KR100482841B1

KR100482841B1 - 귤피로부터 분리한 장관면역 활성화능이 있는 다당류, 그제조방법 및 그 용도

Info

Publication number: KR100482841B1
Application number: KR10-2001-0059993A
Authority: KR
Inventors: 홍범식; 양한철; 조홍연; 신동훈; 전우진; 유광원
Original assignee: 학교법인고려중앙학원
Priority date: 2001-09-27
Filing date: 2001-09-27
Publication date: 2005-04-14
Also published as: KR20030028069A

Abstract

본 발명은 귤피로부터 분리한 장관면역 활성화능이 있는 다당류, 그 제조방법 및 그 용도에 관한 것으로, 귤피에 물을 가하여 추출한 다음 메탄올 환류추출하여 비가용 부분만을 수득한 뒤 에탄올 침전시킨 후 한외여과하여 분자량 10만 Da 이상의 고분자 다당류를 분리하고, 상기 다당류를 음이온 교환수지 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피를 하여 제조한 고분자 다당류는 장관면역 활성화능이 높아 면역증강제로써 뛰어난 효과가 있을 뿐만 아니라 항암활성을 가지고 있어, 암환자나 면역저하 환자용의 기능성 식품 및 약학적 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

Description

귤피로부터 분리한 장관면역 활성화능이 있는 다당류, 그 제조방법 및 그 용도{Polysaccaride from the citrus peel having gut immunity activity, the process for preparation thereof and a use thereof}

본 발명은 귤피로부터 분리한 장관면역 활성화능이 있는 다당류, 그 제조방법 및 그 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 귤피의 수추출물로부터 고분자 다당류를 정제하고 이를 유효성분을 하는 함유하는 장관면역 활성제용 조성물 및 항암용 조성물에 관한 것이다.

장관면역은 1차와 2차로 나누어지는 림프조직계 중 2차 림프조직계로 분류되는 생체림프조직의 1/3이상을 차지하는 점막림프기관의 3가지 중에서 장관관련 림프상조직에 속하면서 장관의 점막부위에 존재하고 장관면역계 내 면역글로블린 에이 반응(IgA response)을 비롯하여 생체방어에 대단히 중요한 역할을 담당한다(Bienestock, J. et. al., Immunol., 41, 249∼270(1980)).

장관면역의 주요 역할은 가용성 항원, 세균, 바이러스 등을 세포흡수작용(pinocytosis)이나 식작용(phagocytosis)에 의해 섭취하여 림프세포에 이동시킴으로써 세포의 활성화에 기여한다(Trier, J., Gastroenterol. Clin. North Am., 20, 531∼547(1991)). 이와 같이 활성화된 면역세포 및 이들이 생산하는 림포카인(lymphokine) 등은 장관막 림프절(mesenteric lymph node)을 거치고 흉관을 통해 전신면역이나 조혈계 세포에 영향을 주게 된다. 따라서 페이어스 패치(Peyer's patch)를 포함한 장관면역체계는 장관의 방어기작(defense system)에 기여할 뿐만 아니라 기관계 염증(systemic inflammation)을 조절하여 결과적으로 알레르기 반응(allergic reaction), 자가면역 결핍증(autoimmune diseases)등을 효과적으로 억제할 수 있는 것이다(Mowat, A.M. et. al., Immunol. rev., 156, 145∼166(1997)).

그리고 장관면역 활성화능과 항암과의 관계에 대한 정확한 기작이 규명되어 있지는 않으나 최근 페놀류 중의 하나인 커큐민(curcumin)을 대장암 유발 쥐에 투여시 장관면역능의 조절에 의하여 암을 억제할 수 있다는 연구가 보고(Churchill, M., et. al., J. Surgical Res., 89,169∼175(2000))된 바 있어 장관면역을 활성화하는 물질은 항암활성도 있는 것으로 추정되고 있다.

한편, 천연물에서의 장관면역 활성화 물질들에 대한 탐색이 활발히 진행되고 있는데, 그 중 한약재가 대부분인 전통차 및 죽류용 식물들은 저분자 및 고분자 물질들을 모두 포함하고 있다. 예컨대 감귤류의 과피에 펙틴이 다량분포하고 있는 것으로 보고되고 있는데, 펙틴은 그 구조적 특성으로 인해 인체 내에서 다이옥신 등의 유해물질 제거, 대장암 예방효과(Sandberg, A.S.. et. al., Hum. Nutr. Clin. Nutr., 37, 171∼183(1983)), 전립선암 억제 효과(Pienta, K. J., et. al., J. Natl Cancer Inst., 87, 348∼353(1995)) 및 항콜레스테롤( Fernandez M.L., et.al., Plant. Physiol., 104 , 699∼710(1994)) 등의 작용을 하는 것을 알려져 있다.

또한 감귤류의 과피에는 리모넨(limonene), 나린진(naringin), 헤스페리딘(hesperidin)등의 플라보노이드 글리코시드(flavonoid glycoside) 또한 다량 존재한다(Sreenath, H.K., et. al., J. Ferm. Bioeng., 80, 190∼194(1995)). 상기 리모넨(limonene)은 암세포 자살인자-알파(Tumor Necrosis Factor-α)와 인터류킨-1(Interleukin-1) 생성능(Tanaka, T., et. al.,Carcinogenesis, 20, 1471∼1476(1999)) 및 항암작용(Wattenberg, L.W., et. al., Carcinogenesis, 12,115∼117(1991))이 있는 것으로 보고되고 있으며, 상기 나린진(naringin) 및 헤스페리딘(hesperidin)등의 바이오플라보노이드(bioflavonoid)에는 항염증, 항콜레스테롤(Monforte, M.T., et.al., Pharmacol., 50 , 595∼599(1995)) 및 항산화(Tanizawa, H., et. al., Chem. Pharm. Bull., 40,1940∼1942(1992)) 등의 기능을 지닌 것으로 알려져 있다.

본 발명자들은 천연물에서 장관면역 활성화 기능이 있는 물질을 탐색하던 중, 귤피 수출물에서 분리된 다당류가 장관면역 활성화 기능이 있음을 처음으로 밝혀 내어 본 발명을 완성하였다.

상기 장관면역 활성화능이 있는 다당류는 인체에서 면역계의 한부분으로 작용하는 장관면역을 활성화시키는 능력을 가지는 것이다. 따라서 장관면역 활성화능을 가지는 다당류는 항암 및 면역증강제로 기능성 식품 및 보조요법제의 소재로 사용될 수 있다.

따라서 본 발명의 목적은 귤피에서 장관면역 활성능이 있는 다당류를 추출, 정제하는 제조방법을 제공함에 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 귤피에서 분리된 다당류를 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 장관면역 활성제용 조성물 및 항암용 조성물로성의 용도를 제공함에 있다.

본 발명의 상기 목적은 귤피에 물을 가하여 추출한 다음 메탄올 환류추출하여 비가용 부분만을 수득한 뒤 에탄올 침전시킨 후 한외여과로 분자량 10만 Da 이상의 고분자 물질을 수득하고, 상기 물질을 증류수에 용해한 후 이를 증류수로 평형화된 음이온 교환수지 크로마토그래피에 주입하고 0.2 몰농도 화나트륨 용액으로 용출, 분획하여 활성획분을 수득한 다음 상기 활성획분을 겔 여과 크로마토그래피를 이용하여 고분자 다당류를 정제하고, 상기 정제된 고분자 다당류의 장관면역 활성 및 고형암 억제능을 확인함으로써 완성하였다.

이하, 본 발명의 구성 및 작용을 설명한다.

본 발명은 귤피의 냉수추출물에 포함된 활성 다당류를 분리하고자 각기 다른 분자량을 갖는 한외여과막을 이용하여 분리한 결과 10만 이상의 분자량을 갖는 분획에서 높은 장관면역활성을 확인하여, 활성본체가 고분자 다당류임을 확인하였다.

상기의 고분자 다당류를 정제하기 위해서 10만 이상의 분자량을 갖는 획분을 증류수에 용해한 후 음이온 교환수지 크로마토그래피에 주입하였다. 0.2 몰농도 염화나트륨 용액에서 장관면역 활성화능을 갖는 다당류가 용출되었음을 확인하고, 상기 분획을 분자량 100만Da 이하 물질의 분리능을 갖는 수지를 선택하여 겔 여과 크로마토그피를 실시한 결과 분리 정제된 다당류는 분자량이 18만Da 정도인 고분자 다당류로 확인되었다.

따라서 본 발명 귤피 수추출물로 분리한 다당류의 분자량은 10 내지 100만 Da이고, 바람직하게는 10만 내지 20만 Da이며, 더욱 바람직하게는 18만 Da이다.

한편, 귤피 수추출물을 한외여과하여 얻은 분자량 10만 Da이상의 고분자 물질이 Sarcoma-180 고형암 모델을 이용하여 항암효과를 분석한 결과 고형암을 저지하는 효과가 있음이 확인되었다.

상기와 같이 귤피에서 분리된 고분자 다당류는 장관면역 활성화능을 가지고 있으며, 고형암을 억제하는 효과도 있어, 면역증강제 또는 항암제로서 기능성 식품 및 보조요법제의 소재로 사용될 수 있다. 현재까지 연구된 독성시험 결과, 감귤류 과피 추출액은 1000 mg/kg의 용량으로 쥐에게 경구투여 하였을 때 독성이 거의 없는 것으로 밝혀졌다. 또한 감귤류 과피 추출액은 간을 비롯한 장기의 기능에 어떠한 부작용도 나타내지 않는 것으로 보고되고 있다.

본 발명에 따라 제조된 귤피 수추출액에서 분리된 다당류는 통상적인 방법에 의하여 정제, 캅셀제, 과립제, 현탁제, 유제와 같은 단위투여형 또는 수회투여형 제제로 제형화하여 장관면역 활성제용 조성물 또는 항암용 조성물로 사용할 수 있다.

또한 상기 다당류를 유효성분으로 함유하는 조성물은 목적하는 바에 따라 하루에 성인 체중 60kg을 기준으로 100 내지 3000mg으로 수회 나누어 또는 일회에 투여할 수 있다.

이하, 실시 예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 국한되지 않는다는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시 예 1: 귤피로부터 장관면역 활성화능이 있는 다당류의 제조

1단계 : 굴피의 수출물을 획득하는 단계

본 연구에 사용된 귤피는 제주산 온주밀감의 껍질로서, ㈜한국신과학기술센타에서 공급받아 건조 후 사용하였다. 건조 귤피 1 kg에 대해 20배 부피의 증류수(20 ℓ)를 첨가하고 분쇄, 교반한 후 7000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 상등액과 잔사로 분리하였다. 상등액을 동결 건조 후 메탄올로 1시간씩 3회 환류하고 원심 분리하여 메탄올 가용 획분과 비가용 획분으로 분리하였다. 비가용 획분은 다시 증류수에 녹이고 4배 부피의 에탄올을 가하여 다시 상등액과 침전물로 나누어 에탄올 비가용부분인 침전물만을 취하여 투석, 농축 및 동결 건조 과정을 거쳐 조다당 획분을 조제하였다.

2단계 : 한외여과 및 이온교환 크로마토 그래피에 의한 다당류의 정제단계

상기 1단계에서 조제된 조다당 획분을 증류수에 녹여 한외여과(cut-off size; 10 만 Da, Viskase Sales 사, 일본)로 분자량 10만 이상의 고분자 물질(이하 한외여과로 분리된 분획을 'CUI-3'이라 한다.)을 얻어 증류수에 용해한 후 이를 증류수로 평형화된 음이온 교환수지 크로마토그래피(DEAE-Sepharose FF column, Cl^- form, 4.0 × 30 cm)에 습윤겔 3 ㎖당 1 ㎎의 농도로 주입하고 증류수, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1.0, 2.0 몰농도 염화나트륨 용액을 분당 3.0 ㎖의 유속으로 각 분획당 8 ㎖씩 각각 용출하였다. 용출된 각 분획들중 증류수로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅰ', 0.1M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱa', 0.2M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱb', 0.3M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱc', 0.4M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱd', 0.5M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱe', 1M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱf', 2M NaCl으로 용출된 분획은 'CUI-3Ⅱg'이라고 명명하였다. 상기 각 분획에 대하여 총당, 산성당 및 단백질 함량을 각각 갈락토오스, 갈락투론산, 소 혈청 단백질을 표준물질로 하여 페놀-황산법, 하이드록시페닐법, 로리법으로 각각 정량하여 그 결과를 도1에 나타내었다.

도 1에 도시된 바와 같이 CUI-3Ⅱb의 활성이 가장 높은 것으로 나타났다.

3단계 : 겔 여과 크로마토그래피에 의한 다당류의 정제단계

상기 2단계의 도 1에 도시된 바와 같이, 활성이 가장 높은 것으로 나타난 CUI-3Ⅱb 분획을 투석, 감압농축, 동결건조한 후 0.2 몰농도 염화나트륨 용액으로 평형화된 겔 여과 크로마토그래피(Sepharose CL-6B) 컬럼(2.5 × 85 cm)에 습윤겔 3 ㎖당 0.1 ㎎의 농도로 주입하고 0.2 몰농도 염화나트륨 용액을 분당 0.2 ㎖의 유속으로 각 분획당 3 ㎖씩 용출하였다.

실시예 2 : 귤피 수출물을 이온교환크로마토 그래피로 분리한 다당류의 장관면역 활성화능 측정

상기 실시예 1에서 제조된 귤피 수출물로부터의 분리된 다당류의 장관면역 활성화능 유무를 확인하기 위한 장관면역 활성촉진 성분의 검색은 장관면역계를 구성하는 장관 페이어스 패치로부터 얻은 세포를 활성화하여 골수세포 증식인자의 생산을 촉진하는 정도로써 측정하였는데 그 방법은 다음과 같다. 즉 장관면역 활성은 지다당류 비 의존성인 C3H/HeJ 쥐(5주령, (주)대한실험동물센타)의 소장을 채취하여 소장벽 상의 페이어스 패치를 잘라 RPMI-1640 배지(Gibco 사, 미국)가 담겨져 있는 페트리 디쉬(petri dish)에 옮기고 금속체(100 mesh)를 이용하여 마쇄함으로써 페이어스 패치로부터 세포를 방출시켰다. 이 액을 금속체(200 mesh)를 사용하여 여과하고 상기 배지로 세 번 세정한 후 세포농도를 2×10⁶세포/㎖로 조정하여 200㎕씩을 96-웰 플레이트(well plate)에 분주한 다음 여기에 귤피 수추출물로부터 분리한 다당류 시료를 1 ㎎/㎖ 농도로 20 ㎕씩 첨가하고 배양기(37℃, 5% 이산화탄소)에서 5일간 배양하여 얻은 상등액을 골수세포 증식활성 측정용 세포배양액으로 사용하였다. 대조구의 경우 시료대신에 0.9% 염화나트륨 용액을 사용하였다. 동일 쥐의 정강이뼈로부터 주사기로 RPMI-1640 배지를 뼈 속으로 주입하면서 골수세포를 시험관에 받은 후 상기와 같이 여과, 세정하고 2.5×10⁵세포/㎖로 조정하였다. 골수세포의 증식도 측정은 알라마 블루(Alamar Blue) 환원측정법을 사용하였다. 조정된 골수세포액 100 ㎕, RPMI-1640 배지 50 ㎕, 골수세포 증식활성 측정용 페이어스 패치 세포배양액 50 ㎕를 96-웰 플레이트에 각각 분주한 후 배양기(37℃, 5% 이산화탄소)에서 6일간 배양하였다(Page, B., et. al., A new fluormetric assay for cytotoxicity measurements in vitro. Int. J. Oncol., 3, 473∼476(1993)). 배양 종료 12시간 전에 알라마 블루 용액 20 ㎕를 첨가한 다음 형광세기를 들뜸 파장 544 nm와 방출 파장 590 nm에서 측정, 엘라이저 리더(ELISA reader)로 수치화 하였다. 시료의 장관면역활성 촉진활성은 대조구와의 차이로부터 골수세포의 증식도를 정량함으로써 장관면역 활성도를 측정하였다.

상기 실시예 1의 CUI-3, CUI-3Ⅰ, CUI-3Ⅱa, CUI-3Ⅱb, CT-3Ⅱc 획분의 장관면역 활성도를 상기와 같은 방법으로 측정한 결과는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다. 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 0.2 몰농도 염화나트륨 용액에서 용출된 획분(CUI-3Ⅱb)이 1 ㎎/㎖의 농도에서 대조구에 비하여 1.5배의 활성과 35.3%의 수율을 나타내어 장관면역 활성도가 가장 높은 것으로 나타났다.

본 발명 귤피 수추출물의 한외여과 및 이온교환수지의 크로마토그래피 획분의 장관면역 활성도와 수율

	장관면역 활성도^*	수율(%)
CUI-3(한외여과한 분획)	1.2	2.9
CUI-3Ⅰ(증류수)	1.3	3.3
CUI-3Ⅱa(0.1M NaCl)	1.2	7.3
CUI-3Ⅱb(0.2M NaCl)	1.5	35.3
CUI-3Ⅱc(0.3M NaCl)	1.1	1.6
* : 대조구의 활성도를 1로 하여 나타낸 수치(단위 : 배)

실시예 3 : 귤피 수출물을 겔크로마토그래피로 분리한 다당류의 장관면역 활성화능 측정

상기 실시예 1의 획분중 가장 활성이 높은 CUI-3Ⅱb획분에 대하여 겔 여과 크로마토그래피를 실시하여 분리된 세 획분을 'CUI-3Ⅱb-1', 'CUI-3Ⅱb-2', 'CUI-3Ⅱb-3'이라 명명하고, 상기 실시예 2의 방법과 동일하게 장관면역 활성화능을 측정하였다.

측정결과, 하기 표 2에 나타낸 바와 같이 세가지 분획중 중 CUI-3Ⅱb-3이 1 ㎎/㎖의 농도에서 대조구에 비하여 2.5배의 활성과 14.7%의 수율을 나타내었다.

본 발명 귤피 수추출물을 겔여과 크로마토그래피 획분의 장관면역 활성도와 수율

	장관면역 활성도^*	수율(%)
CUI-3Ⅱb-1	1.3	2.4
CUI-3Ⅱb-2	2.0	7.4
CUI-3Ⅱb-3	2.5	14.7
* : 대조구의 활성도를 1로 하여 나타낸 수치(단위 : 배)

실시 예 4: 귤피 수출물에서 분리한 장관면역 활성화능이 있는 다당류의 특성

귤피의 수출물로 분리된 고분자획분 중 활성이 가장 높았던 상기 실시예 3의 CUI-3Ⅱb-3의 분자량과 당조성 및 당쇄결합을 다음과 같이 측정하였다.

실험예 1 : CUI-3Ⅱb-3의 분자량 측정

CUI-3Ⅱb-3의 분자량을 측정하기 위하여 표준물질로 덱스트란 T-2000(분자량: 2 ×10⁶), T-500(분자량: 5 ×10⁵), T-70(분자량: 7 ×10⁴), T-10(분자량: 1 ×10⁴) 그리고 갈락토오스를 사용하여 고속액상 크로마토그래피(Waters model 2690; Shodex OHpak KB-805 (0.8 × 30 cm)컬럼 과 refractive index detector 부착)를 실시한 결과 18만 Da인 것으로 확인되었다.

실험예 2 : CUI-3Ⅱb-3의 당조성 및 당쇄결합

2.0 M trifluoroacetic acid(TFA)로 121℃에서 1.5시간 동안 시료(500 ㎍)를 가수 분해시킨 후 NaBH₄를 이용하여 중성당을 알디톨(alditol)로 환원시킨 후, 에탄올을 흡착시킨 Sep-pak C₁₈ 카트리지(cartridge)로 메틸화된 시료를 회수하였다. 메틸화 다당 중에서 산성당은 THF에 용해되어 있는 LiB(C₂H₅)3D (Super-Deutride, 1 ㎖, 상온, 1시간)로 환원시킨 후, 다시 Sep-pak C₁₈카트리지(cartridge)로 회수하였다. 이를 1.0 M TFA로 121℃에서 2시간동안 가수 분해한 후에 NaBD₄로 환원시켜 아세틸화 반응을 수행한다. 부분적으로 메틸화된 알디톨 아세테이트(alditol acetate)는 GC-MS로 분석하였다. 메틸화된 알디톨 아세테이트들은 프래그먼트 이온(fragment ion)과 상대적인 보유 시간(relative retention time)으로 확인하였고, 피크는 피크 면적과 프레임 이온니제이션 디텍터(flame ionization detector(FID))의 반응 팩터(response factor)로 측정하여 그 결과를 표3에 나타내었다. 하기 표3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 의한 장관면역 활성이 있는 다당류 CUI-3Ⅱb-3는 펙틴성 다당류(pectic polysaccharide)의 전형적인 형태이었다.

본 발명 귤피 수추출무로부터 분리된 CUI-3Ⅱb-3의 당조성 및 당쇄결합

당 잔기	메틸기 위치	당쇄 결합	몰농도(%)
아라비노오스	2,3	4 or 5	10.42
크실로오스	2,3.4	말단기	1.65
람노오스	2,3	4	2.38
	2,4	3	2.05
푸코오스	2,4	3	1.57
만노오스	2,3,6	4	0.69
	3,4,6	2	3.02
갈락토오스	2,3,4,6	말단기	18.56
	3,4	2	4.75
	2,4,6	3	4.12
	3,6	2,4	2.27
글루코오스	2,3,4	6	16.16
	2,3,6	4	1.6
	3,4,6	2	1.12
	3,4	2,6	0.9
갈락투론산	2,3	4	22.29
	2	3,4	5.36
글루쿠론산	3,4	2	1.09

실시예 5 : 귤피 수출물로부터 분리된 다당류의 항암활성 측정

상기 실시예 1에서 제조된 높은 장관면역 활성을 나타낸'CUI-3'의 항암활성은 한국세포주은행으로부터 분양받은 사코마(Sarcoma)-180 고형암 모델을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 즉 귤피의 수출물을 한외여과한 분획(CUI-3)을 0(식염수), 5, 10, 50, 100 mg/kg의 농도로 식염수에 용해하였으며, C3H/HeJ 쥐(5주령, (주)대한실험동물센타)의 복강에서 2주일 간격으로 이식하여 보존하고 있는 사코마(sarcoma)-180 세포(한국세포주은행)를 이용하였으며 쥐 복강 내에서 2주일 간 배양한 사코마(sarcoma)-180 세포를 복수와 함께 취하여 분리해 낸 후 빙냉하에서 주사용 생리 식염수로 수회 세척하여 적혈구를 분리 제거한 후 세포수가 3 ×10⁶ cells/㎖가 되도록 조정하여 마리 당 0.1 ㎖씩 오른쪽 서혜부에 피하 이식하고 24시간 후부터 시료를 10 ㎎/㎏씩 1일 1회 10일간 복강 투여하여 측정하였다. 증식 저지율은 하기식(Ⅰ)에 나타낸 바와 같이, 생리식염수를 투여한 대조군과 비교하여 고형암 증식 저지 백분율(percent of inhibition ratio: I.R, %)로 계산하였다.

C_w : 대조군의 종양 무게

T_w: 시료 처치군의 종양 무게

실험결과 도 2에 나타낸 바와 같이, Sarcoma-180 모델을 이용하여 항암 효과를 분석한 결과 10 ㎎/㎏의 용량에서도 70% 이상의 저지 효과를 나타내었다.

상기 실시예와 실험예에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 귤피 수추출물로부터 분리한 고분자 다당류는 장관면역을 활성화시킬 뿐 만 아니라 항암효과를 가지고 있어 암환자 또는 면역저하 환자의 식이 및 기능성 식품 또는 약학적 조성물로서 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 본 발명 귤피 수추출물을 한외여과하여 얻은 획분(CUI-3)을 음이온 교환수지 크로마토그래피한 결과를 나타나 것이다.

도 2는 본 발명 귤피 수추출물을 한외여과하여 얻은 획분(CUI-3)의 Sarcoma-180 고형암 모델에서의 저지율을 측정한 결과이다.

Claims

귤피의 수추출액으로부터 분리된 분자량 10만Da 이상의 고분자 다당류를 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 장관면역 활성제용 조성물.
귤피의 수추출액으로부터 분리된 분자량 10만Da 이상의 고분자 다당류를 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 고형암 치료용 조성물.
a) 귤피에 물을 가하여 추출한 다음 메탄올로 환류추출하여 비가용획분만을 취하여, 이를 다시 물로 녹이고 에탄올에 침전시켜 침전물만을 취하여 조다당을 수득하는 공정;

b) 상기에서 수득한 조다당을 한외여과를 통해서 분자량 10만 이상의 고분자 다당류를 수득하는 공정;

c) 상기에서 수득한 고분자 다당을 음이온 교환수지컬럼에 주입한 다음 0.2 몰농도 염화나트륨 용액으로 용출하여 활성획분을 수득하는 공정; 및

d) 상기에서 수득된 활성획분을 분자량 1만 ∼ 100만의 물질 분리능을 갖는 겔 여과 크로마토그래피를 통해서 분리하는 공정을 포함하는 귤피의 수추출물로부터 장관면역 활성 및 항암활성이 있는 다당류 제조방법.