KR100327043B1 - 지알비2-에스에이치씨 결합 저해 화합물, 미생물로부터이의 분리 방법, 및 이를 함유하는 지알비2-에스에이치씨결합 저해용 조성물 - Google Patents

지알비2-에스에이치씨 결합 저해 화합물, 미생물로부터이의 분리 방법, 및 이를 함유하는 지알비2-에스에이치씨결합 저해용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 Grb2-Shc(Growth factor receptor-bound 2-Src homologous and collagen) 결합 저해활성을 갖는 하기 화학식 1의 신규 화합물, Grb2-Shc 결합 저해 화합물을 페니실리움 멀티칼라(Penicillium multicolor) F1753 균주로부터 분리하는 방법, 및 상기 저해 화합물을 함유하는 Grb2-Shc 결합 저해용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 화합물은 세포내 신호전달과정에 관여하는 Grb2와 Shc의 결합을 저해하여 라스(Ras) 발암유전자의 발현 및 라스단백질을 통한 신호전달의 조절을 통하여 암세포의 분화와 성장을 억제하므로 새로운 종류의 항암제로서 사용될 수 있다. 또한, 세포내 신호전달을 조절하여 천식(Asthmas), 암전이, 심혈관질환 및 자기면역질환(Autoimmune disease) 치료제로서도 사용될 수 있으며, 세포내 신호전이 기전 연구에도 유용하다.

Description

지알비2-에스에이치씨 결합 저해 화합물, 미생물로부터 이의 분리 방법, 및 이를 함유하는 지알비2-에스에이치씨 결합 저해용 조성물{GRB2-SHC BINDING INHIBITORY COMPOUNDS, PROCESS FOR ISOLATING THEM FROM A MICROORGANISM AND COMPOSITION COMPRISING SAME FOR INHIBITING GRB2-SHC BINDING}
본 발명은 Grb2-Shc의 결합을 저해하는 신규 화합물, 페니실리움 멀티칼라(Penicillium multicolor) F1753 균주의 발효액으로부터 Grb2-Shc 결합 저해 화합물을 분리하는 방법, 및 상기 저해 화합물을 함유하는 Grb2-Shc 결합 저해용 조성물에 관한 것이다.
암은 인간에게 있어서 가장 치명적인 질병중 하나로서 이로 인한 사망은 심혈관질환 다음으로 많으며, 이의 치료를 위해서 많은 항암제들이 개발되었고, 현재에도 많은 연구자들이 새로운 항암제 개발을 위한 노력을 계속하고 있다. 그러나 지금까지 항암제로 쓰였던 것들은 분열하고 있는 세포들을 대상으로 한 것으로 주로 DNA 삽입제(intercalating agent), DNA 가교결합제(cross-linking agent), 알킬화제(alkylating agent), 토포아이소머레이즈 저해제(topoisomerase inhibitor) 등을 포함한다. 이러한 항암제들은 효과적이긴 하지만, 세포독성을 갖고 있어 심각한 부작용을 수반하기 때문에 이상적인 항암제라 할 수 없다. 이러한 이유로 종래의 항암제의 문제점을 보완할 새로운 접근 방법이 요구되어 왔다.
지난 10여년 동안 정상세포와 형질전환된 세포의 분자생화학적인 연구가 많이 진행되어 왔으며, 그 결과 세포의 성장, 분화 등에 관여하는 신호전이과정의 이상으로 인해 암이 발생한다는 것이 밝혀졌다. 또한, 각종 발암유전자(oncogene)의 생산물인 단백질들이 세포의 성장, 분화 및 소멸에 관여한다는 사실이 밝혀졌다. 즉 신호전이에 관여하는 성장인자, 성장인자 수용체, 세포내 타이로신(tyrosine) 인산화효소, 라스(Ras) 단백질, 결합 단백질(adaptor proteins), 전사인자(transcription factor)등이 세포의 증식에 중요한 역할을 한다고 할 수 있다(Alexander, L.Eur. J. Biochem.226, 1-13, 1994). 이와 같이 신호전이 과정에는 세포내 여러 인자들이 관여되어 있으며 만약 이중에서 한 부분에 이상이 생겨 세포내의 신호전이가 조절되지 않으면 세포성장이 비정상적으로 진행되어 결국 암을 비롯한 각종 질병이 발생하게 된다. 이러한 사실로 보아 비정상적인 신호전이 과정에 개입할 수 있는 저분자량의 물질을 찾는다면 각종 질병 치료제의 개발에 새로운 전기를 마련해 줄 것이다. 더 나아가서 이런류의 화합물들은 세포내 신호전달 기작 연구에도 새로운 활력소를 제공할 수 있을 것이다(Heimbrook, D. C., Koblan, K. S.Curr. Med. Chem.1, 13-34, 1994).
본 발명에서는 라스단백질의 활성화 전(前)단계 중 하나를 차단함으로써 라스 단백질관련 신호전달을 조절하는 것을 그 목적으로 한다. 라스 단백질을 통한 세포내 신호전달과정을 살펴보면 다음과 같다. 신호전달물질이 수용체에 결합하면 이중복합현상이 일어나고 타이로신에 인산화 반응이 일어나게 된다. 수용체의 인산화반응은 수용체와 다른 신호전이 물질간의 상호작용을 매개하기 때문에 신호전이 과정에서 중요한 역할을 맡는다(Ullich, A., Schlessinger, J.Cell61, 203-212, 1990). 활성화된 수용체의 인산화된 타이로신은 SH2 도메인을 포함하고 있는 결합 단백질중의 하나인 Shc에 의해 인식되어 세포외부의 신호를 세포내로 전달시키는 중요한 역할을 한다. 일련의 상기 신호전달과정에서 Shc 단백질은 가운데 SH2 도메인이 있고 양쪽 끝에 SH3 도메인이 위치하는 25 kDa의 Grb2와 결합하고 각종 인산화 효소들을 활성화시켜서 궁극적으로 세포핵내로 신호를 전달하게 된다.
이에 본 발명에서는 미생물의 2차 대사산물을 대상으로 Grb2-Shc의 결합 저해활성을 갖는 물질을 탐색하던 중, 토양으로부터 분리된 페니실리움 멀티칼라(Penicillium multicolor) F1753 균주의 발효액으로부터 Grb2-Shc 결합 저해활성을 나타내는 아자필론류 화합물들을 분리하고 활성을 검증하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 Grb2-Shc 결합 저해활성을 갖는 신규 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 페니실리움속 미생물로부터 Grb2-Shc 결합 저해 화합물을 분리 정제하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 함유하는 Grb2-Shc 결합 저해제 조성물을 제공하는 것이다.
도 1은 화합물 1 의 적외선 흡수 스펙트럼이고,
도 2는 화합물 1의 수소 NMR 스펙트럼이고,
도 3은 화합물 2의 수소 NMR 스펙트럼이고,
도 4는 화합물 3의 수소 NMR 스펙트럼이고,
도 5는 화합물 1의 탄소 NMR 스펙트럼이다.
상기 목적에 따라, 본 발명에서는 Grb2-Shc 결합 저해 활성을 갖는 하기 화학식 1의 신규 화합물이 제공된다.
화학식 1
상기 화합물은 (a) 페니실리움 멀티칼라(Penicillium multicolor) F1753 균주(KCTC 8874P)의 배양물을 균체와 배양액으로 나누어 각각 유기용매로 추출하고, (b) 각 유기 용매층을 수거하여 감압 농축한 후 여기에 유기용매를 가하여 재추출하고, (c) 헥산과 에틸아세테이트의 혼합물을 용출액으로 사용하는 2회의 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하고, (d) 물과 메탄올의 혼합물을 용출액으로 사용하는 역상 크로마토그래피를 실시하는 단계를 포함하는 방법에 의해 얻을 수 있다. 상기 (a) 단계의 유기 용매로는 아세톤, 클로로포름, 에탄올, 메탄올 등을 예로 들 수 있고, 아세톤과 클로로포름을 사용하는 것이 바람직하다. (b) 단계의 유기 용매로는 메틸렌 클로라이드, 클로로포름을 예로 들 수 있고, 메틸렌 클로라이드를 사용하는 것이 바람직하다.
보다 바람직하게는, 페니실리움 멀티칼라 F1753 균주를 통상적인 페니실리움 종균용 배지에 접종하여 20 내지 30℃에서 1 내지 5일간 진탕 배양하고, 종균액을 통상적인 페니실리움 배양 배지(생산용 배지)에 접종하여 20 내지 30℃에서 3 내지 7일간 진탕 배양한다. 수득된 발효액을 균체와 배양액으로 나누어 각각 2배 내지 3 배의 아세톤과 클로로포름을 가하고 20 내지 25℃에서 1시간 내지 2시간 동안 추출한 후, 각각의 유기 용매층을 감압 농축한다. 각 농축물에 10 내지 15 배 부피의 메틸렌 클로라이드를 가하고 20 내지 25℃에서 30분 내지 1시간 동안 추출하여 메틸렌 클로라이드에 녹는 성분만을 재추출하고, 용출액으로서 헥산/에틸아세테이트(6:4 내지 4:6(v/v))를 이용한 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 2회 분리하였다. 활성 분획을 모아 농축하였으며, 용출액으로서 물/메탄올(10:90 내지 20:80(v/v))을 이용한 역상 크로마토그래피로 정제하여Grb2-Shc 결합 저해 활성을 나타내는 세 가지의 활성 물질을 얻는다.
세 가지 활성 물질은 각각 화학식 1의 화합물(화합물 1)과 하기 화학식 2 및 3의 화합물(화합물 2 및 3)에 해당하는데, 이들은 모두 아자필론류의 화합물로서 화합물 1은 신규 화합물이고 화합물 2는 스클레로티오린, 화합물 3은 이소크로모필론 IV이다(Doherty A. M.et al.,J. Antibiotics48, 913-923(1995); Omura, S.et al.,J. Antibiotics48, 696-702(1995)).
상기와 같이 수득된 화합물 1, 2 및 3은 Grb2-Shc 결합을 저해하며, 상기 결합을 50% 저해하는 농도(IC50)는 각각 약 6 μM, 12 μM 및 11 μM 정도이다.
따라서, 본 발명에서는 상기 화합물 1, 2 및 3 중 하나 이상을 약학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 Grb2-Shc 결합 저해용 조성물이 제공된다. 이러한 본 발명의 약학 조성물은 Grb2-Shc 결합을 저해하므로 발암유전자의 발현을 억제하는 항암제 및 세포내 신호전달 조절에 기인한 각종 질병의 예방 및 치료제로서 이용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립, 현탁액, 유화액 또는 비경구투여용 제제와 같은 단위투여형 또는 수회투여형 제제로 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 활성 성분으로서 0.1 내지 50 ㎎, 바람직하게는 1 내지 10 ㎎의 양으로 투여될 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 사용될 특정 화합물, 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 약제 혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.
이하에서 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 미생물의 분리 및 동정
대한민국 충청남도 칠갑산에서 채취한 토양시료를 멸균수에 희석하여 통상적으로 사용되는 분리용 배지(효모추출물 0.3%, 맥아추출물 0.3%, 덱스트로즈 1%, 그리고 펩톤 0.5%)에 도말하고 28oC에서 5일간 배양한 후 생성된 균총으로부터 곰팡이를 순수 분리하였다.
상기의 곰팡이 균주를 문헌(Williams, S. T., et al.,Beryer's Mannual of Systematic Bacteriology,Vol. 4, 2451-2492, Williams and Wilkins Co., Baltimore; 日本放線菌硏究會偏(1985) 放線菌의 同定實驗法 p.1-160, 日本放線菌硏究會社務局, 동경; 및 長谷川武治遍(1981) 微生物의 分類를 同定, p.155-437, 學會出版 센타, 동경)에 기술된 실험방법에 따라 형태학적 및 생리학적 여러 특성들을 조사하여 동정한 결과 페니실리움 멀티칼라(Penicillium multicolor)로 확인되었다.
이 곰팡이를 F1753 균주로 명명하여 1998년 3월 13일자로 생명공학연구소 유전자 은행에 기탁번호 제 KCTC 8874P 호로서 기탁하였다.
실시예 2: 화합물 1, 2, 3 의 분리 및 정제
실시예 1에서 분리한 곰팡이 F1753 균주를 종균용 배지(글루코스 2%, 이스트 추출물 0.2%, 폴리펩톤 0.5%, 제1인산염 0.1%, 황산 마그네슘 0.05%를 포함하는 멸균 배지) 50 mL가 들어있는 500 mL 삼각플라스크에 접종한 후 25.5℃에서 2일간 진탕 배양하였다. 상기 종균 배양액 4 mL를 생산용 배지(수용성 전분 2%, 박토-소이톤 0.4%, 파마 메디아(Pharma media) 0.5%, 제2인산염 0.1%, 황산마그네슘 0.05%, 염화나트륨 0.2%, 탄산칼슘 0.3%, 황산철 0.002%, 염화망간 0.001%, 황산아연0.001 및 염화코발트 0.0005%를 포함하는 멸균(121℃에서 15분) 배지(pH 6.0)) 150 mL이 포함된 1 L용량의 삼각플라스크에 접종한 후 25.5℃에서 5일 동안 진탕배양하였다.
생산된 Grb2-Shc 결합저해 활성물질을 분리정제하기 위해서 균체와 배양액을 분리한다. 균체에는 200 mL의 아세톤을 가하여 고형 성분과 용액을 분리한다. 배양액 600 mL에 동량의 클로로포름을 가하고 상온에서 30분 동안 추출하였다. 각각의 유기용매층을 수거하고 합쳐서 감압하에 농축시킨 후, 농축물에 300 mL의 메틸렌클로라이드를 가하고 상온에서 1시간 동안 추출하여 메틸렌클로라이드에 용해되는 성분만을 재추출하였다. 이 추출물을 용출액으로서 헥산/에틸아세테이트(4:6(v/v))를 사용하는 2회의 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼: Merck, Kieselgel 60, 230-400 mesh, Art 9385)를 실시하여 분리하였다. 활성 분획을 수거하여 농축한 후 용출액으로서 물/메탄올(2:8(v/v))을 사용하는 역상 크로마토그래피(컬럼: Merck Lichroprep, RP-18, 60-63㎛, Art 13900)로 분리하여 Grb2-Shc 결합 저해활성을 나타내는 3가지 단일 화합물을 얻었다.
순수 분리된 화합물 1, 2 및 3의 수율은 발효액 1 L당 각각 1.7 mg, 2 mg, 0.8 mg이었다.
실시예 3: 저해물질의 물리화학적 특성 확인
가. UV 흡수 스펙트럼
화합물 1, 2, 3을 100% MeOH에 녹여 UV 흡수 스펙트럼을 측정하였다. 화합물1의 최대 흡수 파장은 364 nm와 286 nm이고 271 nm 부근에서 약간의 숄더(shoulder)가 있는 것을 확인하였다.
나. 질량분석 스펙트럼
분자량을 HREI-MS로 측정한 결과, 화합물 1, 2, 3의 [M+] 피크가 각각 403.1576, 390.1219, 394.1549에서 나타났다. 화합물 1의 계산된 분자량(M.W.)(403.1552)으로부터 확인된 화학식은 C22H26NO4Cl이고, 화합물 2의 계산된 M.W.(390.1234)로부터 확인된 화학식은 C21H23O5Cl이고, 화합물 3의 계산된 M.W. (394.1548)로부터 확인된 화학식은 C21H27O5Cl이다. 이 화학식들은13C과1H NMR 스펙트럼을 분석해서 얻은 결과와 일치하였다.
다. IR 스펙트럼
화합물 1, 2, 3의 IR 스펙트럼은 바이오래드 윈-IR(Bio-Rad Win-IR)로 측정하여 얻었다. 화합물 1의 특징적인 피크는 2962, 2928, 2872, 1743, 1697, 1611, 1579, 1278, 1245 cm-1에서, 화합물 2의 특징적인 피크는 1741, 1726, 1669, 1630, 1621, 1581 cm-1에서, 그리고 화합물 3의 특징적인 피크는 3430, 2960, 2930, 1870, 1750, 1670, 1560, 1270 cm-1에서 나타난 것을 볼 수 있었다. 이와 같은 흡수 피크를 분석해 본 결과 화합물 1, 2, 3에는 공통적으로 방향족 C=C (1600∼1575 cm-1), 올레핀 C=C (1670∼1600 cm-1), CH(3000∼2800 cm-1), 에스테르 C=O (1750-1730 cm-1), 콘쥬게이트(conjugated) C=O (1680-1630 cm-1)등과 같은 작용기들이 존재함을 알 수 있었다. 화합물 3의 경우에는 OH(3525∼3200 cm-1), 1의 경우에는 C-N(1370∼1250 cm-1)등의 작용기가 화합물 2보다 추가적으로 존재함을 확인하였다. 화합물 1의 IR 흡수 스펙트럼이 도 1에 나타나 있다.
라. NMR 스펙트럼
화합물 1, 2, 3의 구조식을 결정하기 위해1H,13C, DEPT,1H-1H COSY, HMQC, HMBC 등의 NMR 분석 연구를 수행하였다. 도 2 내지 도 4는 화합물 1, 2, 3의 수소 NMR 스펙트럼이고, 도 5는 화합물 3의 탄소 NMR 스펙트럼이다. 여러 가지 NMR 데이타와 분자량, 화학식을 종합해 볼 때 이 화합물들은 아자필론류의 화합물인 것으로 밝혀졌다.
상기의 각종 기기분석 스펙트럼 및 하기 표 1에 나타낸 물리화학적 성질을 비교해 본 결과, 화합물 2와 3은 각각 기존에 이미 포스포리파제 A2에 대해 저해활성을 갖는 것으로 알려진 스클레로티오린과 ACAT 저해제로 알려진 이소크로모필론 IV로 확인되었다. 화합물 1은 기존의 스클레로티오린과 유사한 점이 많은데,1H,13C-NMR 스펙트럼의 분석 결과와 분자량으로부터 분자식을 얻은 결과를 종합해보면 2번 위치에 있는 산소가 아민으로 치환된 구조임을 유추해 낼 수 있었다. 이것은 HMBC 스펙트럼의 분석결과로 증명된다. 8aC (δ119.7)는 1H (δ8.97), 4H (δ7.49)와 8C (δ160.6)는 18CH3(δ1.52), 8C 메톡시 (δ3.96)와 상호작용이 있는 것을 확인함으로써 화합물 1의 구조를 얻은 결과 알려진 아자필론류의 화합물에서는 볼 수 없었던 새로운 유도체임을 알 수 있었다.
화합물 1 화합물 2 화합물 3
외양 미황색 검 황색 분말 황색 분말
HREI-MS[M+] 403 390 394
분자식 C22H26NO4Cl C21H23O5Cl C21H27O5Cl
UV λmax(MeOH) 286 (18000)364 (24000) 285 (9100)363 (21000) 249 (4500)340 (7800)
Rf 값 (헥산:EA=15:5) 0.46 0.35 0.19
가용성 CHCl3, EtOAc, MeOH CHCl3, EtOAc,MeOH CHCl3, EtOAc,MeOH
불용성 H2O H2O H2O
[α]D 20 ＋110(c 0.1, MeOH) ＋480(c 0.04, EtOH) －340(c 0.2, MeOH)
융점(℃) 점도가 큰 액상 200∼205 83∼85
실시예 4: Grb2-Shc 결합 활성 측정
결합 활성 저해도는 Grb2에 결합하는 Shce 단백질의 펩타이드 부분을 이용하여 측정하는데, 구체적으로는, [3H]프로피오닐화 hShc 펩타이드와 Grb2 단백질을 결합시킨 후 본 발명의 화합물들을 첨가하여 경쟁적으로 결합시키므로서 분리된 물질의 Grb2 단백질과의 상대적 결합정도를 측정하여 산출하였다.
결합 활성을 측정하기 위해, 1.5 ㎖ 용량의 에펜도르프 튜브(eppendorf tube)에 반응액으로서 0.3 ㎍ GST-Grb2 융합 단백질(Santa Cruz Biotech Inc.) 10 ㎕, SPA PVT 항체-결합 비드(Amersham Co.) 10 ㎕, 0.1 μCi [3H]프로피오닐화 hShc 펩타이드(Amersham Co.) 10 ㎕, 6 ㎍ 항-GST 토끼 IgG(Molecular Probes) 10 ㎕, 순수 DMSO 10 ㎕를 넣고, SH2 완충용액(20 mM 트리스-HCl, 250 mM NaCl, 0.1% 우혈청알부민, pH 7.4)을 넣어 전체 반응 부피가 200 ㎕가 되게 하였다. 저해활성을 측정하고자 하는 시료 1mg을 100 ㎕의 DMSO에 용해시켜 시료용액을 만든 후 10 ㎕를 반응액에 첨가하였으며, 공시료에는 GST-Grb2를 넣지 않았고, 대조군 시료는 저해물질 없이 DMSO 만을 사용하였다. 상기의 시료용액을 2배씩 희석하면서 결합 활성을 검색하여 50% 저해활성 농도를 결정하였다. 결합 활성 검색에 사용된 반응액의 조성을 표 2에 나타내었다.
성 분 공시료(㎕) 대조구(㎕) 시료(㎕)
SPA PVT 항체-결합 비드 10 10 10
항-GST, 토끼 IgG 10 10 10
GST-Grb2 융합 단백질 - 10 10
[3H]프로피오닐화 hShc 펩타이드 10 10 10
DMSO 10 10 10
SH2 완충액 160 150 150
총 부피 200 200 200
이렇게 혼합한 반응액을 살짝 볼텍스(vortexing)한 후 실온에서 30-40분 동안 진탕 반응하였다. 반응이 끝난 후에는 액체 섬광 계수기를 사용하여 에펜도르프 튜브의 방사능을 cpm(count/min) 단위로 측정하였다.
Grb2-Shc 결합 저해 활성정도는 아래 수학식 1과 같이 계산하였다.
상기 방법에 따라, 본 발명의 화합물들이 Shc-Grb2 결합을 50% 저해하는 농도(IC50)를 측정한 결과, 화합물 1은 6 μM, 화합물 2는 12 μM, 화합물 3은 11 μM로 각각 나타났다.
본 발명의 화합물들은 세포내 신호전달과정에 관여하는 Grb2와 Shc의 결합을 저해하여 라스 발암유전자의 발현 및 라스단백질을 통한 신호전달의 조절을 통하여 암세포의 분화와 성장을 억제하므로 새로운 종류의 항암제로서 사용될 수 있다. 또한, 새포내 신호전달을 조절하여 항암제로서 뿐만 아니라 천식(Asthmas), 암전이, 심혈관질환 및 자기면역질환(Autoimmune disease) 치료제로서도 사용될 수 있으며, 세포내 신호전이 기전 연구에도 유용하다.

Claims (5)

  1. Grb2와 Shc의 결합을 저해하는 하기 화학식 1의 화합물:
    화학식 1
  2. (a) 페니실리움 멀티칼라(Penicillium multicolor) F1753 균주(KCTC 8874P)의 배양물을 균체와 배양액으로 나누어 각각 유기용매로 추출하고,
    (b) 각 유기 용매층을 수거하여 감압 농축한 후 여기에 유기용매를 가하여 재추출하고,
    (c) 헥산과 에틸아세테이트의 혼합물을 용출액으로 사용하는 2회의 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하고,
    (d) 물과 메탄올의 혼합물을 용출액으로 사용하는 역상 크로마토그래피를 실시하는 단계를 포함하는,
    하기 화학식 1, 2 또는 3의 화합물의 분리방법:
    화학식 1
    화학식 2
    화학식 3
  3. 하기 화학식 1 내지 3의 화합물중 하나 이상을 함유하는, Grb2-Shc 결합 저해용 조성물.
    화학식 1
    화학식 2
    화학식 3
  4. 제3항에 있어서,
    항암 효과를 나타내는 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    세포내 신호전달 연구에 이용되는 조성물.
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