KR100395206B1 - 초고속 간암,대장암,전립선암 동시진단용 스트립 및그제조방법 - Google Patents

초고속 간암,대장암,전립선암 동시진단용 스트립 및그제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 간암, 대장암 및 전립선암을 동시에 신속하게 진단할 수 있는 진단 스트립 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 면역크로마토그래피(Immunochromatography)법을 이용하여 간암, 대장암, 전립선암을 육안으로 간단하고 신속하게 진단할 수 있는 진단 스트립에 관한 것으로서, AFP, CEA, PSA에 대한 항체를 정해진 위치에 흡착시키고 골드입자에 각각에 대한 항체를 접합시켜 패드에 건조시킨 다음, 건조된 골드패드와 검체를 적용하는 패드를 중첩하여 제조하는 것을 특징으로 한다.

Description

초고속 간암, 대장암, 전립선암 동시진단용 스트립 및 그 제조방법{High-Speed Simultaneous Diagnosis Strip for Cancer of Liver, Colon and Prostate Gland and Manufacturing Method thereof}
본 발명은 간암, 대장암 및 전립선암을 동시에 신속하게 진단할 수 있는 진단 스트립 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 면역크로마토그래피(Immunochromatography)법을 이용하여 간암, 대장암, 전립선암을 육안으로 간단하고 신속하게 진단할 수 있는 진단 스트립에 관한 것이다.
AFP(alpha-fetoprotein)은 태아성 혈청 단백질로서 태아의 간에서 합성되며 성인의 간 세포에서는 합성되지 않는다. 그러나 간세포가 암으로 진행되면 다시 합성을 개시하며 원발성 간암의 90%에서 양성율을 보인다. 간경화인 경우 낮은 수치의 양성 반응을 보이며 기타 난소나 고환의 태아성 암일 때도 양성반응을 보인다.
CEA(carcinoembryonic antigen)는 소화기암의 특이 항원으로 존재하며, 태생기 2-6개월 태아의 소화기 조직 중에 존재하는 항원으로 출생 후 소실되어 버리는 태아성 항원이다. CEA는 대장암의 특이적 검사 지표일 뿐만 아니라 췌장암(60-80%), 위암(40-60%), 폐암(40-50%) 등 여러 종양에서도 증가되는 범용 종양표지 물질이라고 할 수 있다. 특히 대장암에서는 전이된 종양일 때 80-90%의 높은 양성 수치를 나타내며 대장벽에 국한된 종양일 때는 20-40% 양성을 나타낸다.
PSA(prostate specific antigen)는 분자량이 43,000으로 전립선 표피에서 높은 수준으로 발현되는 세린 단백질 분해효소이다. 매우 적은 양의 PSA가 건강한 남자의 혈청에서 발견되기도 하나 악성 전립선 조직, 전립선암 등에서 그 양이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 PSA의 혈청 농도가 증가되면 양성 전립선 비후증, 전립선암과 같은 전립선의 질병의 발생을 표시한다.
AFP, CEA, PSA를 혈청에서 측정하는 방법은 방사성 동위원소를 이용한 RIA법이나 효소를 이용한 EIA법이 널리 사용되어 각각 별개로 사용되어 왔다. 그러나, 이러한 검사법은 특별히 고안된 검사용 장비가 필요하고 검사 시간이 오래 걸려 간편한 검사법이 절실히 요구되어 왔다. 더구나 3가지 항목을 동시에 진단 할 수 없어 개별 검사를 실시해야 하는 불편한 점이 있었다.
본 발명의 목적은 간암, 대장암, 전립선암에서 특이적으로 검출되는 지표물질을 면역학적 방법으로 동시에 신속하게 검출하여 확인할 수 있는 진단 스트립을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 간암, 대장암, 전립선암을 특별한 장비 없이도 의료기관은 물론 가정에서도 간단하게 진단할 수 있는 진단 스트립 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.
도 1은 본 발명에 따르는 진단 스트립의 일 실시예를 촬영한 사진.
도 2는 본 발명에 따르는 진단 스트립을 내장한 진단 장치의 일 실시예를 촬영한 사진.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에서는 검사결과를 짧게는 약 3분내에 확인할 수 있는 초고속 진단 방법인 면역크로마토그래피법을 응용하여 동시진단시약을 제조하였다. 면역크로마토그래피법으로 AFP, CEA, PSA를 진단하기 위해서는 나이트로 셀룰로우즈 멤브레인에 AFP, CEA, PSA에 대한 항체를 정해진 위치에 흡착시키고 골드입자에 각각에 대한 항체를 접합시켜 패드에 건조시킨다. 건조된 골드패드와 검체를 적용하는 패드를 중첩하여 나이트로셀룰로우즈 멤브레인 위에 덮고 반대편 위치에 흡습용 패드를 부착시켜 테스트용 스트립을 제조하였다(도 1).
그리고, 이때 3가지 물질을 동시에 검사하려면 1가지 항원 물질을 검출할 때보다 개별 항원에 대한 검출 감도를 올려야 한다. 따라서 검출감도를 높이기 위해서는 정제된 IgG 항체 중에서 Fc' 부(Fc' portion)를 펩신(pepsin)으로 처리하여 제거하고 F(ab')2 만을 정제하여 골드입자에 흡착시키는 것이 바람직하다. 본 과정을 거침으로써 Fc'부에 의한 비특이 반응이 줄어들고 따라서 해당 특이항체 부위만을 선택적으로 과량 골드에 접합시킴으로써 검출 감도를 극대화시킬 수 있다.
AFP, CEA, PSA와 같은 종양 지표물질에 대한 항체를 얻기 위해서는 정제된 종양 지표물질이 있어야 한다. AFP를 얻기 위하여 신생아 출산때 얻을 수 있는 탯줄 세럼(cord serum)으로부터 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography) 방법으로 순수한 AFP를 얻는다. CEA는 CEA를 분비하는 세포주 배양 상청에서 친화성 크로마토그래피법으로 정제하였고 PSA는 사람의 정액에서 친화성 크로마토그래피법으로 정제하여 항원을 제조하였다.
AFP, CEA, PSA에 대한 항체는 정제된 각각의 항원을 마우스에 면역시키고 비장세포를 분리하여 골수종(myeloma) 세포와 접합시켜 AFP, CEA, PSA에 대한 단일클론 항체를 분비하는 잡종세포주를 개발한다. 이 세포주를 이용하여 단일클론 항체를 제조하였다. 또한 골드입자에 부착하는 항체는 정제된 각각의 항원을 토끼에 면역하고 특이항체만을 친화성 크로마토그래피법으로 정제하여 제조하였다.
도 2는 본 발명의 진단용 스트립 제조방법에 따라 제조된 진단용 스트립을 검체 적용홀과 결과 표시창이 표시된 플라스틱 디바이스에 넣어 제조한 것이다. 검체 적용홀에 사람혈청을 약 100㎕(2 drops) 넣으면 검체 중에 존재하는 AFP, CEA, PSA가 골드입자에 부착된 각각의 항체와 반응을 하면서 나이트로셀룰로우즈 멤브레인 위를 모세관 현상에 의해서 전개된다.
본 발명에 따르는 진단 스트립의 제조에 사용할 수 있는 멤브레인은 통상의 진단 스트립의 재료로 사용되는 것들을 이용할 수 있으며, 예를 들어 나이트로 셀룰로우즈, 셀룰로우즈, 셀룰로우즈 아세테이트, 폴리에틸렌 등의 각종 합성 중합체를 사용할 수 있다.
멤브레인에는 CEA, AFP, PSA에 대한 단일클론 항체를 일정한 위치에 흡착시켜 놓아 해당 종양 표지물질이 혈청 중에 존재하는 경우에는 골드입자에 접합된 항체에 반응한 각각의 종양 표지물질이 멤브레인에 흡착된 항체와 다시 반응하여 해당 위치에 골드입자 색에 의한 보라색 밴드를 형성한다. 대조선 위치에는 항-토끼 IgG를 흡착시켜 토끼 IgG가 흡착된 골드입자가 혈청 중에 종양 표지물질의 존재여부에 관계없이 항상 반응하여 보라색 밴드를 나타내게 하였다. 반응하지 않은 내용물은 흡습패드에 스며들어 검사창의 멤브레인은 깨끗한 흰색으로 나타나 형성된 밴드를 쉽게 판독할 수 있다. 즉. 혈청 중에 AFP가 일정량 이상 존재하면 AFP에 대한 단일클론 항체가 흡착된 위치와 대조선 위치에 보라색 밴드를 나타내고, AFP와 CEA가 동시에 존재하면 AFP, CEA에 대한 항체 흡착부위와 대조선 부위에 보라색 밴드가 동시에 형성된다. 또한 AFP, CEA, PSA가 동시에 존재하면 검사선 3밴드, 대조선 1밴드가 나타나 총 4개의 밴드가 형성된다.
이하 실시예를 통해 본 발명에 따르는 진단장치 및 그 제조방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하는 것이며, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 진단 스트립의 제조
(1) AFP 진단용 항체의 제조
AFP가 고농도로 존재하는 탯줄 세럼을 입수하여 침전물을 원심분리(10,000g,30분)하여 제거하였다. AFP에 대한 단일클론 항체를 구입하여 세파로스 겔(sepharose gel)에 부착시키고 원심분리한 탯줄 세럼을 TBS(20mM tris, 130mM sod. chloride, pH7.2) 용액으로 3배 희석하여 반응시켰다. 반응이 완료된 겔은 TBS로 세척하여 반응하지 않은 탯줄 세럼 성분을 완전히 세척해 냈다.
겔에 항체와 반응한 AFP를 0.1M 글리신 용액(pH2.5)을 통과시켜 선택적으로 떼어냈다. 용출된 AFP는 PBS(10mM phosphate, 140mM sod. chloride, pH7.2)로 투석하여 면역원 등으로 사용하였다. 정제된 AFP는 토끼 anti-AFP 항체와 단일클론 anti-AFP 개발용 면역원으로 사용하였다.
① 토끼 anti-AFP 항체와 골드 접합체의 제조
정제된 AFP를 1회에 20㎍씩 프룬드 아주번트(freund's adjuvant)와 함께 1개월 간격으로 토끼의 피하에 4회 접종하여 항혈청을 얻었다. 항혈청은 다시 AFP가 부착된 세파로즈 겔을 이용하여 동일한 방법으로 순수한 토끼 anti-AFP만을 정제했다.
펩신 20㎎을 0.1M 아세테이트 완충액(pH4.5) 2㎖에 용해하고 정제된 토끼 anti-AFP를 동일한 완충액에 20㎎/㎖로 조제하여 1㎖식 첨가하였다. 이 용액을 37℃에서 18시간 반응시켰다. 2M tris를 3㎖ 첨가하여 중화시키고 2000g에서 10분간 원심분리하여 침전을 제거하였다. 이 용액을 20mM 인산 완충액(pH7.2) 용액에 투석하고 프로테인 A 겔이 접합된 겔을 통과시켜 Fc' 부를 흡착시켰다. 겔을 통과한 항체만을 선별하였다.
이 정제된 항체는 골드 입자에 흡착용으로 사용하였다. 즉 염화금을 시트르산 나트륨 용액으로 환원시켜 40nm 크기의 골드 입자를 532nm에서 흡광도가 10+/-1이 되도록 제조하였다. 여기에 정제된 토끼 anti-AFP를 10㎍/㎖되게 부착시키고 PEG 용액으로 골드 입자를 안정화시켰다. 제조된 항체-골드접합체는 다른 항체-골드접합체와 함께 폴리에스테르 또는 유리 섬유와 같은 메트릭스에 적셔 건조시켰다.
② AFP의 단일 클론 항체 제조
한편, 정제된 AFP을 balb/c 마우스에 면역시키고 비장세포를 분리하여 골수종과 접합시켜 AFP 대한 단일클론 항체를 분비하는 잡종세포주를 ELISA 방법으로 선별하고 한계희석 방법으로 단세포군을 확립하였다. 이 세포주를 대량 배양하여 balb/c 마우스에 복강에 접종하여 항체가 다량 함유된 복수를 얻고 프로테인 A 겔을 이용하여 IgG 항체를 정제하였다.
(2) CEA 진단용 항체의 제조
CEA를 분비하는 세포주를 ATCC에서 분양 받아 플라스크에서 배양하고 배양 상청액을 회수하였다. CEA에 대한 단일 클론 항체를 구입하여 세파로스 겔에 부착시키고 배양 상청액을 TBS(20mM tris, 130mM sod. chloride, pH7.2) 용액으로 3배 희석하여 반응시켰다. 반응이 완료된 겔은 TBS로 세척하여 반응하지 않은 배양액 성분을 완전히 세척해냈다.
겔에 항체와 반응한 CEA를 0.1M 글리신 용액(pH2.5)을 통과시켜 선택적으로 떼어냈다. 용출된 CEA는 PBS(10mM phosphate, 140mM sod. chloride, pH7.2)로 투석하여 면역원 등으로 사용하였다. 정제된 CEA는 토끼 anti-CEA항체와 단일클론 anti-CEA 개발용 면역원으로 사용하였다.
① 토끼 anti-CEA 항체와 골드 접합체의 제조
토끼 anti-CEA항체는 정제된 CEA를 1회에 20㎍씩 프룬드 아주번트와 함께 1개월 간격으로 토끼의 피하에 4회 접종하여 항혈청을 얻었다. 항혈청은 다시 CEA가 부착된 세파로즈 겔을 이용하여 동일한 방법으로 순수한 토끼 anti-CEA만을 정제했다.
펩신 20㎎을 0.1M 아세테이트 완충액(pH4.5) 2㎖에 용해하고 정제된 토끼 anti-CEA를 동일한 완충액에 20㎎/㎖로 조제하여 1㎖식 첨가하였다. 이 용액을 37℃에서 18시간 반응시켰다. 2M tris를 3㎖ 첨가하여 중화시키고 2000g에서 10분간 원심분리하여 침전을 제거하였다. 이 용액을 20mM 인산 완충액(pH7.2) 용액에 투석하고 프로테인 A 겔이 접합된 겔을 통과시켜 Fc' 부를 흡착시켰다. 겔을 통과한 항체만을 선별하였다.
이 정제된 항체는 골드 입자에 흡착용으로 사용하였다. 즉 염화금을 시트르산 나트륨 용액으로 환원시켜 40nm 크기의 골드 입자를 532nm에서 흡광도가 10+/-1이 되게 제조하였다. 여기에 정제된 토끼 anti-CEA를 10㎍/㎖되게 부착시키고 PEG용액으로 골드입자를 안정화시켰다. 제조된 골드접합체는 다른 골드접합체와 함께폴리에스테르 또는 유리 섬유와 같은 메트릭스에 적셔 건조시켰다.
② CEA의 단일 클론 항체 제조
정제된 CEA 항원을 blab/c 마우스에 면역시키고 비장세포를 분리하여 골수종과 접합시켜 CEA 대한 단일클론 항체를 분비하는 잡종세포주를 ELISA 방법으로 선별하고 한계희석 방법으로 단세포군을 확립하였다. 이 세포주를 대량배양하여 blab/c 마우스에 복강에 접종하여 항체가 다량 함유된 복수를 얻고 프로데인 A 겔을 이용하여 IgG항체를 정제하였다.
(3) PSA 진단용 항체의 제조
PSA에 대한 단일 클론 항체를 구입하여 세파로즈 겔에 부착시키고 PSA가 다량 함유된 정액을 입수하여 TBS(20mM tris, 130mM sod. chloride, pH7.2)용액으로 10배 희석하여 반응시켰다. 반응이 완료된 겔은 TBS로 세척하여 반응하지 않은 성분을 완전히 세척해 냈다.
겔에 항체와 반응한 PSA를 0.1M 글리신 용액(pH2.5)을 통과시켜 선택적으로 떼어냈다. 용출된 PSA는 PBS(10mM phosphate, 140mM sod. chloride, pH7.2)로 투석하여 면역원 등으로 사용한다. 정제된 PSA는 토끼 anti-PSA항체와 단일클론anti-PSA 개발용 면역원으로 사용하였다.
① 토끼 anti-PSA 항체와 골드 접합체의 제조
토끼 anti-PSA항체는 정제된 PSA를 1회에 20㎍씩 프룬드 아주번트와 함께 1개월 간격으로 토끼의 피하에 4회 접종하여 항혈청을 얻었다. 항혈청은 다시 PSA가 부착된 세파로즈 겔을 이용하여 동일한 방법으로 순수한 토끼 anti-PSA만을 정제했다.
펩신 20㎎을 0.1M 아세테이트 완충액(pH4.5) 2㎖에 용해하고 정제된 토끼 anti-PSA 항체를 동일한 완충액에 20㎎/㎖로 조제하여 1㎖식 첨가하였다. 이 용액을 37℃에서 18시간 반응시켰다. 2M tris를 3㎖ 첨가하여 중화시키고 2000g에서 10분간 원심분리하여 침전을 제거하였다. 이 용액을 20mM 인산 완충액(pH7.2) 용액에 투석하고 프로테인 A 겔이 접합된 겔을 통과시켜 Fc' 부를 흡착시켰다. 겔을 통과한 항체만을 선별하였다.
이 정제된 항체는 골드 입자에 흡착용으로 사용하였다. 즉 염화금을 시트르산 나트륨 용액으로 환원시켜 40nm 크기의 골드입자를 532nm에서 흡광도가 10+/-1이 되게 제조하였다. 여기에 정제된 토기 anti-PSA를 10㎍/㎖되게 부착시키고 PEG용액으로 골드입자를 안정화시켰다. 제조된 골드접합체는 다른 골드접합체와 함께 폴리에스테르 또는 유리섬유와 같은 메트릭스에 적셔 건조시켰다.
② PSA의 단일 클론 항체 제조
정제된 PSA 항원을 balb/c 마우스에 면역시키고 비장세포를 분리하여 골수종과 접합시켜 PSA 대한 단일클론 항체를 분비하는 잡종세포주를 ELISA방법으로 선별하고 한계희석 방법으로 단세포군을 확립하였다. 이 세포주를 대량배양하여 balb/c마우스에 복강에 접종하여 항체가 다량 함유된 복수를 얻고 프로테인 A 겔을 이용하여 IgG항체를 정제하였다.
(4) 동시진단시약용 재료 제조
토끼의 혈청을 얻어 프로테인 A 겔을 이용하여 IgG 항체를 순수하게 분리 정제하였다. 정제된 토끼 IgG를 1회에 100㎍씩 프룬드 아주번트와 함께 1개월 간격으로 산양의 피하에 4회 접종하여 항혈청을 얻었다. 항혈청은 다시 토끼 IgG가 부착된 세파로즈 겔을 이용하여 동일한 방법으로 순수한 산양 anti-토끼 IgG만을 정제하였다.
(5) 진단용 스트립의 제조
플라스틱 카드에 나이트로셀룰로우즈 멤브레인을 깔고 그 위에 상기 정제된 anti-PSA, anti-AFP, anti-CEA, 산양 anti-토끼 IgG를 각각 1㎎/㎖ 농도로 PBS로 희석하여 도 2의 1, 2, 3, C 위치에 각각 흡착시켰다.
제조된 anti-CEA, anti-PSA, anti-AFP 골드접합체를 섞어서 폴리에스테르 또는 유리섬유에 적셔 건조시켜 골드 패드를 제조하였다.
셀룰로우즈 패드를 준비하여 Tween20과 같은 계면활성제를 처리하여 검체패드로 사용하였다. 흡습패드는 셀룰로우즈 패드를 적당히 절단하여 사용하였다. 각각의 구성물을 이용하여 라미네이션 카드를 만들고 도 1과 같은 스트립 형태로 절단하였다. 이 스트립을 플라스틱 디바이스(도 2)에 넣고 뚜껑을 덮었다. 조립된 디바이스는 실리카겔포와 함께 은박포등에 밀봉하여 습기로부터 보호하였다.
실시예 2: 본 발명에 따르는 진단 스트립의 진단 효능 시험
상기 실시예 1에서 제조한 본 발명에 따르는 진단 스트립의 효능을 시험하기 위해 간암 환자로 진단되어 AFP혈청 농도가 20ng/㎖ 이상인 혈청 35검체, 대장암 환자로 CEA 혈중 농도가 5ng/㎖ 이상인 혈청 25검체, 전립선암 환자로 PSA 혈청 농도가 3ng/㎖ 이상인 혈청 19검체 그리고 정상인 혈청 56 검체를 RIA법으로 검사하였고 본 발명품으로 상기의 검사 방법과 판정 기준에 따라 비교 시험을 하였다.
본 발명에 따르는 상기 실시예 1에서 제조된 진단 스트립을 구비하고 있는 장치를 이용한 검사 방법은 다음과 같다.
검사하고자 하는 환자의 혈청이나 혈장을 타원형의 검체 홀에 넣고 약 20분 후에 1, 2, 3, C 위치에 보라색 밴드가 나타났는지를 관찰하였다. 즉, 모든 경우에 C위치에 보라색 선이 나타나야 하고 C 위치에만 보라색 선이 있는 경우는 3가지 종류 표지물질에 대하여 음성으로 판정하며 1, 2, 3 위치에 보라색 선이 나타나면 해당 종양 표지물질이 양성인 것으로 판정하여 그 결과를 하기 표 1, 2, 3으로 나타냈다.
AFP 비교 시험 결과
구분 RIA시약 결과
양성 음성
실시예 1 음성 0 56
양성 35 0
* 양성 기준 : 혈청 중에 AFP 20ng/ml이상
CEA 비교 시험 결과
구분 RIA시약 결과
양성 음성
발명품 음성 0 56
양성 25 0
* 양성 기준 : 혈청 중에 CEA 5ng/ml이상
PSA 비교 시험 결과
구분 RIA시약 결과
양성 음성
발명품 음성 0 56
양성 19 0
* 양성 기준 : 혈청 중에 PSA 3ng/ml이상
상기 표 1 내지 표 3의 비교 실험 결과로부터 확인되는 바와 같이 본 발명에 따르는 진단 스트립은 간암 표지 물질인 AFP, 대장암 표지물질인 CEA, 전립선암 표지물질인 PSA를 동시에 검사할 수 있으며, 그 종래의 검사방식인 RIA방법에 비하여 간단하고 신속하면서도 민감성을 동시에 갖추고 있음을 알 수 있다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따르는 간암, 대장암, 전립선암을 동시에 진단할 수 있는 진단 스트립을 사용하면 특별한 검사장비나 훈련된 인원이 없이도 간단하게 혈청학적으로 AFP, CEA, PSA를 진단함으로서 간암, 대장암, 전립선암을 간편하고 신속하게 진단할 수 있게 해주는 유용한 발명이다.

Claims (10)

  1. AFP, CEA, PSA으로 구성된 그룹에서 선택된 적어도 두 개 이상의 단일클론 항체를 각각 멤브레인에 흡착시켜 AFP, CEA, PSA중의 적어도 하나와 반응할 경우 AFP, CEA, PSA중 적어도 두 개 이상의 항체-골드 접합체와 상기 흡착된 항체가 다시 반응하여 발색하도록 함으로써 간암, 대장암, 전립선암 중 적어도 2가지 이상의 질환을 판정할 수 있도록 하는 것을 특징으로 하는 진단 스트립.
  2. AFP, CEA, PSA로 구성된 그룹에서 선택된 적어도 두 개 이상의 단일 클론 항체를 만들어 멤브레인에 흡착시키고,
    AFP, CEA, PSA로 구성된 그룹에서 선택된 적어도 두 개 이상의 항체를 골드 입자에 부착시켜 항체-골드 접합체를 만들어 혼합한 후 모재에 함침시켜 건조시키는 것을 특징으로 하여 간암, 대장암, 전립선암 중 적어도 2가지 이상의 질환을 판정할 수 있는 진단 스트립의 제조방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 항체-골드 접합체 제조용 항체를 제조하는 단계에서 정제된 항체 중의 Fc'부를 펩신 처리하여 제거하고 F(ab')2만을 정제하여 골드 입자에 흡착시키는 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  4. 제 2 항에 있어서, 상기 항체-골드 접합체의 제조는 염화금을 시트르산 나트륨 용액으로 환원시키고, 40nm 크기의 골드 입자를 532nm에서 흡광도가 10+/-1이 되게 제조한 다음, 여기에 정제된 토끼 anti-CEA, anti-AFP, 또는 anti-PSA를 각각 10㎍/㎖되게 부착시키고 PEG 용액으로 골드입자를 안정화시키는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  5. 제 2 항에 있어서, 상기 멤브레인은 나이트로 셀룰로우즈 멤브레인인 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  6. 제 2 항에 있어서, 상기 항체-골드 접합체를 함침시키는 모재는 폴리에스테르 또는 유리섬유인 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  7. 제 2 항에 있어서, 추가로 검체를 떨어뜨려 스트립 내부로 침투시키도록 하는 검체 패드와 반응하지 않은 시료들을 흡수하는 흡습패드를 적층시키는 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 검체 패드는 계면활성제 처리하는 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  9. 제 7 항에 있어서, 상기 검체 패드 및 흡습 패드는 셀룰로우즈 패드인 것을 특징으로 하는 진단 스트립의 제조방법.
  10. 검체 패드, AFP, CEA, PSA로 구성된 그룹에서 선택된 적어도 두 개 이상의 단일 클론 항체를 흡착시킨 항체 패드, AFP, CEA, PSA로 구성된 그룹에서 선택된 적어도 두 개 이상의 항체를 골드 입자에 부착시켜 항체-골드 접합체를 함침시켜 건조한 골드 패드, 흡습 패드를 적층시킨 스트립; 및 검체 적용홀와 결과 표시창을 구비하며 상기 스트립을 내부에 삽입하여 검사 결과를 관찰할 수 있도록 하는 하우징으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 간암, 대장암, 전립선암 중의 적어도 두 개 이상의 질환을 판정할 수 있는 진단 장치.
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