KR100461585B1 - 데커신 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항암제인 데커신 유도체인 데커시놀 티글레이트에 관한 것으로, 데커신의 전구체인 데커시놀에 안젤레이트의 입체이성질체인 티클레이트를 붙임으로서 합성된 데커시놀 티클레이트에 관한 것이며, 본 발명의 데커신 유도체는 K562 세포주에 대해서 세포독성이 적고, 포볼에스터에 의한 K562 세포주의 분화를 억제하는 뛰어난 효과가 있다.

Description

데커신 유도체{Decursin Derivatives}

본 발명은 데커신 유도체에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 항암제인 데커신의 구조적 이성질체인 데커시놀 안젤레이트의 곁가지의 입체이성질체인 티글레이트를 데커시놀에 붙임으로서 합성된 데커시놀 티글레이트에 관한 것이다.

데커신은 바디나물에서 처음으로 분리된 후, 한국산 기름나물의 과실에서도분리된 바가 있다. 피라노쿠마린 계열의 데커신은 암세포에 대해서는 강한 치사작용을 나타내는 반면, 정상세포에 대해서는 암세포에 대한 치사작용에 비해 휠씬 낮은 치사작용을 나타내어 항암제로서 높은 사용 가능성을 가지고 있다.

이러한 데커신의 활용을 위해서 본 발명자들은 기존의 생약으로부터 분리하여 데커신을 얻는 방법대신 화학 합성방법을 이용하여 데커신을 제조할 수 있는 데커신 전합성 과정에 대하여 특허출원 제2000-35749호(2000년 6월 27일)에 개시 하였다.

본 발명은 상기 데커신의 전구체인 데커시놀에 안젤레이트의 입체이성질체인 티클레이트를 붙임으로서 데커시놀 티클레이트라고 하는 새로운 데커신 유도체를 합성하고, 데커신 티글레이트의 세포독성과 피케이씨에 대한 포볼에스터와의 경쟁적 결합을 조사하여 항암활성을 확인함으로써 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 항암제인 신규한 데커신 유도체를 제공하는데 있다.

본 발명의 상기 목적은 데커신의 전구체인 데커시놀에 티글레이트를 붙임으로써 합성된 데커시놀 티글레이트를 제공하고, 데커신 티글레이트의 세포독성과 피케이씨에 대한 포볼에스터와의 경쟁적 결합을 조사하여 항암활성을 확인함으로써 달성하였다.

이하, 본 발명의 구성 및 작용을 설명한다.

도 1은 본 발명 데커시놀 티클레이트를 합성하는 과정을 도시한 그림이다.

도 2는 본 발명 데커시놀 티클레이트의 K562 세포주에서의 세포독성을 나타낸 그래프이다.

도 3는 본 발명 데커시놀 티클레이트에 의한 K562 세포주에서의 활성산소 발생을 나타낸 그래프이다.

도 4는 본 발명 데케시놀 티클레이트에 의한 K562 세포주의 분화억제를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 데커신 유도체인 데커시놀 티글레이트에 관한 것이다.

하기 화학식 1로 내타내어지는 데커신은 하기 화학식 2로 나타내어지는 데커시놀 안젤레이트라고 하는 구조적 이성질체를 가지고 있다. 본 발명에서 상기 데커시놀 안젤레이트의 곁가지인 안젤레이트의 입체이성질체인 티글레이트를 데커시놀에 붙임으로서 하기 화학식 3으로 나타내어지는 데커시놀 티글레이트라고 하는 새로운 데커신의 유도체를 합성하였다.

상기 데커시놀 티글레이트의 곁가지인 티글레이트는 데커시놀 안젤레이트의 곁가지인 안젤레이트의 입체이성질체로서 안젤레이트에 비해서 안정된 구조로 알려져 있다. 또한 안젤레이트의 가격이 티글레이트에 비해서 상당히 고가로 알려져 있다.

본발명의 실시예에서 사용된 K562 세포주는 인간 적백혈병 세포주(Human Erythroleukemia) 또는 인간 만성골수성 백혈병 세포주(Human Chronic Myelogenous Leukemia,CML)라고 하며, PKC Activator인 Phorbol Ester에 의해서 거핵세포(Megakaryocyte)로 분화된다.

이하, 본 발명의 구체적인 구성 및 작용을 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 데카신 유도체의 합성

도 1은 데커시놀에서 데커시놀 티글레이트를 합성하는 과정을 도시한 것이다. 도 1에 도시된 바와 같이, 메틸렌클로라이드(MC) 150 mL에 데커시놀(0.4 g, 1.624 mmol)을 녹인 용액을 교반하면서 티글릭엑시드(tigllic acid, 0.325 g, 3.248 mmol), 1,3-다이싸이클로헥실 카보다이아마이드(1,3-dicyclohexyl carbodiimide, DCC) 0.704g(3.410mmol), 그리고 4-다이메틸아미노피리딘 (4-dimethylaminopyridine, 4-DMAP) 043 g(0.325 mmol)를 첨가하고 질소가스 하에 상온에서 24시간 반응시킨다. 침전물인 다이싸이클로헥실우레아(dicyclohexylurea)를 에틸아세테이트로 세척하며 감압 여과시키고, 감압 농축 시킨후 에틸아세테이트로 녹여 다시 우레아를 걸러내는 것을 한두 번 반복하고, 물로 세척하고, 에틸아세테이트로 추출하고 무수 황산마그네슘으로 탈수하여 감압 농축시킨다. 농축물을 에틸아세테이트와 헥산의 혼합용매에서 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 데커시놀 티글레이트 (0.472 g, 수득율 88.6%)를 얻는다.

실시예 2: K562 세포주에서의 세포독성 조사

K562 세포주를 10% 우태아혈청이 포함되어 있는 RPMI 1640 배지(Gibco BRL)에서 배양한 후, 12-웰 플레이트에 10⁵세포의 농도로 분주하였다. 각 웰에 데커신 (DEC), 데커시놀 안젤레이트 (DEA), 그리고 데커시놀 티글레이트 (DET)를 50 μM의 농도로 처리하고 72시간 동안 24시간 간격으로 생존세포수를 측정하였다. 생존세포는 트립판블루를 이용하여 확인하였으며 해마사이토미터를 이용하여 세포수를 확인하였다. 상기 실험을 3번 반복하여 얻은 값을 평균하여 도 2에 나타내었다.

K562 세포주에서 조사한 세포독성은 본 발명에 의한 데커시놀 티글레이트는 데커신보다는 높고 데커시놀 안젤레이트보다는 낮은 세포독성을 보였다. 이는 데커신의 곁가지에 따라서 세포독성의 변화가 생기며, 다양한 유도체의 개발이 요구됨을 시사하는 것이다.

실시예 3 : K562 세포주에서의 활성산소 생성 조사

K562 세포주를 10% 우태아혈청이 포함되어 있는 RPMI 1640 배지(Gibco BRL)에서 배양한 후, 12-웰 플레이트에 10⁵세포의 농도로 분주하였다. 각 웰에 활성산소에 특이적으로 결합하는 디씨에프-디에이를 30 μM의 농도로 넣은 후, 30분간 전 배양한다. 각 웰에 데커신 (DEC), 데커시놀 안젤레이트 (DEA), 그리고 데커시놀 티글레이트 (DET)를 50 μM의 농도로 처리하고 30분간 배양한다. 세포를 원심분리하여 획득한 후, 피비에스로 3회 세척한다. 세포를 피비에스로 현탁하여 형광의 정도를 팩스(FACS, fluorescence activated cell sorter)로 측정한다. 도 3의 결과는 1 mM의 과산화수소수가 생성하는 활성산소의 양을 100으로 하였을 때, 데커신 (DEC), 데커시놀 안젤레이트 (DEA), 그리고 데커시놀 티글레이트 (DET)가 생성하는 과산화수소수의 양을 %로 나타내었다.

상기 세포독성의 매개체로 예상이 되는 활성산소의 생성을 K562 세포주에서 조사한 결과, 도 3에 도시한 바와 같이 세포독성과 같은 양상의 결과를 보였다. 상기 도 2와 도 3의 결과를 바탕으로 했을 때, 데커신 유도체의 세포독성은 데커시놀 안젤레이트 > 데커시놀 티글레이트 > 데커신 의 순임을 알수 있었다

실시예 4: 피엠에이에 의해 유도되는 K562 세포주의 분화 억제 조사

K562 세포주를 10% 우태아혈청이 포함되어 있는 RPMI 1640 배지(Gibco BRL)에서 배양한 후, 6-웰 플레이트에 10⁶세포의 농도로 분주하였다. 각 웰에 10 nM의피엠에이와 50 μM의 유도체를 넣은 후, 37℃, 5% 이산화탄소의 조건에서 배양하였다. 3일 후, 부착세포와 부양세포의 수를 측정하였다. 10 nM 피엠에이에 의해서 유도되는 K562 세포의 부착율을 100으로 하여 데커신 (DEC), 데커시놀 안젤레이트 (DEA), 그리고 데커시놀 티글레이트 (DET)의 분화 저해를 측정하여, 3번의 반복실험에서 나온 결과를 평균을 내어 도 4에 나타내었다.

K562 세포주는 피케이씨 엑티베이터인 포볼에스터에 의해서 분화가 유도되며, 이는 K562 세포가 배양기 바닥에 부착되는 현상으로 확인할 수 있다. 도 4에 도시한 바와 같이, 데커신 유도체에 의한 분화억제는 데커신 > 데커시놀 티글레이트 > 데커시놀 안젤레이트의 순으로 나타났다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 데커신 유도체인 데커시놀 티글레이트는 인간 백혈병 세포주인 K562 세포주에 대하여 세포독성이 적고, 포볼에스터에 의한 K562 세포주의 분화를 억제하는 효과가 있으며, 가격이 저렴하므로 의약산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (1)

1. 하기 화학식 3에 의하여 표시되는 것을 특징으로 하는 데커신 유도체.

   [화학식 3]