KR100593255B1 - 신규한 바실러스 균주 및 그 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바실러스 에스피 87 (KACC 91098) 및 이의 용도에 관한 것으로서, 상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 생체 안전성이 인정되고, 병원성 세균 억제활성을 가지며, 장내에서 독립된 균총(Niche)으로서 미생물의 길항 작용을 통한 병원성 균총의 증식을 감소시켜 질병을 예방하는 효과가 있다.

Description

신규한 바실러스 균주 및 그 용도{Novel Bacillus Strain and Its Use}
도 1은 본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주의 동정 및 특성 규명을 위한 절차흐름도이다.
도 2는 본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주의 그람 염색후의 현미경 사진
도 3은 본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주의 16S rRNA의 염기서열
본 발명은 신규한 바실러스 미생물과 이의 산업적 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 건강한 젖소의 신선한 우유로부터 분리 동정된 신규한 바실러스 속 미생물인 바실러스 에스피 (Bacillus sp) 87균주 (KACC-91098) 및 이를 함유하는 생균제 조성, 사료첨가제로서의 용도에 관한 것이다.
생균제 (Probiotics)는 생명체를 위한 미생물군을 총괄하며 바실루스 속(Bacillus spp.), 엔테로코커스 속(Enterococcus spp.), 스트렙토코커스 속(Streptococcus spp.), 락토바실러스 속 (Lactobacillus spp.) 및 효모 등이 주종을 차지하고 있다. 생균제로서 적합한 기능은 생체에 안전하며, 섭취시 생체내 생화학적 환경 즉 내산성, 내담즙성, 장관부착능, 유해병원균에 대한 길항능, 바이타민 B12와 같은 유용성분 합성능 및 균체성분 자체의 동물체내에서의 비특이적 면역활성능의 활성화기능을 전제로 한다.
원유는 축산의 식품으로서 모유의 기능을 대체하며 다양한 가공방법을 통하여 인간이 섭취하는 천연식품이다. 우유에 존재하는 미생물에 대해서는 오래 전부터 연구되기 시작하였으며, 대표적인 미생물로는 바실루스 속 (Bacillus spp.), 엔테로코커스 속 (Enterococcus spp.), 스트렙토코커스 속 (Streptococcus spp.) 및 락토바실러스 속 미생물이나 부패와 관련된 병원성 미생물이 주종을 이루고 있다. 특히, 바실러스 속(Bacillus spp), 엔테로코커스 속 (Enterococcus spp.), 스트렙토코커스 속 (Streptococcus spp.), 및 락토바실러스 속 (Lactobacillus spp.) 미생물은 기타 유해한 병원균 군과 같이 사람을 포함한 동물의 장관 및 유제품이나 원유의 발효과정에서 흔히 볼 수 있다. 실제 락토바실러스 속 미생물은 장내 pH를 산성으로 유지시켜 대장균 (E. coli)이나 클로스트리디움 (Clostridium spp.)과 같은 유해균이나 설사 원인균의 증식을 억제하고 장내균총을 정상화시키므로 기능성 생균제로서 많이 사용되고 있다. 그러나, 병원성 미생물에 대한 길항 작용이나 정균 능력은 락토바실러스 속 미생물에만 한정되어 있는 것은 아니며 자연계에 널리 분포된 바실러스 속 및 엔테로코커스 속이나 효모속에서도 역시 병원성 미생물에 대한 유사한 항균 기능을 하는 것으로서 보고되어 있다.
축산 분야의 경우 경제적 관점에서 가축의 생산성을 높이고자, 사료에 항생물질을 첨가하여 병원성 미생물에 의한 피해를 예방하는 것이 보편화된 현실이나 항생물질에 대한 내성균의 출현과 축산물 내 잔류 항생물질 등의 문제가 심각한 문제로 대두되고 있다. 이와 같은 차원에서 항생제 기능을 대체 할 수 있는 기능성 생균제 (Probiotics)의 사용이 활발하게 연구되고 있다.
본 발명자들은 동물사료에 적용될 수 있는 생균제로서 유용한 균주인 바실러스 에스피 87 균주가 이화학적 특성, 유해 미생물에 대한 길항능력, 억제활성 및 동물체내에서의 비특이적 면역활성능이 우수함을 확인하고서 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 동물의 질환 예방을 위한 면역활성능을 가지고 있어 기능성 생균제로서 사용이 가능한 신규한 바실러스 속 미생물을 제공함에 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규한 바실러스 속 미생물을 함유하는 생균제를 제공함에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규한 바실러스 속 미생물을 함유하는 생균제를 함유하는 사료첨가제를 제공함에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 안전하며, 동물의 질환 예방을 위한 면역활성능이 우수한 신규 바실러스 에스피 87 균주를 제공한다.
본 발명은 상기 신규한 바실러스 에스피 87 균주를 포함하는 동물의 병원성 세균의 발생예방을 위한 생균제를 제공한다.
본 발명은 상기 바실러스 에스피 87 균주를 포함하는 생균제를 함유하는 병원성 미생물에 의한 질환을 예방하기 위한 사료첨가제를 제공한다.
이하, 본 발명의 내용을 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 건강한 젖소의 최상급의 원유에서 분리한 바실러스 속 미생물을 제공한다. 본 발명에 따른 바실러스 속 미생물은 바실러스 (Bacillus sp)로 내산성, 내담즙성, 유해 미생물 억제활성 및 생체 안전성이 우수한 특성이 있다.
바실러스 속 미생물은 자연계에 널리 존재하며 탄수화물을 호기적으로 이용한다. 일반적으로 바실러스 속의 바실러스 서브틸리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 코아귤런스 등과 같은 세균은 직접 혹은 간접적으로 사료에 첨가되어 생체내 길항작용이나 분비 항균성물질에 의하여 병원성 미생물에 의한 피해를 예방한다고 알려져 있다. 또한, 사료을 통하여 섭취된 첨가균은 장내로 유입된 후 장내 상피세포에 착생하게 되어 병원성 미생물의 저해 및 길항작용, 면역활성의 증진 등 섭취동물에 많은 도움을 준다.
따라서, 바실러스균은 생균제 (probiotics)로 오래 전부터 이용되고 있다. 그런데, 균을 생균제로 이용하기 위해서는 그 균이 위산이나 담즙에 내성이 있어 장내 도달율이 높아야 하며, 장내 상피 세포나 점막에 흡착하여 정착할 수 있고, 바람직하게는 항균 물질을 분비하여 유해균을 억제함으로써 장을 안정화시킬 수 있 으며, 유해균의 장 정착을 방지하며 첨가제로서의 사용이 가능하고 안전해야 한다. 본 발명의 바실러스 균주(Bacillus sp)는 위 성질을 모두 갖추고 있는 신규한 미생물이다.
본 발명에 따른 바실러스 속 미생물의 분리 및 동정은 도 1에 도시된 절차에 따라 수행되었으며, 이하에서는 이를 보다 상세하게 설명한다.
전국 22개 지역에 산재된 젖소 목장에서 3개월에 걸쳐 수집된 원유를 체세포 자동측정장치인 Fossomatic series 4000 (Foss Electric Co., Denmark)에 투입한 다음 체세포수가 3만개 미만으로서 건강한 젖소의 신선한 원유에서 세균을 배양하여 분리하였다. 세균의 분리는 원유를 살균된 루프를 이용하여 혈액 한천배지 (blood agar)에 접종한 다음 35∼37℃에서 16∼18시간 배양하였으며, 형성된 독립 콜로니의 일차적 배양 및 그람염색을 통하여 독립적으로 선발된 116개의 균주를 확보하였다. 이들 선발된 균주는 BHI (Brain Heart Infusion, Difco, USA) 배지에 배양한 다음 선발된 미생물의 동정은 형태학적, 배양학적, 생리학적 특성을 기초로 하여 버지스 매뉴얼 (Bergey's manual)의 분류 및 기준에 따라 실시하였으며, 그람염색, 항생물질 저항성과 같은 생리적 특성 등을 살펴본 다음 세균자동분석장비인 Vitek system (BioMerieux, U.S.A)을 이용하여 균을 동정하였다.
본 발명에서는 분리된 바실루스 속 미생물의 당 이용성 양상 및 16S rRNA (ribosomal RNA)의 염기서열을 분석하여 동정하였으며 농업생명공학연구원 한국농용미생물보존센터 (Korean Agricultural Culture Collection)에 2004년 4월 8일자로 기탁번호 KACC 91098로 기탁하였다.
본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주는 다음과 같은 생물학적 특성을 지닌다.
첫째로, 그람 양성의 호기성 간균으로서 낮은 pH (5.0)에서 내성을 나타내며, 0.9％ 담즙산에도 생존이 가능하다.
둘째로, 본 발명의 바실러스 에스피 87균주는 유해 미생물을 억제하는 활성이 있다. 상기 유해 미생물은 살모넬라균 (Salmonella spp.)을 비롯한 대장균 (E. coli) 등 그람음성균과 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus)과 같은 그람양성균이 포함된다.
셋째로, 본 발명의 바실러스 에스피 87 균주는 여러 항생제에 대해 감수성이 있다.
넷째로, 본 발명의 바실러스 에스피 87 균주는 생체에 안전한 특성이 있다.
본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균체는 배양균체 1.1 × 108 CFU/ml의 농도로 마우스 복강에 0.5ml 주사하여도 1주간 생존하였다. 또한, 1일령의 초생추에 급여시 아무런 이상이 없이 장관에 정착하여 병원성 살모넬라균 (Salmonella spp.)에 대한 길항능력을 발휘할 수 있다.
본 발명의 바실러스 에스피 87 균주는 통상적인 배양방법에 의해 대량으로 배양할 수 있다. 배양 배지로는 BHI 브로스 및 기타 브로스를 사용할 수 있다. 미생물의 배양은 통상의 호기성 배양 조건상에서 가능하며 예를 들어, 온도범위 35∼37℃에서 10시간 내지 40시간 동안 배양할 수 있다. 배양액 중의 배양 배지를 제거하고 균체만을 회수하기 위해 원심분리 (centrifugation) 또는 여과 (filtration) 과정을 거칠 수 있으며, 이러한 단계는 사용용도에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 1∼5％의 탈지유(skim milk)와 같은 보호제와 같이 냉동 (frozen) 하거나 또는 냉동건조 (lyophilized) 하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.
본 발명의 미생물을 이용하여 사료첨가제로 사용할 수 있다. 예를 들어, 바실러스 에스피 87 균주를 포함하는 사료를 동물에 투여시 동물 장질환의 예방을 위한 생균제 조성물을 제공한다. 본 발명의 생균제 조성물은 바실러스 에스피 87 균주를 함유한 것으로 '동물'은 사람을 제외한 포유동물 및 조류로서, 바람직하게는 소, 돼지, 닭과 같은 가축을 포함한다.
'생균제 (Probiotics)'는 생명을 위하여 살아 있는 균 즉, 동물이 섭취했을 때 위장관에 머물러 생존할 수 있는 미생물로서 특정 병리적 상태를 예방할 수 있는 동물에게 유익한 효과를 주는 미생물 제제를 말한다. 일반적으로 생균제는 장내 세균총의 이상 발효에 의하여 야기되는 제반 증상을 치료하고 개선하는 효과가 있으며 동물에 투여되면 장내의 소화관 벽에 밀집, 정착하여 유해균이 정착, 증식하지 못하게 한다. 또한, 투여된 생균제는 동물의 장내에 정착하여 정상균총을 형성하며 효소, 박테리오신 (Bacteriocin)을 생성하여 병원균의 증식을 억제하며 영양분의 흡수를 도와준다. 이 밖에도, 영양소의 흡수와 이용을 돕는 다양한 분해물질을 생성하고, 동물에 있어서 사료 요구율을 개선시키며, 병원균이 생성하는 독성물질을 중화하는 물질을 생성하기도 한다.
본 발명의 생균제 조성물은 다양한 제형과 방법으로 제조 및 투여될 수 있다.
이하 본 발명의 내용을 실시예를 참조하여 보다 상세하게 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 발명의 내용을 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니며 유사한 경우에도 포괄적으로 응용되어질 수 있음을 당업자라면 용이하게 이해할 수 있을 것이다.
<실시예 1> 바실러스 87 균주의 분리 및 동정
1-1) 원유로부터 바실러스 87 균주의 분리
전국적으로 산재한 독립된 목장에서 원유를 수집하여 체세포 자동측정장비인 Fossomatic series 4000 (Foss Electric Co, Denmark)에서 체세포수를 측정한 다음 체세포수가 3만 이하인 양질의 원유만을 선발하였다. 선발된 원유를 한천 혈액배지 (Blood agar)에 도말하여 37℃에서 16시간 배양하였다. 배양된 균체를 1차적으로 분리하고자 콜로니의 특징, 혈구응집능 여부, 그람염색후 현미경 검사를 실시하여 각기 다른 독립 균주를 선발하였다. 양질의 원유에서 1차적으로 분리된 균주는 116개 였으며 선발된 균주들은 BHI 배지에서 배양한 다음 미생물의 동정은 형태학적, 배양학적, 생리학적 특성을 기초로 하여 버지스 매뉴얼 (Bergey's manual)의 분류 및 기준에 따라 실시하였으며, 그람염색, 항생물질 저항성과 같은 생리적 특성 등을 살펴본 다음 Vitek system (BioMerieux, U.S.A)을 이용하여 균을 동정하였다.
1-2) 분리한 균주의 동정
상기 실시예 1-1에서 분리 선별된 균주를 그람염색하였던 바 그람양성의 간균으로서 확인 되었으며 Vitek system (BioMerieux, U.S.A)을 이용하여 공급회사의 실험방법에 따라 기질 이용성 양상을 분석하였다. Vitek system에 의한 균주 분석 결과 바실러스 (Bacillus sp)로서 동정되어 바실러스 에스피 (Bacillus sp) 87로 명명하였다 (도 2).
1-3) 분리한 균주의 분자생물학적 동정
상기 실시예 1-1과 1-2에서 분리 선별된 균주의 보다 정확한 동정을 위해 상기 균의 게놈 DNA 중 미생물의 동정에 매우 유효한 것으로 알려진 16S rRNA의 유전자를 프라이머 (Primer)를 이용하여 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction)으로 증폭시킨 다음 자동염기서열결정기로 염기서열을 분석하였다 (표 1참조). 16S rRNA의 염기서열은 자동염기서열결정기로 결정하였다. 16S rRNA의 염기서열은 도 3 및 서열번호 1에 나타낸 바와 같다. 이상의 결과로부터 본 발명의 균주는 유전자은행에 등록된 바실러스 린케니포미스 (Bacillus licheniformis: Af276309)의 16S rRNA의 염기서열과 99％의 일치율을 확인하였다.
<표 1>
균주 프라이머 올리고뉴크레오타이드 서열 (5' to 3') PCR 산물의 크기
B.sp 87 16S-F23 GGC GGC GTG CCT AAT ACA TGC AAG TCG 779bp
16S-F310 CGG CCC AGA CTC CTA CGG GAG GCA GCA 481bp
16S-R770 GCG TGG ACT ACC AGG GTA TCT AAT CC
<실시예 2> 바실러스 87 균주의 특성 조사
2-1) 내산성, 내담즙성 및 당이용성 시험
BHI 액상 배지의 pH를 HCl (Sigma)를 이용하여 pH 1∼7로 조정한 다음, 분리한 바실러스 87 균주를 현탁하여 37℃에서 18시간 처리한 후 O.D 620nm에서 흡광도를 측정하였다. 내산성의 비교를 위하여 시판되고있는 바실러스균종들을 동일한 조건으로 공시하였다. 그 결과 시험 균주 모두 pH 5.0에서 생육하였으며 이로부터 바실러스 에스피 87균주가 pH 5.0의 조건에서도 내산성이 있음을 확인할 수 있었다 (표 2).
<표 2> B. 87과 시판중인 Bacillus spp.와의 내산성비교
균주 pH Cell growth (Cell growth, 620nm)
1 2 3 4 5 6 7
B. sp 87 0.0110 0.0030 0.0000 0.0060 0.3150 0.4110 0.3100
B. subtilis (A) 0.0110 0.0000 0.0040 0.0020 0.1160 0.1700 0.1140
B. subtilis (B) 0.0060 0.0030 0.0100 0.0030 0.0900 0.1160 0.1880
B. coagulans (C) 0.0130 0.0050 0.0000 0.0020 0.1030 0.1430 0.2010
B. mesentericus (D) 0.0080 0.0160 0.0120 0.0000 0.1920 0.2500 0.2340
* A : A사, B : B사, C : C사, D : D사
내담즙성 시험은 BHI 액상배지에 Bile salt (Difco)를 0.3％, 0.6％, 0.9％로 첨가한 다음, 바실러스 균주를 현탁하여 37℃에서 16시간 배양한 다음 균주의 생장 여부를 O.D 620nm의 흡광도를 이용하여 확인하였다. 실험 결과 Bile salt 0.6％ 이상에서도 모든 균주가 생장하였다 (표 3).
<표 3> B.sp 87 및 시판중인 Bacillus spp.의 내담즙성 비교
Strains Cell growth (bile salts, 620nm)
0.3 ％ 0.6 ％ 0.9 ％
B.sp 87 0.040 0.032 0.041
B. subtilis (A) 0.012 0.007 0.005
B. subtilis (B) 0.055 0.048 0.025
B. coagulans (C) 0.056 0.055 0.039
B. mesentericus (D) 0.009 0.029 0.025
* A : A사, B : B사, C : C사, D : D사
2-2) 바실러스 87주 생화학적 당이용성
바실러스 에스피 87 균주의 당이용성을 조사하였던 바 하기 표 4에서 보는바와 같이 전형적인 바실러스 속의 생화학적 당분해 특성을 확인할 수 있었다.
<표 4> 바실러스 에스피 87 균주 및 시판중인 바실러스 균주의 당이용성
No. 탄수화물 B.sp 87 B. subtilis (A) B. subtilis (B) B. coagulans (C) B. mesentericus (D)
1 말토오즈 + + ± + ±
2 D-(+)-글루코오즈 + ± + + +
3 람노오즈 - - - ± -
4 덱스트로오즈 + + + + +
5 D-락토오즈 + - - ± -
6 D-(+)-트레할로오즈 + ± + + +
7 D-(+)-만노오즈 + ± + + +
8 수크로오즈 + ± + + +
9 D-솔비톨 - - - + +
10 이뉼린 - - - - -
11 D-만니톨 + + + + +
12 D-(+)-자일로오즈 - - - - -
13 D-(-)-아라비노오즈 - - - ± -
14 D-(+)-셀로비오즈 + + + + +
15 메틸α-D-글루코피라노사이드 ± + - ± ±
16 L-아르기닌 - - - - -
17 D-(+)-라피노오즈 + - - ± -
* A : A사, B : B사, C : C사, D : D사
2-3) 바실러스 87 균주의 유해 미생물 억제 활성능
바실러스 에스피 87 균주의 유해 미생물 억제 활성을 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus 305)을 이용하여 측정하였다.
황색포도상구균 (Staphylococcus aureus, ATCC 305)은 BHI (Difco, USA) 액 체배지에 증균시켜서 시험에 사용하였다. 상기 유해 미생물을 접종하여 초기 균수를 측정한 후 본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주를 1％ (v/v)되도록 첨가하여 37℃에서 1, 3, 6, 24시간 후에 배양액을 십진법으로 희석하여 배지에 도말한 후 나타난 콜로니수를 산정하여 초기 균수에 대한 비율을 조사하였다.
실험 결과 하기 표 5에 나타낸 바와 같이 대조군에 대해 또한 기존에 사용하는 기타 생균제와 비교할 때 거의 대등하거나 우수한 정균효과를 관찰할 수 있었다.
<표 5> 바실러스 87과 시판중인 바실러스 생균제의 시험관내 항균효과비교
균 주 0 hr 1 hr 3 hr 6 hr 24 hr 48 hr 72 hr
S. aureus 305 (control) < 10 < 10 < 10 1.9×102 9.2×107 6.5×107 7.3×107
S. aureus 305 &B. subtilis 1 < 10 < 10 < 10 < 10 4.3×107 7.0×107 3.4×107
S. aureus 305 &B. subtilis 2 < 10 2.1×102 < 10 < 10 3.7×106 2.4×107 4.9×107
S. aureus 305 &B. sp 87 < 10 < 10 < 10 < 10 5.1×107 7.8×107 2.6×107
* 1 : A사, 2 : B사
2-4) 항생제에 대한 내성 및 감수성 시험
본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주의 항생제에 대한 내성 및 감수성을 시험하였다. 항생제 내성 시험은 NCCLS (2002)의 표준방법에 준하여 수행하였다.
순수배양된 바실러스 87 균주를 증균용 배지에 접종하여 37℃서 배양하였다. 상기 배양액의 탁도를 MacFarland No. 0.5로 조절하여 시험 균액으로 사용하였다. 상기 시험 균액을 뮬러 힌톤 한천 (Mueller Hinton agar) 평판배지에 도말한 후 항 생제 감수성 테스트용 디스크를 올려놓고 37℃에서 16시간 배양하였다. 배양이 완료되면, 육안으로 확인하여 한계직경을 포함한 발육억제직경을 측정함으로써 항생제 감수성 또는 내성 여부를 조사하였다.
실험 결과, NCCLS (2002)에 준한 내성기준치에 의한 판독시 본 발명에 따른 바실러스 에스피 87 균주는 여러 항생제에 대해 감수성을 나타내었다. (표 6)
<표 6> B.sp 87과 바실러스속 생균제의 항생제 내성
항생제 균주 항생제 감수성 (mm)
AN N S L K TE P E ENR VA GM OX AM CF CX
B. sp 87 21 21 24 - 24 28 18 30 28 22 22 - 19 21 -
B. subtilis a 27 25 20 - 28 22 13 12 ND 25 32 11 16 25 15
B. subtilis b 30 23 20 - 11 25 33 30 ND 28 30 24 32 42 15
B. coagulans c 26 21 18 - 24 19 30 25 ND 20 26 23 30 40 22
B. mesentericus d 22 23 20 - 30 19 27 27 ND 20 26 17 25 40 17
VA: 반코마이신 30㎍, CF: 세팔로신 30㎍, P: 페니실린 G 10U, CX: 클록사실린 1㎍, K: 가나마이신 30㎍, N: 네오마이신 30㎍, E: 이리스로마이신 15㎍, OX: 옥사실린 1㎍, AM: 암피실린 10㎍, TE: 테트라사이클린 30㎍,
* a : A사, b : B사, c : C사, d : D사, e : E사
* ND: Not detected.
<실시예 3> 바실러스 에스피 87 균주의 마우스에서 이용한 안전성 검사
바실러스 에스피 87 균주의 생체내 안전성을 검사하고자 BHI 액체배지에 37℃에서 18시간 배양하고 생리식염수로 1.4 × 108 CFU/ml 되도록 조절한 다음 22g 의 4주령 ICR 마우스 40수에 0.5ml씩 복강내 접종한 다음 1주간 관찰하였다. 동일 한 조건에서 40수는 생리식염수를 접종한 다음 대조군으로 관찰하였다. 접종 24시간 경과 후에 1주간 생존율을 측정하였던 바 모두 생존하였다 (표 7).
<표 7> 바실러스 에스피 87 균주의 마우스에서의 생체내 안전성 조사
구 분 접종량 접종부위 투여량 실험두수 기 간(폐사율: ％)
1일 5일 7일
대조군 식염수 복강 0.5ml 40 0 0 0
B.sp 87 1.4×108cfu/ml 복강 0.5ml 40 0 0 0
<실시예 4> 바실러스 에스피 87 균주의 항생제 내성 표준 병원성 황색포도상 구균 및 병원성 대장균에 대한 생체방어효과
상기 실시예 3의 바실러스 에스피 87 균체를 접종한 마우스에 병원성 황색포도상구균 (S. aureus)을 2.0 ×108 CFU/ml로 조정하여 1, 2, 4주에 10수씩 복강내로 1ml씩 접종하였다. 접종 24시간 이후부터 생존율을 비교하였던 바 대조군은 접종 1, 2주에 각 10％, 4주에 40％의 생존율을 보인 반면 바실러스 에스피 87 균체를 접종한 군의 경우 1주군의 경우 80％, 2주군의 경우 70％, 4주군의 경우 90％의 생존율을 나타내었다 (표 8).
<표 8> 마우스에서 바실러스 에스피 87 균주의 병원성 황색포도상구균 S. aureus 접종에 따른 경시별 마우스 생존효과
Figure 112004019820716-pat00001
※선발균주를 복강에 접종하고 1, 2, 3, 4주 후에 S. aureus로 2.0 × 108cfu/ml/mouse 복강내 접종함.
병원성 대장균 (E. coli)의 경우 10수에 대한 동일한 실험 3일 후 2.5 × 109 CFU/ml로 조정하여 10수씩 복강내로 1ml씩 접종하였다. 접종 72시간 이후부터 생존율을 비교하였던 바 대조군은 접종후 10％의 생존율을 보였으나 바실러스 에스피 87 균체접종구는 80％의 생존률을 보였다 (표 9 참조).
<표 9> 마우스에서 바실러스 에스피 87 균주의 병원성 대장균 E. coli 055 접종에 따른 방어효과
구 분 접종량 실험두수 E. coli 접종후 일자별 폐사두수 생존율(％)
0일 1일 3일 4일
대조군 식염수 10 2 7 0 0 10
B.sp 87 1.4×108cfu/ml 10 0 2 0 0 80
본 발명의 바실러스 에스피 87 균주는 내산성, 내담즙성 및 생체 안전성이 우수함이 확인되었고, 병원성 세균 억제활성을 지니고 있으며 장내에서 선점시 길항작용으로 병원성 균총의 증식을 감소시키는 예방효과가 있다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (3)

  1. 병원성 세균의 억제능이 우수한 바실러스 에스피 87 균주 (KACC 91098).
  2. 바실러스 에스피 87 균주(KACC 91098)을 포함하는 동물의 병원성 세균의 발생예방을 위한 생균제
  3. 바실러스 에스피 87 균주(KACC 91098)을 함유하는 생균제를 함유하는 사료첨가제
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