KR100489615B1 - 리스테리아 모노사이토제네스 감염의 예방 및 치료를 위한항체, 이를 포함하는 알 및 이들의 제조방법 - Google Patents
리스테리아 모노사이토제네스 감염의 예방 및 치료를 위한항체, 이를 포함하는 알 및 이들의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 리스테리아 모노사이토제네스의 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 항원으로 사용하여 면역화된 산란계로부터 산란되고 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 포함한 알에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 알의 난황으로부터 분리되고 리스테리증을 예방 및 치료하는데 유용한 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 알 및 항체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 리스테리아 모노사이토제네스 감염을 예방 및 치료하는데 유용한 항체를 포함하는 알 및 이러한 알의 난황으로부터 분리된 항체에 관한 것이다. 보다 자세하게는, 본 발명은 리스테리아 모노사이토제네스 감염에 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 항원으로 사용하여 면역화된 산란계로부터 산란되고 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 포함한 알 및 이러한 알의 난황으로부터 분리되고 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 알 및 항체의 제조 방법에 관한 것이다.
리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)는 식중독 리스테리아 감염증 발병의 원인균이다. 리스테리아 모노사이토제네스는 그람양성, 비아포형성균으로 4℃ 내지 50℃사이에서 증식하는 통성 혐기성 간균이다. 인체 리스테리아 감염증은 대부분 산발적으로 발생되며, 감염원과 통로는 주로 오염된 식품이다.
리스테리아균은 보통 토양과 식물, 하수 오물 등에서 서식한다. 이와 같은 서식 특성 때문에 생야채와 냉장을 필요로 하는 치즈 및 육류 등이 이 균에 오염될 위험이 상대적으로 높다. 리스테리아균에 의한 질병은 리스테리아증(listeriosis)이라 불리는데 일반적인 항생제를 사용해 이를 치료하는 것이 보통이다. 리스테리아증은 후진국에서 특히 많이 발생하며 에이즈와 같은 질병으로 인해 면역계(immune system)가 약화된 사람에게는 뇌막염(meningitis)까지 유발시킬 수 있다. 리스테리아증은 리스테리아균이 위를 통해 장과 혈류로 침투하면서 발병된다. 일단 혈류까지 리스테리아균이 침투하면 중추신경계(central nervous system)와 태반(placenta)까지 이 균이 확산될 수 있다.
한편, 상기 리스테리아증의 치료제로는 페니실린 G, 암피실린, 겐타마이신과 같은 항생제가 사용되고 있다. 그러나, 리스테리아증은 그 감염증세가 뚜렷하지 않으며 치료제로 사용되는 상기 항생제에 대한 리스테리아 균주의 내성으로 인해 새로운 리스테리아증의 예방 및 치료방법이 절실히 요구되고 있다.
최근에 몇몇 연구자들에 의해 산란계의 알을 이용한 항체단백질에 대한 연구가 시작되었다. 산란계의 알, 특히 난황(yolk of the egg)은 특이항체의 풍부한 자원으로서 알려져 있다 (Gassmann, et al., FASEB J, 4, 2528-2538 (1990)). 토코로 등은 병원체를 항원으로 사용하여 면역화시킨 닭에 의해 생산된 알, 알의 알부민 및 난황으로부터 획득한 항체를 함유한 물질로 장관 감염성 질병의 치료방법을 제시한 바 있다(미국특허 제5080895호). 또한, 유전자 백신을 이용한 병원성 대장균에 대한 난황항체(국제특허공개 제WO 01/48018호), 자돈의 장관 감염성 질병의 치료를 위한 난황항체(유럽특허공개 제0955061호, 대한민국특허 제267747호, 대한민국특허 제0267746호), 로타바이러스에 대한 난황항체(대한민국특허공개 제2001-16599호) 등이 개시된 바 있다. 상술한 방법들은 산란계에 항체를 유도하기 위한 항원으로서, 살아있는 바이러스 또는 세균, 약독화 및 불활화된 바이러스 또는 세균, 바이러스 및 세균의 병원성 관련 유전자를 사용한 것이다.
그러나, 세균 또는 바이러스의 균주 자체를 항원으로 사용하는 경우, 균체 내에 여러 이종 단백질을 많이 함유하고 있기 때문에 단일항원을 사용하는 경우에 비해 항체 역가가 높게 나타나지 않는 단점이 있다.
본 발명자들은 리스테리아 모노사이토제네스의 감염에 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질을 상기 병원체로부터 분리하고, 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 항원으로 이용하여 산란계를 면역시킨 다음 면역화된 산란계로부터 산란된 알의 난황에서 리스테리아증의 예방 또는 치료에 유용한 항체를 분리하였다.
따라서, 한 가지 관점으로서, 본 발명은 리스테리아 모노사이토제네스 감염에 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 항원으로 사용하여 면역화된 산란계로부터 산란되고 리스테리아증을 예방 및 치료하는데 유용한 항체를 포함한 알을 제공한다.
다른 관점으로서, 본 발명은 리스테리아 모노사이토제네스 감염에 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 항원으로 사용하여 면역화된 산란계로부터 산란된 알의 난황으로부터 분리되고 리스테리아증을 예방 및 치료하는데 유용한 항체를 제공한다.
또 다른 관점으로서, 본 발명은 (a) 리스테리아 모노사이토제네스를 적합한 배지에서 대량 배양하고, (b) 상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고, (c) 회수한 균체를 파쇄시키고 파쇄물로부터 실질적으로 순수한 플라겔라 단백질를 분리 정제하고, (d) 정제된 플라겔라 단백질 또는 균체파쇄액으로 산란계를 면역화시키고, (e) 면역화된 산란계로부터 알을 산란시키는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 포함한 알을 제조하는 방법을 제공한다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 (a) 리스테리아 모노사이토제네스를 적합한 배지에서 대량 배양하고, (b) 상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고, (c) 회수한 균체를 파쇄시키고 파쇄물로부터 실질적으로 순수한 플라겔라 단백질를 분리 정제하고, (d) 정제된 플라겔라 단백질 또는 균체파쇄액으로 산란계를 면역화시키고, (e) 면역화된 산란계로부터 알을 산란시킨 다음, (f) 산란된 알의 난황으로부터 항체를 분리하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 한 가지 양태는 항원으로서 리스테리아 모노사이토제네스 감염에 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질 또는 플라겔라 단백질과 균체파쇄액을 사용하여 면역화된 산란계로부터 산란되고 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 포함한 알을 제공한다.
리스테리아 모노사이토제네스의 세포 내 증식 및 생존은 맥크니스가 전자현미경으로 관찰함으로써 증명되었다. 리스테리아 모노사이토제네스가 장상피와 마크로파지에 침습한 다음 파고솜(phagosome)을 둘러싸고 있는 막이 붕해되고, 뒤이어 세포질 내에서 증식하게 된다. 감염 2시간 내에 액틴 필라멘트가 리스테리아균을 둘러싸며, 극성 꼬리를 형성하게 된다. 상기 극성 꼬리(플라겔라 단백질; flagella)는 세포내 이동과 세포간 전파에 관여하는 것으로 알려져 있다. 비병원성 리스테리아균은 세포내에서 이동하지 못하는 특성이 있다. 대부분의 병원성 세균은 엔도사이토시스(endocytosis)에 의하여 숙주조직에 침습하는 능력이 있다. 소위 파라사이트-다이렉티드 엔도사이토시스(parasite-directed endocytosis)라 불리는 이 현상은 리스테리아 모노사이토제네스가 장상피에 부착하여 장상피와 마크로파지에 침습하는 것과 같은 원리이다. 따라서, 리스테리아의 주요 병원성 인자는 세포내 이동성에 관여하는 극성 꼬리 즉, 플라겔라 단백질이라 할 수 있다.
리스테리아증(Listeriosis)은 리스테리아 모노사이토제네스에 의해서 일어나는 세균감염증으로 인수 공통감염증의 하나이다. 면양, 염소, 소에게 잘 발생하며 돼지, 설치류, 토끼, 조류에도 감염을 일으킨다. 뇌척수막염을 주요증상으로 하며 패혈증을 일으키고 토끼에서는 말초혈 중 단핵구의 증가를 관찰할 수 있다. 사람에게도 수막염이 많고 드물게 패혈증이나 폐렴, 담석증을 나타내기도 한다. 사람에서는 주로 세포성면역결핍 등에 의한 불확실한 감염이 많다. 임신 중에 감염되어 태아에게 수직감염되면 태아패혈증을 일으킨다. 분만 후 약 1 내주 2주 내에 발병한 것은 신생아 리스테리아증이라고 한다.
본 발명에서는 산란계를 면역시키기 위한 항원으로서 리스테리아 모노사이토제네스의 주요 병원성 인자인 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 사용할 수 있다.
플라겔라 단백질은 균체 배양액으로부터 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조할 수 있다. 바람직하게는, 리스테리아 모노사이토제네스를 적합한 배지에서 대량 배양하고, 상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고, 회수한 균체를 파쇄시키고 파쇄물로부터 실질적으로 순수한 플라겔라 단백질을 분리 정제하여 제조할 수 있다.
더욱 바람직하게는, 리스테리아 모노사이토제네스를 트립티케이즈 소이 브로스(Trypticase Soy Broth, Difco)에 접종하고 22℃ 내지 25℃에서 24시간 내지 48시간 배양한다. 배양이 완료되면, 배양액을 4℃에서 5,000×g로 20분간 원심분리하여 균체를 회수한다. 회수한 균체를 완충용액에 재현탁하고 여기에 지름이 0.5 내지 1.0mm인 비드를 넣은 다음 오비탈 교반기에서 150 내지 200rpm으로 1시간 내지 3시간동안 교반시킨 후 10,000 내지 30,000×g로 10 내지 30분간 원심 침전하여 상청액을 회수한다.
상기에서 회수한 상청액으로부터 순수한 플라겔라 단백질의 분리 정제는 다양한 방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는 이온교환 크로마토그래피, 친화칼럼 크로마토그래피, 겔 투과성 크로마토그래피, SDS변성 전기영동법 등의 방법을 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는, SDS변성 전기영동법을 사용한다. 상기와 같은 방법으로 제조된 플라겔라 단백질은 분자량이 약 29kDa 내지 36kDa이다.
본 발명에 따라 제조된 단백질을 항원으로 사용하여 산란계에 면역화시키는 방법은 당 분야의 통상적인 기술에 따라 실시할 수 있다. 본 발명에 이용되는 산란계로는 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 산란율이 높은 백색레그혼계, 로드아일랜드계, 하이라인 브라운계 등을 이용하는 것이 바람직하다. 산란계에 항원 단백질을 투여하는 경로로는 복멤브레인내, 근육내, 안내 또는 피하 주사 등이 포함된다. 본 발명의 항원 단백질은 보조제, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 사용하여 그 면역성을 증가시킬 수 있다.
추가항원접종(booster)은 충분한 항체 역가가 얻어질 때까지 실시할 수 있다. 바람직하게는 약 2주 간격으로 약 3회 면역을 실시하고, 다음 접종은 약 8주 간격으로 실시한다. 면역화된 산란계로부터 알을 수집하고 이로부터 항체를 분리한 다음 유도된 항체의 양을 측정하여 그 증가량이 충분한 상태에 도달하면, 최종적으로 알을 회수한다. 항체값의 측정은 당 분야의 통상적인 방법에 따라 측정할 수 있다. 바람직하게는, 효소면역흡착법 또는 마이크로타이터법을 이용한다. 더욱 바람직하게는, 마이크로플레이트에 부착된 항원 단백질과 본 발명에 따라 면역화된 알의 난황을 반응시킨 다음 알칼린 포스페이트로 희석한 2차 항체를 반응시키고 여기에 기질용액으로 포스페이트 섭스트레이트 타블레트를 가하여 효소작용에 의한 발색반응을 약 405nm의 파장에서 측정함으로써 유도된 단백질을 정량할 수 있는 방법인 효소면역흡착법(Enzyme Linked Immunosorbent Assay: ELISA)을 사용한다.
또한, 본 발명은 리스테리아 모노사이토제네스 감염에 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질 또는 리스테리아 모노사이토제네스의 균체 파쇄액을 항원으로 사용하여 면역화된 산란계로부터 산란된 알의 난황으로부터 분리되고 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 제공한다.
면역화된 알의 난황으로부터 항체의 분리는 난황 중의 난황지질 성분과 고형분을 제거함으로써 획득할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 상기 회수된 알에서 난황을 분리하고, 이를 증류수로 희석한 다음, 희석액의 pH를 4.0 내지 6.0으로 조절한 후 동결시키고, 동결체를 해동시켜 원심분리하며, 형성된 상청액을 여과함으로써 분리할 수 있다. 더욱 바람직하게는 회수된 알에서 난황을 분리하고 증류수를 가하여 5배 내지 15배로 희석한 다음, 희석액의 pH를 약 5.0으로 조절한 후 -10℃ 내지 -30℃에서 약 24시간 이상 동결시키고, 동결체를 실온에서 해동시켜 5,000 내지 15,000×g, 10℃ 내지 20℃에서 20 내지 40분간 원심분리하며, 형성된 상청액을 여과지로 여과하여 분리한다.
본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
리스테리아 모노사이토제네스의 플라겔라 단백질 분리
리스테리아 모노사이토제네스(KCTC3710) 표준균주는 한국유전자 은행으로부터 분양 받아 사용하였다. 리스테리아 모노사이토제네스를 트립티케이즈 소이 브로스(Trypticase Soy Broth, Difco)에 1x107(CFU)/ml가 되도록 접종하고 전체 배양액 부피 4L로 하여 25℃에서 48시간동안 대량으로 배양하였다. 배양이 완료되면, 배양액을 4℃에서 3,000×g로 30분간 원심분리하여 균체를 회수하였다. 회수한 균체를 0.15M PBS(0.02M 포스페이트 완충용액, 0.13M 염화나트륨, pH7.2)에 재현탁하고 0.8mm의 비드를 넣어 오비탈 교반기에서 2시간 교반시켰다. 상기 균체액을 4℃에서 20,000×g로 20분 동안 원심분리하여 상청액을 획득하였다. 상청액을 SDS변성 전기영동하여 플라겔라 단백질을 분리하였다. 그 결과, 분자량이 약 31kDa의 플라겔라 단백질을 획득하였다(도 1).
실시예 2
리스테리아 모노사이토제네스의 플라겔라 단백질을 이용한 산란계의 면역유도
산란계의 면역 유도에 사용된 동물은 산란을 시작한 36주령의 ISA-브라운계의 산란계 15수를 사용하였다. 실시예 1에서 분리한 플라겔라 단백질 200㎍/㎖과 프로인트의 완전 보조제(Freund's complete adjuvant, Sigma Chemical Co.)를 각각 동량 혼합하여 유화시켰다. 상기 유화액 1㎖를 산란계의 흉근에 각각 0.25㎖씩 4곳에 근육 주사하여 1차 접종하였다. 추가항원주입(Booster injection)은 1차 접종 후 2주 간격으로 실시하였으며 면역항원을 프로인트의 불완전 보조제(Freund's incomplete adjuvant, Gibco)로 유화하여 1차 접종과 동일한 방법으로 실시하였다. 난은 매일 회수하여 8℃에 저장하여 실험에 이용하였다.
실시예 3
난황항체의 분리
실시예 2의 면역 접종한 산란계로부터 산란된 알을 채집하여 난황을 분리 한 후 증류수(pH 5.0)로 10배 희석하였다. 희석된 난황용액을 pH 5.0으로 조정 후 -20℃에서 하룻밤 동안 동결하였다. 동결된 난황을 실온에서 해동시킨 후 30분간 15℃에서 원심분리(10,000×g)하여 상청액만 수거하였다. 상청액을 여과지 (Whatman No.1)로 여과하여 난황단백 분획을 분리하였다.
실시예 4
항체 역가의 측정
실시예 3에서 획득한 난황단백 분획을 이용하여 항체형성정도를 효소면역흡착법(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA)과 마이크로타이터법으로 측정하였다. 리스테리아 모노사이토제네스 플라겔라 단백질 1.8㎎/㎖을 5㎍/㎖가 되도록 카르보네이트-바이카르보네이트 완충용액(pH 9.6)으로 희석하여 마이크로플레이트 (MicrotestⅢ flexible Assay plate, Falcon 3991)에 4℃에서 하룻밤 동안 피복하였다. 피복이 완료된 플레이트를 세척용액(0.02M 포스페이트 완충용액, 0.13M NaCl, pH 7.2, 0.05 % 트윈20)으로 3회 세척한 후 5% 탈지유 용액(pH 7.3, Difco)으로 2시간 동안 실온에서 방치하였다. 난황과 혈청은 5% 탈지유 용액과 PBST(PBS containing 0.05% Tween-20)를 동량으로 섞은 희석용액으로 2,000배부터 1,458,000배까지 3배수로 희석한 후 37℃에서 2시간 반응시켰다. 2차 항체는 알칼린 포스페이트로 컨쥬게이티드 어피니퓨어 토끼 항-닭 IgY(IgG)(conjugated AffiniPure rabbit anti-chicken IgY(IgG), Jackson, USA)를 5,000배로 희석하여 37℃에서 2시간 반응시켰다. 기질용액으로는 포스페이트 섭스트레이트 타블레트(Phosphate substrate tablets: ρ-nitrophenyl phosphate, Sigma-104)를 10% 디에탄올아민(0.5 mM MgCl2 pH 9.8를 포함하는 디에탄올아민)에 녹인 용액을 사용하여 15분간 효소반응시켰다. 각 과정 중 플레이트의 세척은 6회씩 실시하였다. 반응억제제는 5M 수산화나트륨을 사용하였으며 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices ;E Max)를 이용하여 405nm에서 항체 역가를 측정하였다.
실험 결과, 도 2에서와 같이 항체 역가의 변화는 2주에 전체적으로 항체 역가가 20,000정도로 유지하였으며 4주 후 두배의 항체 역가를 나타냈고 6주 이후에는 급격히 증가하는 양상을 보였다.
실시예 5
본 발명에 따른 난황항체의 중화 효과
본 발명에 따른 리스테리아 난황항체의 리스테리아균에 대한 중화 효과를 알아보기 위하여, 리스테리아균과 난황항체의 반응정도를 효소면역흡착법(ELISA)을 이용하여 측정하였다. 1×109CFU/㎖농도의 리스테리아균 5㎖을 각각의 멸균된 시험관에 분주한 후, 동결건조된 본 발명에 따른 난황단백 분획을 농도가 각각 ㎖당 0, 1, 2, 4㎎이 되도록 첨가하였다. 이를 37℃에서 2시간 동안 진탕배양(60 rpm/min)한 다음 시료를 1㎖씩 채취하여 60℃에서 30분간 열처리한 후 냉장 보관하여 ELISA실험에 이용하였다.
상기와 같이 전처리가 끝난 난황단백 분획의 항원결합능력을 샌드위치 효소면역흡착법(Sandwich ELISA)으로 측정하였다. 카르보네이트-비카르보네이트 완충용액(C arbonate-bicarbonate buffer, pH 9.6)에 난황항체를 30,000배 희석하여 ELISA용 플레이트(NUNC, Denmark)에 100㎕씩 분주한 후 4℃에서 하룻밤 동안 방치하였다. 플레이트를 꺼내어 PBS-T로 3회 세척한 후 블로킹 완충용액(blocking buffer)을 가하여 2시간 동안 실온에 정치시켰다. 이후 플레이트를 6회 세척하고 상기 전처리한 시료를 100㎕씩 플레이트에 분주하여 37℃에서 2시간 반응시켰다. 2차 항체로는 자체제작한 HRP-콘쥬게이티드 리스테리아 플라겔라 치킨 IgY를 혼합하여 분주하였다. 이를 6회 세척한 후 NaAc용액에 포화된 구연산(saturate citric acid)을 첨가하여 pH를 5.5로 조정하고, 1% H2O2 용액과 N, N, N, N'-테트라메틸벤지딘(Tetramethylbenzidin)을 첨가하여 기질용액을 제조한 다음 상기 ELISA 플레이트에 100㎕씩 분주하였다. 실온에서 20분간 효소와 반응시킨 후 4N H2O4를 첨가하여 반응을 중지시키고 마이크로플레이트 리더(microplate reader, Molecula Devices ; E Max)를 사용하여 450nm에서 흡광도(optical density : O.D.)를 측정하였다.
실험 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 리스테리아 플라겔라에 대한 난황항체는 리스테리아 균 1x109(CFU/ml)을 1x106(CFU/ml)으로 부착 감소시켰다. 이로부터 본 발명의 난황항체가 리스테리아균에 대하여 중화능력이 있음을 확인할 수 있었다.
| 난황단백 분획(㎎/㎖) | CFU/㎖ |
| 0 | 1×109 |
| 1 | 3.83×106 |
| 2 | 2.33×106 |
| 4 | 2.06×106 |
본 발명에 따라 제조된 알은 리스테리아 모노사이토제네스의 중요한 병원성 인자로 작용하는 플라겔라 단백질에 대한 항체를 다량으로 함유하고 있으며, 알의 난황으로부터 분리한 항체는 리스테리아균에 대한 중화효과가 우수하므로 리스테리아증을 효과적으로 예방할 수 있다.
도 1은 리스테리아 모노사이토제네스에서 분리한 플라겔라 단백질의 SDS 변성 전기영동 사진이다(레인 1: 표준 단백질 마커, 레인 2:리스테리아 플라겔라 단백질).
도 2는 본 발명에 따른 난황항체의 항체 역가의 변화를 ELISA로 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
Claims (10)
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- (a) 리스테리아 모노사이토제네스를 적합한 배지에서 대량 배양하고, (b) 상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고, (c) 회수한 균체를 파쇄시키고 파쇄물로부터 실질적으로 순수한 분자량 29kDa 내지 36kDa의 플라겔라 단백질를 분리 정제하고, (d) 상기 정제된 플라겔라 단백질로 산란계를 면역화시키고, (e) 면역화된 산란계로부터 알을 산란시키는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 포함한 알을 제조하는 방법.
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- (a) 리스테리아 모노사이토제네스를 적합한 배지에서 대량 배양하고, (b) 상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고, (c) 회수한 균체를 파쇄시키고 파쇄물로부터 실질적으로 순수한 분자량 29kDa 내지 36kDa의 플라겔라 단백질을 분리 정제하고, (d) 상기 정제된 플라겔라 단백질로 산란계를 면역화시키고, (e) 면역화된 산란계로부터 알을 산란시킨 다음, (f) 산란된 알의 난황으로부터 항체를 분리하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 리스테리아증을 예방 또는 치료하는데 유용한 항체를 제조하는 방법.
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- 제 8항에 있어서, 알의 난황으로부터 항체를 분리하는 단계가 알의 난황을 증류수로 희석하고, 희석된 난황 용액의 pH를 4.0 내지 6.0으로 조절한 후 동결시키고, 동결체를 해동시켜 원심분리하며, 형성된 상청액을 여과하여 분리하는 것으로 구성되는 방법.
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| KR (1) | KR100489615B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20240006895A (ko) | 2022-07-07 | 2024-01-16 | 금오공과대학교 산학협력단 | 항체, 스트렙토마이신 및 키토산올리고당이 결합된 금나노쉘 구조체, 이를 함유하는 약물 내성 리스테리아 모노사이토제너스 감염증의 화학-광열 치료용 조성물 |
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2002
- 2002-01-30 KR KR10-2002-0005278A patent/KR100489615B1/ko not_active IP Right Cessation
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20030067778A (ko) | 2003-08-19 |
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