KR100381553B1

KR100381553B1 - 개 질병 항원을 이용한 특수사료 첨가제의 제조방법

Info

Publication number: KR100381553B1
Application number: KR10-2001-0009319A
Authority: KR
Inventors: 윤인중; 주한수
Original assignee: 주식회사 중앙백신연구소; 주한수
Priority date: 2001-02-23
Filing date: 2001-02-23
Publication date: 2003-04-23
Also published as: KR20020068923A

Abstract

본 발명은 개의 각종 전염성 질병을 예방하고 치료에 이용될 수 있는 개질병 항원을 이용한 특수사료 첨가제의 제조방법에 관한 것으로,

본 발명의 제조방법은 개의 주요 전염병인 개 파보바이러스(CPV), 개 디스템퍼바이러스(CDV), 개 전염성간염바이러스(ICHV), 개 파라인플루엔자바이러스(CPIV) 및 개 코로나바이러스(CCV)의 5종 바이러스에 대한 항원을 제조하여 채란계에 접종한 후 항체가 생성된 계란의 난황을 이용한 특수사료 첨가제를 제조하여 사료 급여시 혼합투여하므로서 개의 전염병에 대한 면역기능을 높여 주는 것을 특징으로 하는 것이며,

이와같은 본 발명은 본 발명에 의해 제조된 사료첨가제를 기존사료에 혼합하여 먹이므로서 개의 각종 전염성 질병을 사전에 예방 또는 치료효과를 볼수가 있는 것이다.

Description

개 질병 항원을 이용한 특수사료 첨가제의 제조방법{Manufacturing method of special feed additives using the canine disease antigens}

본 발명은 개의 각종 전염성 질병을 예방하고 치료에 이용될수 있는 특수사료 첨가제의 제조방법에 관한 것이다. 본 사료 첨가제는 개에 감염되는 바이러스 항원으로 면역시킨 닭으로부터 생산되는 난황을 주성분으로 하여 곡물가루 또는 분유을 혼합하여 건조 시킨후 분말화한 제품이며 기존 사료에 혼합하여 먹이므로서 개의 각종 전염성 질병을 예방 또는 치료 효과를 보는 것이다.

우리나라에서 개의 사육 두수는 현저히 늘어가고 있는 추세이며, 일반적으로 애완견의 경우 위생적인 사육과 백신의 사용으로 질병에 의한 피해를 감소시킬수 있다. 그러나 이들을 집단적으로 사육시에는 여러 가지 질병에 의한 피해가 예상되며, 특히 이유 후 강아지의 경우 모체 이행항체의 결여로 각종 전염병에 의한 폐사가 많은 문제를 일으키고 있다.

현재 우리나라에서 문제가 되고 있는 질병으로서는 개 파보바이러스, 디스템퍼, 전염성간염, 파라인플루엔자 및 코로나바이러스 등을 들수 있으며, 이중 개 파보 및 코로나바이러스는 전염력이 강하고 설사를 주증으로 하며, 치사율이 높기 때문에 새로운 차원의 예방과 치료 기술이 요구가 된다.

사람 또는 동물에서 각종 질병으로부터 보호되기 위해 어떤 병원체가 감염된 후 회복됨으로 면역기능이 발휘된다. 또한 질병을 앓지 않고 면역을 위해서는 특정 병원균으로 백신을 제조하여 접종하므로서 면역을 얻게 하는 것이 보통이나 외부에서 이미 만들어진 면역물질을 체내에 주입시키므로서 유사한 효력을 얻게 할 수 도 있다. 최근 인체의 특정 전염성 병원체를 동물을 이용하여 면역항체를 생성하고 이들 항체를 각종 식품에 첨가하여 섭취 하므로서 치료 또는 예방에 이용되고 있는 예가 있다.

동물을 이용한 면역물질의 생산은 면역된 젖소로부터 나오는 초유, 면역된 돼지의 혈청 또는 면역된 계란의 난황을 이용하고 있으나, 본 발명에서는 일반사료에 용이하게 첨가할수 있는 면역된 계란을 이용하여 개 전용 특수사료 첨가제를 제조하고져 한다.

면역난황을 이용한 인체 및 각종동물 질병의 예방치료에 관한 보고는 많이 발표된 바 있다(Otake등 1991 ; Imberechts등 1977 ; Kuroki등 1977) 그러나 개의 질병 예방 및 치료용으로 제품이 만들어진 보고는 알려지지 않고 있다. 따라서 본 발명품을 상품화하여 기존사료에 첨가 급여 하므로서 개의 건강상태를 향상시키고 특히 집단사육시 문제되는 폐사를 줄이고져 한다. 본 발명품은 개에 피해를 주고 있는 주요 전염병을 골라서 병원체별 항원을 만들고, 이를 혼합한 후 비동화 시킨후 면역증강제를 가한후 채란계에 연속 접종하여 고도로 면역시킨 난황을 주성분으로 하고 분유 또는 곡물가루를 혼합, 제조하고 여기에 적당량의 지사제를 첨가하여 좋은 효과를 얻을수 있도록 하였다.

이하 본 발명의 제조과정을 실시예에 의하여 상세히 살펴보면 다음과 같다.

실시예

1. 주요질병 원인체에 대한 항원제조

가. 개 파보바이러스(CPV) 계대

(1) 바이러스접종 및 배양

A72(Canine tumor cell origin ;개 종양세포)세포를 37℃에서 세포증식용 배양액(부기.1)으로 부유시켜 배양병에 분주한 후 37℃에서 2∼3일간 배양한다. 배양세포가 단층을 형성하였을 때 ㎖당 10^4.0TCID₅₀의 개 파보바이러스(Canine parvovirus, CPV)가 함유된 세포유지용 배양액(부기.2)으로 교환하여 준다음 37℃에서 4∼5일간 회전 배양한다.

(2) 바이러스 수확

37℃에서 3∼4일간 회전배양한 다음 CPV에 의한 세포변성효과가 80%이상 일어났을 때 무균적으로 채독하여 0.1% 포르말린으로 불활화한 후 항원으로 사용한다. 이때 항원의 역가는 ㎖당 10^7.0TCID₅₀이상이어야 한다.

나. 개 디스템퍼바이러스(CDV) 계대

(1) 바이러스의 접종 및 배양

A72세포를 세포증식용 배양액(부기.1)으로 부유시켜 배양병에 분주한 다음 37℃에서 2∼3일간 배양한다. 배양세포가 단층을 형성하였을 때 배양액을 제거하고 ㎖당 10^4.0TCID₅₀의 개 디스템퍼바이러스(Canine destemper virus, CDV)가 함유된 세포유지용배양액(부기.2)으로 교환하여준 다음 37℃에서 5∼6일간 회전배양한다.

(2) 바이러스 수확

37℃에서 5∼6일간 회전배양한 다음 CDV에 의한 세포변성효과(Cytopathic effects, CPE)가 80%이상 일어났을 때 감염배양액을 채독하여 0.1% 포르말린으로 불활화한 후 항원으로 사용한다. 이때 항원의 역가는 ㎖당 10^5.0TCID₅₀이상이어야 한다.

다. 개 전염성간염 바이러스(ICHV) 계대

(1) 바이러스의 접종 및 배양

돼지 초대콩팥배양세포를 37℃에서 세포증식용 배양액(부기.1)에 부유시켜 배양병에 분주한 후 37℃에서 4∼7일간 배양한다. 배양세포가 단층을 형성하였을 때 ㎖당 10^4.0TCID₅₀의 개 전염성간염바이러스(Infectous canine hepatitis virus, ICHV)가 함유한 세포유지용 배양액(부기.2)으로 교환하여 준다음 37℃에서 3∼4일간 회전배양한다.

(2) 바이러스 수확

37℃에서 3∼4일간 회전배양한 후 개 전염성간염바이러스에 의한 세포변성효과(CPE)가 80%이상 일어났을 때 무균적으로 채독하여 0.1% 포르말린으로 불활화한 후 항원으로 사용한다. 이때 항원의 역가는 ㎖당 10^7.0TCID₅₀이상이어야 한다.

라. 개 파라인플루엔자 바이러스(CPIV) 배양

(1) 바이러스접종 및 배양

Vero(Kidney, African green monkey)세포를 세포증식용 배양액(부기.1)으로 부유시켜 배양병에 분주한 후 37℃에서 2∼3일간 배양한다. 배양세포가 단층을 형성하였을 때 ㎖당 10^3.0TCID₅₀의 개 파라인플루엔자 바이러스(Canine parainfluenza virus, CPIV)가 함유한 세포 유지용배양액(부기.2)으로 교환하여 준다음 37℃에서 5일간 회전배양한다.

(2) 바이러스 수확

37℃에서 5일간 회전배양한 후 무균적으로 채독하여 0.1% 포르말린으로 불활화한 후 항원으로 사용한다. 이때 항원의 역가는 ㎖당 10^6.0TCID₅₀이상이어야 한다.

마. 개 코로나바이러스(CCV) 배양

(1) 바이러스접종 및 배양

A72세포를 37℃에서 세포증식용 배양액(부기.1)으로 부유시켜 배양용기에 분주한 다음 37℃에서 배양한다. 배양세포가 단층을 형성하였을 때 ㎖당 10^4.0TCID₅₀의개 코로나바이러스(Canine coronavirus, CCV)가 함유된 세포유지용 배양액(부기.2)으로 교환하여준 다음 37℃에서 3∼4일간 회전 배양한다.

(2) 바이러스 수확

37℃에서 3∼4일간 회전배양한 후 CCV에 의한 세포변성효과가 80%이상 일어날 때까지 배양한 다음 무균적으로 채독하여 0.1% 포르말린으로 불활화한 후 항원으로 사용한다. 이때 항원의 역가는 ㎖당 10^6.0TCID₅₀이상이어야 한다.

부기 1. 세포증식용 배양액 조성성분(1,000㎖)

α MEM -------------------------- 880㎖

Fetal bovine serum -------------- 100㎖

7.5% NaHCO₃---------------------- 20㎖

Penicillin G-Na ------------ 100unit/㎖

Streptomycin ------------------ 100㎍/㎖

Fungizone ------------------ 0.025㎍/㎖

부기 2. 세포유지용 배양액 조성성분(1,000㎖)

α MEM ------------------------- 930㎖

Fetal bovine serum ------------- 50㎖

7.5% NaHCO₃--------------------- 20㎖

Penicillin G-Na ----------- 100unit/㎖

Streptomycin ---------------- 100㎍/㎖

Fungizone ----------------- 0.025㎍/㎖

2. 채란계용 혼합 백신제조

1㎖당 바이러스 함유량은 CPV 10^7.0TCID₅₀이상, CDV 10^5.0TCID₅₀이상, ICHV

10^7.0TCID₅₀이상, CPIV 10^6.0TCID₅₀이상, CCV 10^6.0TCID₅₀이상이 함유되도록 혼합 유제액을 만든 다음 120목 동망으로 여과 혼합한 후 면역증강제인 Oil adjuvant(부기.3)를 혼합 유제액의 50%을 가하여, 유성혼합기로 혼합한 후 소 분병한 다음, 봉전하여 2∼7℃ 냉암소에 보존하면서 시험백신으로 사용한다.

부기 3. Oil adjuvant(100㎖)

Tween 80 -------------------- 3㎖

Span 85 -------------------- 30㎖

Mineral oil ----------------67㎖

3. 채란계 백신접종

가. 접종시기 : 1차접종 : 생후 20∼21주령.

2차접종 : 1차접종 3주후.

3차접종 : 2차접종 3주후.

4차접종 : 3차접종 3주후.

나. 접종부위 : 앞가슴 또는 다리근육.

다. 접종량 : 1.0㎖/수.

4. 면역계란 채취 및 난황내 바이러스별 항체가 측정

고도로 면역시킨 닭에서 채란된 계란의 난황내의 각 바이러스에 대한 항체가를 각각 측정한 결과 아래 표와 같이 4차접종 3주후 항체가를 측정한 결과 CPV 항체가는 128∼512배, CDV 항체가는 128∼512배, ICHV 항체가는 128∼512배, CPIV 항체가는 128∼512배, CCV중화항체가는 128∼512배의 항체역가를 각각 나타내었다.

표1. CPV에 대한 항체가

접종계No	계란의 난황내 항체가	비 고
접종계No	접종전	비 고	1차접종3주후	3차접종3주후	4차접종3주후
1	<2	16	128	256
2	<2	8	64	256
3	<2	8	32	128
4	<2	16	128	256
5	<2	16	64	128
6	<2	8	64	256
7	<2	8	64	256
8	<2	16	128	512
9	<2	16	64	512
10	<2	16	64	256

표2. CDV에 대한 항체가

접종계No	계란의 난황내 항체가	비 고
접종계No	접종전	비 고	1차접종3주후	3차접종3주후	4차접종3주후
1	<2	16	128	512
2	<2	4	64	128
3	<2	8	32	256
4	<2	4	32	256
5	<2	4	32	128
6	<2	8	32	256
7	<2	16	64	128
8	<2	8	64	256
9	<2	4	32	128
10	<2	8	64	512

표3. ICHV에 대한 항체가

접종계No	계란의 난황내 항체가	비 고
접종계No	접종전	비 고	1차접종3주후	3차접종3주후	4차접종3주후
1	<2	8	64	512
2	<2	16	128	128
3	<2	16	32	128
4	<2	8	64	128
5	<2	8	128	256
6	<2	16	64	256
7	<2	16	32	512
8	<2	16	32	128
9	<2	8	32	256
10	<2	8	64	128

표4. CPI에 대한 항체가

접종계No	계란의 난황내 항체가	비 고
접종계No	접종전	비 고	1차접종3주후	3차접종3주후	4차접종3주후
1	<2	8	64	128
2	<2	16	64	256
3	<2	16	32	256
4	<2	8	32	128
5	<2	16	32	256
6	<2	16	64	128
7	<2	16	64	256
8	<2	8	32	128
9	<2	8	32	128
10	<2	16	64	256

표5. CCV 대한 항체가

접종계No	계란의 난황내 항체가	비 고
접종계No	접종전	비 고	1차접종3주후	3차접종3주후	4차접종3주후
1	<2	16	32	128
2	<2	8	32	128
3	<2	16	64	256
4	<2	16	32	512
5	<2	16	128	512
6	<2	8	64	256
7	<2	16	64	256
8	<2	16	64	256
9	<2	8	32	128
10	<2	8	32	128

5. 발명사료 첨가제 제조

가. 면역난 채취

면역계군중 20마리의 닭을 무작위로 채혈하여 상기 5종의 바이러스에 대한 혈중 항체가를 조사하고 채혈 닭의 80%(16마리)이상이 5종 바이러스에 대한 각각 항체가가 1:128배 이상일 때 면역 계란으로 사용한다.

나. 첨가제 제조

면역난에서 난황만 분리 수거하고 이들 난황액 1리터에 1kg의 찐쌀가루로 잘 섞어 반죽을 만든 후 저온(50℃) 건조기를 이용하여 잘 건조한 후 분쇄기를 이용하여 균일한 분말이 되도록 한다. 본 분말에 적당량의 지사제(Bismuth subsalicylate)를 첨가하여 섞은 후 포장 단위를 100gm 또는 1kg으로 한다.

다. 발명 첨가제 사용

이상과 같이 제조된 첨가제를 사료 급여시 사료용량의 1∼5%가 되도록 섞어 먹이므로서 상기 5종의 바이러스에 대한 예방 목적으로 이용한다. 본 제품을 치료 목적으로 사용할시는 제조된 첨가제를 사료용량의 10∼20%가 되도록 첨가하여 온수 또는 우유에 잘 혼합하여 하루 3회이상 급여 시킨다.

6. 발명품 첨가사료의 효능시험

각종질병으로 인한 강아지의 폐사가 높은 집단 사육 개농장에서 본발명 제품이 첨가된 사료를 급여한 시험군과 일반사료를 급여한 시험군에서의 비교 효능 시험을 한 결과 표6과 같은 성적를 얻었다.

표6. 첨가사료의 효능시험

이유강아지수	구 분	이유휴 1개월간 임상관찰
이유강아지수	구 분	설 사	혈 변	호흡기	폐 사	생 존
30마리	발명품첨가사료	2/30	1/30	1/30	0/30	30/30
30마리	일반사료	8/30	6/30	8/30	*3/30	27/30

* 폐사 : 혈변후 폐사

상술한 바와 같은 본 발명은 본 발명에 의해 제조된 사료첨가제를 기존사료에 혼합하여 먹이므로서 개의 각종 전염성 질병을 사전에 예방 또는 치료효과를 볼수가 있는 것이다.

Claims

개의 주요 전염병인 개 파보바이러스(CPV), 개 디스템퍼바이러스(CDV), 개 전염성간염바이러스(ICHV), 개 파라인플루엔자바이러스(CPIV) 및 개 코로나바이러스(CCV)의 5종 바이러스에 대한 항원을 제조하여 채란계에 접종한 후 항체가 생성된 계란의 난황을 이용한 특수사료 첨가제를 제조하여 사료 급여시 혼합투여하므로서 개의 전염병에 대한 면역기능을 높여 주는 것을 특징으로 하는 개 질병 항원을 이용한 특수사료 첨가제의 제조방법.