KR100297184B1 - 항혈소판제로서의입체배좌적으로억제된펩타이드동족체및이를포함하는약제학적조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 혈소판 응집 억제제로서의 입체배좌적으로 억제된 (Conformational1y restrained) 펩타이드 동족체에 관한 것이다. 이들 화합물은 혈소판 응집을 억제하는 혈소판 GPIIb-IIIa 인테그린 (integrin) 수용체에 대한 피브리노겐의 결합을 억제하여 이들 화합물은 강력한 항혈전제로서 작용한다.

Description

[발명의 명칭]
항혈소판제로서의 입체배좌적으로 억제된 펩티드 동족체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
[발명의 분야]
본 발명은 혈소판 응집 억제제로서의 입체배좌적으로 억제된(conformationally restrained) 펩티드 동족체에 관한 것이다. 이런한 화합물은 혈소판 응집을 억제하는 혈소판 GPIIb-IIIa 인테그린(integrin) 수용체에 대한 피브리노겐의 결합을 억제하여, 강력한 항혈전제로서 작용한다.
[발명의 배경]
혈소판은 전혈에서 발생하며 혈전 형성 및 혈액 응고의 필수 성분이다. 인테그린 상과(superfamily)의 일군인 당단백질 IIb-IIIa는 혈소판 표면 위에서 발견되고 아미노산 서울 Arg-Gly-Asp를 함유하는 피브리노겐과 같은 단백질과의 상호작용에 의해 혈소판 작용에 참여한다. 다양한 인자가 피브리노겐과의 상호작용을 허용하고 혈소판 응집 및 혈전 형성을 자극하는 GPIIb-IIIa 수용체를 활성화시킨다. 피브리노겐과 같은 Arg-Gly-Asp 함유 펩티드와 GPIIb-IIIa 와의 상호작용을 억제하는 화합물은 임의의 자극에 의한 혈소판 활성화를 길항시키므로 중요한 항혈전제이다.
많은 질병 상태가 혈전 형성으로 인한 혈관 폐쇄를 특징으로 한다. 이들 혈전 질환중 일부는 심극 경색, 발작, 폐동맥 색전증, 심부의 정맥 혈전증, 말초동맥 폐쇄 및 혈관 형성술 이후 관산 동맥 재폐쇄이다. 혈액이 인위적 표면 위에서 유동하는 환자는 또한 혈전 형성에 대한 위험이 있다. GPIIb-IIIa 수용체에 대한 피브리노겐의 결합을 억제함으로써 혈소판 응집을 억제하는 제제가 이들 과혈전 상태에 유용하다.
다양한 치료적 증상에 유용한 "브릿징" 잔기 및 "아미노산 유사" 잔기 등을 갖는 작은 사이클릭 펩티드는 이미 당해 기술분야에 공개되어 있다. 이러한 점에서, 하기 문헌을 참조할 수 있다:
- WO-A 제91/0133는 혈소판 응집 억제제로 유용한, 환에 트리펩티드 서열 Arg-Gly-Asp 및 알킬(또는 티오에테르와 같은 기타) 결합을 함유한 특정한 합성 사이클릭 펜타펩티드에 관한 것이고, - WO-A 제92/00995호는 세포 접착 조절 활성을 특징으로 하고, 심혈관 질환, 혈소판 응집 등을 포함하는 많은 질환의 연구, 진단 또는 치료에 유용한 사이클릭 펩티드 및 펩티드 유사 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 다양한 길이의 펩티드이고 Arg-Gly-Asp 서열 또는 이의 동족체를 함유하며 골격 (CH2NH) 아미드 결합 치환체로 아미노산 잔기 측쇄를 폐환시켜 입체배좌적으로 억제된 제제를 기술한다. 기술된 폐환 방법은 증요한 Arg-Gly-Asp 서열에서 입체배좌적 억제를 함유한 다양한 길이의 선형 펩티드의 제조를 허용한다. 다양한 펩티드 길이와 국소적 입체배좌적 억제의 조합은 높은 혈소판 응집 억제 활성을 갖는 펩티드를 제공한다.
[발명의 요약]
항혈소판제는 하기 일반식(Ⅰ)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드 동족체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염의로 구성된다.
상기식에서,
Y는 단편-A1-A2-A3-NR1R2(여기서, A1은 결합하거나 Ser, Asp, Met, Trp, Phe 및 Ala로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, A2는 결합이거나 Pro, Nle, Met, Leu, Asn, Asp, Val, Arg 및 Leu로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이며, A는 결합이거나 Ala, Asp, Pro 및 Asn으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, R1및 R2는 각각 독립적으로 수소, Cl, Br, NO2, NH2, OH, 및 OCH3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 한 개 내지 세 개의 치환체에 의해 임의로 치환된 C1-C10, 알킬, 벤질, 인돌릴, 피리디닐 또는 페닐이다)이며,
Z는 단편 -W-A6-A5-A4-[여기서 A4는 결합이거나 Gly 및 βAla로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, A5는 결합이거나 Arg, Lys, Thr, Ile, Lue, Phe, Asp, Asn 및 Val로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이며, A6결합이거나 Val, Lys, Arg, Asp, Asn 및 Ala로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, W는 수소, 석시닐, C1-C10아실, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1내지 4의 정수이다)이다]이며, X는 CONH, CH2NH, CONH2, CH2CH2, -CH2O- 또는 -CH=CH-이고, R은 수소C1-C10알킬, 벤질, 인돌릴, 나프틸, 티에닐, p-HO-벤질, p-NO-벤질, p-Cl-벤질 및 p-NH2-벤질이며, n은 1내지 3의 정수이고, 단 A6, A5및 A4중의 하나가 아미노산인 경우, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5( 또는 -(CH2)pCO2H가 아니다.
이러한 입체배좌적으로 억제된 펩티드 동족체 및 이의 약제학적 조성물은 항혈전제로서 유용하다.
[발명의 상세한 설명]
용어 "C1-C10알킬"은 탄소수 1 내지 10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 예를 들면 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3급-부틸, 펜틸, 이소펜틸, 2급-펜틸, 헥실 이소헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐 또는 데실이다. 용어 "C1-C10아실"은 탄소수 1 내지 10의 직쇄 또는 측쇄 아실 그룹, 예를 들면, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 발레릴, 헥사노일, 헵타노일, 옥타노일, 노나노일, 테카노일 등이다.
천연 아미노산의 다음 통상적 약어를 본 명세서를 통하여 사용한다:
Ala - 알라닌
Arg - 아르기닌
Gly - 글리신
Asp - 아스파르트산
Glu - 글루탐산
Leu - 로이신
Trp - 트립토판
Ser - 세린
Met - 메티오닌
Phe - 페닐알라닌
Pro - 프롤린
Nle - 노르로이신
Asn - 아스파라긴
Val - 발린
Ala - 베타 알라닌
Lys - 리신
Ile - 이소로이신
다양한 보호 그룹의 다음 통상적 약어를 본 명세서를 통하여 사용한다:
Boc = t-부틸옥시카보닐
Bn = 벤질
Chxl = 사이클로헥실
Tos 또는 Tosyl = p-톨루엔설포닐
Cbz = 카보벤질옥시
Ac = 아세틸
Suc = 석시닐
TFA = 트리플루오로아세트산
C6H5= 치환되지 않은 페닐
펩티드 서열로 도입된 각 아미노산과 함께 사용되는 α-아미노 보호 그룹은 당해 기술분야에 공지된 어떠한 보호 그룹도 될 수 있다. 고려되는 아미노산 보호 그룹의 부류 중에는, 아실형 보호 그룹(Ⅰ), 예를 들면, 포르밀, 트리플루오로아세틸, 프탈릴, 톨루엔설포닐(Tos 또는 토실), 벤젠설포닐, 니트로-페닐설페닐, 트리틸설페닐, o-니트로페녹시 아세틸 및 α-클로로부티릴: 방향족 우레탄형 보호 그룹(2), 예를 들면, 벤질옥시카보닐 및 치환된 벤질옥시카보닐(예: p-클로로벤질옥시 카보닐, p-니트로벤질옥시카보닐, p-브로모벤질옥시카보닐, p-메톡시벤질옥시카보닐, 1-(p-비페닐릴)-1메틸에톡시-카보닐, α, α'-디메틸-3,5-디메톡시벤질옥시카보닐 및 벤즈하이드릴옥시카보닐); 지방족 우레탄 보호 그룹(3), 예를 들면, 3급-부틸옥시카보닐(Boc) 디이소프로필-메톡시카보닐, 이소프로필옥시카보닐, 에톡시카보닐 및 알릴옥시카보닐; 사이클로알킬우레탄형 보호 그룹(4), 예를 들면, 사이클로펜틸옥시카보닐, 아다만틸옥시카보닐 및 사이클로헥실옥시카보닐; 티오우레탄형 보호 그룹(5), 예를 들면 페닐티오카보닐; 알킬형 보호 그룹(6), 예를 들면, 트리페닐메틸(트리틸) 및 벤질; 및 트리알킬실란 그룹(7), 예를 들면, 트리메틸실란이 있다. 바람직한 α-아미노 보호 그룹은 3급-부틸옥시카보닐(Boc)이다.
본 발명의 입체배좌적으로 억제된 펩티드 유도체를 기술하는데 사용되는 다른 명명법은 Ψ[CH2NH], Ψ[COCH2], Ψ[CH2O], Ψ[CH2CH2] 및 Ψ[E-CH=CH]{여기서, 기호 "Ψ" 은 변형된 펩티드 결합을 나타낸다}이다.
글리신을 제외한 천연 아미노산은 키랄 탄소원자를 함유한다. 달리 상세히 명시되지 않는 한, 광학 활성 아미노산은 L-구조이다. R 치환체를 함유하는 탄소원자의 입체화학은 D-구조 또는 L-구조이다. 통상적으로, 본원에 기술된 펩티드의 구조는 아미노 말단이 쇄의 좌측이고 카복시 말단이 쇄의 우측인 구조이다.
특정한 일반식(Ⅰ) 의 입체배좌적으로 억제된 펩티드는 과혈전 상태를 치료하는 방법에서 바람직하다. X가 COHN, COCH2또는 CH2CH22인 일반식(Ⅰ)의 펩티드 유도체가 바람직하며, Y가 벤질아민 또는 Asp-NH2인 펩티드 유도체; n이 2인 펩티드 유도체, R이 CH3, 벤질 또는 p-OH-벤질인 펩티드 유도체 및 Z가 석시닐, -(CH2)3CO2H 또는 CH3CO-Asp-Gly-인 펩티드 유도체가 바람직하다.
일반식(Ⅰ)의 펩티드 유도체는 무독성 유기산 또는 무기산과 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 적합한 염을 형성하는 무기산의 예로는, 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산 및 나트륨 일수소 오르토포스페이트 및 황산 수소 칼륨과 같은 산금속염이 포함된다. 적합한 염을 형성하는 유기산의 예로는, 모노, 디 및 트리카복실산이 포함된다. 이러한 산은, 예를 들면, 아세트산, 클리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타루산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 2-페녹시벤조산 및 설폰산(예: 메탄설폰산, 트리플루오로메탄설폰산 및 2-하이드록시에탄설폰산)이다.
화학 화합물의 일반적인 그룹과 같은, 특정 그룹이 바람직하다. Z가 H, Ph-(CH2)3-, HO2C-(CH2)3- 또는 Ac-Asp-Gly-이며, X가 -CONH-, -COCH2- 또는-CH2CH2이고, Y가 NHCH2Ph 또는 Asp-NH2이며, R이 -CH3, -CH2Ph 또는 4-OH-CH2Ph인 일반식(Ⅰ)의 펩티드 유도체가 바람직하다.
X가 CONH인 일반식(Ⅰ)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드는 당해 기술분야의 통상의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 이들 화합물을 제조하기 위한 통상적인 합성 공정을 반응 도식A에 기술하였다. 반응 도식 A에서, 모든 치환체는 달리 언급하지 않는 한 이미 상술한 바와 같다.
[반응 도식 A]
상기식에서,
Z'은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)이고, Z"은 W-A6-A5-A4-[여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다]이다.
반응 도식 A는 X가 CONH2인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 공정을 제공한다.
단계(a)에서는, 구조(Ⅰ)의 적합한 N-Boc-아미노(O-Bn)산을 구조(2)의 적합한 아민 또는 펩티드 잔기로 아미드화시켜서 구조(3)의 상응하는 N-Boc-아미노(O-Bn)산 아미드를 수득한다. 구조(1)의 적합한 N-Boc 아미노(O-Bn)산 출발물질의 예는 Boc-Asp(β-Bn)(n=1), Boc-Glu(β-Bn)(n=2) 또는 0ε-Bn-Nα-Boc-아미노아디프산(n=3)이다.
예를 들면, 구조(Ⅰ)의 적합한 N-Boc-아미노(O-Bn)산을 몰 당량의 구조(2)의 적합한 아민 또는 펩티드 잔기, 몰 과량의 활성화제(예: 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3에틸카보디이미드 하이드로클로라이드의 혼합물)와 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 메틸렌 클로라이드 또는 테트라하이드로푸란과 같은 적합한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 실온에서 5 내지 24시간 동안 함께 교반한다. 구조(3)의 N-Boc-아미노(O-Bn)산 아미드를 당해 기술분야에 공지된 추출 공정에 의해 반응 영역으로부터 회수한다. 이는 크로마토그래피로 정제할 수 있다.
적합한 커플링제의 선택은 당해 기술분야의 기술 범주 내에 있다. 적합한 커플링제는 (1) 카보디이미드(예:N,N'-디사이클로헥실카보디이미드); (2) 시안아미드(예: NN-디벤질시안아미드); (3) 케텐이민; (4) 이속사졸리움 염(예: N-에틸-5-페닐-이속사졸리움-3'-설포네이트); (5) 환에 한개 내지 네개의 질소를 함유한 방향족 특성의 모노사이클릭 질소 함유 헤테로사이클릭 아미드(예: 이미다졸리드, 피라졸리드 및 1,2,4-트리아졸리드)이다. 유용한 특정 헤테로사이클릭 아미드는 N, N'-카보닐디이미다졸 및 N, N'-카보닐-디-1,2,4,-트리아졸); (6) 알콕시화된 아세틸렌(예: 에톡시아세틸렌); (7) 아미노산의 카복실 잔기와 혼합된 무수물을 형성하는 시약(예: 에틸클로로포르메이트 및 이소부틸클로로포르메이트) 또는 커플링된 아미노산의 대칭성 무수물(예:Boc-Phe-P-Phe-Boc) 및 (8) 한 개의 환 질소에 하이드록시 그룹을 갖는 질소 함유 헤테로사이클릭 화합물(예: N-하이드록시프탈이미드, N-하이드록시석신이미드 및 1-하이드록시-벤조트리아졸)이다. 펩티드 커플링 에서 다른 활성 시약 및 이의 용도는 참조로 본 발명에 인용되는 문헌[참조: Kapoor, J. Phatm. Sci., 59, 1-27 1970]에 기술되어 있다.
단계(b)에서는, 구조(3)의 적합한 N-Boc-아미노(O-Bn)산 아미드의 N-Boc 보호 그룹을 제거하여 구조 (4)의 상응하는 아미노(O-Bn)산 아미드 염을 수득한다.
예를 들면, 구조(3)의 적합한 N-Boc-아미노(O-Bn)산 아미드를 무수 염산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 적합한 산과 접촉시킨다. 반응물은 전형적으로 디옥산과 같은 적합한 극성 유기 용매에서 접촉된다. 반응물은 전형적으로 15분 내지 4시간 동안 함께 실온에서 교반한다. 구조(4)의 아미노(O-Bn)산 아미드염을, 용매를 증발시켜 반응 영역으로부터 회수한다. 이는 크로마토그래피에 의해 정제 할 수 있다.
단계(c)에서는, 구조(4)의 적합한 아미노(O-Bn)산 아미드 염을 단계(a)에서 기술한 바와 같이 구조(5)의 N-Boc-Asp(β-Chxl)와 커플링시켜 구조(6)의 상응하는 N-Boc-Asp(β-Chxl)아미노(O-Bn)산 아미드를 수득한다.
단계(d)에서는, 구조(6)의 적합한 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노(O-Bn)산 아미드의 벤질 보호 그룹을 제거하여 구조(7)의 상응하는 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드를 수득한다.
예를 들면, 구조(6)의 적합한 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노(O-Bn)산 아미드를 펄만(Perlman) 촉매와 같은 적합한 수소화 촉매의 촉매량과 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로 메탄올과 같은 적합한 양성자성 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 파아르(Paar) 수소화 장치상에서 실온에서 2 내지 24시간 동안 수소화시킨다. 구조(7)의 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드를 여과 및 용매 증발 시켜 반응 영역으로부터 회수한다. 이를 크로마토그래피로 정제할 수 있다.
단계(e)에서는, 구조(7)의 적합한 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드를 옥심 수지와 커플링시켜 구조(8)의 상응하는 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
예를 들면, 구조(7)의 적합한 Nα-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드를 몰 과량의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드와 같은 적합한 커플링제와 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 메틸렌 클로라이드 또는 테트라하이드로푸란과 같은 적합한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로 실온에서 2 내지 24시간 동안 함께 교반하고, 여과하고, 아세트산 무수물:디이소프로필틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)와 같은 적합한 캡핑 혼합물과 15분 내지 10시간 동안 교반한다. 구조(8)의 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 여과시켜 반응 영역으로부터 회수한다.
단계(f)에서는, 구조(8)의 적합한 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N-Boc 보호 그룹을 제거하여 구조(9)의 상응하는 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다. 예를 들면, 구조(8)의 적합한 N-Boc-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 아니솔과 함께 트리플루오로아세트산과 같은 적합한 산과 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 메틸렌 클로라이드와 같은 적합한 유기 용매 중에서 전형적으로 접촉시킨다. 반응물을 실온에서 10 내지 30분동안 함께 교반한다. 구조(9)의 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 여과에 의한 반응 영역으로부터 회수한다.
단계(g)에서는, 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 Nα-Boc-Gly-대칭성 무수물(10)과 커플링시켜 구조(11)의 상응하는 Nα-Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
예를 들면, 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 N-Boc-Gly-대칭성 무수물(10) 2.5mol 당량과 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 디메틸포름아미드와 같은 적합한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로는 실온에서 1 내지 12시간 동안 함께 교반하고, 여과하고, 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)와 같은 적합한 캡핑 혼합물과 15분 내지 10시간 동안 교반한다. 구조(11)의 N-Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 여과시켜 반응 영역으로부터 회수한다.
단계(h)에서는, 구조(11)에 적합한 N-Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 Nα-Boc 보호 그룹을 단계(f)에서 상술한 바와 같이 제거하여 구조(12)의 상응하는 Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(i)에서는, 구조(12)의 적합한 Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 단계(g)에서 상술한 바와 같이 N-Boc-Arg(Ng-Tos) 대칭성 무수물(13)과 커플링시켜서 구조(14)의 상응하는 N-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(j)에서는, 구조(14)의 적합한 N-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 Nα-Boc 보호 그룹을 단계(f)에서 상술한 바와 같이 제거 하여 구조(15)의 상응하는 Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(k)에서는, 구조(15)의 적합한 Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 구조(16)의 적합한 D 또는 L-N-Boc-NHCHR-알데히드와 커플링시켜 구조 (17)의 상응하는 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
예를 들면, 구조(15)의 적합한 Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 2.5 mol 당량의 구조(16)의 적합한 D 또는 L-N-Boc-NHCHR-알데히드 및 몰 당량의 나트륨 시아노보로하이드라이드와 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로 실온에서 1 내지 10시간 동안 교반한다. 구조 (17)의 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 여과시키고 용매로 세척하여 반응 영역에서 회수한다.
임의의 단계(l)에서는, 구조(17)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 Ψ[CH2NH] 작용기를 당해 기술분야에 익히 공지된 환원적 알킬화와 같은 알킬화에 의해 구조(18)의 상응하는 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서, Z" 은 W-A6-A5-A4-{여기서, W는, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다]를 폐환시켜 구조(19)의 상응하는 사이클로 NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드 [여기서, Z"은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -((CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다]를 수득한다.
예를 들면, 구조(17)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 구조(18)의 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 [여기서, Z"은 W-A6-A5-A4{여기서, W는, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다]의 N-Boc를 단계(f)에서 상술한 바와 같이, 처음에 제거하여 상응하는 중간체 NH2CHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 NH2CHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 [여기서, Z"은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다]를 수득한다.
중간체 NH2CHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 NH2CHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 [여기서, Z''은 W-A6-A5-A4{여기서, W는, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다]를 폐환시키고 디케틸포름아미드 중의 1% 아세트산과 같은 적합한 희석산과 접촉시켜 옥심 수지로부터 제거한다. 반응물을 전형적으로 실온에서 2시간 내지 2일 동안 함께 진탕한다. 구조(19)의 사이클로 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다]을 용매를 증발시켜 반응 영역으로 부터 회수한다. 이것을 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.
임의의 단계(n)에서는, 구조(19)의 적합한 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드 [여기서, Z''은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 는 수소이며, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 당해 기술분야에 공지된 바와 같이 아실화하여 구조(20)의 상응하는 사이클로로[NH2CHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드 [여기서, Z'은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]을 수득한다.
또한, 구조(19)의 적합한 시아클로 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드 (여기서, Z"은 W-A6-A5-A4{이고, W는 수소이며, A6, A5및 A4는 결합이다)을 당해 기술분야에 공지된 표준 펩티드 화학에 의해 구조 (20)의 상응하는 사이클로 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드[여기서, Z'은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 수소이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]로 전환시킨다. 그런 다음 펩티드 측쇄 A6-A5-A4의 말단 아미노를 당해 기술분야에서 공지된 바와 같이 아실화시켜서 구조(20)에 상응하는 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드[여기서, Z'은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]를 수득한다.
단계(o)에서는, 구조(19)의 적합한 사이클로 NH2CHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 [여기서, Z"은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다]또는 구조(20)의 적합한 사이클로 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드[여기서, Z'은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]의 보호 그룹을 제거하여 구조(21)의 상응하는 사이클로 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z)]-Arg-Gly-Asp-아미노산 아미드를 수득한다.
예를 들면, 구조(19)의 적합한 사이클로 [NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드 옥심 수지 [여기서, Z"은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다}이다] 또는 구조(20)의 적합한 사이클로 [NH2CHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산] 아미드 (여기서, Z'은 W-A6-A5-A4{여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고, A6, A5및 A4중 하나 이상은 아미노산이다}이다]를 불화수소 및 아니솔과 같은 적합한 스캐빈저와 접촉시킨다. 반응물을 전형적으로 0℃에서 20분 내지 1시간 동안 함께 교반한다. 구조(21)의 사이클로 [NHCHR-Ψ[CH2N(Z)]-Arg-Gly-Asp-아미노산]아미드를 용매를 증발시켜 반응 영역으로부터 회수한다. 이를 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.
반응 도식 A에서 사용하기 위한 출발물질은 당해 기술분야의 숙련가에 의해 용이하게 입수될 수 있다. 예를 들면, 옥심 수지는 문헌[참조:J.Org, Chem., 45 1295-1300 1980]에 기술되어 있다.
하기 실시예들은 반응 도식 A에 기술된 바와 같은 전형적인 합성법을 나타낸다. 이들 실시예들은 단지 예시로만 이해되며 어떤 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하려는 것은 아니다. 여기서 사용되는 바와 같이 하기 용어는 다음과 같다:
"g"는 그램; "mmol"은 밀리몰; "㎖"는 밀리리터; "bp"는 비점; "mp"는 융점; "℃"는 섭씨도; "mmHg"는 수은의 밀리미터; "㎕"는 마이크로리터; "㎍"은 마이크로그람; "㎛"은 마이크로몰을 나타낸다.
실시예 1MDL-101, 429KM
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-SEQ 서열확인번호: 1
단계(a): Boc-Glu(δ-Bn)(NHBn)
디클로로메탄(40㎖)에 Boc-Glu(δ-Bn)(6.68g, 19.8mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이레이트(3.4g, 25.2mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(4.2g, 21.9mmol) 및 벤질아민(2.2㎖, 20mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(250㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 80㎖), 포화 탄산수소나트륨 (3 x 80㎖) 및 포화 염화나트륨(80㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 백색 결정성 고체 (8.19g, 97%)로서 표제 화합물을 수득한다.
단계(b): Glu(δ-Bn)(NHBn) 하이드로클로라이드
디옥산 중의 4 염산 용액(40㎖)에 Boc-Glu(δ-Bn)(NHBn)(8.19g, 19.2mmol)을 용해시킨다. 실온에서 30분동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜 취성발포체로서 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)(NHBn)
디메틸포름아미드(50㎖)에 Glu(δ-Bn)(NHBn) 하이드로클로라이드(19.2mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(3.27g, 21mmol), Boc-Asp(β-Chxl)(6.04g, 19.2mmol), 트리에틸아민(4.7㎖) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(4.08g, 21.3mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(300㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 125㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 100㎖), 물(150㎖) 및 포화 염화나트륨(150㎖)으로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 백색 결정성 고체(11.57g)로서 표제 화합물을 수득한다.
단계(d):Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(NHBn)
메탄올(200㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)(NHBn)(11.57g. 18.6mmol)을 용해시키고 펄만 촉매(200mg)을 가한다. 4시간 동안 파아르 수소화 장치에서 수소화시키고, 셀라이트 필터를 통해 여과시키고 용매를 진공중에서 증발시켜 취성 육리 발포체(10g, 100%)로서 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)
메틸렌 클로라이드(140㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(NHBn)(10g, 18.6mmol)을 용해시킨다. 옥심 수지(21g, 0.69meq/g, 14.5mmol) 및 메틸렌 클로라이드(42㎖, 21mmol) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 0.5N 용액을 가하여 20시간 동안 회전 증발기에서 혼합한다. 여과하고, 디메틸포름아미드(2 x 260㎖), 메틸렌 클로라이드(200㎖), 메탄올(3 x 200㎖)및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(2 x 260㎖), 메탄올( 3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드 (3 x 200㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제화합물(26.3g)을 수득한다.
단계(f): Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)
Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)(5.2g, 2mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함하는 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로 아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)
Boc-Gly(2.1g, 12mmol)와 메틸렌 클로라이드(12㎖)를 혼합하고, 메틸렌 클로라이드(12㎖, 6mmol) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 0.5M 용액을 가한다. 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하여 용액으로서 생성된 Boc-Gly 대칭성 무수물을 사용한다.
Boc-Gly 대칭성 무수물 용액에 Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)을 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(3 x 50㎖), 이소프로판올(3 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드(2 x 50㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 포제 화합물(5.15g)을 수득한다.
단계(h): Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)
Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)(5.15g)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 50㎖ 용액으로 간단히 2회 세척하고 여과하여 포제 화합물을 수득한다.
단계(i): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 2
메틸렌 클로라이드(15㎖)에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)(6.43g, 15mmol)을 현탁시키고 메틸렌 클로라이드(15g, 7.5mmol)와 디메틸포름아미드(4㎖) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드의 0.5M 용액을 가한다. 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하여 용액으로서 생성된 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos) 대칭성 무수물을 사용한다.
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos) 대칭성 무수물 용액에 Gly-Asp(β-Chxl) -Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)을 가한다. 실온에서 3시간 동안 진탕하고 여과하고 디메틸포름아미드(2 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하에서 표제 화합물(6.11g)을 수득한다.
단계(j): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 3
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 2(6.11g)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 50㎖ 용액으로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물(6)을 수득한다.
단계(k): Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 4
무수 테트라하이드로푸란(30㎖)에 Boc-Ala(1.89g, 10mmol)를 용해시키고, 1,1'-카보닐디이미다졸(1.8g,11mmol)을 한다. 디메틸포름아미드(10㎖)와 이소프로필에틸아민(2.6㎖) 중의 N.O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(1.44g,15mmol) 용액에 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(150㎖)로 희석한다. 0.5N 염산 (3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)으로 세척한다. 건조(MgSO4)하고, 여과하고 용매를 진공중에 증발시켜 백색 결정성 고체로서 Boc-Ala(NCH3(OCH3))(1.95g, 84%)을 수득한다; 융점 148-149℃
C10H20N2O4에 대한 원소분석
계산치 : C, 51.71; H, 8.68; N, 12.06;
실측치 ; C, 52.07; H, 8.87;N, 12.00
무수 테트라하이드로푸란(40㎖)에 Boc-Ala(NCH3(OCH3) (1.16g, 5mmol)을 용해시키고 빙욕에서 냉각한다. 테트라하이드로푸란(3.1㎖) 중의 수소화알루미늄리튬 1M 용액을 가하고 5℃에서 40분 동안 교반한다. 황산수소나트륨 수용액(0.75g, 15㎖)로 급냉시키고 물(150㎖)로 희석된다. 에틸 아세테이트(3 x 40㎖)로 추출하고, 건조(MgSO4)하고 용매를 진공에서 증발시켜 백색 결정성 고체로서 Boc-Ala-al을 수득한다.
디메틸포름아미드(10㎖) 중의 1% 아세트산 용액에 Boc-Ala-al(5mmol)을 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 3(1.5g, 0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150㎖)를 가한다. 2시간 동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖)로 세척하고 여과에 의해 수집하여 표제 화합물(1.42g)을 수득한다.
단계(m): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 5
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 4(5mmol)을 메틸렌 클로라이드(25㎖) 중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라디드(20㎖), 메틸렌 클로라이드중의 1% 디이소프로필에틸아민 (2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산의 용액에 현탁시키고 2일 동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 진공에서 용매를 증발시키고 아세트산에 잔류 오일을 용해시킨다. 동결 건조시켜 포제 화합물(269mg, 68%)를 수득한다.
단계(o): 사이클로 [AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)CF3CO2H-서열확인 번호: 1
불화수소와 아니솔에 사이클로 [AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](α-NHBn)(서열확인 번호: 5)(269mg)을 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232mg)을 수득하고 역상-HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물(34.2mg)을 수득한다.
FAB MS : 604.2 (M+H)+
AAA: Asp, 0.98;
Glu, 1.02;
Gly, 0.86.
[실시예 2]
사이클로[AlaΨ[CH2NH(CO(CH2)2CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)CF3CO2H-서열확인 번호: 6
임의의 단계(n): 사이클로 [AlaΨ[CH2NH(CO(CH2)2CO2H)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)-서열확인 번호: 7
디메틸포름아미드(10**)에 사이클로 [AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- Glu](NHBn)(서열확인번호: 5)(0.5mmol)를 현탁시키고 디이소프로필에틸아민(0.44㎖)과 석신산 무수물(250mg, 2.5mmol)을 가한다. 4시간 동안 진탕하고, 여과하고, 티메틸포름아미드로 세척하고 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(o): 사이클로 [AlaΨ[CH2NH(CO(CH2)2CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)CF3CO2H-서열확인번호: 6
불화수소와 아니솔에 사이클로 [AlaΨ[CH2NH(CO(CH2)2CO2H)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn) 서열확인 번호: 7 (183mg)을 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(139mg)을 수득한다. 역상-HPLC(수성트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
실시예 3 MDL 100,187
사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)CF3CO2H-서열확인번호: 8
임의의 단계 (l): Boc-[AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu- (δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인 번호: 9
디메틸포름아미드(10㎖) 중의 1% 아세트산에 Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 4)(0.5mmol)을 현탁시킨다. 석신산 세미알데히드(1.6㎖, 수중 5%) 및 나트륨 시아노하이드라이드(100mg)을 가한다. 4시간 동안 진탕하고, 여과하고 디메틸포름아미드 및 디클로로메탄으로 세척하고 진공에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(m):사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δGlu](NHBn)-서열확인번호:10
Boc-[AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu- (δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 9(0.5mmol)을 메틸렌 클로라이드(25㎖)중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖)및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
티메틸포름아미드 중의 1% 아세트산의 용액에 현탁시키고 4일동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 진공에서 용매를 증발시키고 아세트산에 잔류 오일을 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물(408mg, %)을 수득한다.
단계(o): 사이클로[AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 8
불화수소와 아니솔에 사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δGlu](NHBn)(서열확인번호 : 10)(408mg)을 현탁시킨다. 0℃ 에서 1시간동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(32mg)을 수득하고 역상-HPLC(수성트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물(32.7mg)을 수득한다.
(M+N)+= 690.4
AAA: Asp, 1.04;
Glu, 1.05;
Gly, 0.91;
61.8% 펩티드
[실시예 4]
사이클로[AlaΨ[CH2N((CH2)3Ph)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호:11
9
임의의 단계(l): Boc-AlaΨ[CH2N((CH2)3Ph)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호:12
디메틸포름아미드(10㎖) 중의 1% 아세트산에 Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ- 옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 4)(0.5mmol)을 현탁시킨다. 디하이드로신알데히드(0.33㎖, 336mg) 및 나트륨 시아노하이드라이드(100mg)을 가한다. 4시간 동안 진탕하고, 여과하고, 디메틸포름아미드 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(m): 사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)3Ph)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)-서열확인번호:13
Boc-AlaΨ[CH2N((CH2)3Ph)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호:12)(0.5mmol)을 메틸렌 클로라이드(25㎖) 중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올( 3 x20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산의 용액에 현탁시키고 4일 동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 진공에서 용매를 증발시키고 아세트산에 잔류 오일을 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물(176mg)을 수득한다.
단계(o):사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)3Ph)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호:11
블화수소와 아니솔에 사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)3Ph)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)(NHBn)(서열확인번호:13)(176mg)을 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득하고 역상-HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
(M+N)+= 722.5
AAA: Asp, 1.01;
Glu, 1.03;
Gly, 0.96;
57.5% 펩티드
[실시예 5]
사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)2Ph)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호:14
임의의 단계(n):사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)2Ph)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu](NHBn)-서열확인번호: 15
하이드로신남산(751mg, 5mmol)과 메틸렌 클로라이드(12㎖)를 혼합하고 메틸렌 클로라이드(5㎖)와 함께 1-메틸-2-피롤리디논(2.5㎖) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 1M 용액을 가한다. 실온에서 1시간 동안 교반하고 여과하여 하이드로신남산 대칭성 무수물 용액을 수득한다
하이드로신남산 대칭성 무수물 용액에 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)(서열확인번호 : 5)(0.5mmol)을 현탁시킨다. 디이소프로필에틸아민(0.44㎖)를 가하고 4시간 동안 진탕한다. 여과하고, 디메틸포름아미드 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(o):사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)2Ph)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 14
불화수소와 아니솔에 사이클로 [AlaΨ[CH2N((CH2)2Ph)]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)(서열확인번호: 15)(0.5mmol)을 현탁시킨다. 0℃에서 1시간동안교반한다. 용매를 증발시키고, 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득하고 역상-HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
[실시예 6]
사이클로 [AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](LeuNHBn)CF3CO2H
단계(a): Boc-Glu(δ-Bn)(LeuNHBn)
디옥산(10㎖)중의 4N 염산 용액 Boc-Leu(NHBn)(1.60g, 5mmol)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고, 용매를 진공중에서 증발시켜 Leu(NHBn)· 하이드로클로라이드로서 표제 화합물을 수득한다.
디클로로메탄(10)에 Boc-Glu(δ-Bn)(1.60g, 5mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.84g, 5.5mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(1.05g, 5.5mmol), Leu(NHBn) 하이드로클로라이드(5) 및 디이소프로필에틸아민(1.36㎖, mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(200㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 백색 결정성 고체(2.5g, 93%)로서 표제 화합물을 수득한다
MS (CI/CH4) 540(M+N+)
단계(b) : Glu(δ-Bn)-Leu(NHBn) 하이드로클로라이드
디옥산(10㎖)중의 4N 염산용액에 Boc-Glu(δ-Bn)-Leu(NHBn)(2.5g)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Leu(NHBn)
디메틸포름아미드(10㎖)에 Glu(δ-Bn)-Leu(NHBn) 하이드로클로라이드(4.6mmol)를 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.78g, 5.06mmol), Boc-Asp(β-Chxl)(1.46g, 4.6mmol), 디이소프로필에틸아민(1.34㎖) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(0.98g, 5.06mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(150㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조((MgSO4))하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 고체로서 표제 화합물(3.27g, 96%)을 수득한다.
MS (CI/CH4) 737 (M+N+)
단계(d):Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Leu(NHBn)
메탄올(200㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Leu(NHBn)(18.6mmol)을 용해시키고 펄만 촉매(200mg)을 가한다. 4시간 동안 파아르 수소화 장치상에서 수소화시키고 셀라이트 필터를 통해 여과하고 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)
메틸렌 클로라이드(140㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Leu(NHBn)(18.6mmol)을 용해시킨다. 옥심 수지(21g, 0.69meq/g, 14.5mmol) 및 메틸렌 클로라이드(42㎖, 21mmol) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 0.5M 용액을 가하여 20시간 동안 회전 증발기 상에서 혼합한다. 여과하고, 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메틸렌 클로라이드(200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물:디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 티메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메탄올( 3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(f): Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)
Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)(2mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판을(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)-서열확인번호: 16
Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)를 Boc-Gly 대칭성 무수물의 용액에 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반하고 여과하고 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(3 x 50㎖), 이소프로판올(3 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드(2 x 50㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h): Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)-서열확인번호: 17
Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)(서열확인번호: 16)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(i): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)-서열확인번호: 18
디메틸포름아미드(40㎖)에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos) 대칭성 무수물(7.5mmol)을 용해하고 Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)(서열확인번호 17)(0.5mmol)을 가한다. 실온에서 3시간 동안 진탕하고 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(j):Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)-서열확인번호: 19
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(-옥심 수지)-Leu(NHBn)(서열확인번호: 18)(0.5mmol)DMF 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고 25분 동안 교반하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(k): Boc-AlaΨ[CH2NH-]Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)-서열확인번호: 20
디메틸포름아미드(10㎖) 중의1% 아세트산 용액에 Boc-Ala-al(5mmol)을 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)(서열확인번호: 19)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150㎖)를 가한다. 2시간 동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖)와 메틸렌 클로라이드 (3 x 20㎖)로 세척하고 용매를 진공하게 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(m):사이클로[AlaΨ[CH2NH-]Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu]-Leu(NHBn)
Boc-AlaΨ[CH2NH-]Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Leu(NHBn)(서열확인번호: 20)(0.5mmol)를 메틸렌 클로라이드(25㎖)중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖) 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 다이소프로필에틸아민(2 x 25) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산의 용액에 현탁시키고 2일 동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 진공에서 용매를 증발시키고 아세트산에 잔류 오일을 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(o): 사이클로로[AlaΨ[CH2NH-]Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·CF3CO2H
불화수소 및 아니솔에 사이클로 [AlaΨ[CH2NH-]Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu]-Leu(NHBn) (269mg)을 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232mg)을 수득하고 역상-HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
[실시예 7]
사이클로[AlaΨ[CH2NH-]Arg-Gly-Asp-Glu]-Trp(NHBn)·CF3CO2H
단계 (a): Boc-Glu(δ-Bn)-Leu(NHBn)
디옥산(10㎖) 중의 4N 염산 용액에 Boc-Trp(NHBn)(1.97g, 5mmol)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공에서 증발시켜 Trp(NHBn)·하이드로클로라이드를 수득한다.
디클로로메탄(10㎖)에 Boc-Glu(δ-Bn)(1.60g, 5mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.84g, 5.5mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(1.05g, 5.5mmol) 및 Trp(NHBn)·하이드로클로라이드(5mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.36㎖, mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(200㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨 (3 x 50mmol) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 고체(3.11g, 100%)로서 표제 화합물을 수득한다.
MS (CI/CH4) 613(M+N+)
단계(b):Glu(δ-Bn)-Trp(NHBn) 하이드로클로라이드
디옥산(10㎖)중의 4N 염산 용액에 Boc-Glu(δ-Bn)-Trp(NHBn)(3.11g)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): BoC-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Trp(NHBn)
디메틸포름아미드(10㎖)에 Glu(δ-Bn)-Trp(NH게) 하이드로클로라이드(5mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.84g, 5.5mmol), Boc-As(δ-Chxl)-Trp(NHBn) (1.58g, 5mmol), 디이소프로필 에틸아민(1.46㎖) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(1.05g, 5.5mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(150㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨( 3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 고체(3.77g, 93%)로서 표제 화합물을 수득한다.
MS(CI/CH4) 810 (M+N)+
단계(d): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Trp(NHBn)
메탄올(200㎖)에 BoC-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Trp(NHBn)(18.6mmol)을 용해시키고 펄만 촉매(200mg)을 가한다. 4시간 동안 파아르 수소화 장치상에서 수소화시키고 셀라이트 필터를 통해 여과시키고 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(e):BoC-Asp(β-Chxl)-Glu(-옥심 수지)-Trp(NHBn)
메틸렌 클로라이드(140㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Trp(NHBn)(18.6mmol)을 용해시킨다. 옥심 수지(21g, 0.69meq/g, 14.5mmol) 및 메틸렌 클로라이드(42㎖, 21mmol) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 0.5M 용액을 가하여 20시간 동안 회전 증발기 상에서 혼합한다. 여과하고, 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메틸렌클로라이드(200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 홉합물에 30분동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(f):Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)
Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn) (2mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)-서열확인번호: 21
Boc-Gly 대칭성 무수물의 용액에 Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)(0.5mmol)을 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(3 x 50㎖), 이소프로판올(3 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드(2 x 50㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h):Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)-서열확인번호: 22
Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)(서열확인번호:21)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(i): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)-서열확인번호: 23
디메틸포름아미드(40㎖)에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos) 대칭성 무수물(7.5mmol)을 용해하고 Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)(서열확인번호: 22)을 가한다. 실온에서 3시간 동안 진탕하고 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(j): Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)-서열확인번호: 25
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)(서열확인번호: 24) (0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필 에틸아민 용액 50㎖ 로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(f): Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)
Boc-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(2mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드 (50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호: 31
Boc-Gly 대칭성 무수물의 용액에 Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)을 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메될포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(3 x 50㎖), 이소프로판올(3 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드(2 x 50㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h): Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)서열확인번호: 32
Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 31)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(i): Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호: 33
디메틸포름아미드(40㎖)에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)대칭성 무수물(7.5mmol)을 용해하고 Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 32)을 가한다. 실온에서 3시간 동안 진탕하고 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(j): Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호:34
Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 33)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에팅틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(k): Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Nα-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)-서열확인번호: 25
디메틸포름아미드(10㎖) 중의 1% 아세트산 용액에 Boc-Al-al(5mmol)을 용해시킨다. Arg(Nα-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)(서열확인번호: 24)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150㎖)을 가한다. 2시간 동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖)로 세척하고 진공에서 용매를 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(m): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Nα-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu]-Trp(NHBn)
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Nα-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Trp(NHBn)(서열확인번호: 25)(0.5mmol)을 메틸렌 클로라이드(25㎖) 중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산의 용액에 현탁시키고 2일 동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 진공에서 용매를 증발시키고 아세트산에 잔류 오일을 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(o): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NHBn)·CF3CO2H
불화수소 및 아니솔에 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu]-Trp(NHBn)(269㎎)을 현탁시킨다. 0℃ 에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎎)을 수득하고 역상-HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
[실시예8]
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu-Trp(NHBn)·CF3CO2H
단계(a): Boc-Glu(δ-Bn)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)
디옥산(10㎖) 중의 4N 염산 용액에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)NHBn(2.59g, 5mmol)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공에서 증발시켜 Arg(Ng-Tos)(NHBn)·하이드로클로라이드를 수득한다.
디클로로메탄(10㎖)에 Boc-Glu(δ-Bn)(1.60g, 5mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.84g, 5.5mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(1.05g, 5.5mmol), Arg(Ng-Tos)(NHBn)·하이드로클로라이드(5m0l) 및 디이소프로필에틸아민(1.36㎖, mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(200㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 고체(295g, 80%)로서 표제 화합물을 수득한다.
MS (Neg Ion CI/CH4) 735 (M-H)-
단계(b): Glu(δ-Bn)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)하이드로클로라이드
디옥산(10㎖) 중의 4N 염산 용액에 Boc-Gul(δ-Bn)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(2.95g)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)
디메틸포름아미드(10㎖)에 GlU(β-Bn)-Arg(Ng-Tos)(NHBn) 하이드로클로라이드(4mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.67g, 4.4mmol), Boc-Asp(β-Chxl)(1.26g, 4mmol), 디이소프로필에틸아민(1.12㎖) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(0.84g, 4.4mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(150㎖)로 회석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 고체(1.21g, 32%)로서 표제 화합물을 수득한다.
MS(FAB CI/CH4) 943.5 (M+H+)
단계(d): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Arg(Ng-Tos)(NHBn)
메탄올(200M)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(18.6mmol)을 용해시키고 펄만 촉매(200㎎)을 가한다. 4시간 동안 파아르 수소화 장치에서 수소화시키고 셀라이트 필터를 통해 여과시키고 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)
메틸렌 클로라이드(140㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(1.86mmol)을 용해시킨다. 옥심 수지(21g, 0.69meq/g, 14.5mmol) 및 메틸렌 클로라이드(42㎖, 21mmol) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 0.5M 용액을 가하여 20시간 동안 회전 증발기 상에서 혼합한다. 여과하고, 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메틸렌 클로라이드(200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(f): Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)
Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(2mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)-서열확인번호: 26
Boc-Gly 대칭성 무수물의 용액에 Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(0.5mmol)을 가한다. 실온에서 2시간동안 교반하고, 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(3 x 50㎖), 이소프로판올(3 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드(2 x 50㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h): Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)서열확인번호: 27
Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn) (서열확인번호: 26)(0.5mmol을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소 프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(i): Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)-서열확인번호: 28
디메틸포름아미드(40㎖)에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos) 대칭성 무수물(7.5mmol)을 용해하고 Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(서열확인번호: 27)을 가한다. 실온에서 3시간 동안 진탕하고 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(j): Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)서열확인번호: 29
Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(서열확인번호: 28)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(k): Arg-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)-서열확인번호: 30
디메틸포름아미드(10㎖)중의 1% 아세트산 용액에 Boc-Ala-al(5mmol)을 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(서열확인번호: 29)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150mg)을 가한다. 2시간 동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖)로 세척하고 진공에서 용매를 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(m): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg[Ng-Tos]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu]-Arg(Ng-Tos)-(NHBn)
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)Arg(Ng-Tos)(NHBn)(서열확인번호: 30)(0.5mmol)을 메틸렌 클로라이드(25㎖) 중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산의 용액에 현탁시키고 2일 동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 진공에서 용매를 증발시키고 아세트산에 잔류 오일을 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물)를 수득한다.
단계(o): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Arg(NHBn)·CF3CO2H
불화수소 및 아니솔에 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp-(β-Chxl)-δ-Glu]-Arg(Ng-Tos)(NHBn)(269㎎)을 현탁시킨다. 0℃ 에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎎)을 수득하고 역상-HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
[실시예 9]
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NHBn)·CF3CO2H
단계(a): Boc-Glu(δ-Bn)-Asp(β-Chxl)(NHBn)
디옥산(10㎖) 중의 4N 염산 용액에 Boc-Asp(β-Chxl)(NHBn)(2.02g, 5mmol)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공에서 증발시켜 Asp(δ-Chxl)(NHBn) ·하이드로클로라이드를 수득한다.
디클로로메탄(10㎖)에 Boc-Glu(δ-Bn)(1.60g, 5mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.84g, 5.5mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(1.05g, 5.5mmol), Asp(β-Chxl)(NHBn) ·하이드로클로라이드(5mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.36㎖, mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(200㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하고 진공중에서 용매를 증발시켜 고체(3.05g, 98%)로서 표제 화합물을 수득한다.
MS (CI/CH4) 624 (M+H)+
단계(b): Glu(δ-Bn)-Asp-(β-Chl)(NHBn)하이드로클로라이드
디옥산(10㎖) 중의 4N 염산 용액에 Boc-Glu(δ-Bn)-Asp-(β-Chxl)(NHBn)(3.05g, 4.89mmol)을 용해시킨다. 실온에서 30분 동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜 표제 화합물올을 수득한다.
단계(c): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Asp(β-Chxl)(NHBn)
디메틸포름아미드(10㎖)에 Glu(δ-Bn)-Asp(β-Chxl)(NHBn) 하이드로클로라이드(4.89mmol)을 용해하고 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(0.82g, 5.38mmol), Boc-Asp(β-Chxl)(1.54g, 4.89mmol), 디이소프로필에틸아민(1.39㎖) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(1.03g, 538mmol)을 가한다. 실온에서 밤새 교반하고 에틸 아세테이트(150㎖)로 희석한다. 0.5N 염산(3 x 50㎖), 포화 탄산수소나트륨(3 x 50㎖) 및 포화 염화나트륨(50㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)하고 여과하여 진공중에서 용매를 증발시켜 고체로서 표제 화합물을 수득한다.
MS (CI/CH4) 821 (M+H)+
단계(d): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Asp(β-Chxl)(NHBn)
메탄올(200M)에, Boc-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-Bn)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(18.6mmol)을 용해시키고 펄만 촉매(200㎎)을 가한다. 4시간 동안 파아르 수소화 장치상에서 수소화시키고, 셀라이트 필터를 통해 여과시키고 용매를 진공중에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): Boc-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)
메틸렌 클로라이드(140㎖)에 Boc-Asp(β-Chxl)-Glu-Asp(β-Chxl)(NHBn)(18.6mmol)을 용해시킨다. 옥심 수지(21g, 0.69meq/g, 145mmol) 및 메틸렌 클로라이드(42㎖, 21mmol) 중의 1,3-디사이클로헥실카보디이미드 0.5M 용액을 가하여 20시간동안 회전 증발기 상에서 혼합한다. 여과하고, 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메틸렌 클로라이드(200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200M)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메틸포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(2 x 200㎖), 메탄올(3 x 200㎖) 및 메틸렌 클로라이드(3 x 200㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(f): Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)
Boc-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(2mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드 (50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호: 31
Boc-Gly 대칭성 무수물의 용액에 Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)을 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖)로 세척한다. 아세트산 무수물 : 디이소프로필에틸아민 : 디메될포름아미드(6 : 2 : 24)의 캡핑 혼합물에 30분 동안 현탁시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드(3 x 50㎖), 이소프로판올(3 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드(2 x 50㎖)로 세척한다. 진공중에서 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h): Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)서열확인번호: 32
Boc-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 31)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(i): Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호: 33
디메틸포름아미드(40㎖)에 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)대칭성 무수물(7.5mmol)을 용해하고 Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 32)을 가한다. 실온에서 3시간 동안 진탕하고 여과하여 디메틸포름아미드(2 x 50㎖) 및 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 진공에서 건조하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(j): Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호:34
Boc-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 33)(0.5mmol)을 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하여 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반하여 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에팅틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(k): 사이클로Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)-서열확인번호: 35
디메틸포름아미드(10M)중의 1% 아세트산 용액에 Boc-Ala-al(5mmol)을 용해
시킨다. Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu)(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 34)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150mg)을 가한다. 2시간 동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(3x 20㎖)로 세척하고 진공에서 용매를 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(m): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu]-Asp(β-Chxl)(NHBn)
Boc-[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)-Asp(β-Chxl)(NHBn)(서열확인번호: 35)(0.5mmol)을 메틸렌 클로라이드(25㎖) 중의 25% 트리플루오로아세트산으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 현탁시키고 2일동안 진탕시킨다.여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 용매를 진공 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(o): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu]-Asp(NHBn)·CF3CO2H
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu]-Asp(β-Chxl)(NHBn)(0.5mmol)을 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 1시간동안 0℃에서 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 냉동건조시켜 표제 화합물을 수득하고 역상 HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
하기 화합물을 실시예 1 내지 9에서 상술한 과정과 유사하게 제조할 수 있다.
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)3CO2H]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
X가 CH2NH인 일반식(I)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드 동족체를 당해 기술분야의 숙련가는 제조할 수 있다. 이들 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성 과정은 반응 도식 B에 기재되어 있다. 반응 도식 B에서, 달리 언급하지 않는한 모든 치환체는 상술한 바와 같다.
반응 도식 B
상기식에서,
Z'은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)이고,
Z''은 W-A6-A5-A4-[여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다]이다.
반응 도식 B는 X가 CH2NH인 일반식(I)의 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성 과정을 제공한다.
단계(a)에서는, 구조(12)의 적합한 Gly-Asp(β-Chxl)아미노산 아미드 옥심 수지를 Nα-Boc-Ng-Tos 아르기니날(22)과 커플링시켜 구조(23)의 상응하는 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
예를 들어, 구조(12)의 적합한 Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 몰 당량의 Nα-Boc-Ng-Tos 아르기니날(22) 및 몰 당량의 나트륨 시아노보로하이드라이드와 접촉시킨다. 반응물은 디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산과 같은 적합한 산성 유기 용매 혼합물중에서 접촉한다. 1 내지 5시간 동안 실온에서 반응물들을 함께 진탕시킨다. 구조(23)의 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 반응 영역으로부터 여과하여 회수하고 용매로 세척한다.
단계(b)에서는, 구조(23)의 적합한 N-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 GlyΨ[CH2NH] 작용기를 보호시켜서 구조 (24)의 상웅하는 N-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 제공한다.
예를 들어, 구조(23)의 적합한 N-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 벤질 클로로포르메이트 2.5㎖ 당량 및 염기(예: 트리에틸아민) 3㎖ 당량과 접촉시킨다. 반응물을 메틸렌 클로라이드와 같은 적합한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 실온에서 15분 내지 10시간 동안 함께 교반한다. 구조(24)의 N-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지는 여과하여 반응 영역으로 부터 회수한다.
단계(c)에서는, 구조(24)의 적합한 N-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N-Boc 보호 그룹을 상기 반응 도식 A의 단계(f)에 기술된 바와 같이 제거하여 구조(25)의 상응하는 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(d)에서는, 구조(25)의 적합한 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl) 아미노산 아미드 옥심 수지를 구조(16)의 적합한 D 또는 L- Boc-NHCHR-알데히드와 반응 도식 A의 단계(k)에 기술된 바와 같이 커플링시켜 구조(26)의 상응하는 Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
임의의 단계(e)에서는, 구조(26)의 적합한 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH] 작용기를 반응 도식 A의 임의의 단계(o)에서 기술한 바와 같이 알킬화하여 구조(27)의 상응하는 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다)또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, AA6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
단계(f)에서는, 구조(26)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 구조(27)의 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지(여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 반응 도식 A의 단계(m)에서 기술한 바와 같이 폐환하여 구조(28)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(C2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
임의의 단계(g)에서는, 구조(28)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소이고, A6, A5및 A4는 결합이다)를 반응 도식 A의 임의의 단계(n)에서 기술한 바와 같이 아실화시켜 구조(29)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서, Z'는 W-A6-A5-A4-이고, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)를 수득한다.
또한, 구조(28)의 적합한, 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서, Z''은 W-A6-A5-A4이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4은 결합이다)를 당해분야에 공지된 표준 펩티드 화학에 의해 구조(29)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서, Z'는 W-A6-A5-A4이고 W는 수소이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)를 수득한다. 펩티드 측쇄 A6-A5-A4의 말단 아미노는 당해 기술분야에 공지된 바와 같이 아실화시켜 구조(29)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z'은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]를 수득한다.
단계(h)에서는, 구조(28)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4은 결합이다)이다] 또는 구조(29)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z'은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]의 보호 그룹을 반응 도식 A의 단계(o)에 기술된 바와 같이 제거하여, 구조(30)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z)]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-아미노산]아미드를 수득한다.
반응 도식 B에서 사용된 출발 물질은 당해 기술분야에서 숙련가에게는 쉽게 구입가능하다. 예를 들어 N-Boc-Ng-Tso 아르기니날은 문헌에 기술되어 있다[참조: J. M Maraganore, J. W. Fanon and T. Kline, PCT International Publication Number WO 91/02750, March 7, 1991].
하기 실시예는 반응 도식 B에 기술된 대표적인 합성을 제공한다. 이러한 실시예는 단지 예시적인 것이며 본 발명의 영역을 제한하는 것은 아니다.
[실시예 10]
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 36
단계(a): Nα-Boc-Arg-(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 37
Nα-Boc-Ng-Tos 아르기니날(5mmol)을 디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액(l0㎖)에 용해시키고 Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150㎎)를 가한다. 2시간 동안 진탕한 후 여과한다.
디메틸포름아미드(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(3x20㎖)로 세척하고 여과하여 표제화합물을 회수한다.
단계(b): Nα-Boc-Arg-(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 38
메틸렌 클로라이드(7㎖)에 벤질 클로로포르메이트(5mmol)를 용해시키고, Nα-Boc-Arg-(Ng-Tos)Ψ[CH2NH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 37)(1.0mmol)을 가한후 트리에틸아민(0.26㎖, 2.0mmol)을 가한다. 실온에서 30분간 교반한 후 디메틸포름아미E(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(3x20㎖)로 세척하고 표제 화합물을 여과하여 회수한다.
단계(c): Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호:39
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 38)(0.5mmol)를 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25%트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하고 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고 25분 동안 교반하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(d): Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)-서열확인번호: 40
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 10㎖ Arg-Ala-al(5mmol)을 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 39)(0.50.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150㎎)을 가하고 2시간 동안 진탕한 후 여과한다. 디메틸포름아미드(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(3x20㎖)로 세척하고 여과하여 표제 화합물을 회수한다.
단계(f): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호:41
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 40)(0.5mmol)을 메틸렌 클로라이드 증의 25% 트리플루오로아세트산(25㎖)으로 25분간 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3x20㎖), 이소프로판올(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 현탁시키고 2일간 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 용매를 진공 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h):사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2Nh]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 36
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N-Cbz]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)(서열확인번호: 41)(269㎖)을 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎖)을 수득하고 역상 IPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)로 정제하여 표제화합물을 수득한다.
[실시예 11]
사이클로[AlaΨ[CH2N(CH3)]-ArqΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호:42
임의의단계(e): Boc-AlaΨ[CH2N(CH3)]-Arq(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)](NHBn)-서열확인번호: 43
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 40)(5mmol)을 메탄올(Mg로부터 증류)(50㎖)에 현탁시키고 포름알데히드(수중 37% 용액 0.405㎖, 5mmol), 나트륨 시아노보로하이드라이드(0.62g, 5mmol) 및 메탄올 중의 1% 브로모크레졸 그린 1방울을 가한다. 지시제가 더이상 변화없을때까지 메탄올 중의 1N HCl로 반응물의 pH를 유지하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(f): 사이클로[AlaΨ[CH2N(CH3)]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)-서열확인번호:44
Boc-AlaΨ[CH2N(CH3)]-Arq(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)](NHBn)(서열확인번호: 43)(5mmol)을 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산(25㎖)로 25분간 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3x20㎖), 이소프로판올(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 현탁시키고 2일간 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 용매를 진공 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h): 사이클로[AlaΨ[CH2N(CH3)]-ArqΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 42
사이클로[AlaΨ[CH2N(CH3)]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2N(Cbz)]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)(서열확인번호: 44)(269㎖)을 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎖)을 수득하고 역상 HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
하기 화합물은 실시예 10 내지 11에 기술한 것과 동일한 과정으로 제조할 수 있다:
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨCH2NH]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)3CO2H]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(CH2)3CO2H]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2) ·TFA; 및
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2NH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
X가 CH=CH인 일반식 (I)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드 동족체는 당해 기술분야의 숙련가에 의해 제조할 수 있다. 이러한 화합물을 제조하기 위한 일반적 인 합성 과정은 반응 도식 C에 기재되어 있다. 반응 도식 C에서 모든 치환체는 달리 언급 하지 않는한 상술한 바와 같다.
상기식에서,
Z'은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)이고,
Z''은 W-A6-A5-A4-[여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다]이다.
반응 도식 C는 X가 CH=CH인 일반식(I)의 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성 과정을 제공한다.
단계(a)에서는 N-Boc-Ng-Tos 아르기니날(22)을 위티그 조건하에 (3-트리메틸실릴-2-프로피닐)트리페닐포스포늄 브로마이드(31)와 커플링시켜 E-8-(토실구아니디노)-5-(t-부틸옥시카보닐아미노)-3-엔-트리메틸실릴옥틴(32)을 수득한다.
예를 들어, (3-트리메틸실릴-2-프로피닐)트리페닐포스포늄 브로마이드(31)을 먼저 1㎖ 당량의 적합한 염기(예: n-부틸리튬)와 접촉시킨다. 반응물을 통상 적합한 무수 용매(예: 테트라하이드로푸란)중에서 접촉시킨다. 반응물을 통상 5분 내지 2시간동안 -78 내지 0℃에서 함께 교반시킨다. 생성된 중간체를 몰 당량의 N-Boc-Ng-Tos 아르기니날(22)와 접촉시킨다. 반응물을 통상 2 내지 24시간 동안 0℃ 내지 실온에서 함께 교반한다. E-8-(토실구아니디노)-5-(t-부틸옥시카보닐아미노)-3-엔-트리메틸실릴옥틴(32)을 당해 기술분야에 공지된 추출법으로 반응 영역으로부터 회수한다. 크로마토그래피로 정제할 수 있다.
단계(b)에서는, E-8-(토실구아니디노)-5-(t-부틸옥시카보닐아미노)-3-엔-트리메틸실릴옥틴(32)는 산화되어 Na-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]Gly(33)을 제공한다.
예를 들어, E-8-(토실구아니디노)-5-(t-부틸욱시카보닐아미노)-3-엔-트리메틸실릴옥틴(32)를 디사이클로헥실보란과 같은 환원제 2㎖ 당량과 먼저 접촉시킨다. 반응물을 통상 테트라하이드로푸란과 같은 적합한 유기 용매중에서 접촉시키며 실온에서 2 내지 24시간동안 교반한다. 생성된 보란 착화합물을 수성 수산화나트륨/과산화수소의 혼합물과 같은 적합한 산화제 몰 과량과 접촉시킨다. 반응물을 통상 -20 내지 0℃ 온도에서 1분 내지 1시간 동안 함께 교반한다. 당해 기술분야에 공지된 추출법으로 Na-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]Gly(33)를 반응 영역으로부터 회수한다. 이를 크로마토그래피하여 정제할 수 있다.
단계(c)에서는, Na-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]Gly(33)을 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지와 커플링시켜 구조(34)의 상응하는 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
예를 들어, Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]Gly(33)를 2㎖ 당량의 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지, 2㎖ 당량의 활성화제, 예를 들어 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸 카보디이미드 하이드로클로라이드의 혼합물 및 적합한 비친핵성 염기, 예를 들어 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민과 접촉시킨다. 반응물을 통상 메틸렌 클로라이드 또는 테트라하이드로푸란과 같은 적합한 유기 용매 중에서 접촉시키며, 5 내지 24시간 동안 실온에서 함께 교반한다. 구조(34)의 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지는 여과하여 반응 영역으로부터 회수한다.
단계(d)에서는, 구조(34)의 적합한 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 Idc 보호 그룹은 반응 도식 A의 단계(f)에서 상술한 바와 같이 구조(35)의 상응하는 Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지로 제거된다.
단계(e)에서는, 구조(16)의 적합한 D 또는 L-N- Boc-NHCHR-알데히드(16)와 구조(35)의 적합 Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 반응 도식 A의 단계(k)에서 상술한 바와 같이 커플링시켜 구조(36)의 상응하는 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
임의의 단계(f)에서는, 구조(36)의 적합한 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH] 작용기를 반응 도식 A의 임의의 단계(o임의의 단계 상술한 바와 같이 알킬화시켜, 구조(37)의 상응하는 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
임의의 단계(g)에서는, 구조(36)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 구조(37)의 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 반응 도식 A의 단계(m임의의 단계 상술한 바와 같이 폐환시켜, 구조(38)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
임의의 단계(h)에서는, 구조(38)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)를 당해 기술분야에서 공지된 바와 같이 아실화시켜 구조(39)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 W-A6-A5-A4이고 W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4는 결합이다)를 수득한다.
또한, 당해 기술분야에 공지된 표준 펩티드 화학에 의해 구조(38)의 적합한 사이클로[N- NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z은 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)를 구조(39)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)로 전환시킬 수 있다. 펩티드 측쇄 A6-A5-A4의 말단 아미노는 공지된 방법으로 아실화시켜 구조(39)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 W-A6-A5-A4-이고, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)를 수득한다.
단계(i)에서는, 구조(38)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4은 결합이다)이다]
또는 구조(39)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소, C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)의 보호 그룹을 반응 도식 A의 단계(0)에서 상술한 바와 같이 제거하여, 구조(40)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z)]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-아미노산]아미드(40)을 수득한다.
반응 도식 C에서 사용하기 위한 출발물질은 당해 기술분야 숙련가에게는 쉽게 이용가능하다.
하기 실시예는 상기 반응 도식C에서 기술한 바와 같은 대표적인 합성을 제공한다. 이는 단지 설명하기 위한 것이며 어떠한 방식으로든지 본 발명의 영역을 한정하는 것으로 간주되지 않는다.
[실시예 12]
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[E-Ch=ch]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호:45
단계(a):E-8-(토실구아니디노)-5-(t-부틸옥시카보닐아미노)-3-엔-트리메틸실릴옥틴
무수 테트라하이드로푸란(250㎖)에 (3-트리메틸실릴-2-프로피닐)트리페닐포스포늄 브로마이드(24mmol)을 용해시키고 -78℃로 냉각하고 아르곤 대기하에 방치한다. 헥산 중의 n-부틸 리튬 용액(16.3㎖, 26mmol)을 가하고 -78℃에서 10분간 교반한 후 테트라하이드로푸란(50㎖) 중의 Nα-Boc-Arg-(Nε-Tos)-al(20mmol)의 용액을 적가한다. 10분간 교반하고 실온으로 가온하고 추가로 17시간동안 교반한다. 포화 염화암모늄(l00㎖)으로 희석하고 10% 수산화나트륨으로 2회 세척하고 건조(MgSO4)시킨다. 진공하에 용매를 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(b): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly
테트라하이드로푸란(30㎖)에 사이클로헥센(9.035g, 0.11㎖)을 용해시키고 -15℃로 냉각한다. 보란(테트라하이드로푸란 중의 2.3M 용액 24.1㎖)를 서서히 가하고 1시간 동안 -15℃에서 교반하여 디사이클로헥실보란(55㎖)을 수득한다.
테트라하이드로푸란(15㎖) 중의 E-8-(토실구아니디노)-5-(t-부틸옥시카보닐아미노)-3-엔-트리메틸실릴옥틴(25mmol)의 0℃ 용액을 가하고 반응 혼합물이 균질해질때까지 실온에서 교반한다. 0℃로 냉각하고 3N 수산화나트륨(25㎖)로 희석하고 30% 과산화수소(20㎖)를 가하여 즉시 산화시킨다. 탄산칼륨으로 포화시키고 1N염산으로 수층을 산성화시키고 상충을 경사분리한다. 수성 상을 에틸 에테르(2X)로 추출하고 건조(MgSO4)시키고 용매를 진공하에 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 46
Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(10mmol), Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly(5.3mmol), 하이드록시벤즈트리아졸(1.65g, 11mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(2.1g, 11mmol)을 혼합한다.
메틸렌 클로라이드(20㎖) 중의 디이소프로필에틸아민(3.8㎖)의 용액을 가하고 실온에서 수시간 동안 교반한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(d): Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 47
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 46)(2mmol)를 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하고 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고 25분간 교반하고 여과한다. 메틸렌클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 48
Boc-Ala-al(5mmol)를 디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액(10㎖)에 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 47)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150mg)를 가한다. 2시간 동안 진탕한 후 여과한다. 디메틸포름아미드(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(3x20㎖)로 세척한 후 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 49
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 48)(5mmol)를 메틸렌 클로라이드 증의 25% 트리플루오로아세트산(25㎖)으로 25분간 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3x20㎖), 이소프로판올 (3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 현탁시켜 2일 동안 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 용매를 진공 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수독한다.
단계(i): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δGlu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 45
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly-Asp(β-Chxl)-δGlu](NHBn)(서열확인번호: 49)(269㎖)을 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎖)을 수득하고 이를 역상 HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
하기 화합물을 상기 실시예 12에서 기술한 과정과 유사하게 제조할 수 있다:
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(CH2)3CO2H)]ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(0)(CH2)2CO2H)]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA; 및
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[E-CH=CH]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
가 CH2CH2인 일반식(I)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드는 당해 기술분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 이러한 화합물의 일반적인 합성 과정은 반응 도식 D에 기재되어 있다. 반응 도식 D에서 모든 치환체는 달리 지시하지 않는한 상술한 바와 같다.
상기식에서,
Z'은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)이고,
Z''은 W-A6-A5-A4-[여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다]이다.
반응 도식 D는 X가 CH2CH2인 일반식(I)의 화합물을 제조하는 일반적인 합성과정을 제공한다.
단계(a)에서는, 적합한 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly(33)의 올레핀 작용기를 환원시켜 상웅하는 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly(41)을 수득한다.
예를 들어, 적합한 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly(33)을 적합한 수소화 촉매, 예를 들어 팔라륨/탄소 촉매량과 접촉시킨다. 반응물은 보통 적합한 양성자성 용매, 예를 들어 메탄올 중에서 접촉시키며 35 내지 50psi 범위의 압력에서 수소 대기하 실온에서 진탕한다. Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly(41)을 여과하고 용매를 증발시켜 반응 영역으로부터 회수한다.
단계(b)에서는, Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly(41)을 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지와 반응 도식 C의 단계(c)에서 기술한 바와 같이 커플링시켜, 구조(42)의 상응하는 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(c)에서는, 구조(42)의 적합한 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N-Boc 보호 그룹을 상기 반응 도식 A의 단계(f)에서 기술한 바와 같이 제거하여 구조(43)의 상응하는 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(d)에서는, 구조(43)의 적합한 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 구조(16)의 적합한 D 또는 N- Boc-NHCHR-알데히드와 상기 반응 도식 A의 단계(k)에서 기술한 바와 같이 커플링시켜 구조(43)의 상응하는 L-N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드옥심 수지를 수득한다.
임의의 단계(e)에서는, 구조(44)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH] 작용기를 상기 반응도 A의 임의의 단계(e)에서 기술한 바와 같이 알킬화시켜 구조(45)의 상응하는 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산 아미드 옥심 수지[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4은 결합이다)이다]를 수득한다.
단계(f)에서는, 구조(44)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 구조(45)의 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(X'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드옥심 수지[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4은 결합이다)이다]를 상기 반응 도식 A의 단계(m)에서 기술한 바와 같이 폐환시켜 구조(46)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
임의의 단계(g)에서는 구조(46)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'은 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)를 공지된 방법으로 아실화시켜 구조(47)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 A6-A5-A4이고, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4는 결합이다)를 수득한다.
또한, 구조(46)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z''은 W-A6-A5-A4-이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)를 공지된 표준 펩티드 화학에 의해 구조(47)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 W-A6-A5-A4이고 W는 수소이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)로 전환시킬 수 있다. 펩티드 측쇄 A6-A5-A4의 말단 아미노는 공지된 방법으로 아실화시켜 구조(47)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드(여기서 Z'는 W-A6-A5-A4이고 W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)를 수득한다.
단계(h)에서는, 구조(46)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]또는 구조(47)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서 Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10아실 또는 석시닐이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]의 보호그룹을 반응 도식 A의 단계(0)에서와 같이 제거하여 구조(47)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z)]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산]아미드를 수득한다.
반응 도식 D에서 출발물질은 당해 기술분야의 숙련가에게는 쉽게 이용가능하다.
하기 실시예는 반응 도식 D에서 기술한 바와 같은 대표적인 합성을 제공한다. 이 실시예는 단지 예시적인 것이며 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하는 것으로 간주될 수 없다.
[실시예 13]
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 50
단계(a): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[E-CH=CH]-Gly(5.5mmol)를 메탄올(50㎖)에 용해시켜 파아르 수소화 플라스크에 넣는다. 10% 팔라륨/C(500㎎)을 가한다. 용기를 50psi로 충전하고 18시간 동안 진탕한다. 셀라이트를 통해 여과하고 용매를 진공하에 제거하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(b): Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 51
Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(10mmol), Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly(10mmol), 하이드록시벤즈트리아졸(1.65g, 11mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(2.1g, 11mmol)를 혼합한다. 메틸렌 클로라이드(20㎖) 중의 디이소프로필에틸아민(3.8㎖)의 용액을 가하고 실온에서 수시간 동안 교반한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 52
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 51)(0.5mmol)를 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하고 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고 25분 교반하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 증의 1% 디이소프로필에틸아민의 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고 여과하여 표제 화합물몰 수득한다.
단계(d): Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 53
Arg-Ala-al(5mmol)를 디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액(10㎖)에 용해 시킨다. Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 52)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150㎎)을 가한다. 2시간 동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3x20㎖) 메틸렌 클로라이드(3x20㎖)로 세척하고 여과하여 표제화합물을 수득한다.
단계(f): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)-서열확인번호: 54
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호 53) (0.5mmol)를 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산(25㎖)로 25분간 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3x20㎖) 이소프로판올(3x20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 현탁시켜 2일간 진탕한다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다; 용매를 진공 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(h): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 50
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2CH2]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu](NHBn)(서열확인번호: 54)(269㎖)를 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎖)을 수득하고 역상 HPLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물을 수득한다. 하기 화합물은 실시예 13과 유사한 과정으로 제조할 수 있다:
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH22N(C(O)(CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H)]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA; 및
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2CH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
X가 COCH2인 일반식(I)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드는 당해 기술분야의숙련가에 의해 제조될 수 있다. 이들 화합물을 제조하는 일반적 합성 과정은 반응도식 E에 기재되어 있다. 반응 도식 E에서, 모든 치환체는 달리 언급하지 않는한 상술한 바와 같다.
반응 도식 E
상기식에서,
Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)이고,
Z''은 W-A6-A5-A4-[여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5, 및 A4는 결합이다]이다.
반응 도식 E는 X가 COCH2인 일반식(I)의 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성법을 제공한다.
단계(a)에서는, 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지
를 반응 도식 D, 단계(b)에 이미 나타낸 바와 같이 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ
[COCH2]-Gly-OH(49)와 커플링시켜 구조(50)의 상응하는 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(b)에서는, 구조(50)의 적합한 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N-Boc 보호 그룹을 반응 도식 A, 단계(f)에 이미 나타낸 바와 같이 제거하여 구조(51)의 상응하는 Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(c)에서는, 구조(51)의 적합한 Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 반응 도식 A, 단계(k)에 이미 나타낸 바와 같이 구조(16)의 적합한 D-또는 L-New-MEM-알데히드와 커플링시켜 구조(52)의 상응하는 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
임의의 단계(d)에서는, 구조(5)의 적합한 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]작용기를 반응 도식 A, 임의의 단계(o)에 이미 나타낸 바와 같이 알킬화하여 구조(53)의 상응하는 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서, Z은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득할 수 있다.
단계(e)에서는, 구조(52)의 적합한 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 구조(53)의 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 반응 도식 A, 단계(m)에 이미 나타낸 바와 같이 폐환시켜 구조(54)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
임의의 단계(f)에서는, 구조(54)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 당해 기술분야에 공지된 방법으로 아실화하여 구조(55)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서 Z'는 W-A6-A5-A4(여기서, W는 C1-C10-아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득할 수 있다.
또한, 구조(54)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 당해 기술분야에 공지된 표준 펩티드 화학을 사용하여 구조(55)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]로 전환시킬 수 있다.
이어서, 펩티드 측쇄 A6-A5-A4의 말단 아미노를 당해 기술분야에 공지된 대로 아실화하여 구조(55)의 상응하는 사이클로 [NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z'는 A6, A5, A4(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]를 수득할 수 있다.
단계(g)에서는, 구조(54)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다] 또는 구조(55)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-아미노산]아미드[여기서, Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]의 보호 그룹을 반응 도식 A, 단계(o)에 이미 나타낸 바와 같이 제거하여 구조(56)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-아미노산]아미드를 수득한다.
반응 도식 E에 사용된 출반물질은 당해 기술분야의 숙련가에게는 쉽게 구입할 수 있는 것이다.
하기 실시예는 상기 반응 도식 E에 기술된 전형적인 합성법을 나타낸다. 이 실시예는 본 발명을 설명할뿐이지 본 발명의 범위를 제한할 의도는 아니다.
[실시예14]
사이클로[AlaΨ[CH2NH)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 55
단계(a): Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 56
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)(1.0mmol)를 벤젠(4㎖)에 현탁시키고 N-메틸모르폴린(252㎖, 2.5㎖)을 가한다. -22℃로 냉각시키고 이소부틸클로로포르메이트(136㎖, 1.0mmol)를 가한다. 20분 동안 교반하고 과량의 디아조메탄 용액(니트로 소메틸우레아 8.7g으로 부터 미리 제조하고 0℃, 수산화칼륨 펠렛상에서 수시간 동안 건조시킨 것)에 서서히 가한다. 0℃에서 수시간 동안 교반하고 후드속의 증기욕상에서 잔류 벤젠 및 디아조메탄을 제거한다. 잔류 벤젠을 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CHN2를 수득한다.
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CHN2를 무수 에틸 에테르(5㎖)에 용해시키고 디옥산중의 약간 과량의 염산으로 처리한다. 용매를 증기욕상에서 증발시킨 다음, 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2C1을 수득한다.
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2C1(0.485mmol), 디메틸포름아미드(40㎖) 및 요오드화나트륨(10g)을 혼합한다. 8시간 동안 환류시키고, 냉각시킨 다음 메틸렌 클로라이드(40㎖)를 가한다. 여과하고 여액을 잔사로 증발시킨다. 잔사를 메틸렌 클로라이드(20㎖)와 물(20㎖)사이에 분배한다. 유기상을 분리하고, 증발(MgSO4)시킨 다음 용매를 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2I를 수득한다.
수소화나트륨(1g, 0.21mmol)을 테트라하이드로푸란에 현탁시키고, 질소 대기하에 정치시킨 다음 0℃로 냉각시킨다. 디벤질 말로네이트(0.2mmol)를 적가한다. 음이온 형성이 종결될때까지 0℃에서 교반하고 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2I(0.21mmol)를 가한다. 환류시키면서 수시간 동안 가열하고, 냉각시킨 다음 물(40㎖)에 붓는다. 에틸 아세테이트(3 x 60㎖)로 추출하고, 건조(MgSO4)시킨 다음 용매를 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2CH(CO2CH2Ph)2를 수득한다.
95% 에탄올(40㎖)중에서 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2CH(CO2CH2Ph)2(5.3mmol)와 10% Pd/C(0.5g)를 혼합한다. 실온, 대기압에서 수소화한다. 여과하고 여액을 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2CH(CO2H)2를 수득한다.
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)-CH2CH(CO2CH2Ph)2(0.2mmol)를 아세토니트릴(80㎖)에 현탁시키고 산화구리(I)(1.5㎖, 0.01mmol)로 처리한다. 환류시키면서 7시간 동안 가열한다. 냉각시키고, 여과한 다음 용매를 진공에서 증발시킨다. 잔사를 에틸 에테르(10㎖)에 용해시키고 10% 염산(2 x 5㎖), 물(5㎖) 및 염수(5㎖)로 세척한다. 건조(MgSO4)시키고 용매를 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly를 수득한다.
Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 :수지)(NHBn)(10mmol), Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly(5.3m0l), 하이드록시벤즈트리아졸(1.65g, 11mmol) 및 1-(3-디메틸아미드 노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(2.1g, 11mmol)를 혼합한다. 메틸렌 클로라이드(20mmol) 중의 디이소프로필에틸아민(3.8㎖) 용액을 가하고 실온에서 수시간 동안 교반한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고, 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(b): Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 57
Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 56)(0.5mmol)를 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50m로 간단히 세척하고 여과한다 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반한 다음 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고, 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 58
Boc-Ala-al (5mmol)을 디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액(10㎖)에 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 57)(0.5mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150mg)를 가한다. 2시간동안 진탕하고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(3 x 20ml)로 세척하고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu](NHBn): 서열확인번호: 59
Boc-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 58)(5mmol)를 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로 아세트산(25㎖)으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖) 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드중의 1% 아세트산 용액에 현탁시키고 2일 동안 진탕시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 용매를 진공에서 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 55
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[COCH2]-Gly-Asp-(β-Chxl)-Glu](NHBn)(서열확인번호: 59)(269㎖)를 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 0℃에서 1시간동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산속으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎖)을 수득하고, 역상 HPLC(수성 트리플루오로 아세트산/아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
다음 화합물을 상기 실시예 14에 기술한 것과 유사한 방법으로 제조할 수 있다:
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA; 및
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[COCH2]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
X가 CH2O인 일반식(I)의 입체배좌적으로 억제된 펩티드는 당해 기술분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 이러한 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성법을 반응 도식 F에 나타낸다. 반응 도식 F에서, 모든 치환체는 달리 언급이 없는한 상기 기술된 것과 같다.
반응 도식 F
상기식에서
Z'은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이다)이고,
Z''는 W-A6-A5-A4-[여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서 , m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서 , p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다]이다.
반응 도식 F는 X가 CH2O인 일반식(I)의 화합물을 제조하기 위한 일반적인 합성법을 제공한다.
단계(a)에서는, Nα- Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly(57)를 반응 도식 C, 단계(c)에 이미 나타낸 바와 같이 구조(9)의 적합한 Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지와 커플링시켜 구조(58)의 상응하는 Nα- Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(b)에서는, 구조(58)의 적합한 Nα- Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 Nα-Boc 보호 그룹을 반응 도식 A, 단계(f)에 이미 나타낸 바와 같이 제거하여 구조(59)의 상응하는 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
단계(c)에서는, 구조(59)의 적합한 Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 반응 도식 A 단계(k)에 이미 나타낸 바와 같이 구조(16)의 적합한 D-또는 L-N- Boc-NHCHR-알데히드와 커플링시켜 구조(60)의 상응하는 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]Sly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지를 수득한다.
임의의 단계(d)에서는, 구조(60)의 적합한 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지의 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH] 작용기를 반응 도식 A, 임의의 단계(o)에 이미 나타낸 바와 같이 알킬화하여 구조(61)의 상응하는 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
단계(e)에서는, 구조(60)의 적합한 N- Boc-NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl))-아미노산 아미드 옥심 수지 또는 구조(61)의 N-Boc-NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-아미노산 아미드 옥심 수지[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 반응 도식 A, 단계(m)에 이미 나타낸 바와 같이 폐환시켜 구조(62)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득한다.
임의의 단계(f)에서는, 구조(62)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서 , W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 당해 기술분야에 공지된 방법으로 아실화하여 구조(63)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 수득할 수 있다.
또한, 구조(62)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소이고 A6, A5및 A4는 결합이다)이다]를 당해 기술분야에 공지된 표준 펩티드 화학을 사용하여 구조(63)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소이고, A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]로 전환시킬 수 있다.
이어서, 펩티드 측쇄 A6-A5-A4의 말단 아미노를 당해 기술분야에 공지된 대로 아실화하여 구조(63)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z'는 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]를 수득할 수 있다.
단계(g)에서는, 구조(62)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z'')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z''은 W-A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서, m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이고, A6, A5및 A4는 결합이다)이다] 또는 구조(63)의 적합한 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z')]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)아미노산]아미드[여기서, Z'는 A6-A5-A4-(여기서, W는 수소, C1-C10아실 또는 석시닐이고 A6, A5및 A4중의 하나 이상은 아미노산이다)이다]의 보호그룹을 반응 도식 A, 단계(o)에 이미 나타낸 바와 같이 제거하여 구조(64)의 상응하는 사이클로[NHCHR-Ψ[CH2N(Z)]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-아미노산]아미드를 수득한다.
반응 도식 F에 사용된 출발물질은 당해 기술분야의 숙련가에게는 쉽게 구입할 수 있는 것이다.
하기 실시예는 상기 반응 도식 F에 기술된 전형적인 합성법을 나타낸다. 이 실시예는 본 발명을 설명할 뿐이지 본 발명의 범위를 제한할 의도는 아니다.
[실시예15]
사이클로[AlaΨ[CH2NH]ArgΨ[CH2O]Gly-Asp-δ-Gul]-(NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 60
단계(a): Nα-Boe-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 61
Nα-Boc-Ng-Tos 아르기닌(10g)을 무수 테트라하이드로푸란(80㎖)에 현탁시키고 0 내지 5℃로 냉각시킨다 1,1'-카보닐디이미다졸(3.61g)을 한꺼번에 가하고 20분 동안 계속 교반한다. 드라이아이스/아세톤 욕에 함침시켜 -20 내지 -30℃의 온도로 유지시킨다. 수소화알루미늄리튬 현탁액(테트라하이드로푸란 80㎖ 중의 1.8g)을 45분에 걸쳐 적가한다. 추가로 30분 동안 -20℃에서 교반하고, -10℃에서 2N 염산(63㎖)을 적가하면서 급냉시킨다. 여과하고, 용매를 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Ng-Tos 아르기닌올을 수득한다.
Nα-Boc-Ng-Tos 아르기닌올(70.5mmol)을 아세톤(500㎖)에 용해시키고 탄산칼륨(10.7g, 77.6mmol), 요오드화칼륨(1.17g, 7.05mmol) 및 에틸 브로모아세테이트(77.6mmol)로 처리한다. 수시간 동안 환류시키고, 냉각시킨 다음, 여과하고 용매를 진공에서 증발시킨다. 섬광 크로마토그래피로 정제하여 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly(OEt)를 수득한다.
Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly(OEt)(20mmol)를 메탄올(40㎖)에 용해시킨다. 1N 수산화리륨(25㎖, 20mmol)을 가하고 아르곤 대기하에 3.5시간 동안 교반한다. 1N 염산(25㎖)으로 산성화하고, 염화나트륨으로 포화시킨 다음 에틸 아세테이트(3 x 25M)로 추출한다. 유기상을 합하고, 건조(MgSO4)시킨 다음, 용매를 진공에서 증발시켜 Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly를 수득한다.
Asp(β-Chxl)-Glu(3-옥심 수지)(NHBn)(10mmol), Nα-Boc-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly(5.3mmol), 하이드록시벤즈트리아졸(1.65g, 11mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(2.1g, 11mmol)를 혼합한다. 메틸렌 클로라이드(20㎖) 중의 디이소프로필에틸아민(3.8㎖) 용액을 가하고 실온에서 수시간 동안 교반한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고, 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(b): Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 62
Nα-Boe-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 61)(2mmol)를 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 간단히 세척하고 여과한다. 1% 아니솔을 포함한 메틸렌 클로라이드중의 25% 트리플루오로아세트산 용액 50㎖로 처리하고, 25분 동안 교반한 다음 여과한다. 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 이소프로판올(50㎖)로 간단히 3회 세척하고 여과한다. 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민 용액 50㎖로 간단히 2회 세척하고, 여과하여 표제 화합물을 수득한다.
단계(c): Boe-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)-서열확인번호: 63
Arg-Ala-al(5mmol)을 디메틸포름아미드(10㎖) 중의 1% 아세트산 용액에 용해시킨다. Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn))(서열확인번호: 62)(0.mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(150mg)를 가한다. 2시간 동안 진탕시키고 여과한다. 디메틸포름아미드(3 x 20㎖) 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖)로 세척하고, 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(e): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu)(NHBn)-서열확인번호: 64
Boe-AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]Gly-Asp(β-Chxl)-Glu(δ-옥심 수지)(NHBn)(서열확인번호: 63)(5mmol)를 메틸렌 클로라이드 중의 25% 트리플루오로아세트산(25㎖)으로 25분 동안 처리한다. 메틸렌 클로라이드(3 x 20㎖), 이소프로판올(3 x 20㎖), 메틸렌 클로라이드(20㎖), 메틸렌 클로라이드 중의 1% 디이소프로필에틸아민(2 x 25㎖) 및 메틸렌 클로라이드(25㎖)로 세척한다.
디메틸포름아미드 중의 1% 아세트산 용액에 현탁시키고 20초 동안 진탕시킨다. 여과하고 디메틸포름아미드로 세척한다. 용매를 진공에서 증발시키고 잔류 오일을 아세트산에 용해시킨다. 동결 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계(g): 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu)(NHBn)·CF3CO2H-서열확인번호: 60
사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg(Ng-Tos)Ψ[CH2O]-Gly-Asp(β-Chxl)-δ-Glu)(NHBn)(서열확인번호: 64)(269㎖)를 불화수소 및 아니솔에 현탁시킨다. 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고 30% 수성 아세트산으로 추출한다. 동결 건조시켜 표제 화합물(232㎖)을 수득하고, 역상 PLC(수성 트리플루오로아세트산/아세토니트릴 )로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
다음 화합물을 상기 실시예 15에 기술한 것과 유사한 방법으로 제조할 수 있다.
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N(C(CH2)2CO2H]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA;
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2)H]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn) ·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N-Gly-Asp-Ac]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Leu(NHBn)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2NH]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Asp(NH2)·TFA;
사이클로[D-TyrΨ[CH2N(C(O)(CH2)2CO2H)]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Phe(NH2)·TFA; 및
사이클로[D-PheΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-ArgΨ[CH2O]-Gly-Asp-δ-Glu]-Trp(NH2)·TFA;
본 발명의 펩티드 동족체의 항혈소판 투여량은 환자, 치료될 혈전증 상태의 중증도 및 선택된 펩티드 동족체에 따라 환자의 체중(kg)당 0.2 내지 250mg/일이다. 특정 환자에 적합한 투여량은 쉽게 결정할 수 있다. 바람직하게는, 전형적으로 1 내지 4회의 매일 투여량을 투여량당 활성 화합물 5 내지 l00mg과 함께 투여할 수 있다.
항혈소판 치료는 심근 경색 및 발작 뿐만 아니라 혈소판 응집과 관련된 기타 질환의 예방 또는 재발을 나타낸다. 당해 분야의 숙련가는 항응고 및 항혈소판 치료에 필요한 환경을 쉽게 알 수 있다. 본원에 사용된 용어 "환자"는 사람, 양, 말, 소, 돼지, 개, 고양이, 래트(rat) 및 마우스(mouse)를 포함한 영장류와 같은 포유 동물을 의미한다.
몇몇 펩티드 유도체가 경구 투여후 장을 통과하면서 보존될 수 있지만, 대상자들은, 예를 들면, 피하, 정맥내, 근육내 또는 복막내와 같은 비경구 투여; 데포우(depot) 주사에 의한 투여: 이식 제제에 의한 투여: 코, 목 및 기관지의 점막에, 예를 들면, 본 발명의 펩티드 유도체를 함유하는 분무 형태 또는 무수 분말 형태의 에어로졸 캔의 적용 또는 경피 적용을 선호한다.
비경구 투여를 위해, 화합물을 계면 활성제 및 기타 약제학적으로 허용되는 보조제를 가하거나 가하지 않고 살균액(예: 물 및 오일)일 수 있는 약제학적 담체를 함유하는 생리학적으로 허용되는 희석제 중의 화합물의 용제 또는 현탁제의 주사제로서 투여할 수 있다. 이 제제에 사용할 수 있는 오일의 예로는 석유, 동물유, 식물유 또는 합성유, 예를 들면, 낙화생유 대두유 및 광유가 있다. 일반적으로, 물, 염수, 수성 텍스트로즈 및 관련 당 용액, 에탄올 및 글리콜(예: 프로필렌글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜)이 특히 주사용제에 바람직한 액체 담체이다.
화합물은 활성 성분이 서서히 방출되도록 하는 방법으로 제형화할 수 있는 데포우 주사제 또는 이식 제제의 형태로 투여할 수 있다. 활성 성분을 펠렛 또는 소형 실린더로 압착하여 데포우 주사제 또는 이식제로서 피하 또는 근육내에 이식할 수 있다. 이식제에는 생분해성 중합체 또는 합성 실리콘, 예를 들면, 다우 코닝 코포레이션(Dow Coming Corporation)이 생산하는 실리콘 고무인 실라스틱(Silastic)과 같은 불활성 물질을 사용할 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 국소 투여할 수 있다. 이는 바람직하게는 경피 흡수를 촉진시키는 것으로 공지된 용매[예: 에탄올 또는 디메틸설폭사이드(DMSO)]를 사용하고 기타 부형제를 사용하거나 사용하지 않으면서 투여할 화합물 용액을 간단히 제조함으로써, 투여할 수 있다. 바람직하게는, 국소 투여는 저장기 및 다공성막 형태 또는 고체 매트릭스 다양체의 패치를 사용하여 수행한다.
몇몇 적합한 경피 장치가 미합중국 특허 제3,742,951호, 제3,797,494호, 제3,996,934호 및 제4,031,894호에 기술되어 있다. 이들 장치는 일반적으로 표면중 하나를 규정하는 백킹(backing) 부재, 또 다른 표면을 규정하는 활성제 침투성 접착층 및 표면들 사이에 개재시킨 활성 약품을 함유하는 하나 이상의 저장기를 함유한다. 또 다른 방법으로, 활성제를 침투성 접착층 전반에 걸쳐 다수의 미세캡슐에 함유시킬 수 있다. 다른 경우에, 활성제를 막을 통해 저장기 또는 미세캡슐로부터 수용자의 피부 또는 점막에 접촉되는 활성제 침투성 접착층으로 연속 전달시킨다.
활성제가 피부를 통해 흡수되면, 조절된 소정의 유동 활성제가 수용자에게 투여된다. 미세캡슐의 경우, 캡슐화제도 또한 막으로서 작용한다.
본 발명에 따르는 화합물을 경피 투여하기 위한 다른 장치에서, 약제학적 활성 화합물이 바람직하게 점진적으로 일정하게 조절된 속도로 전달되는 매트릭스에 함유된다. 매트릭스는 확산 또는 미세다공성 유동을 통한 화합물의 방출에 투과성이다. 방출 속도는 조절할 수 있다. 막이 필요없는 이러한 시스템은 미합중국 특허 제3,921,636호에 기재되어 있다. 이들 시스템에는 두가지 이상의 방출 유형이 가능하다. 확산에 의한 방출은 매트릭스가 다공성이 아닌 경우 발생한다. 약제학적으로 유효한 화합물은 매트릭스에 용해되어 이를 통과해 확산된다. 미세다공성 유동에 의한 방출은 약제학적으로 유효한 화합물이 매트릭스의 기공에서의 액상을 통해 이동하는 경우 발생한다.
항혈전성 및 항혈소판 응집제로서 작용하는 본 발명의 화합물의 효능은 표준 기술 인지 시험을 사용하여 증명할 수 있다. 본 출원인은 실시예 16에 나타낸 방법에 의해 표 I의 대표적인 화합물에 대해 관련 활성을 측정하고, 결과를 표 11에 나타내었다.
[표 1]
항혈소판 및 항혈전 활성에 대한 화합물 평가
[표 11]
다양한 일반식(I)의 화합물 항혈소판 및 항혈전 활성
[실시예 16]
항혈소판 및 항혈전 활성의 측정
실험동물
수컷 스프라그-돌리(SPrague-Damesr) 래트(300 내지 400gm)를 인디애나주 46229 인디애나폴리스 소재의 할렌 스프라그 돌리, 인코포레이티드(Harlan Sprague Dawley, Inc.)로부터 구입하여 본 연구에 사용한다.
혈액 샘플링
3.8% 삼나트륨 시트레이트(1:10, V:V)를 함유한 플라스틱 주사기로 혈액 샘플을 채취한다. 2000 x g에서 10분 동안 원심분리하여 혈장을 준비한다. 시험관내 연구를 위해 정맥 혈액을 건강한, 약물 복용하지 않은 남성 지원자로부터 수집한다.
응고 분석
문헌[참조: Dade Diagnostics, Inc., (Aguada, Puerto Rico 00602)]의 시약 및 방법을 사용하여 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간(aPTT) 측정을 수행한다.
0.1M 트리스 완충액(pH 7.5) 0.1㎖로 37℃에서 래트 혈장 0.1㎖를 30초 동안 항온 처리하여 혈전 응괴시간을 측정한다. 소 혈전(Sigma Diagnostics, St. Louis , M0 63178) 0.1㎖로 응고를 개시한다. 모든 응괴 시간을 MLA-일렉트라(Electra) 750[뉴욕주 10570 소재의 엠엘에이 인코포레이티드(MLA, Inc.)]을 사용하여 반자동으로 측정한다. 응괴시간(ID2)을 두배로 하기 위해 필요한 농도를 단순 선형 회귀를 사용하여 계산한다.
시험관내 혈소판 응집
200 x g에서 10분동안 실온에서 원심분리하여 사람 혈소판 풍부한 혈장(PRP)을 제조한다. 혈소판이 부족한 혈장(PPP)은 2000 x g에서 10분 동안 원심분리하여 제조한다. PRP를 플라스틱 실험실 기구에만 노출시킨다. 혈액을 수집하는 3시간 내에 모든 실험이 완결된다. 혈소판 응집은 크로노-로그 이중 채널 응집기(Chrono-log dual channel aggregometer, Chrono-log Corp . Haverstown, PA 19083)를 사용하여 광도 측정으로 측정한다. 100% 광 투과율은 오톨로구스(autologus)PPP로 정의된다. 광 투과 최대 변화율(%)을 ADP(1μM) 또는 트롬빈을 가해 PRP로 부터 측정한다. 트롬빈(0.2 내지 2.0 단위/M) 유도된 혈소판 응집은 농도에 좌우되며 억제 연구에 사용되는 반-최대 농도이다. ADP 또는 트롬빈을 가하기 전에 MDL102,530을 PRR(0.45㎖)와 30초 동안 항온 처리한다. 응집을 0.5㎖의 총용적에서 측정한다. 억제 반응을 대조값과 비교하여 억제율(%)로 나타낸다. 응집을 50% 억제하는 농도(IC50)는 단순 선형 회귀에 의해 계산한다.
사람 혈소판의 제조
사람 혈액을 항응고제로서 산-시트레이트-텍스트로즈의 1/10 용적을 함유한 관에 정맥천자에 의해 수집한다. 혈소판 풍부 혈장을 실온에서 10분 동안 혈액을 500g 원심분리하여 제조한다. 혈소판 풍부 혈장을 경사분리하고 산-시트레이트 멕스트로즈의 1/10 용적을 가한 후 실온에서 10분 동안 1000g 원심분리하여 혈소판을 침전시킨다. 혈소판을 0.35% 소 혈청 알부민을 함유한 변형된 티로드(Tyrode)완충액(2M Macl, 0.5M 텍스트로즈, 0.2M NAHCO3, 0.1M KC1, 0.1M MgC12, 0.1M NaH2PO4및 0.1M HEPES, pH 7.3) 2㎖ 현탁시킨 다음 티로드 완층액으로 평형화된 세파로즈 2B(파마시아) 50㎖ 컬럼상에서 여과한다. 최종적으로, 혈소판을 자동화된 혈액학 분석기에서 계수한다.
마취된 개의 생체내 혈소판 응집
마취된 개의 개방 흉부에서 좌전방 하향 관상동맥(LAD) 혈액 유동, 대동맥혈압, 심박도수 및 EKG를 기록한다. LAD의 위험한 협착증 및 내피 손상의 존재시, LAD 관상 동맥 유동은 느리고 거의 0에 가까운 진행성 감소를 나타낸후 순환 유동 감소(CFR)로 언급되는 거의 대조 수준까지 갑자기 되돌아온다. 순환 유동 감소는 혈소판 혈전 형성에 의해 유도된 후 전염을 일으키는 것으로 알려져 있다. 이들 화합물의 항혈전 활성은 CFR를 없애는 능력에 의해 이 모델에서 평가된다.
피브리노겐 요오드화
사람 저용해성 피브리노겐(Kabi)을 상술한 바와 같이 제조한다(Lipinska et al ., 1974).125I 표지화를 위해, 피브리노겐(1mg)을 세 개의 요오도-비이드(Iodo-Beads, Pierce Chemical Co.)와 Na125I 1 mCi와 15분 동안 항온처리 후 PD-10컬럼(파마시아)을 통해 여과에 의해 유리 방사성으로 부터 분리된125I-피브리노겐과 배양한다. 특이적 활성은 약 1 내지 5x1017CPM/mol 피브리노겐이다.
피브리노겐 결합 분석
사람 혈소판에 대한 피브리노겐의 결합은 플로우(Plow) 및 진스버그(Ginsberg)(1981)에 의해 기술된 바와 같이 수행한다. 결합 분석은 혈소판 1 내지 2x107,125I-피브리노겐 0.1μM, CaC122mM 및 혈전 0.1U/㎖ 또는 자극제로서 다양한 농도의 활성제 펩티드 0.2㎖ 용적을 함유한다. 항온 처리를 실온에서 30분 동안 에펜도르프 미세원심분리관 1.2㎖에서 수행하고 2배의 75㎛ 분취량을 1% 소 혈청알부민을 함유한 티로드 완충액에서 20% 슈크로즈 0.4㎖로 적층하고 혈소판을 벡크만 미세원심분리에서 5분 동안 원심분리에 의해 10,000g 침전시킨다. 원심분리관의 끝을 자르고 결합125I-피브리노겐을 감마 계수기(LKB/파마시아)에서 측정한다.
비특이적 결합 방사성을 활성화제가 제외된 항온처리기에서 측정하고 이들 값은 트롬빈 활성화의 경우 수득된 값의 1 내지 5%이다.
GPIIb-IIIa 효소 결합된 면역분석
문헌[참조: Lipinska et al., J. Lab. Clin. Med., 84, 509-516(1974)]에 기술한 바와 같이 제조된 저용해성 피브리노겐(사람, KABI)을 임뮤놀론(Immunolon)2-96 웰 평판(웰에 결합시키기 위해 4℃에서 밤새 항온처리)상에서 50g/웰에서 고정시킨다. 웰을 완충액 A(20nM 트리스-HC1, pH 7.5, 2mM CaC12, 120mM CaC1 및 0.02% NaN3) 중의 0.5% 소 혈청 알부민으로 실온에서 2시간 동안 억제시킨다. 모든 후속 단계를 실온에서 수행한다. 웰을 완충액 A + 0.5% 트윈 20(바이오래드 (BioRad))으로 3회 세척한다. 지시된 농도에서 정제된 GPIIb-IIIa(2pg/웰) + 합성펩티드 보충제를 고정된 피브리노겐과 90 내지 120분 동안 함께 항온처리한다. 이 웰을 상기와 같이 세척한 다음, 항-GPIIb-IIla 모노클로날 항체, CD41a를 각 웰에 가하고 60분 동안 항온처리한다. 다시 3회 세척한 후, 염소 항-마우스 양고추냉이 퍼옥시다제 포합체를 각 웰에 가한다(60분). 이 웰을 완충액 A + 세제로 3회 세척한 다음 완충액 A + 세제로 2회 세척한다. 퍼옥시다제 기질, 3,3' , 5,5'-테트라메틸벤지딘(Kirkegaard and Perry Laboratories , Inc.)을 색상 현상을 위해 웰에 가한다. 반응을 0.3N H2SO4로 정지시키고, 마이크로 평판 기록기(Multiscan H, Flow-Titertek)를 사용하여 450nm에서 흡광도를 측정한다.
GPIIb-IIla 정제
GPIIb-IIla를 사람 혈소판으로부터 세파크릴(Sepharyl) S-300 대신 HW55 크기 배타 컬럼(Waters , Advanced Protein Purification System)으로 최종 겔 정제 단계를 수행하는 것을 제외하고 문헌[참조: Fitzgerald, et al., hal. Biochem., 151, 169-177(1985)]에 기술된 바와 같이 정제한다. SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동법에 의해 평가된 순도 90% 이상의 단백질을 -80℃에서 소량 분취량 저장한다.
서열 리스트
(1) 일반정보
(i) 출원인 : 스코트 엘. 하베손(Harbeson, Scott L)
알란 제이. 비톤티(Bitonti, Alan J)
(ii) 발명의 명칭 : 항혈소판제로서의 입체배좌적으로 억제된 펩티드 동족체
(iii) 서열번호 : 64
(iv) 통신주소 :
(A) 수신인 : 마리온 메렐 다우 인코포레이티드
(B) 가 : 이스트 갈브레이스 로오드 2110
(C) 시 : 신시내티 피. 오. 박스 156300
(D) 주 : 오하이오
(E) 국가 : 미합중국
(F) 우편번호: 45215-6300
(v) 컴퓨터 판촉형태 :
(A) 매체 유형 : 플로피 디스크
(B) 컴퓨터 : IBM PC 호환성
(C) 작동 시스템 : PCO0S/MS-D0S
(D) 소프트웨어 : Patent In Releas #1.0. Version #1.25
(vi) 현출원 데이터;
(A) 출원번호 : US
(B) 출원일 :
(C) 분류 :
(viii) 대리인 정보:
(A) 이름 : 스티븐 엘. 네스비트(Nesbitt, Stephen L)
(B) 등록 번호 : 28,981
(C) 상표/도켓 번호 : M01621 US
(ix) 통신 정보:
(A) 전화 : (513) 948-7965
(B) 팩시밀리 : (513) 948-7961
(C) 텔렉스 : 214320
(2) 서열확인번호 1에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 1 :
Xaa Arg Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 2에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 2 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 3에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 3 :
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(2) 서열확인번호 4에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
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(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 4 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
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(2) 서열확인번호 5에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
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(ii) 분자형 : 펩티드
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(2) 서열확인번호 6에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
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(2) 서열확인번호 7에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
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(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 7 :
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(2) 서열확인번호 8에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
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(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 8 :
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(2) 서열확인번호 9에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 9 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
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(2) 서열확인번호 10에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 10 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
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(2)서열확인번호 11에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 11 :
Xaa Arg Gly Asp Xaa
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(2) 서열확인번호 12에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 12 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 13에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 13 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 14에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 14 :
Xaa Arg Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 15에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 15 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 16에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 16 :
Xaa Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 17에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 17 :
Gly Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 18에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 18 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 19에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 19 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 20에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 6개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 20 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 21에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 21 :
Xaa Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 22에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 22 :
Gly Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 23에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 23 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 24에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 24 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 25에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 6개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 25 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 26에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 26 :
Xaa Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 27에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 27 :
Gly Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 28에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 28 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 29에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 29 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 30에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 6개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 30 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 31에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 31 :
Xaa Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 32에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 32 :
Gly Xaa Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 33에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 33 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 34에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 34 :
Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 35에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 6개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 35 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 36에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 36 :
Xaa Xaa Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 37에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 37 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 38에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 38 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 39에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 39 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 40에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 40 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 41에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 41 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 42에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 42 :
Xaa Xaa Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 43에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 43 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 44에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 44 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 45에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 45 :
Xaa Xaa Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 46에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 46 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 47에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 47개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 47 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 48에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 48 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 49에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 49 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 50에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 50 :
Xaa Xaa Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 51에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 51 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 52에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 52 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 53에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 53 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 54에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 54 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 55에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 55 :
Xaa Xaa Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 56에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 56 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 57에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 57 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 58에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 58 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 59에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 59 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 60에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 60 :
Xaa Xaa Gly Asp Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 61에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 61 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 62에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 4개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 62 :
Xaa Gly Xaa Xaa
1
(2) 서열확인번호 63에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 63 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5
(2) 서열확인번호 64에 대한 정보
(i) 서열특성 :
(A) 길이 : 5개의 아미노산
(B) 유형 : 아미노산
(D) 위상 : 환형
(ii) 분자형 : 펩티드
(xi) 서열기술 : 서열확인번호 64 :
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5

Claims (14)

  1. 일반식(I)의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
    상기식에서,
    Y는 단편 -A1-A2-A3-NR1R2(여기서, A1은 결합이거나 Ser, Asp, Met , Trp, Phe 및 Ala로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, A2는 결합이거나 Pro, Nle, Met , Leu, Asn, Asp, Val, Arg 및 Leu로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이며, A3는 결합이거나 Ala, Asp, Pro 및 Asn으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, R1및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1, Br. NO2, NH2, OH 및 OCH3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 한 개 내지 세 개의 치환체로 치환되거나 치환되지 않은 C1-C10알킬, 벤질, 인돌릴, 피리디닐 또는 페닐이다)이며, Z는 단편 W-A6-A5-A4-[여기서, A4는 결합이거나 Gly 및 βAla로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, A5는 결합이거나 Arg, Lys, Thr, Ile, Leu, Phe, Asp, Asn 및 Val로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이며, A6은 결합이거나 Val, Lys, Arg, Asp, Asn 및 Ala로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산이고, W는 수소, 석시닐, C1-C10아실, C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5(여기서 , m은 1 내지 3의 정수이다) 또는 -(CH2)pCO2H(여기서, p는 1 내지 4의 정수이다)이다]이며, X는 CONH, CH2NH, COCH2, CH2CH2, -CH2O-또는 -CH=CH-이고,
    R은 수소, C1-C10알킬, 벤질, 인돌릴, 나프틸, 티에닐, p-HO-벤질, p-NO2-벤질, p-C1-벤질 및 p-NH2-벤질이며,
    n은 1 내지 3의 정수이고,
    단 A6, A5및 A4중의 하나가 아미노산인 경우, W는 C1-C10알킬, -(CH2)mC6H5또는 -(CH2)pCO2H가 아니다.
  2. 제1항에 있어서, X가 CONE, COCH2또는 CH2CH2인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, Y가 벤질아민 또는 Asp-NH2인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, n이 2인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R이 CH3, 벤질 또는 p-OH-벤질인 화합물.
  6. 제1항에 있어서, Z가 석시닐, -(C2)3CO2H 또는 CH3CO-Asp-Gly인 화합물.
  7. 제1항에 있어서,
    X가, CONH, CONH2또는 CH2CH2이고,
    Y가 벤질아민 또는 Asp-NH2이며,
    n이 2이고,
    R이 CH3, 벤질 또는 pOH-벤질이며,
    Z가 석시닐, -(CH2)3CO2H 또는 CH3CO-Asp-Gly인 화합물.
  8. 제1항에 있어서, 사이클로[AlaΨ[CH2NH]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H인 화합물.
  9. 제1항에 있어서, 사이클로[AlaΨ[CH2N(CO(CH2)2CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H인 화합물.
  10. 제1항에 있어서, 사이클로[AlaΨ[CH2N((CCH2)3Ph)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2H인 화합물.
  11. 제1항에 있어서, 사이클로[AlaΨ[CH2N((CH2)3CO2H)]-Arg-Gly-Asp-δ-Glu](NHBn)·CF3CO2인 화합물.
  12. 제1항에 따르는 일반식(I)의 화합물을 불활성 담체와의 혼합물형태로서 포함하는, 항혈전제 또는 항혈소판 응집제로서 유용한 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 불활성 담체가 약제학적 담체인 조성물
  14. 제12항에 있어서, 심근 경색, 발작, 폐동맥 색전증, 심부의 정맥 혈전증, 말초 동맥 폐쇄 및 혈관 형성술 이후 관상 동맥 재폐쇄를 포함한 혈전 진환을 치료하는 데 유용한 항혈전제 또는 항혈소판 응집제로서 유용한 약제학적 조성물.
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