KR100565442B1 - Composition having cancerous metastasis inhibiting activity and immune enhancing activity - Google Patents
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Abstract
본 발명은 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는, 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼으로 이루어진 혼합물의 수추출물 및 그를 포함하는 기능성 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 수추출물은 백출 또는 가시오갈피 등의 단독 수추출물에 비해 암전이 억제 효과 및 장관 면역 활성 효과가 우수하다. 따라서 본 발명의 수추출물은 암전이 억제 및 면역 증강에 효과적으로 사용될 수 있고, 특히 상기 효과를 갖는 기능성 음료로 이용될 수 있다. The present invention relates to a water extract of a mixture consisting of baekchul, psorigogalpi, licorice, dermis and ginseng having cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity, and a functional food composition comprising the same. The water extract according to the present invention is superior to the cancer metastasis inhibitory effect and intestinal immune activity effect compared to the water extract alone, such as baekchul or psorigogalpi. Therefore, the water extract of the present invention can be effectively used to suppress cancer metastasis and enhance immunity, and in particular, can be used as a functional beverage having the above effects.
암전이 억제, 면역 증강, 증류물, 백출, 가시오갈피, 감초, 진피, 인삼Cancer metastasis suppression, immunity enhancement, distillate, baekchul, prickly pear, licorice, dermis, ginseng
Description
도 1은 본 발명에 따른 조성물의 암전이 억제율을 백출 단독 증류물 및 상이한 조성비의 혼합 증류물과 비교한 것이다(▨: 10㎕/mouse, ▩: 100㎕/mouse, *: p<0.05). FIG. 1 compares the rate of dark metastasis inhibition of a composition according to the invention with a single distillate alone and a mixed distillate of different composition ratios (▨: 10 μL / mouse, ▩: 100 μL / mouse, *: p <0.05).
도 2는 본 발명에 따른 조성물의 장관 면역 활성도를 백출 단독 증류물 및 상이한 조성비의 혼합 증류물과 비교한 것이다(▨: 10㎕/㎖, ▩: 100㎕/㎖, *: p<0.05).Figure 2 compares the intestinal immune activity of a composition according to the present invention with a white alone distillate and a mixed distillate of different composition ratios (VII: 10 [mu] l / ml, [mu]: 100 [mu] l / ml, *: p <0.05).
본 발명은 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는, 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼으로 이루어진 혼합물의 수추출물 및 그를 포함하는 기능성 식품 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a water extract of a mixture consisting of baekchul, psorigogalpi, licorice, dermis and ginseng having cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity, and a functional food composition comprising the same.
암은 발암유전자(oncogene) 및 종양 억제 유전자(tumor suppressor gene)와 같은 유전자에 변이(mutation)가 일어나서 발생하는 유전적 질환이며, 세포차원에 원인이 있는 질환이다. 현재, 암의 치료법으로 외과적 수술요법, 약물요법, 방사선요법 및 면역요법 등이 이용되고 있으나, 악성 종양의 억제 및 재발은 여전히 해결되지 않고 있다. Cancer is a genetic disease caused by mutations in genes such as oncogenes and tumor suppressor genes, and is a disease caused at the cellular level. Currently, surgical surgery, drug therapy, radiation therapy, immunotherapy, and the like have been used as cancer treatments, but suppression and recurrence of malignant tumors are still unresolved.
암의 가장 중요한 생물학적 특성의 하나는 전이를 일으킬 수 있다는 것으로, 이는 암을 치료하는데 가장 큰 장애물로 여겨지고 있다. 실제로 모든 고형 종양 환자의 약 60%는 이미 원발종양 진단시 미세하게나마 임상적으로 전이된 암을 가지고 있으며, 대부분의 암환자들의 중요한 사망 원인이 암전이라는 것은 이미 잘 알려져 있다. One of the most important biological properties of cancer is that it can cause metastasis, which is considered the biggest obstacle to treating cancer. In fact, about 60% of all patients with solid tumors already have cancers that have been clinically metastasized at the time of primary tumor diagnosis, and it is well known that cancer is the leading cause of death for most cancer patients.
전이가 일어나는 과정 가운데 암의 국소조직의 침윤과 동반되어 나타나는 현상이 신생혈관형성인데, 여기에는 종양맥관 형성인자 등이 관여하며, 종양에 의해 새로 생겨난 혈관들은 결함이 많기 때문에 암세포들에 의해 쉽게 침범된다. 또한, 암의 침습 및 전이 과정에는 조직의 기질 및 기저막에 유착하는데 필요한 라미닌 수용체와 같은 수많은 암세포 표면의 수용체들, 제IV형 콜라게나제(collagenase), 플라스미노겐(plasminogen) 활성 인자 및 카텝신 B 등과 같은 정상조직의 간질을 용해시키는데 필요한 수많은 효소들, 성장인자, 자분비 운동 인자(autocrine motility factor) 및 암 유전자 등의 발현이 필요하다.Neovascularization, which is accompanied by infiltration of local tissues of cancer during metastasis, involves tumor vasculature, and blood vessels newly formed by the tumor are easily invaded by cancer cells. do. In addition, cancer invasion and metastasis processes involve numerous cancer cell surface receptors, such as laminin receptors required for adhesion to tissue matrix and basement membrane, type IV collagenase, plasminogen activator and cathepsin Expression of numerous enzymes, growth factors, autocrine motility factors and cancer genes required to dissolve normal tissue epilepsy such as B is required.
현재까지 이러한 암전이 억제 작용을 가지는 물질의 개발에 대한 기대는 매우 크지만, 실제로 암전이 억제를 목적으로 한 물질의 개발예는 극히 적다. 황산화 다당류, N-디아조아세틸글리신 유도체, 노이라미니타제 및 피브로넥틴 분해효소(FNS) 등이 이러한 억제 작용을 갖는다고 보고 되어 있지만 아직 그 실용화의 보고는 없으며 그들 자체가 암전이 억제 효과를 갖는다는 보고도 없다. 따라서, 암전이 억제 작용을 갖는 물질의 개발이 시급한 실정이다. To date, the expectation for the development of a substance having an inhibitory effect on cancer metastasis is very high, but there are very few examples of the development of a substance for the purpose of inhibiting cancer metastasis. Sulfated polysaccharides, N-diazoacetylglycine derivatives, noiraminitase and fibronectin degrading enzymes (FNS) have been reported to have such inhibitory effects, but there are no reports of their practical use, and they have cancer metastasis inhibitory effects. There is no report. Therefore, there is an urgent need to develop a substance having a cancer metastasis inhibiting effect.
한편, 면역 증강이란 숙주의 특이 또는 비특이, 세포성 및 체액성 면역반응을 상승시키는 모든 작용을 말한다(Rajesh K. Gupta et., Vaccine, 11:293, 1993). 최근에 감염이나 종양의 치료에 면역 증강이 이용되면서 많은 관심을 불러일으키고 있다. 면역 증강에 이용되는 제제들은 특이성에 따라 일반면역강화제와 특이면역강화제로 구분되며, 또 기능에 따라 능동면역강화제와 수동면역강화제로 구분할 수 있다. On the other hand, immune enhancement refers to all actions that elevate the specific or non-specific, cellular and humoral immune response of the host (Rajesh K. Gupta et., Vaccine, 11: 293, 1993). Recently, the use of immune enhancement in the treatment of infections and tumors has attracted a lot of attention. Agents used to enhance immunity are classified into general immune enhancers and specific immune enhancers according to their specificity, and may be divided into active and passive immune enhancers according to their functions.
그러나, 이러한 면역 증강물질은 그 자체의 독성, 면역반응의 차이 등 여러 가지 부작용으로 인해 현재 인간에게 사용할 수 있는 물질은 극히 제한된 실정이고 그 효능도 매우 미미한 것으로 알려져 면역 증강제 개발에 있어서 커다란 장벽이 되어 왔다. 따라서, 부작용이 없으면서 유용한 면역 증강효과를 나타내는 천연물질의 개발은 대단히 중요한 의미를 가진다. However, due to various side effects such as its own toxicity and differences in immune response, these immune enhancers are known to be extremely limited in their use in humans, and their efficacy is minimal. come. Therefore, the development of natural substances that exhibit useful immune enhancing effects without side effects is of great importance.
부작용이 없으면서도 암전이 억제 효과 또는 면역 증강 효과를 갖는 천연 추출물을 개발하기 위한 노력이 계속되어 왔다. 예컨대, 대한민국 특허출원 제 2001-38966호에는 암전이 억제 활성을 갖는 조성물의 성분 중 하나로 백출이 개시되어 있고, 대한민국 특허출원 제 2003-93129호에는 면역 증강 활성을 갖는 조성물의 성분 중 하나로 백출이 개시되어 있다. 또한, 대한민국 특허출원 제 2004-48058호에는 가시오갈피 추출물이 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는다고 개시되어 있다. 상기와 같이 백출 추출물 및 가시오갈피 추출물의 암전이 억제 용도 및 면역 증강 용도는 이미 공지되어 있다. Efforts have been made to develop natural extracts having cancer metastasis inhibitory effects or immune enhancing effects without side effects. For example, Korean Patent Application No. 2001-38966 discloses one of the components of the composition having cancer metastasis inhibitory activity, and Korean Patent Application No. 2003-93129 discloses one of the components of the composition having immune enhancing activity. It is. In addition, Korean Patent Application No. 2004-48058 discloses that prickly pear extract has cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity. As mentioned above, the cancer metastasis inhibiting use and the immune enhancing use of the baekchul extract and prickly pear extract are already known.
하지만, 상기와 같은 노력에도 불구하고, 암전이를 효과적으로 억제하고 면역 증강을 효과적으로 활성화할 수 있는 치료제나 음료의 개발은 그 요구에 비하여 아직까지 미미한 편이다. However, despite such efforts, the development of a therapeutic agent or beverage that can effectively inhibit cancer metastasis and effectively activate immune enhancement is still insignificant compared to the demand.
본 발명자들은 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 우수한 물질을 찾아 연구하던 중, 상기 효과를 갖는 것으로 공지되어 있는 백출 수추출물 및 가시오갈피 수추출물을 동시에 함유하고, 추가로 감초, 진피 및 인삼 수추출물을 함유하는 조성물이 백출 또는 가시오갈피 각각의 단독 수추출물 보다 암전이 억제 효과 및 장관 면역 활성 효과가 뛰어난 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. The inventors of the present invention while searching for a substance excellent in cancer metastasis inhibitory effect and immune enhancing effect, simultaneously containing the white water extract and prickly pear extract which is known to have the above effects, and furthermore licorice, dermis and ginseng extract The present invention was completed by confirming that the composition containing the superior anticancer metastasis inhibitory effect and the intestinal immune activity effect than the individual water extracts of baekchul or thorn gogalpi.
본 발명의 목적은 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는 식물 수추출물을 제공하는 것이다. An object of the present invention is to provide a plant water extract having cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity.
본 발명의 다른 목적은 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는 기능성 식품을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a functional food having cancer metastasis inhibiting activity and immune enhancing activity.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는, 백출 32~45 중량%, 가시오갈피 32~45 중량%, 감초 5~15 중량%, 진피 5~15 중량% 및 인삼 2~15 중량%로 이루어진 혼합물의 수추출물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention has cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity, 32-45% by weight, 32-45% by weight, licorice 5-15%, dermis 5-15% by weight It provides a water extract of the mixture consisting of 2% and 15% by weight of ginseng.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 수추출물을 포함하는 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 갖는 기능성 식품 조성물을 제공한다. In order to achieve the other object of the present invention, the present invention provides a functional food composition having a cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity comprising the water extract.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명에 따른 조성물은 백출 32~45 중량%, 가시오갈피 32~45 중량%, 감초 5~15 중량%, 진피 5~15 중량% 및 인삼 2~15 중량%의 수추출물을 함유하는데 그 특징이 있다. The composition according to the present invention contains 32 ~ 45% by weight, 32 ~ 45% by weight, 5-15% by weight licorice, 5-15% by weight dermis and 2-15% by weight of ginseng extract. have.
백출(A. macrocephale)은 국화과에 속하며, 그의 성분으로 아트랙틸론(Atractylone), 아트랙틸레놀라이드(Atractylenolide), 베타-에우데스몰(ㅯ- Eudesmol) 및 하이네솔(Hynesol) 등이 알려져 있다. 백출은 소화관 및 피하조직에서 일어나는 수분대사의 이상에 대하여 이뇨 및 발한 작용을 하고, 동통, 위장염 및 에 효험이 있으며, 민간에서는 혈압강하제로도 쓰인다. 본 발명의 조성물에 함유되는 백출 추출물의 함량을 32~45 중량%로 하는 것이 바람직하다. 백출 추출물의 함량이 32 중량% 미만이면 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하고, 45 중량%를 초과하면 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과 증가에 큰 영향이 없으면서 조성물의 쓴맛이 증가하고 특유의 향이 강해져 음용에 부적합하므로 상기 범위의 함량으로 함유되는 것이 바람직하다. A. macrocephale belongs to the family Asteraceae, and its components are known as Atractylone, Atractylenolide, Beta-Eudesmol, and Heynesol. Exudation acts as a diuretic and sweating effect on the abnormalities of water metabolism in the digestive tract and subcutaneous tissue, and it is effective in pain, gastroenteritis, and in the private sector. It is preferable to make content of the white extract extract contained in the composition of this invention into 32 to 45 weight%. If the content of the extract is less than 32% by weight, the cancer metastasis inhibiting effect and immune enhancing effect of the composition is reduced, while the content of the bitter taste of the composition without a significant effect on the cancer metastasis inhibiting effect and the immune enhancing effect increase of the composition It is preferable to be contained in the content in the above range because it increases and the characteristic aroma becomes strong and unsuitable for drinking.
가시오갈피(A. senticosus)는 두릅나무과에 속하며 일명 '시베리아 인삼' 으로 더 잘 알려져 있다. 전통적으로 자양강장, 견근골 및 당뇨 등에 사용되어 왔으며, 현대에 와서도 가시오갈피의 면역 증강작용, 스트레스 감소작용, 체력증강작용, 방사능에 대한 보호작용 및 항암작용 등의 다양한 활성을 가진 것으로 입증이 되었다. 본 발명의 조성물에 함유되는 가시오갈피 추출물의 함량을 32~45 중량%로 하는 것이 바람직하다. 가시오갈피 추출물의 함량이 32 중량% 미만이면 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하고, 45 중량%를 초과하면 역시 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과 증가에 큰 영향이 없으면서 조성물의 쓴맛이 증가하고 특유의 향이 강해져 음용에 부적합하므로 상기 범위의 함량으로 함유되는 것이 바람직하다. A. senticosus belongs to the family Arboraceae and is better known as Siberian ginseng. Traditionally, it has been used for nourishing tonic, scapula and diabetes, and even in modern times, it has been proved to have various activities such as immune enhancement, stress reduction, physical strength enhancement, protection against radiation and anticancer activity. It became. It is preferable to make the content of the Prickly Pear Extract contained in the composition of the present invention 32 to 45% by weight. Less than 32% by weight of the extract of prickly orange extract reduces the cancer metastasis inhibitory effect and immune enhancing effect of the composition, and if it exceeds 45% by weight of the composition without significant effect on the cancer metastasis inhibitory effect and increase of immune enhancing effect of the composition It is preferable to be contained in the content of the above range because the bitter taste is increased and the characteristic aroma is strong and unsuitable for drinking.
본 발명 조성물의 우수한 효과를 위해서는 상기 백출 및 가시오갈피의 상대적인 조성비가 중요하다. 즉, 본 발명 조성물의 효과를 얻기 위해서는 백출 및 가시오갈피의 조성비가 상기와 같이 각각 32~45 중량%이어야 하지만, 상기 성분들의 조성비는 상기 조성비의 범위 내에서 동일한 것이 가장 바람직하다. For the excellent effect of the composition of the present invention, the relative composition ratios of the white light and thorny sprig are important. That is, in order to obtain the effect of the composition of the present invention, the composition ratio of Baekchul and Vigilokpi should be 32 to 45% by weight, respectively, as described above, but the composition ratio of the components is most preferably within the range of the composition ratio.
감초(G. uralensis)는 콩과의 여러해살이풀로서, 간장을 보호하고 간 기능을 원활하게 하여 피로를 조절한다고 알려져 있다. 또한, 기관지천식 환자의 치료에도 널리 사용되고 있으며, 해열작용이 있다고 알려져 있다. 본 발명의 조성물에 함유되는 감초 추출물의 함량을 5~15 중량%로 하는 것이 바람직하다. 감초 추출물의 함량이 5 중량% 미만이면 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하고, 15 중량%를 초과하면 상대적으로 활성이 높은 백출과 가시오가피의 감소로 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하면서 조성물의 쓴맛이 증가하여 음용에 부적합함으로 상기 범위의 함량으로 함유되는 것이 바람직하다. Licorice ( G. uralensis ) is a perennial herb that is known to control fatigue by protecting the liver and facilitating liver function. In addition, it is widely used in the treatment of bronchial asthma patients, and is known to have an antipyretic effect. It is preferable to make content of the licorice extract contained in the composition of this invention into 5 to 15 weight%. If the content of licorice extract is less than 5% by weight, the cancer metastasis inhibitory effect and immune enhancing effect is reduced, and when the content of the licorice extract exceeds 15% by weight, the anticancer activity and immune enhancing effect of the composition is reduced due to the relatively high activity whitening and reduction of visceral gland. It is preferable that the bitterness of the composition increases while decreasing, so that it is contained in the content in the above range, which is unsuitable for drinking.
진피는 황숙한 귤껍질을 건조시킨 것으로, 그의 성분으로서 정유 및 헤스베리딘 등을 포함한다. 한의학에서는 진토제, 진해제 또는 거담제로서 사용되고 있다. 본 발명의 조성물에 함유되는 진피 추출물의 함량을 5~15 중량%로 하는 것이 바람직하다. 진피 추출물의 함량이 5 중량% 미만이면 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하고, 15 중량%를 초과하면 상대적으로 활성이 높은 백출과 가시오가피의 감소로 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하면서 조성 물의 쓴맛이 증가하여 음용에 부적합함으로 상기 범위의 함량으로 함유되는 것이 바람직하다. The dermis is a dried tangerine peel, and includes essential oils, hesburydine and the like as its components. In oriental medicine, it is used as an anti-emetic, antitussive or expectorant. The content of the dermis extract contained in the composition of the present invention is preferably 5 to 15% by weight. When the content of the dermis extract is less than 5% by weight, the cancer metastasis suppression effect and immune enhancing effect is decreased, and when the content of the dermis extract exceeds 15% by weight, the cancer metastasis inhibitory effect and the immune enhancing effect are decreased due to the relatively high activity whitening and reduction of visceral gland skin. It is preferable that the bitter taste of the composition increases while decreasing, so that it is not suitable for drinking and is contained in the content in the above range.
인삼(P. ginseng)은 두릅나무과의 다년초 약용식물로서, 전통적으로 대표적인 자양강장제로 널리 이용되어 왔으며, 현대에 와서 중추 신경억제 및 흥분 작용, 단백질 및 핵산 생합성 촉진 작용, 조혈 작용, 간 기능 회복 작용, 혈압 강하 및 상승 작용, 동맥 경화 예방 효과, 혈당 강화 작용, 항피로 및 항스트레스 작용 등이 입증되었다. 본 발명의 조성물에 함유되는 인삼 추출물의 함량을 2~15 중량%로 하는 것이 바람직하다. 인삼 추출물의 함량이 2 중량% 미만이면 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하고, 15 중량%를 초과하면 상대적으로 활성이 높은 백출과 가시오가피의 감소로 조성물의 암전이 억제 효과 및 면역 증강 효과가 감소하면서 조성물의 쓴맛이 증가하여 음용에 부적합함으로 상기 범위의 함량으로 함유되는 것이 바람직하다. Ginseng ( P. ginseng ) is a perennial medicinal plant of the family Arboraceae, which has traditionally been widely used as a representative nourishing tonic. In modern times, Ginseng ( C. , Blood pressure lowering and synergism, atherosclerosis prevention effect, blood sugar strengthening effect, anti-fatigue and anti-stress action has been demonstrated. It is preferable to make the content of the ginseng extract contained in the composition of this invention into 2-15 weight%. If the content of ginseng extract is less than 2% by weight, the cancer metastasis inhibiting effect and immune enhancing effect is reduced. It is preferable that the bitterness of the composition increases while decreasing, so that it is contained in the content in the above range, which is unsuitable for drinking.
추출물 제조에 사용되는 원료로서의 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼은 시중에서 구입한 것을 사용할 수 있으며, 특별한 제한이 있는 것은 아니다. As raw materials used in the preparation of the extract, Baekchul, Gaogolpi, licorice, dermis and ginseng can be used commercially available, there is no particular limitation.
본 발명의 특징 중 하나는 상기 백출, 가시오갈피, 감초, 진피, 인삼 또는 그들의 혼합물을 물 추출법에 얻어지는 수추출물, 특히 수증기 증류법에 의해 얻어지는 증류물을 유효성분으로 하는데 있다. One of the characteristics of the present invention is to extract the water extract obtained by the water extraction method, in particular distillate obtained by steam distillation method of white leachate, prickly pear, licorice, dermis, ginseng or a mixture thereof.
추출방법의 예는 상온의 물 또는 열수를 이용한 물 추출법, 메탄올 또는 에탄올 등의 저급 알코올을 이용한 알코올 추출법, 아세톤, 클로로포름 및 메틸렌 클로라이드 등을 이용한 유기용매 추출법 및 초임계 추출법 등을 포함한다. 상기 유기용매 추출법 등의 경우 추출 후 용매의 제거에도 불구하고 유기용매가 추출물 내에 잔류하여 이를 음용하는 경우 인체에 해를 줄 수 있는 문제점이 있어 본 발명에 바람직하지 않다. Examples of the extraction method include water extraction using normal water or hot water, alcohol extraction using lower alcohols such as methanol or ethanol, organic solvent extraction using acetone, chloroform and methylene chloride, and supercritical extraction. In the case of the organic solvent extraction method, there is a problem that may harm the human body when the organic solvent remains in the extract and drink it despite the removal of the solvent after extraction is not preferred in the present invention.
반면, 본 발명의 가장 바람직한 방법인 수증기 증류법은 상기 유기용매 추출법의 단점을 갖지 않을 뿐만 아니라, 물 추출법에 비해 조성물의 물성 또는 관능에 바람직하지 않은 영향을 주는 성분들을 감소시킬 수 있고, 상대적으로 비활성 성분을 감소시킬 수 있으며, 대량생산이 가능하다는 장점을 갖는다. 본 발명의 실시예에서는 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼의 증류물을 얻기 위하여, 시판되는 장치를 이용하여 연속 수증기 증류법을 통해 수득하였다. On the other hand, steam distillation, which is the most preferred method of the present invention, not only does not have the disadvantages of the organic solvent extraction method, but also can reduce the components that have an undesirable effect on the physical properties or functionality of the composition compared to the water extraction method, and is relatively inactive. The component can be reduced and mass production is possible. In the embodiment of the present invention, in order to obtain the distillate of Baekchul, P. golgalpi, licorice, dermis and ginseng, it was obtained by continuous steam distillation using a commercially available apparatus.
수증기 증류법에 사용되는 상기 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼은 건체를 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 증류효율을 증대시키기 위해 증류 전에 분쇄기로 분쇄할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물의 제조 과정에 있어서, 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼 각각의 증류물을 제조한 후 혼합할 수도 있지만, 상기 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼을 혼합한 후 동시에 증류하는 것이 경제 적으로 바람직하다. It is preferable to use dry powders of the baekchul, prickly gallium, licorice, dermis and ginseng used for steam distillation. It may also be ground with a grinder before distillation to increase distillation efficiency. In the process of preparing the composition according to the present invention, the distillate of Baekchul, P. golgalpi, licorice, dermis and ginseng may be prepared and mixed, but at the same time after mixing the Baekchul, P. golgalpi, licorice, dermis and ginseng Distillation is economically desirable.
본 발명에 따른 조성물의 다른 특징은 그 성분으로 백출 및 가시오갈피 증류물을 동시에 사용함으로써 암전이 억제 및 면역 증강에 대한 상승효과를 갖는 것이다. 즉, 백출 또는 가시오갈피 각각의 단독추출물의 암전이 억제 및 면역 증강 효과는 이미 알려져 있다. 그러나, 본 발명에 따른 조성물은 특정 성분비의 백출 및 가시오갈피 증류물을 동시에 포함하고, 추가로 특정 성분비의 감초, 진피 및 인삼 증류물을 포함하는 것으로서, 백출 또는 가시오갈피 각각의 단독증류물에 비해 우수한 숙취해소 효과를 가진다. Another feature of the composition according to the present invention is its synergistic effect on inhibiting cancer metastasis and enhancing immunity by simultaneously using leachate and chlorophyll distillate as its components. That is, the cancer metastasis suppression and immune enhancing effects of the single extract of each of the baekchul or thorn gogalpi are already known. However, the composition according to the present invention simultaneously comprises a specific component ratio of white leachate and prickly pear distillate, and further includes a specific component ratio of licorice, dermis and ginseng distillate, compared to the individual distillate of white peach or prickly pear. It has an excellent hangover relief effect.
상기 본 발명 조성물의 상승효과는 본 발명에 따른 조성물, 백출 증류물, 가시오갈피 증류물, 감초 증류물, 진피 증류물 및 인삼 증류물의 암전이 억제 효과 및 장관 면역 활성 효과를 각각 비교함으로써 확인할 수 있다.The synergistic effect of the composition of the present invention can be confirmed by comparing the cancer metastasis inhibitory effect and intestinal immune activity effect of the composition according to the present invention, baekchul distillate, prickly distillate, licorice distillate, dermis distillate and ginseng distillate, respectively. .
즉, 본 발명의 일 실험예에서는 본 발명에 따른 조성물의 암전이 억제 효과를 백출 증류물 및 가시오갈피 증류물 등의 단독 증류물과 비교하기 위하여, 대장암 세포이면서 폐로의 전이력을 가진 종양 세포주를 마우스에 정맥 주사한 다음, 폐 조직을 적출하여 종양 군집수를 측정하였다. 그 결과, 본 발명에 따른 조성물의 암전이 억제율(55.6% 및 54.9%)은 5가지 성분 각각의 개별 증류물 중 가장 높은 활성을 보인 백출 증류물의 억제율(51.1%)에 비해 우수하였다(도 1 및 표 2 참조). That is, in one experimental example of the present invention, in order to compare the cancer metastasis inhibiting effect of the composition according to the present invention with a single distillate such as a white distillate and a thorny distillate distillate, colon cancer cells and tumor cell lines with metastasis to the lungs. Was injected intravenously into mice, and lung tissue was extracted to determine the tumor population. As a result, the cancer metastasis inhibition rate (55.6% and 54.9%) of the composition according to the present invention was superior to the inhibition rate (51.1%) of the white distillate showing the highest activity among the individual distillates of each of the five components (FIG. 1 and See Table 2).
또한, 본 발명의 일 실험예에서는 본 발명에 따른 조성물의 면역 증강 효과를 백출 증류물 및 가시오갈피 증류물 등의 단독 증류물과 비교하기 위하여, 장관 면역 활성도를 측정하였다. 점막상피세포가 활성화되면 점막상피세포 내에 존재하는 림프구들이 활성화되고, 림프소절의 배중심(germinal center)에서 분화하고 성숙하여, 전신 순환계로 들어간다(James SP, Zietz M., Handbook of mucosal immunology, 275-285, 1994). 결국 점막상피세포를 포함한 장관면역계를 활성화시키면, 장관의 면역학적 방어를 증강시킬 뿐만 아니라 전신 면역 반응을 조절하여 알레르기 반응 및 자가면역질환 등을 효과적으로 억제할 수 있다. 본 발명의 실험예에서는 점막상피세포에 의해 활성화되는 골수세포의 증식도를 측정함으로써 본 발명 조성물의 점막상피세포 활성도를 조사하였다. 그 결과, 본 발명에 따른 조성물의 장관 면역 활성도는 대조구의 1.56배 및 1.59배로서 5가지 성분 각각의 개별 증류물 중 가장 높은 활성을 보인 백출 증류물의 활성도(1.44배)에 비해 우수하였다(도 2 및 표 2 참조). In addition, in one experimental example of the present invention, intestinal immune activity was measured in order to compare the immune enhancing effect of the composition according to the present invention with a single distillate such as a white distillate and a thorny distillate. Activation of the mucosal epithelial cells activates lymphocytes present in the mucosal epithelial cells, differentiates and matures in the germinal center of lymph nodes and enters the systemic circulation (James SP, Zietz M., Handbook of mucosal immunology, 275). -285, 1994). Eventually, by activating the intestinal immune system, including mucosal epithelial cells, it is possible to effectively suppress allergic reactions and autoimmune diseases by enhancing the immune defense of the intestine as well as regulating the systemic immune response. In the experimental example of the present invention, mucosal epithelial cell activity of the composition of the present invention was examined by measuring the proliferation of bone marrow cells activated by mucosal epithelial cells. As a result, the intestinal immune activity of the composition according to the present invention was 1.56 times and 1.59 times that of the control, which was superior to that of the white distillate showing the highest activity among the individual distillates of each of the five components (1.44 times) (FIG. 2). And Table 2).
상기 일련의 결과들은 특정 조성비의 백출 및 가시오갈피 증류물을 동시에 함유하고, 추가로 특정 조성비의 감초, 진피 및 인삼 증류물을 함유하는 본 발명에 따른 조성물이 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 또는 인삼 각각의 단독증류물에 비해 우수한 암전이 억제 효과 및 장관 면역 활성 효과를 가짐을 나타낸다. 즉, 상기 결과에 의해 본 발명의 조성물이 백출 또는 가시오갈피 등 각각의 단독증류물에 비 해 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성에 있어서 상승효과를 가짐을 확인할 수 있다. The above series of results indicate that the composition according to the present invention simultaneously contains white and red ginseng distillate of a certain composition ratio and further contains licorice, dermis and ginseng distillate of a certain composition ratio. It is shown to have a superior cancer metastasis inhibitory effect and intestinal immune activity effect compared to each single distillate. In other words, it can be seen from the above results that the composition of the present invention has a synergistic effect on cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity as compared to the respective distillates, such as baekchul or psoriasis.
또한, 본 발명의 실시예에서는 본 발명에 따른 조성물에 함유되는 성분들의 조성비를 특정하기 위하여, 본 발명 조성물과 조성비가 상이한 5가지 성분의 혼합 증류물을 제조한 후(비교예 6 내지 비교예 8) 그의 암전이 억제 활성 및 면역 증강 활성을 상기와 동일한 방법에 따라 본 발명에 따른 조성물과 비교하였다. In addition, in the embodiment of the present invention, in order to specify the composition ratio of the components contained in the composition according to the present invention, after preparing a mixed distillate of the five components different from the composition of the present invention (Comparative Examples 6 to Comparative Example 8 Its cancer metastasis inhibitory activity and immune enhancing activity were compared with the composition according to the present invention according to the same method as above.
그 결과, 본 발명에 따른 조성물의 암전이 억제율 및 장관 면역 활성도는 각각 비교예 6 내지 비교예 8의 복합 증류물에 비해 우수하였다(도 1, 도 2 및 표 2 참조). 상기 결과로부터, 백출 및 가시오갈피의 양이 각각 32 내지 45 중량%의 일정한 비율로 비슷하거나 동일한 양으로 함유되어야 우수한 활성을 나타내는 것을 알 수 있다(실시예 1 및 실시예 2 참조). 한편, 상대적으로 높은 활성을 갖는 백출 증류물의 비율을 높이고 가시오갈피 증류물의 비율을 감소시키는 경우, 예상과는 달리 활성이 저하되었다(비교예 6 및 비교예 7 참조). 또한, 상대적으로 활성이 낮은 진피, 감초 및 인삼 증류물의 비율을 높이면 조성물의 활성이 감소함을 알 수 있다(비교예 8 참조). As a result, the cancer metastasis inhibition rate and intestinal immune activity of the composition according to the present invention were superior to the complex distillates of Comparative Examples 6 to 8, respectively (see FIGS. 1, 2 and Table 2). From the above results, it can be seen that the amount of baekchul and psorigogalpi exhibited excellent activity only when contained in a similar or the same amount at a constant ratio of 32 to 45% by weight, respectively (see Examples 1 and 2). On the other hand, when increasing the ratio of the white distillate having a relatively high activity and reducing the ratio of the visible distillate, the activity was unexpectedly lowered (see Comparative Example 6 and Comparative Example 7). In addition, it can be seen that increasing the ratio of relatively low activity dermis, licorice and ginseng distillate decreases the activity of the composition (see Comparative Example 8).
상기 본 발명에 따른 조성물은 암전이 억제 및 면역 증강 활성을 갖는 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 암전이 억제 및 면역 증강용 기능성 식품으로 증류물을 직접 사용할 수 있지만, 당업계에 공지된 식품 제조방법에 따라 통상적인 식 품 첨가물을 첨가하여 사용할 수 있다. 상기의 식품 첨가물의 예로 착향료, 산미료, 보존료, 감미료, 산화방지제, 안정제, 착색료 및 영양강화제 등이 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다. 예컨대, 물 100 중량부에 본 발명에 따른 조성물 2~13 중량부 및 구연산, 사과산 및 과당 등의 산미제 또는 감미제 0.5~4 중량부를 첨가하여 암전이 억제 및 면역 증강용 기능성 음료로 사용할 수 있다. The composition according to the present invention can be prepared as a functional food having cancer metastasis suppression and immune enhancing activity. Distillate may be used directly as a functional food for inhibiting cancer metastasis and enhancing immunity, but may be used by adding conventional food additives according to food preparation methods known in the art. Examples of the food additives include, but are not limited to, flavors, acidulants, preservatives, sweeteners, antioxidants, stabilizers, coloring agents, and nutrition enhancers. For example, 2 to 13 parts by weight of the composition according to the present invention and 0.5 to 4 parts by weight of acidifying or sweetening agents such as citric acid, malic acid and fructose may be added to 100 parts by weight of water and used as a functional beverage for inhibiting cancer metastasis and enhancing immunity.
또한, 상기 본 발명의 기능성 식품 조성물을 통상적인 식품에 첨가하여 사용할 수 있다. 본 발명의 기능성 식품 조성물이 첨가될 수 있는 상기 식품은 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면과 같은 면류, 껌류, 아이스크림류와 같은 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제 및 비타민 복합제 등을 포함하지만, 이것에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 따른 기능성 식품 조성물은 식품 100 중량부에 1~15 중량부의 양으로 첨가되어 사용될 수 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다.In addition, the functional food composition of the present invention can be used in addition to conventional food. The food to which the functional food composition of the present invention may be added may be meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionary, pizza, noodles such as ramen, gums, dairy products such as ice cream, various soups, drinks, tea , Drinks, vitamin complexes and the like, but is not limited thereto. Functional food composition according to the present invention 1 to 15 parts by weight of food It can be used in addition to the amount of parts by weight, but is not limited thereto.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
<실시예 1><Example 1>
본 발명에 따른 조성물의 제조Preparation of the composition according to the invention
본 발명에 따른 조성물을 리켄스-니커슨(Likens-Nickerson) 장치(J&W Scientific, Folsom, CA, USA)를 이용하여 연속 수증기 증류법에 따라 제조하였다. The composition according to the invention was prepared by continuous steam distillation using a Rickens-Nickerson apparatus (J & W Scientific, Folsom, Calif., USA).
즉, 백출 10.5g, 가시오갈피 10.5g, 감초 3g, 진피 3g 및 인삼 3g을 세절 및 혼합한 혼합생약재 30g 및 증류수 300mL를 상기 장치의 추출관 한쪽에 가하여 가열 추출하고, 상기 장치의 다른 한쪽의 추출관에는 n-펜탄 및 디에틸에테르의 2:1 혼합액 50mL를 43℃에서 가열하였다. 1시간 후 증류물이 든 플라스크를 떼어내고 수분을 제거하기 위하여 황산나트륨(sodium sulfate) 10g을 첨가한 후 4℃에서 냉장보관 하였다. 상기 냉장 보관된 증류물을 꺼내어 질소가스로 농축하여, 백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼의 증류물 2mL를 얻었다. That is, 30 g of mixed medicinal herbs and 300 mL of distilled water, which are finely chopped and mixed with 10.5 g of Baekchul, 10.5 g of Prickly Pear, 3 g of Licorice, 3 g of Ginseng and 3 g of Ginseng, and 300 mL of distilled water are added to one side of the extraction tube of the apparatus, and the other side of the apparatus is extracted. In the tube, 50 mL of a 2: 1 mixture of n-pentane and diethyl ether was heated at 43 ° C. After 1 hour, the flask containing the distillate was removed and 10 g of sodium sulfate was added to remove moisture, and then refrigerated at 4 ° C. The refrigerated distillate was taken out and concentrated with nitrogen gas, to obtain 2 mL of distillate of baekchul, saenggalpi, licorice, dermis and ginseng.
<실시예 2><Example 2>
본 발명에 따른 조성물의 제조Preparation of the composition according to the invention
백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼의 혼합량을 각각 12g, 12g, 2.25g, 2.25g 및 1.5g으로 하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 본 발명에 따른 조성물을 제조하였다. The composition according to the present invention was carried out in the same manner as in Example 1, except that the mixed amounts of Baekchul, P. falciparum, licorice, dermis and ginseng were 12g, 12g, 2.25g, 2.25g and 1.5g, respectively. Prepared.
<비교예 1~5> <Comparative Example 1-5>
단독 증류물의 제조Preparation of Single Distillate
백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼의 혼합생약제를 사용하는 대신, 상기 각 약재 단독 30g을 사용했다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 증류물을 얻었다. Distillate was obtained by the same method as in Example 1, except that 30 g of each of the medicinal herbs was used instead of the mixed herbal medicine of Baekchul, P. golgalpi, licorice, dermis and ginseng.
<비교예 6~8><Comparative Example 6-8>
혼합 증류물의 제조Preparation of Mixed Distillate
백출, 가시오갈피, 감초, 진피 및 인삼의 혼합량이 하기 표 1과 같다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 혼합 증류물을 제조하였다. A mixed distillate was prepared in the same manner as in Example 1, except that the mixed amounts of Baekchul, P. golpi, licorice, dermis and ginseng were as shown in Table 1 below.
<표 1>TABLE 1
<실험예 1>Experimental Example 1
본 발명 조성물의 암전이 억제 효과 조사Investigation of the cancer metastasis inhibiting effect of the composition of the present invention
본 발명 조성물의 암전이 억제 효과를 확인하기 위하여, 종양세포주를 동물에 투여하여 본 발명 조성물의 암전이 억제 효과를 조사하였다. In order to confirm the cancer metastasis inhibiting effect of the composition of the present invention, tumor cell lines were administered to animals to investigate the cancer metastasis inhibiting effect of the composition of the present invention.
실험 동물로는 (주)대한바이오링크(충북)로부터 Balb/c 마우스 40마리를 분 양받아 실험동물장에서 사육하였다. 상기 마우스를 사육조에 5~10마리씩 넣어 정수와 실험동물용 펠렛사료(삼양사료주식회사, 인천)를 자유공급 하였다. 종양세포주로는 대장암 세포이면서 폐로의 전이력을 가진 콜론 26-M3.1 폐암종(colon 26-M3.1 lung carcinoma)을 일본의 북해도 대학으로부터 분양받았으며, 이를 7.5% FBS, 비타민 용액, 소듐 피루베이트, 비필수 아미노산 및 L-글루탐산이 함유된 EMEM 배지를 이용하여 5% CO2, 95%의 습도 및 37℃의 배양기에서 배양하였다. As experimental animals, 40 Balb / c mice were collected from Daehan Biolink Co., Ltd. (Chungbuk) and bred in the experimental animal farm. 5 to 10 mice were placed in a breeding tank to freely supply pellet feed (Samyang Feed Co., Incheon) for purified water and experimental animals. As a tumor cell line, colon 26-M3.1 lung carcinoma, which is colon cancer cells and has metastasis to the lung, was distributed from the University of Hokkaido, Japan, which was 7.5% FBS, vitamin solution, and sodium. EMEM medium containing pyruvate, non-essential amino acids and L-glutamic acid was incubated in an incubator at 5% CO 2 , 95% humidity and 37 ° C.
상기 실시예 1 내지 실시예 2 및 비교예 1 내지 비교예 8에서 얻은 각 증류물 100㎕ 또는 10㎕을 상기 각 마우스에 정맥주사 하였다. 2일 후에, 2.7ㅧ104의 상기 종양 세포를 각 마우스에 정맥주사 하였다. 14일 후에, 마우스들을 희생시키고 종양의 표적기관인 폐를 적출하여 보우인 용액(Bouin's solution)에서 전이된 종양을 고정시킨 후 광학현미경을 이용하여 종양의 군집수를 측정하였다. 증류물은 투여하지 않고, 종양 세포만을 정맥주사한 마우스를 대조구로 이용하였다. 100 μl or 10 μl of each distillate obtained in Examples 1 to 2 and Comparative Examples 1 to 8 was intravenously injected into the mice. After 2 days, 2.7x10 4 tumor cells were injected intravenously into each mouse. After 14 days, the mice were sacrificed and the lung, which is a target organ of the tumor, was extracted to fix the tumor that had metastasized in Bowin's solution, and the population of tumors was measured using an optical microscope. Distillates were not administered, and mice injected only with tumor cells were used as controls.
각 그룹에 대한 종양 군집수를 도 1에 도시하였으며, 그를 기초로 각 그룹의 암전이 억제율을 다음 식에 의해 계산하여 하기 표 2에 나타내었다. 각 그룹의 마우스 4마리에서 반복하여 측정하였으며, 각 개체별로 얻어진 결과는 평균값으로 나타내었다. Tumor population for each group is shown in Figure 1, based on it, the rate of cancer metastasis inhibition of each group is calculated by the following equation is shown in Table 2 below. Measurement was repeated in four mice of each group, and the results obtained for each individual were expressed as average values.
암전이 억제율(%) = [(대조군 종양의 군집수 - 실험군 종양의 군집수) / 대조군 종양의 군집수] × 100% Of cancer metastasis suppression = [(group of control tumors-number of experimental tumors) / number of control tumors] × 100
도 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 본 발명 조성물은 개별 생약재 증류물 중 가장 높은 활성을 보인 비교예 1의 백출 증류물의 51.1% 억제율 보다 증가된 55.6% 및 54.9%의 억제율을 보였다. 또한, 본 발명 조성물은 각 생약재의 조성비가 상이한 비교예 6 내지 비교예 8에 비해서도 높은 억제율을 보였다. As shown in Figure 1 and Table 2, the composition of the present invention prepared in Examples 1 and 2 was 55.6% increased than the 51.1% inhibition rate of the white distillate of Comparative Example 1 showing the highest activity among the individual herbal distillate and The inhibition rate was 54.9%. In addition, the composition of the present invention showed a high suppression rate compared to Comparative Examples 6 to 8 in which the composition ratio of each herbal medicine is different.
상기 결과에 의하여, 본 발명의 조성물은 백출 및 가시오갈피 등의 단독 조성물 및 상이한 조성비를 갖는 증류물에 비해 암전이 억제 효과가 우수한 것을 알 수 있다. According to the above results, it can be seen that the composition of the present invention is superior in the cancer metastasis inhibiting effect as compared to distillate having a single composition and different composition ratios, such as baekchul and golgogalpi.
<실험예 2>Experimental Example 2
본 발명 조성물의 면역 증강 효과 조사Investigation of immune enhancing effect of the present composition
본 발명 조성물의 면역 증강 효과를 확인하기 위하여, 공지의 방법(Hong T, Matsumoto T, kiyohara H, Yamada H., Phytomedicine 5:353-360, 1998)에 따라, 본 발명 조성물의 소화관 점막상피세포(peyer's patch) 활성화 효과를 골수세포 증식 활성 여부를 통해 측정하였다. In order to confirm the immune enhancing effect of the composition of the present invention, according to known methods (Hong T, Matsumoto T, kiyohara H, Yamada H., Phytomedicine 5: 353-360, 1998), gut mucosal epithelial cells of the composition of the present invention ( peyer's patch) activation effect was measured through myeloid cell proliferation activity.
실험 동물로는 (주)대한바이오링크(충북)로부터 C3H/He 마우스를 분양받아 실험동물장에서 사육하였다. 상기 마우스를 사육조에 5~10마리씩 넣어 정수와 실험동물용 펠렛사료(삼양사료주식회사, 인천)를 자유공급 하였다. As experimental animals, C3H / He mice were distributed from Daehan Biolink Co., Ltd. (Chungbuk) and bred in experimental animal farms. 5 to 10 mice were placed in a breeding tank to freely supply pellet feed (Samyang Feed Co., Incheon) for purified water and experimental animals.
먼저 각 군의 마우스를 경추 탈골로 희생시킨 후, 마우스의 복부를 절개하여 소장을 적출하였다. 이후, 소장 위에 존재하는 소화관 점막상피세포를 떼어내어 HBSS(Hank's balanced salt solution; Gibco, USA)가 함유된 페트리디쉬에 옮겨 조직을 파괴하여 소화관 점막상피세포를 현탁시킨다. 상기 세포 현탁액을 금속체로 여과한 후 RPMI 1640(+5% FBS) 배지로 세척하고, 상기 배지를 이용하여 2×106 cells/ml의 농도로 조정하였다. 이후, 세포 현탁액을 96-웰 플레이트에 웰당 180㎕씩 각각 분주하고, 상기 실시예 및 비교예에서 제조된 증류물 각각을 20 ㎕(100 ㎕/㎖) 또는 1.8 ㎕(10 ㎕/㎖)씩 첨가하였다. 상기 증류물 대신에 식염수 20㎕ 또는 1.8 ㎕을 첨가한 것을 대조구로 이용하였다. 이후, 37℃, 5% CO2 배양기에서 5일간 배양한 후, 배양 상등액(supernatant)을 채취하였다. First, the mice of each group were sacrificed by cervical dislocation, and the abdomen of the mice was incised to extract the small intestine. Subsequently, the gut-mucosal epithelial cells present on the small intestine are removed, transferred to a petri dish containing HBSS (Hank's balanced salt solution; Gibco, USA) and the tissues are destroyed to suspend the gut-mucosal epithelial cells. The cell suspension was filtered through a metal body, washed with RPMI 1640 (+ 5% FBS) medium, and adjusted to a concentration of 2 × 10 6 cells / ml using the medium. Thereafter, the cell suspension was dispensed in a 96-well plate at 180 μl per well, and 20 μl (100 μl / ml) or 1.8 μl (10 μl / ml) was added to each of the distillates prepared in Examples and Comparative Examples. It was. Instead of the distillate, 20 μl or 1.8 μl of saline was added as a control. Then, after incubating for 5 days at 37 ℃, 5% CO 2 incubator, the culture supernatant (supernatant) was taken.
골수 세포는 상기 동일한 마우스의 대퇴부 뼈로부터 회수하였다. 즉, 주사기를 이용하여 뼈 속으로 HBSS를 주입하여 골수세포를 시험관에 수집한 후, RPMI 1640(+5% FBS) 배지로 세척하고, 상기 배지를 이용하여 2×106 cells/ml의 농도로 조정하였다. 이후, 골수 세포 현탁액을 96-웰 플레이트에 웰당 100㎕씩 각각 분주하고, 각 웰에 상기 소화관 점막상피세포 배양 상등액 50㎕ 및 RPMI 1640(+5% FBS) 50㎕를 첨가하고, 37℃, 5% CO2 배양기에서 6일간 배양하였다. Bone marrow cells were recovered from the femoral bones of the same mouse. That is, by injecting HBSS into the bone using a syringe to collect the bone marrow cells in the test tube, washed with RPMI 1640 (+ 5% FBS) medium, using the medium at a concentration of 2 × 10 6 cells / ml Adjusted. Subsequently, 100 μl / well of bone marrow cell suspension was dispensed in 96-well plates, respectively, and 50 μl of the gut mucosal epithelial cell culture supernatant and 50 μl of RPMI 1640 (+ 5% FBS) were added to each well. Incubated for 6 days in a% CO 2 incubator.
골수 세포의 증식도 측정은 골수세포의 전자전달계에서 방출되는 전자에 의해 형광 시약인 알라마 블루(Alamar Blue, Alamar Bio-Sciences Inc, USA)에 의해 환원되어 발색되는 형광 세기를 측정하는 방법을 사용하였다(Page B, Page M, Noel. C., Int J Oncol 3:473-476, 1993). 즉, 상기 소화관 점막상피세포 배양 상 등액 및 골수 세포의 배양 종료 12시간 전에 알라마 블루(Alamar Blue) 20㎕를 첨가한 다음, 형광계(Fluoroskan II; Labsystems, Finland)를 이용하여 형광도를 측정하였다. Proliferation of bone marrow cells is measured by measuring the fluorescence intensity reduced by the fluorescent reagent Alamar Blue (Alamar Blue, Alamar Bio-Sciences Inc, USA) by the electrons emitted from the bone marrow's electron transport system. (Page B, Page M, Noel. C., Int J Oncol 3: 473-476, 1993). That is, 20 μl of Alamar Blue was added 12 hours before the end of culture of the gut mucosal epithelial cell culture supernatant and bone marrow cells, and then fluorescence was measured using a fluorometer (Fluoroskan II; Labsystems, Finland). It was.
각 그룹에 대한 형광 세기를 도 2에 도시하였으며, 그에 의해 각 그룹의 장관 면역 활성도가 대조구의 몇 배인지를 하기 표 2에 나타내었다. 각 그룹의 마우스 4마리에서 반복하여 측정하였으며, 각 개체별로 얻어진 결과는 평균값으로 나타내었다. Fluorescence intensity for each group is shown in FIG. 2, whereby the intestinal immune activity of each group is shown in Table 2 below. Measurement was repeated in four mice of each group, and the results obtained for each individual were expressed as average values.
도 2 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 본 발명 조성물은 개별 생약재 증류물 중 가장 높은 활성을 보인 비교예 1의 백출 증류물의 1.44배 보다 증가된 1.56배 및 1.59배의 활성도를 보였다. 또한, 본 발명 조성물은 각 생약재의 조성비가 상이한 비교예 6 내지 비교예 8에 비해서도 높은 활성도를 보였다. As shown in Fig. 2 and Table 2, the compositions of the present invention prepared in Examples 1 and 2 were 1.56 times and 1.59 times higher than 1.44 times of the white distillate of Comparative Example 1 showing the highest activity among the individual herbal medicine distillates. Pear activity was shown. In addition, the composition of the present invention showed a high activity also compared to Comparative Examples 6 to 8 in which the composition ratio of each herbal medicine is different.
상기 결과에 의하여, 본 발명의 조성물은 백출 및 가시오갈피 등의 단독 조성물 및 상이한 조성비를 갖는 증류물에 비해 장관 면역 활성이 우수한 것을 알 수 있다.According to the above results, it can be seen that the composition of the present invention is superior in intestinal immune activity as compared to distillates having different composition ratios and single compositions such as baekchul and psorigogalpi.
<표 2>TABLE 2
<실시예 3><Example 3>
본 발명의 조성물을 포함하는 기능성 음료의 제조Preparation of Functional Beverage Including Composition of the Present Invention
하기 표 3의 조성은 본 발명의 조성물의 구체적인 이용 형태를 예시하는 것일 뿐 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 표 3의 성분 및 성분비를 이용하여 기능성 음료를 제조하였다. The composition of the following Table 3 is only to illustrate the specific use form of the composition of the present invention and not to limit the scope of the invention. Functional beverages were prepared using the ingredients and ratios of Table 3.
<표 3>TABLE 3
본 발명에 따른 수추출물은 백출 또는 가시오갈피 등의 단독 수추출물에 비해 암전이 억제 효과 및 장관 면역 활성 효과가 우수하다. 따라서 본 발명의 수추출물은 암전이 억제 및 면역 증강에 효과적으로 사용될 수 있고, 특히 상기 효과를 갖는 기능성 음료로 이용될 수 있다. The water extract according to the present invention is superior to the cancer metastasis inhibitory effect and intestinal immune activity effect compared to the water extract alone, such as baekchul or psorigogalpi. Therefore, the water extract of the present invention can be effectively used to suppress cancer metastasis and enhance immunity, and in particular, can be used as a functional beverage having the above effects.
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