는 바이러스 게놈의 5' 측부터 순차적으로, 백혈병 바이러스 유래의 LTR (Long Terminal Repeat), 본 발명의 염기서열, 치료용 유전자, 폴리 A 시그널, LTR 과 같이 디자인된 재조합 바이러스 게놈을 구축하면 된다. 작성한 바이러스 벡터는 공지의 방법에 의해 바이러스 입자내에 패키징하면 된다.
합성 폴리아미노산, 양이온성 지질 등의 비바이러스 벡터의 담체를 사용하는 경우에는, 예컨대 합성 폴리아미노산의 경우, 폴리리신 또는 세린 등의 아미노산을 주체로 하는 담체를 사용할 수 있다. 또 예컨대 양이온성 지질에서는 리포솜 등을 사용할 수 있다. 비바이러스 벡터의 경우는 플라스미드에 본 발명의 염기서열과 그 하류에 치료용 유전자 및 폴리 A 시그널을 삽입하여 사용할 수 있다.
(유전자 치료용 약제)
본 발명의 유전자 치료용 약제는 앞에서 설명한 본 발명의 염기서열을 사용하고 있으며, 특정 치료용 유전자를 편평상피세포에만 특이적으로 발현시킬 수 있다. 이 유전자 치료용 약제는 본 발명의 염기서열을 프로모터로 하고, 그 하류에 치료용 유전자를 도입하여 얻을 수 있다.
이 유전자 치료용 약제를 상기 수법에 의해 세포에 송달하였을 때, 본 발명의 염기서열은 치료용 유전자를 편평상피세포에만 특이적으로 발현시킬 수 있다. 또한 본 발명에 따르면, 치료용 유전자를 특히 암화된 편평상피세포에 강하게 발현시킬 수도 있다.
이러한 효과는 또한 서열번호 1 에 나타내는 4324개 염기의 연속염기서열에서 확인되지만, 이 서열 중, 서열번호 18 에 나타내는 1000개 염기의 연속염기서열, 나아가서는 서열번호 17 에 나타내는 500개 염기의 연속염기서열, 더불어 서열번호 16 에 나타내는 250개 염기의 연속염기서열에서 강하게 확인된다.
본 발명의 유전자 치료용 약제에 의한 치료효과는 피부, 폐, 식도, 자궁 등의 편평상피세포를 포함하는 전체 조직, 장기의 유전성 질환에서 유용하다. 예컨대 색소성 건피증, 표피수포증, 어린선(魚鱗癬), 백피증, 티로시나아제 음성형 백피증, 신경섬유종증 1 형 등의 유전성 피부질환의 치료에도 유용하다.
또, 피부의 주름의 생성억제, 보습성의 향상, 기미·주근깨의 생성억제, 지성·여드름의 억제 등의 미용을 목적으로 한 치료에도 유용하다.
또한, 본 발명의 유전자 치료용 약제는 편평상피세포에 대한 질환뿐만 아니고, 편평상피암세포의 유전자 치료에도 유용하여 자궁경부암, 피부암, 두경부암, 식도암, 폐암 등에서 특히 유효하다.
본 발명의 유전자 치료용 약제를 투여하는 방법으로는 직접 목적으로 하는 장기, 조직에 투여하는 방법 외, 경구 또는 비경구로 투여하는 방법도 사용된다. 경구투여에는 혀아래 투여가 포함된다. 비경구투여에는 예컨대 피하, 근육, 정맥, 동맥, 점적을 투여경로로 하는 주사, 또한 좌제, 도포약, 첩부약이 포함된다.
또, 발명의 유전자 치료용 약제의 투여량은 연령, 투여경로, 투여횟수에 의해 달라지며 적당히 변경할 수 있다. 이 경우, 본 발명의 유전자 치료용 약제의 유효량과, 적절한 희석제 및 약리학적으로 사용할 수 있는 담체의 조성물로서 통상 투여되지만, 그 유효량은 1 ∼ 100,000 ㎍/㎏ 체중/일 이며, 연속적으로 또는 1 일 1 회에서 수회에 나눠서 또는 수일마다 1 회 투여된다.
본 발명의 유전자 치료용 약제를 경구투여하는 경우는 정제, 과립제, 세립제, 산제, 캡슐제 등이 적용된다. 이들 조성물 중에 통상 함유되는 결합제, 포함제, 부형제, 붕괴제 등을 포함해도 되고, 내용수제, 현탁제, 유제, 시럽제 등 중 어느 형태이어도 된다. 또 비경구투여하는 경우에는 이를 위한 조성물이 안정화제, 완충제, 보존제, 등장화제 등을 포함해도 되고, 통상 단위투여량 앰플 혹은 다투여량 용기 또는 튜브의 상태로 제공된다.
이하, 실시예를 나타내고, 이 발명의 실시형태를 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 하기 예에 한정되는 것은 아니다.
(실시예)
(실시예 1 ; 스크리닝용 멤브레인의 조제)
1 차 스크리닝용으로서, 사람게놈 DNA 라이브러리 (EMBL3 SP6/T7, Clontech #HL2067j, Sau3A I partial digest ; Clontech사) 를, 파지의 플라크수가 100 ㎕ 당 1 ×104 pfu (plaques forming unit) 가 되도록, 파지 희석 완충용액 [100 mM NaCl (와코쥰야쿠사), 10 mM MgSO4 (와코쥰야쿠사) 를 포함하는 50 mM Tris-HCl (GIBCO사), pH 7.5, 0.01 % 젤라틴] 로 희석하여 플레이트 전면에 구석구석 플라크가 형성되도록 조제하고, 합계 1.5 ×105 개의 플라크의 스크리닝을 실시하였다. 2 차 스크리닝용으로서, 1 차 스크리닝에 의해 얻어진 양성 파지클론을 함유하는 파지액을, 파지의 플라크수가 100 ㎕ 당 3000 pfu 가 되도록 파지 희석 완충용액으로 희석하여 플레이트에 단리된 플라크가 형성되도록 조제하였다.
대장균 K802 주를 접종하기 전날부터 5 ㎖ 의 LB 배지 (DIFCO사) 에서 배양하고, 1 ㎖ 를 0.2 % 말토오스, 10 mM MgSO4 를 포함하는 5 ㎖ 의 LB 배지에 식균한 후, OD600nm 의 값이 0.6 이 될 때까지 배양함으로써 파지를 감염시키기 위한 대장균을 조제하였다.
상기 대장균 조제액 300 ㎕ 와 파지희석액을 혼합하여 37 ℃ 에서 15 분간 인큐베이트하였다. 이것을 오토클레이브후, 48 ℃ 에서 보온한 6 ㎖ 의 0.75 % Bacto-Agar (DIFCO사) 를 포함하는 LB 배지에 첨가하고, LB 한천배지에 전체량을 첨가하였다. 약 20 분간 실온에 방치한 후, 37 ℃ 에서 하룻밤 인큐베이트하였다.
플레이트를 4 ℃ 에 1 시간 두고, Hybond-N+(아마샴사) 를 LB 한천배지상에 밀착시켜 실온에서 1 분간 방치하였다. 멤브레인을 바람에 건조하여 변성 (Denature) 완충용액 (0.4 M NaOH 용액) 에 5 분간, 중화 (Neutralization) 완충용액 (1 M NaCl 를 포함하는 0.5 M Tris-HCl 용액, pH 7.5) 에 5 분간, 2 ×SSC 에 5 분간 순차적으로 침지시켜 UV 크로스 링커 (Cross Linker) (UV 스트러터 링커 (Strata Linker) ; 스트러터진 사) 처리하고, 하이브리백 (코스모바이오사) 에 보존하였다.
(실시예 2 ; DNA 프로브의 합성)
스크리닝에 사용한 SCC-A2 유전자 유래의 DNA 프로브 (서열번호 2) 는 하기와 같이 하여 조제하였다. 즉, 사람 자궁경암 세포주 HT-Ⅲ (American Type Cell Collection사 : ATCC사) 의 mRNA 로부터 M-MLV 역전사효소 (GIBCO사) 에 의해 cDNA 를 제조하고, PCR primer (서열번호 3,4) 를 사용하여 PCR (GeneAmp PCR System 2400 : Perkin Elmer사) 에 의해 165 bp 의 PCR 산물을 합성하였다. 정제는 QIAquick PCR purification kit (QIAGEN사) 를 사용하여 상기 DNA 프로브를 얻었다.
(실시예 3 ; 32P 표지-DNA 프로브의 제작)
실시예 2에서 조제한 DNA 프로브의 방사능 동위원소 표식은 랜덤 프라이머 DNA 표지화 키트 (Random primer DNA labeling kit) (다카라슈조사) 를 사용하여 32P 표지화를 하였다. 정제는 QIAquick nucleotide removal kit (QIAGEN사) 를 사용하여 실시하였다.
(실시예 4 ; 플라크 하이브리다이제이션에 의한 클리닝)
실시예 1 에서 조제한 멤브레인에 예비융합화 용액 (prehybridization solution: GIBCO사) 을 1 매당 20 ㎖ 를 첨가하여 42 ℃ 에서 2 시간 인큐베이트하였다. 예비 융합화 용액을 버린 후, 실시예 3 에서 조제한 DNA 프로브 (1 ×107 cpm/㎖) 를 함유하는 융합화 용액 (GIBCO사) 을 20 ㎖ 첨가하여 42 ℃ 에서 하룻밤 인큐베이트하였다. 멤브레인을 1L 의 0.1 % SDS 를 함유하는 6 ×SSC 로 42 ℃ 에서 30 분간의 세정을 3 회 실시하고, 다시 1L 의 0.1 % SDS 를 포함하는 2 ×SSC 로 65 ℃, 30 분간의 세정을 2 회 실시하였다. 멤브레인을 하이브리백 (코스모바이오사) 에 싸서 -80 ℃ 에서 3 일간, X 선 필름 (후지필름사) 에 감광, 현상하였다. 현상한 필름과 원래의 플레이트를 중첩함으로써 양성 플라크의 위치를 확인하였다. 양성 플라크의 위치를 한천마다 잘라내 회수하고, 500 ㎕ 의 파지 희석 완충용액과 5 ㎕ 의 클로로포름 (와코쥰야쿠사) 을 첨가하였다. 진탕기(vortex)에 의한 교반 및 원심에 의해 겔편을 가라앉힌 후, 양성 파지입자를 포함하는 상청을 회수하였다. 또한, 양성파지를 단리하기 위해, 실시예 1, 3 및 본 실시예의 방법을 사용하여 2 차 스크리닝하고 단리한 플라크중에서 2 종의 양성 파지클론 (B612, C618) 을 단리하였다.
(실시예 5 ; 파지 DNA 의 대량조제)
대장균 K802 주를 접종하기 전날부터 OD600nm 의 값이 0.6 이 될 때까지 배양하였다.
실시예 4 에서 얻은 파지액을 파지 희석 완충용액으로 희석하여 B612, C618 을 각각 1010 pfu/㎖ 로 조제하였다. 37 ℃ 에서 배양을 실시한 후, 클로로포름과 NaCl 을 첨가하여 37 ℃ 에서 30 분간 진탕하였다. 5000 ×g 에서 30 분간 원심을 실시하여 파지를 포함하는 상청을 회수하였다. 파지 DNA 의 추출은 다음과 같이 하여 실시하였다. 폴리에틸렌글리콜 (와코쥰야쿠사) 100 g 을 첨가하여 4 ℃ 에서 하룻밤동안 침전한 후, 0.75 g/㎖ 의 CsCl (GIBCO사) 로 35000 rpm 에서 18 시간 초원심하였다. 그 후, SM 완충용액 (50 mM Tris-Cl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 10 mM MgSO4, 0.01 % 젤라틴) 로 하룻밤 투석하였다. 이것을 0.02 % SDS 함유 페놀용액에서 1 시간 진탕처리한 후, TE 완충용액을 사용한 투석에 의해 정제하였다. 그 결과, B612 가 800 ㎍, C618 이 910 ㎍ 의 파지 DNA 가 회수되었다.
(실시예 6 ; SCC-A 유전자 상류 서열의 서열화)
상기 B612, C618 의 양 클론중, 서열번호 2 에 나타내는 서열의 상류서열을 서열화하였다.
그 결과, C618 에서 서열번호 5, B612 에서 서열번호 6 에 나타내는 DNA 서 열이 얻어졌다. 상동성 검색 결과, 서열번호 5 의 3' 말단영역은 사람 편평상피세포암 항원 1 (Human squamous cell carcinoma antigen 1: SCC-A1) 유전자의 엑손 1 및 2 의 서열과, 서열번호 6 의 3' 말단영역은 사람 편평상피세포암 항원 1 (SCC-A2) 유전자의 엑손 1 및 2 의 서열과 상동성이 높았다. 이러한 점에서 서열번호 5 는 SCC-A1 유전자 게놈 상류영역 및 SCC-A1 유전자의 일부를 포함하는 서열, 서열번호 6 은 SCC-A2 유전자 게놈 상류영역 및 SCC-A2 유전자의 일부를 포함하는 서열인 것이 판명되었다.
(실시예 7 ; Cap 사이트의 결정)
편평상피암세포인 SKGⅢa 세포 (전 일본 암연구자원 뱅크사, 현 휴먼사이언스 연구자원 뱅크사)로부터 ISOGEN (니뽕진사) 을 사용하여 total RNA 를 조제하였다. 역전사반응은 SMART PCR cDNA SYNTHESIS KIT (Clontech사) 및, SuperScript Ⅱ RNaseH 역전사효소 (GIBCO사) 를 사용하였다. 이로써 5' 말단에 서열번호 7의 서열을 부가한 cDNA 를 제조하였다. 이 역전사반응물을 주형으로 하고, 서열번호 8 (SMART PCR cDNA SYNTHESIS KIT 첨부), 서열번호 9 (스워디 테크놀러지사) 의 PCR 프라이머를 사용하여 PCR 을 실시하였다.
반응후의 혼액을 0.8 % 아가로오스 겔 전기영동에 가하여 특이적으로 증폭된 PCR 산물을 겔편마다 회수하고, QIAquick Gel extraction kit (QIAGEN사) 를 사용하여 겔에서 추출하였다.
0.1 ㎍ 의 Bluscript Ⅱ T-벡터 (도요보사) 와, 정제한 PCR 산물을 혼합하고, T4 DNA Ligase (GiBCO사) 를 사용하여 4 ℃ 에서 하룻밤 라이게이션 반응을 실시하였다.
컴피텐트 셀 E. coli XLI-blue (다카라슈조사) 200 ㎕ 를 얼음 중에서 녹이고, 상기 5 ㎕ 의 라이게이션 반응액을 첨가하여 30 분간 방치하였다.
42 ℃ 에서 60 초간 인큐베이트한 후, 재차 얼음 중에 5 분간 두어 SOC 배지 (GIBCO사) 를 800 ㎕ 첨가하고, 다시 37 ℃ 에서 1 시간 인큐베이트하였다. 50 ㎍/㎖ 의 암피실린 (와코쥰야쿠사) 을 포함하는 LB 한천배지에 100 ㎕ 를 접종하여 37 ℃ 에서 하룻밤 인큐베이트하였다. 단독 콜로니를 5 클론 선택하여 50 ㎍/㎖ 의 암피실린을 포함하는 LB 액체배지에 첨가하고, 다시 37 ℃ 에서 하룻밤 배양하였다.
키아겐 플라스미드 MINI kit (QIAGEN사) 를 사용하여 픽업한 5 클론의 플라스미드 정제를 실시하였다.
정제한 5 클론 중의 상류서열을 DNA 시퀀서 타입 310 (ABI사) 을 사용하여 확인하였다.
그 결과, SCC-A1 유전자의 Cap 사이트는 서열번호 5 의 4296 번째의 염기인 것이 판명되었다.
(실시예 8 ; 발현 플라스미드의 구축 I)
실시예 5 에서 얻어진 파지 DNA (C618) 를 주형으로 하고, 표 1 에 나타내는 조합의 PCR 프라이머를 사용하여 서열번호 16 ∼ 20 에 나타나는 5 종의 상이한 길이의 SCC-A1 유전자 상류영역 DNA 단편을 PCR 에 의해 조제하였다. 반응 후의 혼액을 0.8 % 아가로오스 겔 전기영동에 가하여 특이적으로 증폭된 PCR 산물을 회수하고, QIAquick Gel extraction kit 를 사용하여 겔에서 추출하였다. 결과를 표 1 에 함께 나타낸다.
| DNA 단편 | 상류 프라이머 | 하류 프라이머 | PCR 산물의 길이 (bp) |
| 서열번호 16 | 서열번호 10 | 서열번호 15 | 250 |
| 서열번호 17 | 서열번호 11 | 서열번호 15 | 500 |
| 서열번호 18 | 서열번호 12 | 서열번호 15 | 1000 |
| 서열번호 19 | 서열번호 13 | 서열번호 15 | 1997 |
| 서열번호 20 | 서열번호 14 | 서열번호 15 | 3680 |
0.1 ㎍ 의 베이식 벡터 (니뽕진사) 를 Mlu I (다카라슈조사) 및 Bg1 Ⅱ (다카라슈조사) 제한효소 처리하였다. 상기 벡터와 각각의 PCR 산물을 혼합하여 DNA Ligation kit (다카라슈조사) 를 사용하여 16 ℃ 에서 하룻밤 라이게이션 반응을 실시하였다.
이하, 실시예 7 에 나타낸 수법을 사용하여 트랜스포메이션을 실시하고, 키아겐 플라스미드 MINI kit 를 사용하여 플라스미드를 정제하였다.
서열번호 16 ∼ 20 의 서열을 삽입한 플라스미드의 유전자 서열을, DNA 시퀀서 타입 310 (ABI사) 을 사용하여 확인하였다. 이상과 같은 조작에 의해, 도 1 에 나타내는 서열번호 16 ∼ 20인 상이한 길이의 SCC-A1 유전자 상류영역을 갖는 발현 벡터를 조제하였다.
(실시예 9 ; 유전자 발현성 시험 I)
정상 편평상피세포인 정상 사람 피부각화세포 (다이니뽕세이야쿠사), 편평상피암세포인 SKGⅢa 세포 및 비편평상피암 세포인 난소암 세포 (SKOV3 세포 (ATCC사)) 를 12 웰 플레이트에 1.0 ×106 세포/웰이 되도록 세포를 접종하여 하룻밤 배양하였다.
서열번호 16 ∼ 20 의 서열을 갖는 5 종의 플라스미드 및 양성대조로서 SV40 프로모터를 갖는 컨트롤 벡터 (니뽕진사), 음성대조로서 프로모터 서열을 갖지 않는 베이직 벡터를 각각 실험에 사용하였다. 각각의 플라스미드 1 ㎍ 에 6 ㎍ 의 DOTAP 리포좀 형질감염 시약 (liposomal transfection reagent: Boheringer-Mannheim사) 을 첨가하고, 실온에서 15 분간 방치하여 형질감염 혼액을 조제하였다. 이 혼액을 피부각화세포에 첨가하는 군은 정상 사람 피부각화세포용 무혈청배지 (다이니뽕세이야쿠사) 1 ㎖ 에, SKGⅢa 세포 및 SKOV3 세포에 첨가하는 군은 10 % FCS (GIBCO사) 를 포함하는 RPMI 1640 배지 (GIBCO사) 1 ㎖ 에 첨가하고, 이것을 각 세포를 접종한 12 웰 플레이트에 첨가하여 37 ℃, 5 % CO2 분위기하, 인큐베이트하였다. 6 시간후, 각각의 증식배지를 교환하여 37 ℃, 5 % CO2 분위기하, 다시 48 시간 인큐베이트하였다.
48 시간후, PBS (-) 액으로 5 배로 희석한 PicaGene Cell Culture Lysis Regent Luc (니뽕진사) 를 200 ㎕/웰 첨가하여 세포를 용해하고, PicaGene Luminescence Kit (니뽕진사) 를 사용하여 루시페라아제 활성을 측정하였다. 루미노미터는 Lumicounter 700 (마이크로텍사) 을 사용하였다.
결과를 표 2 에 나타낸다. 서열번호 16 ∼ 20 의 서열을 갖는 5 종의 플라스미드는 피부각화세포 및 SKGⅢa 세포에서 루시페라아제 활성의 상승이 발견되었다. 한편, SKOV3 세포에서는 거의 루시페라아제 활성이 검출되지 않고, 프로모터를 갖지 않는 베이식 벡터와 동일한 정도였다. SV40 프로모터를 갖는 컨트롤 벡터는 어느 세포에서도 동일한 정도의 높은 루시페라아제 활성이 검출되며 세포종 특이성을 보이지 않았다. 이러한 점에서 서열번호 16 ∼ 20의 서열을 갖는 5 종의 플라스미드는 편평상피세포 특이적인 유전자 발현 활성을 갖는 것이 판명되었다. 특히, 이들 서열번호 16 ∼ 20 의 서열을 갖는 5 종의 플라스미드 중, 서열번호 16 ∼ 18 의 서열을 갖는 플라스미드가 강한 유전자 발현 활성을 갖는 것도 판명되었다. 또한 서열번호가 17 인 서열을 갖는 플라스미드가 가장 강한 유전자 발현성을 나타냄을 알 수 있었다.
(실시예 10 ; 발현 플라스미드의 구축 Ⅱ)
실시예 9 에서 가장 유전자 발현 활성이 높았던 서열번호 17 의 특이성을 더 검토할 목적으로, 서열번호 24 ∼ 26 의 서열을 갖는 DNA 단편을 SCC-A1 유전자 상류영역 (서열번호 5) 으로부터 각각 조제하여 발현 플라스미드를 구축하였다. 구체적으로는 발현 플라스미드를 실시예 8 과 동일한 수법에 따라 표 2 에 나타내는 조합의 PCR 프라이머를 사용함으로써 구축하였다. 또 마찬가지로 SCC-A2 유전자 상류영역 (서열번호 6) 을 주형으로 하고, 서열번호 16 ∼ 18 및 서열번호 24 ∼ 26 의 서열을 갖는 DNA 단편과 동일한 길이의 DNA 단편 (서열번호 27 ∼ 32) 을 갖는 발현 플라스미드를 구축하였다. 결과를 각각 표 2 및 표 3 에 나타낸다.
| DNA 단편 | 상류 프라이머 | 하류 프라이머 | PCR 산물의 길이 (bp) |
| 서열번호 24 | 서열번호 21 | 서열번호 15 | 125 |
| 서열번호 25 | 서열번호 22 | 서열번호 15 | 625 |
| 서열번호 26 | 서열번호 23 | 서열번호 15 | 750 |
| DNA 단편 | 상류 프라이머 | 하류 프라이머 | PCR 산물의 길이 (bp) |
| 서열번호 27 | 서열번호 21 | 서열번호 15 | 125 |
| 서열번호 28 | 서열번호 11 | 서열번호 15 | 250 |
| 서열번호 29 | 서열번호 10 | 서열번호 15 | 500 |
| 서열번호 30 | 서열번호 22 | 서열번호 15 | 625 |
| 서열번호 31 | 서열번호 23 | 서열번호 15 | 750 |
| 서열번호 32 | 서열번호 12 | 서열번호 15 | 1001 |
(실시예 11 ; 유전자 발현 시험 Ⅱ)
실시예 9 에서 조제한 SCC-A1 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편 (서열번호 16 ∼ 18) 을 갖는 발현 플라스미드, 실시예 10 에서 조제한 SCC-A1 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편 (서열번호 24 ∼ 26) 및 SCC-A2 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편 (서열번호 27 ∼ 32) 을 갖는 발현 플라스미드의 유전자 발현 활성을 측정하였다.
그 결과를 도 3 ∼ 도 5 에 나타낸다. 도 3 은 각 발현 플라스미드의 피부각화세포에서의 유전자 발현 활성을, 도 4 는 각 발현 플라스미드의 SKGⅢa 세포에서의 유전자 발현 활성을, 도 5 는 각 발현 플라스미드의 난소암 세포에서의 유전자 발현 활성을 각각 나타낸다.
서열번호 16 ∼ 18 및 서열번호 24 ∼ 26 의 서열을 갖는, SCC-A1 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편을 갖는 6 종의 발현 플라스미드 및 서열번호 27 ∼ 32 의 서열을 갖는 SCC-A2 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편을 갖는 6 종의 발현 플라스 미드는, 모두 SKOV3 세포에서는 거의 루시페라아제 활성을 나타내지 않고, 프로모터 활성을 갖지 않는 베이식 벡터와 동일한 정도였다 (도 5). 또 상기 모든 발현 플라스미드에 대하여 피부각화세포 및 SKGⅢa 세포에서는 베이식 벡터와 비교하여 루시페라아제 활성의 상승이 보였다 (도 3 및 도 4). 또한, 서열번호 17 의 발현 플라스미드는 SKGⅢa 세포에서 세포 특이성을 보이지 않았던 SV40 프로모터를 갖는 컨트롤 벡터와 동일한 정도의 높은 유전자 발현 활성을 나타내었다.
이상, 사용한 SCC-A1 및 SCC-A2 유전자 상류영역에서 유래하는 염기서열을 포함하는 12 종의 발현 플라스미드는, 모두 세포종 특이적, 특히 편평상피세포 특이적인 유전자 발현 활성을 갖는 것이 판명되었다. 또 양자의 발현 플라스미드군을 비교하면, 전자 (즉 SCC-A1 유전자 상류영역 유래의 염기서열을 포함함) 발현 플라스미드군의 유전자 발현 활성이 높았다. 또한 서열번호 17 의 서열을 갖는 SCC-A1 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편을 삽입한 플라스미드는 그 이외의 SCC-A1 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편을 갖는 다른 발현 플라스미드 및 SCC-A2 유전자 상류영역 유래의 DNA 단편을 갖는 모든 발현 플라스미드와 비교하여 가장 강한 유전자 발현 활성을 나타냄을 알 수 있었다.
본 발명의 치료용 유전자 발현 염기서열은 SCC-A 유전자의 상류영역의 염기서열이며, 편평상피세포에 특정 유전자를 발현시키는 프로모터 작용을 갖는다.
본 발명에 따르면 이와 같은 염기서열의 하류영역에 치료용 유전자를 도입함으로써 편평상피세포에 특이적으로 치료용 유전자를 발현시킬 수 있다. 또한, 본 발명에 따르면 상기 염기서열의 하류영역에 치료용 유전자를 도입한 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 유전자 치료용 약제를 얻을 수 있다.
<110> Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc.
<120> Base sequences for expression of genes for treatment and
medicinal agents for gene therapy
<130> FP00-0041-00
<150> JP 11/096358
<151> 1999-04-02
<160> 32
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 4324
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
ttttattagt gatttcaaaa ggagagggag tgtacgaata gagtgtgggt cacagagatc 60
acgtgcttca caaggtgata gaatatcaca aggcaaatgg aggcagggtg agatcacagg 120
accacaggac ctgggtgaaa ttaaaattgc taatgaagtt tcgggcacgc attgtcattg 180
ataacatctt atcaggagac agggtttgag agcagacaac cggtctgacc aaaaatttat 240
tagatgggac tttcctcatc ctaataagcc taggagcgct acgggaggtt ggggcttatt 300
tcatccctac agcttcaacc ataaaagacg gctgcccccc aaagcggcca ttttaaaggc 360
ctaccctcag gggcatattc tctttctcag ggatgttcct tgatgagaaa aagaattcag 420
cgatatttct cccatttgct tttgaaagaa gagaaatatg gctctgttcc acccagctca 480
ccggcggtca gagtttaagg ttatcactca tgttccctga acattgctgt tatcctgttc 540
ttttttcaag gtgcccagat ttcatattgt tcaaacacac atgctctaca aataatttat 600
gcagttaatg caatcatcac agggtcctgg gaccacatac attctcctca gcttgcaaag 660
atgatgggat taagagatta aagtaaagac aggcatagga aatcacaagg gtattgattg 720
aggaagtgat aagtgttcat gaaatcttca caatttatgt tcagagattg cagtaaagac 780
aggcataaga aattataaaa gtattaattt ggggaactaa taaatgtcca tgaaaacttc 840
ataatctatg ttcttctgcc atggcttcag ccagtccctc ggttcagggt ccctgacttc 900
ctgcaacata catgtgagac tatttcccgc tctgcttttc aaaccttact ggagttgttt 960
tccctcatga aaactaagaa aggaaagcta gttaatctta ttctgaggtt gttcaatata 1020
tacatattca catctgtaga aagatccttg ggaatacagt aattggcata tattctgtta 1080
tttgatgctt gaaaaatctc ttccactaac cagtttccct atagataggc acaagcacat 1140
aggtaagaaa caataaataa atgttctctt taatttgtaa cttcacaatg ctgagaaaac 1200
tttacagcct tcataaggaa gtgaggtcca ggaaaatcta ggagatattt gttaaccaac 1260
ctataaagac attagtaatg acaggatatt tcctgaaagt gtaatttccc attgaggatt 1320
tgtttttaat ttctggattc ctggatccaa tgaagttggc ataggtttat gaaatgccaa 1380
gatacataag ttggcaagtg ttcacatgca aaaaacttct tggaattcct gagctctctg 1440
tggcaatata tgacatcagg atatgtccca tctcgcacat caggatatgt cctgtcaaga 1500
atgtctatca catgccagga gtacttttta ggaacagaaa aaaatgtctg aaatggtttc 1560
tcatttgaac tcatccaagc tttctctaaa tttaagcaaa ctcctggtca ttttcagtta 1620
gtacctttcc tcaagttcaa ccttcatgac aaacctcagc atctcagaag atttagccat 1680
agtctgaaat tctcttccat agactggtcc cctgtaatcc cagtttgcct cagcttgtta 1740
tcctgctttt tattcccctc tattcccagg ctgagcttct tgcttctgtc ctatgagacg 1800
ttagattcct tcactttggt acccaagtaa acccatcctt ctccatatac aggaaggtcc 1860
atttttctct tacagccctg gatgcagact cagctaagaa gaccattatt catttttgga 1920
attcttcatc taggatattt cctcttgttt ctttctctcc tatctttgag ctttttagat 1980
catcaacacc ccattagtct attacccaac ttaaatcagg gaacttatac ctcccaaact 2040
cattcagaga ctccaaacat atatattgat acaggagacc taagaagagc atgtcttggg 2100
ggttgaggaa acaggcaggt gagaaacttc cagattggaa acacagcttc ctttctcccg 2160
tccagcccct acttcatcct atctgtttcc ggaaccttgt tgtagatgaa tctcccttga 2220
cttcatgatg tgctgagaaa acaaactcat ggctggtgtt aaaaagggcc catgacaata 2280
ccaagtgttg gggagaatgt ggagaaatca gaactctatt cacagtcggt tggaatgcac 2340
acttgtgcag aattctatgg agaagagtct ggcatttcct caaaatgtta acctggattt 2400
accatatgac ccagcgattt cattcatagg tttatactca aaagaaatga agaaatatgc 2460
catgcaaaaa aatgtacatg aaaagtcaaa acatcattat tcataatagt aaatggatgg 2520
aaacaacaca aatgtccatc aacttatgaa taaagaaaat gtggtctatt catagaatgg 2580
aatattattc gaccacaaaa aggaatgatg tactgatcca tgcaatgacg tggacaaacc 2640
ttgaagataa tactagatga aagaagccag tcacaaaagg acttactgta tgattcgatt 2700
tacgtgaaat gtttagaata ggcaaatcca tagaaacagg aggtagatta ctggtttcca 2760
gggtctcgag taagggaaga acgagataca agttttcttt tggaggtagt gaaattgttg 2820
tggaacgaga tcatgatggt gatagcacaa ctttgtgaat ataataaaat cattgaattg 2880
tacagttgaa tttgtggcat ataaattata tgttaaaaaa gggggtccac aaaacaaaca 2940
gccccccact ctggttgtca gggagatatt ggattaaatg gccttggaca acaaccctct 3000
ccctggccac agacattctt cagattacaa gatattccag aggaaacact ggaatgagtc 3060
tgaagccagg tgctaaatgg aaggaccacc aagaaacgtt gtgatcctga caggtcaagc 3120
aacttctttt tctgcttaat ttttaaatga aaaattagaa agctgacatt caaaatggcc 3180
cgtctgtttc aattgctctt ctcagtgtca gcctgttaac tcaatgtgtt agtctgtttt 3240
catgctgctg ataaagacat acctgagatt aggaagtaaa agaggtttaa ttggacttag 3300
agttccacgt gattggggag gcctcagaat cacggtagga ggcaaaagtt attcttacat 3360
ggtggctgca agagaaaatg aggaagaagc aaaagaagaa acccctaata aacccattgg 3420
atctcctgag acttattaac tatcatgaga atagcacaag aaagaccggc ccccatgatt 3480
caattacctc tacctgggtc cctccaacaa catgtggaaa ttctggtaga tacaattcaa 3540
gttgagattt gggtgggaac acagccaaac catatcactc agcaaggcag ataactttct 3600
cactgagcct atgcaacaga aaaccatctg ggatggttgt aaggggcaca ggaagtgact 3660
ggtaggatca ctgccaaagc tgagcattca ggagaaggca atagaatcct attctccata 3720
gtatgctata agatactgaa gtacacttct tcactatctc tttggactta gaattagcac 3780
tatattcctt gttatacaga aaaattacta aggaaattca taggatgaca aaaactttca 3840
gaactgaaaa acaggaaatg taagcttttt agttctttgg tattcgaagt atgcctaaaa 3900
gacaatgcaa aatccaagaa aagaatggtg gggtttttgt ttgtttgttt ttgtttttgt 3960
tttacagctg gagtagaata caaagggatg gagttgaaac aaatgagagg aaattggaat 4020
tctaaactta ttctcattgg cattagaaag gcacctacat gtatttcaca tgagccggtg 4080
actgctgact tgcattctta ttttttccct atagattaaa aaggaggtac aatggtagaa 4140
ctgtaatcct gtcctttgtc ataaattttc gtattcataa aggtgagtgt tagcccgctt 4200
gtgaaatctg aagttgagta acttcaaata ctaaccacag agggagaggc agcaagagga 4260
gaggcataaa ttcaggatct cacccttcat tccacagaca cacatagcct ctctgcccac 4320
ctct 4324
<210> 2
<211> 165
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> unsure
<222> (1)..(165)
<223> Probe
<400> 2
tgaattcact cagtgaagcc aacaccaagt tcatgttcga tctgttccaa cagttcagaa 60
aatcaaaaga gaacaacatc ttctattccc ctatcagcat cacatcagca ttagggatgg 120
tcctcttagg agccaaagac aacactgcac aacaaattag caagg 165
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 3
tgaattcact cagtgaagc 19
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 4
ccttgctaat ttgttgtgc 19
<210> 5
<211> 5279
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> unsure
<222> (1)..(5272)
<223> Template
<400> 5
ttttattagt gatttcaaaa ggagagggag tgtacgaata gagtgtgggt cacagagatc 60
acgtgcttca caaggtgata gaatatcaca aggcaaatgg aggcagggtg agatcacagg 120
accacaggac ctgggtgaaa ttaaaattgc taatgaagtt tcgggcacgc attgtcattg 180
ataacatctt atcaggagac agggtttgag agcagacaac cggtctgacc aaaaatttat 240
tagatgggac tttcctcatc ctaataagcc taggagcgct acgggaggtt ggggcttatt 300
tcatccctac agcttcaacc ataaaagacg gctgcccccc aaagcggcca ttttaaaggc 360
ctaccctcag gggcatattc tctttctcag ggatgttcct tgatgagaaa aagaattcag 420
cgatatttct cccatttgct tttgaaagaa gagaaatatg gctctgttcc acccagctca 480
ccggcggtca gagtttaagg ttatcactca tgttccctga acattgctgt tatcctgttc 540
ttttttcaag gtgcccagat ttcatattgt tcaaacacac atgctctaca aataatttat 600
gcagttaatg caatcatcac agggtcctgg gaccacatac attctcctca gcttgcaaag 660
atgatgggat taagagatta aagtaaagac aggcatagga aatcacaagg gtattgattg 720
aggaagtgat aagtgttcat gaaatcttca caatttatgt tcagagattg cagtaaagac 780
aggcataaga aattataaaa gtattaattt ggggaactaa taaatgtcca tgaaaacttc 840
ataatctatg ttcttctgcc atggcttcag ccagtccctc ggttcagggt ccctgacttc 900
ctgcaacata catgtgagac tatttcccgc tctgcttttc aaaccttact ggagttgttt 960
tccctcatga aaactaagaa aggaaagcta gttaatctta ttctgaggtt gttcaatata 1020
tacatattca catctgtaga aagatccttg ggaatacagt aattggcata tattctgtta 1080
tttgatgctt gaaaaatctc ttccactaac cagtttccct atagataggc acaagcacat 1140
aggtaagaaa caataaataa atgttctctt taatttgtaa cttcacaatg ctgagaaaac 1200
tttacagcct tcataaggaa gtgaggtcca ggaaaatcta ggagatattt gttaaccaac 1260
ctataaagac attagtaatg acaggatatt tcctgaaagt gtaatttccc attgaggatt 1320
tgtttttaat ttctggattc ctggatccaa tgaagttggc ataggtttat gaaatgccaa 1380
gatacataag ttggcaagtg ttcacatgca aaaaacttct tggaattcct gagctctctg 1440
tggcaatata tgacatcagg atatgtccca tctcgcacat caggatatgt cctgtcaaga 1500
atgtctatca catgccagga gtacttttta ggaacagaaa aaaatgtctg aaatggtttc 1560
tcatttgaac tcatccaagc tttctctaaa tttaagcaaa ctcctggtca ttttcagtta 1620
gtacctttcc tcaagttcaa ccttcatgac aaacctcagc atctcagaag atttagccat 1680
agtctgaaat tctcttccat agactggtcc cctgtaatcc cagtttgcct cagcttgtta 1740
tcctgctttt tattcccctc tattcccagg ctgagcttct tgcttctgtc ctatgagacg 1800
ttagattcct tcactttggt acccaagtaa acccatcctt ctccatatac aggaaggtcc 1860
atttttctct tacagccctg gatgcagact cagctaagaa gaccattatt catttttgga 1920
attcttcatc taggatattt cctcttgttt ctttctctcc tatctttgag ctttttagat 1980
catcaacacc ccattagtct attacccaac ttaaatcagg gaacttatac ctcccaaact 2040
cattcagaga ctccaaacat atatattgat acaggagacc taagaagagc atgtcttggg 2100
ggttgaggaa acaggcaggt gagaaacttc cagattggaa acacagcttc ctttctcccg 2160
tccagcccct acttcatcct atctgtttcc ggaaccttgt tgtagatgaa tctcccttga 2220
cttcatgatg tgctgagaaa acaaactcat ggctggtgtt aaaaagggcc catgacaata 2280
ccaagtgttg gggagaatgt ggagaaatca gaactctatt cacagtcggt tggaatgcac 2340
acttgtgcag aattctatgg agaagagtct ggcatttcct caaaatgtta acctggattt 2400
accatatgac ccagcgattt cattcatagg tttatactca aaagaaatga agaaatatgc 2460
catgcaaaaa aatgtacatg aaaagtcaaa acatcattat tcataatagt aaatggatgg 2520
aaacaacaca aatgtccatc aacttatgaa taaagaaaat gtggtctatt catagaatgg 2580
aatattattc gaccacaaaa aggaatgatg tactgatcca tgcaatgacg tggacaaacc 2640
ttgaagataa tactagatga aagaagccag tcacaaaagg acttactgta tgattcgatt 2700
tacgtgaaat gtttagaata ggcaaatcca tagaaacagg aggtagatta ctggtttcca 2760
gggtctcgag taagggaaga acgagataca agttttcttt tggaggtagt gaaattgttg 2820
tggaacgaga tcatgatggt gatagcacaa ctttgtgaat ataataaaat cattgaattg 2880
tacagttgaa tttgtggcat ataaattata tgttaaaaaa gggggtccac aaaacaaaca 2940
gccccccact ctggttgtca gggagatatt ggattaaatg gccttggaca acaaccctct 3000
ccctggccac agacattctt cagattacaa gatattccag aggaaacact ggaatgagtc 3060
tgaagccagg tgctaaatgg aaggaccacc aagaaacgtt gtgatcctga caggtcaagc 3120
aacttctttt tctgcttaat ttttaaatga aaaattagaa agctgacatt caaaatggcc 3180
cgtctgtttc aattgctctt ctcagtgtca gcctgttaac tcaatgtgtt agtctgtttt 3240
catgctgctg ataaagacat acctgagatt aggaagtaaa agaggtttaa ttggacttag 3300
agttccacgt gattggggag gcctcagaat cacggtagga ggcaaaagtt attcttacat 3360
ggtggctgca agagaaaatg aggaagaagc aaaagaagaa acccctaata aacccattgg 3420
atctcctgag acttattaac tatcatgaga atagcacaag aaagaccggc ccccatgatt 3480
caattacctc tacctgggtc cctccaacaa catgtggaaa ttctggtaga tacaattcaa 3540
gttgagattt gggtgggaac acagccaaac catatcactc agcaaggcag ataactttct 3600
cactgagcct atgcaacaga aaaccatctg ggatggttgt aaggggcaca ggaagtgact 3660
ggtaggatca ctgccaaagc tgagcattca ggagaaggca atagaatcct attctccata 3720
gtatgctata agatactgaa gtacacttct tcactatctc tttggactta gaattagcac 3780
tatattcctt gttatacaga aaaattacta aggaaattca taggatgaca aaaactttca 3840
gaactgaaaa acaggaaatg taagcttttt agttctttgg tattcgaagt atgcctaaaa 3900
gacaatgcaa aatccaagaa aagaatggtg gggtttttgt ttgtttgttt ttgtttttgt 3960
tttacagctg gagtagaata caaagggatg gagttgaaac aaatgagagg aaattggaat 4020
tctaaactta ttctcattgg cattagaaag gcacctacat gtatttcaca tgagccggtg 4080
actgctgact tgcattctta ttttttccct atagattaaa aaggaggtac aatggtagaa 4140
ctgtaatcct gtcctttgtc ataaattttc gtattcataa aggtgagtgt tagcccgctt 4200
gtgaaatctg aagttgagta acttcaaata ctaaccacag agggagaggc agcaagagga 4260
gaggcataaa ttcaggatct cacccttcat tccacagaca cacatagcct ctctgcccac 4320
ctctgcttcc tctaggaaca caggtaagag cttcaagcct ctccagctta ataacatgaa 4380
ttatttttga gaataataat gatactgtgt tctatatcat gcatctcctg cattctgtct 4440
gattatattt tacttattct gccagagcaa aattaaaata cctatttcat ctgatttgtc 4500
ctttatctaa attgcttagt tccaagtaaa ccaaggcact tttaggaaca cagagggaga 4560
gtgccttgca gccagagagt cttgaaggag atgtcaggga cgcatcttaa cagctggttg 4620
gatgtgatcc acagaggtct cctgttagca ttcattgtaa agccttccta cctagcccta 4680
gtgtagccag caatgaagga aagagggtct attacttatt tacagtagtc tttaaaaaca 4740
ctaattttgt gaggcttcta attaagacat taatatattt aatatatgca cattgtagaa 4800
agattgaaac gttaaaaata agatgaggaa aactttaaat gtcaaaatct cacaacacag 4860
atatataatt tctttaagaa aattgtacta caaaatacca ttccatttat taaagtcatt 4920
ctgacaggaa tctgatgctt ttccaggagt tccagatcac atcgagttca ccatgaattc 4980
actcagtgaa gccaacacca agttcatgtt cgacctgttc caacagttca cgaaaatcaa 5040
aagagaacaa catcttctat tcccctatca gcatcacatc agcattaggg atggtcctct 5100
taggagccaa agacaacact gcacaacaga ttaagaaggt agctatcagc atcattatgt 5160
tgtcctgttg cagtttttct ctggttccgt cggctagcac gcagatggta atagatgtgg 5220
tggtctgatg ggtagcacag ggggctgagc aggaattccc gtaactgtga gaccactgg 5279
<210> 6
<211> 4384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Template
<400> 6
gatcaagggg catgcagcca tcggggaaaa tccatagtgc agataaagca aggaggaaga 60
agaaggacag ttctagtaaa agggagaaca tcaatatagg atgtttctta gcaatagaaa 120
aagaaggcca agaggaatta gggagagagt tataagagat cagcaagggg acagggttag 180
atttggtttg gtttgaaagc atacagtaaa tatgatgtct gtccctggca gtgttggcag 240
agtaggaagg aggaagggag gcaagagata atatcatttt ctctgtgctc caactgtact 300
tacatatgag actatttccc tctctgcttt tcaaacctta ctggagttgt tttccctcat 360
gaaaaccaag aaaggaaagc tagttagtct tgttctgagg ttgttcaatg tatacatatc 420
tatatctgta gacagaatcc ttgggaatac agtaattgac atatattctg ttatttgatg 480
cttgaaaaat ctcctccact aaccagtttc cctatagatt gccacaagca cataataaga 540
aacaataaat aaaatgttct cttgactttg ttacttaaca atgctgagaa aactttacag 600
ccttcataag gaagtgaggt ccaggaaaat ctaggagata tttcttaacc aatctataaa 660
ggcattagta atgacaggat atttcctgaa agtgtaattt cccattgagg atttgttttt 720
aatttctgga ttcctggagc caatgaagtt ggtgtatgtt tatgaaatat caagagacat 780
aagttggcaa gtgttcatat gcaaaaactt cttggaattt ctgagttctc tgtggcaata 840
tatgacatca ggatatgtcc agtctcacac accaggatat gtcctttcta gcctgtctat 900
cacatgctag gagaactatt taggaacaga aaaaaatgcc tgaaatgatt tctcatttga 960
actcatccaa gctttctcta aatttaagca aactcctggt cattttcagt tagtaccttt 1020
ccttaagttc aaccttcagg gcaaacctcc gtgcctcaga cgtttagcca tagtctgaaa 1080
ttctcttcca tagattggtc ccctgtaacc ccggtttgtc tcagcttgtt atcctgtttt 1140
tttcttccct ccattcccag gatgagcttg ttgcttctgt cctatgagac attagattcc 1200
ttttctttgg tacccgagta aatccatcct actccaatag aggaaggtcc atttttgtct 1260
tatagcgctg gatgcagact cagctgagaa gaccattatt catttttgga attctttatc 1320
tcagatattt cctcttcttt ctttttcttc tatctttgga tttttagtcc atcaacgccc 1380
cattagtcta ttccccgact tcaatcaggg aacttatacc tcttaaactc attcagagac 1440
tcaaaacata tatattgata caggagacct aagaagagca tgtcttgggg gttgaggaaa 1500
caggcaggtg agaaatttcc agattggaaa cacagcttcc tttctcccat ccagccccta 1560
ctttcagcct atgtgtttct ggcaccttgt tgtagataaa tctcccttga ctttgtgatg 1620
tgctgagaaa acaaactcac ggctggtgtt aaaaagggcc catgacaata ccaagtgttg 1680
gggagaatgt ggagaaatca gaactctatt cacggtcggt tggaatgcac acttgtgcag 1740
aattctatgg agaagagtct ggcatttcct caaaatgtta acctggattt accatatgac 1800
ccagcgattt cattcatagg tttatactca aaagaaatga agaaatatgc catgcaaaaa 1860
aatgtacatg aaaggtcaca acatcattat tcataatagt aaaaggatgg aaacaacaca 1920
aatgtccatc aacttatgat taaagaaaat ctggtctatt catagaatgg aatattattc 1980
gaccacaaaa aggaatgatg tactgatcca tgcaatgatg tggacaaacc atgaaaataa 2040
cactagatta aagaagccag tcacaaaagg acttactgta tgattccatt tacctgaaat 2100
gtttggaata ggcaaatcca tagaaacagg aggtagattc ctggtttcca gggtctccag 2160
gaagggaaga atgaagtaca agatttcttt tggaggtagt gaaattgttg tggaatgaga 2220
tcatgatgat gatagcacaa ctttgtgaat ataataaaat cattgaattg tacagttgaa 2280
tttatggtat ataaattata tgttaataaa aagggggtcc acaaaacaaa cagcccccca 2340
ctctggttgt cagggagata ttggattaaa tggccttgga caacaacccc tctccctggc 2400
cacagacatt cttcagatta caagatattc caggggaaac actggaatga gtctgaagcc 2460
aggtgctaaa cagaaggacc attgagaaat gttgtgatcc tgacaggtca agcaatttat 2520
ttttcggctt catttttaaa tgtaaaatta gaaagctgcc atttaaaatg gcccgtctgt 2580
ttcaattgct cttctcagtg tcagcctgtt aactcaatgt gttagtctgt tttcatgctg 2640
ctgataaaaa catacctgag actggcaaga aaaagaggtt taattgggct tagagttcca 2700
cgtgattggg gaggcctcag aatcacagta ggaggcaaaa gttattctta catggtggct 2760
gcaagagaag atgaggaaga agcaaaagaa gaaacccctg ataaacccat cggatctcct 2820
gaggcttatt aactatcatg agaatagcac aagaaagacc ggcccccatg attcaattac 2880
ctctacctgg gtccctccaa taacatgtgg aaattctggt agatacaatt caagttgaga 2940
tttgggtggg aacacagcca aaccatatca ctcagcaagg cagataactt tctcactgag 3000
cctatgcaac agaaaaccat ctgggatggt tgtaaggggc acaggaagtg actggtagga 3060
tcactgccaa agctgagcac tcaggagaag gcaatagaat cctattctcc atagtatgct 3120
ataagatact gaagtacact tcttcactat ctctttggac ttagaattag cactacattc 3180
cttgttatac agaaaaatta ctaaggaaat tcataggatg acaaaaactt tcagaactga 3240
aaaacaggaa atgtaagctt tttagttctt tggtattcga agtatgccta aaagacaatg 3300
caaaatccaa gaaaagaatg gtggggtttt tgtttgtttg gttttgtttt tgttttacag 3360
ctggagtaga atacaaaggg atggagttga aacaaatgag aggaaattgg aattctaaac 3420
ttattctcat tggcattaga aaggcaccta catgtatttc acatgagccg gtgactgctg 3480
acttgcattc ttattttttc cctatagatt aaaaaggagg tacaatggta gaactgtaat 3540
cctgtccttt gtcataaatt ttcatattca taaaggtgag tgttagcccg cttgtgaaat 3600
ctgaagttga gtaacttcaa atactaacca cagagggaaa ggcagcaaga ggagaggcat 3660
aaatttagga tctcaccctt cattccacag acacacacag cctctctgcc cacctctgct 3720
tcctctagga acacaggtaa gagcttcaag cctctccagc ttaataacat gaattatttt 3780
tgagaataat aatgatactg tgttctatat catgcatctc ctgcattctg tctgattata 3840
ttttacttat tctgccagag caaaattaaa atacctattt catctgattt gtcctttatc 3900
taaattgctt agttccaagt aaaccaaggc acttttagga acacagaggg agagtgcctt 3960
gcagccagag agtcttgaag gagatgtcag ggacgcatct taacagctgg ttggatgtga 4020
tccacagagg tctcctgtta gcattcattg taaagccatc ctacctagct ctagtgtaac 4080
cagcaatgaa agaaagataa agagggtcga ttacttattt acaatagtct ttaaaaacgt 4140
agttttgtaa gccttctaat taggacatta atatatttaa tatatgcaca ttgtagaaag 4200
attgaagcgt taaaaataag agaaaaactt taaatgtcaa aatctcacaa cccagatata 4260
tcatttcttt aagaaaattg tactacaaaa taccattcca tttattaaag tcattctgac 4320
aggaatctga tgcttttcca ggagttccag atcacatcga gttcaccatg aattcactca 4380
gtga 4384
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 7
aagcagtggt aacaacgcag agtacgcggg 30
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 8
aagcagtggt aacaacgcag agt 23
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 9
ccagatagca cgagaccgc 19
<210> 10
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 10
cccacgcgtc cggtgactgc tgacttgca 29
<210> 11
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 11
cccacgcgta tgacaaaaac tttcagaac 29
<210> 12
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 12
cccacgcgtc agaatcacgg taggaggca 29
<210> 13
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 13
cccacgcgtg gttggaatgc acacttgtg 29
<210> 14
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 14
cccacgcgtt cctcagcttg caaagatga 29
<210> 15
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 15
cccagatcta gaggtgggca gagaggcta 29
<210> 16
<211> 250
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag attaaaaagg aggtacaatg 60
gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcgtat tcataaaggt gagtgttagc 120
ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa ccacagaggg agaggcagca 180
agaggagagg cataaattca ggatctcacc cttcattcca cagacacaca tagcctctct 240
gcccacctct 250
<210> 17
<211> 500
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag ctttttagtt ctttggtatt 60
cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga atggtggggt ttttgtttgt 120
ttgtttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa gggatggagt tgaaacaaat 180
gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt agaaaggcac ctacatgtat 240
ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag attaaaaagg 300
aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcgtat tcataaaggt 360
gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa ccacagaggg 420
agaggcagca agaggagagg cataaattca ggatctcacc cttcattcca cagacacaca 480
tagcctctct gcccacctct 500
<210> 18
<211> 1000
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 18
cagaatcacg gtaggaggca aaagttattc ttacatggtg gctgcaagag aaaatgagga 60
agaagcaaaa gaagaaaccc ctaataaacc cattggatct cctgagactt attaactatc 120
atgagaatag cacaagaaag accggccccc atgattcaat tacctctacc tgggtccctc 180
caacaacatg tggaaattct ggtagataca attcaagttg agatttgggt gggaacacag 240
ccaaaccata tcactcagca aggcagataa ctttctcact gagcctatgc aacagaaaac 300
catctgggat ggttgtaagg ggcacaggaa gtgactggta ggatcactgc caaagctgag 360
cattcaggag aaggcaatag aatcctattc tccatagtat gctataagat actgaagtac 420
acttcttcac tatctctttg gacttagaat tagcactata ttccttgtta tacagaaaaa 480
ttactaagga aattcatagg atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag 540
ctttttagtt ctttggtatt cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga 600
atggtggggt ttttgtttgt ttgtttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa 660
gggatggagt tgaaacaaat gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt 720
agaaaggcac ctacatgtat ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt 780
ttccctatag attaaaaagg aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa 840
attttcgtat tcataaaggt gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt 900
caaatactaa ccacagaggg agaggcagca agaggagagg cataaattca ggatctcacc 960
cttcattcca cagacacaca tagcctctct gcccacctct 1000
<210> 19
<211> 1997
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 19
ggttggaatg cacacttgtg cagaattcta tggagaagag tctggcattt cctcaaaatg 60
ttaacctgga tttaccatat gacccagcga tttcattcat aggtttatac tcaaaagaaa 120
tgaagaaata tgccatgcaa aaaaatgtac atgaaaagtc aaaacatcat tattcataat 180
agtaaatgga tggaaacaac acaaatgtcc atcaacttat gaataaagaa aatgtggtct 240
attcatagaa tggaatatta ttcgaccaca aaaaggaatg atgtactgat ccatgcaatg 300
acgtggacaa accttgaaga taatactaga tgaaagaagc cagtcacaaa aggacttact 360
gtatgattcg atttacgtga aatgtttaga ataggcaaat ccatagaaac aggaggtaga 420
ttactggttt ccagggtctc gagtaaggga agaacgagat acaagttttc ttttggaggt 480
agtgaaattg ttgtggaacg agatcatgat ggtgatagca caactttgtg aatataataa 540
aatcattgaa ttgtacagtt gaatttgtgg catataaatt atatgttaaa aaagggggtc 600
cacaaaacaa acagcccccc actctggttg tcagggagat attggattaa atggccttgg 660
acaacaaccc tctccctggc cacagacatt cttcagatta caagatattc cagaggaaac 720
actggaatga gtctgaagcc aggtgctaaa tggaaggacc accaagaaac gttgtgatcc 780
tgacaggtca agcaacttct ttttctgctt aatttttaaa tgaaaaatta gaaagctgac 840
attcaaaatg gcccgtctgt ttcaattgct cttctcagtg tcagcctgtt aactcaatgt 900
gttagtctgt tttcatgctg ctgataaaga catacctgag attaggaagt aaaagaggtt 960
taattggact tagagttcca cgtgattggg gaggcctcag aatcacggta ggaggcaaaa 1020
gttattctta catggtggct gcaagagaaa atgaggaaga agcaaaagaa gaaaccccta 1080
ataaacccat tggatctcct gagacttatt aactatcatg agaatagcac aagaaagacc 1140
ggcccccatg attcaattac ctctacctgg gtccctccaa caacatgtgg aaattctggt 1200
agatacaatt caagttgaga tttgggtggg aacacagcca aaccatatca ctcagcaagg 1260
cagataactt tctcactgag cctatgcaac agaaaaccat ctgggatggt tgtaaggggc 1320
acaggaagtg actggtagga tcactgccaa agctgagcat tcaggagaag gcaatagaat 1380
cctattctcc atagtatgct ataagatact gaagtacact tcttcactat ctctttggac 1440
ttagaattag cactatattc cttgttatac agaaaaatta ctaaggaaat tcataggatg 1500
acaaaaactt tcagaactga aaaacaggaa atgtaagctt tttagttctt tggtattcga 1560
agtatgccta aaagacaatg caaaatccaa gaaaagaatg gtggggtttt tgtttgtttg 1620
tttttgtttt tgttttacag ctggagtaga atacaaaggg atggagttga aacaaatgag 1680
aggaaattgg aattctaaac ttattctcat tggcattaga aaggcaccta catgtatttc 1740
acatgagccg gtgactgctg acttgcattc ttattttttc cctatagatt aaaaaggagg 1800
tacaatggta gaactgtaat cctgtccttt gtcataaatt ttcgtattca taaaggtgag 1860
tgttagcccg cttgtgaaat ctgaagttga gtaacttcaa atactaacca cagagggaga 1920
ggcagcaaga ggagaggcat aaattcagga tctcaccctt cattccacag acacacatag 1980
cctctctgcc cacctct 1997
<210> 20
<211> 3680
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 20
tcctcagctt gcaaagatga tgggattaag agattaaagt aaagacaggc ataggaaatc 60
acaagggtat tgattgagga agtgataagt gttcatgaaa tcttcacaat ttatgttcag 120
agattgcagt aaagacaggc ataagaaatt ataaaagtat taatttgggg aactaataaa 180
tgtccatgaa aacttcataa tctatgttct tctgccatgg cttcagccag tccctcggtt 240
cagggtccct gacttcctgc aacatacatg tgagactatt tcccgctctg cttttcaaac 300
cttactggag ttgttttccc tcatgaaaac taagaaagga aagctagtta atcttattct 360
gaggttgttc aatatataca tattcacatc tgtagaaaga tccttgggaa tacagtaatt 420
ggcatatatt ctgttatttg atgcttgaaa aatctcttcc actaaccagt ttccctatag 480
ataggcacaa gcacataggt aagaaacaat aaataaatgt tctctttaat ttgtaacttc 540
acaatgctga gaaaacttta cagccttcat aaggaagtga ggtccaggaa aatctaggag 600
atatttgtta accaacctat aaagacatta gtaatgacag gatatttcct gaaagtgtaa 660
tttcccattg aggatttgtt tttaatttct ggattcctgg atccaatgaa gttggcatag 720
gtttatgaaa tgccaagata cataagttgg caagtgttca catgcaaaaa acttcttgga 780
attcctgagc tctctgtggc aatatatgac atcaggatat gtcccatctc gcacatcagg 840
atatgtcctg tcaagaatgt ctatcacatg ccaggagtac tttttaggaa cagaaaaaaa 900
tgtctgaaat ggtttctcat ttgaactcat ccaagctttc tctaaattta agcaaactcc 960
tggtcatttt cagttagtac ctttcctcaa gttcaacctt catgacaaac ctcagcatct 1020
cagaagattt agccatagtc tgaaattctc ttccatagac tggtcccctg taatcccagt 1080
ttgcctcagc ttgttatcct gctttttatt cccctctatt cccaggctga gcttcttgct 1140
tctgtcctat gagacgttag attccttcac tttggtaccc aagtaaaccc atccttctcc 1200
atatacagga aggtccattt ttctcttaca gccctggatg cagactcagc taagaagacc 1260
attattcatt tttggaattc ttcatctagg atatttcctc ttgtttcttt ctctcctatc 1320
tttgagcttt ttagatcatc aacaccccat tagtctatta cccaacttaa atcagggaac 1380
ttatacctcc caaactcatt cagagactcc aaacatatat attgatacag gagacctaag 1440
aagagcatgt cttgggggtt gaggaaacag gcaggtgaga aacttccaga ttggaaacac 1500
agcttccttt ctcccgtcca gcccctactt catcctatct gtttccggaa ccttgttgta 1560
gatgaatctc ccttgacttc atgatgtgct gagaaaacaa actcatggct ggtgttaaaa 1620
agggcccatg acaataccaa gtgttgggga gaatgtggag aaatcagaac tctattcaca 1680
gtcggttgga atgcacactt gtgcagaatt ctatggagaa gagtctggca tttcctcaaa 1740
atgttaacct ggatttacca tatgacccag cgatttcatt cataggttta tactcaaaag 1800
aaatgaagaa atatgccatg caaaaaaatg tacatgaaaa gtcaaaacat cattattcat 1860
aatagtaaat ggatggaaac aacacaaatg tccatcaact tatgaataaa gaaaatgtgg 1920
tctattcata gaatggaata ttattcgacc acaaaaagga atgatgtact gatccatgca 1980
atgacgtgga caaaccttga agataatact agatgaaaga agccagtcac aaaaggactt 2040
actgtatgat tcgatttacg tgaaatgttt agaataggca aatccataga aacaggaggt 2100
agattactgg tttccagggt ctcgagtaag ggaagaacga gatacaagtt ttcttttgga 2160
ggtagtgaaa ttgttgtgga acgagatcat gatggtgata gcacaacttt gtgaatataa 2220
taaaatcatt gaattgtaca gttgaatttg tggcatataa attatatgtt aaaaaagggg 2280
gtccacaaaa caaacagccc cccactctgg ttgtcaggga gatattggat taaatggcct 2340
tggacaacaa ccctctccct ggccacagac attcttcaga ttacaagata ttccagagga 2400
aacactggaa tgagtctgaa gccaggtgct aaatggaagg accaccaaga aacgttgtga 2460
tcctgacagg tcaagcaact tctttttctg cttaattttt aaatgaaaaa ttagaaagct 2520
gacattcaaa atggcccgtc tgtttcaatt gctcttctca gtgtcagcct gttaactcaa 2580
tgtgttagtc tgttttcatg ctgctgataa agacatacct gagattagga agtaaaagag 2640
gtttaattgg acttagagtt ccacgtgatt ggggaggcct cagaatcacg gtaggaggca 2700
aaagttattc ttacatggtg gctgcaagag aaaatgagga agaagcaaaa gaagaaaccc 2760
ctaataaacc cattggatct cctgagactt attaactatc atgagaatag cacaagaaag 2820
accggccccc atgattcaat tacctctacc tgggtccctc caacaacatg tggaaattct 2880
ggtagataca attcaagttg agatttgggt gggaacacag ccaaaccata tcactcagca 2940
aggcagataa ctttctcact gagcctatgc aacagaaaac catctgggat ggttgtaagg 3000
ggcacaggaa gtgactggta ggatcactgc caaagctgag cattcaggag aaggcaatag 3060
aatcctattc tccatagtat gctataagat actgaagtac acttcttcac tatctctttg 3120
gacttagaat tagcactata ttccttgtta tacagaaaaa ttactaagga aattcatagg 3180
atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag ctttttagtt ctttggtatt 3240
cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga atggtggggt ttttgtttgt 3300
ttgtttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa gggatggagt tgaaacaaat 3360
gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt agaaaggcac ctacatgtat 3420
ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag attaaaaagg 3480
aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcgtat tcataaaggt 3540
gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa ccacagaggg 3600
agaggcagca agaggagagg cataaattca ggatctcacc cttcattcca cagacacaca 3660
tagcctctct gcccacctct 3680
<210> 21
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 21
cccacgcgtt gtgaaatctg aagttgagt 29
<210> 22
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 22
cccacgcgta atagaatcct attctccat 29
<210> 23
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 23
cccacgcgtt cactcagcaa ggcagataa 29
<210> 24
<211> 125
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 24
tgtgaaatct gaagttgagt aacttcaaat actaaccaca gagggagagg cagcaagagg 60
agaggcataa attcaggatc tcacccttca ttccacagac acacatagcc tctctgccca 120
cctct 125
<210> 25
<211> 625
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 25
aatagaatcc tattctccat agtatgctat aagatactga agtacacttc ttcactatct 60
ctttggactt agaattagca ctatattcct tgttatacag aaaaattact aaggaaattc 120
ataggatgac aaaaactttc agaactgaaa aacaggaaat gtaagctttt tagttctttg 180
gtattcgaag tatgcctaaa agacaatgca aaatccaaga aaagaatggt ggggtttttg 240
tttgtttgtt tttgtttttg ttttacagct ggagtagaat acaaagggat ggagttgaaa 300
caaatgagag gaaattggaa ttctaaactt attctcattg gcattagaaa ggcacctaca 360
tgtatttcac atgagccggt gactgctgac ttgcattctt attttttccc tatagattaa 420
aaaggaggta caatggtaga actgtaatcc tgtcctttgt cataaatttt cgtattcata 480
aaggtgagtg ttagcccgct tgtgaaatct gaagttgagt aacttcaaat actaaccaca 540
gagggagagg cagcaagagg agaggcataa attcaggatc tcacccttca ttccacagac 600
acacatagcc tctctgccca cctct 625
<210> 26
<211> 750
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 26
tcactcagca aggcagataa ctttctcact gagcctatgc aacagaaaac catctgggat 60
ggttgtaagg ggcacaggaa gtgactggta ggatcactgc caaagctgag cattcaggag 120
aaggcaatag aatcctattc tccatagtat gctataagat actgaagtac acttcttcac 180
tatctctttg gacttagaat tagcactata ttccttgtta tacagaaaaa ttactaagga 240
aattcatagg atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag ctttttagtt 300
ctttggtatt cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga atggtggggt 360
ttttgtttgt ttgtttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa gggatggagt 420
tgaaacaaat gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt agaaaggcac 480
ctacatgtat ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag 540
attaaaaagg aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcgtat 600
tcataaaggt gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa 660
ccacagaggg agaggcagca agaggagagg cataaattca ggatctcacc cttcattcca 720
cagacacaca tagcctctct gcccacctct 750
<210> 27
<211> 125
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 27
tgtgaaatct gaagttgagt aacttcaaat actaaccaca gagggaaagg cagcaagagg 60
agaggcataa atttaggatc tcacccttca ttccacagac acacatagcc tctctgccca 120
cctct 125
<210> 28
<211> 250
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 28
ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag attaaaaagg aggtacaatg 60
gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcatat tcataaaggt gagtgttagc 120
ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa ccacagaggg aaaggcagca 180
agaggagagg cataaattta ggatctcacc cttcattcca cagacacaca tagcctctct 240
gcccacctct 250
<210> 29
<211> 500
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 29
atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag ctttttagtt ctttggtatt 60
cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga atggtggggt ttttgtttgt 120
ttggttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa gggatggagt tgaaacaaat 180
gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt agaaaggcac ctacatgtat 240
ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag attaaaaagg 300
aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcatat tcataaaggt 360
gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa ccacagaggg 420
aaaggcagca agaggagagg cataaattta ggatctcacc cttcattcca cagacacaca 480
tagcctctct gcccacctct 500
<210> 30
<211> 625
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 30
aatagaatcc tattctccat agtatgctat aagatactga agtacacttc ttcactatct 60
ctttggactt agaattagca ctacattcct tgttatacag aaaaattact aaggaaattc 120
ataggatgac aaaaactttc agaactgaaa aacaggaaat gtaagctttt tagttctttg 180
gtattcgaag tatgcctaaa agacaatgca aaatccaaga aaagaatggt ggggtttttg 240
tttgtttggt tttgtttttg ttttacagct ggagtagaat acaaagggat ggagttgaaa 300
caaatgagag gaaattggaa ttctaaactt attctcattg gcattagaaa ggcacctaca 360
tgtatttcac atgagccggt gactgctgac ttgcattctt attttttccc tatagattaa 420
aaaggaggta caatggtaga actgtaatcc tgtcctttgt cataaatttt catattcata 480
aaggtgagtg ttagcccgct tgtgaaatct gaagttgagt aacttcaaat actaaccaca 540
gagggaaagg cagcaagagg agaggcataa atttaggatc tcacccttca ttccacagac 600
acacatagcc tctctgccca cctct 625
<210> 31
<211> 750
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 31
tcactcagca aggcagataa ctttctcact gagcctatgc aacagaaaac catctgggat 60
ggttgtaagg ggcacaggaa gtgactggta ggatcactgc caaagctgag cactcaggag 120
aaggcaatag aatcctattc tccatagtat gctataagat actgaagtac acttcttcac 180
tatctctttg gacttagaat tagcactaca ttccttgtta tacagaaaaa ttactaagga 240
aattcatagg atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag ctttttagtt 300
ctttggtatt cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga atggtggggt 360
ttttgtttgt ttggttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa gggatggagt 420
tgaaacaaat gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt agaaaggcac 480
ctacatgtat ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt ttccctatag 540
attaaaaagg aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa attttcatat 600
tcataaaggt gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt caaatactaa 660
ccacagaggg aaaggcagca agaggagagg cataaattta ggatctcacc cttcattcca 720
cagacacaca tagcctctct gcccacctct 750
<210> 32
<211> 1001
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 32
cagaatcacg gtaggaggca aaagttattc ttacatggtg gctgcaagag aagatgagga 60
agaagcaaaa gaagaaaccc ctgataaacc catcggatct cctgaggctt attaactatc 120
atgagaatag cacaagaaag accggccccc atgattcaat tacctctacc tgggtccctc 180
caataacatg tggaaattct ggtagataca attcaagttg agatttgggt gggaacacag 240
ccaaaccata tcactcagca aggcagataa ctttctcact gagcctatgc aacagaaaac 300
catctgggat ggttgtaagg ggcacaggaa gtgactggta ggatcactgc caaagctgag 360
cactcaggag aaggcaatag aatcctattc tccatagtat gctataagat actgaagtac 420
acttcttcac tatctctttg gacttagaat tagcactaca ttccttgtta tacagaaaaa 480
ttactaagga aattcatagg atgacaaaaa ctttcagaac tgaaaaacag gaaatgtaag 540
ctttttagtt ctttggtatt cgaagtatgc ctaaaagaca atgcaaaatc caagaaaaga 600
atggtggggt ttttgtttgt ttggttttgt ttttgtttta cagctggagt agaatacaaa 660
gggatggagt tgaaacaaat gagaggaaat tggaattcta aacttattct cattggcatt 720
agaaaggcac ctacatgtat ttcacatgag ccggtgactg ctgacttgca ttcttatttt 780
ttccctatag attaaaaagg aggtacaatg gtagaactgt aatcctgtcc tttgtcataa 840
attttcatat tcataaaggt gagtgttagc ccgcttgtga aatctgaagt tgagtaactt 900
caaatactaa ccacagaggg aaaggcagca agaggagagg cataaattta ggatctcacc 960
cttcattcca cagacacaca tagcctctct sgcccacctc t 1001
Claims (3)
- 편평상피세포에 치료용 유전자를 특이적으로 발현시키는, 하기 (a) ∼ (d) 중 어느 하나의 치료용 유전자 발현 염기서열.(a) 서열번호 1 로 표시되는 전체 염기서열(b) 서열번호 18 로 표시되는 전체 염기서열(c) 서열번호 17 로 표시되는 전체 염기서열(d) 서열번호 16 로 표시되는 전체 염기서열.
- 삭제
- 제 1 항에 기재된 치료용 유전자 발현 염기서열의 하류영역에 치료용 유전자를 갖고, 치료용 유전자를 편평상피세포에 특이적으로 발현시키는 유전자 치료용 약제.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9635899 | 1999-04-02 | ||
| JPJP-P-1999-00096358 | 1999-04-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20010112930A KR20010112930A (ko) | 2001-12-22 |
| KR100636578B1 true KR100636578B1 (ko) | 2006-10-19 |
Family
ID=14162782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020017012338A KR100636578B1 (ko) | 1999-04-02 | 2000-03-31 | 치료용 유전자 발현 염기서열 및 유전자 치료용 약제 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6815430B1 (ko) |
| EP (1) | EP1174501B1 (ko) |
| KR (1) | KR100636578B1 (ko) |
| AT (1) | ATE275629T1 (ko) |
| CA (1) | CA2365545A1 (ko) |
| DE (1) | DE60013586T2 (ko) |
| WO (1) | WO2000060068A1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5858601B2 (ja) * | 2010-08-24 | 2016-02-10 | 花王株式会社 | シミ関連遺伝子 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9214857D0 (en) * | 1992-07-13 | 1992-08-26 | Medical Res Council | Human nucleic acid fragments and their use |
| US5728379A (en) * | 1994-06-23 | 1998-03-17 | Georgetown University | Tumor- or cell-specific herpes simplex virus replication |
| US20030026789A1 (en) | 1995-05-03 | 2003-02-06 | Richard J. Gregory | Gene therapy using replication competent targeted adenoviral vectors |
| DE19525900C1 (de) | 1995-07-15 | 1996-12-12 | Max Planck Gesellschaft | Leberspezifischer Adenovirus-Expressionsvektor |
| JPH0928378A (ja) | 1995-07-17 | 1997-02-04 | Soosei:Kk | 神経細胞特異的に発現するアデノウイルスベクター |
| GB9616685D0 (en) | 1995-10-02 | 1996-09-25 | Cancer Res Campaign Tech | Antitumour vector constructs and methods |
| DE19704301C1 (de) | 1997-02-06 | 1998-03-26 | Hoechst Ag | Der Promotor des humanen Endoglingens und seine Verwendung für die Gentherapie |
| EP0893493A3 (de) | 1997-07-21 | 2002-12-04 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Genetisch veränderte Zellen und deren Verwendung in der Prophylaxe oder Therapie von Erkrankungen |
-
2000
- 2000-03-31 AT AT00913045T patent/ATE275629T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-03-31 CA CA002365545A patent/CA2365545A1/en not_active Abandoned
- 2000-03-31 WO PCT/JP2000/002102 patent/WO2000060068A1/ja active IP Right Grant
- 2000-03-31 EP EP00913045A patent/EP1174501B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-31 KR KR1020017012338A patent/KR100636578B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-03-31 US US09/958,021 patent/US6815430B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-31 DE DE60013586T patent/DE60013586T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1174501A1 (en) | 2002-01-23 |
| WO2000060068A1 (fr) | 2000-10-12 |
| KR20010112930A (ko) | 2001-12-22 |
| US6815430B1 (en) | 2004-11-09 |
| EP1174501B1 (en) | 2004-09-08 |
| DE60013586T2 (de) | 2005-02-03 |
| EP1174501A4 (en) | 2002-07-03 |
| DE60013586D1 (de) | 2004-10-14 |
| ATE275629T1 (de) | 2004-09-15 |
| CA2365545A1 (en) | 2000-10-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2020270508B2 (en) | C/EBP alpha short activating RNA compositions and methods of use | |
| Santoso et al. | Adenovirus-based p53 gene therapy in ovarian cancer | |
| Akagi et al. | Therapeutic antitumor response after immunization with an admixture of recombinant vaccinia viruses expressing a modified MUC1 gene and the murine T-cell costimulatory molecule B7 | |
| US5965535A (en) | Mage-3 peptides presented by HLA class II molecules | |
| KR20210013105A (ko) | 공유 항원 | |
| US9475865B2 (en) | Direct administration of REIC/Dkk-3 to mesothelioma | |
| JPH08505878A (ja) | 免疫原のリソソーム標的 | |
| KR20220016137A (ko) | 변형된 아데노바이러스 | |
| KR20210090650A (ko) | 알파바이러스 신생항원 벡터 및 인터페론 억제제 | |
| EP3388522B1 (en) | Antitumor composition comprising gm-csf gene, flt3l-trail fusion gene, shrna inhibiting tgf- expression, and shrna inhibiting hsp expression | |
| KR20230079359A (ko) | 아데노바이러스 벡터 및 아데노바이러스 벡터의 사용 방법 | |
| US5981279A (en) | Compositions and methods to regulate calmodulin gene expression, and uses thereof for influencing cell growth and differentiation | |
| EP3784252A1 (en) | Fusogenic lipid nanoparticles and methods for the manufacture and use thereof for the target cell-specific production of a therapeutic protein and for the treatment of a disease, condition, or disorder associated with a target cell | |
| KR20230014694A (ko) | 항원-코딩 카세트 | |
| US6030956A (en) | Combination gene therapy for human cancers | |
| US20020068288A1 (en) | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer | |
| KR100636578B1 (ko) | 치료용 유전자 발현 염기서열 및 유전자 치료용 약제 | |
| CZ295967B6 (cs) | Defektní rekombinantní virus nesoucí gen pro nádorově specifický antigen a farmaceutické přípravky obsahující takový virus | |
| JP4771576B2 (ja) | Ｇａｓｃ１遺伝子 | |
| CN102086453A (zh) | 以粘蛋白1和生存素为靶点的肿瘤dna疫苗及病毒载体疫苗 | |
| US6635483B1 (en) | Compound and methods of inhibiting or stimulating presenilin 1 and related pharmaceuticals and diagnostic agents | |
| Odin et al. | Canarypox virus expressing wild type p53 for gene therapy in murine tumors mutated in p53 | |
| CN113874512A (zh) | 诱导毛细胞分化的组合物和方法 | |
| NZ527261A (en) | Polynucleotide useful for modulating cancer cell proliferation | |
| WO1999050412A1 (fr) | GENES HUMAINS p51 ET LEURS PRODUITS GENIQUES |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |