KR100568601B1 - Cosmetic composition comprising saponin compounds containing ginsenoside Rg2 for protecting skin - Google Patents
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Abstract
본 발명은 진세노사이드 Rg2를 함유하는 사포닌 혼합물로 이루어진 피부보호용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for skin protection consisting of a saponin mixture containing ginsenoside Rg2.
본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 진세노사이드 Rg2 50~63 중량부, Rg3 24~30.4 중량부, Re 4~5.6 중량부, Rc 2.4~4 중량부, Rd 0.8~1.6 중량부, Rg1 0.4~0.64 중량부, Rb1 0.16~0.32 중량부, Rf 0.16~0.32 중량부, Rh2 0.16~0.32 중량부를 함유한다.Cosmetic composition for skin protection of the present invention ginsenoside Rg2 50 ~ 63 parts by weight, Rg3 24 ~ 30.4 parts by weight, Re 4 ~ 5.6 parts by weight, Rc 2.4 ~ 4 parts by weight, Rd 0.8 ~ 1.6 parts by weight, Rg1 0.4 ~ 0.64 Parts by weight, Rb1 0.16 to 0.32 parts by weight, Rf 0.16 to 0.32 parts by weight, and Rh2 0.16 to 0.32 parts by weight.
본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 상기 사포닌 혼합물을 총 중량에 대하여 0.000001 ~ 0.1 중량부의 양으로 함유한다.The cosmetic composition for skin protection of the present invention contains the saponin mixture in an amount of 0.000001 to 0.1 parts by weight based on the total weight.
본 발명의 조성물은 자외선 등 외부환경에 의해 유발되는 세포사멸 및 DNA 손상을 감소시키며, 우수한 피부주름 개선작용 및 피부보습효과를 나타내면서도 피부자극감이 없고 안정성이 우수하다.The composition of the present invention reduces the cell death and DNA damage caused by the external environment such as ultraviolet rays, exhibits excellent skin wrinkle improvement and skin moisturizing effect, but also has no skin irritation feeling and excellent stability.
Description
본 발명은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2를 함유하는 사포닌 혼합물로 이루어진 피부보호용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for skin protection consisting of a saponin mixture containing Ginsenoside Rg2.
일반적으로 피부는 표피, 진피, 피하조직으로 구성되어 있으며 외부로부터 보호 및 장벽기능, 온도조절기능, 호흡기능, 배설기능 등 중요한 역할을 담당하고 있다.Generally, the skin is composed of epidermis, dermis and subcutaneous tissue, and plays an important role such as external protection and barrier function, temperature control function, respiration function and excretory function.
그러나 노화현상이 일어나면서 피부는 그 구조가 변화하고 기능이 급격하게 저하된다. 피부 노화는 성장과 마찬가지로 유전자에 미리 프로그램화되어 있다는 설(Genetic Clock)과, 환경에 의하여 유전자 손상이 축적됨으로써 피부항상성(Homeostasis)이 파괴된다는 설(Damage to genes)로 설명된다. However, as aging occurs, the skin's structure changes and its function decreases dramatically. Like aging, skin aging is explained by the Genetic Clock, which is pre-programmed in genes, and the Damage to genes, which damage homeostasis by accumulating gene damage by the environment.
특히 후자의 경우 피부손상에 가장 큰 영향을 미치는 환경요인은 자외선(ultraviolet, UV)으로 알려져 있다. 자외선은 피부세포의 사멸을 유발하고 DNA를 손상시킴으로써 노화에 관여하며, 그 병변은 구체적으로 피부의 구성성분인 표피, 진피, 피하조직의 두께가 얇아지는 현상, 표피와 진피 사이의 굴곡이 감소되어 편평해지는 현상, 피부의 수분함량이 손실되어 피부가 건조되는 현상 및 멜라닌 색소의 증가로 인한 기미, 주근깨, 색소침착 등이 있다.Especially in the latter case, the most important environmental factor affecting skin damage is ultraviolet (UV). Ultraviolet rays are involved in aging by causing the death of skin cells and damaging DNA, and the lesions specifically reduce the thickness of the skin's components, such as the epidermis, dermis and subcutaneous tissue, and the curvature between the epidermis and the dermis. Flattening, loss of moisture in the skin, and drying of the skin; and melanin, freckles, and pigmentation due to an increase in melanin pigment.
따라서, 자외선에 의한 피부 손상을 방지할 수 있는 화장료 조성물들에 대한 연구가 이루어지고 있다. 그 중 가장 널리 사용되는 물질로 레티놀(Retinol, 비타민 A) 및 레티놀 유도체(Vitamin A Palmitate)를 들 수 있다. 그러나 레티놀은 공기 중에 노출되면 산화되어 변질되기 쉬운 매우 불안정한 물질이므로, 그 효과가 지속적이지 못하며 오히려 피부자극을 유발할 우려가 있어 사용범위가 제한되고 있다.Therefore, research on cosmetic compositions that can prevent skin damage by ultraviolet rays has been made. Among the most widely used substances include retinol (Retinol, vitamin A) and retinol derivatives (Vitamin A Palmitate). However, since retinol is a very unstable substance that is easily oxidized and deteriorated when exposed to air, the effect of the retinol may not be sustained, but rather it may cause skin irritation, thereby limiting its use range.
따라서, 피부 주름완화 및 개선, 피부건조 개선 등의 화장료로서의 효능은 현저하게 향상시키면서도 종래의 피부 주름개선 물질의 문제점인 피부 자극 문제도 효과적으로 완화시킬 수 있는 조성물에 대한 발명이 요구되고 있다.Therefore, there is a need for an invention for a composition that can effectively alleviate the skin irritation problem, which is a problem of conventional skin wrinkle improvement materials, while significantly improving the efficacy as a cosmetic such as skin wrinkle relief and improvement, skin dryness improvement.
한편 인삼 또는 홍삼은 다양한 약리효과를 나타내며, 특히 항노화 기전에 관여하는 것으로 알려져 있어 화장료 분야에서 응용하기에 좋은 물질이다.Meanwhile, ginseng or red ginseng exhibits various pharmacological effects, and is known to be involved in anti-aging mechanisms.
종래 기술 중 특허공보 등록번호 10-0296430에서는 다양한 진세노이드계 사포닌 성분으로 이루어진 화장용 조성물을 개시한 바 있다. 그러나 상기 조성물은 피부보다는 모발 치료에 중점을 둔 것으로, 일부 피부미용효과 상승작용을 나타내긴 하나 자외선에 의한 피부 손상 및 노화를 방지하는 효과는 개시되어 있지 않다.Patent Publication No. 10-0296430 in the prior art has disclosed a cosmetic composition consisting of various ginsenoid-based saponin components. However, the composition focuses on the treatment of hair rather than the skin, and although some skin beauty effects are synergistic, the effects of preventing skin damage and aging due to ultraviolet rays are not disclosed.
자외선에 의한 피부 손상 및 노화는 세포주기(cell cycle)와 밀접한 관련이 있는데, 세포가 증식하기 위해서는 먼저 세포주기를 조절하는 제1 체크포인트(checkpoint) 단계를 거치는데, 이 단계는 DNA가 손상되었는지 또는 증식을 시작할 것인지를 결정하는 단계로, 이러한 세포 증식 조절이 제대로 이루어지지 않는 경우 암과 같은 비정상적인 세포 증식을 유발한다. Ultraviolet skin damage and aging are closely related to the cell cycle, which requires a first checkpoint step to control the cell cycle. Or determining whether to start proliferation, which results in abnormal cell proliferation, such as cancer, if such cell proliferation control is poorly controlled.
이 단계를 지나서 DNA 복제 단계를 거치고 다시 제2 체크포인트 단계를 지나서 세포의 유사분열을 하는 일련의 단계를 세포주기라 하는 바, 이러한 과정에서 DNA가 손상된 경우 세포가 수용하지 못할 정도로 그 손상 정도가 심하면 세포죽음을 유발하는 세포자살사(apoptosis)가 일어나며, 그 결과 피부 손상 및 노화를 가져오는 것으로 알려져 있다.After this step, the DNA replication step and then the second checkpoint step, followed by the mitosis of the cell, are called cell cycles. If the DNA is damaged during this process, the damage is severe enough that the cell cannot accept it. Apoptosis, which causes cell death, occurs, which is known to cause skin damage and aging.
이에, 본 발명자들은 다양한 실험을 통해 인삼 및 홍삼의 진세노사이드 성분 중 진세노사이드 Rg2가 상기 세포주기에 관여하여 정상적인 세포주기 활동을 촉진시켜 비주기성 DNA 합성률을 증가시키고 손상된 DNA의 회복에 탁월한 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors through various experiments, ginsenoside Rg2 of ginsenoside components of ginseng and red ginseng are involved in the cell cycle to promote normal cell cycle activity, thereby increasing the aperiodic DNA synthesis rate and excellent in repairing damaged DNA. The present invention was completed by confirming the effect.
본 발명에서는 피부주름 또는 피부노화 현상을 자외선 등 외부환경에 의한 세포의 비정상적인 활동으로 보고, 세포가 증식하기 위해서 거치는 일련의 단계인 세포주기에 관여함으로써, 우수한 피부주름 개선작용 및 피부보습효과를 나타내면서도 피부 자극감이 없고 안정성이 우수한, 진세노사이드 Rg2를 함유하는 사포닌 혼합물로 이루어진 화장료 조성물을 제공하고자 한다.In the present invention, by looking at the skin wrinkles or skin aging phenomena as abnormal activity of the cells by the external environment, such as ultraviolet light, by participating in the cell cycle which is a series of stages for the cells to proliferate, while showing an excellent skin wrinkle improvement and skin moisturizing effect The present invention also provides a cosmetic composition comprising a saponin mixture containing ginsenoside Rg2 having no skin irritation and excellent stability.
본 발명은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2를 함유하는 사포닌 혼합물로 이루 어진 피부보호용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for skin protection consisting of a saponin mixture containing Ginsenoside Rg2.
본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 인삼으로부터 추출한 사포닌계 혼합물인 진세노사이드 Rg2, Rg3, Re, Rc, Rd, Rg1, Rb1, Rf, Rh2를 함유한다.The cosmetic composition for skin protection of the present invention contains ginsenosides Rg2, Rg3, Re, Rc, Rd, Rg1, Rb1, Rf, Rh2 which are saponin-based mixtures extracted from ginseng.
각 진세노사이드의 구조는 다음과 같다.The structure of each ginsenoside is as follows.
본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 구체적으로 진세노사이드 Rg2 50~63 중량부, Rg3 24~30.4 중량부, Re 4~5.6 중량부, Rc 2.4~4 중량부, Rd 0.8~1.6 중량부, Rg1 0.4~0.64 중량부, Rb1 0.16~0.32 중량부, Rf 0.16~0.32 중량부, Rh2 0.16~0.32 중량부로 이루어진 사포닌 혼합물 (이하 가칭 'SM-1'이라 칭함)로 구성되어 있다.The cosmetic composition for skin protection of the present invention is specifically ginsenoside Rg2 50 ~ 63 parts by weight, Rg3 24 ~ 30.4 parts by weight, Re 4 ~ 5.6 parts by weight, Rc 2.4 ~ 4 parts by weight, Rd 0.8 ~ 1.6 parts by weight, Rg1 0.4 It consists of a saponin mixture (hereinafter referred to as 'SM-1') consisting of ˜0.64 parts by weight, Rb1 0.16 to 0.32 parts by weight, Rf 0.16 to 0.32 parts by weight, and Rh2 0.16 to 0.32 parts by weight.
본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 상기 사포닌 혼합물(SM-1)을 총 중량에 대하여 0.000001 ~ 1 중량부의 양으로 함유한다.The cosmetic composition for skin protection of the present invention contains the saponin mixture (SM-1) in an amount of 0.000001 to 1 parts by weight based on the total weight.
본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 구체적으로 상기 사포닌 혼합물(SM-1)을 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 0.1 중량부의 양으로 함유한다.The cosmetic composition for skin protection of the present invention specifically contains the saponin mixture (SM-1) in an amount of 0.00001 to 0.1 parts by weight based on the total weight.
또한 본 발명에서는 상기 화장료 조성물의 제조방법을 함께 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing the cosmetic composition together.
본 발명의 화장료 조성물이 포함하는 사포닌 혼합물(SM-1)은 인삼 또는 홍삼으로부터 직접 추출하여 얻거나, 또는 각각 분리되어 정제된 여러 종류의 사포닌을 혼합함으로써 제조할 수 있다. The saponin mixture (SM-1) included in the cosmetic composition of the present invention may be obtained by directly extracting from ginseng or red ginseng, or by mixing various types of saponins purified separately.
인삼 또는 홍삼으로부터 사포닌 혼합물을 직접 추출하여 얻는 경우, 통상적 인 당류 추출방법에 의하여 조사포닌을 추출한다. 추출방법은 구체적으로 에탄올 추출, 농축, 지방질 제거, 조사포닌 분리, 여과 및 농축 과정을 포함한다.When the saponin mixture is directly extracted from ginseng or red ginseng, the irradiated saponin is extracted by a conventional sugar extraction method. Extraction methods specifically include ethanol extraction, concentration, fat removal, irradiation of the irradiated saponin, filtration and concentration.
상기에서 얻은 조사포닌을, 실리카겔을 충진시킨 컬럼에 통과시켜 Rg2가 함유된 분획(fraction)을 얻는다. 상기 분획에는 Rg2, Rg3, Re, Rc, Rd, Rg1, Rb1, Rf, Rh2가 함유되어 있다.The above-obtained probeponin is passed through a column packed with silica gel to obtain a fraction containing Rg2. The fraction contains Rg2, Rg3, Re, Rc, Rd, Rg1, Rb1, Rf, Rh2.
상기 분획에 대해 성분분석 및 확인과정을 거친 후, 동결 건조시켜 분말화하고, 일정한 농도를 수득하기 위해 다시 용해시킨 후 건조과정을 거쳐, 본 발명의 사포닌 혼합물을 얻는다.After the component analysis and identification process for the fraction, it is lyophilized and powdered, dissolved again to obtain a constant concentration and dried to obtain a saponin mixture of the present invention.
상기 방법으로 얻는 사포닌 혼합물(SM-1)은 진세노사이드 Rg2 50~63 중량부, Rg3 24~30.4 중량부, Re 4~5.6 중량부, Rc 2.4~4 중량부, Rd 0.8~1.6 중량부, Rg1 0.4~0.64 중량부, Rb1 0.16~0.32 중량부, Rf 0.16~0.32 중량부, Rh2 0.16~0.32 중량부로 이루어진다.Saponin mixture obtained by the above method (SM-1) is 50 to 63 parts by weight of ginsenoside Rg2, 24 to 30.4 parts by weight of Rg3, 4 to 5.6 parts by weight of Re, 2.4 to 4 parts by weight of Rc, 0.8 to 1.6 parts by weight of Rd, Rg1 0.4 to 0.64 parts by weight, Rb1 0.16 to 0.32 parts by weight, Rf 0.16 to 0.32 parts by weight, and Rh2 0.16 to 0.32 parts by weight.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 성분 이외에도 필요에 따라 추가로 점증제, 피부보호제, 보습제, 중화제, pH 조절제, 가용화제, 방부제, 용제를 포함할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may further include a thickener, a skin protectant, a moisturizer, a neutralizer, a pH adjuster, a solubilizer, a preservative, and a solvent as needed in addition to the above components.
본 발명의 화장료 조성물은 화장품의 통상적인 제형으로 제조될 수 있으며,구체적으로 유액, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 에센스 또는 팩 등의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in a conventional formulation of cosmetics, specifically, latex, softening longevity, astringent longevity, nourishing longevity, eye cream, nutrition cream, massage cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, essence or It may be prepared in a formulation such as a pack.
본 발명의 조성물은 자외선에 의해 유발되는 세포사멸 및 DNA 손상을 감소시 키는 효과가 있다.The composition of the present invention has the effect of reducing apoptosis and DNA damage caused by ultraviolet light.
또한 본 발명의 조성물은 우수한 피부주름 개선효과, 피부보습효과를 나타내면서도, 피부자극감이 없고 안정성이 우수하여 화장료로 사용되기에 적합하다.In addition, the composition of the present invention exhibits excellent skin wrinkle improvement effect, skin moisturizing effect, has no skin irritation and excellent stability and is suitable for use as a cosmetic.
따라서, 본 발명의 조성물은 자외선에 의한 피부 손상 및 노화를 방지하여 피부미용 효과를 향상시키기 위한 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the composition of the present invention can be usefully used as a cosmetic for improving skin beauty effect by preventing skin damage and aging caused by ultraviolet rays.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred examples are provided to aid in understanding the present invention. However, the following examples are merely provided to more easily understand the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the examples.
[실시예] 본 발명의 화장료 조성물의 제조EXAMPLES Preparation of the Cosmetic Composition of the Present Invention
본 발명의 조성물을 다음과 같이 제조하였다.The composition of the present invention was prepared as follows.
1) 사포닌 혼합물(SM-1)의 제조1) Preparation of Saponin Mixture (SM-1)
본 발명의 조성물을 제조하기 위해, 인삼으로부터 사포닌 혼합물을 직접 추출하였다.To prepare the compositions of the present invention, the saponin mixture was extracted directly from ginseng.
인삼 100 g에 대해 에탄올 1.1 L를 사용하여 추출을 시행한 후, 상기 인삼 추출액을 농축하였다. 지방질을 클로로포름 50g을 사용하여 제거한 후 조사포닌을 분리하고, 여과지와 회전감압농축기를 사용하여 여과 농축하였다.After extracting with 1.1 L of ethanol for 100 g of ginseng, the ginseng extract was concentrated. Lipids were removed using 50 g of chloroform, and then irradiated with phonophonin, filtered and concentrated using a filter paper and a rotary decompressor.
상기에서 얻은 조사포닌을, 실리카겔을 충진시킨 컬럼에 통과시켜 Rg2가 함유된 분획을 얻었다.The probeponin obtained above was passed through a column packed with silica gel to obtain a fraction containing Rg2.
상기 분획에 대해 고속액체크로마토그라피를 이용하여 성분분석한 결과, 진세노사이드 Rg2 50~63 중량부, Rg3 24~30.4 중량부, Re 4~5.6 중량부, Rc 2.4~4 중량부, Rd 0.8~1.6 중량부, Rg1 0.4~0.64 중량부, Rb1 0.16~0.32 중량부, Rf 0.16~0.32 중량부, Rh2 0.16~0.32 중량부를 함유함을 확인하였다.As a result of component analysis using high performance liquid chromatography for the fraction, ginsenoside Rg2 50 ~ 63 parts by weight, Rg3 24 ~ 30.4 parts, Re 4 ~ 5.6 parts, Rc 2.4 ~ 4 parts, Rd 0.8 ~ It was confirmed that 1.6 parts by weight, Rg1 0.4 to 0.64 parts by weight, Rb1 0.16 to 0.32 parts by weight, Rf 0.16 to 0.32 parts by weight, and Rh2 0.16 to 0.32 parts by weight.
상기 분획을 동결 건조시켜 분말화한 후, 일정한 농도를 수득하기 위해 다시 용해시킨 후 건조과정을 거쳐, 본 발명의 사포닌 혼합물(SM-1)을 얻었다.The fractions were lyophilized to powder, and then dissolved again to obtain a constant concentration, followed by drying to obtain a saponin mixture (SM-1) of the present invention.
2) 본 발명의 화장료 조성물의 제조2) Preparation of Cosmetic Composition of the Present Invention
상기 실시예 1)에서 얻은 사포닌 혼합물(SM-1)에 추가 성분들을 첨가하여 다음과 같이 본 발명의 화장료 조성물을 제조하고, 비교예로서 본 발명의 화장료 조성물을 첨가하지 않고 추가 성분만으로 이루어진 비교예 조성물을 제조하였다.Adding the additional components to the saponin mixture (SM-1) obtained in Example 1) to prepare a cosmetic composition of the present invention as follows, Comparative Example consisting of only the additional components without adding the cosmetic composition of the present invention as a comparative example The composition was prepared.
3) 본 발명의 화장료 조성물의 다양한 제형의 제조3) Preparation of Various Formulations of Cosmetic Compositions of the Present Invention
상기 실시예 2)와 같은 방식에 의해 본 발명의 화장료 조성물의 다양한 제형을 제조하였다. 각 제형에 따라 첨가제의 종류 및 함량을 하기 표와 같이 변화시켰다.Various formulations of the cosmetic composition of the present invention were prepared in the same manner as in Example 2). According to each formulation, the type and content of the additives were changed as shown in the following table.
[실험예 1] 본 발명의 조성물에 의한 자외선 유발 세포독성의 감소효과 Experimental Example 1 Effect of Reducing Ultraviolet-induced Cytotoxicity by Compositions of the Invention
1) 본 발명의 조성물에 의한 배양세포에서 자외선 유발 세포사멸의 감소효과 확인1) Confirmation of the reduction effect of UV-induced apoptosis in cultured cells by the composition of the present invention
본 발명의 조성물에 의한 배양세포에서 자외선 유발 세포사멸의 감소효과를 다음과 같이 확인하였다.The effect of reducing the UV-induced apoptosis in the cultured cells by the composition of the present invention was confirmed as follows.
실험대상 세포주로 NIH3T3 세포주를 선택하여 배양한 후, 자외선 B(200 J/m2)를 조사하여 세포 사멸을 유발하였다. 자외선 조사 직후, 상기 실시예 1)에서 제조한 사포닌 혼합물을 50, 100, 200, 400 μM의 다양한 농도로 첨가하여 48시간 동안 배양하였다. 이때 자외선을 조사하지 않고 일반 배양 배지에서 배양한 대조군과, 자외선 조사 후 본 발명의 조성물을 첨가하지 않고 일반 배양 배지에서 배양한 비교군을 함께 준비하였다.NIH3T3 cell line was selected and cultured as the cell line, and UV B (200 J / m 2 ) was irradiated to induce cell death. Immediately after UV irradiation, the saponin mixture prepared in Example 1) was added at various concentrations of 50, 100, 200, 400 μM and incubated for 48 hours. At this time, a control group cultured in a general culture medium without irradiating ultraviolet rays and a comparison group cultured in a general culture medium without addition of the composition of the present invention after UV irradiation were prepared together.
각 세포군에 대해 트리판 블루(trypan blue)의 흡입율을 측정하여 세포 생존률을 결정하고, 그 결과를 표 8에 나타내었다.Inhalation rate of trypan blue for each cell group was measured to determine cell viability, and the results are shown in Table 8.
표 8에 나타난 바와 같이, 자외선 조사 후 본 발명의 조성물을 처리한 군에서는 비교군에 비해 세포 생존률이 40-80 % 정도 증가되었다. As shown in Table 8, in the group treated with the composition of the present invention after UV irradiation, the cell survival rate increased by about 40-80% compared to the comparison group.
특히 본 발명의 조성물의 처리 농도를 증가시킴에 따라 상기와 같은 자외선 유발 세포사멸의 감소효과도 증가하였으며, 본 발명의 조성물을 400mM 의 농도로 처리한 군에서는 세포생존률이 자외선에 의한 세포생존률의 저하를 거의 대조군 수준으로 회복시켰다. 상기와 같은 수준의 자외선 유발 세포사멸의 감소효과는 기존 에 공지된 인삼 사포닌 성분과 비교할 때 현저하게 우수한 것이다. In particular, as the treatment concentration of the composition of the present invention was increased, the effect of reducing UV-induced apoptosis was also increased. In the group treated with the composition of the present invention at a concentration of 400 mM, the cell survival rate was lowered by the UV cell survival rate. Was restored to near control levels. The effect of reducing the level of UV-induced apoptosis as described above is remarkably superior when compared to the previously known ginseng saponin components.
이러한 경향은 각 세포에 대한 현미경적 관찰 소견 및 핵의 균열을 관찰하는 DAPI 염색 결과에서도 유사하게 나타났다. This tendency was similar in the microscopic observation of each cell and in the results of DAPI staining to observe the cracking of the nucleus.
따라서, 본 발명의 조성물은 자외선에 의해 유발되는 세포사멸을 감소시키고 세포 생존률을 증가시키는 효과를 나타냄을 알 수 있다.Therefore, it can be seen that the composition of the present invention has the effect of reducing cell death induced by ultraviolet light and increasing cell viability.
3) 배양세포에서 본 발명의 조성물에 의한 자외선 유발 DNA 손상의 감소효과 확인3) Confirmation of the effect of reducing the UV-induced DNA damage by the composition of the present invention in cultured cells
본 발명의 조성물에 의한 배양세포에서 자외선 유발 DNA 손상의 감소효과를 다음과 같이 확인하였다.The effect of reducing the UV-induced DNA damage in cultured cells by the composition of the present invention was confirmed as follows.
자외선 조사 후 48시간이 경과하면 자외선 상해에 대한 DNA 회복은 거의 다 진행되어 검출할 수 없으므로, 본 발명의 조성물을 먼저 처리한 후 자외선을 조사하고, DNA 손상 후 회복 정도를 측정하였다.After 48 hours of UV irradiation, DNA recovery for UV injury is almost in progress and cannot be detected. Thus, after treating the composition of the present invention, UV irradiation is performed, and the degree of recovery after DNA damage is measured.
실험대상 세포주로 NIH3T3 세포주를 선택하여 배양한 후, 상기 실시예의 1)에서 제조한 사포닌 혼합물을 50, 100, 200, 400 μM의 다양한 농도로 첨가하여 48시간 동안 배양하였다. After selecting and culturing the NIH3T3 cell line as a test cell line, the saponin mixture prepared in Example 1) was added at various concentrations of 50, 100, 200, 400 μM and incubated for 48 hours.
각 세포군에 자외선 B(200 J/m2)를 조사하여 DNA 손상을 유발한 후, 비주기성 DNA 합성법을 사용하여 DNA 손상의 회복 정도를 측정하였다.After irradiating ultraviolet B (200 J / m 2 ) to each cell group to induce DNA damage, the degree of recovery of DNA damage was measured using aperiodic DNA synthesis.
비주기성 DNA 합성법에 따라 NIH3TS 세포를 슬라이드 유리(slide glass) 위 에 가득 차도록 배양한 후, DNA 상해 유발원인 MMS(methylmethane sulfonate)를 1mM 농도로 30분 동안 처리하였다. 상기 실시예 1에서 제조한 사포닌 혼합물(SM-1)을 함유하는 배지에서 삼중수소-티미딘(3H-thymidine, 5 mCi/ml)으로 세포의 DNA를 표지한 후, 자기방사능사진법(autoradiography)에 의해 세포당 베타(beta) 선의 흔적인 그레인(grain)의 수를 현미경 하에서 측정하였다. After incubating the NIH3TS cells on the slide glass to fill the aperiodic DNA synthesis method, MMS (methylmethane sulfonate), a source of DNA injury, was treated at a concentration of 1 mM for 30 minutes. After labeling the cell DNA with tritium-thymidine ( 3 H-thymidine, 5 mCi / ml) in a medium containing the saponin mixture (SM-1) prepared in Example 1, autoradiography The number of grains, which are traces of beta lines per cell, was measured under the microscope.
또다른 방법으로 14C-티미딘(0.02 mCi/ml)으로 선표지한 세포에 10mM 히드록시우레아(hydroxyurea)를 24시간 동안 처리하고, DNA 상해 유발원인 MMS 을 가하였다. 삼중수소-티미딘(5 mCi/ml)으로 1시간 동안 표지하고, 1×SSC (0.15 M 소듐 클로라이드(sodium chloride), 0.015 M 소듐 시트레이트(Sodium citrate), 4% 과염소산(Perchloric acid)으로 세포를 용해시킨 후, GF/C 필터를 통해 용해된 세포를 걸러내고 액체 섬광 계측(liquid scintillation count)을 수행하였다.Alternatively, cells pre-labeled with 14 C-thymidine (0.02 mCi / ml) were treated with 10 mM hydroxyurea for 24 hours and MMS, a source of DNA injury, was added. Label for 1 hour with tritium-thymidine (5 mCi / ml), cells with 1 × SSC (0.15 M sodium chloride, 0.015 M sodium citrate, 4% Perchloric acid) After lysis, the lysed cells were filtered through a GF / C filter and a liquid scintillation count was performed.
이때 일반 배양 배지에서 배양한 후 자외선을 조사하지 않은 대조군과, 본 발명의 조성물을 첨가하지 않고 일반 배양 배지에서 배양한 후 자외선을 조사한 비교군을 함께 준비하여 실험을 수행하였으며, 그 결과를 표 9에 나타내었다.At this time, the control group was not irradiated with ultraviolet rays after culturing in a general culture medium and the comparison group was irradiated with ultraviolet rays after culturing in a general culture medium without addition of the composition of the present invention and the experiment was performed, and the results are shown in Table 9 Shown in
표 9에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물로 배양한 후 자외선으로 조사한 실험군에서는 비교군에 비해 비주기성 DNA 합성률이 20-77 % 정도 증가되었다. As shown in Table 9, in the experimental group irradiated with ultraviolet rays after incubation with the composition of the present invention, the aperiodic DNA synthesis rate was increased by 20-77% compared to the comparison group.
특히 본 발명의 조성물의 처리 농도를 증가시킴에 따라 상기와 같은 자외선 유발 DNA 손상의 회복효과도 증가하였다. 상기와 같은 수준의 자외선 유발 DNA 손상에 대한 회복효과는 기존에 공지된 인삼 사포닌 성분과 비교할 때 현저하게 우수한 것이다. In particular, as the treatment concentration of the composition of the present invention was increased, the effect of repairing UV-induced DNA damage was also increased. The recovery effect on the above-described UV-induced DNA damage is remarkably superior when compared to previously known ginseng saponin components.
따라서, 본 발명의 조성물은 자외선에 의해 유발되는 유전독성을 감소시키고 자외선에 의한 비주기성 DNA합성을 현저히 증가시킴으로써 피부 세포의 죽음을 방지하는 효과가 있음을 알 수 있다.Therefore, it can be seen that the composition of the present invention has an effect of preventing the death of skin cells by reducing the genotoxicity induced by ultraviolet rays and significantly increasing the aperiodic DNA synthesis caused by ultraviolet rays.
[실험예 2] 본 발명의 조성물에 의한 피부보호효과Experimental Example 2 Skin Protection Effect by the Composition of the Present Invention
1) 본 발명의 조성물에 의한 피부주름 개선효과1) skin wrinkle improvement effect of the composition of the present invention
본 발명의 화장료 조성물에 의한 피부주름 개선효과를 다음과 같이 확인하였다.The skin wrinkle improvement effect by the cosmetic composition of this invention was confirmed as follows.
30세 이상의 여성 19명을 대상으로 하여, 실시예 2)에서 제조한 본 발명의 조성물을 주름이 있는 눈가에 사용하였다. 왼쪽 눈가에는 실시예 화장료를, 오른쪽은 비교예 화장료를 8주 동안 사용하도록 한 후, 피부주름 개선정도를 확인하였다.For 19 women aged 30 or older, the composition of the present invention prepared in Example 2) was used near the wrinkled eyes. Example cosmetics on the left eye and the comparative cosmetics on the right were used for 8 weeks, and then the degree of improvement of skin wrinkles was confirmed.
피부 주름 개선 정도는 2주 간격으로 실리콘 재질의 레프리카(replica)를 제작하고, 피부주름측정기(skin image analyzer)로 피부주름의 최대깊이변화를 측정 하여 평가하였으며, 그 결과는 표 10와 같다.Skin wrinkle improvement was produced by replicating silicone replicas at 2 week intervals and measuring the maximum depth change of skin wrinkles with a skin image analyzer. The results are shown in Table 10.
표 10에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물을 사용한 부위에서는 21.84%의 주름 개선도를 나타낸 반면, 비교예 조성물을 사용한 부위에서는 그의 절반 수준에 그치는 10.81%의 주름 개선도를 나타내었다.As shown in Table 10, the area using the composition of the present invention showed a wrinkle improvement of 21.84% while the area using the comparative composition showed a wrinkle improvement of 10.81%, which is only half of that.
따라서, 본 발명의 조성물은 우수한 피부주름 개선효과를 나타냄을 알 수 있다.Therefore, it can be seen that the composition of the present invention exhibits an excellent skin wrinkle improvement effect.
2) 본 발명의 조성물에 의한 피부보습효과 확인2) Check the skin moisturizing effect by the composition of the present invention
본 발명의 화장료 조성물에 의한 피부보습효과를 다음과 같이 확인하였다.The skin moisturizing effect of the cosmetic composition of the present invention was confirmed as follows.
온도 25℃ , 상대습도 45%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 건강한 여성 20명을 대상으로 하여 실시예 2)에서 제조한 본 발명의 조성물의 피부보습효과를 측정하였다. 실험은 왼쪽팔 상박에는 실시예 화장료 조성물을, 오른쪽팔 상박에는 비교예 화장료 조성물을 하루에 3회 6주간 도포하는 방식으로 수행하였다.The skin moisturizing effect of the composition of the present invention prepared in Example 2) was measured for 20 healthy women in a room with a temperature of 25 ° C., a relative humidity of 45% and no air flow. The experiment was carried out by applying the example cosmetic composition to the upper left arm and the comparative cosmetic composition to the upper right arm three times a day for 6 weeks.
실험완료 후, 각 부위에서 경피수분손실량(Transepidermal Water Loss)의 값을 측정하고 시간에 따른 변화량인 ΔTEWL을 계산하여, 그 결과를 표 11에 나타내었다.After completion of the experiment, the value of transepidermal water loss (Transepidermal Water Loss) at each site was measured, and ΔTEWL, which is a change over time, was calculated, and the results are shown in Table 11.
표 11에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물을 도포한 부위의 ΔTEWL은 2.70 g/h㎡ 로, 비교예 조성물을 도포한 부위에 비해 경피수분손실량이 절반 이하인 것으로 나타났다.As shown in Table 11, the ΔTEWL of the site to which the composition of the present invention was applied was 2.70 g / hm 2, indicating that the percutaneous moisture loss was less than half as compared to the site of the comparative composition.
따라서, 본 발명의 조성물은 우수한 피부보습효과를 나타냄을 알 수 있다.Therefore, it can be seen that the composition of the present invention exhibits an excellent skin moisturizing effect.
3) 본 발명의 조성물의 피부 안전성 시험 3) Skin safety test of the composition of the present invention
본 발명의 화장료 조성물에 의한 피부안정성을 다음과 같이 확인하였다.Skin stability by the cosmetic composition of the present invention was confirmed as follows.
평균연령 22세, 연령분포 19세-34세의 피검자 30명을 2 그룹으로 나누어 피 부 첩포시험(Patch Test)을 하였다. 단 건선(Psoriasis), 습진(Eczema) 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외하였다.Thirty subjects with an average age of 22 years and age distribution of 19-34 years were divided into two groups and subjected to a patch test. Those with Psoriasis, Eczema and other skin lesions or those who are pregnant, nursing or contraceptives, and antihistamines are excluded from this study.
먼저 실험부위를 70% 에탄올로 닦고 건조시킨 후, A그룹에는 실시예2)에서 제조한 본 발명의 화장료 조성물을, B그룹에는 비교예의 화장료 조성물을 각각 15㎍씩 체임버(Haye's test chamber)에 적하시킨 후, 실험 부위인 상박 부위에 얹어 고정시켰다. 24시간 동안 첩포를 도포한 후 제거하고, 마킹펜(marking pen)으로 실험부위를 표시하여 각각 24시간, 48시간, 72시간 후에 실험부위를 관찰하였다.First, the test site was cleaned with 70% ethanol and dried, and then, in Group A, the cosmetic composition of the present invention prepared in Example 2) was added dropwise to the Chamber (Haye's test chamber) by 15 µg, respectively. After it was fixed, it was placed on the upper arm, which is an experimental site. The patch was applied for 24 hours, then removed, and the test site was marked with a marking pen to observe the test site after 24 hours, 48 hours, and 72 hours, respectively.
피부반응은 하기 표 12의 국제접촉피부염연구회(International Contact Dermatitis Research Group : ICDRG)의 규정에 따라 판정하였다. Skin reactions were determined according to the rules of the International Contact Dermatitis Research Group (ICDRG) shown in Table 12 below.
판정은 첩포 제거 24시간, 48시간, 72시간 후에 행하였으며, 그 결과를 표 13에 나타내었다.The determination was performed 24 hours, 48 hours, 72 hours after patch removal, and the results are shown in Table 13.
표 13에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물은 비교예 조성물과 마찬가지로 평균 피부자극 정도가 0인 것으로 나타나 피부에 자극이 없는 안전한 화장료임을 알 수 있다. As shown in Table 13, the composition of the present invention, like the comparative composition, the average degree of skin irritation was 0, indicating that the cosmetic is a safe cosmetic without irritation.
따라서, 본 발명의 조성물은 피부에 자극을 유발하지 않는 안전한 성분으로 이루어졌음을 알 수 있다.Thus, it can be seen that the composition of the present invention consists of safe ingredients that do not cause irritation to the skin.
4) 본 발명의 조성물의 피부 자극감 시험 (Stinging Potential Test)4) Skinting Potential Test of the Composition of the Present Invention
상기 실시예 2)에서 제조한 실시예 및 비교예에 따라 제조된 화장료 조성물에 대한 피부자극감을 다음과 같이 측정하였다.Skin irritation for the cosmetic composition prepared according to the examples and comparative examples prepared in Example 2) was measured as follows.
피검자 20명(평군연령 22세, 연령분포 19세~34세)을 대상으로 증기 발생기 (steam Generator)를 사용하여 15분간 충분히 스웨팅(sweating) 시켰다. 얼굴의 왼쪽 면에는 실시예의 화장료 조성물을, 얼굴의 오른쪽 면에는 비교예의 화장료 조성물을 코 주위 및 뺨을 중심으로 강하게 비빈 다음, 얼굴에 나타나는 가려움, 따가움, 쓰라림, 붉어짐, 부어오름 등의 피부자극반응을 8분 동안 관찰하였다. 단, 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 시험에서 제외하였다.Twenty subjects (22-year-olds, 19-34 years of age distribution) were swept for 15 minutes using a steam generator. Rubbing the cosmetic composition of the embodiment on the left side of the face and the cosmetic composition of the comparative example on the right side of the face strongly around the nose and around the cheeks, and then irritating the skin such as itching, stinging, soreness, redness, and swelling appearing on the face Was observed for 8 minutes. However, Psoriasis, Eczema, and other skin lesion holders, or those who are pregnant, nursing or contraceptives, and antihistamines, were excluded from this study.
피부자극 등급(Stinging grade)은 적용 후 자극 반응이 나타나는 시간에 따라 30초 이내에 나타나면 강자극(Intense Stinging), 2.5분 이내는 중자극(mid Stinging), 5분 이내는 경자극(moderate Stinging), 8분 이내는 미자극(delayed Stinging)으로 분류하였고, 자극양성율(Response rate : %)은 자극정도(Response score)를 피검자수(n)로 나누어 구하였다. Stinging grade is within 30 seconds depending on the time of stimulus response after application.Intense Stinging, Mid Stinging within 2.5 minutes, Moderate Stinging within 5 minutes, Less than 8 minutes were classified as delayed stinging, and the response rate (%) was obtained by dividing the response score by the number of subjects (n).
자극양성율에 따른 피부자극 정도는 하기 표 14에 따라 판정하였다.Skin irritation degree according to the rate of stimulation was determined according to Table 14.
상기 판정표에 따른 평가 결과를 표 15에 나타내었다.Table 15 shows the results of the evaluation according to the above determination table.
피부자극감 시험에 의한 피부안전성 실험결과에 따르면, 본 발명의 조성물은 자극양성율이 0.4%로, 화장료 원료 성분만으로 이루어진 비교예 조성물과 비슷한 수준의 자극성만을 가지는 것으로 나타났다.According to the skin safety test results by the skin irritation test, the composition of the present invention has a stimulation-positive rate of 0.4%, and has only a similar level of irritation as that of the comparative composition comprising only a cosmetic raw material component.
따라서, 본 발명의 조성물은 피부에 자극을 유발하지 않는 안전한 성분으로 이루어졌음을 알 수 있다.Thus, it can be seen that the composition of the present invention consists of safe ingredients that do not cause irritation to the skin.
5) 본 발명의 조성물의 안정성 시험5) Stability Test of Compositions of the Invention
실시예 2)에서 제조한 본 발명의 조성물 실시예 및 비교예에 따라 제조된 화장료 조성물에 대한 제형의 안정성을 각기 다른 온도에서 다음과 같이 측정하였다.Compositions of the Invention Prepared in Example 2) The stability of the formulations for the cosmetic compositions prepared according to Examples and Comparative Examples was measured at different temperatures as follows.
첫번째 시험에서는 실시예 및 비교예 조성물을 45℃ 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하였다.In the first test, the Example and Comparative Example compositions were stored in an opaque glass jar in a 45 ° C. thermostat and stored for 12 weeks.
두번째 시험에서는 4℃ 로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하였다.In the second test, they were stored in opaque glass jars for 12 weeks in a completely shaded refrigerator kept constant at 4 ° C.
실험 완료 후, 각 조성물의 분리 정도 및 변색 정도를 평가하였으며, 그 기준은 표 16과 같다.After completion of the experiment, the degree of separation and discoloration of each composition was evaluated, and the criteria are shown in Table 16.
상기 판정표에 따른 평가 결과를 표 17에 나타내었다.Table 17 shows the results of the evaluation according to the above determination table.
표 17에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물은 저온 및 고온에서 모두 비교예와 마찬가지로 변색 및 분리현상을 전혀 나타내지 않았다.As shown in Table 17, the composition of the present invention showed no discoloration and separation at all at low and high temperatures as in the comparative example.
따라서, 본 발명의 조성물은 화장료로 사용하기에 충분한 수준의 안정한 기제임을 알 수 있다. Thus, it can be seen that the composition of the present invention is a stable base at a level sufficient for use as a cosmetic.
본 발명의 조성물은 자외선에 의해 유발되는 세포사멸 및 DNA 손상을 감소시키는 효과가 있다.The composition of the present invention has the effect of reducing apoptosis and DNA damage caused by ultraviolet light.
또한 본 발명의 조성물은 우수한 피부주름 개선효과, 피부보습효과를 나타내면서도, 피부자극감이 없고 안정성이 우수하여 화장료로 사용되기에 적합하다.In addition, the composition of the present invention exhibits excellent skin wrinkle improvement effect, skin moisturizing effect, has no skin irritation and excellent stability and is suitable for use as a cosmetic.
따라서, 본 발명의 조성물은 자외선에 의한 피부 손상 및 노화를 방지하여 피부미용 효과를 향상시키기 위한 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the composition of the present invention can be usefully used as a cosmetic for improving skin beauty effect by preventing skin damage and aging caused by ultraviolet rays.
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